SK59393A3

SK59393A3 - Use of il-4 to enhance immune response to immunogegens in vaccines

Info

Publication number: SK59393A3
Application number: SK593-93A
Authority: SK
Inventors: Edward J Rozhon; John F O'connell; Stuart A Cox; Michael D Hayre; Jerome Schwartz
Original assignee: Schering Corp
Priority date: 1990-12-19
Filing date: 1991-12-17
Publication date: 1994-03-09
Also published as: JPH06503830A; EP0563254A1; ATE129900T1; IL100402A0; CN1063227A; CA2098726A1; HU9301797D0; DK0563254T3; DE69114519D1; IE70453B1; ZA919907B; OA09863A; DE69114519T2; EP0563254B1; FI932759A0; WO1992011030A1; PT99838A; CZ119993A3; IE914436A1; FI932759A

Description

FAŕ.wA-ceynck/ pp.ipjz.avok vakcínach .výšenie imunitnej odpovede n?, imunogény vo

Oblasť vynálezu sa týka farmaceutických prípravkov, obsahujúcich IL-4 ako aktívnu prísadu na vzýšenie primárnej imunitnej odpovede na imunogény vo vskcinacn. Vynález sa tiež ty^.a použitia interleukínu-4 na výrobu liečiva na zvyšovanie primárnej imunitnej odpovede cicavcov na imunogény prítomné vo vakcíne ?ko aj metód zvyšovania efektívnej primárnej imunitnej odpovede u cicavcov na imunogény prítomné vo vakcínach podaním účinného množstva interleukínu-4 v spojení s vakcínou týmto cicavcom.

Doterajší stav techniky

Interleukín-4 /tu dalej IL-4 známy ale tiež ako B Celí Stimulátory Factor 1 /BSF-1// bol pôvodne popísaný M. Howarďom a spol. c J.F'xp.^ed. /1982/, diel. 155, str. 914-23 ako T-bunkami produkovaný rastový faktor, odlišný od IL-2, ktorý dovoľuje dlhodobú tkanivovú kultiváciu normálnych myšacích B-lymfocytov a ktorý interaguje s aktivovanými B-lymfocytmi a udržuje ich proliferáciu dlhšie ako 4 mesiace, ^edže zmiešané 3-lymfocytové vzorky boli použité na iniciovanie kultúry bolo zistené, že B-lymfoeyty s nezrelým fenotypom sa špecificky zvyšujú pôsobením IL 4 v tkanivovej kultúre. Pozri napríklad C. Perchel a spol., J. Immunol. /1989/. zv. 142, 1558-1566. Caiej G. Trenn a spol., J. Immunol. /1988/, zv.

140, 1101-1106 popisuje, že IL-4 stimuluje vývoj cytotoxických T-buniek z Lyt-2+ subpolácie zvyšných myšacích T-lymfocytov. H.Spits a spol., J.- Immunol. /1937/, diel 139, 114247 popisuje, že TL-4. môže hral úlohu rastového faktoru T-buniek u ľudských buniek in vitro odlišnú od IL-2.

