FI57534B - Foerfarande foer foerbaettrandet av stabiliteten vid rumstemperatur hos ett oralt poliovirusvaccin av typen 1,2 eller 3 - Google Patents
Foerfarande foer foerbaettrandet av stabiliteten vid rumstemperatur hos ett oralt poliovirusvaccin av typen 1,2 eller 3 Download PDFInfo
- Publication number
- FI57534B FI57534B FI773015A FI773015A FI57534B FI 57534 B FI57534 B FI 57534B FI 773015 A FI773015 A FI 773015A FI 773015 A FI773015 A FI 773015A FI 57534 B FI57534 B FI 57534B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- cystine
- poliovirus
- tris buffer
- stabilitenen
- poliovirusvaccin
- Prior art date
Links
- 229960003067 cystine Drugs 0.000 description 36
- LEVWYRKDKASIDU-IMJSIDKUSA-N L-cystine Chemical compound [O-]C(=O)[C@@H]([NH3+])CSSC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LEVWYRKDKASIDU-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 35
- 241000991587 Enterovirus C Species 0.000 description 29
- 239000004158 L-cystine Substances 0.000 description 29
- 235000019393 L-cystine Nutrition 0.000 description 29
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 28
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 26
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 23
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 22
- 241000274177 Juniperus sabina Species 0.000 description 17
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 15
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 11
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 11
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 11
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 11
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 10
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 10
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 10
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 10
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 6
- 230000002688 persistence Effects 0.000 description 5
- 229940124867 Poliovirus vaccine Drugs 0.000 description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 4
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 4
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 4
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 4
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 4
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 4
- 241000709701 Human poliovirus 1 Species 0.000 description 3
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 3
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 3
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 3
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000709704 Human poliovirus 2 Species 0.000 description 2
- 241000709727 Human poliovirus 3 Species 0.000 description 2
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 2
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 2
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- DEXFNLNNUZKHNO-UHFFFAOYSA-N 6-[3-[4-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]piperidin-1-yl]-3-oxopropyl]-3H-1,3-benzoxazol-2-one Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)C1CCN(CC1)C(CCC1=CC2=C(NC(O2)=O)C=C1)=O DEXFNLNNUZKHNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002970 Calcium lactobionate Substances 0.000 description 1
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- 241000709661 Enterovirus Species 0.000 description 1
- 102000004407 Lactalbumin Human genes 0.000 description 1
- 108090000942 Lactalbumin Proteins 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 1
- 229940050954 calcium lactobionate Drugs 0.000 description 1
- 235000019307 calcium lactobionate Nutrition 0.000 description 1
- RHEMCSSAABKPLI-SQCCMBKESA-L calcium;(2r,3r,4r,5r)-2,3,5,6-tetrahydroxy-4-[(2s,3r,4s,5r,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxyhexanoate Chemical compound [Ca+2].[O-]C(=O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]([C@H](O)CO)O[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O.[O-]C(=O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]([C@H](O)CO)O[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O RHEMCSSAABKPLI-SQCCMBKESA-L 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 235000011089 carbon dioxide Nutrition 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000002577 cryoprotective agent Substances 0.000 description 1
