SK37299A3

SK37299A3 - Erythromycin a derivatives, method of selective methylation of 6-oh group of erythromycin a and process for the preparation of 6-o-methylerythromycin a

Info

Publication number: SK37299A3
Application number: SK372-99A
Authority: SK
Inventors: Vladimir Nadaka; Joseph Kaspi
Original assignee: Chemagis Ltd
Priority date: 1998-07-15
Filing date: 1999-03-19
Publication date: 2000-01-18
Also published as: EP0972778A1; HUP9900690A2; IL125372A0; HU9900690D0; JP2000034297A

Description

Navrhovaný vynález sa týka derivátov 6-0-metylerytromycínu - A a spôsobu prípravy uvedených derivátov. Tieto deriváty sú totiž vhodnými medziproduktami na prípravu antibiotikového liečiva 6-0-metylerytromycínu A (klaritromycínu).

Doterajší stav techniky

Erytromycín A je považovaný za jedno z najbezpečnejších antibiotík. Avšak v kyslom prostredí stráca táto zlúčenina veľmi rýchlo svoju antibakteriálnu aktivitu vďaka intermolekulárnej cyklizácii. Jednou z možností ako zlepšiť stabilitu molekuly je prevencia uvedenej cyklizácie metyláciou hydroxylovéj skupiny v pozícii 6. 6-0-metylerytromycín A je účinný pri liečbe bakteriálnych infekcií pri orálnom spôsobe podávania.

Existuje niekolko známych spôsobov prípravy 6-0metylerytromycínu A. Príkladom môže byť selektívna metylácia hydroxylovej skupiny v pozícii 6 derivátov erytromycínu A s chránenými 2'-hydroxylovými skupinami a s chránenými 3'dimetylaminoskupinami, na rôzne typy substituovaných oximových derivátov a následnou metyláciou hydroxylovývh skupín v pozícii 6, odstránenie chrániacich skupín, deoximáciu v pozícii 9 a obnovu dimetylamino skupiny v pozícii 3' za vzniku 6-0metylerytromycínu A. Tento spôsob prípravy je popísaný v European patent 195,960 a v European Patent 158,467. Podobne U.S. patent 4,990, 602 popisuje zdokonalený spôsob selektívnej metylácie hydroxylovej skupiny v pozícii 6 erytromycín A 9oximov, ktorý je založený na chránení hydroxylových skupín v pozíciách 2' a 4'' substituovanými silylovými skupinami a hydroxylové skupiny 9-oximovej jednotky alkoxyalylovou skupinou. Uvedené chrániace skupiny sú následne po metylácii hydroxylovéj skupiny v pozícii 6 ľahko odstránené.

Hoci je selektívna metylácia 6-hydroxylovej skupiny uvedenými metódami realizovateľná, ide o komplikované procesy, ako napríklad o katalytickú redukciu za účelom odstránenia chrániacich skupín následne po metylácii (uvedené európske patenty) alebo o čistenie stĺpcovou chromatografiou (U.S. patent).

Podstata vynálezu

S ohľadom na doterajší stav techniky prináša navrhovaný vynález spôsob selektívnej metylácie hydroxylovej skupiny založený na konverzii 9-azínu reakcii

9-azínu s metylačným v pozícii 6 derivátov erytromycínu A, derivátov erytromycínu A na deriváty erytromycín A s chránenými hydroxylovými skupinami a následnej výsledných derivátov erytromycín A činidlom.

Konkrétne sa navrhovaný vynález zaoberá novým derivátom erytromycínu A, ktorý má všeobecný vzorec I :

R1„ .R2

kde R¹ je atóm vodíka alebo alkylová skupina s 1 až 6 atómami uhlíka, R² je alkylová skupina s 1 až 6 skupinami uhlíka alebo nesubstituovaná či substituovaná arylová skupina alebo R¹ a R²spoločne tvoria lineárne alebo nelineárne vetvený reťazec alkylénového kruhu s 3 až 10 atómami uhlíka, arylénalkylovú skupinu, kde alkylénová jednotka je tvorená 2 až 3 atómami uhlíka alebo aryléndialkylénovú skupinu, kde alkylénové jednotky sú tvorené 1 až 2 atómami uhlíka ; R³ je substituovaná silylová skupina a R⁴ je atóm vodíka alebo substituovaná silylová skupina.

V jednom z obzvlášť výhodných uskutočnení sú predmetom navrhovaného vynálezu deriváty 6-0-metylerytromycínu A všeobecného vzorca II :

kde R¹ a R² odpovedajú definícii, uvedenej pre vzorec I.

Medzi mnoho derivátov, ktoré už boli v literatúre popísané, patri erytromycín A 9-hydrazón, pripravený reakciou erytromycínu A s bezvodým hydrazínom v bezvodom metanole. Tento derivát bol popísaný v období prvých degradačných štúdií, robených na molekule erytromycínu [M.V.Sigal, Jr.et.al,; J.Amer.Chem.Soc. 78,388-395 (1956)].

Erytromycín A 9-hydrazón a jeho N'-izopropylidénový derivát boli taktiež popísané v literatúre, a to ako medziprodukty pri príprave erytromycylamínu katalytickou hydrogenáciou [Ger. Offen. 1943781 a 1966310 (I.M. Maas et al,

Lilly), E.H.Massey et al. Tetrahedron Letters, 157-160(1970)].

Reakcia erytromycín A alebo B 9-hydrazónu s aldehydom alebo ketónom bola popísaná v US patente č. 3,780,020 (D. Evans, Lilly). Výsledkom uvedených reakcií sú rôzne deriváty erytromycín 9-azínu s antimikrobiálnou aktivitou vzorca :

RI .R2

N

(ΠΙ) kde R⁵ je H, OH ; a R¹ a R² predstavujú premenlivo H, alkyl, aryl, heterocyklický zostatok atď. (podrobnejší popis je uvedený v odkaze).

Klasicky sú hydrazóny pripravené reakciou hydrazínu s karbonylovou zlúčeninou, ale 9-keto skupina erytromycínu reaguje so samotným hydrazínom iba ťažko a so substituovanými hydrazínmi, ako sú fenylhydrazín alebo semikarbazidy nereaguje vôbec (M.V. Sigal, Jr.op.cit.).

Prihlasovatelia tohoto vynálezu zistili, že erytromycín A 9-hydrazón môže byť s dobrým výťažkom získaný reakciou erytromycínu A s hydrátom hydrazínu v prítomnosti kyseliny.

Medzi vhodné kyseliny, ktoré môžu byť v reakcii použité, patria organické kyseliny, ako kyselina mravčia, kyselina octová a kyselina propiónová, a anorganické kyseliny, ako kyselina chlorovodíková. Rozpúšťadlom v reakcii je alkohol, najlepšie metanol. Reakčná teplota sa môže pohybovať v rozmedzí od izbovej teploty až do 62 °C, najvhodnejšie sú teploty od 55 do 62 °C.

ekvivalent 3,0 molárne Kyselina je

Množstvo hydrátu hydrazínu je vyššie ako množstva erytromycínu A, najlepšie 1,5 až ekvivalenty množstva použitého erytromycínu A pridávaná v množstve, ktoré upraví pH reakčného roztoku na hodnoty 6,0 až 7,0. Rozpúšťadlo je použité v množstve 0,9 až 5 ml, výhodnejšie potom 1 až 3 ml na 1 g erytromycínu A.

Po ukončení reakcie je do reakčnej zmesi pridaný vodný zásaditý roztok, napríklad hydroxid sodný, hydroxid draselný, uhličitan sodný, uhličitan draselný, amoniak a podobne. Reakčná zmes je ochladená. Vytvorená zrazenina je oddelená filtráciou, premytá vodou a vysušená za vzniku erytromycín A 9-hydrazónu. Ukončenie reakcie môže byť ľahko rozpoznané stanovením úbytku erytromycínu A pomocou chromatografie na tenkej vrstve alebo HPLC.

