SK132498A3 - Pyrrolopyrrolone derivatives as inhibitors of neutrophil elastase - Google Patents

Description

Pyrolopyrolónové deriváty, spôsob ich výroby, farmaceutický prostriedok s ich obsahom, ich použitie a medziprodukty

Oblasť techniky

Vynález sa týka pyrolopyrolónových derivátov s protizápalovým účinkom, spôsobu ich výroby, medziproduktov na ich výrobu a farmaceutického prostriedku, ktorý uvedené deriváty obsahuje.

Doterajší stav techniky

Zápal je primárna odpoveď na poškodenia tkaniva alebo na napadnutie mikroorganizmami a je charakterizovaný tým, že sa leukocyty z krvného obehu začnú viazať na výstelku ciev a potom z ciev vystupujú. Ide o neutrofilné, eozinofilné a bazofilné biele krvinky, monocyty a lymfocyty. Rôzne typy zápalov sa vyznačujú rôznymi typmi leukocytov, ktoré sa príslušnej zápalovej reakcie zúčastňujú.

Zápalové pochody môžu byť vyvolané radom príčin, napríklad infekciou, poškodením tkaniva alebo autoimunitnou reakciou. Ako časť zápalového pochodu vystupujú neutrofilné leukocyty z krvného obehu do tkaniva v mieste jeho poškodenia. Tieto biele krvinky obsahujú veľké množstvo rôznych vnútrobunkových granúl, pričom pri ich aktivácii v mieste zápalov sa ich obsah vylučuje do tkaniva. Rôzne typy týchto vnútrobunkových útvarov obsahujú enzýmy a ďalšie bielkoviny, v ktorých rad má antibakteriálne vlastnosti.

Jedným z enzýmov, zistených v azurofilných granulovaných útvaroch je elastáza. Neutrofilné elastáza má v organizme široké spektrum účinnosti. Napríklad v pľúcach dochádza pôsobením tohto enzýmu k zvýšeniu produkcie hlienu a k zmene bunkového zloženia epitelu. Enzým tiež vyvoláva zmeny v priepustnosti ciev v rade tkanív a je účinnou deštrukčnou látkou pre rad zložiek spojivového tkaniva.

Aj napriek tomu, že v organizme existujú endogénne inhibítory elastázy, napríklad antitrypsín a inhibítor proteázy leukocytov, predpokladá sa, že elastáza sa zúčastňuje vzniku patologických zmien v prípade radu ochorení, vrátane

-2zápalových ochorení dýchacích ciest, kĺbov a pokožky. Enzým je taktiež príčinou niektorých · alebo väčšiny príznakov akútnej nedostatočnosti dýchacích ciest (syndróm ARDS) a ďalších akútnych stavov dýchacích ciest, spojených s poranením a/alebo sepsiou.

Teraz bolo zistené, že niektoré nové látky sú schopné vyvolať inhibíciu neutrofilnej elastázy a môžu byť teda využité pri liečení alebo na zmiernenie príznakov tých ochorení, u ktorých je elastáza pravdepodobnou príčinou ich vzniku.

Podstata vynálezu

Podstatu vynálezu tvoria pyrolopyrolónové deriváty všeobecného vzorca I

R¹

R³ kde

R¹ znamená alkyl s 1 až 6 atómami uhlíka, alkenyl s 2 až 6 atómami uhlíka, aryl, arylalkyl s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, arylalkenyl s 2 až 4 atómami uhlíka v alkenylovej časti, heteroaryl, heteroarylalkyl s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti alebo heteroarylalkenyl s 2 až 4 atómami uhlíka v alkenylovej časti alebo niektorú z uvedených skupín, v ktorých je arylová alebo heteroarylová časť substituovaná najmenej jedným substituentom zo skupiny alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka, atóm halogénu, tetrazolyl, trifluórmetylsulfónamid, NR⁹CO-alkyl s 1 až 8 atómami uhlíka, -(CH2)m-NR⁴R⁵, -CN, -COOR⁹, -CONR⁹R¹⁰, -NO2, -SO₂-alkyl s 1 až 6 atómami uhlíka, -CF₃, alkoxyskupina s 1 až 6 atómami uhlíka, -(CH₂)_n-NR⁴R⁵, alkenyl s 2 až 8 atómami uhlíka-NR⁴R⁵, -(CH2)nCONR⁴R⁵, -(CH2)_nNR⁹CO-alkyl s 1 až 6 atómami uhlíka, alkenyl s 2 až 8 atómami uhlíka-COOR⁹, -(CH₂)_nCOOR⁹ a alkenyl s 2 až 8 atómami uhlíka-COR⁴R⁵,

-3X znamená niektorú zo skupín

II alebo

-C-O“ kde karbonylová skupina je viazaná na atóm dusíka kruhu,

R² znamená alkyl alebo alkenyl vždy s 2 až 4 atómami uhlíka alebo alkoxyskupinu alebo alkyltioskupinu vždy s 1 až 3 atómami uhlíka,

R³ znamená alkyl s 1 až 6 atómami uhlíka, -CH2(CF2)0-4CF3, aryl alebo heteroaryl s jedným kruhom alebo dvoma kondenzovanými kruhmi, z ktorých jeden môže byť nasýtený, pričom arylové a heteroarylové skupiny sú prípadne substituované najmenej jedným substituentom zo skupiny alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka, atóm halogénu, -NR⁷R⁸, -SO2NR⁷R⁸, -CONR⁷R⁸, -alkylester s 1 až 6 atómami uhlíka v alkylovej časti, -CN, -CH₂OH, -O-alkyl s 1 až 6 atómami uhlíka, CF₃ alebo nitroskupina, ďalej môže R³ znamenať arylalkyl, arylalkyl-NH- vždy s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti alebo arylalkenyl s 2 až 4 atómami uhlíka v alkenylovej časti, alebo ide o skupiny, v ktorých arylová časť je substituovaná najmenej jedným substituentom zo skupiny alkyl s 1 až 4 atómami uhlíika alebo atóm halogénu,

R⁴ a R⁵ nezávisle znamenajú atóm vodíka, alkyl alebo alkoxyskupinu vždy s 1 až 4 atómami uhlíka, -(CH2)i_4CONR¹¹R¹², -CO-alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka alebo fenyl, prípadne substituovaný najmenej jedným substituentom zo skupiny alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka alebo atómom halogénu alebo môžu byť R⁴ a R⁵ spolu spojené a skupina NR⁴R⁵ potom znamená mono-, bi- alebo tricyklický systém, obsahujúci 4 až 15 atómov v kruhu, v ktorom môže byť najmenej jeden z kruhov prerušený aspoň jedným heteroatómom zo skupiny O, N a S, pričom najmenej jeden uhlíkový atóm kruhu prípadne predstavuje karbonylovú skupinu, alebo môže skupina -(CH2)_nNR⁴R⁵ znamenať skupinu vzorca 1a

-(CH₂)_rf (CH₂) (

a

(1a)

-4kde R⁶ znamená atóm vodíka, karboxy-alkylester s 1 až 6 atómami uhlíka v alkylovej časti, n¹ znamená 0 až 6 a a a b nezávisle znamenajú celé číslo 0 až 3, pričom a + b je v rozmedzí 3 až 5,

R⁷, R⁸, R⁹, R¹⁰, R¹¹ a R¹² nezávisle znamenajú atóm vodíka alebo alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka, m znamená celé číslo 0 až 8, n znamená celé číslo 1 až 9, ako aj soli a solváty týchto látok.

Vo vzorci I je znázornená relatívna stereochémia stredov chirality. Vynález preto zahrnuje zlúčeniny všeobecného vzorca I v racemickej forme aj vo formách, v ktorých jeden z enantiomérov prevažuje alebo je v čistej forme. Všeobecne sa dáva prednosť zlúčeninám všeobecného vzorca I vo forme čistých enantiomérov.

Pod pojmom “alkyl“ sa rozumejú alkylové skupiny s priamym a rozvetveným reťazcom a v prípade, že skupina obsahuje najmenej 3 atómy uhlíka, aj cykloalkylové skupiny.

V prípade, že R⁴ a R⁵ sú spojené tak, že skupina -NR⁴R⁵ znamená mono-, dialebo tricyklický kruhový systém, môže byť najmenej jeden z týchto kruhov nenasýtený alebo aromatický. Ako príklady týchto systémov je možné uviesť nenasýtené skupiny s jedným kruhom, napríklad azetidín, pyrolidín, piperidín, azepín, piperazín alebo morfolín, bicyklícké systémy, ako dihydroizochinolín, tetrahydroizochinolín, oktahydroizochinolín alebo desmetyltropán a tiež tricyklické systémy, ako hexahydrobenzoizoindol. Kruhové systémy s obsahom karbonylovej skupiny zahrnujú pyrolón (napríklad pyrol-2-όη) a oxopyridín (napríklad 2-oxo-2Hpyridín a 4-oxo-4H-pyridín). Atómy uhlíka v kruhu môžu byť substituované niektorou zo skupín alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka, CONR'R“, COOR' (kde R' a R“ nezávisle znamenajú atóm vodíka alebo alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka) alebo atómy halogénov a atómy dusíka v kruhu môžu byť substituované alkylovými skupinami s 1 až 4 atómami uhlíka alebo skupinou -CO-alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka. Zvlášť výhodnými substituentami na atómoch uhlíka sú metyl (napríklad ide o 2,5dimetylpyrolidín alebo 2,6-dimetylpiperidín), -CONH2 (napríklad 4-(H2NCO-piperidín) a COOMe (napríklad 2-(MeOCO)-pyrolidín). Vhodnými substituentami na atóme

-5dusíka sú napríklad metyl (napríklad 4-metylpiperazín) a skupina -COMe (napríklad 4-(MeCO)-piperazín).

Výhodné alkylové skupiny vo význame R⁴ a R⁵ zahrnujú metyl, etyl, n-propyl, izopropyl a cyklopropyl.

Výhodnými alkoxyskupinami v uvedenom význame sú najmä metoxyskupiny.

Výhodným významom pre skupinu -(CH2)i-4CONR¹¹R¹² je najmä -CH2CONH2.

Výhodnými -CO-alkylovými skupinami s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti vo význame R⁴ a R⁵ sú najmä skupiny -COMe.

Výhodnými alkylovými skupinami vo význame R¹ sú metyl, etyl a propyl.

Alkenylovými skupinami s 2 až 6 atómami uhlíka vo význame R¹ sú najmä skupiny CH=CH-CH₃.

Výhodné arylové skupiny vo význame R¹ obsahujú až dva kruhy. Výhodne ide o fenyl a naftyl, najvýhodnejší je fenyl.

Arylalkylové skupiny v uvedenom význame zahrnujú fenylmetyl a fenyletyl.

Arylakenylové skupiny vo význame R¹ zahrnujú najmä styryl.

Zvlášť výhodnými substituentami na arylovej skupine vo význame R¹ sú alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka, ako je metyl alebo etyl, alkoxyskupina s 1 až 6 atómami uhlíka, ako je metoxyskupina, etoxyskupina a n-butyloxyskupina, atóm halogénu, ako napríklad chlóru, brómu alebo jódu, -SO2-alkyl s 1 až 6 atómami uhlíka, ako je -SO2Me, tetrazolyl, viazaný cez atóm uhlíka, -CF3, -NO2, -CN, -(CH2)mNR⁴R⁵, ako je -NH2, -CH2NH2, -CH₂NH(cyklopropyl), -CH₂N(Me)(nPr), -CH₂(4-Me-piperazín-1-yl) a

2-oxopyrolidín-1-yl a skupina -NR⁹CO-alkyl s 1 až 8 atómami uhlíka, ako je -NHCOMe. Často obsahuje aryl 1, 2 alebo 3 takéto substituenty.

Výhodnými heteroarylovými skupinami vo význame R¹ sú skupiny, ktoré obsahujú heteroatóm síry, dusíka alebo kyslíka. Tieto skupiny môžu mať až dva kruhy. Ako príklady je možné uviesť imidazolyl, prípadne N-substituovaný alkylovou skupinou a 1 až 4 atómami uhlíka, pyridyl, furanyl, pyrolyl a tienyl.

Vhodnými heteroarylovými a heteroarylalkenylovými skupinami vo význame R¹ sú napríklad pyridylmetyl, pyridyletyl a pyridyletenyl.

Substituenty na heteroarylových skupinách vo význame R¹ môžu byť tie isté skupiny, ktoré boli vyššie opísané ako vhodné substituenty na arylových skupinách.

-6Vhodné skupiny -(CH₂)_n-NR⁴R⁵ vo význame R¹ taktiež zahrnujú tie skupiny vzorca 1a, v ktorých n¹ = 0, a = 2ab = 2 alebo n¹ = 0a = 0ab = 3. Alkylesterovými skupinami vo význame R⁶ sú najmä terc.butylové skupiny.

Vhodnými alkenyl s 2 až 6 atómami uhlíka-NR⁴R⁵-skupinami vo význame R¹ sú prevážne skupiny -CH%CH-CH2-NR⁴R. Časť NR⁴R⁵ zahrnuje morfolín, azepín, pyrolidín, prípadne substituovaný skupinou COOMe alebo metylovou skupinou, piperidín, prípadne substituovaný skupinou -CONH2 alebo metylovou skupinou, piperazín, prípadne 4-substituovaný metylovou skupinou alebo skupinou -MeCO, -NH-alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka, ako -NH-cyklopropyl a -NH(iPr), ďalej môže ísť o N(alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka)₂, ako NMe(nPr), -N(iPr)₂,-N(Et)₂, -N(Me)₂ a tiež -N-alkylalkoxyskupina s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej a s 1 až 6 atómami uhlíka v alkoxylovej časti, ako je NMe(OMe).

Vhodnou skupinou -(CH₂)_nCONR⁵R⁵ vo význame R¹ je najmä skupina -(CH₂)₂CONH₂.

Výhodné -(CH₂)_nNR⁹CO-alkylové skupiny s 1 až 6 atómami uhlíka v alkylovej časti vo význame R¹ zahrnujú skupiny -(CH₂)₂NHCOMe a -CH₂NHCOMe.

Výhodnými skupinami -(CH₂)_nCOOR⁹ vo význame R¹ sú najmä skupiny -CH₂COOH, -CH₂COOMe, -(CH₂)₂COOH a -(CH₂)₂COOMe.

Výhodnými alkenyl s 2 až 8 atómami uhlíka-COOR⁹ skupinami sú skupiny -CH=CH-COOEt a -CH=CH-COOH.

Výhodnou alkenyl s 2 až 8 atómami uhlíka-COONR⁴R⁵ skupinou je napríklad -CH=CH-CO(4-metyl-1-piperazín).

Výhodnými skupinami vo význame symbolu R¹ sú napríklad alkenyl s 2 až 8 atómami uhlíka -NR⁴R⁵, fenyl, furanyl, tiofenyl alebo pyrolyl, substituovaný skupinou (CH₂)_nNR⁴R⁵, kde n‘ znamená celé číslo 1 až 5 a fenyl, substituovaný -NHCOalkylovou skupinou s 1 až 8 atómami uhlíka. Zvlášť výhodnými skupinami vo význame R¹ sú tie z uvedených skupín, v ktorých skupina NR⁴R⁵ znamená morfolínovú, pyrolidinovú,. piperidínovú, azepínovú, piperazínovú alebo 4-metylpiperazínovú skupinu alebo v ktorej jeden zo symbolov alebo oba symboly R⁴ a R⁵ znamenajú alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka ako je metyl, n-propyl alebo cyklopropyl a druhý zo symbolov, v prípade, že neznamená alkyl, znamená atóm vodíka. S výhodou znamená n‘ celé číslo 1 až 3, najmä 1. V prípade, že R¹ znamená

-7furanyl, substituovaný -NHCO-alkylovou skupinou s 1 až 8 atómami uhlíka v alkylovej časti, je výhodnou alkylovou skupinou v tomto význame metyl.

V prípade, že R¹ znamená alkenyl-NR⁴R⁵ s 2 až 8 atómami uhlíka v alkenylovej časti, má alkenylová časť s výhodou 3 až 6 atómov uhlíka, najmä výhodnou skupinou v tomto význame ej CH=CH-CH₂-NR⁴R⁵.

Výhodnou skupinou vo význame X je -CO- a -SO₂-. Zvlášť výhodným významom pre X je skupina -CO-.

Výhodnými alkylovými skupinami vo význame R² sú etyl, n-propyl a izopropyl.

Výhodnou alkenylovou skupinou vo význame R² je napríklad skupina

-CH₂-CH=CH₂.

Výhodné alkoxyskupiny a alkyltioskupiny vo význame R² zahrnujú metoxyskupinu a metyltioskupinu.

S výhodou znamená R² alkyl s 2 až 4 atómami uhlíka, najmä n-propyl alebo izopropyl, najvýhodnejším významom pre R² je izopropyl.

Výhodné alkylové skupiny vo význame R³ zahrnujú metyl, etyl a propyl, najmä metyl.

Vhodnou skupinou -CH₂(CF₂)o-4CF3 je skupina CH₂CF3. i

Výhodnými arylovými skupinami vo význame R³ sú fenyl, naftyl a tetrahydronaftalénová skupina. | i 3

Výhodnými substituentami na arylových skupinách vo význame R sú NH₂, N(CH₃)₂, SO₂N(CH₃)_2i NO_2i alkyl, alkoxyskupina a atómy halogénu tak, ako boli vyššie uvedené pre substituenty na arylových skupinách vo význame R¹. Ďalšími í

vhodnými substituentami sú skupina CONH₂, metylesterová skupina -COOMe a í

metoxykupina. í

Vhodnými heteroarylovými skupinami vo význame R³ sú skupiny, obsahujúce ako heteroatómy síru, dusík alebo kyslík, ako benzotiofenyl, benzotiadiazolyl, tiofenyl, izoxazolyl, pyridinyl, chinolinyl, izochinolinyl, tetrahyclrochinolinyl a i

tetrahydroizochinolinyl. Výhodnými substituentami pre takéto skupiny sú substituenty, uvedené vyššie pre arylové skupiny vo význame R³. !

Výhodnými arylalkyl- a arylalkylaminoskupinami vo význame R³ sú napríklad fenylmetyl-, fenyletyl-, fenylpropyl-, fenylmetylaminoskupina a fenyletylaminoQ | skupina. Arylalkenylovou skupinou vo význame R je napríklad styryl. Výhodnými

-8substituentami pre tieto skupiny sú alkylové skupiny, najmä metyl alebo atómy halogénu. S výhodou znamená R³ alkyl s 1 až 6 atómami uhlíka, najmä metyl alebo etyl a najvýhodnejšie metyl.

Substituenty R⁷, R⁸, R⁹, R¹⁰, R¹¹ a R¹² s výhodou znamenajú atómy vodíka alebo metylové skupiny, symbol n s výhodou znamená celé číslo 1 až 5, najmä 1 až 3 a najvýhodnejšie 1 a symbol m s výhodou znamená celé číslo 0 až 3 a najmä 1 alebo 2.

V prípade, že zlúčeniny všeobecného vzorca I môžu tvoriť soli, zahrnuje vynález tiež fyziologicky prijateľné soli týchto látok. Výhodné fyziologicky prijateľné soli zlúčenín všeobecného vzorca I zahrnujú soli s anorganickými bázami, napríklad soli s alkalickými kovmi, ako soli sodné a draselné a tiež amónne soli a soli s organickými bázami. Výhodnými soľami s organickými bázami sú napríklad soli s amínmi, napríklad s trialkylamínmi ako trietylamínom, s dialkylamínmi, ako dicyklohexylamínom, s benzylamínmi, prípadne substituovanými, ako s fenylbenzylamínom alebo p-brómbenzylamínom, ďalej soli s prokaínom, etanolamínom, dietylamínom, N-metylglukozamínom a tri(hydroxymetyl)metyl-amínom, ďalej môžu byť vytvorené aj soli s aminokyselinami, napríklad s lyzínom a arginínom. Výhodné soli s anorganickými a organickými kyselinami sú napríklad hydrochloridy, trifluóracetáty a vínany.

Najvýhodnejšie deriváty podľa vynálezu majú nasledujúcu štruktúru

U \ ⁿ SO₂Me kde

R¹⁰⁰ znamená -CH=CH-CH2-piperidín-1-yl (E-izomér), -CH=CH-CH₂-NH(cyklopropyl) (E-izomér), fenyl-4-(CH2-(4-metylpiperazín-1-yl)), fenyl-4-(CH₂-NH-(cyklopropyl)) alebo fenyl-4-(CH₂-N(Me) (n-propyl)).

-9Vo vzorci je naznačovaná relatívna stereochémia uvedených látok, najmä výhodný je (3S,3aS,6aR)-enantiomér.

Schopnosť zlúčenín všeobecného vzorca I vyvolať inhibíciu účinku neutrofilnej elastázy je možné dokázať napríklad pri použití nasledujúcich skúšok in vitro a in vivo.

Skúšky na ľudskú neutrofilnú elastázu in vitro

Zloženie vzorky:

mM Tris/HCI, pH 8,6

150 mM NaCI

11,8 nM čistenej ľudskej neutrofilnej elastázy.

K tejto zmesi sa pridávajú rôzne koncentrácie skúmanej látky zriedenej vodou, riedi sa zásobný roztok s koncentráciou 10 mM v dimetylsulfoxide. Uvedené hodnoty sú konečné koncentrácie po pridaní roztoku substrátu.

Výsledná zmes sa inkubuje 15 minút pri teplote 30 °C, po tejto dobe sa zvyšná účinnosť elastázy meria 10 minút na odčítacom zariadení BioTek 3401 po pridaní 0,6 mM MeO-sukcinyl-alanyl-alanyl-propyl-valyl-p-nitroanilínu. Vzostup absorbancie pri 405 nm je úmerný účinnosti elastázy. Účinnosť enzýmu sa potom vynesie proti koncentrácii inhibítora a pri použití príslušného softvéru sa stanoví IC50.

Účinnosť inhibítorov ľudskej neutrofilnej elastázy in vivo

Samice škrečkov s hmotnosťou 100 až 150 g sa anestetizujú a malým rezom sa vstrekne do priedušnice 0,1 ml nosného prostredia, ktorým je 7% dimetylsulfoxid alebo 0,1 ml roztoku inhibítora v tomto prostredí. Po určitej dobe po aplikácii účinnej látky sa rovnakým spôsobom vstrekne 75 medzinárodných jednotiek ľudskej neutrofilnej elastázy v 0,1 ml toho istého prostredia. 45 minút po aplikácii elastázy sa zvieratá usmrtia. Do pľúc sa vstrekne sterilný fyziologický roztok chloridu sodného kanylou č. 23, pripojenou na injekčnú striekačku. Použije sa 5 x 2,5 ml

-10kvapaliny, čím sa z priedušiek a komôr vyplache približne 1,5 až 2,0 ml premývacej kvapaliny. Táto kvapalina sa zriedi rovnakým objemom 2% roztoku uhličitanu sodného. Potom sa vzorka spracuje ultrazvukom na rozrušenie buniek pred spektrofotometrickým stanovením koncentrácie hemoglobínu. Úroveň krvácania sa vyjadrí ako koncentrácia hemoglobínu a účinok inhibítora elastázy sa vyjadrí v percentách inhibície tohto krvácania v porovnaní s kontrolnými zvieratami, ktorým bolo vstreknuté len nosné prostredie.

Z výsledkov vyplýva, že zlúčeniny všeobecného vzorca I môžu priaznivo ovplyvniť chorobu a jej príznaky tam, kde sa elastáza zúčastňuje vzniku ochorenia. Ide najmä o zápal priedušiek, vrátane chronického zápalu a o akúkoľvek chronickú obštrukčnú chorobu pľúc (COPD).

Príkladom ochorení, ktoré je možné priaznivo ovplyvniť podaním zlúčenín podľa vynálezu môžu byť zápalové ochorenia dýchacích ciest ako je zápal priedušiek vrátane chronického zápalu, rozšírenia priedušiek, astma a stavy hyperaktivity pľúc, syndróm akútneho zlyhania dýchacieho systému, septický šok, zápalové alebo deštrukčné stavy v pľúcach, ako je rozdutie pľúc a cystická fibróza, zlúčeniny je možné použiť aj u zápalových a deštrukčných stavov vonkajších tkanív, napríklad pokožky v prípade lupienky a lupusu a periodontu, napríklad u zápalov ďasien.

Ďalším príkladom podobných stavov, ktoré je možné zlepšiť podávaním zlúčenín podľa vynálezu môže byť hojenie rán, liečenie spálenín, srdcové a cievne ochorenia, ako je infarkt srdcového svalu, mozgová mŕtvica, ochorenie periférnych ciev, ako je claudicatio intermittens, artérioskleróza, chorobné stavy pri reperfúzii, v prípade chirurgického zákroku typu kárdiopulmonárneho bypasu a septikémie.

Zlúčeniny je možné použiť aj u chorobných stavov spojivového tkaniva, ako v prípade reumatoidnej artritídy, osteroartritídy a spondylitis a u zápalov obličiek, napríklad v prípade glomerulonefritidy.

Okrem toho je uvedené látky možné použiť aj v prípade niektorých leukémií, vrátane akútnej myelogénnej leukémie, akútnej myelomonocytárnej leukémie a u chronických monocytárnych leukémií a na prevenciu alebo inhibíciu metastáz tuhých nádorov, napríklad pľúc, mliečnej žľazy, prostaty a žalúdka, najmä v prípade karcinómov a melanómov.

- 11 Zvláštnym prípadom použitia zlúčenín podľa vynálezu je použitie na liečenie chronického zápalu priedušiek. Chronický zápal priedušiek je ochorenie, ktoré vzniká v dôsledku vystavenia povrchu dýchacích ciest škodlivým chemickým látkam alebo iným vplyvom alebo môže vznikať aj sekundárne u iného ochorenia. Hlavným príznakom je príliš veľká sekrécia hlienu na povrchu dýchacích ciest. Tento prebytočný hlien zvyčajne nie je účinne odstránený a tým dochádza k zníženej výmene plynov v pľúcach, k namáhavému dýchaniu, zníženému zásobeniu tkanív kyslíkom, k opakujúcim sa mikrobiálnym infekciám a k pretrvávajúcemu kašľu, spojenému s vykašlávaním hlienovitého materiálu. Tento materiál vzniká najmä tiež výstupom neutrofilov do dýchacích ciest pri dráždení výstelky rôznymi materiálmi. Neutrofilné biele krvinky vylučujú na povrch dýchacích ciest elastázu a tento enzým spôsobuje zvýšenie množstva vylučovaného hlienu a dramatické zmeny v bunkovom zložení epitelu dýchacích ciest. Inhibícia účinnosti elastázy podaním zlúčenín podľa vynálezu je teda jednou z možných ciest na liečenie chronického zápalu priedušiek. Znížená funkcia pľúc u chorôb typu COPD, napríklad u chronickej bronchitídy so zníženým prechodom vzduchu je tiež spôsobená poškodením pľúc elastázou, pri ktorom dochádza k zúženiu dýchacích ciest a zápalovým zmenám. Inhibítor elastázy môže preto zlepšiť v týchto prípadoch funkciu dýchacích ciest.

Ako už bolo uvedené, je možné zlúčeniny všeobecného vzorca I použiť v ľudskom alebo veterinárnom lekárstve, najmä ako inhibítory neutrofilnej elastázy.

Je celkom zrejmé, že uvedené látky je možné použiť nielen na liečebné účely u už vyvinutého ochorenia, ale aj na prevenciu uvedených stavov.

Zlúčeniny podľa vynálezu a ich fyziologicky prijateľné soli alebo solváty je teda možné použiť na výrobu farmaceutického prostriedku, určeného na liečenie týchto ochorení, u ktorých sa predpokladá pôsobenie elastázy, najmä chronického zápalu priedušiek.

