JPH06503830A - ワクチン中の免疫原に対する免疫応答を促進するｉｌ−４の使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ワクチン中の免疫原に対する免疫応答を促進するＩＬ−４の使用発明の背景 本発明は、ワクチン中の免疫原に対する哺乳動物の一次免疫応答を促進する活性 成分としてインターロイキン−４を含む薬剤組成物に関する。本発明は、更に、 ワクチン中に存在する免疫原に対する哺乳動物の一次免疫応答を促進するための 薬剤の製造に対するインターロイキン−４の使用並びに哺乳動物において有効量 □　のインターロイキン−４をワクチンと一緒に該哺乳動物に対して投与するこ とによって該ワクチン中に存在する免疫原に対する有効な一次免疫応答を促進す る方法に関する。

序論 インターロイキン−４［以下ｒｌＬ−４Ｊであるが、Ｂ細胞刺激因子１（ＢＳＦ −１）としても知られる］は、Ｍ、ハワード（Ｈｏｗａｒｄ、）らによってＪ。

Ｅｅｐ、Ｍｅｄ、（１９８２）、１５５巻、９１４〜２３頁に、正常なマウスＢ リンパ球の長期組織培養を可能にし且つ活性８０２８球と相互作用してそれらの 増殖を４か月程度の長期間維持した、ＩＬ−２とは異なるＴ細胞に誘導された増 殖因子として最初に記載された。混合Ｂリンパ球外植体を用いて培養を開始した が、未熟表現型を有するＢＩＪンパ球は、組織培養中のＩＬ−４によって特異的 にθ巻、１１０１〜１１０６には、ＩＬ−４が、休止ネズミＴリンパ球の下位集 団Ｌｙｔ−２＋からの細胞障害性Ｔ細胞の発生を刺激することが開示されており 、Ｈ，スピッツ（Ｓｐｉｔｓ）ら、Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｆ、（１９８７）、１３９ 巻。

１１４２〜４７には、ＩＬ−４が、インビトロのヒト細胞に対してＩＬ−２とは 異なるＴ細胞増殖因子として作用することがあることが開示されている。

マウスＩＬ−４遺伝子はＣ０８−７細胞中でクローン化され且つ発現した［Ｔ。

オーツカ（Ｏｔｓｕｋａ）ら、Ｎｕｃ、Ａｃ１ｄｓ　Ｒｅｓ、（１９８７）、１ ５巻、３３３〜３３４を参照されたい］。クローン化因子は、Ｔ細胞培養物上澄 みから精製された因子に見られた組織培養中の活性全部を有した。ヒトＩ　Ｌ− ４８３巻、５８４４〜５８４８に記載されており、Ｃ０８−７細胞中で生産され た因子は組織培養において研究される天然の分子と同様の活性を有した。ＩＬ− ４をヒトおよびネズミ双方の細胞システムにおいて研究したところ、更に別のイ ンビトロの活性がその分子に起因していた。すなわち、（ｉ）ＩＬ−４はＩｇＥ 合成の誘導および調節において重要な役割を果たしており、Ｂリンパ球下位集団 の；（ｉｉ）ＩＬ−４は、組織培養において正常なヒトＢリンパ球上の低親和性 Ｆｃε受容体（ＣＤ２３）を誘導した［Ｔ、デフランス（ＤｅＦｒａｎｃｅ）ら 、Ｊ、Ｅｘｐ、Ｍｅｄ、（１９８７）、１６５巻、１４５９〜１４５７を参照さ れたい］　；　（ｉ　ｉ　ｉ）　ＩＬ−４は他のリンホカイン、特に、インター フェロン−γ［Ｒ，Ｌ、ニア７７ン（Ｃｏｆ　ｆｍａｎ）ら、Ｉｍｍｕｎｏｌ、 Ｒｅｓ、（１９８８）、１０２巻、５〜２７およびＳ０口？−＝ヤニ　（Ｒｏｍ ａｇｎａｎｉ）ら、（１９８７）、３２６巻、７９５〜９８を参照されたい］と 相互作用して、Ｂ細胞の増殖および変化を引き起こした；（ｉｖ）ＩＬ−４はヒ トＢ細胞によって特定の抗体クラス、例えば、Ｉｇの分泌を促進した［Ｊ、Ｂ、 　スブラウスキ（Ｓｐ　ｌ　ａｗｓ　ｋ　ｉ）　ら、Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、（１ ９８９）、１４２巻、１５６９〜１５７２を参照されたい］；（ｖ）ＩＬ−４は 、Ｔ細胞、肥満細胞およびマクロファージに対する刺激作用を有する［Ｋ、　Ｈ ，グラブスタインＳｃ　ｉ、（１９８６）、８３巻、２０６１；およびＡ、ズロ トニク５〜４２７９を参照されたい］　；そして（ｖｉ）ＩＬ−４は、休止Ｂ細 胞に対するＭＨＣクラスＩＩ抗原発現を増大させた（Ｒ，フェμ（Ｎｏｅｌｌｅ ）ら、ＰＮＡＳ８１．６１４９〜６１５３．１９８４）。Ｔ、　Ｒ，モスマン（ Ｍｏｓｍａｎｎ）ら、Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏ、、１３８巻、１８１３〜１８１６には 、アミノ酸配列１〜９０および１２９〜１４９において５０％相同であるヒトお よびネズミＩＬ−４が種特異的であることが開示された。