Pre účely navrhovaného vynálezu môže byť použitý akýkoľvek z dvoch izomérov erytromycín A 9-hydrazónu alebo ich zmes.

Za účelom chránenia aminoskupiny hydrazónu v pozícii 9 je uskutočnená reakcia erytromycín A 9-hydrazónu so zlúčeninou všeobecného vzorca IV :

kde R¹ a R² sú definované rovnako ako vo vzorci I. Reakcia je uskutočňovaná podobne ako pri klasickom spôsobe prípravy azínov. Napríklad erytromycín A 9-hydrazón reaguje so zlúčeninou vzorca IV vo vhodnom rozpúšťadle za vzniku zlúčeniny vzorca III (kde R¹ a R² sú definované rovnako ako vo vzorci III a R⁵ je hydroxylová skupina). Použité množstvo zlúčeniny IV v tejto reakcii zodpovedá 1 až 10 ekvivalentom, výhodne 1 až 12 ekvivalentom erytromycín A 9-hydrazónu.

Ako príklady boli použité nasledujúce zlúčeniny vzorca IV:

acetón, metylizopropylketón, cyklohexanón, benzaldehyd a atetralón. Vynález ale nie je limitovaný iba na uvedené zlúčeniny, ale taktiež sa týka samozrejme všetkých zlúčenín všeobecného vzorca IV.

Medzi rozpúšťadlá, vhodné na použitie v reakcii erytromycín A 9-hydrazónu so zlúčeninou vzorca IV, patrí napríklad dichlórmetán, chloroform, tetrahydrofurán, metanol, etanol, izopropanol, Ν,Ν-dimetylformamid, dimetylsulfoxid, acetonitril, toluén a ďalšie. Reakčná teplota sa pohybuje v rozmedzí od izbovej teploty do teploty odparovania (refluxná teplota) rozpúšťadla.

Za účelom chránenia hydroxylových skupín v pozíciách 2'a 4'' derivátov erytromycín A 9-azínu vzorca III (kde R¹ a R² sú definované rovnako ako vo vzorci I a R⁵ je hydroxylová skupina) je uskutočnená reakcia tejto zlúčeniny so silylačným činidlom. Reakcia je robená v rozpúšťadle pri teplote v rozmedzí 0 °C do teploty odparovania rozpúšťadla, najlepšie pri izbovej teplote. Medzi silylačné činidlá vhodné na použitie v uvedenej reakcii patria chlórsilany, ako napríklad trimetylchlórsilan, dimetylizopropylchlórosilan, atď., silylamíny, ako napríklad 1,1,1,3,3,3-hexametyldisilazan, N,Ndimetylaminometylsilan, trimetylsilylimidazol, atď., silylamidy ako bis(trimetylsilyl)močovina, bis(trimetylsilyl)acetamid atď., a ich zmesi. V prípade použitia iba jedného chlórsilanu sa odporúča pridávať zásadu. Silylačné činidlo sa používa v množstve 1 až 10 ekvivalentov, výhodne 1 až 5 molárnych ekvivalentov použitého množstva zlúčeniny vzorca III.

Medzi rozpúšťadlá vhodné na použitie v uvedenej reakcii patrí dichlórmetán, chloroform, Ν,Ν-dimetylformamid, dimetylsulfoxid, tetrahydrofurán, dioxán, 1,2-dimetoxyetán a podobné.

Medzi vhodné zásadité zlúčeniny patria anorganické zásady, ako hydroxid sodný, hydroxid draselný, uhličitan sodný, uhličitan draselný a podobné; a ďalej organické zásady, ako trimetylamín, trietylamín, tri-n-butylamín, tribenzylamín, N,Ndimetylanilín, pyridín a podobné.

Silylamíny sú s výhodou používané spolu s chlórsilanmi alebo spolu s chloridom amonným či hydrochloridom pyridínu.

Ί

Alternatívne môže byť zlúčenina vzorca V získaná jednoduchou syntézou z erytromycín A 9-hydrazónu. Konkrétne ide o reakciu erytromycín A 9-hydrazónu so zlúčeninou vzorca IV pri rovnakých podmienkach, aké boli popísané vyššie. Výsledná zlúčenina v tejto reakčnej zmesi reaguje ďalej so silylačným činidlom a to znova za podmienok, aké boli popísané vyššie. Výsledkom uvedených reakcií je zlúčenina vzorca V :

Rk R2

N

(V)

Ukončenie reakcie môže byť lahko určené stanovením úbytku derivátov erytromycín A 9-hydrazónu a/alebo erytromycín A 9azínu pomocou chromatografie na tenkej vrstve alebo pomocou vysoko účinnej kvapalinovej chromatografie (HPLC).

6-hydroxylová skupina je selektívne metylovaná v reakcii zlúčeniny vzorca V s metylačným činidlom v rozpúšťadle v prítomnosti zásady pri teplote -15 °C do izbovej teploty, výhodne pri teplote O °C až 8 °C. Príkladom metylačného činidla môže byť napríklad metylchlorid, metylbromid, metyljodid, dimetylsulfát/ metyl p-toluénsulfonát, metyl metánsulfonát a podobne. Na jeden mól zlúčeniny vzorca V môžu byť použité 1,0 až 3,0 molárne ekvivalenty metylačného činidla, ale obyčajne je postačujúce množstvo 1,0 až 2,0 molárnych ekvivalentov. Medzi vhodné rozpúšťadlá patria polárne aprotické rozpúšťadlá, ako dimetylsulfoxid, Ν,Ν-dimetylformamid, tetrametylénsulfoxid, hexametyltriamid kyseliny fosforečnej a zmesi, pozostávajúce z jedného z uvedených rozpúšťadiel a tetrahydrofuránu, 1,2dimetoxyetánu, dioxánu, octanu etylnatého, dichlórmetánu atď. Medzi najvhodnejšie rozpúšťadlá patria zmesi dimetylsulfoxidu a tetrahydrofuránu (1:1 a 4:3). Medzi zásady, vhodné na použitie v uvedenej reakcii, patrí hydroxid sodný, hydroxid draselný, hydrid sodný, terciárny butyloxid draselný, hydrid draselný a podobné. Zásada je použitá v množstve 1 až 1,9 molárnych ekvivalentov na jeden ekvivalent zlúčeniny vzorca I.

Prítomnosť O-metylovej skupiny v pozícii 6 derivátov 6-0metylerytromycín A 9-azínu môže byť stanovená pomocou NMR, pretože na NMR spektre poskytuje charakteristický signál.

Erytromycín A 9-azíny môžu existovať buď v dvoch (pre symetrické karbonylové prekurzory) alebo v štyroch (pre asymetrické karbonylové prekurzory) formách. Na použitie podlá vynálezu je vhodný hociktorý izomér, rovnako ako ich zmes.

Metylácia hydroxylovej skupiny v pozícii 6 podlá navrhovaného vynálezu vykazuje velmi vysokú selektivitu.

Naviac substituované silylové skupiny, použité na chránenie hydroxylových skupín v pozíciách 2' a 4'', môžu byť lahko odstránené za vzniku zlúčenín vzorca II.

Navrhovaný vynález umožňuje produkovať 6-0metylerytromycín A s vysokým výťažkom a ekonomicky. Zlúčenina vzorca I môže byť premenená na 6-0-metylerytromycín A napríklad nasledujúcim spôsobom.

