SK278719B6 - Kompozícia na ochranu vírusu besnoty - Google Patents

Description

Oblasť techniky

Vynález sa týka kompozície na ochranu vírusu besnoty na výrobu vakcíny proti besnote na orálnu iminizáciu líšok. Orálne aplikované vakcíny sú úspešne používané na tlmenie besnoty v populácii voľne žijúcich zvierat. Imunita líšok proti besnote obmedzuje šírenie vírusu besnoty v líščej populácii, a tým bráni šíreniu nákazy na iné zvieratá. Líšky sa podieľajú 95% na všetkých prípadoch výskytu besnoty u zvierat. Zlepšenie nákazovej situácie u líšok znižuje riziko infekcie človeka. Redukcia počtu potrebných vakcinácií ľudí vedie ku zníženiu nákladov a počtu postvakcinačných reakcií u ľudí, ktoré sú po použití vakcín besnoty známe.

Doterajší stav techniky

Na zaistenie účinnej orálnej imunizácie líšok je potrebné zabrániť poklesu vírusu besnoty vo vakcíne, ktorá je položená do voľnej prírody. Vakcína je predstavovaná plastikovou kapsulou naplnenou vakcinačným vírusom s ochranným médiom, zakrytou hliníkovou fóliou. Kapsula s vírusom je obalená vhodonou návnadovou látkou, ktorá je pre líšky atraktívna. Pri požieraní dôjde k prehiyznutiu plastikovej kapsuly a k výtoku vakcinačného vírusu do sústa návnadovej látky, ktorá kontaminuje ústnu dutinu vírusom, ktorý prenikne do krvného obehu a vedie k vytvoreniu imunity. Vyrobená vakcína sa skladuje v zamrazenom stave pri teplote -20 až -30 °C. Vakcinácia sa vykonáva tak, že vakcína sa kladie do prírody v množstve 16 dávok vakcíny na km². Cieľom je dosiahnuť čo najvyšší počet imúnnych líšok, čo sa dosahuje dvojnásobnou vakcináciou v priebehu kalendárneho roka. Prvý termín vakcinácie je koncom apríla, druhý začiatkom októbra. V týchto ročných obdobiach sa teploty spravidla pohybujú od 0 do 20 °C. Pri týchto klimatických podmienkach je potrebné zaistiť minimálny pokles titra vo vakcíne, a tým čo najvyššiu účinnosť vakcíny a vakcinácie. Vakcinačná dávka musí obsahovať minimálne 10⁷, °PFU (povlakotvomých jednotiek) v 1 ml. Na dosiahnutie uvedených parametrov je nutné vírus vo vakcíne vhodným spôsobom stabilizovať. Na stabilizáciu možno použiť rôzne látky.

Na stabilizáciu vírusu besnoty je použiteľný čistený kazeínový hydrolyzát (Baer g. m., Winkler e. g., US patent 4 014 991 z 29. 3. 1977, Int. Cl², A61K 39/28).

Použitie hydrolyzovanej želatíny a sorbitu s koncentráciou 3,57 % vedie k ochrane vírusových antigénov (Abitz W., Morf D.. DE 28 16 349 Al z 14. 4. 1978, Int. Cl², A61K 39/16).

Zmes hydrolyzovanej želatíny, disacharidov, L-glutámovej kyselina a L-arginínu chráni vírusové suspenzie (Mc Aleer W. J., Markus H. Z., US patent 4 338 335 z 30. 7. 1980, Int. Cl³, A 61K 39/12), Mc Aller W. J., Markus H. Z„ EP 0 028 563 z 28. 10. 1980, Int. Cl³, A 61K 39/121).

Tris pufer v koncentrácii 0,03 až 0,08 M stabilizuje vírusovú suspenziu (Blades J. E., EP 0 049 296 Al z 2.10.1982, Int. Cl³, A 61K 39/205).