感染抗原刺激、例えば、慢性的感染由来のウィルス、細菌、真菌または原生動物 に対する免疫応答を促進するＩＬ−４の使用は、１９９０年３月２１日出願の同 一所有の米国特許出願第０７／４９６．８３２号明細書に開示されており、１９ ９１年３月１９日出願のＰＣＴ出願第ＵＳ−９１１０１７３３号明細書に対応す る。

発明の概要 本発明は、哺乳動物に対して有効量のＩＬ−４をワクチンと一緒に投与すること によって該ワクチン中に存在する免疫原に対する該哺乳動物の一次免疫応答を促 進する薬剤の製造に対するＩＬ−４の使用を提供する。

本発明は、更に、ワクチン中に存在する免疫原に対する哺乳動物の一次免疫応答 を促進するための薬剤組成物であって、このような促進に有効な一定量のＩＬ− ４および薬学的に許容しうる担体を含む上記組成物を提供する。

本発明は、更に、哺乳動物において、このような予防に有効な一定量のＩＬ−４ をワクチンと一緒に該哺乳動物に対して投与することを含む、該ワクチン中に存 在する免疫原に対する一次免疫応答を促進する方法を提供する。

本発明は、更に、このような誘導に有効な一定量のＩ　Ｌ−４をウィルスワクチ ンと一緒に哺乳動物に対して投与することを含む、該ワクチン中に存在する免疫 原に対する該哺乳動物の一次免疫応答を促進する方法を提供する。

本発明は、また更に、哺乳動物において、このような目的に有効な一定量のＩＬ −４を破傷風トキソイドワクチンと一緒に該哺乳動物に対して投与することを含 む、該破傷風トキソイドワクチン中に存在する免疫原に対する一次免疫応答を促 進する方法を提供する。

本発明は、更に、哺乳動物において、このような目的に有効な一定量のＩＬ−４ をワクチンと一緒に該哺乳動物に対して投与することを含む、ＩＬ−４不存在で の該哺乳動物による一次免疫応答が疾患を予防するのに十分に強力でないしまた は急速でない、該ワクチン中に存在する免疫原に対する該−次免疫応答を促進す る方法を提供する。

本発明は、更に、（１）ＩＬ−４の薬剤組成物およびそれに対する薬学的に許容 しうる担体の容器並びに（２）ワクチンの薬剤組成物およびそれに対する薬学的 に許容しうる担体の容器を含む、ワクチン中の免疫原に対する哺乳動物の一次免 疫応答を促進するためのキットを提供する。

図面の説明 図１は、本発明による組換えヒトＩＬ−４および破傷風トキソイドワクチンのジ ノモルガス（ｅｙｎｏｍｏ　Ｉｇｕｓ）モンキーに対する投与によって達成され た経時免疫応答を図示する。