Substituované silylové skupiny zlúčeniny vzorca I (R³ a R⁴) v pozíciách 2' a 4'' môžu byť lahko odstránené reakciou s kyselinou (napríklad kyselinou mravčou) vo vodnom alkohole (metanol, etanol a podobné) pri izbovej teplote. Výsledná zlúčenina vzorca II reaguje ďalej v tejto zmesi s hydroxylamínom za vzniku 6-0-metylerytromycín A 9-oximu. Aby bol výťažok 6-0-metylerytromycín A 9-oximu dostatočný, musí byť použité množstvo hydroxylamínu väčšie ako 6 molárnych ekvivalentov na jeden molárny ekvivalent zlúčeniny vzorca II.

pH reakčnej zmesi sa pohybuje v rozmedzí 5,5 až 8,0, najvhodnejšie pH je 6,0 až 7,0. Vhodné množstvo reakčného rozpúšťadla je 0,9 až 5 ml, ešte lepšie 1 až 3 ml na 1 g zlúčeniny vzorca I. Reakčná teplota sa môže pohybovať v rozmedzí od izbovej teploty až po teplotu odparovania rozpúšťadla, najvhodnejšia teplota je 55 až 62 °C. Hydroxylamín môže byť do reakčnej zmesi pridávaný vo forme vodného roztoku, hydrochloridu hydroxylamínu alebo sulfátu hydroxylamínu. Ukončenie reakcie je určené sledovaním úbytku zlúčeniny vzorca I a zlúčeniny vzorca II metódou chromatografie na tenkej vrstve alebo metódou vysoko účinnej kvapalinovej chromatografie (HPLC).

Takto získaný 6-O-metylerytromycín A 9-oxim je lahko premenený na 6-0-metylerytromycín A reakciou s deoximačným činidlom (hydrogénsiričitan sodný, chlorid titanitý, octan amonný, dusitan sodný, kyselina chlorovodíková, hydrosiričitan sodný a podobné).

Ďalším z aspektov navrhovaného vynálezu je spôsob selektívnej metylácie hydroxylovej skupiny v pozícii 6 derivátov erytromycínu A zahrňujúci konverziu erytromycínu A na erytromycín A 9-hydrazón, ďalej konverziu hydrazónu na erýtromycín A 9-azínový derivát vzorca III, kde R¹ a R² sú definované rovnako ako vo vzorci I a R⁵ je hydroxylová skupina, a ďalej chránenie hydroxylových skupín v pozíciách 2' a 4'' silyláciou za vzniku zlúčeniny vzorca V

R1 .R2

N

-O

R3O (V) a konečne metyláciou hydroxylovej skupiny v pozícii 6 za vzniku zlúčeniny vzorca I.

Navrhovaný vynález bude ďalej konkrétne ilustrovaný na príkladoch, ktoré ukazujú spôsob prípravy 6-0-metylerytromycínu A.

Navrhovaný vynález bude ďalej popísaný na určitých konkrétnych vhodných príkladoch uskutočnenia, aby boli jednotlivé aspekty vynálezu lahko pochopitelné, s tým, že uvedené príklady vynálezu nie sú v žiadnom prípade pre rozsah navrhovaného vynálezu limitujúce. Naopak zámerom je pokryť všetky alternatívy, modifikácie a ekvivalentné úpravy, ktorých sa navrhovaný vynález, tak ako je definovaný v priložených patentových nárokoch, týka. Nasledujúce príklady, ktoré zahrňujú zvlášť výhodné aspekty uskutočnenia, sú tu uvedené iba na ilustráciu praktického použitia vynálezu a ako námety na diskusiu o zvlášť vhodných spôsoboch uskutočnenia navrhovaného vynálezu a za účelom objasnenia najvhodnejších a najlahšie pochopiteľných spôsobov prípravy jednotlivých zlúčenín, rovnako ako princípov a celkovej koncepcie navrhovaného vynálezu.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Príklad 1 : Príprava erytromycín A 9-hydrazónu

K 500 g erytromycínu A bolo pridané 650 ml 2-propanolu a zmes sa 1 hodinu miešala pri 60 °C. Do suspenzie bolo pridané 75 g hydrazínu a 35,5 g 99 % kyseliny mravčej a výsledná zmes (pH 6,5) bola miešaná počas noci pri teplote 58 °C až 60 °C. Po ochladení na 15 °C bolo do zmesi pridané 600 ml vody a asi 69 g 45% vodného roztoku hydroxidu sodného (tak, aby pH bolo upravené na hodnotu 11)/ potom sa zmes miešala pri izbovej teplote počas 2 hodín. Vytvorené kryštály boli oddelené filtráciou/ premyté 900 ml vody a vysušené pri 60 °C za vzniku 414 g erytromycín A 9-hydrazónu

m.p.(teplota topenia) 138 až 141 °C (rekryštalizované z etylacetát hexánov) [a]_D ²⁰ - 53 , 0 °C (c=l,0; CHC1₃) ^-NMR (CDC1₃| _: δ (ppm) = 0, 84[3H, t, CH₃(C-15)], 2,31[6H, s, 3'N(CH₃)₂], 3,32[3H, s, 3-OCH₃].

¹³C-NMR (CDC1₃) : ô(ppm) = 9,36(C-17), 10,64(C-15), 13,94(C-20), 40, 23[3 '-N (CH₃) ₂], 49, 38 (3-OCH₃) , 96,56{C-1), 103, 02 (C-l ) ,

103,02(C-ľ) , 168, 00(C-9), 175, 62(C-1).

Mass(FAB) : m/e 748 (MH⁺).

Príklad 2 : Príprava erytromycín A 9-acetónazínu g zlúčeniny, získanej v príklade 1 bolo pod spätným chladičom rozpustené v 100 ml acetónu. Roztok bol potom ponechaný pri teplote prostredia počas 8 hodín a ďalej pri teplote 5 °C počas 16 hodín. Vytvorené bezfarebné kryštály boli oddelené filtráciou a vysušené pri 50 °C za vzniku 48 g erytromycín A 9-acetónazínu.

m.p. (teplota topenia) 131 až 134 °C (rekryštalizované z acetónu) [a]_D ²² -17,0 °C (c=l,0; CHC1₃) ¹H-NMR (CDC1_{3) :} Ô (ppm) = 0,83[3H, t, CH₃(C-15)], 1,87 : 2,04[6H, d, (CH₃)₂], 2,29[6H, s, 3'N(CH₃)₂], 3,32[3H, s, 3 -OCH₃].

¹³C-NMR (CDC1₃) : ô(ppm) = 9,29(C-17), 10,65(C-15), 14,29(C-20),

40, 32[3 '-N (CH₃) ₂], 49,47 (3-OCH₃) , 96, 43 (C-1), 103, 01 (C-l') ,

163, 82 (-N=C (CH₃) ₂], 178, 93(C-9), 174, 94 (C-l).

Mass(FAB) : m/e 788.44 (MH⁺).

Príklad 3 : Príprava 2'4''-O-bis(trimetylsilyl)erytromycín A 9acetónazínu

Do roztoku 20 g erytromycín A 9-acetónazínu, získaného v príklade 2, v 100 ml N,N-dimetylformamidu bolo za stáleho chladenia ľadom pridané 4,6 g hydrochloridu pyridínu a 15 ml 1, l, 1,3,3,3-hexametyldisilazanu a zmes bola miešaná počas noci pri teplote prostredia. Po pridaní vody bola zmes alkalizovaná (pH 11) 5% vodným roztokom hydroxidu sodného a extrahovaná etylacetátom. Extrakt bol opakovane premytý vodou a saturovaný vodným roztokom chloridu sodného a vysušený nad bezvodým síranom horečnatým. Rozpúšťadlo bolo za zníženého tlaku odparené za vzniku bezfarebnej peny. Táto bola rekryštalizovaná zo zmesi acetón/voda 1:1 za vzniku 22,7 g 2'4 -bis(trimetylsilyl)erytromycín A 9-acetónazínu.

m. p. (teplota topenia) 119 až 122 °C (solvatované s 1 mólom acetónu) [a]o²² 37,5 °C (c=l,0; CHC1₃) ¹H-NMR (CDC1₃₎ : δ (ppm) = 0,ll[9H, s, 2'-O-TMS) ; 0,15(9H, s, 4 -O-TMS); 0,84[3H, t, CH₃(C-15)], 1,87; 2,03[6H, d, (CH₃)₂],

2,17[6H, s, (CH₃)₂CO], 2.23[6H, s, 3'N(CH₃)₂], 3,31[3H, s, 3OCH₃].

