CZ96999A3 - Nové deriváty erytromycinu A, způsob selektivní methylace 6-OH skupiny erytromycinu A, a způsob přípravy 6-0- methylerytromycinu A - Google Patents

Abstract

Deriváty etytromycinuAobecného vzorce I, kde Rjje atom vodíku nebo alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku, R2 je alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku, nebo nesubstituovaná či substituovaná aiylová skupina, nebo K aR2 společně tvoří lineární nebo větvený řetězec alkylenového kruhu se 3 až 10 atomy uhlíku, arylenalkylenovou skupinu, kdeje alkylenová jednotka tvořena2 až 3 atomy uhlíku, nebo arylendialkylenovou skupinu, kdejsou alkylenovéjednotky tvořeny 1 až 2 atorry uhlíku; Rjje substituovaná silylová skupina aR)je atomHnebo substituovaná silylová skupina. Způsob přípravy 6-0 methyleiytromycinu Aze sloučenin se vzorcemI zahrnuje a/ odstranění silylových chránících skupin kyselinou zavzniku 6-0 rrethylerytromycin A9-azinu; b/ reakci tohoto azinu s hydroxylaminem; aďkonverzi v kroku b/ získaného 6-0 methyleiytrorrycin A9-oxirru na 6-Omethylerytromycin A

Description

NOVÉ DERIVÁTY ERYTROMYCINU A, ZPŮSOB SELEKTIVNÍ METHYLACE 6-OH SKUPINY ERYTROMYCINU A, A ZPŮSOB PŘÍPRAVY 6-O-METHYLERYTROMYCINU A.

Oblast techniky

Navrhovaný vynález se zabývá novými deriváty 6-O-methylertromycinu A a způsobem přípravy zmíněných derivátů. Zmíněné deriváty jsou totiž vhodnými meziprodukty pro přípravu antibiotického léčiva 6-0methylerytromycinu A (klaritromycinu).

Dosavadní stav techniky

Erytromycin A je považován za jedno z nejbezpečnějších antibiotik. Ovšem v kyselém prostředí ztrácí tato sloučenina velmi rychle svou antibakteriální aktivitu díky intermolekulární cyklizaci. Jednou z možností, jak zlepšit stabilitu molekuly, je prevence zmíněné cyklizace methylací hydroxylové skupiny v pozici 6. 6-0-methylerytromycin A je velmi účinný při léčbě bakteriálních infekcí při orálním způsobu podávání.

Existuje několik známých způsobů přípravy 6-0-methylerytromycinu A. Příkladem může být selektivní methylace hydroxylové skupiny v pozici 6 derivátů erytromycinu A, která zahrnuje konverzi derivátů erytromycinu A schráněnými 2'-hydroxylovými skupinami a schráněnými 3'dimethylaminoskupinami, na různé typy substituovaných oximových derivátů, a následnou methylaci hydroxylových skupin v pozici 6, odstranění chránících skupin, deoximaci v pozici 9 a obnovu dimethylamino skupiny v pozici 3' za vzniku 6-0-methylerytromycinu A. Tento způsob přípravy je popsán v European Patent 195,960 a v European Patent 158,467. Podobně U.S. patent 4,990,602 popisuje zdokonalený způsob selektivní methylace hydroxylové skupiny v pozici 6 erythromycin A 9-oximů, který je založen na chránění hydroxylových skupin v pozicích 2'a 4 substituovanými silylovými skupinami a hydroxylové skupiny 9-oximové jednotky alkoxyalylovou skupinou. Zmíněné chránící skupiny jsou následně po methylaci hydroxylové skupiny v pozici 6 snadno odstraněny.

Přestože je selektivní methylace 6-hydroxylové skupiny zmíněnými metodami možná, jedná se o komplikované procesy, jako například o katalytickou redukci za účelem odstranění chránících skupin následně po methylaci (zmíněné Evropské patenty) a nebo o purifikaci kolonovou chromatografií (U.S. Patent).

Podstata vynálezu

S ohledem na dosavadní stav techniky přináší navrhovaný vynález způsob selektivní methylace hydroxylové skupiny v pozici 6 derivátů erytromycinu A, založený na konverzi derivátů erytromycinu A na deriváty erytromycin A 9-azinu s chráněnými hydroxylovými skupinami a následné reakci výsledných derivátů erytromycin A 9-azinu s methylačním činidlem. Konkrétně se navrhovaný vynález zabývá novým derivátem erytromycinu A, který má obecný vzorec I:

kde Ri je atom vodíku nebo alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku, R₂ je alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku, nebo nesubstituovaná či substituovaná arylová skupina, nebo Ri a R₂ společně tvoří lineární nebo větvený řetězec alkylenového kruhu se 3 až 10 atomy uhlíku, arylenalkylenovou skupinu, kde je alkylenová jednotka tvořena 2 až 3 atomy uhlíku, nebo arylendialkylenovou skupinu, kde jsou alkylenové jednotky tvořeny 1 až 2 atomy uhlíku; R₃ je substituovaná silylová skupina a R₄ je atom vodíku nebo substituovaná silylová skupina.

V jednom ze zvláště výhodných provedení jsou předmětem navrhovaného vynálezu deriváty 6-O-methylerytromycinu A s obecným vzorcem II:

kde R[ a R₂ odpovídají definici, uvedené pro vzorec I.

Mezi mnoho derivátů erytromycinu, které již byly v literatuře popsány, patří erytromycin A 9-hydrazon, připravený reakcí erytromycinu A s bezvodým hydrazinem v bezvodém methanolu. Tento derivát byl popsán v období prvních degradačních studií, prováděných na molekule erytromycinu [M.V. Sigal, Jr. et. al.; J. Amer. Chem. Soc. 78, 388-395 (1956)].

Erytromycin A 9-hydrazon a jeho N'-isopropylidenový derivát byly také v literatuře popsány, a to jako meziprodukty při přípravě erytromycylaminu katalytickou hydrogenaci [Ger. Offen. 1943781 a 1966310 (EM. Maas et al, Lilly), E.H.Massey et al. Tetrahedron Letters, 157-160 (1970)].

Reakce erytromycin A nebo B 9-hydrazonu s aldehydem nebo ketonem byla popsána v US Patent No. 3,780,020 (D. Evans, Lilly). Výsledkem zmíněných • · · · • · · · • 9 reakcí jsou různé deriváty erytromycin 9-azinu s antimikrobiální aktivitou se vzorcem:

(III) kde R5 je H, OH; a Ri a R2 představují proměnlivě H, alkyl, aryl, heterocyklický zbytek atd. (podrobnější popis je uveden v odkazu).

Klasicky jsou hydrazony připraveny reakcí hydrazinu s karbonylovou sloučeninou, ale 9-keto skupina erytromycinu reaguje se samotným hydrazinem jen obtížně a se substituovanými hydraziny jako jsou fenylhydrazin nebo semikarbazidy nereaguje vůbec (M.V.Sigal, Jr. op. cit.). Navrhovatelé tohoto vynálezu zjistili, že erytromycin A 9-hydrazon může být s dobrým výtěžkem získán reakcí erytromycinu A s hydrátem hydrazinu za přítomnosti kyseliny.

Mezi vhodné kyseliny, které mohou být v reakci použity patří organické kyseliny jako kyselina mravenčí, kyselina octová a kyselina propionová a anorganické kyseliny jako kyselina chlorovodíková. Rozpouštědlem v reakci je alkohol, nejraději methanol. Reakční teplota se může pohybovat v rozmezí od pokojové teploty až do 62 °C, nejvhodnější jsou teploty od 55 °C do 62 °C.