図２〜５は、ジノモルガスモンキーモデルにおいて、本発明にしたがって組換え ヒトＩＬ−４および破傷風トキソイドワクチンを０．５ｍｃｇ／Ｋｇおよび２０ ｍｃｇ／Ｋｇ投与することによる破傷風抗体の出現を破傷風トキソイドワクチン に対する時間の関数として図示するグラフである。

発明および好ましい実施態様の詳細な説明本発明者は、ジノモルガスモンキーに 対する組換えヒトＩＬ−４（以下ｒｒｈＩ　Ｌ−４Ｊ　）の破傷風トキソイドワ クチンと同時の投与が、該モンキーにおける一次免疫応答を促進させたというこ とを意外にも発見した。この結果は、組換えＢ型肝炎ウィルス（ｒＨＢＶａｘ） を用いるブースター接種中のジノモルガスモンキーに対して、ｒＨＢＶａｘワク チンを投与して約２か月後にｒｈｌＬ−４を投与した場合、更にはソーク不活化 ポリオウィルスワクチンを用いるブースター接種中のジノモルガスモンキーに対 して、ソーク不活化ポリオウィルスワクチンを投与して約１か月後にｒｈｌＬ　 ４を投与した場合にも、既往応答、すなわち、二次応答または記憶応答が観察さ れなかったので特に意外である。ＩＬ−４をワクチンと一緒に投与する本発明の 方法は下記の利点を有する。ＩＬ−４の存在下でのより少量の抗原が、上記のワ クチンの投与によって達成されるのと少なくとも同等の免疫学的応答をもたらす と考えられるので、投与されるワクチンの全抗原性負荷は減少することができる 。本発明にしたがってＩＬ−４を投与することによって、より少量の抗原しかワ クチン注射に必要とされないと考えられるので、現在用いられているある種のワ クチンに関係した望ましくない副作用の確率は減少すると考えられる。更に、有 効な予防を達成するのにより少量の免疫原しか必要とされないので、個体当りの ワクチンの総費用は低減すると考えられる。ワクチン注射に対して不十分に応答 するある種の個体の免疫応答は、本発明にしたがってＩＬ−４を投与することに より促進されると考えられる。本発明の方法から恩恵を受ける必要があるこの種 の個体としては、（１）免疫応答性が損なわれている種類の個体、例えば、ある 種の免疫欠損を伴って生まれた子供、（２）ある種のワクチンに対して応答性で ない推定上の正常な個体並びに（３）放射線、コルチコステロイド等を含む免疫 抑制療法を受けている個体がある。

したがって、本発明者は、（１）このような哺乳動物においてワクチン中に存在 する免疫原に対する有効な一次免疫応答を促進し；　（２）ワクチン中の免疫原 に対し°Ｃ暴露された哺乳動物における抗体の有効量を増大させ；そして（３） ＩＬ−４不存在下の哺乳動物による一次免疫応答が疾患を予防するのに十分に強 力ではないしまたは急速ではない、ワクチン中に存在する免疫原に対する該哺乳 動物での該免疫応答を促進する有効な方法を発見した。ＩＬ−４不存在下の前記 の哺乳動物による免疫応答は、該哺乳動物におい“Ｃ疾患を予防するのに十分に 強力ではないしまたは急速ではないことがあるが、本発明者は、このような哺乳 動物に対してこの種の目的それぞれに有効な一定量のＩＬ−４、好ましくは、組 換えヒトＩ　Ｌ−４を投与することを含む有効な方法を発見した。

