SK285286B6 - Peptidy s antineoplastickým účinkom, ich prípravaa použitie - Google Patents

Peptidy s antineoplastickým účinkom, ich prípravaa použitie Download PDF

Info

Publication number
SK285286B6
SK285286B6 SK767-98A SK76798A SK285286B6 SK 285286 B6 SK285286 B6 SK 285286B6 SK 76798 A SK76798 A SK 76798A SK 285286 B6 SK285286 B6 SK 285286B6
Authority
SK
Slovakia
Prior art keywords
nhch
nhc
pro
xab pro
xaa
Prior art date
Application number
SK767-98A
Other languages
English (en)
Other versions
SK76798A3 (en
Inventor
Wilhelm Amberg
Teresa Barlozzari
Harald Bernard
Ernst Buschmann
Andreas Haupt
Hans-Guenther Hege
Bernd Janssen
Andreas Kling
Helmut Lietz
Kurt Ritter
Martina Ullrich
J�Rgen Weymann
Thomas Zierke
Original Assignee
Abbott Gmbh & Co. Kg
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Abbott Gmbh & Co. Kg filed Critical Abbott Gmbh & Co. Kg
Publication of SK76798A3 publication Critical patent/SK76798A3/sk
Publication of SK285286B6 publication Critical patent/SK285286B6/sk

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/08—Peptides having 5 to 11 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/10—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length using coupling agents

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

Sú opísané peptidy všeobecného vzorca (Ia), ktorémajú antineoplastický účinok, ich príprava a použitie.