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 210000001840 diploid cell Anatomy 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- JEIPFZHSYJVQDO-UHFFFAOYSA-N iron(III) oxide Inorganic materials O=[Fe]O[Fe]=O JEIPFZHSYJVQDO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 229940126578 oral vaccine Drugs 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 229910001415 sodium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- -1 sorbitol Chemical class 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 230000002123 temporal effect Effects 0.000 description 1
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 1
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/125—Picornaviridae, e.g. calicivirus
- A61K39/13—Poliovirus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/32011—Picornaviridae
- C12N2770/32611—Poliovirus
- C12N2770/32634—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
Description
1- -.---- rRl KUUUUTUSJULKAISU c n r 7 A
W (11) UTLÄGGN INGSSKRIFT 5 7 5 3 4
C (45) Γ.'t: . l ti my J r·*.:: . Ly '3 3? J'.TO
^ ^ (51) Kv.lk?/lnt.CI.3 A 61 K 39/13 SUOM I — FI N LAN D (21) P»t*nttlh»l»mu« — PMmtaiweknlni TT3015 (22) Hakemlipllvl —Anteknlngadtg 11.10.77 ^ ^ (23) AlkupUvl — Glltlgh«ud*g 11.10.77 (41) Tullut lulklMksI — Bllvlt offmtllg 30.0 5.7 8
Patentti- ]a rakUterihailitu· (44) NlhtMtolpwo* |. kuuLJulkttaun pvm._
Patant- och rcgicterstyralaan An*ek»n utiigd och uti.*krHt*n pubiic«nd 30.05.80 (32)(33)(31) Pyydetty etuoikeus —Begird prlorltet 29.11.76
Kanada(CA) 266768 (71) Connaught Laboratories Limited, 1755 Steeles Avenue West, Willovdale,
Ontario, Kanada(CA) (72) Adolf von Seefred, Sharon, Ontario, Joong Hwan Chuun, Mississauga,
Ontario, Hildegarde M. G. Macmorine, Thornhill, Ontario, Kanada(CA) (7*0 Oy Kolster Ab (5M Menetelmä tyyppiä 1, 2 tai 3 olevan oraalin poliovirusrokotteen säilyvyyden parantamiseksi huoneen lämpötilassa - Förfarande för förbättrandet av stabiliteten vid rumstemperatur hos ett oralt poliovirusvaccin av typen 1, 2 eller 3
Keksinnön kohteena on menetelmä tyyppiä 1, 2 tai 3 olevan oraalin polio-virusrokotteen säilyvyyden, parantamiseksi huoneen lämpötilassa.
Ihmisen ja eläinten suojaaminen virustauteja vastaan saadaan aikaan usein rokottamalla inaktivoiduilla antigeeneillä tai elävillä, heikennetyillä viruskannoilla. Molemmissa tapauksissa virusantigeenien on säilyttävä vahingoittumattomina, ja siitä syystä on käytettävä säilöntämenetelmiä. Käytettäessä eläviä, heikennettyjä viruskantoja, rokotteiden teho riippuu kuitenkin pelkästään siitä, pysyvätkö virukset elävinä valmistuksessa, kuljetuksessa ja varastoinnissa.
Sopivan pysyvyyden saamiseksi jotkin rokotteet on toimitettava jäädytettyinä tai lyofilisoituina tai niihin on sekoitettava aineita, jotka vähentävät tai poistavat rokoteviruksen pysymättömyyttä. Tällaisista lisäaineista mainittakoon US-patenttijulkaisussa 3 186 908 esitetty kalsiumlaktobionaatti, kanadalaisessa patenttijulkaisussa 952 U29 esitetyt fosfaattipuskurit ja US-patenttijul-kaisussa 3 128 229 esitetty MgCl^. Toisinaan käytetään hiilihydraatteja, kuten sorbitolia, monnitolia jne. varsinkin kylmäsuojäävinä aineina jäädytettäessä tai lyofilisoitaessa. Stabilointiaineina on myös käytetty sakkaroosia tai magnesium- 2 57534 kloridia, erityisesti valmisteessa Poliovirus Vaccine, Live, Oral (Sabin). Näiden aineiden käytöllä on kuitenkin tiettyjä haittoja. Sakkaroosiliuosten korkea viskositeetti tekee tuotteen käsittelyn ja lääkeannon vaikeaksi. Magnesiumkloridilla on epämiellyttävä maku, ja sen antaminen lapsille tuottaa vaikeuksia.
On myös tunnettua, että L-kystiinillä on stabiloiva vaikutus poliovirusten lämmön avulla suoritetussa inaktivoinnissa. Pohjanpelto, Virology J_5, 225-230 (I960 on osoittanut, että kystiinin vaikutusnopeus, so. aika, joka tarvitaan kystiinin liittymiseen virukseen, jota on tarkoitus suojata lämmön inaktivointia vastaan, vaihtelee eri enterovirus-tyypeillä ja -kannoilla. Ikegami et ai Jap.