Množství hydrátu hydrazinu je vyšší než 1 ekvivalent množství erytromycinu A, nejraději je to 1,5 až 3,0 molární ekvivalenty množství použitého • · • · • · « · • · erytromycinu A. Kyselina je přidávána v množství, které upraví pH reakčního roztoku na hodnoty 6,0 až 7,0. Rozpouštědlo je nejraději použito v množství od 0,9 do 5 ml, raději pak 1 až 3 ml na 1 g erytromycinu A.

Po ukončení reakce je k reakční směsi přidán vodný bazický roztok, například hydroxid sodný, hydroxid draselný, uhličitan sodný, uhličitan draselný, amoniak a podobně. Reakční směs je zchlazena. Vytvořená sraženina je oddělena filtrací, promyta vodou a vysušena za vzniku erytromycin A 9-hydrazonu. Ukončení reakce může být snadno rozpoznáno stanovením úbytku erytromycinu A pomocí chromatografie na tenké vrstvě nebo HPLC.

Pro účely navrhovaného vynálezu může být použit kterýkoliv ze dvou izomerů erytromycin A 9-hydrazonu, nebo jejich směs.

Z účelem chránění aminoskupiny hydrazonu v pozici 9 je provedena reakce erytromycin A 9-hydrazonu se sloučeninou s obecným vzorcem IV:

(IV) kde R] a R₂ jsou definovány stejně jako ve vzorci I. Reakce probíhá podobně jako při klasickém způsobu přípravy azinů. Například erytromycin A 9hydrazon reaguje se sloučeninou se vzorcem IV ve vhodném rozpouštědle za vzniku sloučeniny se vzorcem III (kde Ri a R₂ jsou definovány stejně jako ve vzorci III a R5 je hydroxylová skupina). Použité množství sloučeniny IV v této reakci odpovídá 1 až 10 ekvivalentům, nejraději 1 až 2 ekvivalentům erytromycin A 9-hydrazonu.

Navrhovatelé použili jako příklady následující sloučeniny se vzorcem IV: aceton, methylisopropylketon, cyklohexanon, benzaldehyd a a-tetralon. Vynález ovšem není limitován pouze na zmíněné sloučeniny, ale týká se samozřejmě všech sloučenin s obecným vzorcem IV.

Mezi rozpouštědla, vhodná pro použití v reakci erytromycin A 9-hydrazonu se sloučeninou se vzorcem IV patří například dichlormethan, chloroform, tetrahydrofuran, methanol, ethanol, isopropanol, N,N-dimethylformamid, dimethylsulfoxid, acetonitril, toluen a další. Reakční teplota se pohybuje

v rozmezí od pokojové teploty do teploty odpařování (refluxní teplota) rozpouštědla.

Za účelem chránění hydroxylových skupin v pozicích 2'a 4 derivátů erytromycin A 9-azinu se vzorcem III (kde Ri a R₂ jsou definovány stejně jako ve vzorci I a R5 je hydroxylová skupina) je provedena reakce této sloučeniny se silylačním činidlem. Reakce probíhá v rozpouštědle při teplotě v rozmezí od 0 °C do teploty odpařování rozpouštědla, nejraději při pokojové teplotě. Mezi silylační činidla, vhodná pro použití ve zmíněné reakci patří chlorosilany jako například trimethylchlorosilan, dimethylisopropylchlorosilan atd., silylaminy jako například 1,1,1,3,3,3hexamethyldisilazan, N,N-dimethylaminotrimethylsilan, trimethylsilylimidazol atd., silylamidy jako bis(trimethylsilyl)urea, bis(trimethylsilyl)acetamid atd., a jejich směsi. V případě použití pouze jednoho chlorosilanu se doporučuje přidávat bázi. Silylační činidlo se používá v množství od 1 do 10 ekvivalentů, nejraději potom od 1 do 5 molárních ekvivalentů použitého množství sloučeniny se vzorcem III.

Mezi rozpouštědla, vhodná pro použití ve zmíněné reakci patří dichloromethan, chloroform, Ν,Ν-dimethylformamid, dimethylsulfoxid, tetrahydrofuran, dioxan, 1,2-dimethoxyethan a podobně.

Mezi vhodné bazické sloučeniny patří anorganické báze jako hydroxid sodný, hydroxid draselný, uhličitan sodný, uhličitan draselný a podobně; a dále organické báze jako trimethylamin, triethylamin, tri-n-butylamin, tribenzylamin, Ν,Ν-dimethylanilin, pyridin a podobně.

Silylaminy jsou s výhodou používány spolu s chlorosilany, nebo spolu s chloridem amonným či hydrochloridem pyridinu.

Alternativně může být získána sloučenina se vzorcem V jednoduchou syntézou z erytromycin A 9-hydrazonu. Konkrétně se jedná o reakci erytromycin A 9-hydrazonu se sloučeninou se vzorcem IV za stejných podmínek, jaké byly popsány výše. Výsledná sloučenina v této reakční směsi reaguje dále se silylačním činidlem, a to opět za podmínek, jaké byly popsány výše. Výsledkem zmíněných reakcí je sloučenina se vzorcem V:

• · · ·

V

(V)

Ukončení reakce může být snadno určeno stanovením úbytku derivátů erytromycin A 9-hydrazonu a/nebo erytromycin A 9-azinu pomocí chromatografie na tenké vrstvě nebo pomocí vysoko účinné kapalinové chromatografie (HPLC).

6-hydroxylová skupina je selektivně methylována v reakci sloučeniny se vzorcem V s methylačním činidlem v rozpouštědle za přítomnosti báze při teplotě od -15 °C do pokojové teploty, nejraději při teplotě od 0 °C do 8 °C. Příkladem methylačního činidla může být kupříkladu methylchlorid, methylbromid, methyljodid, dimethylsulfát, methyl p-toluensulfonát, methyl methansulfonát a podobně. Na jeden mol sloučeniny se vzorcem V mohou být použity 1,0 až 3,0 molární ekvivalenty methylačního činidla, ovšem obvykle je postačující množství 1,0 až 2,0 molární ekvivalenty. Mezi vhodná rozpouštědla patří polární aprotická rozpouštědla jako dimethylsulfoxid, Ν,Ν-dimethylformamid, tetramethylensulfoxid, hexamethyltriamid kyseliny fosforečné a směsi, sestávající se z jednoho ze zmíněných rozpouštědel a tetrahydrofuranu, 1,2-dimethoxyethanu, dioxanu, octanu ethylnatého, dichloromethanu atd. Mezi nejvhodnější rozpouštědla patří směsi dimethylsulfoxidu a tetrahydrofuranu (1:1 a 4:3). Mezi báze, vhodné pro použití ve zmíněné reakci patří hydroxid sodný, hydroxid draselný, hydrid • · • · · · sodný, terciální butyloxid draselný, hydrid draselný a podobně. Báze je použita v množství od 1 do 1,9 molárních ekvivalentů na jeden ekvivalent sloučeniny se vzorcem I.

Přítomnost O-methylové skupiny v pozici 6 derivátů 6-O-methylerytromycin A 9-azinu může být stanovena pomocí NMR, neboť na NMR spektru poskytuje charakteristický signál.

Erytromycin A 9-aziny mohou existovat buď ve dvou (pro symetrické karbonylové prekurzory), nebo ve čtyřech (pro asymetrické karbonylové prekurzory) formách. Pro použití podle vynálezu je vhodný kterýkoliv izomer, stejně jako jejich směs.

Methylace hydroxylové skupiny v pozici 6 podle navrhovaného vynálezu vykazuje velmi vysokou selektivitu.