Description

Oblasť techniky
Vynález sa týka peptidov a ich derivátov so zlepšeným terapeutickým využitím na liečenie neoplastických ochorení a spôsobu ich prípravy.
Doterajší stav techniky
Zlúčeniny podľa vynálezu ponúkajú zlepšené terapeutické využitie na liečenie neoplastických ochorení v porovnaní s dolastatinom -10 a -15 (americké patenty US 4 879 276 a US 4 816 444) a zlúčeninami opísanými vo svetovom patente WO 93/23424. V DE 4415997 A1 je opísaný derivát dolastatínu Me2Val-Val-MeVal-Pro-Pro-NH(CH2Ph), ktorý vykazuje určitú antineoplastickú aktivitu.
Podstata vynálezu
Zlúčeniny podľa vynálezu zahrnujú peptidy všeobecného vzorca (I) r‘r2n-chx-co-a-b-d-e-k (I), v ktorom znamená
R1 metyl, R2 metyl,
A valylový zvyšok, B N-metylvalylový zvyšok, D prolylový zvyšok E prolylový zvyšok,
X izopropyl,
K -NI IQCHaK -NHCHtt^CHjjCHCCHjL -NHCH(CH3)C(CH3)5, -N(CH3)OCH2CH3, -N(CH3)OCH2CH2CH3, -N(CH3jOCH(CH3)2, -N(CH3)O(CH2)3CH3, -N(CH3)OCH2CsH5, -NHCjCH^CôHj, -NHC/CH^CHjCHj, -NHQCHjXCHjČHjL -NHCHfCHÍCHjjjb -NHQCH^CN, -NHCH/CII,)CH(OH)C(H;„ -NH-QCH3)2CH=CH2, -NHQCHjXCíH-NHqCHjCHjjCílk-NHQCHjjsCHjCHPH, -NHC(CH3)2CH(CH3)2, -NHC(CH3)2CH2CH2CH3, -NHQCHjjjCHÍéH,, -N(OCH,)CH(CH,h, -N(OCH3)CH2CH3, -N(OCHj)CH2CH2CH3, -N(OC11,)CH;C,,H5, -N(OCH3)C6H5, -N(CH3)OC6H5, -N(OCH3)CH2CH2CH2CH3;
alebo K je -NHCH(C2H5)2, -NHCH(C2H5)CH(CH3)2, -NHCH(CH3)CH(CH3)2,
-NHC(CH3)2C2H5, -NHC(CH3)2CH(CH3)2, NHCH(C3H7)2, NHCH(C2H5)C3H7, NHCH(CH3)2, -NHCH(CH3)C2H5, -NH-cyklohexyl, -NH-cykloheptyl,
alebo K je h3c H3CyA> b K. h3c
'o . M θ ~\_7° _N_/ \
H3Cm hV> HN HM' i · 1 h_9H3 /N“CH3 ’ COS'H2 h’c>o ---U · HN^ , h h' í*3
H.ÚO zn-|-co~nh-ch2 ch2-ch: ch3
a ich soli s fyziologicky prijateľnými kyselinami.
Uvedené zlúčeniny vzorca (I) korešpondujú s peptidmi vzorca (la) (CHjhN-CHtCHtCHjht-CO-ivaljit-fN-metyl-valyiXprolylXprolylt-Ktla), kde K je definované.
Výhodné zlúčeniny vzorca (I) alebo (la) sú tie, kde K predstavuje:
-NH-alkyl, -NH-cykloalkyl, -alkyl-N-alkyl, pričom v týchto zvyškoch jedna CH2 skupina môže byť nahradená atómom kyslíka, jeden atóm vodíka fenylom, alebo jeden alebo dva atómy vodíka fluórom, s výnimkou N-metoxy-N-metylaminového, N-benzylamínového alebo N-metyl-N-benzylamínového zvyšku, alebo K predstavuje
CH, CH, CH> CH,
Predovšetkým výhodne K znamená:
NHCH(CH3)2, -NHCH(CH3)CH2CH3, -NHCH (CH2CH3)2j NHCH(CH2CH2CH3)2, -NHC(CH3)3j
NHCH(CH2CH3)CH2CH2CH3,-NHCH(CH3)CH(CH3)2,
NHCH(CH2CH3)CH(CH3)2, -NHCH(CH3)C(CH3)3,
NH-cyklohexyl, -NH-cykloheptyl,
N(CH3)OCH2CH3, -N(CH3)OCH2CH2CH3,
N(CH3)OCH(CH3) 2,
N(OCH3)CH(CH3)2, -N(CH3)OCH2C6H5,
NHC(CH3)2C6H5, -NHC(CH3)2CH2CH3,
NHC(CH3)(CH2CH3)2,-NHCH(CH3)CH(OH)CČH5,
NHC(CH3)2CH2CH2OH,
NHC(CHj)2CH(CH3)2, -NHC(CH3)CH=CH2,
NHC(CH3)2CN, -NHC(CH3)2CCH, -N(OCH3)C6H5,
NHCH[CH(CH3)J2, -N(OCH3)CH2C6H5,
N(OCH3)CH2CH3,
N(OCH3)CH2CH2CHj, -N(OCH3)CH2CH2CH2CH3,
CH,
CH, CH,
- NM-Ιζ] , -ΝηΧ^Ζ* , -NH — NH
—NH
Tento vynález poskytuje spôsoby prípravy zlúčenín vzorca (1) alebo (la), farmaceutické kompozície obsahujúce takéto zlúčeniny spolu s farmaceutický prijateľnými nosičmi a spôsoby ich použitia na liečenie rakoviny u cicavcov.
Zlúčeniny môžu byť vo forme solí s fyziologicky prijateľnými kyselinami, ako sú: kyselina chlorovodíková, kyselina citrónová, kyselina karbolová, kyselina mliečna, kyselina fosforečná, kyselina metánsulfónová, kyselina octová, kyselina mravčia, kyselina maleínová, kyselina fumárová, kyselina jablčná, kyselina jantárová, kyselina malónová, kyselina sírová, kyselina L-glutámová, kyselina L-aspartová, kyselina pyrohroznová, kyselina slížová, kyselina benzoová, kyselina glukuronová, kyselina šťaveľová, kyselina askorbová a acetylglycin.
Zlúčeniny sa môžu pripraviť známymi metódami chémie peptidov. Peptidy sa môžu sekvenčne zostavovať z aminokyselín alebo viazaním vhodných malých fragmentov peptidov. Pri sekvenčnom zostavovaní, počnúc C koncom, sa peptidový reťazec po krokoch rozširuje vždy o jednu aminokyselinu. Pri kopulácii fragmentov je možné viazať dovedna fragmenty rozličnej dĺžky a naopak, fragment sa dá získať sekvenčným zostavením z aminokyselín alebo z fragmentov pomocou kopulácie fragmentov.
V obidvoch prípadoch, pri sekvenčnom zostavovaní a pri kopulácii fragmentov, je potrebné viazať jednotky vytvorením amidovej väzby. Na tento účel sú vhodne enzymatické a chemické metódy.
Chemické metódy na tvorbu amidovej väzby podrobne opísali Muller, Methoden der organischen Chemie, Vol. XV/2, str. 1 až 364, Thieme Verlag, Stuttgart, 1974; Stewart, Zoung, Solid Phase Peptide Synthesis, str. 31 a6 34, 71 až 82, Pierce Chemical Company, Rockford, 1984; Bodansky, Klausner, Ondetti, Peptide Synthesis, str. 85 až 128, John Wiley & Sons, New York, 1976; The Practice of Peptide Synthesis, M. Bodanszky, A. Bodanszky, SpringerVerlag, 1994 a ďalšie štandardné práce chémie peptidov. Za predovšetkým výhodnú sa považuje azidová metóda, symetrická a zmesová anhydridová metóda, in situ generované alebo transformované aktívne estery, použitie uretánom chránených N-karboxyanhydridov aminokyselín a tvorba amidovej väzby použitím kopulačných reagentov, predovšetkým, ako je dicyklohexylkarbodiimid (DCC), diizopropylkarbodiimid (DIC), l-etoxykarbonyl-2-etoxy-l,2-dihydrochinolín (EEDQ), pivaloylchlorid, hydrochlorid 1-etyl-3-(3-dimetylaminopropyl)karbodiimidu (EDCI), anhydrid kyseliny n-propánfosfónovej (PPA), N,N-bis(2-oxo-3-oxazolidinyl)-amidofosforylchlorid (BOP-C1), bromotris-pyrolidinofosfónium hexafluórfosfát (PyBrop), difenylfosforylazid (DPPA), Castrovo činidlo (BOP, PyBop), soli O-benzotriazolyl-N,N,N',N'-tetrametyluróma (HBTU), soli O-azabenzotriazolyl-N,N,N',N'-tetrametylurónia (HATU), dietylfosforylkyanid (DEPCN), 2,5-difenyl-2,3-dihydro-3-oxo-4-hydroxytioféndioxid (Steglichovo činidlo; HOTDO) a l,ľ-karbonyldiimidazol (CDI). Kopulačné činidlá sa môžu použiť samotné alebo v kombinácii s prísadami, ako je N,N-dimetyl-4-aminopyridín (DMAP), N-hydroxybenzotriazol (HOBť), N-hydroxybenzotriazín (HOOBt), azabenzotriazol, N-hydroxysukcínimid (HOSu) alebo 2-hydroxypyridín.
Zatiaľ čo je vo všeobecnosti možné zaobísť sa bez ochranných skupín pri enzymatickej syntéze peptidov, pri chemickej syntéze je potrebné reverzibilné chránenie reaktívnych skupín, ktoré sa nezúčastňujú na amidovej väzbe pri oboch reaktantoch. Pri chemickej syntéze peptidov sa uprednostňujú tri zvyčajné spôsoby chránenia skupín: benzylkarbonylový (Z), terc.butoxykarbonylový (Boe) a 9-fluorenylmetoxykarbonylový (Fmoc) spôsob.
