SK292792A3 - The composition for protecting hydrophobia virus - Google Patents

Description

Kompozícia na ochranu vírusu besnoty

Oblasť techniky

Vynález sa týka kompozície na ochranu vírusu besnoty pre výrobu vakcíny proti líšiek. Orálne aplikované tlmenie besnoty v populácii besnote na orálnu imunizáciu vakcíny sú úspešne používané na voľne žijúcich zvierat. Imunita líšiek proti besnote obmedzuje Šírenie vírusu besnoty v líščej populácii, a tým bráni Šíreniu nákazy na iné zvieratá. LíSky sa podieľajú 95 X na vSetkých prípadoch výskytu besnoty u zvierat. Zlepšenie nákazovej situácie u líSok znižuje riziko infekcie človeka. Redukcia počtu potrebných vakcinácií ľudí vedie ku zníženiu nákladov a počtu postvakcinačných reakcií u ľudí, ktoré sú po použití vakcín besnoty známe.

Doterajší stav techniky

Pre zaistenie účinnej orálnej imunizácie líSiek je potrebné zabrániť poklesu vírusu besnoty vo vakcíne, ktorá je položená do voľnej prírody. Vakcína je predstavovaná plastikovou kapsulou naplnenou vakcinačným vírusom s ochranným médiom, zakrytou hliníkovou fóliou. Kapsula s vírusom je obalená vhodnou návnadovou látkou, ktorá je pre líSky atraktívna. Pri požieraní dôjde k prehryznutiu plastikovej kapsule a k výtoku vakcinačného vírusu do sústa návnadovej látky, ktorá kontaminuje ústnu dutinu vírusom, ktorý prenikne do krvného obehu a vedie k vytvoreniu imunity. Vyrobená vakcína sa skladuje v zamrazenom stave pri teplote -20 až -30°C. Vakcinácia sa prevádza tak, že vakcína Ba kladie do prírody v množstve 16 dávok vakcíny na km². Cieľom je dosiahnuť čo najvyšší počet imúnnych líšok, čo sa dosahuje dvojnásobnou vakcináciou v priebehu kalendárneho roka. Prvý termín vakcinácie je koncom apríla, druhý

- 1 ’ začiatkom októbra. V týchto ročných obdobiach sa teploty spravidla pohybujú od 0 do 20°C. Pri týchto klimatických podmienkach je potrebné zaistiť minimálny pokles titru vo vakcíne, a tým čo najvygäiu účinnosť vakcíny a vakcinácie. Vakcinačná dávka musí obsahovať minimálne ÍCP'OPFU (povlakotvorných jednotiek) v 1 ml. Na dosiahnutie uvedených parametrov je nutné vírus vo vakcíne vhodným spôsobom stabilizovať. Na stabilizáciu možno použiť rôzne látky.

Na stabilizáciu vírusu besnoty je požiteľný čistený kazeinový hydrolyzát (Baer g.m., Winkler e.g., US patent 4 014 991 z 29.3.1977, Int. Ciz, A61K 39/28).

Použitie hydrolyzovanej želatíny a sorbitu s koncentráciou 3,57 X vedie k ochrane vírusových antigénov (Abitz W., Morí D., DE 28 16 349 Al z 14.4.1978, Int. Ciz, A61K 39/16).

Zmes hydrolyzovanej želatíny, disacharidov,

L-glutámovej kyseliny a L-argininu chráni vírusové suspenzie (Mc Aleer W.J., Markus H.Z., US 30.7.1980, Int. C13 , A 61K 39/12), H.Z., EP 0 028 563 z 28.10.1980, Int.

Tris puíor v koncentrácii 0,03 vírusovú suspenziu (Biades J.E., 2.10.1982, Int. C13, A 61K 39/205).

patent 4 338 335 z

Mc Aller W.J., Markus C13, A 61K 39/121).

až 0,08 M stabilizuje EP 0 049 296 Al z

Vírus besnoty vo vakcíne pre orálnu imunizáciu USiek je možno stabilzovať pridaním 5 až 10 X vaječného žĺtku (Steck F., EP 0 100 752 Al z 2.8.1983 Int. C13, A61K 39/205) alebo zmesou 10 X vaječného žĺtku s bovínnym sérovým albumínom (Schneider L.G., DE 35 26 889 Al z 26.7.1985, Int. A

C13 ,'/39/205) .