¹³C-NMR (CDC1₃) : δ (ppm) = 0,93(4 -O-TMS); 1,04 (2'-O-TMS) ;

9,78(C-17), 10,74(0-15), 14,25(0-20), 41,00[3 ' -N (CH₃) ₂],

96,73(0-1), 102, 68(0-1'), 163.54[-N=C (CH₃) ₂], 49,76(3OCH₃), 97, 73 (C-l), 102,68(0-1'), 163.54=[-N=C (CH₃) ₂], 175, 55 (ΟΙ), 178,54(0-9) ; 206, 80[ (CH₃) ₂C0].

Mass(FAB) : m/e 932,66(MH⁺).

Príklad 4 : Príprava 2'4 -O-bis(trimetylsilyl)-6-0-erytromycín A 9-acetónazínu

Do roztoku 10 g 2'4-O-bis (trimetylsilyl) erytromycín A 9acetónazínu získaného v príklade 3, v 300 ml zmesi dimetylsulfoxidu a tetrahydrofuránu (1:1) bolo pridané za stáleho chladenia ladom 1,2 ml metyljodidu a 1,2 g 85 % práškového hydroxidu draselného a zmes bola miešaná za stáleho chladenia ladom počas 75 min. Do reakčného roztoku bolo pridané 10 ml 50 % vodného roztoku dimetylamínu a zmes bola miešaná pri teplote prostredia počas 1 hodiny. Po pridaní 300 ml vody bola zmes extrahovaná etylacetátom. Organická frakcia bola premytá nasýteným vodným roztokom chloridu sodného a vysušená nad bezvodým síranom horečnatým. Rozpúšťadlo bolo odparené za zníženého tlaku za vzniku 9,3 g hrubého 2'4''-Obis(trimetylsilyl)-6-erytromycín A 9-acetónazínu vo forme bezfarebnej pevnej látky.

m.p. (teplota topenia) 191,5 až 194 °C (rekryštalizované z etanolu) [ot]_D ²² -150 , 0 0 °C (c=l,0; CHC1₃) ^XH-NMR (CDC13) : δ (ppm) = 0,09[9H, s, 2'-O-TMS) ; 0,14(9H, s, 4 -O-TMS); 0, 84[3H, t, CH3 (C-15) ], 1,95; 2,06[6H, d, (CH3)2], 2,22[6H, s, 3'- N(CH3)2], 2.95[3H, s, 6-OCH3)], 3,31[3H, s, 3-OCH3]. ¹³C-NMR (CDL3) : δ (ppm) = 0, 88 (4 -O-TMS) ; 1, 06 (2 ' -O-TMS) ;

9,71(C-17), 10,58(C-15), 14,87(C-20), 40, 99[3 ' -N (CH₃) ₂],

49, 69(3-N(CH₃)₂], 49, 69 (3-OCH₃), 50, 85 (6-OCH₃) ; 102,54(Cľ), 163.54[-N=C1CH₃)₂], 175, 86 (C-l), 179, 57N=C (CH₃) ₂], (C-9) . Mass(FAB) : m/e 946, 84(MH⁺).

Príklad 5: Príprava 6-O-metylerytromycín A 9-acetónazínu

K zmesi 1 g 2'4''-O-bis(trimetylsilyl)-6-erytromycín A 9acetónazínu získaného v príklade 4, 5 ml etanolu a 0,5 ml vody bolo pridané 0,2 ml 99 % kyseliny mravčej a zmes bola miešaná pri teplote prostredia počas 3 hodín. Roztok bol zriedený 15 ml vody a alkalizovaný (pH 11) 45 % vodným roztokom hydroxidu sodného. Potom bola zmes ponechaná pri 5 °C počas noci. Bezfarebná zrazenina bola oddelená filtráciou, premytá vodou a vysušená pri 50 °C za vzniku 0,8 g 6-O-metylerytromycín A 9acetónazínu.

m.p. (teplota topenia) 132 až 135 °C (rekryštalizované zo zmesi etanol/voda) [a]_D ²² -152 , 0 °C (c=l,0; CHC1₃) ’H-NMR (CDC1₃, : ô(ppm) = O,84[3H, t, CH₃(O15)J ; 1,94 ; 2,06[6H, d, C(CH₃)₂]; 2,30[6H, s, 3'-N(CH₃)_z], 2,96 [3H, s, 6-OCH₃],

3,33[3H, s, 3-OCH₃)].

¹³C-NMR (CDC1₃) : ô(ppm) = 9,08(017), 10,48(015), 14,80(020); 40,20 [3 '-N (CH₃) 2], 49, 36 (3 -OCH₃) , 50, 88 (6-OCH₃) ; 95,92(01),

102.60 ( 01') , 163.56[-N=C_(CH₃) ₂], 175,48(01), 179,42(09). Mass(FAB) : m/e 802, 6(MH⁺).

Príklad 6 : Príprava erytromycín A 9-cyklohexanónazínu

100 g erytromycín A 9-hydrazónu, získaného v príklade 1 bolo pod spätným chladičom rozpustené v 200 ml etylacetáte. Do roztoku bolo pridané 20 ml cyklohexanónu a zmes bola udržiavaná pod spätným chladičom počas 1 hodiny. Ďalej bola zmes ponechaná počas 1 hodiny pri teplote prostredia a potom pri 5 °C počas noci. Bezfarebné kryštály boli filtráciou oddelené, premyté hexánom a vysušené pri 50 °C za vzniku 90,7 g erytromycín A 9cyklohexanónazínu. Po odstránení etylacetátu z filtrátu bola zvyšná látka rekryštalizovaná z etanolu za vzniku ďalších 7,3 g výslednej zlúčeniny.

m.p. (teplota topenia) 140 až 143 °C (rekryštalizované zo zmesi toluén/hexány) [a]_D ²² -3,9 °C (c=l,0; CHC1₃) ¹H-NMR (CDC1_{3) :} δ (ppm) = 0,84[3H, t, CH₃(O15)]; 2,29[6H, s, 3N(CH₃)₂], 3,32[3H, s, 3-OCH₃].

¹³C-NMR (CDCls) : ô(ppm) = 9,12(017), 10,49(C-15), 14,13(020);

25.60 , 26,06, 27,15, 28,20 a 35,45 ;

49, 30 (3 -OCH3), 96,21(0-1)/ 102,74(01), 168,37

174,68 (01) , 178,42(09) .

Mass(FAB) : m/e 828, 26 (MH⁺).

Príklad 7 : Príprava 2',4''-O-bis(trimetylsilyl)erytromycín A 9-cyklohexanónazínu

1. K roztoku 50 g erytromycín A 9-cyklohexanónazínu, získaného v príklade 6, v 100 ml N, N-dime tyl f ormamidu bolo pridané za stáleho chladenia ľadom 6,5 g chloridu amonného a 38,0 ml 1, 1,1,3, 3, 3, -hexametyldisilazanu a vzniknutá zmes bola miešaná pri teplote prostredia počas noci. Potom bolo podobným spôsobom, aký bol popísaný v príklade 3, získané 57,0 g 2',4 -O-bis(trimetylsilyl)erytromycín A 9-cyklohexanónazínu vo forme bezfarebnej peny.

[a]_D ²² -34,5°C (c=l,0; CHC1₃) .

¹H-NMR (CDC1₃) : δ (ppm) = 0,08[9H, s, 2'-O-TMS); 0,11 (-9H, s, -0TMS); 0,81[3H, t, CH₃(C-15)], 2.22[6H, s, 3'-N(CH₃)₂], 3,27[3H, s, 3 ’' -OCH₃].