V každom prípade sa určí ochranná skupina na alfaamino skupine jednotky predlžovaného reťazca. Podrobnejší prehľad aminokyselinových ochranných skupín uvádza Muller, Methoden der organischen Chemie, Vol XV/1, str. 20 až 906, Thieme Verlag, Stuttgart, 1974. Jednotky použité pri zostavovaní peptidového reťazca sa môžu nechať reagovať v roztoku, v suspenzii alebo podobným spôsobom, ako opísal Merrifield v J. Amer. Chem. Soc. 85, (1963),2149.
Vhodnými rozpúšťadlami pri syntéze peptidov v roztoku sú všetky rozpúšťadlá, ktoré sú inertné pri reakčných podmienkach, predovšetkým voda, Ν,Ν-dimetylformamid (DMF), dimetylsulfoxid (DMSO), acetonitril, dichlórmetan (DCM), etylacetát, 1,4-dioxán, tetrahydrofurán (THF), N-metyl-2-pyrolidón (NMP) a zmesi uvedených rozpúšťadiel.
Syntéza peptidov na polymémom nosiči sa môže uskutočňovať vo všetkých organických rozpúšťadlách, v ktorých sú použité deriváty aminokyselín rozpustné. Ale, vhodné rozpúšťadlá majú navyše vlastnosti napučiavania živice, ako je DMF, DCM, NMP, acetonitril a DMSO, a zmesi týchto rozpúšťadiel. Po ukončení syntézy sa peptid odštiepi z polymémeho nosiča. Podmienky, pri ktorých je možné odštiepenie z rozličných typov živice, sú uvedené v literatúre. Najčastejšie používané štiepne reakcie sú katalyzované kyselinou a paládiom, predovšetkým štiepenie v kvapalnom bezvodom fluorovodíku, v bezvodej trifluórmetánsulfónovej kyseline, v zriedenej alebo koncentrovanej trifluóroctovej kyseline, paládiom katalyzované štiepenie v THF alebo v zmesi THF-DCM v prítomnosti slabej zásady, ako je morfolín alebo štiepenie v zmesiach kyselina octová/-dichlórmetán/-trifluóretanol. V závislosti od zvolených ochranných skupín, sa tieto môžu zachovať alebo tiež odštiepiť za podmienok štiepenia.
Čiastočné odstránenie chrániacej skupiny z peptidu môže byť tiež užitočné, ak sa majú uskutočniť určité derivatizačné reakcie.
Peptidy, dialkylované na N-konci, sa môžu pripraviť alebo kopuláciou na vhodné Ν,Ν-dialkylaminokyseliny v roztoku alebo na polymémy nosič, redukčnou alkyláciou živicovo viazaného peptidu v DMF/1 % kyseline octovej s NaCNBHj a vhodnými aldehydmi, hydrogenáciou peptidu v roztoku v prítomnosti aldehydu alebo ketónu a Pd/C.
Rozličné v prírode sa nevyskytujúce aminokyseliny, ako aj rozličné neaminokyselinové časti uvedené v tomto vynáleze, sa môžu získať z komerčných zdrojov alebo syntetizovať z komerčne dostupných materiálov s použitím spôsobov známych z doterajšieho stavu techniky. Napríklad, aminokyseliny tvoriace bloky s časťami R1 a R2 sa môžu pripraviť podľa E. Wiinscha, Houben-Weyl, Methoden der organischen Chemie, Bánd XV, 1, str. 306 a nasl., Thieme Verlag, Stuttgart, 1974 a tam citovanej literatúry.
Zlúčeniny podľa tohto vynálezu sa môžu použiť na inhibíciu alebo iný spôsob ošetrenia tuhých nádorov (napríklad nádorov pľúc, prsníka, hrubého čreva, prostaty, močového mechúra, konečníka alebo endometriálnych nádorov) alebo hematologického zhubného bujnenia (napríklad leukémie, lymfómu) podávaním zlúčenín cicavcovi.
Špecifickou výhodou nových zlúčenín je, že sú veľmi rezistentné proti enzymatickej degradácii a môžu sa podávať tiež orálne.
Podávanie sa môže uskutočňovať akýmikoľvek prostriedkami, ktoré sú bežné pre farmaceutické, predovšetkým onkologické, činidlá, vrátane orálnych a parenterálnych prostriedkov, ako je subkutánne, intravenózne, intramuskuláme a intraperitoneálne.
Zlúčeniny sa môžu podávať samotné alebo vo forme farmaceutických kompozícií obsahujúcich zlúčeninu vzorca (I) spolu s farmaceutický prijateľným nosičom vhodným na uvažovaný spôsob podávania. Takéto farmaceutické kompozície môžu byť kombinovanými prípravkami, to znamená, že môžu tiež obsahovať ďalšie terapeuticky účinné zložky.
Dávka, ktorá sa má podávať cicavcovi, obsahuje účinné, nádor inhibujúce, množstvo účinnej zložky, ktoré bude závisieť od zvyčajných faktorov zahrnujúcich biologickú účinnosť jednotlivej použitej zlúčeniny; spôsob podávania; vek, zdravotný stav a telesnú hmotnosť príjemcu; povahu a rozsah symptómov; frekvenciu liečby; podávanie iných terapií; a požadovaný účinok. Typická denná dávka predstavuje asi 0,05 až 50 miligramov na kilogram telesnej hmotnosti pri orálnom podaní a približne 0,01 až 20 miligramov na kilogram telesnej hmotnosti pri parenterálnom podaní.
Nové zlúčeniny sa môžu podávať vo zvyčajných pevných alebo kvapalných farmaceutických formách podávania, napríklad nepoťahované alebo poťahované tablety, kapsuly, prášky, granuly, čapíky alebo roztoky. Tieto sa vyrábajú bežným spôsobom. Účinne látky sa na tento účel môžu spracovať s bežnými farmaceutickými prísadami, ako sú spájadlá tabliet, plnidlá, ochranné činidlá, dezintegrátory tabliet, regulátory toku, plastifikátory, zmáčadlá, dispergačné činidlá, emulzifikačné činidlá, rozpúšťadlá, kompozície s predĺženým uvoľňovaním, antioxidanty a/alebo hnacie plyny (porovnaj H. Sucker a kol.,: Pharmaceutische Technológie, Thieme-Verlag, Stuttgart, 1978). Formy podávania získané týmto spôsobom bežne obsahujú I až 90 % hmotnostných účinnej látky.
Nasledujúce príklady slúžia na ilustráciu vynálezu. Proteinogénne aminokyseliny sú v príkladoch skrátené s použitím známeho trojpísmenového kódu. Ďalšie použité skratky:
Me2Val = Ν,Ν-dimetylvalin, MeVal = N-metylvalín.
Príklady uskutočnenia vynálezu
A. Všeobecné postupy
I. Peptidy nárokované v nároku 1 sa syntetizovali alebo klasickou syntézou v roztoku s použitím Z- a Boc-metodológie, ako je opísané, alebo štandardnými spôsobmi syntézy v pevnej fáze s použitím techník Boe a Fmoc ochranných skupín.
V prípade syntézy v pevnej fáze sa N,N-dialkylpentaalebo hexapeptid kyseliny uvoľnili z pevného nosiča a ďalej sa kopulovali so zodpovedajúcimi C-koncovými amínmi v roztoku. BOP-C1 a PyBrop sa použili ako reakčné činidlá na kopuláciu aminokyseliny po N-metylaminokyselinách. Reakčné časy sa zodpovedajúco zvýšili. Na redukčnú alkyláciu N-konca sa z peptidu viazaného na živicu odstránila ochranná skupina z N konca a potom sa nechala reagovať s 3-násobným molámym nadbytkom aldehydu alebo ketónu v DMF/1 % kyseliny octovej s prídavkom troch ekvivalentov NaCNBH3. Po ukončení reakcie (negatívny Kaiserov test) sa živica niekoľkokrát premyla vodou, izopropanolom, DMF a dichlórmetánom.
Pri syntéze v roztoku použitie buď Boc-chránených NCA aminokyselín (anhydridy N-terc.butyloxykarbonylamino-N-karboxykyseliny), Z-chránených NCA aminokyselín (anhydridy N-benzyloxykarbonylamino-N-karboxykyseliny), alebo použitie pivaloylchloridu ako kondenzačného činidla je najvýhodnejšie na kopuláciu aminokyseliny po N-metylaminokyselinách. Redukčná alkylácia N-konca sa môže dosiahnuť napríklad reakciou peptidov alebo aminokyselín s odstránenými N-koncovými skupinami so zodpovedajúcimi aldehydmi alebo ketónmi, s použitím NaCNBH3 alebo vodíka, Pd/C.