Navíc substituované silylové skupiny, použité pro chránění hydroxylových skupin v pozicích 2'a 4, mohou být snadno odstraněny za vzniku sloučeniny se vzorcem II.

Navrhovaný vynález tedy umožňuje produkovat 6-O-methylerytromycin A s vysokým výtěžkem a ekonomicky. Sloučenina se vzorcem I může být převedena na 6-O-methylerytromycin A například následujícím způsobem. Substituované silylové skupiny sloučeniny se vzorcem I (R₃ a R4) v pozicích 2'a 4 mohou být snadno odstraněny reakcí s kyselinou (například kyselinou mravenčí) ve vodném alkoholu (methanol, ethanol a podobně) při pokojové teplotě. Výsledná sloučenina se vzorcem II reaguje dále v této směsi s hydroxylaminem za vzniku 6-O-methylerytromycin A 9-oximu. Aby byl výtěžek 6-O-methylerytromycin A 9-oximu dostatečný, musí být použité množství hydroxylaminu větší než 6 molárních ekvivalentů na jeden molární ekvivalent sloučeniny se vzorcem II. pH reakční směsi se pohybuje v rozmezí od 5,5 do 8,0, nejvhodnější pH je potom 6,0 až 7,0. Vhodné množství reakčního rozpouštědla je 0,9 až 5 ml, ještě lépe 1 až 3 ml na 1 g sloučeniny se vzorcem I. Reakční teplota se může pohybovat v rozmezí od pokojové teploty až po teplotu odpařování rozpouštědla, nejvhodnější teplota je 55 °C až 62 °C. Hydroxylamin může být do reakční směsi přidáván ve formě vodného roztoku, hydrochloridu hydroxylaminu nebo sulfátu hydroxylaminu. Ukončení reakce je určeno sledováním úbytku sloučeniny se • a · · · · • *

• · * · • · · · • · » * · · • » • · · · vzorcem I a sloučeniny se vzorcem II metodou chromatografie na tenké vrstvě nebo metodou vysokoúčinné kapalinové chromatografie (HPLC).

Takto získaný 6-O-methylerytromycin A 9-oxim je snadno převeden na 6-0methylerytromycin A reakcí s deoximačním činidlem (hydrogensiřičitan sodný, chlorid titaniný octan amonný, dusitan sodný-kyselina chlorovodíková, hydrosiřičitan sodný a podobně).

Dalším z aspektů navrhovaného vynálezu je způsob selektivní methylace hydroxylové skupiny v pozici 6 derivátů erytromycinu A zahrnující konverzi erytromycinu A na erytromycin A 9-hydrazon, dále konverzi hydrazonu na erytromycin A 9-azinový derivát se vzorcem III, kde jsou Ri a R₂ definovány stejně jako ve vzorci I a R5 je hydroxylová skupina; a dále chránění hydroxylových skupin v pozicích 2'a 4 silylací za vzniku sloučeniny se vzorcem V

(V) a konečně methylaci hydroxylové skupiny v pozici 6 za vzniku sloučeniny se vzorcem I.

Navrhovaný vynález bude dále konkrétně ilustrován na příkladech, které ukazují způsob přípravy sloučeniny se vzorcem I, a na srovnávacích příkladech, které ukazují způsob přípravy 6-0-methylerytromycinu A.

• · · · • 4 • · · · · · • · t * · · · · ♦ · • · · • · · · · • · · · · • · · • 4 * • · · · ·

Navrhovaný vynález bude dále popsán na určitých konkrétních výhodných příkladech provedení, aby byly jednotlivé aspekty vynálezu snáze pochopitelné, ovšem zmíněné příklady provedení vynálezu nejsou v žádném případě pro rozsah navrhovaného vynálezu limitující. Naopak záměrem je pokrýt všechny alternativy, modifikace a ekvivalentní úpravy, kterých se navrhovaný vynález, tak, jak je definován v přiložených patentových nárocích, týká. Následující příklady, které zahrnují zvláště výhodné aspekty provedení, jsou zde uvedeny pouze pro ilustraci praktického použití vynálezu a jako náměty pro diskusi o zvláště vhodných způsobech provedení navrhovaného vynálezu a za účelem objasnění nejvhodnějších a nejsnáze pochopitelných způsobů přípravy jednotlivých sloučenin, stejně jako principů a celkové koncepce navrhovaného vynálezu.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1: Příprava erytromycin A 9-hydrazonu.

K 500 g erytromycinu A bylo přidáno 650 ml 2-propanolu a směs byla 1 hodinu míchána při 60 °C. K suspenzi bylo přidáno 72 g hydrátu hydrazinu a 35,5 g 99% kyseliny mravenčí a výsledná směs (pH 6,5) byla míchána přes noc při teplotě 58 °C až 60 °C. Po ochlazení na 15 °C bylo ke směsi přidáno 600 ml vody a asi 69 g 45% vodného roztoku hydroxidu sodného (tak aby pH bylo upraveno na hodnotu 11). poté byla směs míchána při okolní teplotě po dobu 2 hodin a dále při 5 °C po dobu 5 hodin. Vytvořené krystaly byly odděleny filtrací, promyty 900 ml vody a vysušeny při 60 °c za vzniku 414 g erytromycin A 9-hydrazonu.

m.p. (bod tání) 138 - 141 °C (rekrystalizováno z ethylacetát hexanů) [a]_D ²⁰ -53,0°C (c = 1,0; CHC1₃).

‘H-NMR (CDCb) : 5(ppm) = 0,84[3H, t, CH₃(C-15)], 2,31[6H, s, 3’N(CH₃)₂], 3,32[3H, s, 3”-OCH₃].

« · · ·4 · • » · · · *

· · · · • · « * • > * « · » · · • « • · β * • · « · ⁿC-NMR (CDCls) : ó(ppm) == 9,36(C-17), 10,64(C-15), 13,94(020),

40,20[3‘-N(CH₃)₂], 49,38(3“-OCH3), 96,56(01“), 103,02(01‘), 168,00(0 9), 175,62(01).

Mass(FAB) : m/e 748(MH⁺).

Příklad 2: Příprava erytromycin A 9-acetonazinu.

g sloučeniny, získané v příkladu 1 bylo pod zpětným chladičem rozpuštěno ve 100 ml acetonu. Roztok byl poté ponechán při okolní teplotě po dobu 8 hodin a dále při teplotě 5°C po dobu 16 hodin. Vytvořené bezbarvé krystaly byly odděleny filtrací a vysušeny při 50 °C za vzniku 48 g erytromycin A 9-acetonazinu.

m.p. (bod tání) 131 - 134 °C (rekrystalizováno z acetonu) [a]_D ²² -17,0°C (c = 1,0; CHC1₃).

^!H-NMR (CDCh) : ó(ppm) = 0,83[3H, t, CH₃(C-15)], 1,87; 2,04[6H, d, C(CH₃)₂], 2.29[6H, s, 3’-N(CH₃)₂], 3,32[3H, s, 3”-OCH₃].

¹³C-NMR (CDCI3) : 5(ppm) = 9,29(017), 10,65(015), 14,29(020),

40,32[3‘-N(CH₃)₂], 49,47(3“-OCH₃), 96,43(01“), 103,01(01 ‘), 163.82 [N=C(CH₃)₂], 178,93(09), 174,94(01).

Mass(FAB) : m/e 788.44(MH⁺).

Příklad 3: Příprava 2'4-O-bis(trimethylsilyl)erytromycin A 9-acetonazinu.