J. M. Sc. & Biol. j6, 325-3^2, 1963, Jap. J. M. Sc. & Biol. 17, 13-22, 196U havaitsivat, että tämä ilmiö oli geneettisesti pysyvä luonteenomainen piirre, ja että kystiinin stabiloiva vaikutus oli riippuvainen viruksen proteiinin rakenteesta. Näiden tutkimusten tarkoituksena ei ollut kehittää stabilointiainetta näille viruksille, vaan tarkoituksena oli tutkia geneettisiä merkitsijöitä. Artikkeleissa mainitaan L-kystiinin käyttö liuotettuna 1-n kloorivetyhappoon. Ikegami (1963) (196Π) valmisti kystiini-perusliuoksensa käyttäen laimentxmena 0,05-m trispuskuria. Tätä puskuria käytetään biokemiassa yleisesti laimentimena. On kuitenkin osoittaunut, ettei näin alhaisella trispuskurin väkevyydellä ole riittävää stabiloivaa vaikutusta polioviruksiin. Pohjanpelto, Virology 15, 225-230, 1961, neutraloi L-kystiinin perusliuoksen natriumhydroksidilla. On kuitenkin osoitettu, että natriumioneilla on haitallinen vaikutus poliovirusten pysyvyyteen säilytyksessä 25°C:ssa tai sen alapuolella.
Kun ottaa huomioon, että nykyiset poliovirusrokotteet menettävät 25°C:ssa tehostaan puolet jo seitsemässä vuorokaudessa, on selvää, että pitemmän säilytys-ajan saaminen näille rokotteille on erittäin toivottu varsinkin niissä maissa, joissa terveysmääräysten mukaan tuote, jonka tiitteri on laskenut alle 50 #:n, on poistettava markkinoilta.
Keksinnön mukaan on siten havaittu, että on erityisen edullista lisätä huoneen lämpötilassa olevaan analyysinäytteeseen, josta tutkitaan mahdollisten poliovirusten läsnäolo stabiloivaksi tai säilyttäväksi aineeksi vesipitoista väliainetta, joka koostuu 0,3-1,0-m tris(hydroksimetyyli)aminometäänistä ja sisältää 100 pg/ml L-kystiiniä.
On myös havaittu, että vesipitoinen stabilointikoostumus, joka koostuu 0,3-1,0-m tris(hydroksimetyyli)aminometaanista ja sisältää noin 100 pg/ml L-kystiiniä, on erityisen sopiva stabiloimaan oraaleja poliovirusrokotteita jopa neljäksi viikoksi huoneen lämpötilassa eli 25°C:ssa, joten tällöin vältytään koko rokotepulloni sen käytöltä samalla kertaa sen lämmettyä huoneen lämpötilaan tai loppuosan hylkäämiseltä, kun vain osa rokotteesta on käytetty.
3 57534
Keksinnön mukaan on havaittu, että poliovirusrokotteen pysyvyyttä sitä säilytettäessä lämpötiloissa -70 - U C voidaan yllättäen parantaa siten, että rokote suspendoidaan vesipitoiseen stabilointiväliaineeseen, jonka pH on 6,5-8,5 edullisesti 7»0~7,5 ja joka on valmistettu noin 0,3-1,0-ra tris(hydroksi-metyyli)aminometaaniliuoksesta ja sisältää noin 100 jig/ml L-kystiiniä ja noin 0,8 mg/ml hapolla hydrolysoitua gelatiinia.
Odottamaton parantunut pysyvyys johtuu siitä, että aikaisempien menetelmien vastaisesti L-kystiinin liuottaminen ei tapahdu kloorivetyhapolla ja sitä seu-raavalla NaOH-neutraloinnilla, koska tällaisen menetelmän on havaittu aiheuttavan olennaisia häviöitä aktiivisuudessa varsinkin varastoitaessa 25°C:ssa ja sen alapuolella olevissa lämpötiloissa. L-kystiini on näin ollen liuotettava tislattuun veteen kuumentamalla lievästi paineen alaisena lämpötilan 105°C saavuttamiseksi. Kun L-kystiini on liuennut, liuos jäähdytetään 60c ^rseen ja trispuskuri lisätään jauheena ja hapolla hydrolysoitu gelatiini 10-?S:isena liuoksena. Liuos jäähdytetään ja steriloidaan suodattamalla 0,22 μβ membraani suotimellä.