II. Čistenie a charakterizácia peptidov
Čistenie sa uskutočnilo pomocou gólovej chromatografie (SEPHADEX G-10, G-15/10 % HOAc, SEPHADEX LH20/MeOH), strednotlakovou chromatografiou (stacionárna fáza: HD-SIL C-18, 20-45 mikrónov, 100 Anstromov; mobilná fáza: gradient s A = 0,1 % TFA/MeOH, B = = 0,1 % TFA/voda) alebo preparatívnou HPLC (stacionárna fáza: Watcrs Delta-Pack C-18, 15 mikrónov, 100 Anstromov; mobilná fáza: gradient s A = 0,1 % TFA/MeOH, B = = 0,1 % TFA/voda).
Čistota výsledných produktov sa stanovila pomocou analytickej HPLC (stacionárna fáza: 100 2,1 mm VYDAC C-18, 5 1, 300 Anstromov; mobilná fáza: gradient acetonitril/-voda pufrované s 0,1 % TFA, 40 °C).
Charakterizácia sa uskutočnila pomocou analýzy aminokyselín a hmotnostnou spektroskopiou pomocou bombardovania rýchlymi atómami.
B. Špecifické metódy Príklad 1 (SEQ ID NO: 1)
Me2Val-Val-MeVal-Pro-Pro-NHCH(CH3)2
a) Z-MeVal-Pro-OMe
66,25 g (250 mmol) Z-MeVal-OH sa rozpustilo v 250 ml suchého dichlórmetánu. Po pridaní 36,41 ml (262,5 mmol) trietylamínu sa reakčná zmes ochladila na teplotu -25 °C a pridalo sa 32,27 ml (262,5 mmol) pivaloylchloridu. Po miešaní počas 2,5 hodiny sa k reakčnej zmesi pridalo 41,89 g (250 mmol) H-Pro-OMe x HCI v 250 ml dichlórmetánu, neutralizovaného so 36,41 ml (262,5 mmol) trietylamínu pri teplote 0 °C. V miešaní sa pokračovalo počas 2 hodín pri teplote - 25 °C a cez noc pri laboratórnej teplote. Reakčná zmes sa zriedila dichlórmetánom a dôkladne premyla nasýteným vodným roztokom NaHCO3 (3x), vodou (lx), 5 % kyselinou citrónovou (3x) a nasýteným roztokom chloridu sodného. Organická fáza sa vysušila nad síranom sodným a odparila do sucha. Zvyšok (91,24 g) sa nechal zmiešať s petroléterom cez noc a odfiltroval sa. Získalo sa 62,3 g produktu.
b) H-MeVal-Pro-OMe
48,9 g (130 mmol) Z-MeVal-Pro-OMe sa rozpustilo v 490 ml metanolu. Po pridaní 10,9 ml (130 mmol) koncentrovanej kyseliny chlorovodíkovej a 2,43 g 10 % paládia/aktívne uhlie sa reakčná zmes hydrogenovala. Filtrácia a odparenie do sucha poskytlo 36,43 g produktu.
c) Z-Val-MeVal-Pro-OMe
18,1 g (65 mmol) H-MeVal-Pro-OMe, 21,6 g (78 mmol) Z-Val-N-karboxyanhydridu a 22,8 ml (130 mmol) diizopropyletylamínu sa miešalo v 110 ml DMF pri teplote 40 °C počas 2 hodín. Po odparení DMF sa pridal dichlórmetán a organická fáza sa premyla nasýteným vodným roztokom NaHCO3 (3x), vodou (lx), 5 % kyselinou citrónovou (3x) a nasýteným roztokom chloridu sodného. Organická fáza sa vysušila nad síranom sodným a odparila do sucha. Produkt (29,3 g) sa získal vo forme viskózneho oleja.
d) H-Val-MeVal-Pro-OMe
29,3 g (61,6 mmol) Z-Val-MeVal-Pro-OMe sa rozpustilo v 230 ml metanolu. Po pridaní 1,15 g 10 % paládia/aktívne uhlie sa reakčná zmes hydrogenovala. Filtrácia a odparenie do sucha poskytlo 21,96 g produktu.
e) Z-Val-Val-MeVal-Pro-OMe
15,29 g (61 mmol) Z-Val-OH a 21,96 g (61 mmol) H-Val-MeVal-Pro-OMe sa rozpustilo v 610 ml dichlórmetánu a ochladilo na teplotu 0 °C. Po pridaní 8,16 ml (73,2 mmol) N-metylmorfolínu, 2,77 g (20,3 mmol) HOBt a 11,74 g (61 mmol) EDCI sa reakčná zmes nechala miešať cez noc pri laboratórnej teplote, zriedila sa dichlórmetánom a dôkladne premyla nasýteným vodným roztokom NaHCO3 (3x), vodou (lx), 5 % kyselinou citrónovou (3x) a nasýteným roztokom chloridu sodného. Organická fáza sa vysušila nad síranom sodným a odparila do sucha, čim sa získalo 31,96 g produktu.
f) Z-Val-Val-MeVal-Pro-OH
31,96 g (57 mmol) Z-Val-Val-MeVal-Pro-OMe sa rozpustilo v 250 ml metanolu. Pridalo sa 102,6 ml 1 N roztoku hydroxidu lítneho a zmes sa miešala cez noc pri laboratórnej teplote. Po pridaní 500 ml vody sa vodná fáza trikrát premyla etylacetátom, pH sa upravilo na 2 pri teplote 0 °C a zmes sa trikrát extrahovala etylacetátom. Organická fáza sa vysušila nad síranom sodným a odparila do sucha, čím sa získalo 30,62 g požadovaného produktu vo forme bielej pevnej látky.
g) Z-Val-Val-MeVal-Pro-Pro-NHCH(CH3)2 g (3,35 rnmol) Z-Val-Val-MeVal-Pro-OH a 0,664 g (3,35 mmol) H-Pro-NHCH(CH3)2 sa rozpustilo v 34 ml suchého dichlórmetánu. Po ochladení na teplotu 0 °C sa pridalo 1,35 ml (12,1 mmol) N-metylmorfolínu, 0,114 g (0,84 mmol) HOBt a 0,645 g (3,35 mmol) EDCI a reakčná zmes sa miešala cez noc pri laboratórnej teplote. Pridalo sa 80 ml dichlórmetánu a organická fáza sa dôkladne premyla nasýteným vodným roztokom NaHCO3 (3x), vodou (lx), 5 % kyselinou citrónovou (3x) a nasýteným roztokom chloridu sodného. Organická fáza sa vysušila nad síranom sodným a odparila do sucha, čim sa získalo 1,96 g produktu, ktorý sa použil bez ďalšieho čistenia v nasledujúcej reakcii.
h) Me2Val-Val-MeVal-Pro-Pro-NHCH(CH3)2
1,96 g Z-Val-Val-MeVal-Pro-Pro-NHCH(CH3)2 sa rozpustilo v 11 ml metanolu. Pridalo sa 0,054 g 10 % Pd/C pod dusíkovou atmosférou a reakčná zmes sa hydrogenovala pri laboratórnej teplote počas 4 hodín. Po pridaní 0,86 ml (11,24 mmol) 37 % vodného roztoku formaldehydu a 0,281 g 10 % Pd/C sa v hydrogenácii pokračovalo počas 5 hodín. Filtrácia a odparenie rozpúšťadla poskytlo 2,77 g surového produktu. Ďalšie čistenie sa dosiahlo rozpustením peptidu vo vode, nastavením pH na hodnotu 2 a extrakciou vodnej fázy etylacetátom (trikrát). Vodná fáza sa potom adjustovala na pH 8 až 9 a extrahovala štyrikrát dichlórmetánom. Organická fáza sa vysušila nad síranom sodným, čím sa získalo 1,37 g prečisteného produktu vo forme peny. Zlúčenina sa ďalej čistila pomocou strednotlakovej kvapalnej chromatografie (10 - 50 % A za 10 min.; 50 až 90 % A za 320 min.). Frakcie obsahujúce produkt sa spojili, lyofilizovali, opätovne rozpustili vo vode a pH sa upravilo na hodnotu 9 pomocou 1 N hydroxidu lítneho. Po extrakcii s dichlórmetánom sa organická fáza vysušila nad síranom sodným a odparila do sucha. Lyofilizácia poskytla 500 mg čistého produktu, ktorý sa charakterizoval hmotnostnou spektrometriou bombardovaním rýchlymi atómami. ([M + H]+ = 593)
Príklad 2 (SEQ ID NO: 1)
Me2Val-Val-MeVal-Pro-Pro-NHC(CH3)3
i) Z-Val-Val-MeVal-Pro-Pro-NHC(CH3)3 g (3,35 mmol) Z-Val-Val-MeVal-Pro-OH a 0,692 g (3,35 mmol) H-Pro-NHC(CH3)3 sa rozpustilo v 34 ml suchého dichlórmetánu. Po ochladení na teplotu 0 °C sa pridalo 1,35 ml (12,1 mmol) N-metylmorfolínu, 0,114 g (0,84 mmol) HOBt a 0,645 g (3,35 mmol) EDCI a reakčná zmes sa miešala cez noc pri laboratórnej teplote. Pridalo sa 80 ml dichlórmetánu a organická fáza sa dôkladne premyla nasýteným vodným roztokom NaHCO3 (3x), vodou (lx), 5 % kyselinou citrónovou (3x) a nasýteným roztokom chloridu sodného. Organická fáza sa vysušila nad síranom sodným a odparila do sucha, čím sa získalo 1,8 g produktu, ktorý sa použil bez ďalšieho čistenia v nasledujúcej reakcii.