Súčasť podstaty vynálezu tvorí aj farmaceutický prostriedok, určený na liečenie alebo na prevenciu vyššie uvedených stavov u človeka alebo iného živočícha, tento prostriedok obsahuje ako svoju účinnú zložku zlúčeniny všeobecného vzorca I alebo ich fyziologicky prijateľné soli alebo solváty.

- 12Na tento účel môžu byť zlúčeniny podľa vynálezu spracované akýmkoľvek známym spôsobom, bežne používaným vo farmaceutickom priemysle, najmä pri použití bežných, farmaceutický prijateľných riedidiel, nosičov alebo iných zvyčajne používaných pomocných látok.

Najbežnejším spôsobom výroby týchto farmaceutických prostriedkov je zmiešanie všetkých zložiek.

Zlúčeniny podľa vynálezu môžu byť napríklad spracované na farmaceutický prostriedok, určený na perorálne, parenterálne, miestne alebo rektálne podanie alebo na podanie ústnou sliznicou.

Tablety a kapsuly na perorálne podanie môžu obsahovať bežné pomocné látky, napríklad spojivá, ako sú sirupy, akáciovú gumu, želatínu, sorbitol, tragakant, želatinizovaný škrob alebo polyvinylpyrolidón, plnivá, napríklad laktózu, mikrokryštalickú celulózu, kukuričný škrob, sacharózu, fosforečnan vápenatý alebo sorbitol, klzné látky ako je stearan horečnatý, kyselina stearová, mastenec, polyetylénglykol alebo oxid kremičitý, dezintegračné látky, ako je zemiakový škrob, sodnú soľ zosietenej karmelózy alebo sodnú soľ glykolátu škrobu alebo zmáčadlá, ako je laurylsíran sodný. Tablety môžu byť potiahnuté známym spôsobom.

Kvapalné prostriedky na perorálne podanie môžu mať formu suspenzií, roztokov alebo emulzií vo vode alebo v oleji, sirupov alebo elixírov alebo môžu byť dodávané vo forme prášku, určeného na zmiešanie s vodou alebo iným vhodným prostredím tesne pred použitím. Tieto kvapalné prostriedky môžu obsahovať bežné prísady, ako suspenzné činidlá, napríklad sorbitolový sirup, metylcelulózu, sacharózu alebo glukózu, želatínu, hydroxymetylcelulózu, karboxymetylcelulózu, gél stearanu hlinitého alebo hydrogenované jedlé oleje, emulgačné činidlá, ako je lecitín, sorbitanmonooleát alebo akáciovú gumu, nosné prostredie nevodnej povahy, vrátane jedlých olejov, ako sú mandľový olej, frakcionovaný kokosový olej, estery typu olejov, propylénglykol alebo etylakohol a konzervačné činidlá, ako je metylalebo propyl-p-hydroxybenzoát alebo kyselinu sorbovú. Tieto prostriedky môžu ďalej obsahovať pufre, látky na úpravu chuti, farbivá a/alebo sladidlá, napríklad manitol podľa potreby.

Na podanie ústnou sliznicou môžu mať prostriedky formu tabliet alebo kosoštvorčekových tabliet, vyrobených bežným spôsobom.

- 13Uvedené látky je tiež možné spracovať na čapíky, napríklad s obsahom bežnej bázy, ako je kakaové maslo alebo iné glyceridy.

Zlúčeniny podľa vynálezu je možné tiež spracovať na parenterálne podanie vo forme injekcie alebo kontinuálnej infúzie a môžu byť spracované na formy s obsahom jednotlivej dávky, napríklad vo forme ampúl, liekoviek, infúzií malého objemu alebo vopred naplnených striekačiek alebo vo forme, obsahujúcej väčší počet dávok s konzervačným prostriedkom. Môže pritom ísť o roztoky, suspenzie alebo emulzie vo vodnom alebo nevodnom prostredí a okrem toho môžu tieto prostriedky obsahovať pomocné látky, ako antioxidačné činidlá, pufre, antimikrobiálne látky a/alebo látky, znižujúce toxicitu. Účinná zložka môže byť dodávaná aj vo forme prášku, určeného na zmiešanie s vhodným nosným prostredím, napríklad sterilnou bezpyrogénnou vodou tesne pred použitím. V tomto prípade môže byť sterilný prášok aseptický plnený do fľaštičiek alebo môže byť sterilný roztok aseptický naplnený do fľaštičiek a potom lyofilizovaný.

Miestne podanie zahrnuje aj podanie insufláciou a inhaláciou. Ako príklad rôznych typov prostriedkov na miestne podanie je možné uviesť masti, krémy, prášky, pesary, spreje, aerosóly alebo kapsuly na použitie v inhalačnom alebo insuflačnom zariadení a tiež kvapky, určené na podanie do oka alebo do nosa.

Masti a krémy môžu byť napríklad pripravené použitím vodnej alebo olejovej bázy s pridaním vhodných zahusťovadiel, gelujúcich činidiel alebo rozpúšťadiel. Môže ísť o vodu a/alebo olej, ako je kvapalný parafín alebo rastlinný olej, ako je arašidový alebo ricínový olej alebo iné rozpúšťadlo, ako je polyetylénglykol. Zo zahusťovadiel je možné uviesť mäkký parafín, stearan hlinitý, cetostearylalkohol, polyetylénglykoly, mikrokryštalícký vosk a včelí vosk.

Lotióny je možné pripraviť použitím vodnej alebo olejovej bázy. Tieto prostriedky budú zvyčajne taktiež obsahovať emulgačné činidlá, stabilizátory, dispergačné činidlá, suspenzné činidlá alebo zahusťovadlá.

Prášky na vonkajšie podanie je možné pripraviť použitím rôzneho práškového základu, napríklad mastenca, mliečneho cukru alebo škrobu. Kvapky je možné pripraviť použitím vodnej alebo nevodnej bázy, obsahujúcej dispergačné činidlá, solubilizačné činidlá alebo suspenzné činidlá.

Spreje je možné pripraviť napríklad ako vodné roztoky alebo suspenzie alebo ako aerosóly, aplikované z tlakových balení pri použití príslušného hnacieho prostriedku, napríklad dichlórdifluórmetánu, trichlórfluórmetánu, dichlórtetrafluóretánu, 1,1,1,2,3,3,3-heptafIuórpropánu, 1,1,1,2-tetrafluóretánu, oxidu uhličitého alebo iného vhodného plynu.

Kapsuly a ďalšie prostriedky na použitie v inhalačných alebo insuflačných zariadení, napríklad zo želatíny, môžu byť pripravené s obsahom zmesi zlúčenín podľa vynálezu a vhodného práškového riedidla, ako laktózy alebo škrobu.

Farmaceutické prostriedky podľa vynálezu je možné použiť aj v kombinácii s inými účinnými látkami, napríklad protizápalovými látkami, ako napríklad antagonistami beta-2-adrenergných receptorov a xantínmi, napríklad teofilínom, látkami na rozpustenie hlienu, antimuskarínovými látkami, antileukotriénmi, inhibítormi adhézie buniek, napríklad antagonistami ICAM, antioxidačnými látkami, ako N-acetylcysteínom povrchovo aktívnymi látkami na použitie v pľúcach a/alebo antimikrobakteriálnymi a protivírusovými látkami. Prostriedky podľa vynálezu je možné použiť aj v kombinácii s liečbou, pri ktorej sa prevádza výmena génu.

Uvedené kombinácie je možné na bežné použitie spracovať na farmaceutický prostriedok, ktorý' obsahuje obe účinné látky spolu s príslušným farmaceutickým prostriedkom.

Jednotlivé zložky takýchto kombinácii je teda možné podávať súčasne alebo následne jednotlivo alebo v spoločnom farmaceutickom prostriedku. Príslušné dávky známych účinných látok sú v danej oblasti techniky bežne známe.

Zlúčeniny podľa vynálezu môžu byť podávané v dávkach napríklad 0,01 až 50 mg/kg telesnej hmotnosti, výhodne 0,05 až 25 mg/kg telesnej hmotnosti perorálne raz alebo viackrát v priebehu dňa. Presná dávka bude závisieť na veku a celkovom stave chorého, na zvolenom spôsobe podania a na závažnosti liečeného ochorenia. Vyššie uvedené látky sa na liečenie zápalu priedušiek výhodne podávajú perorálne. Pri iných indikáciách môže byť potrebné zvoliť iný spôsob podania, napríklad vnútrožilovo v prípade ARDS.

Zlúčeniny všeobecného vzorca I majú veľmi výhodnú predĺženú dobu účinku.

Zlúčeniny všeobecného vzorca I a ich soli a solváty je možné pripraviť ďalej uvedeným spôsobom, ktorý taktiež tvorí súčasť podstaty vynálezu.

-15Spôsob na výrobu zlúčenín všeobecného vzorca I spočíva v tom, že sa , I

i) na zlúčeninu všeobecného vzorca II

c (II) pôsobí zlúčeninou všeobecného vzorca

R¹COOH, RCOY, R¹OCOY alebo R¹SO₂Y, kde Y je reaktívna skupina, napríklad atóm halogénu, alebo sa ii) vykoná sulfonylácia zlúčeniny všeobecného vzorca III

(III) pôsobením zlúčeniny YO₂SR³, kde Y je reaktívna skupina, napríklad atóm halogénu, ako je atóm chlóru alebo sa iii) pri príprave zlúčeniny všeobecného vzorca I, v ktorom X znamená skupinu

O

II

-C-O- 16(IV) na zlúčeninu všeobecného vzorca IV

kde Y má vyššie uvedený význam, pôsobí zlúčeninou všeobecného vzorca R¹OH, alebo sa iv) pri príprave zlúčeniny všeobecného vzorca I, v ktorom R² znamená alkyl alebo alkenyl vždy s 2 až 4 atómami uhlíka, na zlúčeninu všeobecného vzorca V

pôsobí postupne s bázou a potom so zlúčeninou všeobecného vzorca R²Y, kde Y je reaktívna skupina vo vyššie uvedenom význame s R² znamená alkyl alebo alkenyl vždy s 2 až 4 atómami uhlíka, alebo sa

v) cyklizuje zlúčenina všeobecného vzorca VI

- 17alebo jej ester, vytvorený na karboxylovej skupine, alebo sa vi) pri príprave zlúčenín všeobecného vzorca I, v ktorom X znamená skupinu

O o ' oxiduje zlúčenina vzorca VII

kde X^a znamená atóm síry alebo SO alebo sa vii) pri príprave zlúčeniny všeobecného vzorca I oxiduje zodpovedajúca zlúčenina všeobecného vzorca VIII

z.R

N

H

R³ (VIII) kde X^a znamená atóm síry alebo skupinu SO, alebo sa viii) pri príprave zlúčeniny všeobecného vzorca I, v ktorom R¹ znamená aryl, substituovaný skupinou -(CH2)m NR⁴R⁵, kde m‘ znamená celé číslo 1 až 8, podrobí redukčnej aminácii zodpovedajúca zlúčenina všeobecného vzorca IX

- 18(CHzJmM aryl (IX)

pôsobením zlúčeniny všeobecného vzorca HNR⁴R⁵, alebo sa ix) pri príprave zlúčeniny všeobecného vzorca I, v ktorom R¹ znamená skupinu -(CH₂)_nNR⁴R⁵, podrobí redukčnej aminácii zodpovedajúca zlúčenina všeobecného vzorca X

(X) pôsobením zlúčeniny všeobecného vzorca HNR⁴R⁵, alebo sa

- 19x) pri príprave zlúčeniny všeobecného vzorca I, v ktorom R¹ znamená aryl, substituovaný skupinou -(CH₂)mNR⁴R⁵, kde m' znamená celé číslo 1 až 8, na zodpovedajúcu zlúčeninu všeobecného vzorca XI

Hal — (CH>

kde Hal znamená atóm halogénu, najmä chlóru alebo brómu, pôsobí zlúčeninou všeobecného vzorca HNR⁴R⁵, alebo sa xi) pri príprave zlúčeniny všeobecného vzorca I, v ktorom R¹ znamená skupinu -(CH₂)_nNR⁴R⁵ alebo alkenyl-NR⁴R⁵ s alkenylovou časťou s 2 až 8 atómami uhlíka, na zodpovedajúcu zlúčeninu všeobecného vzorca XII

Hal

Alk i

(XII) kde

Alk znamená alkenyl s 2 až 8 atómami uhlíka alebo -(CH2)_n-, Hal znamená atóm halogénu, najmä chlóru alebo brómu,

-20pôsobí zlúčeninou všeobecného vzorca HNR⁴R⁵, alebo sa xii) pri príprave zlúčeniny všeobecného vzorca I, kde R¹ obsahuje alkylpiperazinylovú skupinu s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti alkyluje zodpovedajúca zlúčenina vzorca I, kde piperazínová skupina nie je alkylované, alebo sa xiii) pri príprave zlúčeniny všeobecného vzorca I, v ktorom R¹ obsahuje N-alkylpiperazinylovú skupinu, uskutoční redukčná alkylácia zodpovedajúcej nealkylovej zlúčeniny všeobecného vzorca I, alebo sa xiv) premení zlúčenina všeobecného vzorca I na inú zlúčeninu všeobecného vzorca I, alebo sa xv) jeden z enantiomérov zlúčeniny všeobecného vzorca I z racemickej zmesi izoluje a čisti, a potom sa v prípade potreby premení výsledná voľná kyselina alebo báza všeobecného vzorca I na fyziologicky prijateľnú soľ alebo obrátene alebo sa určitá soľ premení na inú fyziologicky prijateľnú soľ.

Spôsob i)

Kondenzačná reakcie so zlúčeninou vzorca R¹COOH sa výhodne uskutočňuje v prítomnosti väzbového činidla, napríklad 1-(3-N,N-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimidu a v rozpúšťadle, napríklad dichlórmetáne, DMF, alebo tetrahydrofuráne pri teplote v rozmedzí 0 °C až teplote miestnosti. Je zrejmé, že okrem kyseliny všeobecného vzorca R¹COOH je možné použiť aj deriváty tejto kyseliny, napríklad chloridy, anhydridy alebo zmesné anhydridy. V závislosti na použití určitého derivátu je nutné upraviť reakčné podmienky, napríklad pridaním bázy.

-21 V prípade použitia zlúčenín typu R¹SC>2Y a R¹OCOY sa reakcia výhodne uskutočňujem prítomnosti bázy, napríklad trietylamínu a rozpúšťadla, ako DMC pri teplote v rozmedzí O °C až teplote miestnosti.

Spôsob ii)

Sulfonylačná reakcia sa výhodne uskutočňuje v prítomnosti bis(trimetylsilyl)amidu lítneho, LHMDS alebo NaH v rozpúšťadle, napríklad tetrahydrofuráne pri teplote v rozmedzí -78 až 0 °C.

Spôsob iii)

Túto reakciu je možné ľahko uskutočniť v prítomnosti organickej bázy, napríklad trietylamínu a rozpúšťadla, ako je dichlórmetánu pri teplote 0 až 25 °C.

Spôsob iv)

Reakcia sa výhodne uskutočňuje v prítomnosti silnej bázy, napríklad LHDS a v prítomnosti rozpúšťadla, napríklad tetrahydrofuránu pri nízkych teplotách, napríklad v rozmedzí -78 až 0 °C.

Spôsob v)

Cyklizačná reakcia sa výhodne uskutočňuje v prítomnosti 2-chlór-1-metylpyridíniumjodidu alebo 1-(3-N,N-dimetyl-aminopropyl)-3-etylkarbodiimidu, EDC v rozpúšťadle, napríklad dichlórmetáne pri teplote 0 °C až teplote varu pod spätným chladičom. Reakciu je možné uskutočniť aj použitím tioesterového derivátu karboxylovej kyseliny všeobecného vzorca VI.

Spôsoby vi) a vii)

-22Tieto oxidačné reakcie je možné uskutočniť zvyčajným spôsobom, napríklad pôsobením perkyseliny.

Spôsoby viii) a ix)

Redukčnú amináciu je možné uskutočniť tak, že sa na aldehyd pôsobí amínom v prítomnosti kyseliny, napríklad kyseliny octovej v inertnom rozpúšťadle, ako DCM alebo THF s následným pridaním mierneho redukčného činidla, ako triacetoxyhydroborátu sodného.

Spôsoby x) a xi)

Reakcie je možné uskutočniť tak, že sa zmiešajú reakčné zložky za prípadne prítomnosti bázy, napríklad trietylamínu alebo uhličitanu draselného v inertnom aprotickom rozpúšťadle, ako je DMF alebo MeCN. V súvislosti s reakciou xi) je nutné uviesť, že bola pozorovaná tendencia k preskupeniu a-alkenylhalogenidu v priebehu reakcie za vzniku β-alkenylamínu.

Spôsob xii)

Reakciu je možné uskutočniť tak, že sa na piperazinylový derivát pôsobí alkylhalogenidom, napríklad metylbromidom, pripadne po predchádzajúcom odobratí protónu, napríklad pôsobením bázy, ako je -butyllítium.

Spôsob xiii)

Redukčnú alkyláciu je možné uskutočniť tak, že sa najskôr vytvorí imíniový medziprodukt reakciou nealkylovaného piperazinylového derivátu všeobecného vzorca I so zlúčeninou, obsahujúcou karbonylovú skupinu, napríklad formaldehydom za zvyčajných podmienok, napríklad v inertnom rozpúšťadle, ako je DCM v prítomnosti kyseliny, napríklad kyseliny octovej s následnou redukciou

-23redukčného činidla, ako kyanohydroborátu sodného alebo triacetoxyhydroborátu sodného. ··

Spôsob xiv)

Ako príklady typických premien je možné uviesť redukciu nitroskupiny na aminoskupinu, redukciu alkenylovej skupiny na alkylovú skupinu, čiastočnú alebo úplnú redukciu arylového alebo heteroarylového systému adstránenie N-ochranných skupín, napríklad terc.butoxykarbonylovej skupiny alebo benzyloxykarbonylovej skupiny CBz. Tieto reakcie je možné uskutočniť bežným spôsobom, napríklad hydrogenáciou v prítomnosti paládia na aktívnom uhlí v rozpúšťadle, ako etylacetátu alebo tetrahydrofuránu.

Spôsob xv)

Čistenie jednotlivého enantioméru je možné dosiahnuť bežnými postupmi, najoríklad chirálnou chromatografiou, ako napríklad chirálnou vysokotlakovou kvapalinovou chromatografiou a kryštalizáciou použitím homochirálnej kyseliny, napríklad kyseliny vinnej.

Fyziologicky prijateľné soli vzorca I je možné pripraviť pôsobením vhodnej bázy, ako hydrogénuhličitanu, napríklad sodného, v prítomnosti vhodného rozpúšťadla. Soli s kyselinami, ako sú hydrochloridy, trifluóracetáty alebo vínany je možné získať pôsobením kyseliny na voľnú bázu vzorca I.

Medziprodukty vzorca II je možné získať podľa schémy 1:

-24Schéma 1

-25(XXII)

Schéma 1 - pokračovanie l·

I ^r: j <X«)

(XXIII) (II)

Stupeň i)

Zlúčeniny vzorca XIII sú známe látky alebo je možné ich získať analogickými postupmi ako známe látky. P¹ je N-ochranná skupina, výhodne benzyloxykarbonyl CBZ. Stupeň i) je ďalšou reakciou na ochranu atómu dusíka. P² vo vzorci XIV je odlišná N-ochranná skupina, výhodne terc.butyloxykarbonyl BOC. V prípade, že P² znamená BOC, je výhodné reakciu uskutočniť pri použití BOC₂O.

Reakcia sa s výhodou uskutočňuje v prítomnosti bázy, ako trietylamínu alebo 4-dimetylaminopyridínu v rozpúšťadle, napríklad etylacetátu, vhodné teplotné rozmedzie je 0 až 25 °C.

Stupeň ii)

Premena sa výhodne uskutočňuje použitím pyridínium-p-toluénsulfonátu v rozpúšťadle, napríklad v zmesi acetónu a vody, výhodne pri teplote v rozmedzí 25 až 75 °C.

y í'

-26Stupeň iii)

Ide o kondenzačné preskupenie, ktoré sa s výhodou uskutočňuje pri použití

2-fenylsulfinylesteru kyseliny octovej vzorca PhSOCHzCC^R¹³ a piperidínu v rozpúšťadle, napríklad acetonitrile, výhodne pri teplote miestnosti, R¹³ výhodne znamená alkylovú skupinu s 1 až 6 atómami uhlíka, výhodne metyl.

Stupeň i v)

Ide o Mitsunobuovu substitučnú reakciu pri použití ftalimidu, trifenylfosfínu PPh3 a dietyíazodikarboxylátu DEAD v prítomnosti rozpúšťadla, ako je THF a pri teplote v rozmedzí 0 až 40 °C.

Stupeň v)

V tomto stupni sa odstráni ochranná skupina, výhodne pri použití silnej kyseliny, napríklad TFA v rozpúšťadle, ako je DCM pri teplote 0 až 40 °C.

Stupeň vi)

Cyklizačná reakcia podľa tohto stupňa sa výhodne uskutočňuje ako intramolekulárna Michaelova reakcia. Výhodne sa použije hydrid sodíka v rozpúšťadle, napríklad THF pri teplote 0 až 25 °C.

Stupeň vii)

V tomto stupni dochádza k dvom reakciám, k N-deprotekcii a na zavedenie novej ochrannej skupiny. Ftalimidoskupina sa odstráni, výhodne napríklad pôsobením hydrazínhydrátu v rozpúšťadle, ako napríklad etanole pri teplote 0 °C až teplote varu pod spätným chladičom. Potom sa naviaže ochranná skupina P³ zvyčajným spôsobom. V prípade, že P³ znamená BOC, postupuje sa výhodne tak, že sa pôsobí BOC₂O.

-27Stupeň viii)

V prípade, že R² znamená alkyl alebo alkenyl, je možné naviazať bočný reťazec vo význame R² alkyláciou tak, že sa použije ako reakčné činidlo zlúčenina R²-Y, kde Y znamená reakčnú skupinu, napríklad atóm brómu alebo jódu. Reakcia sa uskutočňuje použitím bázy, výhodne silnej bázy, ako LHMDS a súčasné s tohto bázou sa pomocné rozpúšťadlo použije DMPU v THF. Vhodné reakčné teploty sú v rozmedzí -78 až 50 °C. Za týchto podmienok reakcia zvyčajne prebieha s dobrým stereochemickým výsledkom.

V prípade, že R² znamená tioalkyl, je možné reakciu uskutočniť tak, že sa na zlúčeninu vzorca XX pôsobí terc.butylmagnéziumchloridom a bis(trimetylsilyl)amidom lítia a potom alkyldisulfidom. Reakcia sa výhodne uskutočňuje v málo polárnym rozpúšťadlom, napríklad v THF alebo v zmesi THF a N, N, N‘, N‘-tetramety Ietyléndiamínu pri teplote nižšej ako 0 °C. V prípade, že R² znamená alkoxyskupinu, je možné reakciu uskutočniť tak, že sa najskôr pripraví ako medziprodukt hydroxyzlúčenina pri použití hexametyldisilazidu draselného a 3-fenyl-2-(fenylsulfonyl)oxaziridínu, typicky pri teplote -78 °C v THF a po čistení tohto meziproduktu sa na medziprodukt pôsobí alkylhalogenidom, výhodne alkyljodidom v prítomnosti oxidu strieborného.

Stupeň ix)

Ide o hydrolýzu esteru s následnou N-deprotekčnou reakciou. Reakcia sa uskutočňuje bežným spôsobom, napríklad použitím KOH vo vodnom etanole pri teplote v rozmedzí 25 až 80 °C. N-deptotekčná reakcia sa uskutočňuje bežným spôsobom, napríklad použitím HCI v dioxáne pri teplote 0 až 50 °C alebo v prípade, že ochrannou skupinou je trifluóracetátová skupina, pôsobením bázy.

Stupeň x)

V tomto stupni sa uskutočňuje cyklokondenzačná reakcia, ktorú je výhodne možné uskutočniť v prítomnosti 2-chlór-1-metylpyridíniumjodidu a vhodnej bázy,

-28napríklad Ν,Ν-diizopropyletylamínu v rozpúšťadle, ako napríklad dichlórmetáne pri teplote 0 °C až teplote varu pod spätným chladičom. Bolo tiež dokázané, že je možné použiť ako zlúčeninu vzorca XXII ester kyseliny karboxylovej, takže hydrolýza esteru v stupni ix) nie je nevyhnutná. V tomto prípade zahrnujú výhodné podmienky pre cyklokondenzáciu použitie alkylovaného Grignardovho reakčného činidla, napríklad terc.BuMgCI v THF pri teplote -20 až 25 °C.

Stupeň xi)

Ide o sulfunyláciu laktámu, ktorá sa výhodne uskutočňuje reakciou so zlúčeninou vzorca R³SC>2-Y, v ktorom Y znamená reakčnú skupinu, výhodne atóm chlóru, v prítomnosti LHMDS, NaH alebo KH v rozpúšťadle, napríklad THF pri teplote -78 až 0 °C.

Stupeň xii)

V tomto stupni sa odstráni skupina na atóme dusíka zvyčajným spôsobom. Napríklad v prípade, že P¹ znamená CBZ, je možné uskutočniť hydrogenáciu použitím hydroxidu paladnatého ako katalyzátora v rozpúšťadle, napríklad etylacetáte alebo THF.

Medziprodukty všeobecného vzorca III je možné pripraviť reakciou zlúčeniny všeobecného vzorca XXIII zo schémy 1, zbavenej ochrannej skupiny, so zlúčeninou R¹SO2Y alebo R¹OCOY spôsobom, ktorý bol opísaný vyššie pri spôsobe i). Počiatočnú N-deptrotekciu je možné uskutočniť podľa stupňa xii).

Medziprodukty všeobecného vzorca IV je možné pripraviť zo zlúčeniny všeobecného vzorca II napríklad reakciou s trifosgénom v rozpúšťadle, ako je DCM pri teplote v rozmedzí 0 až 25 °C.

Medziprodukty všeobecného vzorca V je možné pripraviť podobným spôsobom ako zlúčeniny všeobecného vzorca I cez zlúčeniny vzorca II podľa schémy 1, avšak pri vynechaní alkylačného stupňa viii).

-29Pri tomto postupe vznikajú medziprodukty Xlla a Xllla, ktorých štruktúra zodpovedá štruktúre medziproduktov XII a XIII až na to, že R² znamená atóm vodíka.

Medziprodukty všeobecného vzorca VI je možné pripraviť zo zlúčenín všeobecného vzorca XXII analogicky ako zlúčeniny vzorca III zo zlúčenín vzorca XXIII podľa vyššie uvedeného spôsobu ii).

Medziprodukty všeobecného vzorca VII je možné pripraviť reakciou zlúčenín všeobecného vzorca II s príslušným R¹-sulfonyl- alebo R¹-sulfinylhalogenidom bežným spôsobom.

V prípade, že R² znamená alkyl, alkyltioskupinu alebo alkenyl a ide o väčšiu skupinu, najmä o izopropyl alebo terc.butyl, je výhodné pripravovať zlúčeniny všeobecného vzorca XXI podľa nasledujúcej schémy 2.

Schéma 2

(XXVII)

O (XXV)

2HCI hn nh₂ (XXVI) (iv)

-30(vi)

Schéma 2 - pokračovanie

R² (XXX)

Oalkyl OSi(alkyl)j ψ

R\J^CO₂alkyľ

NHP⁴ (XXI)

Stupeň i)

Reakcia prebieha za bežných podmienok pre tvorbu alkylesterov, napríklad pôsobením alkoholu, ako metanolu v prítomnosti SOCfe.