Cieľom rieäenia bolo pripraviť vhodnú kompozíciu na ochranu vírusu besnoty pre orálnu vakcináciu líäok, ktorá zaisti jeho ochranu pri dlhodobom skladovaní pri teplotách -20 až -30°C a po vyložení vakcíny pre líšky pri teplotách od -5 do 20°C po dobu 14 dní.

Podstata vynálezu

Podstata vynálezu spočíva v tom, že kompozície obsahujúce kryštalický kolagén, 2,4,6-Tris (dimetylaminometyl)fenol , glutamát draselný, kyselinu etyléndiaminotetraoctovú, zvieracie inaktivovaná sérum bez protilátok proti vírusu besnoty v destilovanej vode pri styku s vakcinačným vírusom besnoty bránia strate jeho biologickej aktivity. Krátkodobo pri teplote -5°C až + 20°C alebo dlhodobo pri teplote -20°C až -60°C. Biologická aktivita vírusu besnoty je rozhodujúca pre zaistenie vakcinačného efektu u voľne žijúcich líSiek. Vakcína uložená v návnadovej látke sa kladie do voľnej prírody koncom apríla a začiatkom októbra, keď teplota môže kolísať od -10 do + 25°C. Za týchto podmienok je nechránený > n vírus ľahko ^aktivovateľný, a tým je ohrozená účinnosť vakcíny. Z týchto dôvodov sa používajú rôzne látky, ktoré obmedzujú zníženie biologickej aktivity vírusu besnoty vo vakcíne pre orálnu imunizáciu líSok. Po zožratí návnady, v ktorej je uložená tobolka obsahujúca vakcinačný vírus s kompozíciou, dochádza k porušeniu tobolky zubami, vírus sa dostane do návnadovej látky. Hryzanlm návnadovej hmoty dochádza ku kontaminácii orálnej dutiny USky vírusom besnoty, ktorý preniká do krvného obehu. V organizme líšky dochádza k tvorbe protilátok proti vírusu besnoty, ktoré ju chránia pred ochorením. Na prípravu kompozície sa používa 0,5 až 10 9S hmotn. kryštalického kolagénu, 0,7 až 1,5 96 hmotn. 2,4,6,-Tris (dimetylaminometyl)fenolu, 0,1 až 0,8 % hmotn. glutamátu draselného, 0,1 až 1,8 9S hmotn. kyseliny etyléndiaminotetraoctovej, 2 až 10 9S hmotn. zvieracieho inaktivovaného séra bez protilátok vírusu besnoty v destilovanej vode. Zloženie sa mieša s vakcinačným vírusom v pomere 1 diel vírusu s 0,5 až 2 dielmi zloženia.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Príklad 1

Kompozícia Ba pripraví z nasledujúcich zložiek :

kryštalický kolagén 200,0

2,4,6-Tris(dimetylaminometyl)fenol 100,0 glutamát draselný 50,0 kyselina etyléndiaminotetraoctová 60,0 bovínne sérum inaktivované 400,0 destilovaná voda ad 10 000,0

Po rozpustení zložiek sa upraví pH na 7,6 až 7,9 a urobí sa sterilizácia roztoku filtráciou. Bezprostredne pred plnením sa zmieša 1 diel kompozície s 1 dielom vírusu besnoty. Zmes sa rozplní, zamrazí a obalí návnadovou látkou.

Príklad 2

Roztok kryštalického kolagénu 12 *

Roztok 2,4,6-Tris(dimetylaminometyl)fenolu 5% Roztok glutamátu draselného 9 X Roztok kyseliny etyléndiaminotetraoctovej Q% Konské sérum inaktivované

5	000	ml
2	000	ml
	900	ml
2	000	ml
	100	ml

Na prípravu roztoku sa použije deionizovaná sterilná apyrogénna voda. Po rozpustení jednotlivých zložiek sa tieto postupne zmieSajú, zmes sa inaktivuje 2 hodiny pri 58°C a upraví sa pH na 7,6 až 7,9. Kompozícia sa vychladí. Vychladená kompozícia sa zmieSa v pomere 1,3 dielov vírusu a 1 diel kompozície.