On tunnettua, että L-kystiini on käytännöllisesti katsoen liukenematonta veteen, mutta sangen hyvin liukenevaa vesiliuoksiin, joiden pH on alle 2, tai aikalisiin liuoksiin, joiden pH on yli 8. Nämä pH-tasot eivät kuitenkaan sovi virusanalyysinäytteille tai poliovirusrokotteille. Stabilointiaine valmistetaan siksi edellä kuvatulla tavalla ja pH säädetään orgaanisella, myrkyttömällä puskurilla, kuten trispuskurilla, Näytteitä tai rokotteita voidaan sitten tarvittaessa säilyttää huoneen lämpötilassa. Ajanjaksona ik-Z] vrk. virushäviö on korkeintaan 50 %. Toisaalta haluttaessa säilyttää rokotetta pitemmän aikaa lämpötiloissa -70° - noin ^°C, L-kystiiniä ja tri(hydroksimetyyli)aminometaania sisältävään suspendointiväliaineeseen lisätään hapolla hydrolysoitua gelatiinia.
Keksinnön mukaisen uuden väliaineen stabiloiva ja suspendoiva vaikutus saadaan väkevyydellä noin 100 pg/ml L-kystiiniä ja noin 0,8 mg/ml hapolla hydrolysoitua gelatiinia ja 0,3~1,0-m tri(hydroksimetyyli)aminometaania. Stabiloivan suspensioväliaineen pH säädetään 6,5-8,5:een, edullisesti 7,0-7,5:een.
Esimerkkeinä poliovirusrokotteista, jotka voidaan stabiloida esillä olevan keksinnön menetelmällä, ovat elävät, heikennetyt Sabin-poliovirusrokot-teet, jotka on valmistettu seuraavista kannoista: Tyyppi 1 = (LSc, 2ab.), QVyppi 2 = (P712, CH, 2ab.) ja Tyyppi 3 = (Leon a^b). Soluviljelmät ja virus-rokotenesteet valmistetaan alalla tunnetuin menetelmin, josta seuraavassa lyhyt kuvaus: apinan raunuaissolu- tai ihmisen diploidisoluviljelmiä (WI-30) kasvatetaan soluviljelmäväliaineessa CMRL-19Ö9® (Connaught Medical Research laboratories) li 57534 jossa on lisänä härän seerumia. Viljelyväliaine poistetaan parhaassa kasvussaan (yksisolukerros) ja korvataan virusympillä ja Earle'n laktalbumiinihydrolysaatti-väliaineella, jota lisätään soluviljelmän ylläpitämiseksi. Infektoituja soluviljelmiä inkuboidaan, kunnes noin 50 3»:issa soluista näkyy virusten aiheuttamaa sytopaat-tista vaikutusta.Virusnesteet otetaan talteen, ja jatkokäsittelyssä ne suodatetaan 0,1»5 μ membraanisuot imellä, niihin lisätään keksinnön mukaista stabilointiainetta ja sitten ne laimennetaan. Suspensio täytetään sitten lasipulloihin ja varastoidaan. Kaikissa rokotteen valmistusvaiheissa huolehditaan siitä, ettei rokotteeseen joudu haitallisia tai myrkyllisiä aineita. Virusnesteiden turvallisuutta, voimakkuutta ja tehoa kokeillaan valmistuksen eri vaiheissa.
Keksintöä kuvataan lähemmin seuraaviSsa esimerkeissä.