K roztoku 20 g erytromycin A 9-acetonazinu, získaného v příkladu 2, ve 100 ml Ν,Ν-dimethylformamidu bylo za stálého chlazení ledem přidáno 4,6 g hydrochloridu pyridinu a 15 ml 1,1,1,3,3,3-haxamethyldisilazanu a směs byla přes noc míchána při okolní teplotě. Po přidání vody byla směs alkalizována (pH 11) 5% vodným roztokem hydroxidu sodného a extrahována ethylacetátem. Extrakt byl opakovaně promyt vodou a saturován vodným roztokem chloridu sodného a vysušen nad bezvodým síranem hořečnatým. Rozpouštědlo bylo za sníženého tlaku odpařeno za vzniku • 4 ···· ·· ···· ♦ · ·* • » · · * · ·

1/-1 ····· · · · · · * ^έ _ * ^1Ζ· »·*··· · » ·· »·· ·· ··· ·· ·· bezbarvé pěny. Ta byla rekrystalizována ze směsi aceton/voda 1:1 za vzniku 22,7 g 2'4- bis(trimethylsilyl)erytromycin A 9-acetonazinu.

m.p. (bod tání) 119 - 122 °C (solvatováno s 1 molem acetonu) [a]_D ²² -37,5°C (c = 1,0; CHC1₃).

‘H-NMR (CDC1₃) : d(ppm) = 0,11(9H, s, 2'-O-TMS); 0,15 (9H, s, 4-OTMS); 0,84[3H, t, CH₃(C-15)], 1,87; 2,03[6H, d, C(CH₃)₂], 2.17[6H, s, (CH₃)₂CO], 2.23[6H, s, 3’-N(CH₃)₂], 3,31 [3H, s, 3”-OCH₃], ¹³C-NMR (CDC1₃) : ó(ppm) = 0,93(4-O-TMS); 1,04(2'-O-TMS); 9,78(C17), 10,74(C-15), 14,25(020), 41,00[3‘-N(CH₃)₂], 49,76(3“-OCH₃),

96,73(01“), 1O2,68(C-1‘), 163.54[-N=C(CH₃)₂], 175,55(01), 178,54(09); 206,80[(CH₃)₂CO],

Mass(FAB) : m/e 932,66(MH⁺).

Příklad 4: Příprava 2'4''-O-bis(trimethylsilyl)-6-O-erytromycin A 9acetonazinu.

K roztoku 10 g 2'4''-O-bis(trimethylsilyl)erytromycin A 9-acetonazinu, získaného v příkladu 3, ve 300 ml směsi dimethylsulfoxidu a tetrahydrofuranu (1:1) bylo přidáno za stálého chlazení ledem 1,2 ml methyljodidu a 1,2 g 85% práškového hydroxidu draselného a směs byla míchána za stálého chlazení ledem po dobu 75 min. K reakčnímu roztoku bylo přidáno 10 ml 50% vodného roztoku dimethylaminu a směs byla míchána při okolní teplotě po dobu 1 hodiny. Po přidání 300 ml vody byla směs extrahována ethylacetátem. Organická frakce byla promyta nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a vysušena nad bezvodým síranem hořečnatým. Rozpouštědlo bylo odpařeno za sníženého tlaku za vzniku 9,3 g hrubého 2'4''-O-bis(trimethylsilyl)-6-O-erytromycin A 9-acetonazinu ve formě bezbarvé pevné látky.

m.p. (bod tání) 191,5 - 194 °C (rekrystalizováno z ethanolu) [cc]_D ²² -150,0°C (c = 1,0; CHC1₃).

• · · · · · • · · · · • · · · · · * • · · · · · • · · · · ‘H-NMR (CDC1₃) : ó(ppm) = 0,09(9H, s, 2'-0-TMS); 0,14 TMS); 0,84[3H, t, CH₃(C-15)], 1,95; 2,06[6H, d, C(CH₃)₂], (9H, s, 4-O2.22[6H, s, 3’N(CH₃)₂], 2,95[3H, s, 6-OCH3], 3,31[3H, s, 3”-OCH₃].

¹³C-NMR (CDC1₃) : ó(ppm) = 0,88(4-O-TMS); 1,06(2'-O-TMS); 9,71(C17), 10,58(C-15), 14,87(C-20), 40,99[3‘-N(CH₃)₂], 49,69(3“-OCH₃),

50,85(6-OCH₃); 96,17(C-1“), 102,54(01 ‘), 163.51 [-N=C(CH₃)₂], 175,86(0 1), 179,57(09).

Mass(FAB) : m/e 946,84(MH⁺).

Příklad 5: Příprava 6-0-methylerytromycin A 9-acetonazinu.

Ke směsi 1 g 2'4-O-bis(trimethylsilyl)-6-O-erytromycin A 9-acetonazinu, získaného v příkladu 4, 5 ml ethanolu a 0,5 ml vody bylo přidáno 0,2 ml 99% kyseliny mravenčí a směs byla míchána při okolní teplotě po dobu 3 hodin. Roztok byl zředěn 15 ml vody a alkalizován (pH 11) 45% vodným roztokem hydroxidu sodného. Poté byla směs ponechána při 5 °C přes noc. Bezbarvá sraženina byla oddělena filtrací promyta vodou a vysušena při 50 °C za vzniku 0,8 g 6-0-methylerytromycin A 9-acetonazinu.

m.p. (bod tání) 132 - 135 °C (rekrystalizováno ze směsi ethanol/voda) [a]_D ²² -152,0°C (c = 1,0; CHC1₃).

‘H-NMR (CDC1₃) : ó(ppm) = 0,84[3H, t, CH₃(C-15)], 1,94; 2,06[6H, d, C(CH₃)₂], 2.30[6H, s, 3’-N(CH₃)₂], 2,96[3H, s, 6-OCH3], 3,33[3H, s, 3”0CH₃].

¹³C-NMR (CDCI3) : 6(ppm) = 9,08(C-17), 10,48(C-15), 14,80(C-20),

40,20[3‘-N(CH₃)₂], 49,36(3 “-OCH3), 50,88(6-OCH₃); 95,92(C-1“),

1O2,6O(C-1‘), 163.56[-N=C(CH₃)₂], 175,48(C-1), 179,42(C-9).

Mass(FAB) : m/e 802,6(MH⁺).

Příklad 6: Příprava erytromycin A 9-cyklohexanonazinu.

100 g erytromycin A 9-hydrazonu, získaného v příkladu 1, bylo pod zpětným chladičem rozpuštěno ve 200 ml ethylacetátu. K roztoku bylo přidáno 20 ml • · cyklohexanonu a směs byla udržována pod zpětným chladičem po dobu 1 hodiny. Dále byla směs ponechána po dobu 1 hodiny při okolní teplotě a poté při 5°C přes noc. Bezbarvé krystaly byly odděleny filtrací, promyty hexanem a vysušeny při 50 °C za vzniku 90,7 g erytromycin A 9cyklohexanonazinu. Po odstranění ethylacetátu z filtrátu byla zbylá látka rekrystalizována z ethanolu za vzniku dalších 7,3 g výsledné sloučeniny.

m.p. (bod tání) 140 - 143 °C (rekrystalizováno ze směsi toluen/hexany) [a]_D ²⁰ -3,9°C (c = 1,0; CHC1₃).

'H-NMR (CDClj) : d(ppm) = 0,84[3H, t, CH₃(O15)], 2,29[6H, s, 3N(CH₃)₂], 3,32[3H, s, 3”-OCH₃], ¹³C-NMR (CDC1₃) : Ó(ppm) = 9,12(017), 10,49(015), 14,13(020); 25,60, 26,06, 27,15, 28,20 a 35,45;

N=C (CH₂)

2'5

49,30(3“-OCH₃), 96,21(01“), 1O2,74(C-1‘), 168,37

174,68(01), 178,42(09).