Vírus besnoty vo vakcíne na orálnu imunizáciu líšok je možné stabilizovať pridaním 5 až 10 % vaječného žĺtka (Steck F., EP 0 100 752 Al z 2. 8. 1983 Int. Cl³, A 61K 39/205) alebo zmesou 10 % vaječného žĺtka s bovínnym sérovým albumínom (Schneider L. G., DE 35 26 889 Al z 26. 7. 1985, Int. Cl³, A 61K 39/205).

Cieľom riešenia bolo pripraviť vhodnú kompozíciu na ochranu vírusu besnoty na orálnu vakcináciu líšok, ktorá zaistí jeho ochranu pri dlhodobom skladovaní pri teplotách -20 až -30 °C a po vyložení vakcíny pre líšky pri teplotách od -5 do 20 °C počas 14 dní.

Podstata vynálezu

Podstata vynálezu spočíva v tom, že kompozície ob10 sahujúce kryštalický kolagén, 2,4,6-tris (dimetylaminometyl) fenol, glutamát draselný, kyselinu etyléndiaminotetraoctovú, zvieracie inaktivované sérum bez protilátok proti vírusu besnoty v destilovanej vode pri styku s vakcinačným vírusom besnoty bránia strate jeho biolo15 gickej aktivity. Krátkodobo pri teplote -5 °C až + 20 °C alebo dlhodobo pri teplote -20 °C až -60 °C. Biologická aktivita vírusu besnoty je rozhodujúca pre zaistenie vakcinačného efektu u voľne žijúcich líšok. Vakcína uložená v návnadovej látke sa kladie do voľnej prírody kon20 com apríla a začiatkom októbra, keď teplota môže kolísať od -10 do + 25 °C. Za týchto podmienok je nechránený vírus ľahko inaktivovateľný, a tým je ohrozená účinnosť vakcíny. Preto sa používajú rôzne látky, ktoré obmedzujú zníženie biologickej aktivity vírusu besnoty 25 vo vakcíne na orálnu imunizáciu líšok. Po zožratí návnady, v ktorej je uložená tobolka obsahujúca vakcinačný vírus s kompozíciou, dochádza k porušeniu tobolky zubami, vírus sa dostane do návnadovej látky. Hryzením návnadovej hmoty dochádza ku kontaminácii orálnej 30 dutiny líšky vírusom besnoty, ktorý preniká do krvného obehu. V organizme líšky dochádza k tvorbe pritilátok proti vírusu besnoty, ktoré ju chránia pred ochorením. Na prípravu kompozície sa používa 0,5 až 10 % hmotn. kryštalického kolagénu, 0,7 až 1,5 % hmotn. 2,4,635 -tris (dimetylaminometyl) fenolu, 0,1 až 0,8 % hmotn. glutamátu draselného, 0,1 až 1,8 % hmotn. kyseliny etyléndiaminotetraoctovej, 2 až 10 % hmotn. zvieracieho inaktivovaného séra bez protilátok vírusu besnoty v destilovanej vode. Zloženie sa mieša s vakcinačným víru40 som v pomere 1 diel vírusu s 0,5 až 2 dielmi zloženia.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Príklad 1

Kompozícia sa pripraví z nasledujúcich zložiek:

kryštalický kolagén	200,0 g
2,4,6-tris (dimetylaminometyl) fenol	100,0 g
glutamát draselný	50,0 g
50 kyselina etyléndiaminotetraoctová	60,0 g
bovínne sérum inaktivované	400,0 g
destilovaná voda ad	10 000,0 g
Po rozpustení zložiek sa upraví pH na 7,6 až 7,9 a
urobí sa sterilizácia roztoku filtráciou. Bezprostredne
55 pred plnením sa zmieša 1 diel kompozície s 1 dielom ví-
rusu besnoty. Zmes sa plní, zamrazí a	obalí návnadovou
látkou.

Príklad 2

Roztok kryštalického kolagénu 12 % 5 000 ml

Roztok 2,4,6-tris (dimetylaminometyljfenolu 5% 2 000 ml Roztok glutamátu draselného 9 % 900 ml

Roztok kyseliny etyléndiaminotetraoctovej 8 % 2 000 ml Konské sérum inaktivované 100 ml

Na prípravu roztoku sa použije deionizovaná sterilná apyrogén navoda. Po rozpustení jednotlivých zložiek sa

II U11; I tieto postupne zmiešajú, zmes sa inaktivuje 2 hodiny pri 58 °C a upraví sa pH na 7,6 až 7,9. Kompozícia sa vychladí. Vychladená kompozícia sa zmieša v pomere 1,3 dielov vírusu a 1 diel kompozície.