¹³C-NMR (CDCla) : δ (ppm) = 0, 83 (4 -O-TMS) ; 0,96(2'-O-TMS);

9,71(017), 10,64(015), 14,18(020), 25, 69, 26,08, 27,21,

28,28 a 35, 54[-N=C (CH₂) ₅]

40, 91[3'-N (CH₃) ₂], 49.64 (3 -OCH₃) , 96,61(01), 102,55 ( 01'),

102,55(01'), 168, 00[-N=C (CH₂) ₅] ;

175,36(C-1), 178,08 (C-9)

Mass (FAB) : m/e 972,70 (MH⁺)

2. Do roztoku 100 g erytromycín A 9-hydrazónu, získaného v príklade 1, v 200 ml N,N-dimetylformamidu bolo pridané 14,6 ml cyklohexanónu a zmes bola miešaná počas 4 hodín pri teplote 60 °C. Potom bolo do reakčnej zmesi za stáleho chladenia ľadom pridané 13 g chloridu amonného a 75 ml 1,1,1,3,3,3,hexametyldisilazanu a zmes bola miešaná pri teplote prostredia počas noci. Potom, podobným spôsobom, aký bol popísaný v príklade 3, bolo získané 126 g 2', 4-ΟΙ trimetylsilyl) erytromycín A 9-cyklohexanónazínu, ktorý bol identický so zlúčeninou získanou vyššie (1.)

Príklad 8 : Príprava 6-0-metylerytromycín A 9-cyklohexanónazínu

1. Do roztoku 50 g 2',4-O-bis(trimetylsilyl)erytromycín A 9cyklohexanónazínu, získaného v príklade 7,. v 350 ml zmesi dimetylsulfoxidu a tetrahydrofuránu (4:3) bolo za stáleho chladenia ľadom pridané 5,8 ml metyljodidu a 5,75 g 85 % práškového hydroxidu draselného a zmes chladená ľadom sa miešala počas 90 min. Do reakčnej zmesi bolo pridaných 30 ml 50 % vodného roztoku dimetylamínu a zmes sa miešala pri teplote prostredia počas 1 hodiny. Potom bola zmes zriedená 350 ml vody a extrahovaná etylacetátom. Organická frakcia bola premytá nasýteným vodným roztokom chloridu sodného a vysušená nad bezvodým síranom horečnatým. Rozpúšťadlo bolo za zníženého tlaku odparené za vzniku 47,4 g 2',4-O(trimetylsilyl)-6-0-metylerytromycín A 9-cyklohexanónazínu vo forme peny.

2. Do roztoku 20 g zlúčeniny, získanej v prechádzajúcom príklade (1.), v 50 ml zmesi etanol/voda (10/1) bolo pridané

2,8 ml 99 % kyseliny mravčej a zmes sa miešala pri teplote prostredia počas 2 hodín. Potom bola reakčná zmes zriedená 60 ml vody, alkalizovaná (pH 11) 45 % vodným roztokom hydroxidu sodného pri teplote 15 až 20 °C a extrahovaná etylacetátom. Organická frakcia bola premytá vodou a nasýteným vodným roztokom chloridu sodného a vysušená nad bezvodým síranom horečnatým. Rozpúšťadlo bolo odparené za zníženého tlaku za vzniku 16,2 g 6-O-metylerytromycín A 9cyklohexanónazínu vo forme peny.

m.p. 176 až 179 °C (rekryštalizované z etanolu) [a]_D ²² -144,2 °C (c=l,0; CHC1₃) ¹H-NMR (CDC1₃, _: δ (ppm) = 0,84[3H, t, CH₃(O15)]; 2,29[6H, s, 3'N(CH₃)₂], 2,98(3H, s, 6-OCH₃), 3,33[3H, s, 3-OCH₃].

¹³C-NMR (CDC1₃) : δ (ppm) = 9,07(C-17), 10,51(0 15), 14,92(020);

25, 86 , 26, 16, 27,29, 28,39 a 34, 85 ;

40,24(3'-N (CH₃)₂], 49, 42 (3 -OCH₃), 51, 07 (6-OCH₃), 95,97(01), 102,73 (Ol), 168,77 ;

175,59(01), 179,71 (09)

Mass(FAB) : m/e 842,24 (MH⁺) .

Príklad 9 : Príprava 6-0-metylerytromycín A 9-oximu z m2',4O-bis(trimetylsilyl)-erytromycín A 9-cyklohexanónazínu

Do roztoku 7,1 g 2', 4''-O-bis(trimetylsilyl)-6metylerytomycín A 9-cyklohexanónazínu, získaného v príklade 8(1), v 25 ml metanolu a 3 ml vody boli pridané 3 g hydrochloridu hydroxylamínu a zmes bola miešaná pri teplote prostredia počas 2 hodín. Potom bolo do reakčnej zmesi pridané

3,5 ml 50 % vodného roztoku hydroxylamínu a roztok 1 g hydrochloridu hydroxylamínu v 1 ml vody. Zmes (pH 6) bola miešaná pri teplote 60 °C až 62 °C počas 24 hodín. Potom bola reakčná zmes ochladená na 15 °C, zriedená 30 ml vody a alkalizovaná (pH 11) 46 % vodným roztokom hydroxidu sodného a udržiavaná počas víkendu pri teplote 5 °C. Bezfarebná zrazenina bola oddelená filtráciou, premytá vodou a vysušená pri teplote 50 °C za vzniku 3,8 g 6-O-metylerytromycín A 9-oximu.

m.p. (teplota topenia) 248 až 251 °C, (roztavené pri 169 °C až 171 °C, znovu stuhnuté pri 180°C až 185 °C, znovu roztavené pri 248 až 251 °C)(rekryštalizované zo zmesi etanol/petroléter). [a]_D ²² - 91,3 °C (c=l,0; CHC1₃) ¹H-NMR (CDC1₃| _: δ (ppm) = 0,83[3H, t, CH₃(C-15)]; 2,36[6H, s, 3'N(CH₃)₂], 3,10(3H, s, 6-OCH₃), 3,33[3H, s, 3-OCH₃].

¹³C-NMR (CDC1₃) : Ô(ppm) = 9,21(C-17), 10,61(C-15), 14,97(C-20);

40, 43[3 '-N (CH₃) ₂], 49, 48 (3-OCH₃) , 51,19 (6-OCH₃) ; 96,03(C-l), 102,70(C-l'), 175, 67 (C-1), 170,36(C-9).

Mass(FAB) : m/e = 763,4(MH⁺).

Príklad 10 : Príprava erytromycín A 9-(3-metyl-2-butanón)azínu

Zmes 20 g erytromycín A 9-hydrazónu, získaného v príklade l, a 6 ml 3-metyl-2-butanónu bola zahrievaná pod spätným chladičom v 20 ml metanolu počas 3 hodín. Potom boli metanol a nadbytok ketónu odstránené vysušením za zníženého tlaku. Výsledkom reakcie bolo 22 g erytromycín A 9-(3-metylbutanón)azínu vo forme peny.

m. p. 139 až 142 °C, (rekryštalizované zo zmesi etylacetát/nhexán).

[oc]_D ²⁷ - 10,0 °C (c=l,0; CHC1₃) ^XH-NMR (CDC1₃, : ô(ppm) = 0, 84[3H, t, CH₃(C-15)], 2,34[6H, s, 3'N(CH₃)₂], 3,32[3H, s, 3-OCH₃].

¹³C-NMR (CDC1₃) : δ (ppm) = 9,36(0-17), 10, 65 (C-15) , 14,43(0-20); 40, 36[3 '-N (CH₃) ₂], 49, 45 (3 -0CH₃) , 96,35(01), 102,75(01'),

170, 05[-N=C (CH₃) 2]; 174,72(01), 177,48(09).

Mass(FAB) : m/e = 816,6(MH⁺).

Príklad 11 : Príprava 2',4-0-bis(trimetylsilyl)erytromycín A 9-(3-metyl-2-butanón)azínu

Do roztoku 8,3 g erytromycín A 9-(3-metyl-2-butanón)azínu, získaného v príklade 10 v 20 ml N,N-dimetylformamidu bolo za neustáleho chladenia ladom pridané 1,1 g chloridu amonného a

6,4 ml 1,1,1,3,3,3-hexametyldisilazanu a zmes bola miešaná pri teplote prostredia počas noci. Potom bola reakčná zmes zriedená vodou, alkalizovaná (pH 11) 5 % vodným roztokom hydroxidu sodného a extrahovaná etylacetátom. Organická frakcia bola premytá vodou a nasýteným vodným roztokom chloridu sodného a vysušená nad bezvodým síranom horečnatým. Rozpúšťadlo bolo odparené za zníženého tlaku za vzniku 9,6 g 2',4-Obis(trimetylsilyl)erytromycín A 9-(3-metyl-2-butanón)azínu vo forme peny.