本発明にしたがって用いるのに考えられたワクチンとしては、細菌ワクチン、ト キソイドワクチン（不活化毒素）およびウィルスワクチンまたはヒトにおける能 動免疫に用いられるそれらの混合物（「多重抗原」）がある。例えば、Ｒｅｍｊ ｎ　ｔｏｎ’　ｓ　Ｐａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　５ｃｉｅｎｃｅｓ第１４版　 １９９０年　マッグ・パブリッシング・カンパニー（ＭａｃｋＰｕｂｌ　ｉｓｈ ｉｎｇ　Ｃｏ、）１４２６〜１４４１頁の「免疫感作物質（Ｉｍｍｕｎｉｚｉｎ ｇ　Ａｇｅｎｔｓ）Ｊという表題の第７５章並びに、米国れた抗毒素、トキソイ ド、ワクチンおよび生ワクチンを参照されたい。適当な細菌ワクチンとしては、 下記の疾患または状態、すなわち、コレラ、百日咳、ペスト、腸チフス、髄膜炎 、肺炎球菌性肺炎、Ｈインフルエンザ（ｉｎｆ　１ｕｅｎｚａｅ）Ｂ型、らい、 淋疾、Ｂ群髄膜炎菌およびＢ群連鎖球菌属、グラム陰性敗血症、大腸菌（Ｅ、ｃ ｏｌｉ）敗血症および緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ ）に対する細菌ワクチンがある。適当なトキソイドとしては、ジフテリアトキソ イド、ポツリスムトキソイドおよび破傷風トキソイドがある。適当なウィルスワ クチンとしては、下記の疾患または状態、すなわち、灰白髄炎、麻疹風疹、黄熱 病、流行性耳下腺炎およびＢ型肝炎に対する生および不活化ウィルスワクチンが ある。

適当な「多重抗原」としては、コンノート・ラボラトリーズ・インコーホレーテ ッド（Ｃｏｎｎａｕｇｈｔ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｉｎｃ、）スウイフト ヴアター、ＰＡ　１８３７０から入手可能であるようなジフテリアおよび破傷風 トキソイド、三重抗原であるジフテリア、百日咳および破傷風トキソイドがある 。様々な国々および免疫感作スケジュールで用いられた広範囲のウィルス株およ び細胞基質は、（Ｄ、　Ｏ，ホワイト（Ｗｈ　ｉ　ｔ　ｅ）およびＦ、ツェナー （Ｆｅｎｎｅｒ）著、Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｖｉ　ｒｏｌｏ　ｙ、（１９８６）第３ 版、アカデミツク・プレス。インコーホレーテッド（Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅ ｓｓＩｎｃ、）オルランド、Ｆｌａの４頁、２８３〜３０１頁２７行）の「ウィ ルス性疾患に対する免疫感作（Ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ　ａｇａｉｎｓｔｖｉ ｒａｌ　ｄｉｓｅａｓｅｓ）Ｊという表題の第１０章の表１０−６および１０− ７それぞれに開示されている。

本明細書中で用いられる「と−緒に」という用語は、ワクチンの投与中または直 前若しくは直後の同時の夏Ｌ−４の投与を意味する。例えば、ＩＬ−４は、適当 なワクチンが投与される前後の１０〜１４日間投与することができる。通常、適 当なワクチンを投与する前に、哺乳動物のリンパ組織中で定常状態のＩ　Ｌ−４ 濃度を得るのに十分な時間ＩＬ−４を投与する。このような濃度は標準的な薬動 学測定法を用いることによって決定される。ＩＬ−４の投与は、ワクチンを投与 した後、ワクチン中に存在する免疫原が哺乳動物免疫系によって処理されている 時間中およびＩＬ−４が一次免疫応答を促進させるのに十分な時間継続される。

ワクチンは、用いられるそれぞれの種に推奨された経路および強度で投与される 。

適当なＩＬ−４はいずれも本発明において用いることができる。最近、ＩＬ−４ に相補的なりＮＡｓ　（ｃＤＮＡ）が、多数の研究室、例えば、ヨコタら、Ｐｒ ｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、ＵＳＡ、（１９８６）旦旦巻：５８９４〜 ５８９ε　（ヒト）　；リー（Ｌｅｅ）　ら、Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ。