‘‘yiscí IL-4 gén eol konovaný e. exprLzcvaný v COS-7 bunkách'/pozri T. Otsuka a spol., buc.Acids Res,. /1967/, diel 15, 333-334. Klonovaný faktor mal všetky aktivity v tkanivovej kul túre pozorované pre faktor purifikovaný z supernatantu T-bunkovej kultúry. Klonovanie a expresia ľudského IL-4 génu boli popísané K.Araioin a spol., J. Immunol. /1989/, diel 142, 274262 a T. Yokotom a spol., Proc. Natl. Acad. Sci. /1986/, zv. 83, 5844-5848 s faktorom p odukovaným v COS-7 bunkách, majúcim podobné aktivity ako natívna molekula, ako bolo študované na tkanivovej kultúre. IL-4 bol študovaný ako na ľudskom tak aj na myšacom bunkovom systéme, navyše boli molekule prisúdené in vitro tieto aktivity: i/ IL-4 hrá významnú úlohu v indukcii a regulácii syntézy IgE, procese, vyskytujúcom sa v 3-lymfocytovej subpopulácii, ak je indukovaná k proliferácii /pozri Pene, J. Proc. Naťl. Acad. Sci. /1988/, diel 8568806684/i ii/ IL-4 indukuje nízko afinitne Fc£ receptory /CD23/ na normálnych ľudských B-lymfocytoch v tkanivovej kultúre /pozri T. De^rance a spol., J. Exp. Med. /1987/, diel 1 65, 14591457/, iii/ IL-4 interaguje s áalšími lymfokínmi, predovšetkým interferónom-^ /pozri R, L. Coffman a spol., Immunol. Res. /1988/, diel 102,5-27 a S. Romagnani a spol., vyššie/ a T-bunkami /pozri R. L. Coffman a spol. vyššie, S. Romagnani a spol. vyššie a II. D. Widmer a spol., ⁿature /1987/, diel 326,795-96/ na vyvolanie určitej B-bunkovéj proliferácie * alterácie; iv/ IL-4 zvyšuje sekráciu špecifických protilátkových tried, t.j. napr. Ig ľudskými bunkami-B /pozri J. B. ^plawski a spol., J. Immunol. /1989/, diel 142, 1569-1572j v/ IL-4 má stimulačné účinky na T-bunky, mastocyty a makrofágy /pozri K. H. Grabstein a spol., J.Immunol. /1967/, diel 139, 1148-1153; ?. Lee a spol., Proc. Kati. Acad. 8_ci /1986/, diel 83,2061 a A. Zlotnik a spol., J. Immunol. /1967/, diel 138, 4275-4279/ a vi/ IL-4 zvyšuje expresiu IIHC antigénov II. triedy u zvyšných Bbuniek /R. Noelle a spol., PNAS 81. 6149-6153, 1984/. T. R.. Mosmann a spol. v -J. Immuno., die-l 138, 1613-1816 popisuje, že ľudský a myšací IL-4, ktoré sú z 50 % homológne v aminokyselinovsj sekvencií T-90 s

9-149 boli druhovo špecifické.

Použitie IL-4 na zvýšenie imunitnej odpovede na infekčné antigenické podnety, napr. vírusmi, baktériami, hubami alebo protozoami spôsobené chronické infekcie, je popísané v zverejnenej americkej prihláške vynálezu č. 07/^49683^, zodpovedajúcej PCT prihláške US-91/01733, podanej 03/19/91.

Podstata vynálezu

Predkladaný vynález poskytuje použitie IL-4 na výrobu lie čiv, zvyšujúcich primárnu imunitnú odpoveá u cicavcov na imunogény prítomné vo vakcíne podaním účinného množstva IL-4 týmto cicavcom v spojení s uvedenou vakcínou.

Predkladaný vynález tiež poskytuje farmaceutickú kompozíciu na zvyšovanie primárnej imunitnej odpovede cicavcov na imunogény prítomné vo vakcíne, takéto kompozície obsahujú množstvo IL—4 účinné na takéto zvýšenie a farmaceutický prijateíný nosič.

Predkladaný vynález tiež poskytuje metódu na zvýšenie pri márnej imunitnej odpovede cicavcov na imunogény prítomné vo vakcíne, ktorá obsahuje podanie IL-4 v spojení s vakcínou v množstve postačujúcom na zaistenie takéhoto účinku uvedeným zvieratám.

Predkladaný vynález tiež poskytuje metódu zvýšenia primárnej imunitnej odpovede cicavcov na imunogény vo vírusovej vakcíne, ktorá zahrnuje pre tento účel účinné množstvo IL-4 v spojení s uvedenou vakcínou podané, týmto cicavcom.

V /

Predkladaný vynález dalej poskytuje metódu zvýšenia primárnej imunitnej odpovede u cicavcov na imunogény prítomné vo vakcíne tetanového toxoidu, ktorá zahrnuje podanie pre tento účel účinného množstva IL-4 v spojení s uvedenou vakcínou tetanového toxoidu.

i P Ό ť Ll 00. &Í íj^r ’v g íle-1G Z mám-j imuni+n·’ j odpoved· vakcíne, kle.primárna imu tomnosti IL-4 nim je príl nila chorobe, kde metóda tiež poskytuje metódu zvýšenia priv. cicavcov na i nn r .-n;r á n v n·—' tQ'nr'd vo nitná· •••dpoveá týchto cicavcov za príiš silná alebo rýchla tak, aby zabrá— zahrnuje podanie množstva IL-4 účinného pre tento účel uve eným cicavcom v spojení s vakcínou.