Mass(FAB) : m/e 828,26(MH⁺).

Příklad 7: Příprava 2',4-O-bis(trimethylsilyl)erytromycin A 9cyklohexanonazinu.

1. K roztoku 50 g erytromycin A 9-cyklohexanonazinu, získaného v příkladu 6, ve 100 ml Ν,Ν-dimethylformamidu bylo přidáno za stálého chlazení ledem 6,5 g chloridu amonného a 38,0 ml 1,1,1,3,3,3hexamethyldisilazanu a vzniklá směs byla míchána při okolní teplotě přes « · • · · · noc. Poté bylo podobným způsobem, jaký byl popsán v příkladu 3, získáno 57,0 g 2',4-O-bis(trimethylsilyl)erytromycin A 9cyklohexanonazinu ve formě bezbarvé pěny.

[oc]d²² -34,5°C (c = 1,0; CHC1₃).

'H-NMR (CDC1₃) : ó(ppm) = 0,08(9H, s, 2'-O-TMS); 0,11 (9H, s, 4-OTMS); 0,81[3H, t, CH₃(C-15)], 2.22[6H, s, 3’-N(CH₃)₂], 3,27[3H, s, 3”OCH₃], ¹³C-NMR (CDC1₃) : δ(ρριη) = 0,83(4-O-TMS); 0,96(2'-O-TMS); 9,71(C17), 10,64(015), 14,18(020), 25,69, 26,08, 27,21, 28,28 a 35,54[N=C(CH₂)₅] —n=c^~^A(CH₂)₅

40,91 [3'-N(CH₃)₂], 49.64(3 -OCH₃), 96,61(01), 102,55(01'), 168,00[N=C(CH₂)₅];

175,36(01), 178,08(09)

Mass(FAB) : m/e 972,70(MH⁺).

2. K roztoku 100 g erytromycin A 9-hydrazonu, získaného v příkladu 1, ve 200 ml Ν,Ν-dimethylformamidu bylo přidáno 14,6 ml cyklohexanonu a směs byla míchána po dobu 4 hodin při teplotě 60 °C. Poté bylo k reakční směsi za stálého chlazení ledem přidáno 13 g chloridu amonného a 75 ml 1,1,1,3,3,3-hexamethyldisilazanu a směs byla míchána při okolní teplotě přes noc. Poté, podobným postupem, jaký byl popsán v příkladu 3, bylo získáno 126 g 2',4-O-bis(trimethylsilyl)erytromycin A 9cyklohexanonazinu, který byl identický se sloučeninou, získanou výše (1.)· • ·

Příklad 8: Příprava 6-0-methylerytromycin A 9-cyklohexanonazinu.

1. K roztoku 50 g 2',4-O-bis(trimethylsilyl)erytromycin A 9cyklohexanonazinu, získaného v příkladu 7, ve 350 ml směsi dimethylsulfoxidu a tetrahydrofuranu (4:3) bylo za stálého chlazení ledem přidáno 5,8 ml methyljodidu a 5,75 g 85% práškového hydroxidu draselného, a směs, chlazená ledem, byla míchána po dobu 90 min.

K reakční směsi bylo přidáno 30 ml 50% vodného roztoku dimethylaminu a směs byla míchána při okolní teplotě po dobu 1 hodiny. Poté byla směs zředěna 350 ml vody a extrahována ethylacetátem. Organická frakce byla promyta nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a vysušena nad bezvodým síranem hořečnatým. Rozpouštědlo bylo za sníženého tlaku odpařeno za vzniku 47,4 g 2',4-O-bis(trimethylsilyl)-6-O-methylerytromycin A 9cyklohexanonazinu ve formě pěny.

2. K roztoku 20 g sloučeniny, získané v předchozím příkladu (1.), v 50 ml směsi ethanol/voda (10/1) bylo přidáno 2,8 ml 99% kyseliny mravenčí a směs byla míchána při okolní teplotě po dobu 2 hodin. Poté byla reakční směs zředěna 60 ml vody, alkalizována (pH 11) 45% vodným roztokem hydroxidu sodného při teplotě 15 až 20 °C a extrahována ethylacetátem.

Organická frakce byla promyta vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a vysušena nad bezvodým síranem hořečnatým. Rozpouštědlo bylo odpařeno za sníženého tlaku za vzniku 16,2 g 6-Omethylerytromycin A 9-cyklohexanonazinu ve formě pěny.

m.p. 176 - 179 °C (rekrystalizováno z ethanolu) [a]_D ²⁵ -144,2°C (c = 1,0; CHC1₃).

’Η-NMR (CDCh) : ó(ppm) - 0,84[3H, t, CH₃(C-15)], 2.29[6H, s, 3’N(CH₃)₂], 2,98 (3H, s, 6-OCH3), 3,33[3H, s, 3”-OCH₃].

í • ·

¹³C-NMR (CDC1₃) : ó(ppm) = 9,07(C-17), 10,51(0-15), 14,92(0-20), 25,86, 26,16, 27,29, 28,39 a 34,85;

40,24[3'-N(CH₃)₂], 49.42(3-OCH₃), 51,07(6-OCH₃), 95,97(0-1”),

102,73(0-1”), 168,77;

175,59(0-1), 179,71(0-9)

Mass(FAB) : m/e 842,24(MH⁺).

Příklad 9: Příprava 6-0-methylerytromycin A 9-oximu z 2',4-Obis(trimethylsilyl)-erytromycin A 9-cyklohexanonazinu.

K roztoku 7,1 g 2’,4”-O-bis(trimethylsilyl)-6-O-methylerytromycin A 9cyklohexanonazinu, získaného v příkladu 8(1), ve 25 ml methanolu a 3 ml vody byly přidány 3 g hydrochloridu hydroxylaminu a směs byla míchána při okolní teplotě po dobu 2 hodin, poté bylo k reakční směsi přidáno 3,5 ml 50% vodného roztoku hydroxylaminu a roztok 1 g hydrochloridu hydroxylaminu v 1 ml vody. Směs (pH 6) byla míchána při teplotě 60 °C až 62 °C po dobu 24 hodin. Poté byla reakční směs ochlazena na 15 °C, zředěna 30 ml vody a alkalizována (pH 11) 46% vodným roztokem hydroxidu sodného a udržována přes víkend při teplotě 5 °C. Bezbarvá sraženina byla oddělena filtrací, promyta vodou a vysušena při teplotě 50 °C za vzniku 3,8 g 6-O-methylerytromycin A 9-oximu.

m.p. (bod tání) 248 - 251 °C (roztaveno při 169 °C až 171 °C, znovu ztuhlé při 180 °C - 185 °C, a znovu roztaveno při 248 - 251 °C) (rekrystalizováno ze směsi ethanol/petroléther).

[a]_D ²² -91,3°C (c = 1,0; CHC1₃).

‘H-NMR (CDCI3) : δ(ρριη) = 0,83[3H, t, CH₃(C-15)], 2.36[6H, s, 3’N(CH₃)₂], 3,1O[3H, s, 6-OCH3], 3,33[3H, s, 3”-OCH₃].

¹³C-NMR (CDCI3) : ó(ppm) = 9,21(017), 10,61(015), 14,97(C-20),

40,40[3‘-N(CH₃)₂], 49,48(3“-OCH₃), 51,19(6-OCH₃); 96,03(01“),

1O2,7O(C-1‘), 175,67(01), 170,36(09).

Mass(FAB) : m/e = 763,4(MH⁺).

Příklad 10: Příprava erytromycin A 9-(3-methyl-2-butanon)azinu.