Esimerkki 1
Sabin-poliovirusnesteitä laimennettiin 1-m trispuskurilla suhteessa 1:10, ja normaalilla tavalla tapahtuvan L-kystiinilisäyksen vaikutus pysyvyyteen määritettiin sitä lisättäessä 100 pg/ml heikosti sekoittaen. Kunkin kolmen polio-virustyypin erilaisten suspensioiden virussisältö määritettiin kokeen alussa ja sitten neljän viikon välein suspensioita säilytettäessä 25°C:ssa. Tulokset osoittavat, että jokaisen kolmen Sabin-polioviruksen elävien virusten määrä oli L-kystiinilisäyksen vaikutuksesta parantunut. Samankaltaisessa kokeessa osoitettiin, että L-kystiini paransi samoin stabiliteettia, mutta tällä yhdisteellä on epämiellyttävä haju, eikä se siten sovellu lisäaineeksi oraalirokotteeseen. Tulokset nähdään taulukossa I.
Taulukko I
Kystiinin ^ stabiloiva vaikutus Sabin-polioviruksiin ^ 25°C:ssa säilytettäessä
Poliovirustyyppi L-kystiiniä Eläviä viruksia Areina 25°C:ssa Puoliintumisaika^ lisätty' (viikkoja) (vrk)
0 2 U
1 - 100 19 5 10 + 100 59 25 17 2 - 100 20 5 10 + 100 55 17 16 3 - 100 U5 6 11 + 100 72 16 19 1) 100 pg/ml L-kystiiniä 2) Laimennu3aine 0,1-m trispuskuri 3) Vuorokausien lukumäärä virusten 50-Ji:iseen inaktivoitumiseen
Esimerkki 2 5 57534
Sabin-polioviruksen (tyyppi 1) nestettä suspendoitiin 1-m trispuskuriin, jossa oli 100 pg/ml L-kystiiniä. pH säädettiin tasoille 6,4, 7,4 ja 8,5, ja virusten pysyvyys määritettiin näillä kolmella pH-tasolla 4°C:ssa neljän kuukauden aikana. Koe vahvisti aikaisemmat tulokset, että pH ei vaikuta Sabin-poliovirusten inak-tivoitumiseen pH-alueella 6,8 - 8,5. Tulokset nähdään taulukossa II.
Taulukko II
pH:n vaikutus Sabin-poliovirustyypin 1 pysyvyyteen säilytettäessä 4°C:ssa käyttäen stabilointiin 1-m trispuskuria +100 pg/ml L-kystiiniä
Suspension Eläviä viruksia %:eina 4°C:ssa (kuukausia) pH 0124 6.4 1 00 79 74 47 7.4 100 89 - 66 8.5 100 83 74 25
Esimerkki 3
Kolmella poliovirustyypillä suoritettiin neljän viikon aikana säilytyskoe 25°C:ssa, jolloin virukset olivat suspendoituina eri väkevyisiin trispuskuriliuoksiin, joissa lisänä oli 100 pg/ml L-kystiiniä. Osoittautui, ettei trispuskurin väkevyys 0,1-m ollut riittävän korkea, vaan riittävä virusten pysyvyys saatiin tris-puskuriväkevyyksillä 0,3 - 1,0-m. Koska 1-m trispuskuri on jossain määrin kitkeränmakuinen, valittiin alempi väkevyys stabilointival-misteen standardiksi. Saattaa kuitenkin olla edullista joissakin olosuhteissa käyttää korkeampaa trispuskuriväkevyyttä. Tulokset nähdään taulukossa III.
6 57534
Taulukko III
Trispuskurin + 100 pg/ml L-kystiinin erilaisten väkevyyksien vaikutus Sabin-poliovirusten pysyvyyteen säilytyksessä 25°C:ssa
Poliovirus- Trispuskurin Eläviä viruksia %:eina 25°C:ssa (viikkoja) tyyppi molaarisuus 02 4 0,1 100 40 3 1 0,3 100 32 16 1.0 100 40 23 0,1 100 36 6 2 0,3 100 58 45 1.0 100 40 32 0,1 1 00 70 7 3 0,3 100 100 56 1 ,0 1 00 79 50
Esimerkki 4
Kutakin kolmea oraalia Sabin-virustyyppiä suspendoitiin sta-bilointiväliaineeseen, joka oli valmistettu 0,3-m trispuskurista ja sisälsi 100 pg/ml L-kystiiniä. Puoleen määrään kutakin valmistetta lisättiin n. 8 mg/ml hapolla hydrolysoitua gelatiinia. Kumpaakin erää säilytettiin -20°C:ssa, ja virusten pysyvyys määritettiin neljän ja kuuden kuukauden kuluttua. Tulokset on esitetty taulukossa IV. Niistä voidaan nähdä, että kuuden kuukauden varastoinnin jälkeen elävien virusten suhde rokotteissa, jotka sisälsivät trispuskuria, L-kystiiniä ja hapolla hydrolysoitua gelatiinia, oli 100 %.