Predkladaný vynález tiež poskytuje kit na zvýšenie primárnej imunitnej odpovede na imunogény vo vakcíne, ktorý zahrnuje: 1/ kontajner farmaceutického prípravku IL-4 a jeho far maceuticky vhodného nosiča a 2/ kontajner farmaceutického prípravku vakcíny a jej farmaceutický vhodného nosiča.

Popis obrázkov na výkresoch

Obr. 1 ilustruje chronoló^riu imunitnej odpovede vyvolanej podaním rekombinantného ľudského IL-4 a vakcíny tetanického toxoidu opici cynomolgus v súlade s predkladaným vynálezom.

Obr. 2-5 graficky ilustrujú stav protilátok proti tetanu ako funkciu času k vakcíne tetanického toxoidu na modele opice cynomolgus podaním 0,5 pg/kg a 20 pg/kg rekombinantného ľudského IL-4 a vakcíny tetanického toxoidu v súlade s predkladaným vynálezom.

S prekvapením bolo ľudského IL-4 /dalej rh zistené, že podanie rekombinantného IL4’7 opiciam cynomol.gus súčasne s vakcínou tetanického toxoidu malo márnej imunitnej odpovede u opíc.

za následok zvýšenie priTento výsledok je osobitne prekvapivý, pretože keó bol podaný rhIL4 opiciam c nomolgus počas druhej inokulácie rekombinantným vírusom hepatitídy B /rH8Vax/ a..i 2 mesiace po podaní RHBVax a rovnako tak ako vtedy, sk je IL4 podaný opiciam cynomolgus počas druhej inokulácie Salk vakcíny inaktivovaného poliovírusu asi jeden mesiac po podaní Sslk vakcíny inaktivovspého vírusu, nebola pozorovaná žiadna anamnestická, t.j. sekundárna alebo pamäťová odpoved. i-.eíódy tohto vynálezu ne poskytnutie podania IL-4 spolu s vakcínou, majú nasledujúce výhody. Celková antigenická záťaž podávanej vakcíny môže byť znížená, pretože menej antigénu za prítomnosti IL-4 b.y malo zvýšiť imunologickú odpoveď aspoň ekvivalentne tomu, čo bolo dosiahnuté podaním vakcíny vyššie uvedeným. Pretože bude požadované menšie množstvo an* v tigénu pre vakcináciu vdaka podaniu IL-4 postupom podlá vynálezu, bude znížená pravdepodobnosť nežiadúcich účinkov bežne spojených s niektorými vakcínami. Navyše pretože je požadované menšie množstvo imunogénu na dosiahnutie účinnej ochrany, budú znížené celkové náklady vakcíny na pacienta. Imunitná odv poved iného typu jedincov, ktorí odpovedajú slabo na vakcináciu, bude zvýšená podaním IL-4 v súlade s týmto vynálezom. Takáto typy jedincov, ktorí môžu výhodne využiť metódy tohto vynálezu sú 1/ tie typy, ktoré majú poškodenú imunitnú odpovedavosť ako sú deti narodené s istými imunodeficienciami, 2/ predtým normálne indivídua, ktoré neodpovedajú na isté vakcíny rovnako ako 3/ jedinci, ktorí sa podrobili imunosupresívnej terapii, vrátane radiácie, kortikosteroidov atď.

Bolo zistené, že boli objavené účinné metódy 1/ zvýšenia účinnej primárnej imunitnej odpovede u takýchto cicavcov na imunogény prítomné vo vakcíne, 2/ zvýšenia účinnej hladiny protilátok u cicavcov vystavených imunogénom vo vakcíne a 3/ zvýšenia primárnej imunitnej odpovede na imunogény prítomné vo vakcíne u cicavcov, kde ich imunitná odpoveď za neprítomnosti IL-4 nie je dostatočne silná alebo rýchla aby zabránila chorobe. Imunitná odpoveď týchto cicavcov za neprítomnosti IL-4 môže byť nedostatočne silná či dosť rýchla aby zabránila chorobe υ. týchto cicavcov, ale bolo zistené, že existujú účinné metódy, ktoré zahrnujú IL-4. .podanie, výhodnejšie podanie rekombinantného IL-4 v množstve účinnom pre tento účel takýmto cicavcom.