Ｓｃｉ、ＵＳＡ、（１９８６）８３巻：２０６１〜２０６５　（マウス）；ノー マ（Ｎｏｍａ）ら、Ｎａｔｕｒｅ　（１９８６）旦１旦巻＝６４０〜６４６（マ ウス）；およびジエンザイムーコーポレーション（ＧｅｎｚｙｍｅＣｏｒｐｏｒ ａｔｉｏｎ）、ボストン、マサチューセッツ（ヒトおよびマウス）でクローン化 され且つ配列決定された。更に、非組換えＩＬ−４が種々の培養物上澄みから精 製された。例えば、サンダーソン（Ｓａｎｄｅｒｓｏｎ）ら、Ｐｒｏｃ、Ｎａｔ ｌ、Ａｃａｄ、Ｓｅｔ、ＵＳＡ、（１９８６）旦旦巻：４３７〜４４０（マウス ）；グラブスタイン（Ｇｒａｂｓｔｅｉｎ）ら、Ｊ、Ｅｘｐ。

Ｍｅｄ、、（１９８５）工旦旦巻：１４０５〜１４１３　（マウス）；オノ１う （Ｏｈａｒａ）　ら、Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏ　１．、（１９８５）１３５巻＝２５１ ８〜２５２３　（マウスＢＳＦ−１）；パトラ−（Ｂｕｔｌｅｒ）ら、二Ｉｍｍ ｕｎｏ１．．１３３巻：　（１９８４）２５１〜２５５　（ヒトＢＣＧＦ）。

およびファラー（Ｆａｒｒａｒ）ら、Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、、（１９８３）１３ １巻：１８３８〜１８４２　（マウスＢＣＧＦ）。上記論文の開示はいずれも、 本発明において用いるのに適当なＩＬ−４材料を得るためのＤＮＡおよびアミノ 酸配列並びに方法についての内容に関する参考文献として本明細書中に包含され る。

好ましくは、本発明において用いられるＩＬ−４はヒｈ　Ｉ　Ｌ−４であり、最 も好ましくは、それはヨコタら、Ｐｒｏｃ、Ｎａｔ　１．Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、Ｕ ＳＡ（１９８６）８３巻＋　５８９４〜５８９８および、大腸菌において発現さ せ且つそこから単離している１９８７年５月２１日公開のＰＣＴ特許出願第８７ １０２９９０号明細書（１９８７年７月２９日出願の米国特許出願第０７９．６ ６６号明細書および１９８８年７月１２日出願の米国特許出願第１．９４．７９ ９号明細書）に記載された配列を有するヒト変種である。ＣＨＯ細胞からのＩＬ −４の生産は、１９８９年７月２８日出願の同一所有の米国特許出願第５Ｎ３８ ６．９３７号明細書に記載されている。大腸菌からのＩＬ−４の生産は、１９８ ９年８月３１日出願の同一所有の米国特許出願第５Ｎ４２９．５８８号明細書に 記載されている。上記論文、ＰＣＴ出願および米国特許出願の開示は参考文献と して本明細書中に包含される。

本発明にしたがって投与される有効量のＩＬ−４に関して本明細書中で用いられ る「有効」という用語は、感染原因物質からの保護を増大させるのに十分な抗体 濃度の上昇を生じる一定量のＩＬ−４を意味する。抗体濃度の正確な上昇はおそ らくかなり小さいと考えられる。投与される有効量のＩＬ−４は、典型的に、Ｉ Ｌ−４、好ましくは、大腸菌またはＣＨＯ細胞から組換えによって生じたヒトＩ Ｌ−４が０．２５〜１５マイクログラム／ｋｇ（体重）７日で投与するのが好ま しい。更に好ましくは、哺乳動物にｒｈｌＬ−４を０．２５〜５マイクログラム ／ｋｇ（体重）７日で投与し、最も好ましくは、哺乳動物にｈ　Ｉ　Ｌ−４を０ ゜２５〜１マイクログラム／ｋｇ（体重）７日で投与する。

投与量、回数および期間は、特異的抗体力価、誘導される抗体のクラス、ワクチ ン種類、更には患者の年齢、栄養等のような因子に応じて変化する。通常、■Ｌ −４の投与は最初は毎日であり、そして患者の寿命の間周期的に継続することが できる。投薬量および回数は、特異的抗体力価および抗体力価の増加に対するＩ Ｌ−４の効果の強さを最初にスクリーニングする際に決定することができる。