k) Me2Val-Val-MeVal-Pro-Pro-NHC(CH3)3
1,8 g Z-Val-Val-MeVal-Pro-Pro-NHC(CH3)3 sa rozpustilo v 10 ml metanolu. Pod dusíkovou atmosférou sa pridalo 0,049 g 10 % PD/C a reakčná zmes sa hydrogenovala pri laboratórnej teplote počas 4 hodín. Po pridaní 0,86 ml (11,24 mmol) 37 % vodného roztoku formaldehydu a 0,252 g 10 % Pd/C sa v hydrogenácii pokračovalo počas ďalších 5 hodín. Filtrácia a odparenie rozpúšťadla poskytlo
1,82 g surového produktu. Zlúčenina sa ďalej čistila pomocou strednotlakovej kvapalnej chromatografie (10 - 50 % A za 10 min.; 50 až 90 % A za 320 min). Frakcie obsahujúce produkt sa spojili, lyofilizovali, opätovne rozpustili vo vode a pH sa upravilo na hodnotu 9 pomocou 1 N hydroxidu lítneho. Po extrakcii s dichlórmetánom sa organická fáza vysušila nad síranom sodným a odparila do sucha. Lyoftlizácia poskytla 547 mg čistého produktu, ktorý sa charakterizoval hmotnostnou spektrometriou s bombardovaním rýchlymi atómami.
([M + H]+ = 607)
Nasledujúce zlúčeniny sa pripravili alebo sa môžu pripraviť podľa postupov z príkladov 1 a 2:
3. Xaa Val Xab Prp Xac
4. Xaa Val Xab Pro Xad
5. Xaa Val Xab Pro Xae
6. Xaa Val Xab Pro Xaf Ί. Xaa Val Xab Pro Xag
8. Xaa Val Xab Pro Xah
9. Xaa Val Xab Pro Xai
10. Xaa Val Xab Pro Xak
11. Xaa Val Xab Pro Xal
12. Xaa Val Xab Pro Xam
13. Xaa Val Xab Pro Xan
14. Xaa Val Xab Pro Xao
15. Xaa Val Xab Pro Xap
16. Xaa Val Xab Pro Xaq
17. Xaa Val Xab Pro Xar
18. Xaa Val Xab Pro Xas
19. Xaa Val Xab Pro Xat
20. Xaa Val Xab Pro Xau
21. Xaa Val Xab Pro Xav
22. Xaa Val Xab Pro Xaw
23. Xaa Val Xab Pro Xax
24. XddValXabProXay
25. Xaa Val Xab Pro Xaz
26. Xaa Val Xab Pro Xba
27. Xaa Val XabProXbb
28. Xaa Val Xbc Pro Xay
29. Xaa Val Xab Pro Xbd
30. Xaa Val XabProXbe
31. Xaa Val Xab Pro Xbf
32. Xaa Val XabProXbg
33. Xaa Val XabProXbh
34. Xaa Val Xab Pro Xbi
35. Xaa Val XabProXbk
36. Xaa Val XabProXbl
37. Xaa Val Xab Pro Xbm
38. Xaa Val Xab Pro Xbn
39. Xaa Val Xab Pro Xbo
40. Xaa Val Xab Pro Xbp
41. Xaa Val Xab Pro Xbq
42. Xaa Val Xab Pro Xbr
43. Xaa Val Xab Pro Xbs
44. Xaa Val Xab Pro Xbt
45. Xaa Val XabProXbu
46. Xaa Val Xab Pro Xbv
47. Xaa Val Xab Pro Xbw
48. Xaa Val Xab Pro Xbx
49. Xaa Val XabProXby
50. Xaa Val Xab Pro Xbz
51. Xaa Val Xab Pro Xca
52. Xaa Val Xab Pro Xcb
53. Xaa Val Xab Pro Xcc
54. Xaa Val Xab Pro Xcd
55. Xaa Val Xab Pro Xce
56. Xaa Val Xab Pro Xcf 123. Xab Val Xab Pro Xbf
57. Xaa Xdf Xab Pro Xay 124. Xab Val XabProXbm
58. Xaa Val Xab Pro Xch 125. Xab Val Xab Pro Xbn
59. Xaa Val Xab Pro Xci 126. Xab Val Xab Pro Xbo
60. Xaa Val Xab Pro Xck 127. Xab Val Xab Pro Xch
61. Xaa Val Xab Pro Xcl 12 8. Xaa Val Xab Pro Xdt
62. Xaa Val Xab Pro Xcm 129. Xaa Val Xab Pro Xdu
63. Xaa Val Xab Pro Xcn 13 0. Xaa Val XabProXdv
64. Xaa Val Xab Pro Xco 131. Xaa Val Xab Pro Xdw
65. Xaa Val Xab Pro Xcp 132. Xaa Val Xab Pro Xdx
66. Xaa Val Xab Pro Xcq 133. Xaa Val Xab Pro Xdy
67. Xaa Val Xab Pro Xcr 134, Xaa Val Xab Pro Xdz
68. Xaa Val Xab Pro Xcs 135. Xaa Val Xab Pro Xea
69. Xaa Val Xab Pro Xct 136. Xaa Val XabProXeb
70. Xaa Val Xab Pro Xcu 137. Xaa Val Xab Pro Xec
71. Xcw Val Xab Pro Xcv 138. Xaa Val Xab Pro Xed
72. Xcx Val Xab Pro Xcv 139. Xaa Val Xab Pro Xef
73. Xaa Val Xab Pro Pro Xcy 140, Xaa Val Xab Pro Xeg
74. Xaa Val Xab Pro Pro Xcz 141, Xaa Val Xab Pro Xch
75. Xaa Val Xda Pro Xcv 142. Xaa Val Xab Pro Xei
76. Xaa Xdb Xab Pro Xcv 143. Xaa Val Xab Pro Xek
77. Xde Val Xab Pro Xcv 144, Xaa Val Xab Pro Xel
78. Xaa íle Xab Pro Xcv 145. Xaa Val Xab Pro Xem
79. Xdd Val Xab Pro Xcv 146. Xaa Val Xab Pro Xen
80. Xde Val Xab Pro Xcv 147. Xaa Val Xab Pro Xeo
81. Xaa Xdf Xab Pro Xcv 148. Xaa Val Xab Pro Xep
82. Xaa Val Xab Pro Xcg 149. Xaa Val Xab Pro Xeq
83. Xaa Val Xab Pro Pro Xdg 150. Xaa Val Xab Pro Xer
84. Xaa Val Xab Pro Pro Xdh 151. Xaa Val Xab Pro Xcg
85. Xaa Val Xab Pro Pro Xdi
86. Xaa Val Xab Pro Pro Xdk Príklady charakterizácie pomocou hmotnostnej spek-
87. Xaa Val Xdl Pro Xcv trometrie syntetizovaných nových zlúčenín sú uvedené v
88. Xde Val Xab Pro Xay nasledujúcej tabuľke.
89. Xaa Val Xdl Pro Xay
90. Xaa Val Xab Pro Xdm Analýza pomocou hmotnostnej spektromet-
91. Xaa Val Xab Pro Xdn Príklad [č.] rie s bombardovaním rýchlymi atómami
92. Xaa Val Xab Pro Xdo [mol. hmotnosť (merané)]
93. Xaa Val Xab Pro Xdp 3. 565
94. Xaa Val Xab Pro Xdq 4. 579
95. Xaa Val Xab Pro Pro Xdr 5. 593
96. Xaa Val Xab Pro Xds 6. 607
97. Xaa Val Xbc Pro Xcv 7. 621
98. Xaa íle Xab Pro Xay 8. 635
99. Xcw Val Xab Pro Xay 11. 607
100. Xaa Val Xbc Pro Xal 12. 607
101. Xaa Val Xdl Pro Xal 13. 621
102. Xaa Xdf Xab Pro Xal 14. 649
103. Xaa íle Xab Pro Xal 15. 635
104. Xdd Val Xab Pro Xal 16. 635
105. Xde Val Xab Pro Xal 17. 635
106. Xcx Val Xab Pro Xcy 18. 635
107. Xcw Val Xab Pro Xal 19. 621
108. Xcx Val Xab Pro Xal 20. 621
109. Xcw Val Xab Pro Xav 21. 635
110. Xcx Val Xab Pro Xav 22. 635
111. Xcw Val Xab Pro Xaw 25. 633
112. Xcx Val Xab Pro Xaw 26. 647
113. Xab Val Xab Pro Xay 27. 661
114. Xab Val Xab Pro Xcv 31. 623
115. Xab Val Xab Pro Xal 32. 671
116. Xab Val Xab Pro Xam 33. 667
117. Xab Val Xab Pro Xan 34. 681
118. Xab Val Xab Pro Xao 35. 655
119. Xab Val Xab Pro Xav 36. 655
120. Xab Val Xab Pro Xaw 37. 669
121. Xab Val Xab Pro Xat 38. 621
122. Xab Val Xab Pro Xau 39. 635
Analýza pomocou hmotnostnej spektromet-
Príklad [č.] rie s bombardovaním rýchlymi atómami
[mol. hmotnosť (merané)]
41. 649
42. 621
43. 633
44. 667
45. 607
46. 647
47. 668
48. 655
49. 669
50. 685
51. 629
52. 625
53. 721
55. 579
58. 623
61. 597
62. 621
63. 609
64. 625
65. 635
66. 591
67. 715
68. 685
69. 685
70. 591
71. 607
72. 621
74. 706
75. 579
76. 579
77. 579
78. 607
79. 607
80. 607
81. 607
82. 637
83. 692
84. 706
85. 706
86. 706
87. 607
90. 635
92. 659
93. 617
94. 636
95. 678
128. 671
131. 625
139. 625
151. 637
Tabuľka I
Identifikácia sekvencií zlúčenín pripravených podľa príkla-
dov 1 a 2
Číslo zlúčeniny Číslo sekvencie ID
1-56,58-72,75,77,79j 80,82 1
87-94,96,97,99-101,104-151
73,74, 83-86, 95 2
57, 76, 81, 102 3
78, 98, 103 4
Symboly Xaa majú v súhrne nasledujúce významy:
Xaa:
Xab:
Xac:
Xad:
N,N-dimetylvalín
N-metylvalín
O
O
Xci:
Xcn:
Xco:
Xck:
Xcl:
Xcm:
Xcp:
Xcq:
Xcr:
Xcs:
Xct:
Xcw: Xcx:
Xcy:
Xcz:
Xcu:
Xcv:
N-metyl-N-etyl-valín
N,N-diétylvalín
O ch3
-A”
CHj
Xda: N-metyl-2-aminobutyroyl
Xdb: 2-aminobutyroyl
Xdc: N,N-dimetyl-2-aminobutyroyl
Xdd: N,N-dimetyl-2-terc.butylglicín
Xde: N,N-dimetyl-izoleucín
Xdf: 2-terc.butylglicín
Xdg:
Xdh:
Xdi:
Xdk:
Xdl:
Xdm:
0 CHj CRj
HjcAx-CKj
N-metyl-2-terc.butylglicín
Xdn:
Xdo:
Xdp:
Xdq:
Xdr:
Xds:
Xdt:
Xdu:
Xdv:
Xdw:
Xdx:
O
Xei:
Xel:
Xep:
Xeg:
Xch:
Cl
o
Xek:
Xem:
Xen:
Cl o CH3
Xeo:
o cx r
Cl
Xeq:
CHj