Vakcíny zamýšľané pre použitie, v zahrnujú bakteriálne vakcíny, vakcíny súlade s týmto vynálezom toxoidov /'inektivovtných toxoidov/ e víruosvé vakcíny alebo ich zmesi /mnohonásobné antigény’’/· používané pre aktívnu imunizáciu u ľudí. Pozri napríklad kapitola 75 nazvaná Immunizing Agents v Remington’s Pharmaceutical Sciences 14 vydanie 1990 Lack Publishing Co. str. 1426-1441 a antitoxíny, toxoidy, vakcíny a živé vakcíny schválené PDA a uvede ne na str. 210 /Product Category Index/ Physicians’Besk Peference, 44. vyd. 1990. Vhodné bakteriálne vakcíny zahrnujú bakteriálne vakcíny proti nasledujúcim chorobám alebo stavom: cholere, pertussis, moru, týfusovej horúčke, meningitíde, pneumokokovej pneumonii, H.influenzae typ B, lepre, kvapavke, meningokokovej skupine B a skupine B streptokokov, G-negatívnej sepse, E.coli sepse a Pseudomonáde aeruginosa.

Vhodná Toxoidy zahrnujú difteria toxoid, toxoid botulizmu a toxoid tetánu. Vhodné vírusové vakcíny zahrnujú živé a inaktivované vírusové vakcíny proti nasledujúcim chorobám a stavom: poliomyelitíde, osýpkam, ružienke, žltej horúčke, príusniciam a hepatitíde B.

Vhodné mnohonásobné antigény zahrnujú diftériu a tetanový toxoid, trojitý antigén - óiftérie, pertussie a tetanový toxoid tak, ako sú dosiahnuteľné od Connaught Laboratories Inc. Swiftevater, PA 18370. Široký rozsah vírusových kmeňov a bunkových substrátov, používaných v rôznych zemiach a imunizačná postupy sú popísané v Tabuľke 10-6 a 10-7 resp. kapitole 10 nazvanej Immunization against viral diseases v /str.

4, r. 27 str. 283-301 knihy D. 0. Whitea a F Fennera, Medicinal Virology, /1986/ 3. vydanie, Academic Press ^xnc. Orlando, PI a/.

Výraz v spojení s ako je tu používaný, znamená podanie IL-4 súčasne, počas alebo ihne3 pred alebo po podaní vakcíny, napríklad IL-4 môže byť podaný 1^ až 14 dní po a pred podaním vhodnej vakcíny. Normálne je možné podať IL-4 pred podaním vho dnej vakcíny, v čase postačujúcom pre získanie stálej hladiny IL-4 v lymfatickom tkanive cicavcov. Tieto hladiny sú určova7 né 'použitím 2tandartných fsrmakokinetiekých meraní. Podanie IL-4 by malo byť kontinuálne po.podaní vakcíny počas doby, počas ktorej sú imunogény prítomná vo vakcíne spracovávané imunitným systémom cicavcov a počas doby dostatočnej na to, aby IL-4 priniesol zvýšenie primárnej imunitnej odpovede. Vakcína je podaná cestou a silou doporučenou pre každý užívaný druh.

Akýkoľvek vhodný IL-4 môže byť použitý v predkladanom vynáleze. Komplementárne DNA /cDNA/ pre IL-4 boli nedávno klonované a sekvenované v mnohých laboratóriách, napr. ^okota-om. a spol., Proc. Natl. Acad Sci. USA /1966/ zv. 83: 5694-5896 /ľudské/, Lee-om a spol., Proc. Natl. ^cad Sci. USA /1986/ zv. 83: 2061-2065 /myšací, Nomaom a spol. Náture /1.986/ zv. 319: 640Λ