7 57534
Taulukko IV
Gelatiinilisäyksen vaikutus Sabin-poliovirusten pysyvyyteen trispuskuri-kystiiniväliaineessa säilytyksessä -20°C:ssa
Poliovirus- 0,08 % ge- Eläviä viruksia %:eina -20°C:ssa (kuukanc^i tyyppi latiinia n 4 1 ) u 4 6 _lisätty_______ - 100 56 jjg 1 + Ί00 - 100 1 00 56 ~7ä 2 + 100 - 100 100 40 40 3 + 100 - 100 1) Laimennin: 0,3-m trispuskuri +100 pg/ml L-kystiiniä Esimerkki 5
Kutakin kolmea oraalia Sabin-poliovirustyyppiä suspendoi-tiin stabilointiväliaineeseen, joka oli valmistettu 0,3-m tris-puskurista ja sisälsi 100 ug/ml L-kystiiniä ja 0,4 mg/ml hapolla hydrolysoitua gelatiinia. Vastaavasti suspendoitiin kolme oraalia Sabin-poliovirustyyppiä tislattuun veteen. Kumpaakin erää säilytettiin 25°C:ssa ja säilyvyyskokeet suoritettiin kerran viikossa neljän viikon aikana. Tulokset on esitetty taulukossa V, ja ne osoittavat, että keksinnön mukaista stabilointiväliainetta käytettäessä pysyvyys oli selvästi parantunut.
57534 1) 8
Taulukko V
Vertailukoe stabilointiaineen ja tislatun veden vaikutuksesta elävien poliovirusten määrään säilytyksessä 25°C:ssa
Poliovi- Laimennin Eläviä viruksia %:eina 25°C:ssa rustyyp- __iikkoja) ___ • 0 12 3 4
Ho0 100 71 24 17 5
1 L
Stabilointiaine 100 69 47 20 13 H90 100 54 37 1 3 10 2 1
Stabilointiaine 100 72 72 36 23
Ho0 100 74 30 22 7 3 1
Stabilointiaine 100 100 69 32 44
Huom.: 1) Stabilointiaine = 100 pg/ml L-kystiiniä, 0,08 % gelatiinia, 0,3-m trispuskuria, pH 7,4
Esimerkki 6
Kutakin kolmea oraalia Sabin-poliovirustyyppiä suspendoi-tiin stabilointiväliaineeseen, joka oli valmistettu 0,3-m tris-puskurista ja sisälsi 100 pg/ml L-kystiiniä ja 0,8 ffig/ml hapolla hydrolysoitua gelatiinia. Stabiloituja poliovirusrokotteita säilytettiin 4°C:ssa, ja kustakin näytteestä määritettiin pysyvyys kerran kuukaudessa kuuden kuukauden aikana. Tulokset nähdään taulukossa VI, ja niistä ilmenee, että häviö oli alle 50 %.
Taulukko VI
Stabilointiaineen vaikutus elävien Sabin-poliovirusten määrään säilytyksessä 4°C:ssa
Poliovirus- Eläviä viruksia %:eina 4°C:ssa (kuukausia) tyyppi__0__1__2__4__6_ 1 1 00 1 00 1 00 74 53 2 1 00 1 00 1 00 83 74 3 100 100 - 100 50
Esimerkki 7 9 57534
Valmistettiin useampia eriä oraalla poliovirusrokotetta esimerkin 6 mukaisesti. Näille rokotteille suoritettiin viiden ja kymmenen jäädytys-sulatus-syklin sarja, ja sen jälkeen määritettiin titterit, joista ilmeni, etteivät rokotteet olleet menettäneet lainkaan tehoa. Tulokset nähdään taulukossa VII.