Príklad 3

Roztok kryštalického kolagénu 2 % 5 000 ml

Roztok 2,4,6-tris (dimetylaminometyl) fenolu 4 % 2 000 ml Roztok glutamátu draselného 6 % 900 ml

Roztok kyseliny etyléndiaminotetraoctovej 5 % 2 000 ml

Konské sérum inaktivované 1 000 ml

Na prípravu roztoku sa použije deionizovaná sterilná apyrogénna voda. Po rozpustení jednotlivých zložiek sa tieto postupne zmiešajú a pH sa upraví na 7,6 až 7,9. Kompozícia sa vychladí a zmieša v pomere 2 diely vírusu a 1 diel kompozície.

% kryštalického kolagénu, 0,7 až 1,5 hmotn. % 2,4,6-tris (dimetylaminometyl) fenolu, 0,1 až 0,8 hmotn. % glutamátu draselného, 0,1 až 1,8 hmotn. % kyseliny etyléndiaminotetraoctovej, 2 až 10 hmotn. % zvieracieho 5 inaktivovaného séra bez protilátok proti vírusu besnoty v destilovanej vode.

______________________

Koniec dokumentu

Priemyselná využiteľnosť

Priaznivý vplyv kompozície na titer vírusu besnoty pri teplote 5 °C sa prejavil znížením poklesu titra vírusu 100-krát. Výsledky sú v nasledujúcej tabuľke. Na zaistenie 100 % ochrany líšok je treba, aby bol vo vakcinačnej dávke minimálny titer 10^5,9/ml (Lawson F. K. a iní, 1989, 25

Can. J.Vet. Res. 53, 438 - 444).

Vplyv kompozície na titer vírusu počas skladovania

DOM skladovania	Vírus e kompozíciou Liter vírusu lociePFU v ml skladovacia teplota	Vírus bez kcoipozície titer vírusu v mi skladovacia teplota
-20°C	4SOC	4200C	-20°C	+5OC	+2CPC
0	7,3	7,3	7,3	7,3	7,3	7.3
4dni	7/4	7,1	6,8	7.3	6,8	6,5
7dní	-	7.0	6,2	-	6,0	5.5
lOdnl	7,0	0,0	6,0	7,0	5,0	4,0
14dnl	7,3	6,0	5,5	7.3	4,0	3,0
lrss.	7.0	-	-	7.3	-	-
3mee.	7,0	-	-	6.5	-	-
ta···	7,0		-	6.0

Pokles titra počas skladovanie pri teplote -60 °C.

Doba skladovania pri -60®C v nwiacoch	0	2	3	4	5	7	s
zistený titer	7,4	7,5	7,1	7,0	6,9	6.9	6,7

Po prvom kladení vakcíny na orálnu imunizáciu líšok proti besnote bol dokázaný tetracyklín (marker) v kostiach u 79% vyšetrovaných líšok. U týchto líšok boli protilátky dokázané v 84 % prípadoch. Distribúcia hladín protilátok podľa titrov alebo podľa počtu medzinárodných jednotiek (I. U.) v 1 ml ukazuje na dobré prežívanie vírusu vo vakcíne, a tým na dobrú protilátkovú odpoveď po použití návnady. Výsledky sú v nasledujúcej tabuľke.

Zistený titer protilátok	20	60	190	520
Priemerný titer protilátok 1· U. v ml	1,3	2,1	2.7	3,5
k zvierat b daným tltrcn protilátok	54	36	9	2

PATENTOVÉ NÁROKY

Claims (1)

1. PATENTOVÉ NÁROKY

   Kompozícia na ochranu vírusu besnoty, vyznáčujúcasa tým, že obsahuje 0,5 až 10 hmotn.