Zlúčeniny podľa tohto vynálezu sa môžu hodnotiť na protirakovinovú aktivitu zvyčajnými metódami, ktoré zahrnujú napríklad opísané metódy.
A. Metodológia in vitro
Cytotoxicita sa merala pomocou štandardnej metodológie pre prilípavé bunkové línie ako vzorka mikrokultúry tetrazolium (MTT). Podrobnosti týchto skúšok sú publikované (Alley, MC a kol., Cancer Research 48, 589 - 601, 1988). Exponenciálny rast kultúr nádorových buniek, ako je karcinóm hrubého čreva HT-29 alebo pľúcny nádor LX-1, sa použili na prípravu mikrotitračných doštičkových kultúr. Bunky sa naočkovali pri 3000 buniek na jamku do 96 jamkových platničiek (v 150 μΙ média) a nechali sa rásť cez noc pri teplote 37 °C. Pridali sa testované zlúčeniny, v 10-násobnom zriedení v rozsahu od 104 do 10'10. Bunky sa potom inkubovali počas 72 hodín. Na stanovenie počtu životaschopných buniek v každej jamke sa pridalo MTT farbivo (50 μΐ roztoku obsahujúceho 3 mg/ml 3-(4,5-dimetyltiazol-2-yl)-2,5-difenyltetrazoliumbromidu v soľanke). Táto zmes sa inkubovala pri teplote 37 °C počas 5 hodín a potom sa do každej jamky pridalo 50 μΐ 25 % SDS, pH 2. Po inkubácii cez noc sa merala absorbancia pri 550 nm s použitím ELISA testu. Hodnoty pre priemerné údaje +/- SD sa vypočítali z replikačných jamiek, s použitím vzorca % T/C (% životaschopných ošetrených buniek/kontrola).
OD ošetrených buniek -------------------- x 100 = % T/C
OD kontrolných buniek
Koncentrácia testovanej zlúčeniny, ktorá poskytla T/C 50 % inhibície rastu sa označila ako hodnota IC50.
B. Metodológia in vivo
Zlúčeniny podľa tohto vynálezu sa ďalej testovali v predklinických štúdiách na in vivo aktivitu, ktorá je ukazovateľom klinickej využiteľnosti. Takéto skúšky sa uskutočňovali s holými myšami, do ktorých sa transplantovali (xenotransplantovali) nádorové tkanivá, predovšetkým humánneho pôvodu, ako je v tejto oblasti dobre známe. Testované zlúčeniny sa vyhodnotili na protinádorovú účinnosť po podaní myšiam nesúcim xenotransplantát.
Špecifickejšie, ľudské nádory prsníka (MX-1), ktoré rástli na nahých myšiach sa transplantovali do nových príjemcov myší, s použitím nádorových fragmentov, ktoré mali veľkosť asi 50 mg. Deň transplantácie sa označil ako deň 0. O šesť až desať dní neskôr sa myši ošetrovali testovanými zlúčeninami podávanými vo forme intravenóznych injekcií alebo orálne, v skupinách po 5 až 10 myší pre každú dávku. Zlúčeniny sa podávali každý druhý deň, počas troch týždňov, v dávkach od 1 do 200 mg/kg telesnej hmotnosti.
Priemer nádorov a telesná hmotnosť sa merali dvakrát týždenne. Objem nádorov sa vypočítal použitím nameraných priemerov s Vemierovými kaliprami a pomocou vzorca (dĺžka x šírka2)/2 = mm3 objemu nádoru.
Priemerné objemy nádorov sa vypočítali pre každú ošetrovanú skupinu a hodnoty T/C sa stanovili pre každú skupinu vzhľadom na nádory neošetrenej kontroly.
Nové zlúčeniny vykazujú dobré nádory inhibujúce vlastnosti.
Tabuľka 1
Príklad číslo K % metabolizmu
1 h 2h 4h
2 2
11 12
12 10
13 NHCH(C2H5)2 8
14 NHCH(C3H7)2 7
15 NHCH(C2H5)C3H7 5
16 NHCH(C2Hj)C3H7 6
17 NHCH(C2H5)CH(CH3)2 3
16 NHCH(C2H5)CH(CH,)2 1
19 NHCH(CH,)CH(CH,), 8
20 NHCH(CH3)CH(CH3)2 8
21 NHCH(CH3)C(CH3)3 1
22 NHCH(CH3)C(CH3)3 5*
25 NH-cyklohexyl 14
26 NH-cykloheptyl 8
31 N(CH3)OC3H7 1
37 NHC(CH3)2Ph 0
38 NHC(CH3)2C2H6 1
39 NHC(CH3)(C2H5)2 1
41 NHCH[CH(CH3)2]2 1
52 NHC(CH3)3 4
53 NH adamant-l-yl 4
60 1 4*
62 Morfolino 3*
82 NHC(CH3)2CH2CH2OH 1
83 NHCH(CH3)2 4
90 NHC(CH3)2CH(CH3)2 1
92 2 1
93 NHC(CH3)2CCH 15
95 NHC(CH3)2CONHCjH7 4
Príklad číslo K % metabolizmu
1 h 2h 4h
128 N(OCH3)CH2Ph 1
132 NHC(CH3)2C2H5 0
129 NH( 1 -metyl-1 -cyklopentyl) 5*
130 NH(1 -metyl-1 -cyklohexyl) 0
* = po 24 hodinách
Porovnávacie príklady
Príklad číslo K % metabolizmu
1 h 2h 4h
A NHCH2Ph 33 70
B NH(CH2)3CH3 14 25 46
C NH(CH2)4CH3 14 22 50
D NH(CH2)sCH3 12 22 44
Podmienky testu
100 μ\ 1,3 μΐ zásobného roztoku komerčne dostupného enzýmu (prolyloligopeptidáza, CN) sa pridalo do 1 ml 0,1 M fosfátového tlmivého roztoku (pH 7) a 250 μ! 910 μΜ zásobného roztoku zlúčeniny pri 37 °C. V rôznych časoch sa odobrali malé vzorky, neutralizovali sa 0,3 % vodnou TFA a analyzovali sa analytickou HPLC.
Zoznam skratiek
Z benzyloxykarbonyl
Boe /-butoxykarbonyl
Fmoc N-alfa-(9-fluorenylmetyloxykarbonyl)
EDCI l-etyl-3-(3’-dimetylaminopropyl)karbodiimid hydrochlorid
DCC 1,3-dicyklohexylkarbodiimid
DIC N,N’-diizopropylkarbodiimid
EEDQ etyl 2-etoxy-1,2-dihydro-1 -chinolinkarboxylát
PPA cyklický anhydrid kyseliny 1-propánfosforitej
ΒΟΡ-Cl chlorid kyseliny bis(2-oxo-3-oxozonilidyl)fosforitej
PyBrop bróm-tris-pyrolidino-fosfóniumhexafluórfosfát
BOP benzotriazol-l-yloxytris(dimetylamino)fosfónium hexafluórfosfát
PyBop l-benzotriazolyoxytris(pyrolidino)fosfónium hexafluórfosfát
DPPA kyselina dipalmitoylfosfatidová
HBTU 2-( 1 H-benzotriazol-1 -yl)-1,1,3,3-tetrametylurónium hexafluórfosfát
HATU 0-(7-azabenzotriazol-lyl)-l,l ,3,3-tetrametylurónium hexafluórfosfát
DEPCN dietylfosforyl kyanid
HOTDO 2,5-difenyl-2,3-dihydro-3-oxo-4-hydroxytiofén dioxid
CDI Ν,Ν'-karbonyldiimidazol
DMAP (dimetylamino)pyridín
HOBt N-hydroxybenzotriazol monohydrát
HOOBt 3,4-dihydro-3-hydroxy-4-oxo-l,2,3-benzotriazín HOSu N-hydroxysukcinimid
EDCI l-etyl-3-(3’-dimetylaminopropyl)karbodiimid hydrochlorid
HOBt N-hydroxybenzotriazol monohydrát
Pd/C paládium na uhlíku
Zoznam sekvencií (1) Všeobecné informácie (i) Prihlasovateľ:
(A) BASF Aktiengesellschaft (B) Ulica: Carl-Bosch-Strasse 38 (C) Mesto: Ludwigshafen (E) Krajina: Nemecká spolková republika (F) ZIP: D-67056 (G) Telefón: 0621/6048526 (H) Telefax: 0621/6043123 (I) Telex: 1762175170 (ii) Názov vynálezu: Nové peptidy, ich príprava a použitie (í ii) Počet sekvencií: 4 (iv) Počítačom čitateľná forma:
(A) Typ média: Disketa 3,5 palcov, 2DD (B) Počítač: IBM AT-kompatibilný, 80286 procesor (C) Operačný systém: MS-DOS verzia 5,0 (D) Software: WordPerfect (2) Informácie pre SEQ ID NO: 1 (í) Charakteristiky sekvencie (A) Dĺžka: 5 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (ii) Typ molekuly: peptid (xi) Opis sekvencia: SEQ ID NO: 1:
Xaa Val Xaa Pro Xaa (2) Informácie pre SEQ ID NO: 2 (i) Charakteristiky sekvencie (A) Dĺžka: 6 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (ii) Typ molekuly: peptid (xi) Opis sekvencia: SEQ ID NO: 2:
Xaa Val Xaa Pro Pro Xaa (2) Informácie pre SEQ ID NO: 3 (i) Charakteristiky sekvencie (A) Dĺžka: 5 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (ii) Typ molekuly: peptid (xi) Opis sekvencia: SEQ ID NO: 3:
Xaa Xaa Xaa Pro Xaa (2) Informácie pre SEQ ID NO: 4 (i) Charakteristiky sekvencie (A) Dĺžka: 5 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (ii) Typ molekuly: peptid (xi) Opis sekvencia: SEQ ID NO: 4:
Xaa íle Xaa Pro Xaa