[a]_D ²⁷ - 39, 8 °C (c=l,O; CHC1₃) ¹H-NMR (CDC1_{3) :} δ (ppm) = 0,10[9H, s,2'-0-TMS); 0,13 (9H, s, 4 -O-TMS); 0,84[3H,t, CH₃(C-15)], 2,23[6H, s, 3'-N(CH₃)₂], 3,29[3H, s, 3-OCH₃].

ⁿC-NMR (CDC1₃) : Ô(ppm) = 0,84 (4-0-TMS); 0,97 (2' -O-TMS) ;

9,67(0-17), 10, 63(0-15), 14,29(0-20); 40, 70[3 '-N (CH₃) ₂],

49, 68 (3-OCH₃) , 96, 64(0-1), 102,48(0-1'), 169,69[N=C (CH₃) CH (CH₃) ₂]; 175,44(0-1), Mass(FAB) : m/e = 960,5(MH⁺).

177,16(0-9).

Príklad 12 : Príprava 6-O-metylerytromycín A -(3-metyl-2butanón)azínu

1. Do roztoku 8,0 g 24' '-O-bis(trimetylsilyl)erytromycín A 9-(3-metyl-2-butanón)azínu, získaného v príklade 11, v 56 ml zmesi dimetylsulfoxidu a tetrahydrofuránu (4:3) bolo za stáleho chladenia ladom pridané 0,93 ml metyljodidu a 0,93 g práškový 85 % KOH. Reakčná zmes bola za neustáleho chladenia ľadom miešaná počas 80 minút. Potom bolo do reakčného roztoku pridané 20 ml 50 % vodného roztoku dimetylamínu a zmes bola miešaná pri teplote prostredia počas 1 hodiny. Zmes bola zriedená 60 ml vody a extrahovaná etylacetátom. Organická frakcia bola premytá nasýteným vodným roztokom chloridu sodného a vysušená nad bezvodým síranom horečnatým. Rozpúšťadlo bolo odparené za zníženého tlaku za vzniku 8,0 g 2',4''-O-bis(trimetylsilyl)-6-0-metylerytromycín A 9—(3— metyl-2-butanón)azínu vo forme peny.

2. Do roztoku 7,0 g zlúčeniny, získanej v predchádzajúcom príklade (1.), v 70 ml zmesi etanol/voda (1:1) bolo pridané 2,8 ml kyseliny mravčej a zmes bola miešaná pri teplote prostredia počas 1 hodiny. Potom bol reakčný roztok zriedený 70 ml vody, alkalizovaný (pH 11) 5 % vodným roztokom hydroxidu sodného a extrahovaný etylacetátom. Organická frakcia bola premytá vodou a nasýteným vodným roztokom chloridu sodného a vysušená nad bezvodým síranom horečnatým. Rozpúšťadlo bolo odparené za zníženého tlaku za vzniku 5,7 g 6-O-metylerytromycín A 9-(3-metyl-2-butanón)azínu.

m.p. 153 až 156 °C (rekryštalizované z metanolu) [a]_D ²¹ - 127,0 °C (c=l,0; CHC1₃) 'H-NMR (CDC1_{3) :} ô(ppm) = 0,83[3H, t, CH₃(C-15)J, 2.29[6H, s, 3'N(CH₃)₂] 3,00(3H, s, 6-OCH₃) , 3,33[3H, s, 3-OCH₃].

¹³C-NMR (CDC1₃) : ô(ppm) = 0,83 (C-17), 10,28 (0-15), 14,28(020), 40, 01[3 ' -N (CH₃) ₂], 49,16 (3 -OCH₃) , 50, 73 (6-OCH₃) , 95, 80(021

1), 102,44(C-l'), 169, 13[-N=C(CH₃)CH(CH₃) ₂]; 175,19(01),

177, 92 (09) .

Mass(FAB) : m/e = 830, 6 (MH⁺) .

Príklad 13 : Príprava erytromycín A 9-a tetralónazínu

Zmes 20 g erytromycín A 9-hydrazónu, získaného v príklade 1 a 3,55 ml a-tetralónu [3,4-dihydro-l(2H)-naftalenón] bola zahrievaná pod spätným chladičom v 60 ml toluénu počas 16 hodín. Voda bola odstraňovaná (Dean-Starkov odlučovač). Potom bol toluén za zníženého tlaku odparený do sucha za vzniku 23 g erytromycín A 9-a-tetralónazínu vo forme peny.

m.p. 134 až 137 °C (rekryštalizované zo zmesi metanol/voda 1/1) [ot]_D ²⁷ - 0,0 °C (c=l,0; CHC1₃) ¹H-NMR (CDC1_{3) :} δ (ppm) = 0,85[3H, t, CH₃(C-15)], 2.32[6H, s, 3'N(CH₃)₂], 3,32[3H, s, 3-OCH₃], 7,15 -8,16(4H, m, Ar) .

¹³C-NMR (CDC1₃) : δ (ppm) = 9,30 (C-17), 10,58(C-15), 14,48(C20), 21,81, 27,30 a 28,87

40, 24[3'-N (CH₃) ₂], 49,41(3-OCH₃), 96,40 (C-l); 125,36, 126,38, 129, 69, 129, 94, 131, 98 a 140,93 (Ar); 160,74

174,78(C-1), 178,18 (C-9) . Mass (FAB) : m/e = 876, 6(MH⁺).

Príklad 14: Príprava 2',4''-O-bis(trimetylsilyl)erytromycín A

9-a-tetralónazínu

K roztoku 9,8 erytromycín A 9-a-tetralónazínu, získaného v príklade 13, v 20 ml N,N-dimetylformamidu bolo za stáleho chladenia ľadom pridané do 1,3 g chloridu amonného a 7,5 ml 1, 1,1,3,3,3-hexametyldisilazanu a zmes bola počas noci miešaná pri teplote prostredia. Potom bolo podobným spôsobom, aký bol popísaný v príklade 3, získaných 11,2 g 2',4-Obis(trimetylsilyl)erytromycín A 9-a-tetralónazínu vo forme peny.

[a]_D ²⁷ - 20 , 2 °C (c=l,0; CHC1₃) ¹H-NMR (CDC1₃, _: δ (ppm) = 0,13[9H, s, 2'-O-TMS); 0,16(9H, s, 4O-TMS); 0,86[3H, t, CH₃(C-15)], 2.26[6H, s, 3'- N(CH₃)₂], 3,31[3H, s, 3-OCH₃], 7,15 -8,18(4H, m, Ar) .

¹³C-NMR (CDC1₃) : δ (ppm) = 0,84 (4-O-TMS); 0,98 (2 '-O-TMS) ;

9,67(017), 10,65(015), 14,41(020), 21,86 a 27,27.

If

40, 91[3'-N (CH₃) ₂]/ 49, 69 (3''-OCH3), 96,65(01), 96,65(01');

125,46, 126,32, 128, 62, 129, 84, 132,10 a 140,89 (Ar) ; 160,66

175,38(01), 178,10(09). Mass(FAB) : m/e = 1020, 6 (MH⁺) .