Stupeň ii)

Cyklizačná reakcia sa uskutočňuje: za miešania vo vode spolu so živicou Dowex 2X8, výhodne 400 mesh.

Stupeň iii)

P⁴ je ochranná skupina. Spôsoby na ochranu aminoskupiny sú v danej oblasti techniky známe, v tomto prípade je výhodný najmä trifluóracetát TFA. Amín, chránený TFA je možné vytvoriť tak, že sa na zlúčeninu všeobecného vzorca XXVI pôsobí metyltrifluóracetátom v polárnom protickom rozpúšťadle, napríklad v metanole.

Stupeň iv)

Vhodné ochranné skupiny P¹ zahrnujú CBS. V tomto prípade je možné pôsobiť na zlúčeninu všeobecného vzorca XXVII silnou bázou, ako je LHMDS alebo nBuLi v inertnom rozpúšťadle, napríklad v THF s následným pôsobením CBZ-CI.

-31Stupeň v)

Túto premenu je možné uskutočniť tak, že sa na zlúčeninu vzorca XXVIII pôsobí redukčným činidlom, napríklad borohydridom sodíka s následným pôsobením koncentrovanej kyseliny sírovej v prítomnosti alkylalkoholu v rozpúšťadle, napríklad v etanole.

Stupeň vi)

Reakciu zlúčenín všeobecného vzorca XXIX a XXX je možné uskutočniť v prítomnosti Lewisovej kyseliny, napríklad dieterátu trifluoridu boritého v inertnom rozpúšťadle, napríklad dichlórmetáne. Alkylovou skupinou v skupinách O-alkyl a OSi(alkyl)₃ je zvyčajne alkyl s 1 až 6 atómami uhlíka. V silylalkylovej skupine najmä metyl, izopropyl a terc.butyl. Výhodnou O-alkylovou skupinou je OEt a najmä je výhodnou OSi(alkyl)₂-skupinou skupina OSi(i-Pr)₃ alebo OSi(Me)₂(t-Bu). Je možné použiť aj zlúčeniny vzorca XXX, v ktorých je O-alkylová skupina nahradená skupinou OSi(alkyl)₃.

Zlúčeniny všeobecného vzorca XXX, v ktorých R² znamená alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka, alkenyl s 2 až 4 atómami uhlíka, alebo alkyltioskupinu s 1 až 3 atómami uhlíka je možné pripraviť tak, že sa na zodpovedajúci ester karboxylovej kyseliny, to znamená R²CH₂COOEt alebo na iný alkylester, známy alebo pripravený známym spôsobom pôsobí silnou bázou, ako je LHMDS a potom trialkylsilylchloridom, napríklad trimetylsilylchloridom alebo trialkylsilyltriflátom. Typicky sa reakcia uskutočňuje pri teplote nižšej ako 0 °C v inertnom rozpúšťadle, ako je THF v prítomnosti DMPU.

Zlúčeniny všeobecného vzorca VIII, v ktorých X^a znamená atóm síry, je možné pripraviť reakciou zodpovedajúcej zlúčeniny všeobecného vzorca III so zlúčeninou vzorca R³SSR³ za podmienok, bežných pre nukleofilné preskupenie. Zlúčeniny všeobecného vzorca VIII, v ktorom X^a znamená SO je možné pripraviť oxidáciou zodpovedajúcej zlúčeniny, v ktorej X^a znamená atóm síry, pôsobením perkyseliny.

i

-32/

Zlúčeniny všeobecného vzorca VII je tiež možné pripraviť analogickým spôsobom. .

Zlúčeniny všeobecného vzorca IX, X, XI a XII je možné pripraviť zo zlúčenín všeobecného vzorca II niektorým zo známych postupov.

Súčasť podstaty vynálezu tvorí aj spôsob výroby derivátov všeobecného vzorca I vo forme izolovaných jednotlivých enantiomérov.

Postupuje sa tak, že sa v syntetických schémach medziprodukty pripravia homochirálnou syntézou, alebo je možné rozdeliť výslednú racemickú zmes.

Podľa jedného z možných uskutočnení sa pripravuje (2R,3S)-enantiomér zlúčeniny všeobecného vzorca XX podľa nasledujúcej schémy 3:

Schéma 3 co₂h

H₂N

CO₂H (S)-diaminobutyrylová kyselina

(XXXIII)

NHP⁴ (XXXII)

NHP⁴ (XXXI)(S)

(XXXVI) (-)

(XX) (2R, 3S)

CH₂OH

CHO

P⁵ H N

(XXXV)

NHP⁴

P⁵hn

NHP⁴ (XXXIV)

-33Stupeň a i

Zlúčeniny všeobecného vzorca XXXI (S) sú známe látky alebo je možné ich pripraviť podobným postupom ako známe zlúčeniny. P⁴ je ochranná skupina vo význame P³ vyššie, vhodným významom je Boe. Reakcia sa s výhodou uskutočňuje pri použití fenyljodosylbis(trifluóracetátu), PIFA a bázy, napríklad pyridínu vo vodnom rozpúšťadle, ako v zmesi vody a THF, dioxánu alebo acetonitrilu. Ide o spôsob podľa publikácie Stansfield C. F., Organic Preparation and Procedures Int., 1990, 22(5), 593 až 603.

Stupeň b

P⁵ je ochranná skupina, napríklad CBZ. Túto ochrannú skupinu je možné naviazať zvyčajným spôsobom. Postup sa napríklad uskutočňuje v rozpúšťadle, miešateľnom s vodou, napríklad v THF, DMF alebo dioxáne použitím N-(benzyloxykarbonyloxy)sukcínamidu, benzyloxykarbonylchloridu alebo akéhokoľvek iného vhodného zdroja benzyloxykarbonylovej skupiny pri úprave pH na alkalickú stranu uhličitanom sodným.

V alternatívnom stupni b¹ je možné pripraviť zlúčeninu všeobecného vzorca XXXIII bežným spôsobom z kyseliny (S)-diaminomaslovej.

Stupeň c

Reakcia sa výhodne uskutočňuje v dvoch skupinách. Najskôr sa uskutoční pri nižšej teplote reakcie s N-metylmorfolínom a potom s alkylchlórmravčanom, napríklad etylchlórmravčanom v organickom rozpúšťadle, napríklad v DCM, dioxáne alebo THF. Potom sa produkt redukuje, zvyčajne hydroborátom sodným pri nižšej teplote, napríklad v rozmedzí -20 až 10 °C v rozpúšťadle; ako THF.

Stupeň d i

-34Túto oxidačnú reakciu je možné uskutočniť akýmkoľvek vhodným spôsobom, napríklad použitím oxalylchloridu v DMSO a metylénchloridu pod dusíkom pri nižšej teplote napríklad -30 až -70 °C s následnou reakciou s trietylamínom. Medziprodukt vzorca XXXV sa zvyčajne neizoluje.

Stupeň e

Reakcia sa uskutočňuje použitím Wittigovho činidla, ako trifenylfosforanu R¹³O₂CCH=PPh3, je možné použiť aj fosfonát vo Wadsworth-Emmonsonovej reakcii.

Stupeň f

Táto Michaelova adičná reakcia sa uskutočňuje použitím bis(trimetylsilylamidu)lítneho alebo inej silnej bázy v organickom rozpúšťadle, ako je THF, éteru -.-alebo toluénu-a s výhodou v prítomnosti komplexotvorného činidla, ako je tetrarnetyletyíéndiamín.

Podľa ďalšieho . uskutočnenia sa pripraví (2S,3R)-enantiomér zlúčeniny vzorca XX podľa schémy 4:

Schéma 4

(XXXI)(R)

-35Stupeň a

Reakcia sa výhodne uskutočňuje použitím benzylalkoholu, PIFA a trietylamínu pri vyššej teplote vo vhodnom rozpúšťadle, ako je DMF. Ide o postup, analogicky spôsobu podľa publikácie Moutevelis-Minakakis a Photaki, J. Chem. Soc., Perkin Trans 1, 1985, 2277.

Zlúčeniny vzorca XXXI(R) sú známe alebo je možné ich pripraviť analogickým spôsobom ako známe látky podľa publikácie Zaoral, Collect, Czech. Chem. Commun., 1979, 44(4), 1179 až 1186.

Stupeň b

Tento stupeň sa uskutočňuje analogickým spôsobom ako stupne c, d, e a f zo schémy 3.

Podľa ďalšieho uskutočnenia vynálezu je možné rozdeliť zlúčeninu všeobecného vzorca XX. Toto je možné dosiahnuť napríklad tak, že sa uvedená látka premení na zodpovedajúci amín vzorca XX¹

Túto premenu je možné uskutočniť pôsobením akejkoľvek silnej kyseliny, napríklad TFA vo vhodnom rozpúšťadle, ako DCM s následným premytím bázou.

Zlúčenina vzorca XX¹ sa potom rozdelí. Je možné postupovať napríklad nasledujúcim spôsobom:

-36S-séria

Použije sa akékoľvek vhodné deliace činidlo, výhodne kyselina (+)-di-ptoluoylvinná, (+) DPTTA, nasleduje prekryštalizovanie, zvyčajne z etanolu, čím sa získa S-vínan vzorca XX²(S)

(XX²)(S)

Typicky sú potrebné dve kryštalizácie.

R-séria

Použije sa akékoľvek vhodné deliace činidlo, výhodne kyselina (-)-di-ptoluoylvinná, (-) DPTTA s následným prekryštalizovaním, zvyčajne z etanolu, čím vzniká R-vínan vzorca XX²(R)

P¹

(XX²)(R)

V typických príkladoch je opäť potrebné uskutočniť dve kryštalizácie. Po tomto deliacom stupni je možné na zlúčeninu všeobecného vzorca XX²(S) a XX²(R) znova naviazať ochranné skupiny, čím je možné získať požadované výsledné látky vzorca XX(S) a XX(R).

-37Je tiež možné postupovať tým spôsobom, že sa medziprodukty delia chromatografjou na stĺpci, napríklad použitím chirálneho systému HPLC. Týmto spôsobom je možné rozdeliť najmä medziprodukty všeobecného vzorca XXIII.

Je zrejmé, že reakcie, uvedené v schémach 3 a 4 je možné opakovať použitím racemických zlúčenín. Reakcia podľa schémy 3 je možné opakovať napríklad použitím kyseliny diaminomaslovej ako východiskovej látky. Táto reakcia je ďalšou cestou na získanie racemického medzipriduktu všeobecného vzorca XX¹, ktorý môže byť potom rozdelený vyššie opísaným spôsobom. Reakcia podľa schém 3 alebo 4 je možné použiť aj na prípravu druhého enantioméru.

Ďalší spôsob pre homochirálnu syntézu niektorých medzipriduktov všeobecného vzorca XXIII, najmä zlúčenín, v ktorých R² znamená alkyl, alkenyl alebo alkyltioskupinu použitím D-asparagínu ako východiskovej látky, je znázornený v nasledujúcej schéme 5:

Schéma 5

A_NH₂ ⁽RH

U N COOH ² H

D-asparagín

NH, (RH

CF₃CONH'L' COOH H (XXXVII)

C=N

NH,

CFjCONH'' 1 'COOMe (XXXIX)

HN^-

.. NHCOCF₃ (R)

CF,CONH'T^ COOMe

P¹

(XXVII)’(R)

-38Schéma 5 - pokračovanie f (XXVIII)’(R) ▼

OEt

OSÍ(alkyl)₃ (XXX)¹ ◄g

(XXIX)’(R) (XXIII) (3S, 3aS, 6aR)

Stupeň a

Túto reakciu je možné uskutočniť pôsobením metyltrifluóracetátu v polárnom rozpúšťadle, napríklad metanole v prítomnosti bázy, ako je trietylamín.

Stupeň b

Reakcia môže byť uskutočnená pôsobením ecetylchloridu a príslušného alkoholu, napríklad metanolu pri nízkej teplote, typicky pod 0 °C.

Stupeň c

Ide o dehydratačnú reakciu, ktorá sa uskutočňuje pôsobením tosylchloridu v prítomnosti pyridínu v inertnom rozpúšťadle.

-39Stupeň d

Táto redukčná cyklizačná reakcia sa uskutočňuje tak, že sa mieša roztok zlúčeniny všeobecného vzorca XXXIX v polárnom protickom rozpúšťadle, ako etanole v atmosfére vodíka v prítomnosti kovového katalyzátora, ako 5% rodia na oxide hlinitom.

Stupne e až g

Reakcie sa vykonávajú rovnako ako stupne iv) až vi) vo vyššie uvedenej schéme 2.

Stupeň h

Túto deprotekčnú reakciu je možné uskutočňovať pôsobením bázy, napríklad uhličitanu draselného.

Stupeň i

Uzavterie kruhu je možné uskutočniť pôsobením terc.butylmagnéziumchloridu v inertnom rozpúšťadle, napríklad THF v prítomnosti tetrametyletyléndiamíne podľa schémy 1, stupeň x). Zlúčeniny vzorca XXVIII(R) je možné získať z (R)-metionínu tiež spôsobom podľa schémy 6.

Schéma 6

SMe

SMe (ii)

SMe

H-.hr^COOH (R)-metionín

P²,nh cooh

P².nh

CONH.

'2 (XLI) (XLII)

-40(iv)

Schéma 6 - pokračovanie ⁴SMeRX‘

O»)

SMe

P²,nh'^xxconh P¹ (XLIV)

P¹ \ U NHCOCFj

Ά^) (XXVIII)¹(R)

P²NH CONHP¹ (XUII) (XLV)(R)

Stupeň i)

Ide o bežnú reakciu zavedenia ochrannej skupiny. V prípade, že P² znamená BOC, je možné skupinu naviazať pôsobením (BOC)₂O v prítomnosti bázy, napríklad NaOH v polárnom rozpúšťadle, napríklad v zmesi dioxánu a vody.

Stupeň ii)

Premenu je možné uskutočniť pôsobením hydrogénuhličitanu amónneho v prítomnosti vhodného rozpúšťadla, napríklad zmesi pyridínu a dimetylformamidu v prítomnosti (BOC)₂O alebo vhodného ekvivalentu tejto látky.

Stupeň iii)

Túto bežnú reakciu, najmä v prípade, že P¹ znamená CBZ, je možné uskutočniť reakciou s nBuLi a potom s CBZ-CI v prítomnosti inertného rozpúšťadla, ako THF pri teplote nižšej ako -50 °C.

-41Stupeň iv)

Reakciu je možné uskutočniť pôsobením zlúčeniny RX, schopnej premeniť síru v skupine SMe na sulfóniovú skupinu, napríklad môže ísť o Mel, benzyljodid alebo Me₂SO₄ vo vhodnom rozpúšťadle, napríklad propanónu alebo acetonitrilu. R bude zvyčajne znamenať alkyl alebo aralkyl a X znamená atóm halogénu, najmä jódu alebo zvyšok kyseliny sírovej. Pre túto reakciu je vhodné chrániť amidovú skupinu, aj keď to nie je celkom nevyhnutné.

Stupeň v)

Uzáver kruhu je možné uskutočniť pôsobením živice Dowex 2 x 8 v OH‘ forme s veľkosťou častíc 400 mesh vo vhodnom rozpúšťadle, ako je metylkyanid. Uzavretie kruhu je možné dosiahnuť aj pôsobením uhličitanu draselného vo vhodnom rozpúšťadle, napríklad metylkyanide.

Stupeň vi)

Ochrannú skupinu je možné odstrániť zvyčajným spôsobom, napríklad v prípade skupiny BOC pôsobením HCI, napríklad v dioxáne.

Stupeň vii)

Reakciu je možné uskutočniť pôsobením kyseliny trifluóroctovej vo forme alkylesteru, napríklad metylesteru v prítomnosti bázy, napríklad N-metylmorfolínu.

Je zrejmé, že reakcie podľa schém 5 a 6 je možné uskutočniť aj použitím (L)-asparagínu a (S)-metionínu za vzniku enantiomérov zlúčenín, uvedených v týchto schémach. Je tiež možné použiť racemické východiskové látky, produkt je potom možné rozdeliť.

u

V prípade, že sa podľa schémy 6 pripravia z racemického metionínu racemické zlúčeniny vzorca XLV, je možné izoméry týchto látok rozdeliť dynamickým postupom. Na racemické zlúčeniny vzorca XLV sa pôsobí

-42homochirálnou kyselinou di-p-toluolylvinnou v prítomnosti 3,5-dichlór-2hydroxybenzaldehydu ako katalyzátora v inertnom rozpúšťadle, ako je THF. Získa sa homochirálna soľ zlúčeniny vzorca XĽV. Zlúčeniny vzorca XXVIII¹ je potom možné získať pôsobením metylesteru kyseliny trífluóroctovej v prítomnosti Nmetylmorfolínu.

Zlúčeniny vzorca XXIII zo schémy 1, v ktorých R² je izopropyl, je možné v homochirálnej forme získať podľa nasledujúcej schémy 7:

Schéma 7

OMe

zlúčenina z

J. Org. Chem., 1970, 3140

1.

Y

L— COCI

EtjN, toluén 2. HCI (vodná)

MeSOjCI

E^N

Chirálna HPLC

Chiracel OD-H EtOH v heptáne 7 % objemových

(racemický) (XLVII)

(XLIX)

OMe

-43Schéma7 -pokračovanie

1. Pd/C, NH₄HCO₃

2. TMS-Cl/IMS

3. (BOC)₂O/B₃N

o

1. HCl. £ }

2. NajCOj/lMS

3. CBZ-Cl/EtjN

(XXIIlf (SSR)

-44Je zrejmé, že je možné pripraviť aj enantiomér (RRS) zlúčeniny vzorca XXIII¹ po izoláciu opačného enantioméru z chirálnej HPLC v treťom stupni.

Zlúčeninu vzorca LVI zo schémy 7 je možné pripraviť aj spôsobom podľa schémy 8:

Schéma 8

CHO

xHjO

(iii) kryštalizácia

(LIX)

MeSOjCI,

EijN.DCM

1. OsO₄, NalO₄

2. NaBH₄

IMS

-45Schéma 8 - pokračovanie

Je zrejme, že spôsob podľa vyššie uvedenej schémy 8 by bolo možné upraviť aj tak, aby bolo týmto spôsobom možné pripraviť zlúčeniny s opačnou chiralitou.

Odborníkom v danej oblasti techniky bude tiež celkom zrejmé, že vyššie uvedené postupy na výrobu derivátov všeobecného vzorca I je možné ešte modifikovať napríklad tak, že sa nepoužijú ochranné skupiny alebo sa použijú iné ochranné skupiny tak, ako sú opísané napríklad v publikácii T. W. Greene, Protective Groups Inorganic Synthesis, 2. vydanie, (1991), J. Wiley and Sons a tak dosiahnuť v praxi optimálne podmienky na výrobu derivátov podľa vynálezu.

Rad opísaných medziproduktov z vyššie uvedených schém sú nové látky, ktoré tiež tvoria súčasť podstaty vynálezu. Ide najmä o nové zlúčeniny všeobecného vzorca II a ďalej o zlúčeniny vzorcov II¹, III, IV, V, VI, VII, VIII, IX, X, XI, XII, XVI, XVII, XVIII, XIX, XX, vrátane XX¹ a XX², XXI, vrátane XXI¹, XXII, XXIIa, XXIII, vrátane XXIII¹, XXIIIa, XXVII, vrátane XXVII¹, XXVIII, vrátane XXVIII¹, XXIX, vrátane XXIX¹, XXX, XXXIV až XL, XLII až XLIV a XLVI až LXII, ich deriváty, zbavené ochranných skupín a tiež deriváty, v ktorých je najmenej jeden atóm dusíka chránený ochrannou skupinou a/alebo je karboxylová skupina chránená vo forme alkylesteru s 1 až 6 atómami uhlíka v alkylovej časti, výhodne etylesteru. Ako výhodné ochranné skupiny je možné uviesť CBZ, BOC a trifluóracetylovú skupinu. Zvyčajne je výhodné chrániť dusíkový atóm v pyrolidínovom alebo pyrolidínónovom kru zavedením ochrannej skupiny CBZ, Všetky uvedené medziprodukty môžu byť tiež použité vo forme svojich solí. Okrem toho môžu tieto medziprodukty byť vo forme racemických zmesí alebo vo forme jednotlivých enantiomérov.

Nové chirálne medziprodukty, uvedené vo vyššie opísaných chirálnych postupoch a postupoch na delenie výsledných produktov tiež tvoria súčasť podstaty vynálezu.

Súčasť podstaty vynálezu tvoria tiež spôsoby výroby nových medziproduktov.

Zvlášť významné sú medziprodukty všeobecného vzorca II, III, V, XX, XXII, XXIIa, XXIII, XXIIla, XXVIII a XXIX a ich deriváty, zbavené ochranných skupín a tiež deriváty, v ktorých je najmenej jeden atóm dusíka chránený ochrannou skupinou a/alebo je chránená karboxylová skupina vo forme alkylesteru s 1 až 6 atómami uhlíka v alkylovej časti. Zvlášť sú tieto látky cenné vo forme jednotlivých čistených enantiomérov.

Praktické uskutočnenie vynálezu bude vysvetlené nasledujúcimi príkladmi, ktoré však nemajú slúžiť na obmedzenie rozsahu vynálezu.

Skratky

BOC

CBZ

DCM (BOC)₂O

Et₃N

Py-Ts

PPh₃

DEAD

THF

TFA

NaH

LHMDS

DMPU

DMAP

NBS

AIBN

DMF

EDC

CAN t-butyloxykarbonyl benzyloxykarbonyl dichlórmetán di-terc.butyldikarbonát trietylamín pyridínium-p-toluénsulfonát trifenylfosfín dietylazokarboxylát tetrahydrofurán kyselina trifluóroctová hydrid sodný bis(trimetylsilyl)amid sodný

1,3-dimetyl-3,4,5,6-tetrahydro-2-(1 H)-pyridinón

4-dimetylaminopyridín

N-brómsuIcínimid azoizobutyronitril dimetylformamid

1-(3-N,N-dimetylaminopropyl)-3-etyl-karbodiimid dusičnan cernatoamónny

-47Príkladv uskutočnenia vynálezu

Príprava medziproduktov

Medziprodukt 1 benzylester (4,4-dietoxybutyl)karbamovej kyseliny

Do energicky miešanej zmesi 910 ml 4-aminobutyr-aldehyd-dietylacetálu v 3 I dichlórmetánu a 3 I 1M vodného roztoku uhličitanu sodného sa postupne po troch častiach pridá roztok 260 ml benzylchlórmravčanu v 170 ml dichlórmetánu. Reakčná zmes sa 50 minút mieša do úplného vývoja plynu. Po pridaní 40 ml N-(2aminoetyl)piperazínu sa reakčná zmes mieša ďalších 75 minút. Podiely sa oddelia a organický podiel sa premyje 3,8 I 1M vodného roztoku kyseliny citrónovej a 2 I nasýteného vodného roztoku hydrogénuhličitanu sodného. Reakčná zmes sa suší nad síranom horečnatým, filtruje sa a zahustí vo vákuu za vzniku 1,6 kg žltého oleja výslednej zlúčeniny.

TLC (éter): Rf 0,5.

Medziprodukt 2 terc.butylester benzyloxykarbonyl-(4,4—dietoxybutyl)-karbamovej kyseliny

Do miešanej zmesi 84 ml medziproduktu 1, 42 ml trietylamínu a 37 g 4dimetylaminopyridínu v 150 ml etylacetátu sa po kvapkách pridá roztok 138 ml diterc.butyldikarbonátu v 150 ml etylacetátu. Reakčná zmes sa pod dusíkom mieša pri teplote miestnosti 19 hodín a potom sa ochladí v ľadovom kúpeli. Reakcia sa ukončí pridaním po kvapkách 250 ml 2M roztoku zriedenej kyseliny chlorovodíkovej pri zaistení vnútornej teploty reakčnej zmesi pod 25 °C. Podiely sa oddelia a organický podiel sa premyje 200 ml 1M roztoku kyseliny chlorovodíkovej a 200 ml vody, suší sa nad síranom horečnatým, filtruje sa a zahustí vo vákuu za vzniku 144,81 g oranžového oleja výslednej zlúčeniny.

TLC (éter/hexán = 1:1): Rf 0,45.

-48Medziprodukt 3 terc.butylester kyseliny benzyloxykarbonyl-(3-formyl-propyl)karbamovej

Do miešaného roztoku 144,78 g medziproduktu 2 v zmesi 400 ml acetónu a 100 ml vody sa pridá 7,5 g pyridínium p-toluénsulfonátu. Vytvorená zmes sa zahreje na teplotu 50 °C a v miešaní sa pokračuje 5,5 hodín. Acetón sa odstráni vo vákuu a na vodný zvyšok sa pôsobí 1 I éteru. Po oddelení podielov sa organický podiel premyje 200 ml vody, suší sa nad síranom horečnatým, filtruje sa a zahustí vo vákuu za vzniku 110 g oranžového oleja výslednej zlúčeniny.

TLC (éter:hexán = 1:1); Rf 0,3.

Medziprodukt 4 metylester kyseliny 6-(benzyloxykarbonyl-terc.butoxykarbonylamino)-4-hydroxy-hex2-énovej

Do miešaného roztoku 267,5 g 2-fenylsulfinylacetátu a 160 ml piperidínu v 2 I bezvodého acetonitrilu sa pod dusíkom po kvapkách pridá roztok 520 g medziproduktu 3 v 1 I bezvodého acetonitrilu. Reakčná zmes sa pod dusíkom mieša 15 hodín pri teplote miestnosti. Po zahustení vo vákuu vznikne hnedý olej, ktorý sa rozdelí medzi 3 I etylacetátu a dvakrát 1,5 I 1N roztoku zriedenej kyseliny chlorovodíkovej. Organický podiel sa premyje 1 I vody a 500 ml nasýteného roztoku chloridu sodného, suší sa nad síranom horečnatým a zahustí sa vo vákuu za vzniku

889,4 g hnedého oleja, ktorý sa po absorpcii na kolónu silikagélu čistí chromatografiou pri elúcii gradientom pomerov od 9:1 do 1:1 zmesou hexánu a izopropylacetátu za vzniku 273,5 g žltého oleja výslednej zlúčeniny.

TLC (etylacetát:hexán = 1:1): Rf 0,41.

Medziprodukt 5 metylester kyseliny 6-(benzyloxykarbonyl-terc.butoxykarbonylamino)-4-(1,3-dioxo1,3-dihydroizoindol-2-yl)-hex-2-énovej

I

-49Do miešanej zmesi 173 g trifenylfosfínu, 97 g ftalimidu a 254,7 g medziproduktu 4 v 1,1 I bezvodého tetrahydrofuránu sa pod dusíkom pri teplote 4 až 6 °C po kvapkách pridá počas 2 hodín roztok 105 ml dietylazodikarboxylátu v 95 ml bezvodého tetrahydrofuránu. Reakčná zmes sa mieša 2 hodiny pri teplote 4 °C, nechá sa počas 4 hodín zohriať na teplotu miestnosti a následne sa nechá cez noc stáť v atmosfére dusíka. Po zahustení zmesi vo vákuu sa vytvorený zvyšok rozotrie s 1 I t-butylmetyléteru a v kúpeli ľadu a vody sa ochladí na teplotu 5 °C. Vznikne zrazenina trifenylfosfínoxidu, ktorá sa oddelí filtráciou, dvakrát sa premyje 200 ml ľadovo studeného t-butylmetyléteru a odloží sa. Filtrát sa zahustí vo vákuu za vzniku 428,06 g oranžového oleja, ktorý sa po absorpcii na 9 kg kolóny silikagélu s veľkosťou 28 x 32,5 cm (Merck 9385) čistí chromatografiou pri elúcii zmesou hexánu a etylacetátu v pomere 2:1 za vzniku 281,63 g špinavo bielej tuhej látky vo viskóznom žltom oleji. Tento produkt sa rozotrie v 1,2 I zmesi etylacetátu a hexánu v pomere 1:1 za vzniku tuhej látky, ktorá sa oddelí filtráciou a odloží sa. Po zahustení filtrátu vo vákuu sa vytvorí 270,2 g viskózneho žltého oleja výslednej zlúčeniny.