Taulukko VII
Stabilointiaineen vaikutus elävien poliovirusten määrään jäädytys-sulatus -käsittelyjen jälkeen
Poliovirus- _Eläviä viruksia, %_ tyyppi__0__5__10 sykliä 1 100 100 100 2 100 100 100 3 100 100 100
1) Jäädytys-sulatus -syklien määrä Jäädytys: kuivajää + asetoni Sulatus: vesihaude, 25°C
Esimerkki 8
Yksi erä Sabin-poliovirusrokotetta (tyyppi 1) stabiloitiin väliaineella, joka sisälsi 100 pg/ml L-kystiiniä liuotettuna tarvittavaan määrään NaOH ja HC1. Toisessa erässä L-kystiini (100 pg/ml) liuotettiin kiehuvaan veteen. Molempia eriä säilytettiin 25°C:ssa ja niiden titteri määritettiin kahden ja neljän viikon kuluttua. Tulokset nähdään taulukossa VIII.
Taulukko VIII
NaOH:n vaikutus Sabin-polioviruksen (tyyppi 1) pysyvyyteen
Kystiini liuotettu Eläviä viruksia %:eina 25°C:ssa (viikkoja) __0__2__M_ HC1 + NaOH 100 13 3
Kiehuvaan veteen 100 59 25
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CA266,768A CA1067406A (en) | 1976-11-29 | 1976-11-29 | Stabilized oral poliovaccine and stabilizing medium therefor |
| CA266768 | 1976-11-29 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI773015A7 FI773015A7 (fi) | 1978-05-30 |
| FI57534B true FI57534B (fi) | 1980-05-30 |
| FI57534C FI57534C (fi) | 1980-09-10 |
Family
ID=4107389
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI773015A FI57534C (fi) | 1976-11-29 | 1977-10-11 | Foerfarande foer foerbaettrandet av stabiliteten vid rumstemperatur hos ett oralt poliovirusvaccin av typen 1, 2 eller 3 |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| AT (1) | AT351161B (fi) |
| BE (1) | BE861265A (fi) |
| CA (1) | CA1067406A (fi) |
| DE (2) | DE2747662A1 (fi) |
| DK (1) | DK145175C (fi) |
| FI (1) | FI57534C (fi) |
| FR (1) | FR2371927A1 (fi) |
| NL (1) | NL7713087A (fi) |
| NO (1) | NO773378L (fi) |
| SE (1) | SE426440B (fi) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4252792A (en) | 1979-09-21 | 1981-02-24 | Douglas Industries, Inc. | Injectable rabies vaccine composition and method for preparing same |
| EP0049296B1 (en) * | 1980-10-02 | 1985-03-27 | Schering Corporation | Injectable rabies vaccine composition and method for preparing same |
| NL8102740A (nl) * | 1981-06-05 | 1983-01-03 | Nederlanden Staat | Virusvaccins en werkwijze ter bereiding daarvan. |
| US5360736A (en) * | 1992-06-04 | 1994-11-01 | Merck & Co., Inc. | Process for attenuated varicella zoster virus vaccine production |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| BE665076A (fi) * | 1963-12-23 | 1965-12-08 |
-
1976
- 1976-11-29 CA CA266,768A patent/CA1067406A/en not_active Expired
-
1977
- 1977-10-04 NO NO773378A patent/NO773378L/no unknown
- 1977-10-11 FI FI773015A patent/FI57534C/fi not_active IP Right Cessation
- 1977-10-24 DE DE19772747662 patent/DE2747662A1/de active Pending
- 1977-11-03 SE SE7712473A patent/SE426440B/xx not_active IP Right Cessation
- 1977-11-25 DE DE2752725A patent/DE2752725C2/de not_active Expired
- 1977-11-28 AT AT850077A patent/AT351161B/de not_active IP Right Cessation
- 1977-11-28 DK DK526477A patent/DK145175C/da active
- 1977-11-28 NL NL7713087A patent/NL7713087A/xx not_active Application Discontinuation