Príklad 15 : Príprava 6-0-metylerytromycín A 9-a-tetralónazínu

1. Do roztoku 9,0 g 2',4''-O-bis(trimetylsilyl)erytromycín A 9α-tetralónazínu, získaného v príklade 14, v 63 ml zmesi dimetylsulfoxidu a tetrahydrofuránu (4:3) bolo za stáleho chladenia ľadom pridaných 0,99 ml metyljodidu a 0,99 g 85 % práškového hydroxidu draselného. Zmes bola za stáleho chladenia ľadom miešaná počas 80 min. Do reakčnej zmesi bolo ďalej pridané 20 ml 50 % vodného roztoku dimetylamínu a zmes bola miešaná pri teplote prostredia počas 1 hodiny. Potom bola zmes zriedená 63 ml vody a extrahovaná etylacetátom. Organická frakcia bola premytá vodou a nasýteným roztokom chloridu sodného a vysušená nad bezvodým síranom horečnatým. Etylacetát bol odparený za zníženého tlaku. Výsledným produktom bolo 8,6 g 2',4''-O-bis(trimetylsilyl)-6-0metylerytromycín A 9-a-tetralónazínu vo forme peny.

2. Do roztoku 7,0 g zlúčeniny, získanej v predchádzajúcom príklade (1.), v 20 ml zmesi etanol/voda (10/1)bol pridaný 1 ml 99 % kyselinu mravčej a zmes sa miešala pri teplote prostredia počas 1,5 hodiny. Potom bola reakčná zmes zriedená 20 ml vody, alkalizovaná (pH 11) 5 % vodným roztokom hydrochloridu sodného a extrahovaná etylacetátom. Organická frakcia bola premytá vodou a nasýteným vodným roztokom chloridu sodného a vysušená nad bezvodým síranom horečnatým. Rozpúšťadlo bolo odparené za zníženého tlaku za vzniku 5,3 g 6-O-metylerytromycín 6-O-metylerytromycín A 9-a-tetralónazínu vo forme peny.

m.p. 159 až 162 °C (rekryštalizované z metanolu) [<x]_D ²⁷ - 124,2 °C (c=l,0; CHC1₃) ¹H-NMR (CDC1₃j _:Ô(ppm) = 0,85[3H, t, CH₃(C-15)]; 2.30[6H, s, 3N(CH₃)₂], 2.97 (3H, s, 6-OCH₃) ; 3,32[3H, s, 3-OCH₃], 7,15 8,30(4H, m, Ar) .

¹³C-NMR (CDC1₃) : 5(ppm) = 9,10(C-17), 10,54(C-15), 15,07(C-20), 22,03, 27,30 a 28,75

40, 25[3 ' -N (CH₃) ₂], 49, 42 (3 ' '-OCH3) , 95,96(01), 102,61(01');

125,34, 126, 32, 128, 63, 129, 63, 132, 97 a 141,04(Ar); 160,78

175,56 (C-l) , 179,86(09) .

Mass (FAB) : m/e = 890, 6 (MH⁺) .

Príklad 16 : Príprava erytromycín A 9-benzalazínu

Zmes 20 g erytromycín A 9-hydrazónu, získaného v príklade 1, a 2,73 ml benzaldehydu bola zahrievaná pod spätným chladičom v 40 ml etylacetátu počas 3 hodín. Potom bol roztok udržiavaný pri 5 °C počas noci. Vytvorené bezfarebné kryštály boli oddelené filtráciou, premyté etylacetátom a vysušené pri 50 °C za vzniku 18,1 g erytromycín A 9-benzalazínu.

m.p. 142 až 145 °C (rekryštalizované z etylacetátu) [a]_D ²⁸ - 42, 0 °C (c=l,0; CHC1₃) ¹H-NMR (CDC1₃) _: δ (ppm) = 0,85[3H, t, CH₃(C-15)]; 2.31[6H, s, 3' N(CH₃)₂], 3.31[3H, s, 3- OCH₃) ; 7,42 -7,78 (5H, m, pH), 8,3(1H, s, PhCH=N-).

¹³C-NMR (CDCI3) : ô(ppm) = 9,12 ( 0 17), 10,53 (0 15), 14,25 ( 020), 40,15[3'-N (CH₃) 2], 49, 35 (3 ' '-OCH₃) , 96,23 (C-l), 102, 90 (C-l') ;

128,26, 128,66, 130,96 a 133,66(Ph); 159,66(PhCH=N-); 184,26(09) .

Mass (FAB) : m/e = 836,5(MH⁺).

Príklad 17 : Príprava 2', 4''-O-bis(trimetylsilyl)erytromycín A 9-benzalazínu

Do roztoku erytromycín A 9-benzalazínu, získaného _k v príklade 16, v 20 ml N,N-dimetylformamidu bolo pridané za • stáleho chladenia ľadom 1,3 g chloridu amonného a 7,7 ml 1,1, * 1,3,3,3-hexametyldisilazanu a zmes bola miešaná pri teplote prostredia počas noci. Potom bolo podobným spôsobom, aký bol popísaný v príklade 3, získané 11/4 g 2',4''-Obis(trimetylsilyl)erytromycín A 9-benzalazínu vo forme peny.

[ot]_D ²⁸ - 51,5 °C (c=l,0; CHC1₃) ¹H-NMR (CDC1₃₎ : δ (ppm) = 0,ll[9H, s, 2 '-O-TMS) ; 0,12 (9H, s, 4-OTMS), 0,85[3H, t, CH₃CC-15)], 2.26[6H, s, 3'-N(CH₃)₂]; 3,28[3H, s, 3-OCH₃]; 7, 40 - 7,78(5H, m, pH), 8,3O(1H, s, PhCH=N-) .

¹³C-NMR (CDC1₃) : δ (ppm) = 0, 88[4 -O-TMS); 1,05(2'-O-TMS);

9, 66(0-17), 10,79(0-15), 14,23(0-20), 40,96[3-N (CH₃) ₂], , 49, 70 (3 ' '-OCH₃) , 96, 48 (C-l), 102,55(0-1'); 128,42, 128,42, * 130,97 a 134,09(Ph); 159,89(PhCH=N-); 175,74(0-1), 184,12(0-9).

• Mass (FAB) : m/e = 980, 6(MH⁺).

I

Príklad 18 : Príprava 6-0-metylerytromycín A 9-benzalazínu

1. Do roztoku 8,0 g 2', 4 -O-bis(trimetylsilyl)erytromycín A 9benzalazínu, získaného v príklade 17, v 56 ml zmesi dimetylsulfoxidu a tetrahydrofuránu (4:3) bolo za neustáleho chladenia ladom pridané 0,92 ml metyljodidu a 0,92 g 85% práškového hydroxidu draselného. Reakčná zmes bola za neustáleho chladenia ladom miešaná počas 80 min. Potom bolo do reakčnej zmesi pridané 15 ml 50 % vodného roztoku dimetylamínu a zmes bola miešaná pri teplote prostredia počas 1 hodiny. Zmes bola zriedená 60 ml vody a extrahovaná etylacetátom. Organická frakcia bola premytá síranom horečnatým. Rozpúšťadlo bolo odparené za zníženého tlaku za vzniku 7,7 g 2',4''-O-bis(trimetylsilyl)-6-0metylerytromycín A 9-benzalazínu vo forme peny.

2.Do roztoku 7,0 g zlúčeniny, získanej v predchádzajúcom príklade (1.), v 70 ml zmesi etanol/voda (1/1) » bolo pridané 2,8 ml 99 % kyselinu mravčej a zmes bola miešaná pri teplote prostredia počas 1 hodiny. Reakčný roztok bol potom zriedený 70 ml vody, alkalizovaný (pH 11) 5% vodným roztokom hydroxidu sodného a extrahovaný etylacetátom. Organická frakcia bola premytá vodou a nasýteným roztokom chloridu sodného a potom vysušená bezvodým síranom horečnatým. Rozpúšťadlo bolo odparené za zníženého tlaku za vzniku 5,8 g hrubého produktu vo forme peny. 5 g hrubého produktu bolo čistené silikagélovou kolónovou chromatografiou (eluované CH₂C1₂ : CH₃OH : NH₄0H = 30:1:0,1 - 10:1:0,1) s výťažkom 3,83 g 6-O-metylerytromycín A 9-benzalazínu.

m.p. 142 až 145 °C (rekryštalizované z chloroform-n-hexánu) . [a]_D ²⁷ - 106,5 °C (c=l,0; CHC1₃) ¹H-NMR (CDClsi _:ô(ppm) = 0,85[3H, t, CH₃CC-15)], 2.37[6H, s, 3'a , N(CH₃)₂]; 2,92(3H, s, 6-OCH₃); 3,32[3H, s, 3-OCH₃]; 7,41-7,80 (5H, m, pH), 8,36(1H, s, PhCH=N-).