TLC (etylacetát:hexán = 1:2): Rf 0,29.

Medziprodukt 6 metylester kyseliny 6-benzyloxykarbonylamino-4-(1,3-dioxy-1,3-dihydro-izoindol-2yl)-hex-2E-énovej

Do miešaného roztoku 251,5 g medziproduktu 5 v 2,6 I bezvodého dichlórmetánu sa v atmosfére dusíka pri teplote 5 °C po kvapkách počas 10 minút pridá 148 ml kyseliny trifluóroctovej. Reakčná zmes sa mieša 2 hodiny. Chromatografiou na tenkej vrstve sa overí dokonalé spotrebovanie počiatočnej zlúčeniny a reakcia sa ukončí pomalým pridávaním (asi 20 minút) 750 ml 1M vodného roztoku uhličitanu sodného. Zmes sa mieša do skončenia vývoja plynu. Po oddelení podielov sa organický podiel premyje 750 ml nasýteného vodného roztoku hydrogénuhličitanu sodného a 500 ml nasýteného roztoku chloridu sodného. Po sušení nad síranom horečnatým sa produkt filtruje a zahustí vo vákuu za vzniku

204,5 g viskóznej žltej gumy.

-50TLC (etylacetát:hexán = 2:3): Rf 0,24.

Medziprodukt 7 benzylester kyseliny trans-3-(1,3-dioxy-1,3-dihydro-izoindol-2-yl)-2-metoxykarbonylmetylpyrolidín-1 -karboxylovej

Do miešaného roztoku 182,5 g medziproduktu 6 v 2,8 I bezvodého tetrahydrofuránu s teplotou 4 °C sa pod dusíkom pridá 4,3 g 60% disperzie hydridu sodného v minerálnom oleji. Po 1 hodine sa vykoná chromatografia na tenkej vrstve (TLC), ktorá dokázala výraznú prítomnosť východiskového materiálu, takže sa pridá ďalších 4,3 g (107,5 mmol) 60% disperzie hydridu sodného a reakčná zmes sa mieša 2 hodiny pod dusíkom pri teplote 4 °C. Podľa následnej chromatografie na tenkej vrstve reakcia opäť neprebehla a preto sa reakčná zmes nechala počas 30 minút zohriať na teplotu 10 °C a v miešaní sa pokračuje 1 hodinu. Chromatografiou na tenkej vrstve sa dokáže určitý priebeh reakcie, pridá sa ďalších 2,15 g 60% disperzie hydridu sodného v minerálnom oleji a reakčná zmes sa 1 hodinu mieša pri teplote 10 °C. Chromatografia na tenkej vrstve dokáže ukončenie reakcie. Reakcia sa skončí pridávaním najskôr po kvapkách 1,6 I nasýteného vodného roztoku chloridu sodného v pomere 2:3, pričom vývoj plynu s pridávaním postupne ustáva. Po oddelení podielov sa vodný podiel dvakrát extrahuje 1 I etylacetátu. Organický podiel sa zlúči, premyje sa 1 I nasýteného roztoku chloridu sodného, suší sa cez noc nad síranom horečnatý, filtruje sa a zahustí vo vákuu za vzniku 159,91 g viskózneho žltého oleja výslednej zlúčeniny.

TLC (etylacetát:hexán = 2:3): Rf 0,26.

Medziprodukt 8 benzylester kyseliny trans-3-amino-2-metoxykarbonyl-metylpyrolidín-1 -karboxylovej

Do miešaného roztoku 150,2 g medziproduktu 7 v 700 ml etanolu sa pod dusíkom pridá 22 ml 55% roztoku hydrátu hydrazínu. Vytvorí sa zmes, ktorá sa mieša a 3 hodiny zahrieva pod refluxom v atmosfére dusíka. Reakčná zmes sa nechá ochladiť cez noc za vytvorenia nerozpustnej tuhej látky, ktorá sa oddelí

-51filtráciou, premyje sa 160 ml etanolu a odloží sa. Filtrát sa zahustí vo vákuu a zvyšok sa rozdelí do 800 ml etýlacetátu a 500 ml 1M roztoku riedenej kyseliny chlorovodíkovej. Filtráciou sa oddelí tuhá látka, ktorá sa premyje 300 ml 1M roztoku zriedenej kyseliny chlorovodíkovej a tiež sa odloží. Vodný premývací podiel sa znova extrahuje a tiež sa odloží. Vodný premývací podiel sa znova extrahuje roztokom etýlacetátu. Vodné kyslé extrakty sa zlúčia, premyjú sa 400 ml etýlacetátu a neutralizujú sa na pH približne 8 350 ml 2M vodného roztoku hydroxidu sodného a 100 ml 1M vodného roztoku uhličitanu sodného, produkt sa extrahuje štyrikrát 500 ml etýlacetátu, extrakty sa zlúčia, premyjú sa 300 ml nasýteného roztoku chloridu sodného, sušia sa cez noc nad síranom horečnatým, filtrujú sa a zahustia vo vákuu za vzniku 62,5 g žltého oleja výslednej zlúčeniny.

TLC (etylacetáthexán = 9:1): Rf od 0,25 do 0,09.

Medziprodukt 9 benzylester kyseliny trans-3-terc.butoxykarbonylamino-2-metoxykarbonyl-metylpyrodlidín-1 -karboxylovej

Do miešaného roztoku 80,77 g medziproduktu 8 a 44 ml trietylamínu v 950 ml bezvodého acetonitrilu sa po kvapkách pridá v atmosfére dusíka roztok 69 g diterc.butyl-dikarbonátu v 500 ml bezvodého acetonitrilu. Reakčná zmes sa 5,5 hodiny mieša pri teplote miestnosti a cez noc sa pod dusíkom pri teplote miestnosti nechá stáť. Reakčná zmes sa zahustí vo vákuu a vzniknutých 141,7 g zvyšku sa rozdelí do 650 ml 1M roztoku zriedenej kyseliny chlorovodíkovej a 1,3 I etýlacetátu. Vodný podiel sa znova extrahuje 650 ml etýlacetátu. Organické extrakty sa zlúčia, premyjú sa 500 ml nasýteného roztoku chloridu sodného, sušia sa nad síranom horečnatým, filtrujú sa a zahustia vo vákuu za vzniku 120,5 g červenohnedého oleja. Tento produkt sa po absorpcii na 1,2 kg kolóny silikagélu s veľkosťou 11x18 cm (Merck 9385) čistí chromatografiou pri elúcii zmesou hexánu a etýlacetátu v pomere 2:1 za vzniku 98,23 g svetložltého oleja. Produkt státím kryštalizuje na 90,85 g špinavobielej tuhej látky, ktorá sa rozotrie s 250 ml zmesi éteru a hexánu v pomere 1:4 za vzniku 81,16 g bielej tuhej látky s teplotou topenia 73 až 74 °C.

TLC (etylacetáthexán = 1:2): Rf 0,21.

-52Medziprodukt 10 benzylester kyseliny rel-(2R,3S)-3-terc.butoxykarbonylamino-2-(1 R-metoxykarbonylbut-3-enyl)-pyrolidín-1-karboxylovej

Do miešaného roztoku 9,81 g medziproduktu 9 v zmesi 54 ml bezvodého tetrahydrofuránu a 120 ml 1,3-dimetyl-3,4,5,6-tetrahydro-2-(1H)-pyrimidónu sa pri vnútornej teplote zmesi -71 °C ± 1 °C sa v atmosfére dusíka po kvapkách 65 minút pridáva roztok 80 ml 1M roztoku bis(trimetylsilyl)amidu lítneho v tetrahydrofuráne. Reakčná zmes sa 1 hodinu mieša pri teplote pod -70 °C. Pri vnútornej teplote zmesi -71 °C ± 1 °C sa počas 5 minút pridá 2,8 ml alyljodidu a vytvorená zmes sa mieša 2 hodiny pri teplote pod -70 °C. Reakcia sa ukončí pridaním po kvapkách 20 ml nasýteného vodného roztoku chloridu amónneho a zmes sa nechá zohriať na 0 °C. Po pridaní ďalších 20 ml vodného roztoku chloridu amónneho sa vytvorená zmes štyrikrát extrahuje 100 ml etylacetátu. Organické extrakty sa zlúčia, zahustia sa vo vákuu na žltý olej, ktorý sa rozdelí v 200 ml toluénu a 100 ml vody. Organický podiel sa dvakrát premyje 80 ml vody a raz 80 ml nasýteného roztoku chloridu sodného, suší sa nad síranom sodným, filtruje sa a zahustí vo vákuu za vzniku 15,69 g oranžového oleja, ktorý sa po absorpcii na 700 g kolónu silikagélu s veľkosťou 13x14 cm (Merck 9385) čistí chromatografiou pri elúcii zmesou hexánu a etylacetátu v pomere 7:3 za vzniku 7,7 g bezfarebného oleja výslednej zlúčeniny.

TLC (etylacetát:hexán = 3:7): Rf 0,24.

Medziprodukt 11 benzylester kyseliny rel-(2R,3S)-3-terc.butoxykarbonylamino-2-(1 R-karboxy-but-3enyl)-pyrolidín-1-karboxylovej

Do miešaného roztoku 32,17 g medziproduktu 10 v 400 ml etanolu sa pridá roztok 45 g hydroxidu draselného v 400 ml vody. Vytvorená zmes sa 5 hodín mieša pri teplote 55 °C a v atmosfére dusíka. Etanol sa z reakčnej zmesi odstráni vo vákuu a vytvorená zmes sa okyslí na pH približne 2 pridaním 400 ml 2M roztoku zriedenej kyseliny chlorovodíkovej. Reakčná zmes sa trikrát extrahuje 500 ml etylacetátu,

-53extrakty sa zlúčia, sušia sa nad síranom horečnatým, filtrujú sa a zahustia vo vákuu za vzniku 29 g bezfarbeného oleja výslednej zlúčeniny.

TLC (etylacetát:hexán = 3:7): Rf od 0,30 do 0,12.

Medziprodukt 12 hydrochlorid benzylesteru kyseliny rel-(2R,3S)-3-amino-2-(1R-karboxy-but-3-enyl)pyrolidín-1-karboxylovej

V 300 ml 4M chlorovodíka v dioxáne sa rozpustí 29 g medziproduktu 11. Reakčná zmes sa 3 hodiny mieša pri teplote miestnosti v atmosfére dusíka. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a 25,56 g vytvoreného zvyšku sa dvakrát rozotrie s 80 ml éteru. Vznikne 22,03 g bielej tuhej látky s teplotou topenia 158 až 159 °C.

Medziprodukt 13 benzylester kyseliny rel-(3aS,6R,6aR)-6-alyl-5-oxo-hexahydro-pyrolo[3,2-b]pyrol-1 karboxylovej

Do miešaného roztoku 2,73 g medziproduktu 12 a 1,3 ml N,N-diizopropyletylamínu v 1,25 ml bezvodého dichlórmetánu sa pri teplote miestnosti a v atmosfére dusíka naraz pridajú 3 g 2-chlór-1-metylpyridíniumjodidu. Po 1 hodine sa pridá ďalších 2,6 ml Ν,Ν-diizopropyletylamínu, reakčná zmes sa mieša 4 hodiny a potom sa nechá stáť 16 hodín. Roztok sa dvakrát premyje 75 ml 1M roztoku zriedenej kyseliny chlorovodíkovej a raz 75 ml vody, suší sa nad síranom sodným, filtruje sa a zahustí vo vákuu za prítomnosti 5 g silikagélu. Tuhá vzorka sa po absorpcii na kolónu silikagélu (Merck 9385) čistí chromatografiou na kolóne silikagélu (Merck 9385) čistí chromatografiou pri elúcii zmesou etylacetátu a hexánu v pomere 3:1 za vzniku žltej tuhej látky, tento produkt sa rozotrie s 20 ml a s 10 ml éteru za vzniku 1,664 g smotanovej bielej tuhej látky s teplotou topenia 159,5 až 160 °C.

Medziprodukt 14 rel-(3R,3aR,6aS)-1-(naftalén-2-sulfonyl)-3-propyl-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón

-54Pri teplote miestnosti a za prítomnosti 2,0 g hydroxidu paladnatého a 3,5 g aktivovaných sít 4Ĺ sa hydrogenuje roztok 1,45 g produktu z príkladu 1 v 200 ml etylacetátu pri tlaku vodíka 0,1 MPa. Po 8 hodinách sa katalyzátor filtruje cez hyflo a premyje sa 10 ml etylacetátu. Filtrát sa zahustí vo vákuu a do zvyšku sa pridá 10 ml éteru, ktorý sa následne odstráni vo vákuu. Vznikne 985 mg svetlohnedej peny výslednej zlúčeniny.

TLC (metanol:etylacetát = 3:7): Rf 0,49.

Medziprodukt 26 rel-(3R,3aR,6aS)-1-metánsulfonyl)-3-propyl-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón

Za prítomnosti 60 mg zvlhčeného 20% hydroxidu paládia na aktívnom uhli v 50 ml etylacetátu sa 4 hodiny hydrogenuje 517 mg produktu z príkladu 6. Katalyzátor sa odstráni filtráciou a filtrát sa zahustí za vzniku 323 mg bielej tuhej látky výslednej zlúčeniny.

TLC (dichlórmetán:metanol = 95:5): Rf 0,27.

Medziprodukt 27

3-morfolín-4-yl-propán-1-sulfonylchlorid-hydrochlorid

Do 4,4 g 4-morfolinopropánsulfónovej kyseliny sa pridá 10 ml tionylchloridu a následne 0,2 ml dimetylformamidu. Reakčná zmes sa 5 hodín mieša pod refluxom v atmosfére dusíka. Tionylchlorid sa odstráni vo vákuu a vytvorený zvyšok sa rozotrie s acetonitrilom. Po filtrácii vznikne biela tuhá látka, ktorá sa suší vo vákuu pri teplote 80 °C za vzniku 2,7 g bielej tuhej látky výslednej zlúčeniny.

Nájdené: C 31,9, H 5,9, N 5,1 %, vypočítané pre C₇H₁₄CINO₃S.HCI: C 31,8, H 5,7, N 5,3 %.

Medziprodukt 36

5-m-tolyl-1 H-tetrazol

-55Pri teplote 160 °C sa 2,5 hodiny zahrieva zmes 3,6 g azidu tribylcínu a 0,7 g

3-metylbenzonitrilu. Reakčná zmes sa ochladí a rozdelí sa do 80 ml 2N roztoku hydroxidu sodného, 30 ml vody a 50 ml dietyléteru. Éterový podiel sa odstráni a vodný podiel sa trikrát premyje 30 ml dietyléteru. Vodný podiel sa okyslí koncentrovanou kyselinou chlorovodíkovou a trikrát sa extrahuje 30 ml etylacetátu. Po sušení organických extraktov nad síranom horečnatým sa zvyšok zahustí vo vákuu za vzniku 0,933 g bielej tuhej látky s teplotou topenia 150 až 152 °C.

Medziprodukt 37

5-m-tolyl-2-trityl-2H-tetrazol

V 130 ml bezvodého dichlórmetánu sa rozpustí 12,7 g medziproduktu 36, 16,6 ml, 0,25 g 4-dimetylaminopyridínu a 22,1 g tritylchloridu. Reakčná roztok sa 48 hodín mieša pod dusíkom pri teplote miestnosti. Po filtrácii sa produkt zriedi 100 ml dichlórmetánu a roztok sa dvakrát premyje 150 ml 2M roztoku hydroxidu sodného a raz 100 ml nasýteného roztoku sulfátu meďnatého. Vznikne zrazenina, ktorá sa odstráni filtráciou a filtrát sa premyje 100 ml nasýteného roztoku chloridu sodného, suší sa nad síranom horečnatým a zahustí sa vo vákuu za vzniku 26,0 g svetlohnedej tuhej látky výslednej zlúčeniny.

TLC oxid kremičitý (hexán:dietyléter = 4:1): Rf 0,5.

Medziprodukt 38

5-(3-brómmetyl-fenyl)-2-trityl-2H-tetrazol

Pod refluxom sa 3 hodiny zahrieva zmes 2,0 g medziproduktu 37, 1,1 g Nbrómsukcínimidu a 87 mg azoizobutyronitrilu v 25 ml bezvodého tetrachlórmetánu. Reakčná zmes sa ochladí, zriedi sa 100 ml dichlórmetánu a sukcínimid sa odstráni filtráciou. Organický podiel sa dvakrát premyje 100 ml vody, suší sa nad síranom horečnatým a zahustí sa vo vákuu za vzniku 2,6 g špinavobielej peny výslednej zlúčeniny.

TLC oxid kremičitý (hexán:dietyléter = 4:1): Rf 0,44.

-56Medziprodukt 39

5-(3-chlórmetyl-fenyl)-2-trityl-2H-tetrazol

Pri teplote miestnosti sa 24 hodín mieša zmes 7,3 g medziproduktu 38 a 9,6 g chloridu lítneho v 300 ml bezvodého dimetylformamidu. Reakčný roztok sa vleje do 250 ml 10% roztoku chloridu lítneho a pridá sa 300 ml etylacetátu. Vodný podiel sa dvakrát extrahuje 150 ml etylacetátu a zlúčené organické extrakty sa sušia nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu za vzniku 6,6 g bielej tuhej výslednej zlúčeniny.

TLC oxid kremičitý (hexán:dietyléter = 4:1): Rf 0,44.

Medziprodukt 40

5-(3-chlórmetyl-fenyl)-1H-tetrazol

Pri teplote miestnosti sa 4 hodiny mieša zmes 6,5 g medziproduktu 39 v zmesi 300 ml etanolu, 50 ml dichlórmetánu a 7 ml koncentrovaného roztoku kyseliny chlorovodíkovej. Reakčný roztok sa zahustí vo vákuu a pridá sa 20 I vody. Reakčná zmes sa rozdelí do 200 ml éteru a 2N roztoku uhličitanu sodného. Vodný podiel sa dvakrát premyje 250 ml éteru, okyslí sa pridaním koncentrovanej kyseliny chlorovodíkovej a trikrát sa extrahuje 200 ml etylacetátu. Zlúčené extrakty sa sušia nad síranom horečnatým a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu za vzniku 2,1 g rúžovej tuhej látky výslednej zlúčeniny s teplotou topenia 152 až 154,5 °C.

Medziprodukt 41

Sodná soľ S-[3-(1H-tetrazol-5-yl)benzyl]esteru kyseliny tiosírovej

Do roztoku 1,1 g medziproduktu 40 v 5 ml metanolu a 4 ml etanolu sa pridá roztok 1,3 g tiosulfátu sodného v 10 ml vody. Suspenzia sa zahrieva pod refluxom 20 Hodín, ochladený roztok sa zahustí vo vákuu a zvyšok sa rozotrie so zmesou éteru a etylacetátu v pomere 3:1 za vzniku 1,3 g bielej tuhej látky výslednej zlúčeniny s teplotou topenia vyššou ako 250 °C.

-57Medziprodukt 42 [3-(1H-tetrazol-5-yl)fenyl]metánsulfonylchlorid

Suspenzia 1,3 g medziproduktu 41 v zmesi 20 ml zmesi ľadu a vody a 4 ml kyseliny octovej sa ochladí pri teplote nižšej ako 10 °C. Do miešanej zmesi, ktorej teplota sa udržuje pod 10 °C, sa nechá po dobu 40 minút rýchlo prechádzať chlór, pridá sa 200 ml etylacetátu a 200 ml vody. Vodný podiel sa dvakrát extrahuje 100 ml etylacetátu. Zlúčené organické extrakty sa dvakrát premyjú 100 ml 5% roztoku metahydrogénsiričitanu (metabisulfitu) sodného a suší sa nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu za vzniku 0,6 g bielej tuhej látky výslednej zlúčeniny.

Hmotnostné spektrum: MNH₄ ⁺ (vypočítané) 276;

MNH₄ ⁺ (nájdené) 276.

Medziprodukt 78

3-amino-pyrolidín-2-ón

Reakčná zmes 1 g medziproduktu 77, 70 ml vody a 16,4 ml Dowex (2x8 = 400 mesh) sa 1 hodinu mieša. Živica sa odstráni filtráciou a filtrát sa zahustí vo vákuu za vzniku 0,40 g bielej tuhej výslednej zlúčeniny.

TLC (etylacetát:metanol = 18:3): Rf 0,07.

Medziprodukt 79

2,2,2-trifluór-N-(2-oxo-pyrolidín-3-yl)acetamid

Do suspenzie sa počas 2 hodín uvedie 181 g medziproduktu 78, 218 ml metyltrifluóracetátu a 2,6 I metanolu. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu za vzniku 355 g smetanovoružovej tuhej látky výslednej zlúčeniny.

Hmotnostné spektrum: MNH₄ ⁺ nájdené 214, MNH₄ ⁺ vypočítané 214.

Medziprodukt 80 benzylester 2-oxo-3-(2,2,2-trifluóracetylamino)pyrolidín-1 -karboxyovej kyseliny

-58Do zmesi 3,5 g medziproduktu 79 a 100 ml tetrahydrofuránu sa pri teplote -70 °C pridá 20 ml hexametyldisilazidu lítneho. Po 0,25 hodine sa pridá 2,8 ml benzylchlórmravčanu a reakčná zmes sa 1 hodinu zahrieva na teplotu miestnosti. Po pridaní 25 ml 1M roztoku kyseliny chlorovodíkovej a extrakcii trikrát 25 ml etylacetátu sa zlúčené extrakty premyjú 2% roztokom amoniaku, 2M roztokom kyseliny chlorovodíkovej, nasýteným roztokom chloridu sodného a sušia sa nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlo sa odstráni a biela tuhá látka sa kryštalizuje zo zmesi etylacetátu a hexánu v pomere 5:1 za vzniku 4,2 g výslednej zlúčeniny.

TLC (etylacetát:metanol = 18:2): Rf 0,7.

Medziprodukt 81 benzylester 2-etoxy-3-(2,2,2-trifluóracetylamino)-pyrolidín-1 -karboxylovej kyseliny

Do roztoku 34 g medziproduktu 80 v 1070 ml etanolu sa pri teplote -5 °C pridá 9,86 g borohydridu sodného. Po kvapkách sa pridá 20 ml 4M roztoku chlorovodíka v 1,4 dioxánu. V ďalších častiach sa pravidelne pridáva dvakrát 5 ml a raz 10 ml 4M roztoku chlorovodíka v 1,4-dioxáne a 2 g borohydridu sodného. Po 3 hodinách sa pridá 11 ml koncentrovanej kyseliny sírovej a reakčná zmes sa zahreje na 2 hodiny na teplotu miestnosti. Pridá sa 300 ml nasýteného vodného roztoku hydrogénuhličitanu sodného, etanol a dioxán sa odstráni vo vákuu. Vytvorený zvyšok sa zriedi 500 ml vody a trikrát sa extrahuje 500 ml etylacetátu. Zlúčené extrakty sa premyjú nasýteným roztokom chloridu sodného a sušia sa nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa po absorpcii na kolóne silikagélu (Merck 9385) čistí rýchlou chromatografiou pri elúcii éterom za vzniku 21 g výslednej zlúčeniny.

Hmotnostné spektrum: MNH₄ ⁺ nájdené 378, MNH₄ ⁺ vypočítané 378.

Medziprodukt 82 benzylester trans-2-(1-etoxykarbonyl-2-metylpropyl)-3-(2,2,2-trifluóracetylamino)pyrolidín-1-karboxylovej kyseliny

-59Na teplotu 5 °C sa ochladí zmes 10 g medziproduktu 81, 11 ml etyltrimetylsilyl-izopropylketén-acetálu a 250 ml dichlórmetánu a počas štvrť hodiny sa pridá 17 ml bór-trifluorid-dieterátu. Po 1 hodine sa pridá ďalších 3,4 ml bór-trifluoriddieterátu a 11 ml keténacetálu. Po ďalšej 1 hodine sa pridá 200 ml 1M roztoku kyseliny chlorovodíkovej a organický podiel sa oddelí, premyje sa nasýteným roztokom chloridu sodného a suší sa nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu za vzniku 16,7 g výslednej zlúčeniny.

TLC (etyléter:cyklohexán = 2:1): Rf 0,18 a 0,27.

Medziprodukt 83 benzylester trans-3-amino-2-(1-etoxykarbonyl-2-metylpropyl)pyrolidín-1-karboxylovej kyseliny

Na teplotu 60 °C sa 3 hodiny zahrieva zmes 31 g medziproduktu 82, 71 g uhličitanu draselného, 930 ml vody a 930 ml etanolu. Etanol sa odstráni vo vákuu a vodný zvyšok sa trikrát extrahuje 300 ml etylacetátu. Zlúčené extrakty sa premyjú nasýteným roztokom chloridu sodného a sušia sa nad síranom horečnatým. Po zahustení vo vákuu vznikne 17,5 g hnedého oleja výslednej zlúčeniny.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 349, MH⁺ vypočítané 349.

Medziprodukt 84 benzylester rel-(3R,3aR, 6aS)-6-izopropyl-5-oxohexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-1karboxylovej kyseliny

Počas 0,5 hodiny sa do zmesi 17,5 g medziproduktu 83 v 1800 ml tetrahydrofuránu ochladenej na -5 °C pridá 204 ml 1M roztoku t-butylmagnéziumchloridu v tetrahydrofuráne. Po 2 hodinách sa pridá 250 ml 1M roztoku kyseliny chlorovodíkovej a 300 ml nasýteného roztoku chloridu sodného. Reakčná zmes sa extrahuje 250 ml etylacetátu. Extrakty sa vo vákuu zahustia na polovicu objemu, premyjú sa nasýteným roztokom chloridu sodného a sušia sa nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a vzniknutý zvyšok sa rozotrie so 60

-60ml dietyléteru za vzniku bielej tuhej látky, ktorá sa znova čistí kryštalizáciou z etylacetátu za vzniku 3,4 g výslednej zlúčeniny.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 303, MH⁺ vypočítané 303.

Medziprodukt 85 benzylester kyseliny rel-(3R,3aR,6aS)-6-izopropyl-4-metánsulfonyl-5-oxohexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-1-karboxylovej

Do miešaného roztoku 15,01 g medziproduktu 84 v 950 ml bezvodého tetrahydrofuránu sa v atmofére dusíka pri teplote -74 °C po kvapkách pridá 69,5 ml 1,0M roztoku hexametyldisilazidu lítneho v tetrahydrofuráne. Po 10 minútach miešania pri teplote -74 °C sa zmes nechá počas 45 minút zohriať na teplotu 0 °C. Po 20 minútach pri tejto teplote sa zmes znova ochladla na -76 °C a po kvapkách sa na zmes pôsobí 9,61 ml metánsulfonylchloridu. Vytvorená reakčná zmes sa zohreje na -50 °C a reakcia sa skončí pridaním 480 ml nasýteného roztoku chloridu amónneho. Reakčná zmes sa nechá zohriať na teplotu miestnosti. Reakčná zmes sa rozdelí do 300 ml vody a 750 ml etylacetátu, vodný podiel sa ďalej extrahuje 750 ml etylacetátu a zlúčené organické extrakty sa premyjú 450 ml nasýteného roztoku chloridu sodného, sušia sa nad síranom sodným a zahustia sa vo vákuu za vzniku okrovej tuhej látky. Tento produkt sa po absorpcii na kolónu silikagélu (Merck 9385) čistí rýchlou chromatografiou pri elúcii zmesou etylacetátu a cyklohexánu v pomeroch 1:3, 1:2, 1:1 a potom 3:1 za vzniku 13,65 g kryštalickej bielej tuhej látky výslednej zlúčeniny.