Směs 20 g erytromycin A 9-hydrazonu, získaného v příkladu 1, a 6 ml 3methyl-2-butanonu byla zahřívána pod zpětným chladičem ve 20 ml methanolu po dobu 3 hodin. Poté byly methanol a nadbytek ketonu odstraněny vysušením za sníženého tlaku. Výsledkem reakce bylo 22 g erytromycin A 9-(3-methyl-2-butanon)azinu ve formě pěny.

m.p. 139 - 142 °C (rekrystalizováno ze směsi ethylacetát/n-hexan).

[a]_D ²⁷ -10,0 °C (c = 1,0; CHC1₃).

‘H-NMR (CDCI3) ; ó(ppm) = 0,84[3H, t, CH₃(C-15)], 2.34[6H, s, 3’N(CH₃)₂], 3,32[3H, s, 3”-OCH₃].

¹³ONMR (CDCI3) : ó(ppm) = 9,36(017), 10,65(015), 14,43(C-20),

40,36[3‘-N(CH₃)₂], 49,45(3“-OCH₃), 96,35(01“), 102,75(01‘), 170,05[N=£(CH₃)CH(CH₃)₂]; 174,72(01), 177,48(09).

Mass(FAB) : m/e = 816,6(MH⁺)·

Příklad 11: Příprava 2',4-O-bis(trimethylsilyl)erytromycin A 9-(3-methyl2-butanon)azinu.

K roztoku 8,3 g erytromycin A 9-(3-methyl-2-butanon)azinu, získaného v příkladu 10, ve 20 ml Ν,Ν-dimethylformamidu bylo za stálého chlazení ledem přidáno 1,1 g chloridu amonného a 6,4 ml 1,1,1,3,3,3hexamethyidisilazanu a směs byla míchána při okolní teplotě přes noc. Poté byla reakční směs zředěna vodou, alkalizována (pH 11) 5% vodným • · · 9 ίο ..........

IJ ..····

.. ... ·· ... ·« roztokem hydroxidu sodného a extrahována ethylacetátem. Organická frakce byla promyta vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a vysušena nad bezvodým síranem hořečnatým. Rozpouštědlo bylo odpařeno za sníženého tlaku za vzniku 9,6 g 2',4-O-bis(trimethylsilyl)erytromycin A 9-(3-methyl-2-butanon)azinu ve formě pěny.

[<x]_D ²⁷ -39,8 °C (c = 1,0; CHC1₃).

’Η-NMR (CDCI3) : ó(ppm) = 0,10(9H, s, 2'-O-TMS); 0,13 (9H, s, 4-OTMS); 0,84[3H, t, CH₃(C-15)], 2.23[6H, s, 3’-N(CH₃)₂], 3,29[3H, s, 3”OCH3].

^I3C-NMR (CDCb) : d(ppm) = 0,84(4-O-TMS); 0,97(2'-O-TMS); 9,67(C17), 10,63(C-15), 14,29(C-20), 40,70[3‘-N(CH₃)2], 49,68(3 “-OCH₃),

96,64(0-1“), 102,48(01‘), 169,69[-N=C(CH₃)CH(CH₃)₂], 175,44(0-1),

177,16(0-9).

Mass (FAB) : m/e = 960,5 (MH⁺).

Příklad 12: Příprava 6-O-methylerytromycin A 9-(3-methyl-2butanon)azinu.

1. K roztoku 8,0 g 2',4-O-bis(trimethylsilyl)erytromycin A 9-(3-methyl-2butanon)azinu, získaného v příkladu 11, v 56 ml směsi dimethylsulfoxidu a tetrahydrofuranu (4:3) bylo za stálého chlazení ledem přidáno 0,93 ml methyljodidu a 0,93 g práškového 85% KOH. Reakční směs byla za stálého chlazení ledem míchána po dobu 80 minut. Poté bylo k reakčnímu roztoku přidáno 20 ml 50% vodného roztoku dimethylaminu a směs byla míchána při okolní teplotě po dobu 1 hodiny. Směs byla zředěna 60 ml vody a extrahována ehylacetátem. Organická frakce byla promyta nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a vysušena nad bezvodým síranem hořečnatým. Rozpouštědlo bylo odpařeno za sníženého tlaku za vzniku 8,0 g 2',4-O-bis(trimethylsilyl)-6-O-methylerytromycin A 9-(3-methyl-2-butanon)azinu ve formě pěny.

2. K roztoku 7,0 g sloučeniny, získané v předchozím příkladě (1.), v 70 ml směsi ethanol/voda (1:1) bylo přidáno 2,8 ml 99% kyseliny mravenčí a • · · · směs byla míchána při okolní teplotě po dobu 1 hodiny. Poté byl reakční roztok zředěn 70 ml vody, alkalizován (pH 11) 5% vodným roztokem hydroxidu sodného a extrahován ethylacetátem. Organická frakce byla promyta vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a vysušena nad bezvodým síranem hořečnatým. Rozpouštědlo bylo odpařeno za sníženého tlaku za vzniku 5,7 g 6-O-methylerytromycin A 9(3-methyl-2-butanon)azinu.

m.p. 153 - 156 °C (rekrystalizováno z methanolu).

[a]_D ²⁷ -127,0 °C (c - 1,0; CHC1₃).

‘H-NMR (CDC1₃) : d(ppm) = 0,83[3H, t, CH₃(C-15)], 2.29[6H, s, 3’N(CH₃)₂], 3,00(3H, s, 6-OCH₃), 3,33[3H, s, 3”-OCH₃], ¹³C-NMR (CDC1₃) : Ó(ppm) = 8,83(C-17), 10,28(C-15), 14,28(020),

40,01[3‘-N(CH₃)₂], 49,16(3“-OCH₃), 50,73(6-OCH₃), 95,80(01“),

102,44(01‘), 169,13[-N=C(CH₃)CH(CH₃)₂]; 175,19(0-1), 177,92(0-9).

Mass (FAB) : m/e = 830,6(MH⁺).

Příklad 13: Příprava erytromycin A 9-a-tetralonazinu.

Směs 20 g erytromycin A 9-hydrazonu, získaného v příkladu 1, a 3,55 ml atetralonu [3,4-dihydro-l(2H)-naftalenon] byla zahřívána pod zpětným chladičem v 60 ml toluenu po dobu 16 hodin. Voda byla odstraňována (Dean-Starkův odlučovač). Poté byl toluen za sníženého tlaku odpařen do sucha za vzniku 23 g erytromycin A 9-a-tetralonazinu ve formě pěny.

m.p. 134 - 137 °C (rekrystalizováno ze směsi methanol/voda 1/1).

[a]_D ²⁷ 0,0 °C (c - 1,0; CHC1₃).

'H-NMR (CDC1₃) : 6(ppm) = 0,85[3H, t, CH₃(C-15)], 2.32[6H, s, 3’N(CH₃)₂], 3,32[3H, s, 3”-OCH₃]; 7,15 - 8,16(4H, m, Ar).

¹³C-NMR (CDC1₃) : ó(ppm) = 9,30(C-17), 10,58(015), 14,48(C-20), 21,81, 27,30 a 28,87

40,24[3‘-N(CH₃)₂], 49,41(3“-OCH₃), 96,40(C-l“), 102,87(C-l‘); 125,36, 126,38, 128,69, 129,94, 131,98 a 140,93(Ar); 160,74

ch₂ ch₂ h₂

174,78(01), 178,18(09).

Mass (FAB) : m/e = 876,6(MH⁺).

Příklad 14: Příprava 2’,4-O-bis(trimethylsilyl)erytromycin A 9-atetralonazinu.