Claims (7)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Peptid všeobecného vzorca (la) (CH3)2N-CH(CH(CH3)2)-CO-(valyl)-(N-metyl-valyl)(prolyl)-(prolyl)-K (la), v ktorom
    K je -NHC(CH3)3, -NHCH(CH2CH3)CH(CH3)2, -NHCH(CH3)C(CH3)3,
    -N(CH3)OCH,CHj, -N(CH3)OCH2CH2CH3, -N(CH3)OCH(CH3)2,
    -N(CH3)O(CH2)3CH3, -N(CH3)OCH2C6H5, -NHC(CH3)2C6H5,
    -NHC(CH3)2CH2CH3, -NHC(CH3)(CH2CH3)2, -NHCH[CH(CH3)2]2,
    -NHC(CH3)2CN,-NHCH(CH3)CH(OH)C6H3, -NH-C(CH3)2CH=CH2,
    -NHC(CH3)2C CH, -ŇHC(CH2CH3)2C ch, -NHC(CH3)2CH2CH2OH,
    -NHC(CHj)2CH(CH3)2, -NHC(CH3)2CH2CH2CH3, -NHC(CH3)2CH2CóH5, -N(OCH3)CH(CH3)2, -N(OCH3)CH2CH3,
    -N(OCH3)CH2CH2CH3,-N(OCH,)CH,C6H5, -N(OCH3)C6H5,
    -N(CHj)OC6H5, -N(OCH3)CH2CH2CH2CH3, alebo K je -NHCH(C2H5)2, -NHCH(C2H5)CH(CH3)2, -NHCH(CH3)CH(CH3)2,
    -NHC(CH3)2C2H5, -NHC(CH3)2CH(CH3)2, NHCH(C3H7)2, NHCH(C2H5)C3H7, NHCH(CH3)2, -NHCH(CH3)C2H5,
    -NH-cyklohexyl, -NH-cykloheptyl, alebo K je h3c H3CtO n-O , h'?3
    N—j—co-nh-ch2 chz ch3 ch3 H’cx>
    HN V a ich soli s fyziologicky prijateľnými kyselinami.
  2. 2. Peptid podľa nároku 1, v ktorom K je -NHC(CH3)3, -NHCH(CH3)C2H5, -NHCH(C2H5)2, -NHCH(C2H5)CH(CH3)2, -NHCH(CH3)CH(CH3)2,-NHCH(CH3)C(CH3)3, -NHC(CH3)2C2H5j -NHCH[CH(CH3)2]2,-NHC(CH3)2CH(CH3)2j -NHCH(C3H7)2, -NHCH(C2H5)C3H7, -NH-cyklohexyl, -NH-cykloheptyl, -N(CH3)OC3H7, -NHC(CH3)2C6H5, -NHC(CH3)(CH2CHj)2, -NHC(CH3)2CCH, -NHC(CH3)2CH2CH2OH, -NHCH(CH3)2j -N(OCHj)CH2C6H5 alebo K je
  3. 3. Peptid podľa nároku 1, v ktorom K je -NHC(CH3)3, a ich soli s fyziologicky prijateľnými kyselinami.
  4. 4. Peptid alebo soľ podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 3 na použitie ako liečivo.
  5. 5. Farmaceutická kompozícia, vyznačujúca sa tým, že obsahuje peptid alebo soľ podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 3 spolu s farmaceutický prijateľným nosičom.
  6. 6. Použitie peptidu alebo soli podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 3 na prípravu farmaceutickej kompozície na liečenie rakoviny.
  7. 7. Spôsob prípravy peptidu alebo soli podľa ktoréhokoľvek z nárokov laž3, vyznačujúci sa tým, že zahŕňa sekvenčné zostavovanie z vhodných aminokyselín alebo ich derivátov a/alebo viazanie vhodných peptidových fragmentov syntézou v roztoku alebo tuhej fáze, za získania peptidu.
SK767-98A 1995-12-15 1996-12-11 Peptidy s antineoplastickým účinkom, ich prípravaa použitie SK285286B6 (sk)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US57342295A 1995-12-15 1995-12-15
PCT/EP1996/005518 WO1997022621A2 (en) 1995-12-15 1996-12-11 Antineoplastic peptides