TLC (dichlórmetán): Rf 0,22.

Hmotnostné spektrum: MNH₄ ⁺ nájdené 398, MNH₄ ⁺ vypočítané 398.

Medziprodukt 86 rel-(3R,3aR, 6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón

Do suspenzie 13,63 g medziproduktu 85 v 900 ml etylacetátu sa pridá 3,16 g 20% hydroxidu paladnatého na aktívnom uhlí (zvlhčeného). Vytvorená čierna suspenzia sa energicky mieša v atmosfére vodíka pri teplote miestnosti 90 minút.

-61 Reakčná zmes sa filtruje cez Harborlite J2 a zahustí sa vo vákuu za vzniku 8,63 g jemného bieleho prášku výslednej zlúčeniny.

TLC (metanoLdichlórmetán = 1:9): Rf 0,50.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 247, MH⁺ vypočítané 247.

Medziprodukt 87 rel-4-(4-metánsulfonyl-5-oxo-6R-propylhexahydro-(3aS,6aR)-pyrolo[3,2-b]pyrol-1karbonyl)benzaldehyd

Do miešaného roztoku 100 mg medziproduktu 26 v 10 ml acetonitrilu sa pridá 121 mg 4-karboxybenzaldehydu, 109 mg 1-hydroxybenztriazolu a následne 156 mg 1-(3-dimetyl-aminopropyl)-3-etylkarbodiimidhydrochloridu. Vytvorená reakčná zmes sa 4 hodiny mieša pri teplote miestnosti. Za vzniku žltého oleja sa z reakčnej zmesi odstráni acetonitril. Olej sa rozpustí v 50 ml dichlórmetánu a roztok sa extrahuje 50 ml nasýteného vodného roztoku hydrogénuhličitanu sodného. Vodný podiel sa dvakrát extrahuje 15 ml dichlórmetánu. Zlúčené dichlórmetánové extrakty sa sušia nad síranom sodným, filtrujú sa a zahustia vo vákuu za vzniku surovej žltobielej peny, ktorá obsahuje výslednú zlúčeninu. Surová zmes sa po absorpcii na oxid kremičitý (Merck 9385) čistí rýchlou chromatografiou pri elúcii zmesou 1% metanolu v dichlórmetáne. Podiely sa zahustia vo vákuu za vzniku 131 mg bezfarebnej peny výslednej zlúčeniny.

TLC (metanoLdichlórmetán): Rf 0,77.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 379, MH⁺ vypočítané 379.

Medziprodukt 88 rel-(3R,3aR,6aS)-1-metánsulfonyl-3-propyl-4-undek-10-enoyl-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón

Do miešaného roztoku 900 mg medziproduktu 26 a 1,91 ml N,Ndiizopropyletylamínu sa v 10 ml bezvodého dichlórmetánu pod dusíkom pridá 682 mg 10-undekénovej kyseliny v 5 ml bezvodého dichlórmetánu a následne 1,87 g bróm-tris-pyrolidín-fosfónium-hexafluór-fosfátu. Reakčná zmes sa 2 hodiny mieša,

-62rozdelí sa do 100 ml dichlórmetánu a 100 ml 8% vodného roztoku hydrogénuhličitanu sodného. Podiely sa oddelia, vodný podiel sa ďalej extrahuje 100 ml dichlórmetánu, zlúčené organické podiely sa sušia nad síranom horečnatým a rozpúšťadlo sa odparí vo vákuu za vzniku žltej gumy. Tento zvyšok sa po absorpcii na kolónu silikagélu čistí rýchlou chromatografiou pri elúcii dietyléterom. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu za vzniku 1,31 g bielej tuhej látky výslednej zlúčeniny s teplotou topenia 62 až 64,5 °C.

TLC oxid kremičitý (dietyléter): Rf 0,43.

Medziprodukt 89 rel-10-(4-metánsulfonyl-5-oxo-6R-propylhexahydro-rel-(3aS,6aS)pyrolo[3,2-b]pyrol1 -y I)-10-oxodekanál

Miešaný roztok 1,28 g medziproduktu 88 v 45 ml bezvodého dichlórmetánu sa ochladí na -78 °C. Roztokom sa necháva prejsť bezvodý ozón do vzniku stálej tmavomodrej farby roztoku. Následne sa roztokom nechá 5 minút prebublávať kyslík a následne 5 minút dusík. Po pridaní 1,63 g trifenylfosfínu sa roztok cez noc mieša v atmosfére dusíka. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu za vzniku zvyšku, ktorý sa čistí rýchlou chromatografiou pri elúcii dietyléterom za vzniku 850 mg bielej tuhej látky výslednej zlúčeniny.

TLC oxid kremičitý (dietyléter): Rf 0,31.

Medziprodukt 90 rel-4-(4-metánsulfonyl-5-oxo-6R-propylhexahydro-(3aS,6aS)pyrolo[3,2-b]pyrol-1-yl)6-oxodekanál

TLC (éter: etylacetát = 4:1): Rf 0,18.

Výsledná zlúčenina sa pripraví podľa postupu uvedeného v príklade 89 za použitia medziproduktu 26 ako východiskovej zlúčeniny.

Medziprodukt 92

-63rel-(3R,3aR,6aS)-4-akryloyl-1-metánsulfonyl-3-propylhexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2ón

Do miešaného roztoku 158 mg medziproduktu 26 a 202 mg trietylamínu v 15 ml divchlórmetánu sa po kvapkách pridá roztok 140 mg 3-brómpropionylchloridu v 1 ml dichlórmetánu. Reakčná zmes sa 4,5 hodiny mieša pri teplote miestnosti, premyje sa 15 ml 8% roztoku hydrogénuhličitanu sodného, 15 ml 0,5M roztoku kyseliny chlorovdíkovej a 10 ml vody. Po sušení nad síranom sodným sa zvyšok filtruje a zahustí vo vákuu za vzniku 161 mg bieleho prášku výslednej zlúčeniny s tepltoou topenia 177 až 181 °C.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 301, MH⁺ vypočítané 301.

Vypočítané pre Ci3H₂%N₂O45: C 50,1, H 6,5, N 8,75, S 10,2%, nájdené: C 50,2, H 6,9, N 9,0, S 10,3%.

Medziprodukt 95 (1 -etoxy-3-metyl-but-1 -enyloxy)triizopropylsilán

Pri teplote -20 °C sa zmieša 100 ml tetrahydrofuránu a 140 ml 1,3-dimetyl3,4,5,6-tetrahydro-2-(1H)-pyrimidinónu a pridá sa 100 ml 1M roztoku lítiumbis(trimetylsilyl)amidu v tetrahydrofuráne. Reakčná zmes sa ochladí na teplotu -70 °C, pridá sa 18,75 ml etylizovalerátu a reakčná zmes sa mieša 0,5 hodiny pri teplote 70 °C. Po pridaní triizopropyl-silyl-trifluórmetánsulfonátu sa zmes mieša 0,5 hodiny pri teplote -75 °C, následne sa zahreje na teplotu miestnosti a reakčná zmes sa 3 hodiny mieša. Reakcia sa skončí pridaním 150 ml 8% vodného roztoku hydrogénuhličitanu sodného a extrahuje sa 1000 ml hexánu. Hexánový extrakt sa štyrikrát premyje 500 ml vody, suší sa nad síranom horečnatým, filtruje sa a zahustí vo vákuu za vzniku surového žltého oleja výslednej zlúčeniny, produkt sa čistí krátkou destiláciou pri tlaku 2 Pa a pri teplote 68 až 80 °C. Vznikne 15,69 g bezfarebného oleja výslednej zlúčeniny.

Teplota varu pri tlaku 2 Pa je 68 až 80 °C.

-64Medziprodukt 96

Poloamid kyseliny 2R-(2,2,2-trifluór-acetylamino)jantárovej

Do miešanej suspenzie 37,9 g D-asparagín (práškový, sušený 48 hodín pri teplote 110 °C) v 144 ml metanolu (sušeného 5 hodín cez sito 3Á) sa v atmosfére dusíka pridá 40,2 ml a následne 36 ml metyl-trifluóracetátu. Vytvorená zmes sa nechá miešať 48 hodín. Pridá sa 145 ml bezvodého metanolu, 115 g živice Dowex 50 v H⁺ forme (sušenej 24 hodín pri teplote 56 °C). Vytvorená zmes sa 10 minút mieša, filtruje sa a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu za vzniku surovej bielej tuhej látky, obsahujúcej výslednú zlúčeninu. Tento surový produkt sa zlúči s produktom vytvoreným rovnakým spôsobom. Po kryštalizácii z horúcej vody vznikne výsledná zlúčenina ako 106 g bielej kryštalickej tuhej látky výslednej zlúčeniny.

Hmotnostné spektrum: MNH₄ ⁺ nájdené 246, MNH₄ ⁺ vypočítané 246.

Medziprodukt 97 metylester kyseliny poloamidu kyseliny 2R-(2,2,2-trifluór-acetylamino)jantárovej

Miešaný roztok 95,14 g medziproduktu 96 v 1150 ml metanolu (metanol sa suší nad molekulárnym sitom 3Á) sa ochladí na teplotu -70 °C. Pomaly sa pridáva 162 ml acetylchloridu pri zachovaní teploty pod -60 °C. reakčná zmes sa nechá zohriať na -20 °C a potom sa pri rovnakej teplote nechá stáť 48 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu za vzniku číreho, bezfarebného oleja, obsahujúceho výslednú zlúčeninu. Po rozotrení s dietyléterom sa vytvorená tuhá látka nechá kryštalizovať z vriacej vody za vzniku 42 g kryštalickej tuhej látky výslednej zlúčeniny.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 243, MH⁺ vypočítané 243.

Medziprodukt 98 metylester kyseliny 3-kyano-2R-(2,2,2-trifluór-acetylamino)propiónovej

Do miešanej suspenzie 3,0 g medziproduktu 97 v 20 ml dichlórmetánu sa pridá 4,92 ml pyridínu a 4,92 g p-toluénsulfonylchloridu. Po pridaní 15 ml dichlórmetánu sa hnedý roztok 48 hodín mieša pri teplote miestnosti. Reakčná

-65zmes sa zriedi 25 ml dichlórmetánu, premyje sa 74 ml 1M vodného roztoku kyseliny trihydrogénfosforečnej, suší sa nad síranom sodným, filtruje sa a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu za vzniku 3,57 g surovej hnedej tuhej látky, obsahujúcej výslednú zlúčeninu. Surová zmes sa po absorpcii na oxid kremičitý (Merck 9385) čistí chromatografiou pri elúcii zmesou etylacetátu a cyklohexánu v pomere 1:3 a potom 1:2,5. Elučné činidlo sa odparí vo vákuu za vzniku 1,62 g bielej kryštalickej tuhej látky výslednej zlúčeniny.

TLC (etylacetát:cyklohexán = 1:1): Rf 0,5.

Hmotnostné spektrum: MNH₄ ⁺ nájdené 242, MNH₄ ⁺ vypočítané 242.

Medziprodukt 99

2,2,2-trifluór-N-(2-oxo-pyrolidín-3R-yl)acetamid

V atmosfére vodíka sa za prítomnosti 1,00 g 5% roztoku rodia na oxide hlinitom 3 hodiny mieša roztok 200 mg medziproduktu 98 v 10 ml etanolu. Katalyzátor sa odstráni filtráciou a filtrát sa zahustí vo vákuu za vzniku surovej gumy, ktorá obsahuje výslednú zlúčeninu. Reakčná zmes sa po absorpcii na oxid kremičitý (Merck 9385) čistí rýchlou chromatografiou pri elúcii acetonitrilom. Elučné činidlo sa odstráni odparovaním vo vákuu za vzniku 40 mg bielej tuhej látky výslednej zlúčeniny.

TLC (acetonitril): Rf 0,63.

Hmotnostné spektrum: MNH₄ ⁺ nájdené 214, MNH₄ ⁺ vypočítané 214.

Medziprodukt 100 benzylester kyseliny 2-oxo-3R-(2,2,2-trifluóracetylamino)-pyrolidín-1 -karboxylovej

Do miešaného roztoku 1,04 g medziproduktu 99 v tetrahydrofuráne, ochladeného na -70 °C, sa pridá 3,31 ml 1,6M roztoku n-butyllítia v zmesi hexánov. Po 5 minútach sa pridá 833 μΙ benzylchlórmravčanu a reakčná zmes sa nechá zohriať na teplotu miestnosti. Po 2,5 hodinách sa reakčná zmes zriedi 100 ml etylacetátu a dvakrát sa premyje 150 ml 1M roztoku kyseliny chlorovodíkovej. Zlúčené organické extrakty sa sušia nad síranom horečnatým, filtrujú sa a zahustia

-66vo vákuu za vzniku surovej tuhej látky, produkt sa čistí rozotrením s dietyléterom za vzniku 1,25 g bielej tuhej látky výslednej zlúčeniny.

Hmotnostné spektrum: MNH₄ ⁺ nájdené 348, MNH4⁺ vypočítané 348.

Chirálna HPLC (Chiracel AD; elučné činidlo: zmes etanolu a heptánu v pomere 15:85; rýchlosť prietoku 1 ml/minútu): doba retencie enantioméru R = 10,08 min, výťažok 71,8 %; doba retencie enantioméru S = 12,50 min. výťažok 28,2 %.

Medziprodukt 100 (alternatívna syntéza) benzylester kyseliny 2-oxo-3R-(2,2,2-trifluór-acetylamino)pyrolidín-1 -karboxylovej

Do suspenzie 195,5 g medziproduktu 155 v 1500 ml dichlórmetánu sa pridá 600 ml metanolu, následne 410 g metyltrifluóracetátu a nakoniec 97 g N-metylmorfolínu. Reakčná zmes sa pri teplote miestnosti 18 hodín mieša, zriedi sa 500 ml dichlórmetánu a pridá sa 1000 ml nasýteného roztoku chloridu amónneho. Po pridaní 250 ml 2N roztoku zriedenej kyseliny chlorovodíkovej sa zmes energicky 5 minút mieša. Podiely sa nechajú oddeliť, organický podiel sa zoberie a vodný podiel sa extrahuje 500 ml dichlórmetánu. Organické extrakty sa zlúčia a premyjú 1000 ml 2N zriedeného roztoku kyseliny chlorovodíkovej a 1000 ml nasýteného roztoku chloridu sodného, sušia sa nad síranom sodným a zahustia sa. Zvyšok sa rozotrie so zmesou 1000 ml éteru a cyklohexánu v pomere 1:1 za vzniku tuhej látky, ktorá sa oddelí filtráciou. Vytvorí sa 197,9 g svetlej ružovej tuhej látky výslednej zlúčeniny.

TLC (éter): Rf 0,46.

Hmotnostné spektrum: MNH₄ ⁺ nájdené 348, MNH₄ ⁺ vypočítané 348.

Medziprodukt 101 benzylester kyseliny 2-etoxy-3R-(2,2,2-trifluóracetylamino)pyrolidín-1 -karboxylovej

V 1 ml bezvodého tetrahydrofuránu sa rozpustí 100 mg medziproduktu 100, roztok sa ochladí na -20 °C a pridá sa 0,15 ml 2M roztoku bórhydridu lítneho v tetrahydrofuráne. Po 0,5 hodine sa pridá 1 ml etanolu a následne 33 μΙ kyseliny sírovej a vytvorený reakčný roztok sa nechá 3,5 hodín stáť pri teplote miestnosti.

-67pridaním nasýteného vodného roztoku hydrogénuhličitanu sodného sa privedie reakčná zmes na pH 8 až 9 a organické rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu. Zvyšok sa rozdelí do 20 ml etylacetátu a 10 ml vody. Vodný podiel sa extrahuje 10 ml etylacetátu. Zlúčené organické extrakty sa sušia nad síranom sodným, filtrujú sa a zahustia vo vákuu za vzniku 101 mg číreho oleja výslednej zlúčeniny, ktorý sa bez ďalšieho čistenia použije v nasledujúcej syntéze.

Hmotnostné spektrum: MNHZ nájdené 378, MNHF vypočítané 378.

Medziprodukt 101 (alternatívna syntéza) benzylester kyseliny 2-etoxy-3R-(2,2,2-trifluóracetylamino)-pyrolidín-1 -karboxylovej

Roztok 214,8 g medziproduktu 100 v 1200 ml bezvodého tetrahydrofuránu sa mieša a ochladí na -30 °C. Počas pridávania 336 ml 2,0M roztoku bórhydridu lítneho sa počiatočná teplota zvýši na -12 °C a následne sa udržuje pod -17 °C. Po 90 minútach sa k reakčnej zmesi pri -20 °C pridáva 760 ml etanolu, pričom teplota reakčnej zmesi sa udržuje pri teplote pod -19 °C. Do studenej zmesi sa pomaly pridáva 75 ml koncentrovanej kyseliny sírovej v 215 ml etanolu pri zachovaní vnútornej teploty zmesi pod -18 °C. Chladiaci kúpeľ sa odstráni a reakčná zmes sa mieša 90 minút pri zvýšení vnútornej teploty reakčnej zmesi na +15 °C. Opatrne sa 35 minút pridáva 1600 ml nasýteného roztoku hydrogénuhličitanu sodného a potom sa podiel prchavých látok odstráni vo vákuu. Vodný podiel sa extrahuje raz 1000 ml etylacetátu a následne dvakrát 800 ml etylacetátu. Zlúčené organické extrakty sa raz premyjú 800 ml nasýteného roztoku chloridu sodného, sušia sa cez noc nad síranom sodným a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu za vzniku 211,6 g výslednej zlúčeniny ako oranžového oleja.

TLC (metylénchlorid:dietyléter = 4:1): Rf 0,64 a 0,43.

Medziprodukt 102 benzylester kyselinu (2S,3R)-2-(rel-1 S-etoxykarbonyl-2-metylpropyl)-3-(2,2,2-trifluóracetylamino)pyrolidín-1-karboxylovej

-68Reakčná zmes 90 mg medziproduktu 101, 0,22 g medziproduktu 95 a 1,1 ml dichlórmetánu sa ochladí na teplotu 5 °C a pridá sa 0,15 ml bór-trifluorid-dieterátu. Po 55 minútach sa reakcia ukončí pridaním 15 ml 2M vodného roztoku hydrogénuhličitanu sodného. Zmes sa zriedi 10 ml dichlórmetánu a vodný podiel sa oddelí. Organický podiel sa premyje 10 ml nasýteného vodného roztoku chloridu sodného, suší sa nad síranom horečnatým, filtruje sa a zahustí vo vákuu za vzniku 106 mg bezfarebného oleja výslednej zlúčeniny.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 445, MH⁺ vypočítané 445.

Medziprodukt 102 (alternatívna syntéza) benzylester kyseliny (2S,3R)-2-(rel-1 S-etoxykarbonyl-2-metylpropyl)-3-(2,2,2-trifluóracetylamino)pyrolidín-1-karboxylovej

V atmosfére dusíka sa ochladí na 5 °C zmes 97,9 g medziproduktu 101, 233 g (Z)-(1-etoxy-3-metyl-but-1-enyl-oxyl)-triizopropylsilánu a 600 ml dichlórmetánu. Počas 15 minút sa pridáva 200 ml bór-trifluorid-dieterátu a po ďalších 15 minútach sa pridá 750 ml 2M roztoku uhličitanu sodného pri zachovaní teploty reakčnej zmesi pod 20 °C. Reakčná zmes sa následne filtruje cez Hyflo a tuhý materiál sa dvakrát premyje 200 ml dichlórmetánu. Premývacie podiely sa pridajú do zmesi dvoch podielov. Vodný podiel sa oddelí a dvakrát sa extrahuje 400 ml dichlórmetánu. Zlúčené extrakty sa dvakrát premyjú 250 ml nasýteného roztoku chloridu sodného, sušia sa nad síranom horečnatým a zahustia sa vo vákuu za vzniku výslednej zlúčeniny, obsahujúcej 154 g medziproduktu 103.

TLC oxid kremičitý (etylacetátcyklohexán = 1:3) Rf 0,49, (β-anomér) a 0,42 (aanomér).

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 445, MH⁺ vypočítané 445.

Medziprodukt 103 benzylester kyseliny (2S,3R)-3-amino-2-(1-etoxykarbonyl-2-metylpropyl)pyrolidín-1karboxylovej

-69K teplote refluxu sa 2,5 hodiny zahrieva zmes 97 mg medziproduktu 102, 300 mg uhličitanu draselného, 2 ml etanolu a 2 ml vody. Etanol a voda sa odparí vo vákuu a vytvorený zvyšok sa rozdelí do 10 ml etýlacetátu a 10 ml vody. Vodný extrakt sa privedie na pH 9 až 10 pridaním 2M vodného roztoku hydroxidu sodného a trikrát sa extrahuje 20 ml dietyléteru. Zlúčené organické extrakty sa sušia nad síranom horečnatým, filtrujú sa a zahustia vo vákuu za vzniku 56 mg číreho oleja výslednej zlúčeniny.

Medziprodukt 103 (alternatívna syntéza) benzylester kyseliny (2S,3R)-3-amino-2-(1-etoxykarbonyl-2-metylpropyl)pyrolidín-1karboxylovej

Reakčná zmes 153 g medziproduktu 102 (obsahujúca medziprodukt 103), 183,3 g uhličitanu draselného, 1000 ml etanolu a 1000 ml vody sa 5 hodín zahrieva pod refluxom. Organický podiel sa oddelí a zahustí vo vákuu. Zvyšok, vodný podiel a 200 ml nasýteného roztoku chloridu sodného sa dvakrát extrahuje 500 ml éteru a raz 250 ml éteru. Zlúčené extrakty sa znova trikrát extrahujú 500 ml 1M roztoku kyseliny chlorovodíkovej. Zlúčené kyslé extrakty sa privedú na pH 8 pridaním 150 g hydrogénuhličitanu sodného a raz sa extrahujú 600 ml dichlórmetánu a následne trikrát 300 ml dichlórmetánu. Zlúčené dichlórmetánové extrakty sa sušia nad síranom horečnatým a zahustia sa vo vákuu za vzniku 87,9 g výslednej zlúčeniny. TLC oxid kremičitý (dichlórmetán:etanol:amoniak = 10:8:1) Rf 0,55.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 349, MH⁺ vypočítané 349.

Medziprodukt 104 benzylester (3aR,6S,6aS)-6-izopropyl-5-oxo-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-1 -karboxylovej kyseliny

V 1 ml tetrahydrofuránu a 1 ml tetrametyletyléndiamínu sa rozpustí 50 mg medziproduktu 103 a následne sa pridá 0,4 ml 1M roztoku t-butylmagnéziumchloridu v tetrahydrofuráne. Po 3 hodinách sa reakcia ukončí pridaním 1 ml nasýteného roztoku chloridu amónneho. Vodný podiel sa oddelí a extrahuje 4 ml

-70etylacetátu. Zlúčené organické extrakty sa odparia vo vákuu za vzniku zvyšku, ktorý sa rozdelí do 10 ml dichlórmetánu a 10 ml 2M roztoku kyseliny chlorovodíkovej. Vodný podiel sa oddelí a extrahuje trikrát 5 ml dichlórmetánu. Zlúčené organické extrakty sa sušia nad síranom horečnatým, filtrujú sa a zahustia vo vákuu za vzniku surovej bielej tuhej látky, ktorá obsahuje výslednú zlúčeninu. Tento produkt sa čistí rýchlou chromatografiou pri elúcii zmesou etylacetátu a cyklohexánu v pomere 1:1 za vzniku 16 mg tuhej látky výslednej zlúčeniny.

TLC (etylacetát:cyklohexán = 2:1): Rf 0,38.

Chirálna HPLC (kolóna Chiracel AD; elučné činidlo: zmes etanolu a heptánu v pomere 10:90; rýchlosť prietoku 1 ml/min): doba retencie SSR laktámu = 9,92 minút, výťažok 73,6 %; doba retencie RRS laktámu = 13,12 minút, výťažok 26,4 %.

Medziprodukt 104 (alternatívna syntéza) benzylester (3aR,6S,6aS)-6-izopropyl-5-oxo-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-1 -karboxylovej kyseliny

V atmosfére dusíka sa pri teplote 0 °C do zmesi 87 g medziproduktu 103, 800 ml tetrahydrofuránu a 800 ml N,N,N‘,N‘-tetrametyletyléndiamínu počas 40 minút pridá 750 ml 1M roztoku t-butylmagnéziumchloridu v tetrahydrofuráne. Za ďalšiu hodinu sa pridá 500 ml nasýteného roztoku chloridu amónneho, vodný podiel sa oddelí a extrahuje 250 ml etylacetátu. Zlúčené organické podiely sa zahustia vo vákuu a do vytvoreného zvyšku sa pridá 1000 ml 1M roztoku kyseliny chlorovodíkovej. Roztok sa trikrát extrahuje 500 ml etylacetátu. Zlúčené extrakty sa raz premyjú 250 ml nasýteného roztoku chloridu sodného, sušia sa nad síranom horečnatým a zahustia sa vo vákuu za vzniku 63,4 g hnedej tuhej látky, ktorá sa nechá kryštalizovať z etylacetátu za vzniku 29,5 g výslednej zlúčeniny.

TLC oxid kremičitý (etylacetát:metanol = 19:1): Rf 0,64.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 303, MH⁺ vypočítané 303.

Medziprodukty 104 a 111

-71 Chirálnou HPLC (5,08 cm Merck kolóna s tuhou fázou Chiralpak AD, elučné činidlo: 15% roztok etanolu v heptáne, rýchlosť prietoku 50 ml/min) sa rozdelí 1,40 g časť racemického medziproduktu 84 na enantioméry.

Medziprodukt 104 benzylester (3S,3aR,6aS)-6-izopropyl-5-oxo-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-1 -karboxylovej kyseliny

Chirálna HPLC (Chiracel AD; elučné činidlo: zmes etanolu a heptánu v pomere 10:90; rýchlosť prietoku 1 ml/min): doba retencie = 9,0 minút; čistota enantioméru 98,9 %. Vznikne 510 mg.

Medziprodukt 111 benzylester (3R,3aR,6aS)-6-izopropyl-5-oxo-hexahydropyrol[3,2-b]pyrol-1 -karboxylovej kyseliny

Chirálna HPLC (Chiracel AD; elučné činidlo: zmes etanolu a heptánu v pomere 10:90; rýchlosť prietoku 1 ml/minútu: doba retencie = 11,3 minút; čistota enantioméru 97,8 %. Vznikne 495 mg.

Medziprodukt 112 etylester (E)-4-piperidín-1-yl-but-2-énovej kyseliny

Zmes 193 mg etyl-4-brómkrotonátu, 94 mg piperidínu a 276 mg uhličitanu draselného v 10 ml acetonitrilu sa 3 hodiny mieša a zahrieva pod refluxom. Reakčná zmes sa ochladí a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu za vzniku zvyšku, ktorý sa rozdelí do dvakrát 15 ml vody a raz 20 ml etylacetátu. Organické extrakty sa sušia nad síranom sodným, filtrujú sa a zahustia vo vákuu za vzniku 1257 mg oranžového oleja výslednej zlúčeniny.

TLC oxid kremičitý (dichlórmetán:etanol:amoniak = 10:8:1) (špecifická hmotnosť = 0,88) Rf=0,55.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 198, MH⁺vypočítané 198.