646 /myšací/ a Genzyme Corporation, Boston, Líassachusetts /ľudské s myšacie/. Navyše bol nsrskombinantný IL-4 čistený z rôznych kultúrových supernatantov, napr. Sandeŕson a spol., Proc. Natl. Acad. Sci. USA /1986/ zv. 83: 437-440 /myšací/, Grabstein a spol., J. Exp. Med. /1985/, zv. l63í 1405-1413 /myšací/, Ohara a spol., J. Immunol. /1985/ zv. 135·’ 2518-2523 /myšací BSF-1/, Butler a spol., j. Immunol. 133: /1984/' zv. 251-255 /ľudský BCGF/ a Farrar a spol., J. Immunol,/1983/ zv. 131í 1836-1842 /myšací BCGF/. Všetky predchádzajúce citácie sú tu zahrnuté ako odkazy vzhľadom na ich informácie o DNA a aminokyεklinových sekveciách s metódach'získania vhodných IL-4 materiálov pre použitie v predloženom vynáleze.

Výhodne je IL-4 používaný v predloženom vynáleze ľudský IL-4 a najvýhodnejšie je to ľudská verzia sekvencie popísanej v práci, ktorej autorom je Yokoto a spol., Proc. Natl; Acad. Sci. USA /1966/, zv. 83: 5894-5696 a PCT patentovej prihláške č. 87/02990 publikovanej 21. mája 1987, ktorá je exprimovaná a izolovaná z E. coli /US patentová prihláška č. 079666, podaná 29. júla 1967 s US patentová prihláška č. 194799 podaná 12. júla 1968/. Produkcia IL-4 ž OHO buniek je popísaná v US patentovej prihláške SN 366937, podanej

26. júle'1989. Fročh tovej prihláške US, .kcia IL-4 z. u. coli je pooísaná v oatenSií 429588, podanej 31 októbra 1989. Citované články, PCT prih vedené ako odkazy.

šky s U3 patentové prihlášky sú tu uVýraz účinné množstvo, ako je tu používaný v súvislosti s účinným množstvom IL-4 podaným v súlade s týmto vynálezom, znamená množstvo IL-4, ktoré produkuje nárast hladiny protilátok dostatočný na zvýšenie ochrany proti infekčnému agen su. Presné zvýšenie hladiny protilátok, ktoré môže byť považované za signifikantné, môže byť malé. Účinné množstvo podaného IL-4 sa typicky pohybuje od 0,25 do 15 mikrogramov IL-4, výhodne ľudského IL-4 rekombinantné produkovaného E. coli alebo CHO bunkami, na kilogram telesnej hmotnosti a den. Ešte výhodnejšie se cicavcom podáva 0,25 - 5 mikrogramov rhIL4 na kilogram telesnej hmotnosti a deň a najvýhodnejšie sa cicavcom podáva 0,25 - 1 mikrogram rhIL4 na kilogram telesnej hmotnosti a deň.

ľénožstvo, frekvencia a perióda podanie budú závisieť a meniť sa v závislosti na faktoroch ako je hladina titru špecifických protilátok, triede indukovaných protilátok, type vakw cíny ako aj veku pacienta, jeho výžive atd. Obvykle bude podanie IL-4 so začiatku denné a môže pokračovať periodicky počas celého pacientovho života. Veľkosť dávky a frekvencia môže byť určená počas počiatočného screeningu titru špecifických protilátok a veľkosti účinku IL-4 na zvýšenie titru protilátok.

Podanie dávky môže byť intravenózne,, nasálne, parenterálne, orálne, subkutánne, intramusLÍulárne, topické, transdermálne alebo akoukoľvek inou prijateľnou metódou. IL-4 môže byť podaný v akejkoľvek z rôznych konvenčných dávkových foriem. Parenterálne preparáty zahrnujú sterilné roztoky alebo suspenzie. Inhalačné podanie môže byť formou nazálneho alebo orálneho spreja alebo insufláciou. Topické dávkové formy zahrnujú krémy, masti, pleťové vody, tr--nsdermálne prípravky /t.j.

- 9 obvyklé rezervoáre aleb re.

Ry revrico?h nánlastí/

Frjamulácia farmaceutických prípravkov uvedených v týchto dávkových formách sa dá dosiahnuť s obvyklými farmaceutický prijateľnými|prísad8mi a excipientmi s použitím bežných tech ník.