Publications (2)

Publication Number Publication Date
SK76798A3 SK76798A3 (en) 1999-02-11
SK285286B6 true SK285286B6 (sk) 2006-10-05

Family

ID=24291935

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SK767-98A SK285286B6 (sk) 1995-12-15 1996-12-11 Peptidy s antineoplastickým účinkom, ich prípravaa použitie

Country Status (30)

Country Link
EP (2) EP0866800B1 (sk)
JP (1) JP3939354B2 (sk)
KR (1) KR100463739B1 (sk)
CN (1) CN1127514C (sk)
AR (1) AR004382A1 (sk)
AT (2) ATE471944T1 (sk)
AU (2) AU731458B2 (sk)
BG (1) BG64563B1 (sk)
BR (1) BR9611987A (sk)
CA (1) CA2237721C (sk)
CO (1) CO4750840A1 (sk)
CZ (1) CZ296908B6 (sk)
DE (2) DE69638206D1 (sk)
DK (1) DK0866800T3 (sk)
ES (1) ES2229287T3 (sk)
HR (1) HRP960585A2 (sk)
HU (1) HU228275B1 (sk)
IL (2) IL124342A (sk)
MX (1) MX9803953A (sk)
MY (1) MY114327A (sk)
NO (1) NO319273B1 (sk)
NZ (1) NZ324691A (sk)
PL (1) PL186721B1 (sk)
PT (1) PT866800E (sk)
RU (1) RU2182911C2 (sk)
SK (1) SK285286B6 (sk)
TR (1) TR199801102T2 (sk)
TW (1) TW474946B (sk)
WO (1) WO1997022621A2 (sk)
ZA (1) ZA9610510B (sk)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6143721A (en) 1997-07-18 2000-11-07 Basf Aktiengesellschaft Dolastatin 15 derivatives
US5985837A (en) * 1998-07-08 1999-11-16 Basf Aktiengesellschaft Dolastatin 15 derivatives
CA2360740A1 (en) 1999-03-02 2000-09-08 Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc. Compounds useful as reversible inhibitors of cathepsin s
US6420364B1 (en) 1999-09-13 2002-07-16 Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc. Compound useful as reversible inhibitors of cysteine proteases

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4879276A (en) * 1983-12-19 1989-11-07 Uniroyal Chemical Ltd./Uniroyal Chemical Ltee Method for reducing serum uric acid levels
US4816444A (en) * 1987-07-10 1989-03-28 Arizona Board Of Regents, Arizona State University Cell growth inhibitory substance
US5831002A (en) * 1992-05-20 1998-11-03 Basf Aktiengesellschaft Antitumor peptides
AU669710B2 (en) * 1992-05-20 1996-06-20 Abbott Gmbh & Co. Kg Derivatives of dolastatin
ATE196296T1 (de) * 1992-12-16 2000-09-15 Basf Ag Dolastatin analog
DE4415997A1 (de) * 1994-05-06 1995-11-09 Basf Ag Neuer peptidischer Wirkstoff und dessen Herstellung
DE4415998A1 (de) * 1994-05-06 1995-11-09 Basf Ag Neue Tetrapeptide, ihre Herstellung Verwendung
US5807984A (en) * 1995-11-09 1998-09-15 Basf Aktienegesellschaft Oligopeptides, the preparation and use thereof

Also Published As

Publication number Publication date
EP0866800B1 (en) 2004-09-22
WO1997022621A3 (en) 1998-02-26
AU2004220772B2 (en) 2008-06-12
ATE277076T1 (de) 2004-10-15
JP2000502092A (ja) 2000-02-22
CA2237721C (en) 2008-01-29
MX9803953A (es) 1998-09-30
DE69638206D1 (de) 2010-08-05
HRP960585A2 (en) 1998-02-28
DE69633457T2 (de) 2005-09-22
AU1192597A (en) 1997-07-14
BG102479A (en) 1999-06-30
SK76798A3 (en) 1999-02-11
CN1204342A (zh) 1999-01-06
DK0866800T3 (da) 2005-01-17
DE69633457D1 (de) 2004-10-28
NO982711D0 (no) 1998-06-12
AU2004220772A1 (en) 2004-11-11
ES2229287T3 (es) 2005-04-16
AU731458B2 (en) 2001-03-29
NO319273B1 (no) 2005-07-11
IL124342A0 (en) 1998-12-06
HUP0000172A3 (en) 2000-09-28
EP1593686A1 (en) 2005-11-09
CA2237721A1 (en) 1997-06-26
ZA9610510B (en) 1998-06-15
ATE471944T1 (de) 2010-07-15
EP0866800A2 (en) 1998-09-30
BG64563B1 (bg) 2005-07-29
AR004382A1 (es) 1998-11-04
CZ184698A3 (cs) 1998-09-16
PT866800E (pt) 2005-01-31
NZ324691A (en) 1999-11-29
CO4750840A1 (es) 1999-03-31
JP3939354B2 (ja) 2007-07-04
KR20000064400A (ko) 2000-11-06
IL166853A (en) 2013-03-24
PL186721B1 (pl) 2004-02-27
CN1127514C (zh) 2003-11-12
TW474946B (en) 2002-02-01
EP1593686B1 (en) 2010-06-23
CZ296908B6 (cs) 2006-07-12
KR100463739B1 (ko) 2005-02-28
WO1997022621A2 (en) 1997-06-26
HUP0000172A2 (en) 2000-07-28
TR199801102T2 (xx) 1998-12-21
HU228275B1 (en) 2013-02-28
NO982711L (no) 1998-06-12
MY114327A (en) 2002-09-30
RU2182911C2 (ru) 2002-05-27
IL124342A (en) 2005-06-19
PL327175A1 (en) 1998-11-23
BR9611987A (pt) 1999-02-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU679479B2 (en) Dolostatin analog
AU725164B2 (en) Novel dolastatin derivatives, their preparation and use
EP0642530A1 (en) Derivatives of dolastatin
IL166853A (en) Antineoplastic peptides, their preparation and various uses thereof
US8440626B2 (en) Antineoplastic peptides
AU775090B2 (en) Antineoplastic peptides
SK165497A3 (en) Peptides, preparation method thereof and pharmaceutical composition containing the same

Legal Events

Date Code Title Description
PC4A Assignment and transfer of rights

Owner name: ABBVIE DEUTSCHLAND GMBH & CO. KG, WIESBADEN, DE

Free format text: FORMER OWNER: ABBOTT GMBH & CO. KG, WIESBADEN, DE

Effective date: 20141020

MM4A Patent lapsed due to non-payment of maintenance fees

Effective date: 20141211