-72Medziprodukt 113 hydrochlorid (E)-4-piperidín-1-yl-but-2-énovej kyseliny

Roztok 592 mg medziproduktu 112 v 18 ml dioxánu a 10 ml 2M roztoku kyseliny chlorovodíkovej sa mieša a 5,5 hodiny zahrieva pod refluxom. Reakčná zmes sa ochladí a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu za použitia toluénu na odstránenie posledných stôp vody azeotropickou destiláciou. Vytvorí sa polotuhá látka, ktorá sa počas 1,5 hodiny dvakrát rozotrie s 50 ml éteru a následne sa 30 minút rozotiera s 450 ml etylacetátu. Po každom rozotieraní sa rozpúšťadlo dekantuje. Zvyšok po poslednom rozotieraní sa suší vo vákuu za vzniku 569 mg okrového prášku výslednej zlúčeniny.

TLC oxid kremičitý (dichlórmetán:etanol:amoniak = 10:8:1( (špecifická hmotnosť = 0,88) Rf=0,0.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 170, MH⁺ vypočítané 170.

Medziprodukt 114 rel-(3R,3aR,6aS)-4-(4-chlór-but-2E-enoyl)-1-metánsulfonyl-3-propyl-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón

Do miešaného roztoku 50 mg medziproduktu 116, 43 mg 1hydroxybenztriazolu a 61 mg 1-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid-hydrochloridu v 2,5 ml bezvodého tetrahydrofuránu a 0,5 ml dimetylformamidu sa pridá 40 mg medziproduktu 26 v 1 ml bezvodého tetrahydrofuránu. Reakčná zmes sa 2,5 hodiny mieša pri teplote miestnosti a potom sa rozdelí do 15 ml 40% roztoku hydrogénuhličitanu sodného a dvakrát 20 ml etylacetátu. Zlúčené organické podiely sa dvakrát premyjú 15 ml vody, sušia sa nad síranom sodným, filtrujú sa a zahustia za vzniku gumy. tento zvyšok sa po absorpcii na kolónu oxidu kremičitého čistí rýchlou chromatografiou pri elúcii zmesou etylacetátu a cyklohexánu v pomere 4:3 za vzniku 25 mg okrového prášku výslednej zlúčeniny.

TLC oxid kremičitý (cyklohexán:etylacetát = 1:1): Rf 0,22.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 349, MH⁺ vypočítané 349.

-73Medziprodukt 115 rel-(3R,3aR,6aS)-4-[3-(4-metánsulfonyl-5-oxo-6-propyl-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-1-yl)-3-oxo-prop-2E-enyl]-benzaldehyd

Do miešaného roztoku 56 mg 4-formylškoricovej kyseliny, 44 mg hydroxybenztriazolu a 62 mg 1-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid-hydro-chloridu v 2,7 ml bezvodého dimetylformamidu sa pridá roztok 60 mg medziproduktu 26 v 0,8 ml bezvodého dimetylformamidu. Reakčná zmes sa 16 hodín mieša pri teplote miestnosti a ptoom sa rozdelí do 15 ml 8% roztoku hydrogénuhličitanu sodného a 20 ml etylacetátu. Etylacetátový podiel sa oddelí, dvakrát sa premyje 15 ml vody, suší sa nad síranom sodným, filtruje sa a zahustí vo vákuu za vzniku tuhej látky. Tento zvyšok sa rozotrie s 10 ml éteru. Po 10 minútach sa éter dekantuje a zvyšok sa suší vo vákuu za vzniku 79 mg žltého prášku výslednej zlúčeniny s teplotou topenia 183 až 188 °C.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 405, MH⁺ vypočítané 405.

Medziprodukt 116

4-chlór-but-2E-énová kyselina

Pri teplote miestnosti sa 5,5 hodiny mieša roztok 3,58 g etyl-4-brómkrokonátu a 0,83 g monohydrátu hydroxidu lítneho v 30 ml vody a 50 ml tetrahydrofuránu. Roztok sa okyslí 13 ml 2M roztoku kyseliny chlorovodíkovej na pH 1 až 2 a extrahuje sa dvakrát 50 ml etylacetátu. Zlúčené organické podiely sa premyjú 40 ml vody, sušia sa nad síranom sodným, filtrujú sa a zahustia vo vákuu za vzniku viskózneho oleja. Olej sa 5 minút rozotiera v 10 ml dichlórmetánu a roztok sa dekantuje. Po zahustení vznikne olej, ktorý sa 10 minút rozotiera s 15 ml dietyléteru. Roztok sa dekantuje a zahustí za vzniku polotuhej látky. Tento zvyšok sa po absorpcii na kolónu oxidu kremičitého čistí rýchlou chromatografiou pri elúcii zmesou cyklohexánu a etylacetátu v pomere 3:2 za vzniku 0,62 g voskovitej bielej tuhej látky výslednej zlúčeniny.

TLC oxid kremičitý (cyklohexán:etylacetát =1:1): Rf 0,5.

-74Medziprodukt 117 rel-(3R,3aR,6aS)-4-(4-chlór-but-2E-enoyl)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón

Roztok 690 mg medziproduktu 86, 500 mg medziproduktu 116, 541 mg 1hydroxybenztriazolu a 766 mg etyl-1-(3-dimetyl-aminopropyl)-3-etylkarbodiimidhydrochloridu v 5 ml bezvodého dimetylformamidu a 20 ml bezvodého tetrahydrofuránu sa 6 hodín mieša pri teplote miestnosti a potom sa nechá 16 hodín stáť. Reakčná zmes sa rozdelí do dvakrát 75 ml etylacetátu a 80 ml 8% roztoku hydrogénuhličitanu sodného. Zlúčené etylacetátové extrakty sa dvakrát premyjú 60 ml 0,5M roztoku kyseliny chlorovodíkovej a 60 ml vody, sušia sa nad síranom sodným a odparia sa za vzniku polotuhej látky. Tento zvyšok sa po absorpcii na kolónu oxidu kremičitého čistí rýchlou chromatografiou. Ako elučné činidlo sa použije zmes cyklohexánu a etylacetátu najskôr v pomere 2:1 a ďalej sa postupne zvyšuje koncentrácia etylacetátu až na pomer 1:1. Vznikne 328 mg bieleho prášku výslednej zlúčeniny.

TLC oxid kremičitý (cykoohexán:etylacetát = 1:1): Rf 0,3.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 349, MH⁺ vypočítané 349.

Pri syntéze sa pripraví aj medziprodukt 118.

Medziprodukt 118 rel-(3R,3aR,6aS)-4-(4-chlór-but-3Z-enoyl)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón

Čistením medziproduktu 117 rýchlou chromatografiou na kolóne sa oddelí 284 mg bieleho prášku medziproduktu 118 s teplotou topenia 165 až 167 °C.

TLC oxid kremičitý (cyklohexán:etylacetát = 1:1): Rf0,55.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 349, MH⁺ vypočítané 349.

Medziprodukt 119 etylester (E)-4-azepín-1-yl-but-2-énovej kyseliny

-75Zlúčenina sa pripraví spôsobom, ktorý je uvedený pre medziprodukt 112. Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 212, MH⁺ vypočítané 212.

Medziprodukt 120 (E)-4-azepín-1-yl-but-2-énová kyselina

Výsledná zlúčenina sa pripraví podľa postupu syntézy medziproduktu 113 za použitia medziproduktu 119 ako východiskovej zlúčeniny.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 184, MH⁺ vypočítané 184.

Medziprodukt 121 benzylester kyseliny (3aR,6S,6aS)-6-izopropyl-4-metánsulfonyl-5-oxo-propyl-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-1 -karboxylovej

Do roztoku 0,46 g medziproduktu 104 v 30 ml bezvodého tetrahydrofuránu sa pri teplote -70 °C a pod dusíkom pridá 2,0 ml 1M roztoku hexametyldisilazidu lítneho v tetrahydrofuráne. Reakčný roztok sa 15 minút zahrieva na teplotu 0 °C a potom sa znova ochladí na -70 °C. Pridá sa 0,30 ml metánsulfonylchloridu a po 1,5 hodine sa pridá 30 ml nasýteného vodného roztoku chloridu amónneho. Reakčná zmes sa trikrát extrahuje 5 ml etylacetátu. Zlúčené extrakty sa dvakrát premyjú 25 ml nasýteného roztoku chloridu sodného, sušia sa nad síranom horečnatým a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu. Zvyšok sa po absorpcii na kolónu oxidu kremičitého čistí rýchlou chromatografiou pri elúcii zmesou cyklohexánu a etylacetátu v pomere 1:1 za vzniku 0,34 g bielej tuhej látky výslednej zlúčeniny.

TLC oxid kremičitý (cyklohexán:etylacetát = 1:1): Rf 0,4.

Hmotnostné spektrum: MNH₄ ⁺ nájdené 398, MNH₄ ⁺ vypočítané 398.

Medziprodukt 122 (3S,3aS,6aR)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón

-76V atmosfére vodíka sa 3 hodiny mieša zmes 0,31 g medziproduktu 121, 0,24 g 10% roztoku hydroxidu paládia na aktívnom uhlí, 25 ml 1,4-dioxánu a 25 ml etylacetátu. Katalyzátor sa odstráni filtráciou cez hyflo a filtrát sa zahustí vo vákuu za vzniku 0,20 g svetložltej tuhej látky výslednej zlúčeniny.

TLC oxid kremičitý (chlorofomrmetanol = 9:1): Rf 0,36.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 247, MH⁺ vypočítané 247.

Medziprodukt 123 benzylester kyseliny (3aS,6R,6aR)-6-izopropyl-4-metánsulfonyl-5-oxo-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-1-karboxylovej

V atmosfére dusíka sa pri teplote -75 °C do roztoku 0,46 g medziproduktu 111 v 30 ml bezvodého tetrahydrofuránu pridá 2,0 ml 1M roztoku hexametyldisilazidu lítneho v tetrahydrofuráne. Reakčný roztok sa 5 minút mieša, na 25 minút sa ohreje na teplotu 0 °C a znova sa ochladí na teplotu -75 °C. Pridá sa 0,30 ml metánsulfonylchloridu a po 4,5 hodinách sa pridá 5 ml nasýteného vodného roztoku chloridu amónneho. Reakčná zmes sa nechá zohriať na teplotu miestnosti. Pridá sa 15 ml vody a zmes sa trikrát extrahuje 20 ml etylacetátu. Zlúčené extrakty sa premyjú 10 ml vody a 15 ml nasýteného roztoku chloridu sodného, sušia sa nad síranom horečnatým a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu. Zvyšok sa po absorpcii na kolóne oxidu kremičitého čistí rýchlou chromatografiou pri elúcii zmesou cyklohexánu a etylacetátu v pomere 1:1 za vzniku 0,4 g bielej tuhej látky. Hmotnostné spektrum: MNH₄ ⁺ nájdené 398, MNH₄ ⁺ vypočítané 398,

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 381, MH⁺ vypočítané 381.

TLC oxid kremičitý (cyklohexán:etylacetát = 1:1): Rf 0,4.

Medziprodukt 124 (3R,3aR,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón

V atmosfére vodíka sa 5 hodín mieša 0,37 g medziproduktu 123, 0,11 g 10% roztoku hydroxidu paládia na aktívnom uhlí a 50 ml etylacetátu. Katalyzátor sa odstráni filtráciou cez hyflo a filtračný koláč sa trikrát premyje 20 ml etylacetátu a 40

-77ml horúceho etylacetátu. Zlúčené filtračné podiely sa zahustia vo vákuu za vzniku 0,23 g bielej kryštalickej tuhej látky výslednej zlúčeniny.

TLC oxid kremičitý (etylacettá) Rf = 0,07.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 247, MH⁺ vypočítané 247.

Medziprodukt 132 rel-4-[3-(6R-izopropyl-4-metánsulfonyl-5-oxo-hexahydro-(3aS,6aR)-pyrolo[3,2-b]pyrol-1-yl)-3-oxo-(E)-propenyl]-benzaldehyd

Výsledná zlúčenina s teplotou topenia 201 až 204 °C sa pripraví podľa postupu uvedeného v príprave medziproduktu 115 za použitia medziproduktu 86 ako východiskovej zlúčeniny.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 405, MH⁺ vypočítané 405.

Medziprodukt 133 rel-(3R,3aR,6aS)-4-(3-piperidín-1-yl-propionyl)-3-propyl-hexahydro-pyrolo[3,2-b]pyrol-2-όη

Do miešaného roztoku 1,213 g medziproduktu 34 a 3,7 g bróm-tris-pyrolidínfosfónium-hexafluórfosfátu v 50 ml bezvodého dichlórmetánu sa v atmosfére dusíka pridá 1,15 g kyseliny piperidínpropiónovej a 3,8 ml N,N-diizopropyletylamínu. Reakčná zmes sa 20 hodín mieša a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu za vzniku žltohnedej kryštalickej tuhej látky. Tento produkt sa po absorpcii na kolónu oxidu kremičitého čistí rýchlou chromatografiou pri elúcii zmesou dichlórmetánu, etanolu a 0,880% roztoku amoniaku v pomere 50:8:1. Nepoláme nečistoty sa vymyjú elučnou zmesou metylénchloridu, etanolu a 0,880% roztoku amoniaku v pomere 25:8:1. Požadované podiely sa zlúčia a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu za vzniku 2,214 g bielej krehkej peny výslednej zlúčeniny.

TLC doska oxidu kremičitého (metylénchlorid:etanol:0,880% amoniak = 50:8:1) Rf = 0,13.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 308, MH⁺ vypočítané 308.

-78Medziprodukt 134 rel-(3R,3aR,6aS)-4-(6-piperidín-1-yl-hexanoyl)-3-propyl-hexahydro-pyrolo[3,2-b]pyrol-2-όη

Výsledná zlúčenina s teplotou topenia 78 až 79,5 °C sa pripraví podľa postupu uvedeného na prípravu medziproduktu 133 za použitia medziproduktu 34 ako východiskovej zlúčeniny.

Medziprodukt 135 rel-(3R,3aR,6aS)-4-(3-piperidín-1-yl-propán-1-sulfonyl)-3-propyl-hexahydropyrolo[3,2-b]-pyrol-2-ón

Výsledná zlúčenina sa pripraví podľa postupu uvedeného na prípravu výslednej zlúčeniny z príkladu 8 za použitia medziproduktu 34 ako východiskovej zlúčeniny.

TLC (dichlórmetán:metanol = 7:1): Rf 0,19.

Medziprodukt 136 rel-4-(6R-izopropyl-4-metánsulfonyl-5-oxo-hexahydro-(3aS,6aR)-pyrolo[3,2-b]-pyrol1 -karbonyl)-benzaldehyd

Do miešaného roztoku 100 mg medziproduktu 86 v 5 ml acetonitrilu sa pridá 79 mg 4-karboxybenzaldehydu, 110 mg 1-hjydroxybenztriazolu a 156 mg 1-(3dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid-hydrochloridu. Reakčná zmes sa 22 hodín mieša pri teplote 22 °C. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok ako guma sa rozdelí do 15 ml 2N roztoku uhličitanu sodného a 15 ml dichlórmetánu. Organický podiel sa oddelí, premyje sa 10 ml 2N roztoku uhličitanu sodného, 10 ml vody, 10 ml nasýteného roztoku chloridu sodného, suší sa nad síranom horeČnatým, filtruje sa a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu za vzniku žltej gumy. tento produkt sa po absorpcii na kolónu oxidu kremičitého (Merck 9385) čistí rýchlou chromatografiou pri elúcii 2% roztokom metanolu a metylénchloridu. Podiely obsahujúce požadovanú

-79látku sa zlúčia a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu za vzniku 148 mg bielej výslednej zlúčeniny.

TLC doska oxidu kremičitého (metylénchlorid:metanol = 9:1) Rf = 0,60; detekcia pomocou UV (KMnO₄);

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 379, MH⁺ vypočítané 379.

Medziprodukt 137 rel-3-(6R-izopropyl-4-metánsulfonyl-5-oxo-hexahydro-(3aS,6aR)-pyrolo[3,2-b]-pyrol1 -karbonyl)benzaldehyd

Výsledná zlúčenina sa pripraví podľa postupu uvedeného na prípravu medziproduktu 87 za použitia medziproduktu 86 ako východiskovej zlúčeniny.

TLC (dichlórmetán:metanol = 19:1): Rf 0,3.

Medziprodukt 138 terc.butylester kyseliny rel-4-[4-(6R-izopropyl-4-metánsulfonyl-5-oxo-hexahydro(3aS,6aR)-pyrolo[3,2-b]pyrol-1-karbonyl)benzyl]piperazín-1-karboxylovej

Výsledná zlúčenina sa pripraví podľa postupu uvedeného na prípravu výslednej zlúčeniny z príkladu 173 za použitia medziproduktu 136 ako východiskovej zlúčeniny.

TLC (dichlórmetán:metanol = 9:1): Rf 0,46.

Medziprodukt 139 rel-(3R,3aR,6aS)-4-(4-brómmetyl-benzénsulfonyl)-1-metánsulfonyl-3-propyl-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón

V 10 ml acetonitrilu sa rozpustí 246 mg medziproduktu 26, pridá sa 414 mg uhličitanu draselného a 403 mg 4-(brómmetyl)benzénsulfonylchloridu. Reakčná zmes sa 2 hodiny mieša pri teplote miestnosti, zmes sa potom zriedi dichlórmetánom a roztok sa premyje vodou, nasýteným roztokom chloridu sodného a suší sa nad síranom horečnatým. Po zahustení vznikne biela tuhá látka, ktorá sa

-80rozotrie s acetonitrilom a filtruje sa za vzniku 181 mg bielej tuhej látky výslednej zlúčeniny.

Hmotnostné spektrum: MNH₄ ⁺ nájdené 498, MNH₄ ⁺ vypočítané 498.

TLC (etylacetát:hexán = 1:2) Rf = 0,23.

Medziprodukt 140 rel-(3R,3aR,6aS)-4-(4-brómmetyl-benzénsulfonyl)-3-izopropyl-1-metánsulfonylhexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón

Výsledná zlúčenina sa pripraví podľa postupu uvedeného na prípravu medziprioduktu 139 za použitia medziproduktu 86 ako východiskovej zlúčeniny.

TLC (dichlórmetán:etylacetát = 14:1): Rf 0,5.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 497/498, MH⁺ vypočítané 497/498.

Medziprodukt 141 rel-(3R,3aR,6aS)-4-(4-brómmetyl-benzoyl)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón

V 10 ml dichlórmetánu sa rozpustí 200 mg medziproduktu 86, pridá sa 204 mg hydrogénuhličitanu sodného a následne 227 mg 4-(brómmetyl)benzoylchloridu. Reakčná zmes sa cez noc mieša, následne sa vleje do vody a extrahuje sa etylacetátom. Zlúčené organické extrakty sa premyjú zriedenou kyselinou chlorovodíkovou, nasýteným roztokom chloridu sodného, sušia sa nad síranom horečnatým a zahustia sa za vzniku žltej gumy. Tento zvyšok sa po absorpcii na kolónu oxidu kremičitého čistí chromatografiou pri elúcii zmesou hexánu a etylacetátu v pomere 1:1 za vzniku 287 mg bielej tuhej látky výslednej zlúčeniny. Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 444, MH⁺ vypočítané 444.

Medziprodukt 142 rel-5-(6R-izopropyl-4-metánsulfonyl-5-oxo-hexahydro-(3aS,6aR)-pyrolo[3,2-b]pyrol1 -karbonyl)furán-2-karbaldehyd

-81 Výsledná zlúčenina sa pripraví podľa postupu uvedeného na prípravu medziproduktu 87 za použitia medziproduktu 86 ako východiskovej zlúčeniny Hmotnostné spektrum: MNH₄ ⁺ nájdené 386, MNH₄ ⁺ vypočítané 386.

Medziprodukt 143 terc.butylester kyseliny rel-4-[4-(6R-izopropyl-4-metánsulfonyl-5-oxo-hexahydro(3aS,6aR)-pyrolo[3,2-b]pyrol-1-yl)4-oxobutyl]piperidín-1-karboxylovej

Výsledná zlúčenina sa pripraví podľa postupu uvedeného ako prípravu medziproduktu 115 za použitia medziproduktu 86 ako východiskovej zlúčeniny. Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 500, MH⁺ vypočítané 500.

TLC (etylacetátcyklohexán = 1:1): Rf 0,27.

Medziprodutk 144 (2-cyklopropyl-1-etoxy-(E)-vinyloxy)trimetylsilán

Za stáleho miešania sa do roztoku 6,2 ml diizopropylamínu v 8 ml tetrahydrofuránu pri teplote nižšej ako -25 °C a v atmosfére dusíka pridá 26 ml 1,6M roztoku n-butyllítia v zmesi hexánov. Po 30 minútach sa zmes ochladí na -75 °C a po kvapkách sa pridá 4,5 g etylcyklopropylacetátu pri zachovaní teploty zmesi nižšej ako -65 °C. Reakčná zmes sa 3 hodiny udržuje pri teplote nižšej ako -75 °C. Pridá sa 3,8 ml chlórtrimetylsilánu tak, aby sa teplota reakčnej zmesi nezvýšila nad -65 °C. Reakčná zmes sa nechá zohriať na teplotu miestnosti a potom sa odparuje dosucha. Vytvorený zvyšok sa uvedie do suspenzie s hexánom a filtruje sa. Filtrát sa odparí za vzniku oranžového oleja, ktorý sa vo vákuu destiluje za vzniku oranžového oleja, ktorý sa vo vákuu destiluje za vzniku 4,0 g čírej prchavej tekutiny s teplotou varu 80 až 82 °C (3x1 kPa).

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 201, MH⁺ vypočítané 201.

Medziprodukt 145

-82benzylester kyseliny trans-2-(cyklopropyl-etoxykarbonyl-metyl)-3-(2,2,2-trifluóracetylamino)pyrolidín-1-karboxylovej

V atmosfére dusíka sa za stáleho miešania pridá pri teplote 0 °C do roztoku

2,5 g medziproduktu 144 v 16 ml dichlórmetánu roztok 2,0 g medziproduktu 81 v 16 ml dichlórmetánu. Po kvapkách sa pridá 4 ml bór-trifluorid-dieterátu a reakčná zmes sa ďalšiu 1 hodinu mieša. Reakcia sa ukončí pridaním 10 ml 1M roztoku kyseliny chlorovodíkovej. Vodná fáza sa oddelí a dvakrát sa extrahuje 20 ml dichlórmetánu. Zlúčené organické podiely sa premyjú nasýteným roztokom chloridu sodného, sušia sa nad síranom horečnatým a odparujú sa za vzniku 3,1 g žltého oleja výslednej zlúčeniny, ktorý sa bez ďalšieho čistenia použije v nasledujúcej syntéze.

Medziprodukt 146 benzylester kyseliny trans-3-amino-2-(cyklopropyl-etoxykarbonyl-metyl)-pyrolidín-1karboxylovej

K teplote refluxu sa 16 hodín zahrieva zmes 30 ml acetonitrilu, 40 ml etanolu a 3,1 g surového medziproduktu 145 v roztoku 9,3 g uhličitanu draselného v 30 ml vody. Reakčná zmes sa ochladí, organický podiel sa oddelí, odparuje sa za vzniku oleja, ktorý sa rozdelí do 25 ml 1M roztoku kyseliny chlorovodíkovej a 50 ml éteru. Organický podiel sa trikrát extrahuje 25 ml 1M roztoku kyseliny chlorovodíkovej. Zlúčené vodné roztoky sa premyjú 25 ml éteru a za stáleho miešania sa postupne privedú na bázické pH postupným pridávaním uhličitanu sodného. Reakčná zmes sa trikrát extrahuje 75 ml etylacetátu. Zlúčené extrakty sa premyjú 50 ml nasýteného roztoku chloridu sodného, sušia sa nad síranom horečnatým a odparujú sa vo vákuu za vzniku 1,3 g viskózneho žltého oleja výslednej zlúčeniny.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 347, MH⁺ vypočítané 347.

Medziprodukt 147 benzylester rel-(6R,6aS,3aS)-6-cyklopropyl-5-oxo-hexahydro-pyrolo[3,2-b]pyrol-1karboxylovej kyseliny

-83V atmosfére dusíka sa pri teplote 4 až 5 °C po kvapkách pridá 11,25 ml 1M roztoku t-butylmagnéziumchloridu v tetrahydrofuráne do roztoku 1,2 g medziproduktu 146 v 13 ml zmesi Ν,Ν,Ν’,Ν’-tetrametyléndiamínu a 13 ml tetrahydrofuránu. Po 2 hodinách sa chladenie odstráni a reakčná zmes sa nechá zohriať na teplotu miestnosti. Pri teplote miestnosti sa počas 4 hodín po kvapkách pridajú ďalšie 3 ml t-butyl-magnéziumchloridu. Po ďalších 2 hodinách sa pridá 1 ml nasýteného vodného roztoku chloridu amónneho a reakčná zmes sa okyslí na pH 1 až 2 pridaním kyseliny chlorovodíkovej. Reakčná zmes sa trikrát extrahuje 30 ml etylacetátu. Organické podiely sa premyjú 20 ml nasýteného roztoku chloridu sodného, sušia sa nad síranom horečnatým a odparujú sa za vzniku žltej pasty. Tento zvyšok sa rozotrie s etylacetátom za vzniku 0,3 g bielej tuhej látky s teplotou topenia 141 až 149 °C, ktorá obsahuje výslednú zlúčeninu. Čistením tohto produktu rýchlou chromatografiou pri elúcii zmesou etylacetátu a hexánu v pomere 2:1 vzniknú 0,2 g tuhej peny výslednej zlúčeniny.

Medziprodukt 148 benzylester rel-(3aS,6R,6aS)-6-cyklopropyl-4-metánsulfonyl-5-oxo-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-1 -karboxylovej kyseliny

V atmosfére dusíka sa pri teplote -75 °C do miešaného roztoku 0,25 g medziproduktu 147 v 16 ml tetrahydrofuránu po kvapkách pridá 0,1 ml 1M roztoku hexametyldisilazidu lítneho v tetrahydrofuráne. Reakčná zmes sa 5 minút mieša pri teplote -75 °C, 25 minút pri 0 °C a následne sa znova ochladí na teplotu -75 °C. Po kvapkách sa pridá 0,24 g metánsulfonylchloridu a reakčná zmes sa 1,5 hodiny mieša pri teplote okolo -75 °C. Po 2 hodinách sa postupne pridá 1,5 ml nasýteného vodného roztoku chloridu amónneho a 30 ml vody. Reakčná zmes sa trikrát extrahuje 25 ml etylacetátu. Zlúčené extrakty sa premyjú 15 ml nasýteného roztoku chloridu sodného, sušia sa nad síranom horečnatým a odparujú sa za vzniku číreho filmu, ktorý sa čistí rýchlou chromatografiou na kolóne pri elúcii zmesou hexánu a etylacetátu v pomere 2:1 za vzniku 0,21 g bielej tuhej látky výslednej zlúčeniny s teplotou topenia 144 až 149,5 °C.

-84Medziprodukt 149 rel-(3R,3aR,6aS)-3-cyklopropyl-1-metánsulfonyl-hexahydro-pyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón

Do vopred redukovaného 20% roztoku hydroxidu paládia na aktívnom uhlí (Pearlmanov katalyzátor) v 20 ml etylacetátu sa pridá 0,21 g medziproduktu 148 v 25 ml etylacetátu. Reakčná zmes sa energicky 1,5 hodiny mieša pri teplote miestnosti a v atmosfére vodíka (spotreba vodíka - 17 ml). Katalyzátor sa odstráni filtráciou a filtrát sa odparí vo vákuu za vzniku 0,13 g bielej kryštalickej tuhej látky s teplotou topenia 137 až 144 °C.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 245, MH⁺ vypočítané 245.