K roztoku 9,8 g erytromycin A 9-a-tetralonazinu, získaného v příkladu 13, ve 20 ml Ν,Ν-dimethylformamidu bylo za stálého chlazení ledem přidáno 1,3 g chloridu amonného a 7,5 ml 1,1,1,3,3,3-hexamethyldisilazanu a směs byla přes noc míchána při okolní teplotě. Poté bylo podobným způsobem, jaký byl popsán v příkladu 3, získáno 11,2 g 2',4-Obis(trimethylsilyl)erytromycin A 9-a-tetralonazinu ve formě pěny.

[a]_D ²⁷ -20,2 °C (c = 1,0; CHC1₃).

‘H-NMR (CDC1₃) : ó(ppm) = 0,13(9H, s, 2'-O-TMS); 0,15 (9H, s, 4-OTMS); 0,86[3H, t, CH₃(C-15)], 2.26[6H, s, 3’-N(CH₃)₂], 3,31[3H, s, 3”OCH₃]; 7,15 - 8,18(4H, m, Ar).

¹³C-NMR (CDC1₃) : ó(ppm) = 0,84(4-O-TMS); 0,98 (2’-O-TMS); 9,67(0 17), 10,65(C-l5), 14,41(020), 21,86 a 27,27

N

II

H₂

40,91 [3‘-N(CH₃)₂], 49,69(3“-OCH₃), 96,65(C-1“), 102,50(C-1 ‘); 125,46, 126,32, 128,62, 129,84, 132,10 a 140,89(Ar);

175,38(C-1), 178,10(C-9).

Mass (FAB) : m/e = 1020,6 (MH⁺).

Příklad 15: Příprava 6-O-methylerytromycin A 9-a-tetralonazinu.

1. K roztoku 9,0 g 2',4-O-bis(trimethylsilyl)erytromycin A 9-atetralonazinu, získaného v příkladu 14, v 63 ml směsi dimethylsulfoxidu a tetrahydrofuranu (4:3) bylo za stálého chlazení ledem přidáno 0,99 ml methyljodidu a 0,99 g 85% práškového hydroxidu draselného. Směs byla za stálého chlazení ledem míchána po dobu 80 min. K reakční směsi bylo dále přidáno 20 ml 50% vodného roztoku dimethylaminu a směs byla míchána při okolní teplotě po dobu 1 hodiny. Poté byla směs zředěna 63 ml vody a extrahována ethylacetátem. Organická frakce byla promyta vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a vysušena nad bezvodým síranem hořečnatým. Ethylacetát byl odpařen za sníženého tlaku. Výsledným produktem bylo 8,6 g 2',4-O-bis(trimethylsilyl)-6-Omethylerytromycin A 9-a-tetralonazinu ve formě pěny.

• ·

2. K roztoku 7,0 g sloučeniny, získané v předchozím příkladu (1.), ve 20 ml směsi ethanol/voda (10/1) byl přidán 1 ml 99% kyseliny mravenčí a směs byla míchána při okolní teplotě po dobu 1,5 hodiny. Poté byla reakční směs zředěna 20 ml vody, alkalizována (pH 11) 5% vodným roztokem hydrochloridu sodného a extrahována ethylacetátem. Organická frakce byla promyta vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a vysušena nad bezvodým síranem hořečnatým. Rozpouštědlo bylo odpařeno za sníženého tlaku za vzniku 5,3 g 6-O-methylerytromycin 6O-methylerytromycin A 9-a-tetralonazinu ve formě pěny.

m.p. 159 - 162 °C (rekrystalizováno z methanolu).

[cc]_D ²⁷ -124,2 °C (c = 1,0; CHC1₃).

‘H-NMR (CDCI3) : Ó(ppm) = 0,85[3H, t, CH₃(C-15)], 2.30[6H, s, 3’N(CH₃)₂], 2,97(3H, s, 6-OCH3), 3,32[3H, s, 3”-OCH₃]; 7,15 - 8,30(4H, m, Ar).

¹³C-NMR (CDCI3) : ó(ppm) = 9,10(0-17), 10,54(0-15), 15,07(C-20), 22,03, 27,30 a 28,75

40,25[3‘-N(CH₃)₂], 49,42(3“-OCH₃), 51,10(6-OCH₃), 95,96(0-1“),

102,61(0-0); 125,34, 126,32, 128,63, 129,63, 132,97 a 141,04 (Ar); 160,78

175,56(0-1), 179,86(0-9).

Mass (FAB) : m/e = 890,6 (MH⁺).

• · • · · ·

Příklad 16: Příprava erytromycin A 9-benzalazinu.

Směs 20 g erytromycin A 9-hydrazonu, získaného v příkladu 1, a 2,73 ml benzaldehydu byla zahřívána pod zpětným chladičem ve 40 ml ethylacetátu po dobu 3 hodin, poté byl roztok udržován při 5 °C přes noc. Vytvořené bezbarvé krystaly byly odděleny filtrací, promyty ethylacetátem a vysušeny při 50 °C za vzniku 18,1 g erytromycin A 9-benzalazinu.

m.p. 142 - 145 °C (rekrystalizováno z ethylacetátu).

[a]_D ²⁸ -42,0 °C (c = 1,0; CHC1₃).

‘H-NMR (CDC1₃) : Ó(ppm) = 0,85[3H, t, CH₃(C-15)], 2.31[6H, s, 3’N(CH₃)₂], 3,31[3H, s, 3”-OCH₃); 7,42 - 7,78(5H, m, Ph), 8,31(1H, s, PhCH=N-).

¹³C-NMR (CDC1₃) : ó(ppm) = 9,12(017), 10,53(015), 14,25(020),

40,15[3‘-N(CH₃)₂], 49,35(3“-OCH₃), 96,23(C-1“), 1O2,9O(C-1‘); 128,26, 128,66, 130,96 a 133,66(Ph); 159,66(PhCH=N-); 175,01(01), 184,26(09). Mass (FAB) : m/e = 836,4 (MH⁺).

Příklad 17: Příprava 2',4-O-bis(trimethylsilyl)erytromycin A 9benzalazinu.

K roztoku erytromycin A 9-benzalazinu, získaného v příkladu 16, ve 20 ml Ν,Ν-dimethylformamidu bylo přidáno za stálého chlazení ledem 1,3 g chloridu amonného a 7,7 ml 1,1,1,3,3,3-hexamethyldisilazanu, a směs byla míchána při okolní teplotě přes noc. Poté bylo podobným způsobem, jaký byl popsán v příkladu 3, získáno 11,4 g 2',4-Obis(trimethylsilyl)erytromycin A 9-benzalazinu ve formě pěny.

[a]_D ²⁸ -51,5 °C (c = 1,0; CHC1₃).

‘H-NMR (CDC1₃) : ó(ppm) = 0,ll(9H, s, 2'-O-TMS), 0,12(9H, s, 4-OTMS), 0,85[3H, t, CH₃(C-15)], 2.26[6H, s, 3’-N(CH₃)₂], 3,28[3H, s, 3”0CH₃]; 7,40 - 7,78(5H, m, Ph), 8,3O(1H, s, PhCH=N-).

• ·

¹³C-NMR (CDC1₃) : ó(ppm) = 0,88(4-O-TMS); 1,05(2'-O-TMS); 9,66(C17), 10,79(015), 14,23(020), 40,96[3‘-N(CH₃)₂], 49,70(3“-OCH_a),

96,48(01“), 1O2,55(C-1‘); 128,42, 128,70, 130,97 a 134,09(Ph);

159,89(PhCH=N-); 175,74(01), 184,12(09).

Mass (FAB) ; m/e = 980,6 (MH⁺).

Příklad 18: Příprava 6-0-methylerytromycin A 9-benzalazinu.