V súčasnej dobe je IL-4 výhodne podávaný intravenóznou cestou. Roztok, ktorý má byť podaný, môže byť rekonštituovaný lyofilizovaný prášok a môže navyše obsahovať chrániace látky, pufre, disperganty atä.

Výhodne tovým pufrom neobsahujúcou sahujúcou 100 je IL-4 rekonštituovaný s 10 milimolárnym citrás vhodným pH a neobsahuje ochranné látky, vodou ochranné látky s maximálnou koncentráciou nepremikrogramov na mililiter a je podávaný kontinuálnou intravenóznou alebo infúziou alebo injekciou. Pre kontinuálnu infúziu môže byť denná dávka pridaná k 5 ml normálneho selenického roztoku a roztok potom je infundovaný mechanickou pumpou alebo pôsobením gravitácie.

Materiály a metódy

Ľudský rekombinantný IL-4 použitý v nasledujúcich experimentoch bol derivovaný CHO-bunkami a metódy jeho prípravy sú popísané v US patentovej prihláške, SN 386937, podanej 29. júla 1989.

Príklad realizácie vynálezu

Popis experimentov:

Opice: Dospelý samci opice Cynomolgus získaní z juhovýchodnej ázie boli odaní obvyklýipi zdrojmi, napr. Hazelton and Charles ⁿiver Laboratories. Všetky opice boli pred užitím minimálne 90 dní v karanténe.

ľetanus toxoid inokulscia zvierat:

Vakcína tetanus toxoidu použitá v tomto experimente bola tetanus toxoid purgonated^ tetanus toxoid tľkutý, získaný od Lederle Laboratories, Pearl r.iver, NY 10965.

Pätnásť /15/ dospelých samcov opice Cynomolgus bolo infikovaných opičím cytomegalovírusom /PCIvíV/ pred začiatkom tejto štúdie. Po celý čas zvieratá vykazovali merateľný titer pro tilátok proti PCMV. Účelom zahrnutia tejto internej kontroly bolo otestovať, či liečba IL-4 bude nešpecifický ovplyvňovať hladinu protilátok. Neočakávalo sa od IL-4, že bude produkovať zvýšenie protilátok proti PCMV, pretože PCMV vakcína nebola podaná. Standartné postupy použité na meranie protilátkových odpovedí boli radioimmunoassay pre PCMV a radioimmunoassay pevnej fázy /pozri Berzofasky, J.A. a spol. AntigenAntibody Interactions and Monoclonal Antibodies str. 315-356 v In Fundamental Immunology /1989/ 2. vydanie /77. E. Paul vyd./ Paven Press N.Y., N.Y. pre rHB’^ax a Salk inaktivovanou vakcínou poliovírusu.

Odber krvi pre skúšky na PCMV a tetanus toxoid protilátky bol vykonávaný raz týždenne počas'desiatich týždňov /2-7 obr. 1/ pred podaním IL-4 a dvakrát každý týždeň počas 22 týždňov /8-33/ štúdie. I.V., podanie rhlL-4 dvakrát denne v dávkových hladinách /5,0 s 20,0 pg/kg/deň 3.1.Ľ/ a placebo začalo medzi týždňami 8 a 12 a pokračovalo počas celkovo 25 dní. Vakcína tetanového toxoidu /0,5 ml obsahujúcich 5 Lf jednotiek tetanického toxoidu/ bola podaná intramuskulárnou injekciou každej z 15 opíc v 11. dni podávania rhIL-4. Výsledky určenia titru protilátok proti tetanu pre tri skupiny /priemer pre sku pinu/ sú uvedená na obr. 2 a tabuľke 1. Obr. 2 ilustruje graficky zvýšenie odpovede skupiny s 5 Mg/kg/deň v porovnaní so skupinou kontrolnou a skupinou s 20 /og/kg/deň. Odpoveá skupiny s '5 /ug/kg/deň /uvedená na obr. 2 a 4/ bola štatisticky významná vzhľadom na odpoveá kontrolnej skupiny, uvedenej na obr 2 a 3.