Medziprodukt 150 kyselina 2R-terc.butoxy-karbonylamino-4-metylsulfonyl-maslová

Za stáleho miešania sa do chladenej suspenzie 1000 ml R-metionínu v 1,4dioxáne a 1330 ml 1,25M roztoku hydroxidu sodného s teplotou 6 °C pridá naraz roztok 384 g di.terc.butyl-dikarbonátu v 300 ml 1,4-dioxánu. Chladiaci kúpeľ sa odstráni a reakcia sa 3,5 hodiny mieša. Po odstránení 1,4-dioxánu vo vákuu sa pridá 1000 ml etylacetátu a následne 1700 ml 1M roztoku hydrogénsíranu draselného. Reakčná zmes sa mieša a po oddelení podielov sa vodný podiel extrahuje 600 ml etylacetátu. Zlúčené organické extrakty sa premyjú 600 ml vody, 100 ml nasýteného roztoku chloridu sodného, sušia sa nad síranom sodným, filtrujú sa a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu za vzniku 449 g svetložltého oleja výslednej zlúčeniny, ktorý obsahuje prímes etylacetátu.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 250, MH⁺ vypočítané 250.

Medziprodukt 151 terc.butylester kyseliny (1 R-karbamoyl-3-metylsulfonylpropyl)karbamovej

V 700 ml Ν,Ν-dimetylformamidu sa rozpustí 425 g medziproduktu 150 a pridá sa 63,2 g pyridínu. Po častiach sa pridá 402,2 g di-terc.butyldikarbonátu a reakčná zmes sa 10 minút mieša pri teplote miestnosti. Pridá sa 145,7 g hydrogénuhličitanu

-85amónneho a reakčná zmes sa 18 hodín mieša pri teplote miestnosti. Do reakčnej zmesi sa pridá 1000 ml vody, následne 1000 ml etylacetátu a 250 ml nasýteného roztoku chloridu sodného. Reakčná zmes sa energicky mieša a potom sa podiely nechajú oddeliť. Vodný podiel sa dvakrát extrahuje 600 ml etylacetátu. Zlúčené organické podiely sa raz premyjú 1000 ml vody, dvakrát 750 ml zriedenej kyseliny sírovej (vyrobené z 38 ml koncentrovanej kyseliny sírovej a 1600 ml vody), trikrát 750 ml vody a raz 1000 ml nasýteného roztoku chloridu sodného. Reakčný roztok sa suší nad síranom sodným a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu za vzniku bielej tuhej látky. Tento produkt sa rozotrie s 1200 ml dietyléteru, filtruje sa a suší vo vákuu. Vytvorí sa 265 g bieleho prášku výslednej zlúčeniny.

TLC oxid kremičitý (cyklohexán:etylacetát = 1:1): Rf0,25.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 249, MH⁺ vypočítané 249.

Medziprodukt 152 benzylester kyseliny (2R-terc.butoxy-karbonylamino-4-metylsulfonyl-butyryl)-karbamovej

Do miešaného a chladeného roztoku 308 g meziproduktu 151 v 2000 ml tetrahydrofuránu sa pravidelne pridáva 992 ml 2,5M roztoku n-butyllítia v zmesi hexánov tak, aby sa teplota reakčnej zmesi udržovala v rozmedzí -65 až -72 °C. Po 1 hodine a 20 minútach sa počas 45 minút pravidelne pridáva roztok 211 g benzylchlórmravčanu v 200 ml tetrahydrofuránu pri udržovaní teploty pod -60 °C. Reakčná zmes sa znova ochladí na teplotu -70 °C a po 1,5 hodine sa reakcia ukončí pridaním 1000 ml nasýteného vodného roztoku chloridu amónneho. Teplota sa zvýši na -40 °C a nechá sa plynulo zvyšovať na +10 °C. Organický podiel sa oddelí a vodný podiel sa trikrát extrahuje 50 ml etylacetátu. Zlúčené organické podiely sa trikrát premyjú 500 ml nasýteného roztoku chloridu sodného, sušia sa nad síranom sodným a odparujú sa vo vákuu za vzniku 560 g svetložltého viskózneho oleja. Tento materiál sa ďalej nečistí a ako surový sa použije v nasledujúcej syntéze. Hmotnostné spektrum: MNH₄ ⁺ nájdené 400, MNH₄ ⁺ vypočítané 400.

-86Medziprodukt 153 (4-benzyloxykarbonylamino-3R-terc.butoxy-karbonylamino-4-oxo-butyl)-dimetylsulfónium-jodid

V atmosfére dusíka sa pri teplote miestnosti za stáleho miešania do roztoku 558 g medziproduktu 152 v 875 ml acetónu pridá 875 g metyljodidu. Reakčná zmes sa 3 dni mieša v tme a následne sa 4 hodiny chladí v ľadovom kúpeli. Vytvorí sa svetložltá kryštalická suspenzia, ktorá sa filtruje, filtračný koláč sa premyje 1000 ml studenej zmesi acetónu a éteru v pomere 1:9 s teplotou 0 °C a vytvorená tuhá látka sa suší za vzniku 559 g bielej kryštalickej tuhej látky výslednej zlúčeniny s teplotou topenia 121 až 126 °C.

Medziprodukt 154 benzylester kyseliny (R)-3-terc.butoxy-karbonyl-amino-2-oxo-pyrolidín-1 -karboxylovej

Do roztoku 510 g medziproduktu 153 v 2600 ml acetonitrilu sa pridá 55 g molekulárneho sita 4Ä rozomletého na prášok a následne sa pridá 640 g živice Dowex 2X8-400 vo forme hydroxidu. Vytvorená reakčná zmes sa 3,5 hodiny energicky mieša. Po pridaní ďalších 60 g živice sa reakčná zmes mieša 1,5 hodiny a pridá sa ďalších 60 g živice. Reakcia trvá celkom 6 hodín. Po jej ukončení sa reakčná zmes filtruje a živica sa na sintri premyje 1000 ml acetonitrilu. Po odstránení acetonitrilu vo vákuu vznikne 360 g slamovožltej tuhej látky, ktorá sa rozpustí v 1500 ml horúceho etýlacetátu a horúci roztok sa filtruje. Filtrát sa zahustí na približne 800 ml a následne sa zriedi 1500 ml cyklohexánu. Reakčná zmes sa zahrieva v parnom kúpeli do rozpustenia všetkého tuhého podielu (na dosiahnutie úplného rozpustenia sa pridá 50 ml etýlacetátu). Roztok sa nechá ochladiť a 3 dni sa nechá stáť pri teplote miestnosti. Kryštalický produkt sa filtruje a premyje sa 400 ml zmesi etýlacetátu a cyklohexánu v pomere 1:3. Po sušení vo vákuu vznikne

217,5 g bielych dosiek výslednej zlúčeniny.

TLC oxid kremičitý (etylacetátcyklohexán = 1:1) Rf = 0,55.

Hmotnostné spektrum: MNH₄ ⁺ nájdené 352, MNH₄ ⁺ vypočítané 352.

-87Medziprodukt 155 hydrochlorid benzylesteru kyseliny (R)-3-amino-2-oxo-pyrolidín-1-karboxylovej

Do suspenzie 215 g medziproduktu 154 v 400 ml 1,4-dioxánu sa pri teplote miestnosti pridá 800 ml 4M roztoku chlorovodíka v 1,4-dioxáne. Po 10 minútach sa začne vytvárať biela zrazenina, ktorá s postupujúcou reakciou stále hustne. Reakcia trvá celkom 45 minút a následne sa pridá 400 ml 1,4-dioxánu. Po 2,5 hodine sa prchavý podiel odstráni vo vákuu za vzniku 196 g bielej tuhej látky výslednej zlúčeniny.

TLC oxid kremičitý (dichlórmetánetanohamoniak = 100:8:1): Rf = 0,5.

Hmotnostné spektrum: MNH/ nájdené 252, MNH₄ ⁺ vypočítané 252.

Príklad 1 benzylester kyseliny rel-(3aS,6R,6aR)-6-alyl-4-(naftalén-2-sulfonyl)-5-oxo-hexahydro-pyrolo[3,2-b]-pyrol-1-karboxylovej

Do roztoku 2,0 medziproduktu 13 v 80 ml bezvodého tetrahydrofuránu, ochladeného v kúpeli suchého ľadu a acetónu na teplotu -70 °C, sa v atmosfére dusíka pridá 7,3 ml 1M roztoku hexametyldisilamidu lítneho v tetrahydrofuráne. Reakčná zmes sa 10 minút mieša pri teplote -70 °C. Chladiaci kúpeľ sa nahradí ľadovým kúpeľom a reakčná zmes sa 25 minút mieša. Zmes sa znova ochladí na teplotu -70 °C a potom sa po kvapkách pridá roztok 1,81 g 2-naftylsulfonylchloridu v 15 ml bezvodého tetrahydrofuránu. Reakčná zmes sa mieša 3 hodiny pri teplote -70 °C. Reakcia sa ukončí pridaním 8 ml vody a po pridaní ďalšieho množstva vody pri teplote 5 °C sa reakčná zmes trikrát extrahuje 200 ml nasýteného roztoku chloridu sodného, suší sa nad síranom horečnatým a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu za vzniku žltej tuhej látky, ktorá sa po absorpcii na kolónu oxidu kremičitého (Merck 9385) čistí rýchlou chromatografiou pri elúcii éterom za vzniku 2,385 g bielej tuhej látky výslednej zlúčeniny s teplotou topenia 158,5 až 159,5 °C.

TLC dosky oxidu kremičitého (éter): Rf = 0,53.

-88Príklad 2 rel-(33,6aR,6aS)-1-(naftalén-2-sulfonyl)-4-(3-piperidín-1-yl-propionyl)-3-propyl-hexahydropyrolo[3,2-b]-pyrol-2-ón hydrochlorid

V 10 ml bezvodého dichlórmetánu sa rozpustí 0,5 g medziproduktu 14, 263 mg 1-piperidín-propiónovej kyseliny, 225,7 mg 1-hydroxybenztriazolu a 320 mg 1(3-N,N-dimetyl-aminopropyl)-3-etylkarbodiimidu. Do reakčnej zmesi sa pridá 0,58 ml trietylamínu a výsledná reakčná zmes sa 18 hodín mieša pri teplote miestnosti. Reakčná zmes sa rozdelí do 100 ml 2M roztoku uhličitanu sodného a 100 ml etylacetátu. Organický podiel sa oddelí a vodný podiel sa ďalej extrahuje 100 ml etylacetátu. Zlúčené organické extrakty sa sušia nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu za vzniku žltej gumy, ktorá sa po absorpcii na kolónu oxidu kremičitého (Merck 9385) čistí rýchlou chromatografiou pri elúcii zmesou etylacetátu a trietylamínu v pomere 100:1. Vznikne 200 mg bielej peny, ktorá sa rozpustí v 10 ml éteru a pridá sa 1 ml 1M éterového roztoku chlorovodíka. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu, zvyšok sa rozotrie s 30 ml éteru a po sušení vo vákuu vznikne 190,2 mg výslednej zlúčeniny s teplotou topenia 230 až 234 °C (za rozkladu).

TLC (voľná báza) etylacetátmetanol = 2:1)) Rf 0,28.

Príklad 6 benzylester kyseliny rel-(6R,6aR,3aS)-6-alyl-4-metánsulfonyl-5-oxo-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-1-karboxylovej

V atmosfére dusíka sa rozpustí 500 mg medziproduktu 13 v 30 ml tetrahydrofuránu a reakčný roztok sa ochladí na teplotu -70 °C. Pridá sa 2,17 ml 1M roztoku hexametyldisilylamidu lítneho v tetrahydrofuráne a reakčná zmes sa 6 minút mieša pri teplote -70 °C. Kúpeľ suchého ľadu a acetónu sa odstráni a nahradí sa kúpeľom ľadu a vody. Reakčná zmes sa nechá zohriať na teplotu 0 °C a 20 minút sa mieša. Následne sa reakčná zmes znova ochladí na teplotu -70 °C a pridá sa 479 mg metánsulfonylchloridu. Zmes sa 1 hodinu mieša a reakcia sa ukončí

-89pridaním nasýteného roztoku chloridu amónneho a nechá sa zohriať na teplotu miestnosti. Reakčná zmes sa extrahuje etylacetátom, zlúčené organické extrakty sa premyjú nasýteným roztokom chloridu sodného, sušia sa nad síranom horečnatým a odparujú sa za vzniku svetložltej gumy. Tento zvyšok sa po absorpcii na kolónu oxidu kremičitého čistí chromatografiou pri elúcii zmesou etylacetátu a hexánu v pomere 1:2 za vzniku 527 mg bielej tuhej látky výslednej zlúčeniny s teplotou topenia 92 až 94 °C.

Príklad 7 rel-(3R,3aR,6aS)-1-metánsulfonyl-4-(1-metyl-1H-imidazol-4-sulfonyl)-3-propyl-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón

V atmosfére dusíka sa do roztoku 32 mg medziproduktu 26 a 44 ml trietylamínu v 3 ml dichlórmetánu pridá 28 mg 1-metylimidazol-4-sulfonylchloridu. Po 4 hodinách sa reakčná zmes vleje do vody a extrahuje sa etylacetátom. Zlúčené organické extrakty sa premyjú 8% zriedeným roztokom hydrogénuhličitanu sodného, nasýteným roztokom chloridu sodného, sušia sa nad síranom horečnatým a zahustia sa za vzniku béžovej tuhej látky. Tento produkt sa rozotrie so zmesou éteru a hexánu. Po filtrácii vznikne 40 mg slamovožltej tuhej látky výslednej zlúčeniny s teplotou topenia 192 až 193 °C.

TLC (dichlórmetán:metanol = 95:5): Rf 0,27.

Príklad 8 rel-(3R,3aR,6aS)-1-metánsulfonyl-4-(3-morfolín-4-yl-propán-1-sulfonyl)-3-propylhexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón

V atmosfére dusíka sa do miešaného roztoku 30 mg medziproduktu 26 a 30 mg trietylamínu v 3 ml dichlórmetánu pridá 38 mg medziproduktu 27. Po 3 hodinách sa reakčná zmes vleje do vody a extrahuje sa etylacetátom. Zlúčené organické extrakty sa premyjú nasýteným roztokom chloridu sodného, sušia sa nad síranom horečnatým a zahustia sa za vzniku okrovej tuhej látky, ktorá sa po absorpcii na kolónu oxidu kremičitého čistí chromatografiou pri elúcii gradientom koncentrácií

-90zmesou etylacetátu a metanolu od 100:0 do 99:1 za vzniku 26 mg bielej tuhej látky výslednej zlúčeniny s teplotou topenia 135 °C (za rozkladu).

TLC (etylacetát): Rf = 0,12.

Príklad 23 rel-(3R,3aR,6aS)-1-(naftalén-2-solfonyl)-3-propyl-4-[3-(1H-tetrazol-5-yl)fenylmetánsulfonyl]hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón

V atmosfére dusíka sa pri teplote miestnosti 30 minút mieša zmes 0,021 g medziproduktu 14 a 0,023 g medziproduktu 42 v 1,5 ml dichlórmetánu. Pridá sa 0,0126 ml trietylamínu a reakčná zmes sa 18 hodín mieša. Zmes sa rozdelí do 15 ml etylacetátu a 15 ml vody. Vodný podiel sa dvakrát extrahuje 15 ml etylacetátu. Zlúčené organické extrakty sa sušia nad síranom horečnatým a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu za vzniku tuhej látky, ktorá sa po absorpcii na kolónu oxidu kremičitého (Merck 9385) čistí rýchlou chromatografiou pri elúcii gradientom koncentrácií od zmesi etylacetátu a hexánu v pomere 1:1 k zmesi etylacetátu a hexánu a kyseliny octovej v pomere 99.99.2 za vzniku 0,024 g bielej tuhej látky výslednej zlúčeniny.

Hmotnosatné spektrum MNH₄ ⁺ nájdené 598, MNH₄ ⁺ vypočítané 598.

TLC (etylacetát:hexán = 1:1): Rf 0,1.

Príklad 29 rel-(3R,3aR,6aS)-1-metánsulfonyl-4-(3-piperidín-1-yl-propionyl)-3-propyl-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón

V atmosfére dusíka sa pri teplote miestnosti mieša 24 hodín zmes 0,038 g medziproduktu 26, 0,030 g (3-piperidínpropánovej kyseliny, 0,042 g 1-(dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid-hydrodrochloridu a 2,6 ml dichlórmetánu. Roztok sa zriedi etylacetátom a premyje sa nasýteným roztokom chloridu sodného. Vodný podiel sa ďalej extrahuje etylacetátom. Zlúčené organické podiely sa sušia nad síranom horečnatým a zahustia sa vo vákuu. Zvyšok sa po absorpcii na kolónu oxidu kremičitého (Merck 9385) čistí rýchlou chromatografiou pri elúcii zmesou

-91 etylacetátu a metanolu v pomere 7:3 za vzniku 0,048 g bezfarebného oleja výslednej zlúčeniny.

TLC (etylacetát:metanol = 7:3): Rf 0,19.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 386, MH⁺ vypočítané 386.

Príklad 57 rel-(3R,3aR,6aS)-1-metánsulfonyl-4-(4-piperidín 1-yl-but-2-(E)-enoyl-3-propyl-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón hydrochlorid

Výsledná zlúčenina ako svetložltý prášok sa pripraví podľa postupu uvedeného na prípravu príkladu 2 za použitia medziproduktu 26 a (E)-4-piperidín-1yl-butl-2-énovej kyseliny ako východiskových zlúčenín.

TLC oxid kremičitý (dichlórmetán:etanol:amoniak = 100:8:1): Rf = 0,43.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 398, MH⁺ vypočítané 398.

Príklad 60 rel-(3R,3aR,6aS)-4-(6-azepín-1-yl-hexanoyl)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón hydrochlorid

Výsledná zlúčenina ako okrová tuhá látka sa pripraví podľa postupu uvedeného na prípravu výslednej zlúčeniny z príkladu 61 za použitia medziproduktu 86 ako východiskovej zlúčeniny.

Voľná báza: TLC (dichlórmetán:etanol:amoniak = 100:8:1) Rf = 0,14.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 442, MH⁺ vypočítané 442.

Príklad 61 rel-(3R,3aR,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(3-piperidín-1-yl-propionyl)-hexahydropyrolo[3,2-b]-pyrol-2-ón hydrochlorid

Reakčná zmes 0,04 g medziproduktu 86, 0,028 g kyseliny piperidínpropánovej, 0,085 ml di-izopropyletylamínu, 0,083 g bróm-tris-pyrolidín-fosfóniumhexafluórfosfátu a 3 ml dichlórmetánu sa 4 hodiny mieša. Reakčná zmes sa zriedi

-92etylacetátom, premyje sa vodou a nasýteným roztokom chloridu sodného a suší sa nad síranom horečnatým. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu za vzniku zvyšku, ktorý sa po absorpcii na kolónu oxidu kremičitého (Merck 9385) čistí rýchlou chromatografiou pri elúcii zmesou etylacetátu a metanolu. Vytvorí sa 41 mg oleja, ktorý sa rozpustí v 3 ml dichlórmetánu a 0,5 ml 1M roztoku chlorovodíka v éteri. Rozpúšťadlo sa odstráni a tuhá látka sa rozotrie v dietyléteri za vzniku 0,045 g okrovej tuhej látky výslednej zlúčeniny.

Voľná báza: TLC (etylacetát:metanol + stopové množstvo = 7:3): Rf 0,31. Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 386, NH⁺ vypočítané 386.

Príklad 62 rel-(3R,3aR,6aS)-1-metánsulfonyl-4-(4-piepridín-1-yl-metylbenzoyl)-3-propyl-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón

Do miešaného roztoku 98 ml medziproduktu 87 v 7 ml dichlórmetánu sa pridá

34,5 μΙ ľadovej kyseliny octovej, 88,2 mg tricetoxybórhydridu sodného a nakoniec 36 μΙ piperidínu. Vytvorená zmes sa dvakrát premyje 25 ml destilovanej vody, suší sa nad síranom sodným, filtruje sa a zahustí vo vákuu za vzniku žltej gumy. Tento zvyšok sa čistí rýchlou chromatografiou pri elúcii zmesou trietylaminu a etylacetátu v pomere 3:97 za vzniku frakcií, ktoré sa zahustia vo vákuu za vzniku bielej peny. Pena sa rozpustí v 1 ml tetrahydrofuránu a 10 ml dietyléteru. Do vytvoreného roztoku sa pridá 300 μΙ zmesi 1M roztoku kyseliny chlorovodíkovej a dietyléteru. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu za vzniku 76 mg voľnej sypnej bielej tuhej látky. Voľná báza: TLC (etylacetát:metanoktrietylamín = 88:10:2): Rf 0,32.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 448, MH⁺ vypočítané 448.

Príklad 63 rel-N-[4-(4-metánsulfonyl-5-oxo-6R-propyl-hexahydro-(3aS,6aR)-pyrolo[3,2-b]pyrol1 -sulfonyl)fenyl]acetamid

-93V atmosfére dusíka sa do miešaného roztoku 75 mg hydrochloridu medziproduktu 26 a 0,185 ml trietylamínu v 3 ml bezvodého DCM pridá 81 mg Nacetylsulfonylchloridu. Po 1 hodine sa reakčná zmes rozdelí do etylacetátu a nasýteného roztoku chloridu sodného. Organický podiel sa oddelí, suší sa nad síranom sodným a zahustí sa vo vákuu. Zvyšok sa nechá kryštalizovať z metanolu za vzniku 86 mg bielej tuhej látky výslednej zlúčeniny.

TLC (chloroform:metanol = 9:1): Rf = 0,53.

Hmotnostné spektrum: MNH4⁺ nájdené 461, MNH4⁺ vypočítané 461.

Príklad 64

DL-vínan rel-(3R,3aR,6aS)-1 -metánsulfonyl-4-(10-morfolín-4-yl-dekanoyl)-3-propylhexa-hydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu

Do miešaného roztoku 100 mg medziproduktu 89 v 1 ml dichlórmetánu sa pridá 0,1 ml kyseliny octovej a následne 23 μΙ morfolínu. Reakčný roztok sa 2 minúty mieša a potom sa pridá 76,3 mg triacetoxybórhydridu sodného. Reakčná zmes sa 30 minút mieša, rozdelí sa do 50 ml etylacetátu a 8% vodného roztoku hydrogénuhličitanu sodného. Podiely sa oddelia, vodný podiel sa ďalej extrahuje 50 ml etylacetátu. Zlúčené organické extrakty sa sušia nad síranom horečnatým a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu za vzniku bezfarebnej gumy. Tento zvyšok sa čistí rýchlou chromatografiou pri elúcii zmesou dichlórmetánu a metanolu v pomere 9:1 za vzniku bezfarebnej gumy, ktorá sa rozpustí v 2 ml etanolu. Do roztoku sa pridá roztok 26 mg kyseliny (DL)-vínnej v 2 ml etanolu. Roztok sa odparí do sucha a vytvorený zvyšok sa rozotrie s éterom. Po filtrácii vznikne 102,5 mg bielej peny výslednej zlúčeniny.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené (termosprej + ve) 486, MH⁺ vypočítané 486. TLC oxid kremičitý (dichlórmetán:etanol = 9:1): Rf = 0,46.

Príklad 72

DL-vínan rel-(3R,3aR,6aS)-4-(10-azetidín-1 -yl-dekanoyl)-1 -metánsulfonyl-3-propylhexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ónu

-94Výsledná zlúčenina sa pripraví podľa postupu uvedeného na prípravu výslednej zlúčeniny z príkladu 64 za použitia medziproduktu 89 ako východiskovej zlúčeniny.

TLC (dichlórmetán:metanol = 5:1): Rf = 0,45.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 456, MH⁺ vypočítané 456.

Príklad 73 rel-(3R,3aR,6aS)-1-metánsulfonyl-3-propyl-4-(6-pyrolidín-1-yl-hexanoyl)-hexahydropyrolo[3,2-b]-pyrol-2-ón hydrochlorid

Výsledná zlúčenina sa pripraví podľa postupu uvedeného na prípravu výslednej zlúčeniny z príkladu 64 za použitia medziproduktu 90 ako východiskovej zlúčeniny.

TLC (dichlórmetán:etanol:0,880 amoniak = 100:8:1): Rf = 0.23.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 414, MH⁺ vypočítané 414.

Príklad 94 rel-(3R,3aR,6aS)-1-metánsulfonyl-4-[3-(4-metylpiperazín-1-yl)propionyl]-3-propylhexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón dihydrochlorid

Pri teplote miestnosti sa 42 hodín mieša roztok 60 mg medziproduktu 92 a 29 mg 1-metylpiperazínu v 6 ml acetonitrilu. Po 18 hodinách sa pridá 15 mg 1metylpiperazínu. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu za vzniku gumy, ktorá sa po absorpcii na kolónu oxidu kremičitého (Merck 9385) čistí chromatografiou pri elúcii zmesou dichlórmetánu, etanolu a amoniaku v pomere 125:10:4. Vytvorený produkt ako guma sa rozpustí v 10 ml dietyléteru a za stáleho miešania sa pridá 0,15 ml 4M roztoku chlorovodíka v 1,4-dioxánu. Rozpúšťadlo sa dekantuje a zvyšok ako tuhá látka sa suší vo vákuu za vzniku 83 mg bieleho prášku výslednej zlúčeniny s teplotou topenia 144 až 150 °C.

TLC oxid kremičitý (dichlórmetán:etanol:amoniak = 100:8:1): Rf = 0,12.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 401, MH⁺ vypočítané 401.

-95Príklad 95 rel-4-(4-metánsulfonyl-5-oxo-6R-propylhexahydro-(3aS,6aR)-pyrolo[3,2-b]pyrol-1yl)-4-oxo-butyramid

Výsledná zlúčenina sa pripraví podľa postupu uvedeného na prípravu výslednej zlúčeniny z príkladu 29 za použitia medziproduktu 26 ako východiskovej zlúčeniny.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 346, MH⁺ vypočítané 346.

I.R. v_max 1748, 1653, 1139 cm'¹.

Príklad 96 rel-N-[3-(4-metánsulfonyl-5-oxo-6R-propylhexahydro-(3aS,6aR)-pyrolo[3,2-b]-pyrol1 -yl)-3-oxo-propyl]acetamid

Výsledná zlúčenina sa pripraví podľa postupu uvedeného na prípravu výslednej zlúčeniny z príkladu 29 za použitia medziproduktu 26 ako východiskovej zlúčeniny.

TLC (dichlórmetán:metanol = 19:1): Rf 0,13.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 360, MH⁺ vypočítané 360.

Príklad 98 hydrochlorid amidu kyseliny rel-(3R,3aR,6aS)-1-[3-(4-metánsulfonyl-5-oxo-6Rpropyl-hexahydro-(3aS,6aR)-pyrolo[3,2-b]pyrol-1-yl)-3-oxo-propyl]piperidín-4-karboxylovej

Výsledná zlúčenina sa pripraví podľa postupu uvedeného na prípravu výslednej zlúčeniny z príkladu 94 a za použitia medziproduktu 92 ako východiskovej zlúčeniny.

TLC oxid kremičitý (dichlórmetán:etanol:0,880 amoniak = 100:8:1): Rf 0,75. Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 429, MH⁺ vypočítané 429.

-96Príklad 103 rel-(3R,3aR,6aS)-1-metánsulfonyl-4-[(metylfenylamino)-acetyl]-3-propyl-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón hydrochlorid

Výsledná zlúčenina sa pripraví podľa postupu uvedeného na prípravu výslednej zlúčeniny z príkladu 2 za použitia medziproduktu 26 ako východiskovej zlúčeniny.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 394, MH⁺ vypočítané 394.