1. K roztoku 8,0 g 2’,4“-O-bis(trimethylsilyl)erytromycin A 9-benzalazinu, získaného v příkladu 17, v 56 ml směsi dimethylsulfoxidu a tetrahydrofuranu (4:3) bylo za stálého chlazení ledem přidáno 0,92 ml methyljodidu a 0,92 g 85% práškového hydroxidu draselného. Reakční směs byla za stálého chlazení ledem míchána po dobu 80 min. poté bylo k reakční směsi přidáno 15 ml 50% vodného roztoku dimethylaminu a směs byla míchána při okolní teplotě po dobu 1 hodiny. Směs byla zředěna 60 ml vody a extrahována ethylacetátem. Organická frakce byla promyta nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a vysušena nad bezvodým síranem hořečnatým. Rozpouštědlo bylo odpařeno za sníženého tlaku za vzniku 7,7 g 2',4''-O-bis(trimethylsilyl)-6-O-methylerytromycin A 9-benzalazinu ve formě pěny.

2. K roztoku 7,0 g sloučeniny, získané v předchozím příkladu (1.), v 70 ml směsi ethanol/voda (1/1) bylo přidáno 2,8 ml 99% kyseliny mravenčí a směs byla míchána při okolní teplotě po dobu 1 hodiny. Reakční roztok byl poté zředěn 70 ml vody, alkalizován (pH 11) 5% vodným roztokem hydroxidu sodného a extrahován ethylacetátem. Organická frakce byla promyta vodou a nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a poté vysušena nad bezvodým síranem hořečnatým. Rozpouštědlo bylo odpařeno za sníženého tlaku za vzniku 5,8 g hrubého produktu ve formě pěny. 5 g hrubého produktu bylo purifikováno silikagelovou kolonovou chromatografii (eluováno CH2CI2 : CH₃0H : NH4OH = 30:1:0,1 10:1:0,1) s výtěžkem 3,83 g 6-0-methylerytromycin A 9-benzalazinu.

m.p. 142 - 145 °C (rekrystalizováno z chloroform-n-hexanu) [a]_D ²⁷ -106,5 °C (c = 1,0; CHC1₃).

v

i.

• · · · • <

* · · · ‘H-NMR (CDC1₃) : ó(ppm) = 0,85[3H, t, CH₃(C-15)], 2,37[6H, s, 3’N(CH₃)₂], 2,92(3H, s, 6-OCH₃), 3,32[3H, s, 3”-OCH₃]; 7,41 - 7,80(5H, m, Ph), 8,36(1H, s, PhCH=N-).

^,3C-NMR (CDC1₃) : 6(ppm) = 9,14(C-17), 10,56(015), 14,66(020),

40,27[3‘-N(CH₃)₂], 49,37(3 “-OCH₃), 51,16(6-OCH₃); 95,96(01“),

1O2,52(C-1‘); 128,16, 128,71, 130,68 a 134,52(Ph); 159,14(PhCH=N-); 175,35(01), 184,18(09).

Mass (FAB) : m/e = 850,5 (MH⁺).

Referenční příklad: Příprava 6-0-methylerytromycinu A z 6-0methylerytromycin A 9-oximu.

K roztoku 2 g 6-0-methylerytromycin A 9-oximu, získaného v příkladu 9, a l, 1 g metabisulfitu sodného ve 20 ml směsi ethanol/voda (1/1) bylo přidáno 0,25 ml 99% kyseliny mravenčí a směs byla zahřívána pod zpětným chladičem po dobu 100 minut. Poté byla reakční směs zředěna 30 ml vody, alkalizována (pH 11) 5% vodným roztokem hydroxidu sodného a za stálého chlazení ledem míchána po dobu 2 hodin. Vytvořená sraženina byla oddělena filtrací a rekrystalizována z ethanolu za vzniku 1,45 g 6-Omethylerytromycinu A.

m. p. 222 °C - 225 °C [a]_D ²⁰ -93,2°C (c = 1,0; CHC1₃).

Odborníku je jistě zřejmé, že vynález není limitován konkrétními detaily, uvedenými v předcházejících ilustrativních příkladech a že konkrétní provedení navrhovaného vynálezu mohou nabývat dalších specifických forem, které nevycházejí ze zde uvedených konkrétních příkladů. Je tedy zcela zřejmé, že uvedené způsoby provedení, stejně jako jednotlivé příklady, musí být brány v úvahu jen jako ilustrativní a nikoliv limitující. Rozsah navrhovaného vynálezu vystihují přiložené patentové nároky spíše než předchozí popis, a veškeré změny a modifikace, provedené v rozsahu znění patentových nároků a ve shodě s nimi jsou tudíž také předmětem vynálezu.

Claims (4)

1. PATENTOVÉ NÁROKY

   1. Nové deriváty erytromycinu A s obecným vzorcem I:

   kde Ri je atom vodíku nebo alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku, R₂ je alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku, nebo nesubstituovaná či substituovaná arylová skupina, nebo Ri a R₂ společně tvoří lineární nebo větvený řetězec alkylenového kruhu se 3 až 10 atomy uhlíku, arylenalkylenovou skupinu, kde je alkylenová jednotka tvořena 2 až 3 atomy uhlíku, nebo arylendialkylenovou skupinu, kde jsou alkylenové jednotky tvořeny 1 až 2 atomy uhlíku; R3 je substituovaná silylová skupina a R₄ je atom H nebo substituovaná silylová skupina.
2. 2. Derivát erytromycinu A se vzorcem II, kde Rj je atom vodíku nebo alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku, R₂ je alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku, nebo nesubstituovaná či substituovaná arylová skupina, nebo Ri a R₂ společně tvoří lineární nebo větvený řetězec alkylenového kruhu se 3 až 10 atomy uhlíku, arylenalkylenovou skupinu, kde je alkylenová jednotka tvořena 2 až 3 atomy uhlíku, nebo arylendialkylenovou skupinu, kde jsou alkylenové jednotky tvořeny 1 až 2 atomy uhlíku.

   0 0

   0 0 0 0

   0 0 · 0 0 ···
3. 3. Derivát erytromycinu A podle nároku 1, vybraný ze skupiny obsahující:

   a) 6-O-methylerytromycin A 9-acetonazin;

   b) 6-O-methylerytromycin A 9-cyklohexanonazin;

   c) 6-O-methylerytromycin A 9-methyl-2-butanonazin;

   d) 6-O-methylerytromycin A 9-a-tetralonazin;

   e) 6-O-methylerytromycin A 9-benzalazin.
4. 4. Způsob selektivní methylace hydroxylové skupiny v pozici 6 erytromycinu A, vyznačující se tím, že zahrnuje:

   a) konverzi erytromycinu A na erytromycin A 9-hydrazon;

   b) konverzi hydrazonu na erytromycin A 9-azinový derivát se vzorcem III, kde Ri je atom vodíku nebo alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku, R₂ je alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku, nebo nesubstituovaná či substituovaná arylová skupina, nebo Ri a R₂ společně tvoří lineární nebo větvený řetězec alkylenového kruhu se 3 až 10 atomy uhlíku, arylenalkylenovou skupinu, kde je alkylenová jednotka tvořena 2 až 3 atomy uhlíku, nebo arylendialkylenovou skupinu, kde jsou alkylenové jednotky tvořeny 1 až 2 atomy uhlíku; a R5 je hydroxylová skupina;

   (III)

   c) chránění hydroxylových skupin v pozicích 2 a 4- silylací za vzniku sloučeniny se vzorcem V:

   R’ K₂ (V)

   d) methylaci hydroxylové skupiny v pozici 6 za vzniku sloučeniny se vzorcem I.