- 1977-11-28 BE BE182976A patent/BE861265A/xx not_active IP Right Cessation
- 1977-11-29 FR FR7735923A patent/FR2371927A1/fr active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FR2371927B1 (fi) | 1981-06-19 |
| DE2752725A1 (de) | 1978-06-15 |
| SE7712473L (sv) | 1978-05-30 |
| DK145175B (da) | 1982-09-27 |
| NL7713087A (nl) | 1978-05-31 |
| DE2747662A1 (de) | 1978-06-01 |
| FI57534C (fi) | 1980-09-10 |
| FR2371927A1 (en) | 1978-06-23 |
| ATA850077A (de) | 1978-12-15 |
| FI773015A7 (fi) | 1978-05-30 |
| AT351161B (de) | 1979-07-10 |
| DE2752725C2 (de) | 1987-02-12 |
| DK526477A (da) | 1978-05-30 |
| CA1067406A (en) | 1979-12-04 |
| NO773378L (no) | 1978-05-30 |
| BE861265A (fr) | 1978-03-16 |
| SE426440B (sv) | 1983-01-24 |
| DK145175C (da) | 1983-02-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR100702086B1 (ko) | 동결 건조된 감독 ａ형 간염의 생 백신 및 그의 안정화제 | |
| AU726630B2 (en) | Stabilizers for live vaccines | |
| CA1333562C (en) | Preservation of viruses | |
| KR910009346B1 (ko) | 안정화된 생 비루스 백신 및 그의 제조방법 | |
| NZ203878A (en) | Mammalian blood plasma free of living hepatitis b and non-a,non-b viruses | |
| JPS5832827A (ja) | ワクチンの安定化剤 | |
| Avila et al. | Protection of junín virus‐infected marmosets by passive administration of immune serum: Association with late neurologic signs | |
| FI57534B (fi) | Foerfarande foer foerbaettrandet av stabiliteten vid rumstemperatur hos ett oralt poliovirusvaccin av typen 1,2 eller 3 | |
| JPH06234659A (ja) | 安定化生ワクチン | |
| Habili et al. | Comparative studies on tomato aspermy and cucumber mosaic viruses: II. Virus stability | |
| US6982088B2 (en) | Vaccine composition and stabilization method using high molecular weight PVP | |
| MXPA05008695A (es) | Estabilizacion de composiciones virales. | |
| KR102544928B1 (ko) | 아미노산을 유효성분으로 함유하는 동물용 백신 또는 진단용 항원의 안정성 증진용 조성물 및 이의 용도 | |
| US3186908A (en) | Calcium lactobionate stabilization of labile antigenic virus vaccine materials | |
| JP4707811B2 (ja) | 脱水ストレス保護剤 | |
| AU597709B2 (en) | Vaccines for fowl colibacillosis | |
| DE68904131T2 (de) | Schweinenierenzellkultur und ihre verwendung fuer die herstellung von vakzinen. | |
| Berge et al. | Preservation of enteroviruses by freeze-drying | |
| GB1564998A (en) | Vaccine and stabilizing solution therefor | |
| Michalski et al. | Thermal inactivation of rabies and other rhabdoviruses: stabilization by the chelating agent ethylenediaminetetraacetic acid at physiological temperatures | |
| Allen et al. | Preservation of viruses of the psittacosis-lymphogranuloma venerum group and herpes simplex under various conditions of storage | |
| Noguchi | Further studies on the properties of pure vaccine virus cultivated in vivo | |
| US4004974A (en) | Live virus culture vaccine against carnivore distemper and method of producing same | |
| Christoffersen et al. | The toxicity of meningopneumonitis organisms (Chlamydia psittaci) at different stages of development | |
| WO2015032302A1 (zh) | 卵黏蛋白液体制剂及其制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM | Patent lapsed | ||
| MM | Patent lapsed |
Owner name: CONNAUGHT LABORATORIES LIMITED |