投薬は、静脈内、点鼻、非経口、経口、皮下、筋肉内、局所、経皮または何等か の他の許容しうる方法であることができる。ＩＬ−４は何種類もの慣用的な剤形 で投与することができる。非経口製剤としては、滅菌水剤または懸濁剤がある。

吸入投与は点鼻若しくは経口用噴霧剤の形でまたは吹入によることができる。局 所的剤形としては、クリーム剤、軟膏剤、ローション剤、経皮装置（例えば、慣 用的なレザバーまたはマトリックスパッチ型）等がある。

上記剤形によって考えられる薬剤組成物の製剤は、慣用的な薬学的に許容しうる 賦形剤および添加剤と一緒に慣用的な技法を用いて製造することができる。

現在、ＩＮ、−４は静脈内経路によって投与されるのが好ましい。投与される水 剤は凍結乾燥粉末を還元してよいし、更に、それらは保存剤、緩衝剤、分散剤等 を含んでいてよい。

好ましくは、ＩＬ−４を、最大濃度が１０マイクログラム／ミリリツトル以下で ある適当なｐＨおよび保存剤不含滅菌水の１０ミリモルクエン酸緩衝液で還元し 且つ持続静脈内注入によってまたは静脈内注射によって投与する。持続注入に対 しては、日用量を規定食塩水５ｍｌに加えることができ、その水剤を機械的ポン プによってまたは重力によって注入する。

材料および方法： 下記の実験において用いたヒト組換えＩＬ−４はＣＨＯ細胞由来であって、その 製造方法は１９８９年７月２９日出願の米国特許出願第５Ｎ３８６．９３７号明 細書に記載されている。

東南アジアから入手された成熟した雄のジノモルガスモンキーを販売元、例えば 、ベーゼルトン（Ｈａｚｅｌｔｏｎ）およびチャールズ・リバー・ラボラトリー ズ（Ｃｈａｒｌｅｓ　Ｒｉｖｅｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）から購入した。

全部のサルを、使用前に最低９０日間隔離した。

破傷風トキソイドおよび被験動物接種：本実験で用いた破傷風トキソイドワクチ ンは、レダール・ラボラトリーズ（Ｌｅｄｅｒｌｅ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ ）、パール・リバー、ＮＹＩＯ成熟したジノモルガスモンキー１５匹を、この研 究を開始する前に、霊長類サイトメガロウィルス（ＰＣＭＶ）に感染させた。そ の時点で、全被験動物がＰＣＭ、Ｖの測定しうる抗体力価を示した。この内部調 節を行なう目的は、ＩＬ−４処置が抗体濃度に非特異的に影響を与えるかどうか を試験することであった。本発明者は、ＰＣＭＶワクチンを投与しなかったので 、ＩＬ−４がＰＣＭＶに対する抗体の増大を生じることを予期していなかった。

抗体反応を測定するのに用いられた標準的な方法はＰＣＭＶに関するラジオイム ノアッセイおよび固相ラジオイムノアッセイであった（ｒＨＢＶａｘおよびソー ク不活化ポリオウィルスワクチンに関するｒｌｎ　Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ　Ｉ ｍｍｕｎｏｌｏ　ｙＪ、（１９８９）第２版（Ｗ、Ｅ、ポール（Ｐａｕｌ）監修 ）ラヴエン鴨プレス（Ｒａｖｅｎ　Ｐｒｅｓｓ）Ｎ、Ｙ、、Ｎ、Ｙ、の３１５〜 ３５６頁、ベルツオフアスキー（Ｂｅｒｚｏｆａｓｋｙ）、Ｊ、Ａ、ら、「抗原 〜抗体相互作用および単クローン性抗体（Ａｎｔｉｇｅｎ−Ａｎｔｔｂｏｄｙ　 Ｉｎｔｅｒ−ａｃｔｉｏｎｓ　ａｎｄ　Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　Ａｎｔｉｂｏｄ ｉｅｓ）Ｊを参照されたい）。