- 11 Tabuľka 1 ukazuje, že 1/ v týždňoch 4-c po vakcinácii tetanovým toxoidom skupina, ktorá prijala 5 pg/kg/ôen IL-4 mala štatisticky vyšší titer protilátok než mali ..kupiny, ktoré prijali placebo, 2/ v týždňoch 7-9 po vakcinácii mali obidve snupiny, ktoré prijali IL-4 /0,5 /ug/kg a 20 /ug/kg/ vyšší titer protilátok proti tetanu než mala kontrolná skupina s plac e bom·

Tabuľka 1

Odpovea protilátok na primárnu tetanovú vakcínu: vplyv II-4

Skupina	IL-4 dávka	týždeň 12-13	týždeň 14-16	týždeň 17-19
hladina	týždeň 11
I	0	37^21 ^2/	2127+606	2456+488	1223+139
II	5	49+30	2178+529	5333+697	3973^631
III	' 20	46+20	1560+228	2355+152	1677+227

1/ - ug/kg hmotnosti živočícha.

2/ - hodnoty predstavujú pri-merný titer protilátok počas obdobia; N = 5 opíc na skupinu /+ = S.L.I;./.

Vzhľadom na vyššie uvedené výsledky sa očakáva, že IL-4, výhodne rhIL-4, by mohol zvyšovať imunitnú odpoveá cicavcov v

po primárnej expozícii vakcíne tam, kde- primárna odpoved uve-. dených cicavcov nie je dostatočne- silná alebo rýchla na prevenciu infekcie.

Podobné výsledky sú očakávané pre bakteriálne a vírusové vakcíny a cih zmesi s toxoidml.

Claims

1. Použitie ÍL-4 pre výrobu liečiva na zvýšenie primárnej imunitnej odpovede u cicavcov na imunogény prítomné vo vakcíne podaním účinného množstva IL-4 v spojení s uvedenou vakcínou týmto cicavcom.

2. Farmaceutický prípravok na zvýšenie primárnej o ž.povede u cicavcov na imunogény prítomné vo vakcíne, vyznačujúci sa tým, že zahrnuje množstvo IL-4 účinné pre toto zvýšenie a farmaceutický prijateľný nosič.

3. Spôsob zvýšenia primárnej imunitnej odpovede u cicavcov na imunogény prítomné vo vakcíne, vyznačujúci sa t ý m, že zahrnuje podanie účinného množstva IL-4 v spojení s uvedenou vakcínou týmto cicavcom.

4. / Použitie farmaceutického prípravku alebo spôsobu podľa ktoréhokoľvek z predchádzajúcich nárokov, pri ktorom sa IL-4 podáva cicavcom súčasne s uvedenou vakcínou.

5. Použitie farmaceutického prípravku alebo spôsobu podľa ktoréhokoľvek z predchádzajúcich nárokov, pri ktorom je IL-4 podávaný parenterálne.

č. Použitie buč farmaceutického prípravku alebo spôsobu podľa ktoréhokoľvek z predchádzajúcich nárokov, kde je podávaný ľudský IL-4, výhodne Ξ. coli odvodený rekombinsntný IL-4

-7./ Použitie buč farmaceutického prípravku alebo spôsobu

-..y podľa ktoréhokoľvek z predchádzajúcich nárokov, kde množstvo podávaného IL-4 je v rozmedzí od 0,25 do 15 mikrogramov na kilogram telesnej hmotnosti na deň.

- 13 v

S. Použitie bud farmaceutického prípravku alebo spôsobu podľa ktoréhokoľvek z predchádzajúcich nárokov, kde vakcína je vírusová vakcína alebo bakteriálna vakcína alebo toxoidná vakcína.

9. Použitie buč farmaceutického prípravku, alebo spôsobu podľa ktoréhokoľvek z predchádzajúcich nárokov, kde toxoidná vakcína je tetanová toxoidná vakcína.

10., Kit na zvýšenie primárnej protilátkovej odpovede u cicavcov k imunogénom vo vakcíne, vyznačujúci sa tým, že zahrnuje 1/ kontajner farmaceutického prípravku IL-4 ε jeho farmaceutický prijateľného nosiča a 2/ kontajner farmaceutického prípravku vakcíny a ich farmaceutický prijateľného nosiča.