¹³C-NMR (CDCls) : δ (ppm) = 9,14(C-17), 10,56(C-15), 14,66(C-20), 40, [3-N (CH₃) ₂], 49, 37 (3-OCH₃) , 51,16 (6-OCH₃) ; 95,96 (C-l),

102,52(C-l'); 128,16, 128,71, 130,68 a 134,52(Ph);

159,14(PhCH=N-); 175,35(C-l), 184,18(C-9).

Mass (FAB) : m/e = 850,5(MH⁺).

Referenčný príklad : Príprava 6-O-metylerytromycínu A z 6-0metylerytromycín A 9-oximu

Do roztoku 2 g 6-0-metylerytromycín A 9-oximu, získaného v príklade 9 a 1,1 metabisulfitu sodného v 20 ml zmesi etanol/voda (1/1) bolo pridané 0,25 ml 99 % kyseliny mravčej a zmes bola zahrievaná pod spätným chladičom počas 100 minút. Potom bola reakčná zmes zriedená 30 ml vody, alkalizovaná (pH 11) 5 % vodným roztokom hydroxidu sodného a za neustáleho chladenia ladom miešaná počas 2 hodín. Vytvorená zrazenina bola oddelená filtráciou a rekryštalizovaná z etanolu za vzniku 1,45 g 6-0-metylerytromycínu A.

• • m.p. 222 až 225 °C [a]_D ²⁰ - 93 , 2 °C (c=l,0; CHC1₃)

Odborníkom je isto zrejmé, že vynález nie je limitovaný konkrétnymi detailami, uvedenými v predchádzajúcich ilustrovaných príkladoch a že konkrétna realizácia navrhovaného vynálezu môžu nadobúdať ďalšie špecifické formy, ktoré vychádzajú z tu uvedených konkrétnych príkladov. Je celkom zrejmé, že uvedené spôsoby uskutočnenia, rovnako ako jednotlivé príklady, musia byť zobrané do úvahy iba ako ilustratívne a nie limitujúce. Rozsah navrhovaného vynálezu vystihujú priložené patentové nároky skôr ako predchádzajúci popis a všetky zmeny _e modifikácie, urobené v rozsahu znenia patentových nárokov a < v zhode s nimi sú teda taktiež predmetom vynálezu.

Claims

1. Deriváty erytromycínu A všeobecného vzorca I :

(I) kde R¹ je atóm vodíka alebo alkylová skupina s 1 až 6 atómami uhlíka, R² je alkylová skupina s 1 až 6 skupinami uhlíka alebo nesubstituovaná či substituovaná arylová skupina alebo R¹ a R² spoločne tvoria lineárne alebo nelineárne vetvený reťazec alkylénového kruhu s 3 až 10 atómami uhlíka, arylénalkylénovú skupinu, kde alkylénová jednotka je tvorená 2 až 3 atómami uhlíka alebo aryléndialkylénovú skupinu, kde sú alkylénové jednotky tvorené 1 až 2 atómami uhlíka ; R³ je substituovaná silylová skupina a R⁴ je atóm vodíka alebo substituovaná silylová skupina.

2. Derivát erytromycínu A vzorca II, kde R¹ je atóm vodíka alebo alkylová skupina s 1 až 6 atómami uhlíka, R² je alkylová skupina s 1 až 6 atómami uhlíka alebo nesubstituovaná či substituovaná arylová skupina alebo R¹ a

R² spoločne tvoria lineárny alebo vetvený reťazec alkylénového kruhu s 3 až 10 atómami uhlíka, arylénalkylénovú skupinu, kde je alkylénová jednotka tvorená 2 až 3 atómami uhlíka alebo aryléndialkylénovú skupinu, kde sú alkylénové jednotky tvorené 1 až 2 atómami uhlíka.

3. Derivát erytromycínu A podía nároku 1, vybraný zo skupiny obsahujúcej :

a) 6-0-metylerytromycín A 9-acetónazín ;

b) 6-0-metylerytromycín A 9-cyklohexanónazín;

c) 6-0-metylerytromycín A 9-metyl-2-butanónazín;

d) 6-0-metylerytroniycín A 9-a-tetralónazín;

e, 6-0-metylerytromycín A 9-benzalazín.

4. Spôsob selektívnej metylácie hydroxylovej skupiny v pozícii 6 erytromycínu A, vyznačujúci sa tým, že zahrňuje :

a) konverziu erytromycínu A na erytromycín A 9-hydrazón

b) konverziu hydrazónu na erytromycín A 9-azínový derivát vzorca III, kde R¹ je atóm vodíka alebo alkylová skupina s 1 až 6 atómami uhlíka, R2 je alkylová skupina s 1 až 6 atómami uhlíka alebo nesubstituovaná či substituovaná arylová skupina alebo R¹ a R² spoločne tvoria lineárny alebo vetvený reťazec alkylénového kruhu s 3 až 10 atómami uhlíka, arylénalkylénovou skupinou, kde alkylénová jednotka je tvorená 2 až 3 atómami uhlíka alebo aryléndialkylénovú skupinu, kde alkylénové jednotky sú tvorené 1 až 2 atómami uhlíka i a R^{4 5} je hydroxylová skupina ;

(III)

c) chránenie hydroxylových skupín v pozíciách 2'silyláciou za vzniku zlúčeniny vzorca V:

4R1

Y

d) metyláciu hydroxylovej skupiny v pozícii zlúčeniny vzorca I.

6 za vzniku (V)

5. Spôsob podlá nároku 4, vyznačujúci sa tým, že uvedená metylácia sa uskutočňuje v polárnom aprotickom rozpúšťadle za prítomnosti bázy.

6. Spôsob podlá nároku 5, vyznačujúci sa tým, že uvedenou zásadou je hydroxid draselný, hydroxid sodný, hydrid sodný alebo hydrid draselný a že je použité 1,0 až 1,9 molárneho ekvivalentu uvedenej zásady na 1 mól erytromycín A 9azínového derivátu.

7. Spôsob podlá nároku 5, vyznačujúci sa tým, že uvedeným polárnym aprotickým rozpúšťadlom je dimetylsulfoxid.

8. Spôsob podía nárokov 5 a 7, vyznačujúci sa tým, že uvedeným polárnym aprotickým rozpúšťadlom je zmes dimetylsufoxidu a tetrahydrofuránu.

9. Spôsob podía nároku 4, vyznačujúci sa tým, že uvedeným metylačným činidlom je metyljodid, metylbromid, metylchlorid, dimetylsulfát, metyl p-toluénsulfonan alebo metylmetansulfonan.

10. Spôsob podía nároku 4, vyznačujúci sa tým, že uvedené metylačné činidlo je použité v množstve 1 až 2 molárne ekvivalenty na 1 ekvivalent erytromycín 9-azínového derivátu.

11. Spôsob podía nároku 4, vyznačujúci sa tým, že uvedená metylácia je uskutočňovaná pri teplotách v rozmedzí 0 °C až po izbovú teplotu.

12. Spôsob prípravy 6-0-metylerytromycínu A zo zlúčenín vzorca I, vyznačujúci sa tým, že zahrňuje :

a) odstránenie silylových chrániacich skupín kyselinou za vzniku 6-0-metylerytromycín A 9-azínu;

b) reakciu azínu s hydroxylamínom za vzniku 6-0metylerytromycín A 9-oximu ; a

c) konverziu takto získaného 6-0-metylerytromycín A 9-oximu na 6-0-metylerytromycín A.