ＰＣＭＶおよび破傷風トキソイド抗体の検定用の血液を得るための採血は、■Ｌ 、−４を投与する前の９週間は一週間に１回（図１の２〜７）および研究対象の ２２週間は各週に２回（８〜３０まで）行なった。−日２回の投与量でのｒｈｌ Ｌ−４（５，０および２０．０μｇ／Ｋｇ／日、Ｂ、１．　Ｄ、　）およびプラ シーボの静脈内投与を８週目の中間から１２週目の中間に開始し、そして全２５ 日間継続した。破傷風トキソイドワクチン（破傷風トキソイドを５Ｌｆ単位含む ０゜５ｍＬ）を筋肉内注射によって１５匹のサルそれぞれに対してｒｈＩＬ−４ 投与の第１１日目に投与した。三つの群に関する破傷風抗体力価測定の結果（群 平均データ）を図２および表Ｉに示す。図２は、対照および２０μｇ／Ｋｇ／日 群と比較して増大した５μｇ／Ｋｇ／日群の反応をグラフによって図示する。５ μｇ／Ｋｇ群の反応（図２および図４に示した）は、図２および図３に示した対 照群の反応と比較して統計的に有意であった。

表Ｉは、（１）破傷風トキソイドワクチン注射後の４〜６週間において、ＩＬ− ４を５μｇ／Ｋｇ与えられた群の抗体力価はプラシーボ対照群の場合よりも統計 的に高＜；（２）ワクチン注射後の７〜９週間において、ＩＬ−４（５，０μｇ ／Ｋｇおよび２０μｇ／Ｋｇ）を与えられた双方の群の抗体力価はプラシーボ対 照群の場合よりも高かったことを示している。

−次破傷風ワクチンに対する抗体反応：ｌｌ５４９±３０　２１７８±５２９　 ５３３３±６９７　３９７３±６３１（１）−μｇ／ｋｇ（被験動物体重） （２）−値は全期間の平均抗体力価を示す；Ｎ−サル５匹／群（±＝Ｓ、　Ｅ、 　Ｍ、　）。

上記の実験の結果から、ＩＬ−４、好ましくはｒｈｌＬ−４は、哺乳動物による 免疫応答が疾患を予防するのに十分に強力でないしまたは急速でない、ワクチン に対する最初の暴露後の哺乳動物での免疫応答を促進するであろうと期待される 。

同様の結果が、細菌およびウィルスワクチン並びにトキソイドとのそれぞれの混 合物に対して予想されると考えられる。

た斤究工Ｊひ°泪旅スグジ１−ｊしの経Ｂ寺的尉毘酪ル皮イｌ！ｆａオ九イ木カ イ西：言下平均テパ一夕週 回２ ル皮傷月し朽Ｌイ本力相　：夕４照君Ｙは １辺　３ ＭＡ　Ｕ　ｊＪ’［，４＊カイｉｌｌ　：５，０　）」９／ｋＣ１８手週 ｌ午 遁臣イ塾　Ｉ了しイ本カイ＠　：　２０．０ノｚｇ／ｋｇｉ亨皿 図ぶ 国際調査報告 ｋｔｍＰＣＩｎｕａ＋口１議萬奪噛Ｗｎ−嘴凄−＄ローｍ＋２１１−Ｐｌａ１２ ＢＯシ１ｉ国際調査報告 Ｔｌｊｓ−−−１−ｔｓｅｕｌｅｗｌｌ欺−一マｗ−１−−ツ嘆ｍνｉ輪ｔＩ＠ 鶴ｔｐ−−１に６−ｉ四−１−オｔｋｅ４−６１ａｍ−ト・|１七−１−−ｍ５ ＋ｓ−〉−１−−■−で一１１Ｎ−１ＴＩ＋ｃ＋＋−一噌■１−−１１−−１ｒ １＋ｍｓ＋ｅｅ４ｍｌ珈−ｒＥｍａｐｅｍＰａ＋ｅｍ（）ｌ’ｌ’ｉ＋ｖＥＤＰ Ｆｂｔｗ−齋９１O３Ｉ９！ １ｂ１倉−Ｐｍｅｗ＋　ω−１ｍ　Ｍ　ｗｓ７−廁１ｍ−−ｖ■−蛸Ｉ−６劉１ 畔轡ｙｐｅ＊　Ｉｗ　ｔｈｅ−１嘴ｅｌ　−一一一フロントページの続き （８１）指定国　ＥＰ（ＡＴ、ＢＥ、ＣＨ，ＤＥ。