Príklad 3

Roztok kryštalického kolagénu 2%

Roztok 2,4, 6-Tris (dimety laminometyl) fenolu 485 Roztok glutamátu draselného 6 %

Roztok kyseliny etyléndiaminotetraoctovej 5% Konské sérum inaktivované

5	000	ml
2	000	ml
	900	ml
2	000	ml
1	000	ml

Na prípravu roztoku sa použije deionizovaná sterilná apyrogénna voda. Po rozpustení jednotlivých zložiek sa tieto postupne zmiešajú a pH sa upraví na 7,6 až 7,9. Kompozícia sa vychladí a zmieša v pomere 2 diely vírusu a 1 diel kompozície.

Priemyselná využiteľnosť

Priaznivý vplyv kompozície na titer vírusu besnoty pri teplote 5°C sa prejavil znížením poklesu titra vírusu 100-krát. Výsledky sú v nasledujúcej tabuľke. Na zaistenie 100 % ochrany líšok je treba, aby bol vo vakcinačnéj dávke minimálny titer 10⁵»⁹/ml (Lawson F.K. a iní, 1989, Can. J. Vet. Res. 53, 438 - 444).

Vplyv kompozície na titer vírusu počas skladovania

Doba skla- dova- nia	Vírus s kompozíciou titer vírusu logioPFU v ml	Vírus bez kompozície titer vírusu locrioPFU v ml skladovacia teplota
skladovacia	teplota
	-20° C	+5° C	+ 20° C	-20°C	+ 5° C	+ 20® C
□	7,3	7,3	7,3	7,3	7,3	7,3
4dni	7,4	7,1	6, 8	7,3	6,8	6,5
7dní	-	7,0	6,2	-	6,0	5,5
lOdní	7,0	6,5	6,0	7,0	5,0	4,0
14dní	7,3	6,0	5,5	7,3	4,0	3,0
lmes.	7,0	-	-	7,3	-	-
3mes.	7,0	-	-	6,5	-	-
6mes.	7,0	—	—	6,0	—	—

Pokles titra počas skladovania pri teplote -60°C.

Doba skladovania pri -60°C v mesiacoch	0	2	3	4	5	7	8
ziBtený titer	7,4	7,5	7,1	7,0	6,9	6,9	6,7

Po prvom kladení vakcíny na orálnu imunizáciu líšok proti besnote bol dokázaný tetracyklín (marker) v kostiach u 79 % vyšetrovaných líšok. U týchto líšok boli protilátky dokázané v 84 % prípadoch. Distribúcia hladín protilátok podľa titrov alebo podľa počtu medzinárodných jednotiek (I.U.) v 1 ml ukazuje na dobré prežívanie vírusu vo vakcíne, a tým na dobrú protilátkovú odpoveď po požití návnady. Výsledky sú v nasledujúcej tabuľke.

Zistený titer protilátok	20	60	180	520
Priemerný titer protilátok I.U. v ml	1,3	2,1	2,7	3,5
X zvierat s daným titrom protilátok	54	36	8	2

€

Claims (1)

1. PATENTOVÉ

   NÁROKY

   7> V

   Kompozícia na ochranu vírusu besnoty, vyznačujúca sa t Ý m, že obsahuje 0,5 až 10 hmotn. 96 kryštalického kolagénu, 0,7 až 1,5 hmotn. X 2,4,6,-Tris(dimetylaminomety1)íenolu, 0,1 až 0,6 hmotn. % glutamátu draselného, 0,1 až 1,8 hmotn. 96 kyseliny etyléndiaminotetraoctove j, 2 až 10 hmotn. 96 hmotn. zvieracieho inaktivovaného séra bez protilátok proti vírusu besnoty v destilovanej vode.