ＤＫ、ＥＳ、ＦＲ，ＧＢ、ＧＲ，ＩＴ、ＬＵ、ＭＣ，ＮＬ、ＳＥ）、０Ａ（ＢＦ 、ＢＪ、ＣＦ、ＣＧ、ＣＩ、ＣＭ、ＧＡ、ＧＮ、ＭＬ、ＭＲ，ＳＮ、ＴＤ、ＴＧ ）、ＡＵ、　ＢＢ、　ＢＧ、　ＢＲ，ＣＡ、　Ｃ３，ＦＩ、　ＨＵ、ＪＰ。

ＫＰ、　ＫＲ，ＬＫ、　ＭＧ、　ＭＷ、　Ｎｏ、　ＰＬ、　ＲＯ，ＳＤ、５Ｕ （７２）発明者　コックス、スチュアート・エイアメリカ合衆国ニューヨ−シー 州０７２０４゜ロセル・パーク、ベンダー・アベニュー（７２）発明者　ヘイア ー、マイケル・ディーアメリカ合衆国ニューヨーク州１００２１．ニューヨーク 、イースト・シックスティサード・ストリート　４３０．ナンバー１２エヌ（７ ２）発明者　シュワルツ、ジェロームアメリカ合衆国ニューヨーク州１００２８ ．ニューヨーク、イースト・エイティセヴンス・ストリート　５００　エイ

Claims (10)

【特許請求の範囲】
1. １．哺乳動物に対して有効量のＩＬ−４をワクチンと一緒に投与することによっ て該ワクチン中に存在する免疫原に対する該哺乳動物の一次免疫応答を促進する ための薬剤の製造に対するＩＬ−４の使用。
2. ２．ワクチン中に存在する免疫原に対する哺乳動物の一次免疫応答を促進する薬 剤組成物であって、このような促進に有効な一定量のＩＬ−４および薬学的に許 容しうる担体を含む上記組成物。
3. ３．哺乳動物に対して有効量のＩＬ−４をワクチンと一緒に投与することを含む 、該ワクチン中に存在する免疫原に対する該哺乳動物の一次免疫応答を促進する 方法。
4. ４．ＩＬ−４を前記の哺乳動物に対して前記のワクチンと同時に投与する請求項 １〜３のいずれか１項に記載の使用または薬剤組成物または方法。
5. ５．ＩＬ−４を非経口によって投与する請求項１〜４のいずれか１項に記載の使 用または薬剤組成物または方法。
6. ６．ヒトＩＬ−４、好ましくは、大腸菌由来の組換えヒトＩＬ−４を投与する請 求項１〜５のいずれか１項に記載の使用または薬剤組成物または方法。
7. ７．投与されるＩＬ−４の量が０．２５〜１５マイクログラム／キログラム（体 重）／日の範囲である請求項１〜６のいずれか１項に記載の使用または薬剤組成 物または方法。
8. ８．ワクチンがウイルスワクチン若しくは細菌ワクチンまたはトキソイドワクチ ンである請求項１〜７のいずれか１項に記載の使用または薬剤組成物または方法 。
9. ９．トキソイドワクチンが破傷風トキソイドワクチンである請求項１〜８のいず れか１項に記載の使用または薬剤組成物または方法。
10. １０．（１）ＩＬ−４の薬剤組成物およびそれに対する薬学的に許容しうる担体 の容器並びに（２）ワクチンの薬剤組成物およびその薬学的に許容しうる担体の 容器を含む、ワクチン中に存在する免疫原に対する哺乳動物の一次免疫応答を促 進するためのキット。