I.R. v_max1748, 1675, 1355, 1149 cm'¹.

Príklad 114 rel-N-[2-(4-metánsulfonyl-5-oxo-6R-propylhexahydro-(3aS,6aR)-pyrolo[3,2-b]pyrol1 -yl)-2-oxo-etyl]acetamid

Výsledná zlúčenina sa pripraví podľa postupu uvedeného na prípravu výslednej zlúčeniny z príkladu 29 za použitia medziproduktu 26 ako východiskovej zlúčeniny.

Vypočítané pre C14H23N3O5S: C 48,68, H 6,71, N 12,16, S 9,28 %, nájdené: C 48,35, H 6,95, N 11,89, S 9,03.

Príklad 117 (3S,3aS,6aR)-4-(6-azepín-1-yl-hexanoyl)-1-metánsulfonyl-3-propyl-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón hydrochlorid

Cirkulárny dichroizmus: X_max 207,8 nm (ΔΕ = -0,79 M'¹cm'¹),

X_max 225,2 nm (ΔΕ - + 2,15 M‘¹cm'¹) (MeCN).

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 442, MH⁺ vypočítané 442.

Príklad 118 (3S,3aS,6aR)-1-metánsulfonyl-4-(3-piepridín-1-yl-propionyl)-3-propyl-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón hydrochlorid

-97Cirkulárny dichroizmus: : Z_max 223,8 nm (ΔΕ = +2,31 M'¹cm'¹) (MeCN).

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 386, MH⁺ vypočítané 386.

Príklad 119 rel-(3R,3aR,6aS)-1-metánsulfonyl-4-[4-(piperidín-1-karbonyl)benzénsulfonyl]-3propyl-hexahydropyrolo[3,2-b]-pyrol-2-ón

Pri teplote miestnosti sa 72 hodín mieša zmes 40 mg výslednej zlúčeniny z príkladu 122, 38 mg 1-hydroxybenztriazolu, 54 mg 1-(3-dimetylaminopropyl)-3etylkarbodiimid-hydrochloridu, 24,0 μΙ piperidínu a 10 ml acetonitrilu. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a vytvorený zvyšok sa rozdelí do 15 ml nasýteného vodného roztoku hydrogénuhličitanu sodného a 15 ml dichlórmetánu. Vodný podiel sa extrahuje 15 ml dichlórmetánu. Organický podiel sa zlúči, premyje sa 15 ml vody a 15 ml kyseliny chlorovodíkovej. Po sušení nad síranom horečnatým, filtrácii a odstránení rozpúšťadla vo vákuu vznikne 22 mg bielej tuhej látky výslednej zlúčeniny.

TLC (6% roztok metanolu v chloroforme): Rf 0,65.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 498, MH⁺ vypočítané 498.

Príklad 120 rel-N-[4-(4-metánsulfonyl-5-oxo-6R-propylhexahydro-(3aS,6aR)-pyrolo[3,2-b]pyrol1 -karbonyl)fenyl]acetamid

Výsledná zlúčenina ako biela tuhá látka sa pripraví podľa postupu uvedeného na prípravu výslednej zlúčeniny z príkladu 29 za použitia medziproduktu 26 ako východiskovej zlúčeniny.

TLC (metanokchloroform = 1:9): Rf 0,54.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 408, MH⁺ vypočítané 408.

Príklad 121 rel-4-(4-metánsulfonyl-5-oxo-6R-propyl-hexahydro-(3aS,6aR)-pyrolo[3,2-b]pyrol-1sulfonyl)-N-(2-piperidín-1 -yl-rtyl)benzamid hydrochlorid

-98Pri teplote miestnosti sa 1,5 hodiny mieša zmes 50 mg výslednej zlúčeniny z príkladu 122, 31 mg 1-hydroxybenztriazolu, 44 mg 1-(3-dimetylaminopropyl)-3etyl-karbodiimid-hydrochloridu a 10 ml acetonitrilu. Následne sa pridá 25 μΙ 1-(2aminoetyl)piperidínu. Po 1 hodine sa rozpúšťadlo odstráni vo vákuu a vytvorený zvyšok sa rozdelí do 50 ml dichlórmetánu a 50 ml vody. Organický podiel sa premyje 50 ml nasýteného vodného roztoku chloridu sodného. Po sušení nad síranom horeČnatým, filtrácii a odstránení rozpúšťadla vo vákuu vznikne surový produkt, ktorý sa po absorpcii na kolónu oxidu kremičitého (Merck 9385) čistí rýchlou chromatografiou. Vytvorí sa 29 mg bielej tuhej látky, ktorá sa zlúči s materiálom vyrobeným podobným postupom a pridá sa 1M roztok chlorovodíka v dietyléteru za vzniku 36 mg žltobieleho prášku výslednej zlúčeniny.

TLC voľných báz (metanoLdichlórmetán = 10:90): Rf 0,37.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 541, MH⁺ vypočítané 541.

Príklad 122 rel-(3aS,6R,6aS)-4-(4-metánsulfonyl-5-oxo-6-propyl-hexahydro-pyrolo[3,2-b]pyrol-1sulfonyl)benzoová kyselina

V atmosfére dusíka sa pri teplote miestnosti mieša zmes 300 mg medziproduktu 26, 680 μΙ, 350 mg kyseliny 4-(chlórsulfonyl)benzoovej a 15 ml dichlórmetánu. Po 2 hodinách sa reakčná zmes rozdelí medzi 120 ml dichlórmetánu a nasýtený vodný roztok chloridu sodného. Organický podiel sa oddelí, suší sa nad síranom horeČnatým, filtruje sa a zahustí vo vákuu za vzniku okrového prášku. Tento zvyšok sa po absorpcii na kolónu oxidu kremičitého (Merck 9385) čistí rýchlou chromatografiou pri elúcii zmesou acetonitrilu, kyseliny octovej a dichlórmetánu v pomere 5:1:94 za vzniku 213 mg bielej kryštalickej tuhej látky výslednej zlúčeniny. TLC (10% roztok metanolu v dichlórmetáne): Rf 0,43.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 431, MH⁺ vypočítané 431.

Príklad 123 hydrochlorid rel-N-(2-dimetylamino-etyl)-4-(4-metánsulfonyl-5-oxo-6R-propyl)hexahydro-(3aS,6aR)-pyrolo[3,2-b]pyrol-1-sulfonyl)benzamidu

-99Výsledná zlúčenina ako biela tuhá látka sa pripraví podľa postupu z príkladu 121 za použitia výslednej zlúčeniny z príkladu 122 ako východiskovej zlúčeniny.

TLC (dichlórmetán:etanol:amoniak = 75:8:1): Rf = 0,51.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 501, MH⁺ vypočítané 501.

Príklad 124 rel-(3aS,6R,6aR)-4-(4-metánsulfonyl-5-oxo-6-propyl-hexahydro-pyrolo[3,2-b]pyrol-1sulfonyl)-N-metylbenzamid

Výsledná zlúčenina ako žltá tuhá látka sa pripraví podľa postupu z príkladu 119 za použitia výslednej zlúčeniny z príkladu 122 ako východiskovej zlúčeniny.

TLC (metanoLchloroform = 6:94): Rf = 0,43.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 444, vypočítané MH⁺ 444.

Príklad 125 rel-N-cyklopropyl-4-(4-metánsulfonyl-5-oxo-6R-propyl-hexahydro-(3aS,6aR)-pyrolo[3,2-b]py rol-1 -sulfonyl)benzamid ,

Výsledná zlúčenina ako biela tuhá látka sa pripraví podľa postupu z príkladu 119 za použitia výslednej zlúčeniny z príkladu 122 ako východiskovej zlúčeniny.

TLC (metanoLchloroform = 6:94): Rf = 0,49.

Hmotnostné spektrum: MNH₄ ⁺ nájdené 487, MNH₄ ⁺ vypočítané 487.

Príklad 126 rel-4-(4-metánsulfonyl-5-oxo-6R-propyl-hexahydro-(3aS,6aR)-pyrolo[3,2-b]pyrol-1sulfonyl)-N,N-dimetylbenzamid

Výsledná zlúčenina ako biela tuhá látka sa pripraví podľa postupu z príkladu 119 za použitia výslednej zlúčeniny z príkladu 122 ako východiskovej zlúčeniny.

TLC (metanoLchloroform = 6:94): Rf = 0,65.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 458, MH⁺ vypočítané 458.

- 100Príklad 127 rel-(3R,3aR,6aS)-1-metánsulfonyl-4-[4-(4-metylpiperazín-1-karbonyl)benzénsulfonyl]-3-propylhexahydro-pyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón hydrochlorid

Výsledná zlúčenina ako žltá tuhá látka sa pripraví podľa postupu z príkladu 121 za použitia výslednej zlúčeniny z príkladu 122 ako východiskovej zlúčeniny.

TLC (voľných báz) (metanokchloroform = 6:94): Rf = 0,33.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 513, MH⁺ vypočítané 513.

Príklad 128 etylester kyseliny rel-(3R,3aR,6aS)-4-(4-metánsulfonyl-5-oxo-6-propyl-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-1-yl)-4-oxo-but-2E-énovej

Pri teplote miestnosti sa 16 hodín mieša zmes 400 mg medziproduktu 26, 346 mg monoetylesteru kyseliny fumarovej, 324 mg 1-hydroxybenztriazolu a 640 mg (1-(3-dimetylamino-propyl)-3-etylkarbodiimid-hydrochloridu v 2 ml bezvodého dimetylformamidu. Pridá sa 40 ml 8% roztoku hydrogénuhličitanu sodného a reakčná zmes sa extrahuje 50 ml etylacetátu. Organický extrakt sa premyje trikrát 50 ml vody, suší sa nad síranom sodným, filtruje sa a zahustí vo vákuu za vzniku tuhej látky, ktorá sa rozotrie v 25 ml éteru, filtruje sa a suší vo vákuu za vzniku 486 mg okrovej tuhej látky výslednej zlúčeniny s teplotou topenia 184 až 185 °C. Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 373, MH⁺ vypočítané 373.

Príklad 129 kyselina rel-4-(4-metánsulfonyl-5-oxo-6-propyl-hexahydro-(3aS,6aR)-pyrolo[3,2-b]pyrol-1 -yl)-4-oxo-but-2E-énovej

Pri teplote 60 až 70 °C sa 17 hodín zahrieva roztok 465 mg výslednej zlúčeniny z príkladu 128 v 35 ml dioxánu a 15 ml 2M roztoku kyseliny chlorovodíkovej. Reakčná zmes sa následne mieša 1,5 hodinu pri teplote 70 až 80 °C. Ochladená zmes sa zahustí vo vákuu na približne 20 ml a dvakrát sa extrahuje 35 ml etylacetátu. Zlúčené organické extrakty sa premyjú 20 ml vody, sušia sa nad

- 101 síranom sodným, filtrujú sa a zahustia vo vákuu za vzniku 281 mg žltej peny výslednej zlúčeniny.

TLC oxid kremičitý (etylacetát): Rf 0,45.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 345, MH⁺ vypočítané 345.

Príklad 130 rel-(3R,3aR,6aS)-1-(4-metánsulfonyl-5-oxo-6-propyl-hexahydro-pyrolo[3,2-b]pyrol-1y|)-4-(4-metyl-piperazín-1-yl)but-2E-én-1,4-dión hdyrochlorid

Do miešaného roztoku 55 mg výslednej zlúčeniny z príkladu 129, 27 mg 1hydroxybenztriazolu a 39 mg 1-(3-dimetylaminorpopyl)-3-etylkarbodiimid-hydrochloridu v 1,5 ml bezvodého dimetylformamidu sa pridá roztok 30 mg 1-metylpiperazínu v 0,5 ml bezvodého dimetylformamidu. Reakčná zmes sa 20 hodín mieša pri teplote miestnosti a potom sa do nej za stáleho miešania pridá 25 ml 4% roztoku hydrogénuhličitanu sodného. Zmes sa trikrát extrahuje 25 ml etylacetátu a zlúčené organické extrakty sa dvakrát premyjú 35 ml vody, sušia sa nad síranom sodným, filtrujú sa a zahustia vo vákuu za vzniku tuhej látky. Tento zvyšok sa rozotrie v 10 ml dietyléteru a éter sa dekantuje. Zvyšok sa suší vo vákuu za vzniku 54 mg okrovej tuhej látky výslednej zlúčeniny.

TLC oxid kremičitý (dichlórmetán:etanol:amoniak (špecifická hmotnosť = 0,88) = 100:8:1) Rf = 0,35.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 427, MH⁺ vypočítané 427.

Príklad 131 rel-(3R,3aR,6aS)-4-but-2E-enoyl-1-metánsulfonyl-3-propyl-hexahydropyrolo[3,2-bjpyrol-2-όη

Do 10 minút miešaného roztoku 54 mg 1-hydroxybenztriazolu a 77 mg 1-(3dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid-hydrochloridu a 35 mg kyseliny krotónovej v 3 ml bezvodého tetrahydrofuránu sa pri teplote miestnosti pridá 50 mg medziproduktu 26. Reakčná zmes sa 18 hodín mieša pri teplote miestnosti, rozdelí sa medzi 8 ml 8% roztoku hydrogénuhličitanu sodného a 15 ml etylacetátu.

- 102Organický podiel sa oddelí, premyje sa 10 ml 0,5M roztoku kyseliny chlorovodíkovej a 10 ml vody, suší sa nad síranom sodným a filtruje sa za vzniku polotuhej látky. Tento produkt sa po absorpcii na kolónu oxidu kremičitého čistí rýchlou chromatografiou pri elúcii najskôr zmesou cyklohexánu a etýlacetátu v pomere najskôr 1:1 a potom sa plynulo zvyšuje koncentrácia etýlacetátu na konečný pomer 2:1. Vznikne výsledná zlúčenina ako 44 mg okrového prášku s teplotou topenia 165 až 166 °C.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 315, MH⁺ vypočítané 315.

Príklad 132 rel-(3R,3aR,6aS)-1-metánsulfonyl-4-{3-[4-(4-metylpiperazín-1-ylmetyl)fenyl]-(E)akryloyl}-3-propylhexahydro-pyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón-dihdyrochlorid

Výsledná zlúčenina s teplotou topenia 188 až 192 °C sa pripraví podľa postupu z príkladu 62 za použitia medziproduktu 115 ako východiskovej zlúčeniny. Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 489, MH⁺ vypočítané 489.

Príklad 133 rel-(3R,3aR,6aS)-1-metánsulfonyl-4-[3-(4-piepridín-1-ylmetyl-fenyl)-(E)-akryloyl]-3propyl-haxahydro-pyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón hydrochlorid

Výsledná zlúčenina s teplotou topenia 152 až 157 °C sa pripraví podľa postupu z príkladu 62 za použitia medziproduktu 115 ako východiskovej zlúčeniny. Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 474, MH⁺ vypočítané 474.

Príklad 134 rel-N-{4-[3-(4-metánsulfonyl-5-oxo-6R-propyl-haxahydro-(3aS,6aR)-pyrolo[3,2b]pyrol-1-yl)-3-oxo-(E)-propenyl]-fenyl}acetamid

Výsledná zlúčenina stepltoou topenia 213 až 215 °C sa pripraví podľa postupu z príkladu 131 za použitia medziproduktu 26 ako východiskovej zlúčeniny. Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 434, MH⁺ vypočítané 343.

- 103Príklad 136 rel-(3R,3aR,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(4-piperidín-1-yl-but-2E-enoyl)hexahydro-pyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón hydrochlorid

Do miešaného roztoku 308 mg medziproduktu 113, 202 mg 1hydroxybenztriazolu, 286 mg 1-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid hydrochloridu a 303 mg trietylamínu v 5 ml bezvodého dimetylformamidu sa pridá 246 mg medziproduktu 86 v 1 ml bezvodého dimetylformamidu. reakčná zmes sa 16 hodín mieša pri teplote miestnosti, pridá sa 25 ml 8% roztoku hydrogénuhličitanu sodného a extrahuje sa 35 ml a 25 ml etylacetátu. Organický podiel sa dvakrát premyje 30 ml vody, suší sa nad síranom sodným, filtruje sa a odparuje za vzniku gumy. Tento zvyšok sa po absorpcii na kolónu oxidu kremičitého čistí rýchlou chromatografiou pri elúcii zmesou dichlórmetánu, etanolu a amoniaku v pomere 100:8:1 za vzniku 266 mg svetložltej peny ako hlavného produktu. Tvorbou soli pridaním 1M roztoku chlorovodíka v dietyléteri v malom molárnom prebytku vznikne 269 mg bieleho prášku výslednej zlúčeniny s teplotou topenia vyššou ako 220 °C (za rozkladu).

TLC oxid kremičitý (dichlórmetán:etanol:amoniak (špecifická hmotnosť = 0,88) = 100:8:1: Rf= 0,5.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 398, MH⁺ vypočítané 398.

príklad 136 rel-(3R,3aR,6aS)-4-(4-azepín-1-yl-but-2E-enoyl)-3-izopropyl-1-metánsulfonylhexahydro-pyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón

Pri teplote miestnosti sa 5 dní mieša roztok 50 mg medziproduktu 86, 104 mg medziproduktu 120, 150 mg 1-(3-N,N-dimetylaminopropyl)-3-etyl-karbodiimid hydrochloridu, 250 ml trietylamínu a 750 mg bezvodého sulfátu sodného v 10 ml dichlórmetánu a 0,5 ml dimetylformamidu. Reakčná zmes sa rozdelí medzi 6 ml dichlórmetánu a 4% vodného roztoku hydrogénuhličitanu sodného. Vodný podiel sa dvakrát extrahuje 3 ml dichlórmetánu. Zlúčené organické extrakty sa sušia nad síranom sodným, filtrujú sa a odparujú za vzniku viskózneho oleja, ktorý sa po absorpcii na kolónu oxidu kremičitého čistí rýchlou chromatografiou pri elúcii

- 104zmesou etanolu, dichlórmetánu a amoniaku v pomere 8:100:1. Vytvorí sa bezfarebné sklo, ktoré sa rozpustí v 3 ml dichlórmetánu a 3 ml 1M éterového roztoku chlorovodíka. Vytvorený produkt sa odparuje za vzniku 43 mg svetložltej tuhej látky výslednej zlúčeniny s teplotou topenia 150 až 154 °C.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 412, MH⁺ vypočítané 412.

Príklad 137 rel-(3R,3aR,6aS)-4-(4-cyklopropylamino-but-2E-enoyl)-3-izopropyl-1-metánsulfonylhexahydro-pyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón hydrochlorid

Pri teplote miestnosti sa 24 hodín mieša reakčná zmes 30 mg medziproduktu 117, 15 mg cyklopropylamínu a 30 mg jodidu sodného v 3 ml acetonitrilu. Acetonitril sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa rozdelí medzi 15 ml etylacetátu a 10 ml 8% roztoku hydrogénuhličitanu sodného. Organický podiel sa oddelí, premyje sa 12 ml vody a suší sa nad síranom sodným. Po filtrácii a odparovaní vznikne guma, ktorá sa po absorpciu na kolónu oxidu kremičitého čistí rýchlou chromatografiou pri elúcii zmesou etylacetátu a metanolu v pomere 10:1 za vzniku 12 mg gumy ako hlavného produktu. Roztok tejto gumy v 5 ml zmesi a etylacetátu v pomere 1:1 sa mieša a pridá sa 0,15 ml 1M éterového roztoku chlorovodíka. Rozpúšťadlo sa dekantuje a vytvorená tuhá látka sa premyje éterom a suší sa vo vákuu. Vznikne 13 mg výslednej zlúčeniny ako svetložltej tuhej látky.

TLC oxid kremičitý (dichlórmetán:etanol:amoniak (špecifická hmotnosť = 0,88) = 100:8:1): Rf=0,5.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 370, MH⁺ vypočítané 370.

Príklady 138 až 147

Výsledné zlúčeniny z príkladov 138 až 147 sa pripravia podľa postupu z príkladu 137 za použitia medziproduktu 117 ako východiskovej zlúčeniny.

- 105Príklad 138 rel-(3R,3aR,6aS)-4-[4-(4-acetyl-piperazín-1-yl)-but-2E-enoyl]-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-hexahydro-pyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón hydrochlorid

TLC oxid kremičitý (dichlórmetán:etanol:amoniak (špecifická hmotnosť = 0,88) = 100:8:1: Rf=0,45.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 441, MH⁺ vypočítané 441.

Príklad 139 rel-(3R,3aR,6aS)-4-[4-(2,6-dimetylpiperidín-1-yl)-but-2E-enoyl]-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón hydrochlorid

TLC oxid kremičitý (dichlórmetán:etanol:amoniak (špecifická hmotnosť = 0,88) = 100:8:1): Rf=0,53.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 426, MH⁺ vypočítané 426.

Príklad 140 hydrochlorid metylesteru kyseliny 1-[4-(rel-6R-izopropyl-4-metánsulfonyl-5-oxohexahydro-(3aS,6aR)-pyrolo[3,2-b]pyrol-1-yl)oxo-but-2E-enoyl]-pyrolidín-2S-karboxylovej

TLC oxid kremičitý (dichlórmetán:etanol:amoniak (špecifická hmotnosť = 0,88) = 100:8:1): Rf= 0,55.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 442. MH⁺ vypočítané 442.

Teplota topenia 118 až 122 °C.

Príklad 141 rel-(3R,3aR,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-[4-(metylpropylamino)-but-2Eenoyl]-hexahydro-pyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón-hydrochlorid

TLC oxid kremičitý (dichlórmetán:etanol:amoniak (špecifická hmotnosť = 0,88) = 100:8:1): Rf= 0,55.

- 106Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 386, MH⁺ vypočítané 386.

Príklad 142 rel-(3R,3aR,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(4-morfolín-4-yl-but-2E-enoyl)hexahydro-pyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón hydrochlorid

TLC oxid kremičitý (dichlórmetán:etanol:amoniak (špecifická hmotnosť = 0,88) 100:8:1): Rf=0,65.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 400, MH⁺ vypočítané 400.

Teplota topenia: 152 až 155 °C.

Príklad 143 rel-(3R,3aR,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-[4-(4-metyl-piperazín-1-yl)-but-2Eenoyl]-hexahydro-pyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón hydrochlorid

TLC oxid kremičitý (dichlórmetán:etanol:amoniak (špecifická hmotnosť = 0,88) 100:8:1): Rf= 0,15.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 413, MH⁺ vypočítané 413.

Teplota topenia: 166 až 171 °C.

Príklad 144 rel-(3R,3aR,6aS)-4-(4-diizopropylamino-but-2E-enoyl)-3-izopropyl-1 -metánsulfonyl hexahydro-pyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón hydrochlorid

TLC oxid kremičitý (dichlórmetán:etanol:amoniak (špecifická hmotnosť = 0,88) 100:8:1): Rf=0,50.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 414, MH⁺ vypočítané 414.

Teplota topenia: 119 až 123 °C.

Príklad 145 rel-(3R,3aR,6aS)-4-(4-dietylamino-but-2E-enoyl)-3-izopropyl-1-metánsulfonylhexahydro-pyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón hydrochlorid

- 107 TLC oxid kremičitý (dichlórmetán:etanol:amoniak (špecifická hmotnosť = 0,88) = 100:8:1): Rf= 0,56.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 386, MH⁺ vypočítané 386.

Príklad 146 rel-(3R,3aR,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(4-pyrolidín-1-yl-but-2E-enoyl)hexahydro-pyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón hydrochlorid

TLC oxid kremičitý (dichlórmetán:etanol:amoniak (špecifická hmotnosť = 0,88) = 100:8:1): Rf=0,35.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 384, MH⁺ vypočítané 384.

Teplota topenia: 130 až 135 °C.

Príklad 147 rel-(3R,3aR,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-[4-(metoxymetylamino)-but-2Eenoyl]-hexahydro-pyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón hydrochlorid

TLC oxid kremičitý (dichlórmetán:etanol:amoniak (špecifická hmotnosť = 0,88) = 100:8:1): Rf= 0,60.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 374, MH⁺ vypočítané 374.

Príklad 148 rel-(3R,3aR,6aS)-4-(4-dimetylamino-but-2E-enoyl)-3-izopropyl-1-metánsulfonylhexahydro-pyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón hydrochlorid

Reakčná zmes 30 mg medziproduktu 118, 30 mg jodidu sodného, 20 mg dimetylamóniumchloridu a 15 ml trietylaminu v 2 ml acetonitrilu sa 18 hodín mieša pri teplote miestnosti. Pridá sa ďalších 20 mg dimetylamóniumchloridu a 22 mg trietylaminu a reakčná zmes sa ďalej 24 hodín mieša. Zmes sa rozdelí medzi dvakrát 15 ml etylacetátu a 4 ml 8% roztoku hydrogénuhličitanu sodného. Organické extrakty sa premyjú 10 ml vody, sušia sa nad síranom sodným, filtrujú sa a zahustia za vzniku gumy, ktorá sa po absorpcii na kolónu oxidu kremičitého čistia rýchlou

- 108chromatografiou pri elúcii zmesou dichlórmetánu, etanolu a amoniaku v pomere 100:8:1 za vzniku 12 mg tuhej látky ako hlavného produktu. Tvorbou soli pridaním v miernom molárnom prebytku 1M éterového roztoku chlorovodíka vznikne 13 mg bieleho prášku výslednej zlúčeniny s teplotou topenia 224 až 228 °C.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 358, MH⁺ vypočítané 358.

Príklady 149 až 153

Výsledné zlúčeniny príkladov 149 až 153 sa pripravia podľa postupu z príkladu 148 za použitia medziproduktu 118 ako východiskovej zlúčeniny.

Príklad 149 rel-(3R,3aR,6aS)-4-[4-(2,5-dimetyl-pyrolidín-1-yl)but-2E-enoyl]-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-hexahydro-pyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón hydrochlorid

TLC oxid kremičitý (dichlórmetán:etanol:amoniak (špecifická hmotnosť = 0,88) = 100:8:1): Rf= 0,64.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 412, MH⁺ vypočítané 412.

Teplota topenia 121 až 125 °C.

Príklad 150 hdyrochlorid rel-2-{[4-(6R-izopropyl-4-metánsulfonyl-5-oxo-hexahydro-(3aS,6aR)pyrolo[3,2-b]pyrol-1-yl)-4-oxo-but-2E-enoyl]-metylamino}acetamidu

TLC oxid kremičitý (dichlórmetán:etanol:amoniak (špecifická hmotnosť = 0,88) = 100:8:1): Rf= 0,50.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 401, MH⁺ vypočítané 401.

Teplota topenia 136 až 141 °C.

Príklad 151 rel-(3R,3aR,6aS)-3-izopropyl-4-(4-izopropylamino-but-2E-enoyl)-1-metánsulfonylhexahydro-pyrolo-[3, 2-b]-pyrol-2-ón-hydrochlorid

-109TLC oxid kremičitý (dichlórmetán:etanol:amoniak (špecifická hmotnosť - 0,88) = 100:8:1) Rf = 0,30.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 372, MH⁺ vypočítané 372.

Teplota topenia 140 až 145 °C.

Príklad 152 hydrochlorid amidu kyseliny rel-1-[4-(6R-izopropyl-4-metánsulfonyl-5-oxohexahydro-(3aS,6aR)-pyrolo-[3,2-b]-pyrol-1-yl)-4-oxo-but-2E-enoyl]-pyperidín-4-karboxylovej

TLC oxid kremičitý (dichlórmetán:etanol:amoniak (špecifická hmotnosť - 0,88) = 100:8:1) Rf = 0,13.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 441, MH⁺ vypočítané 441.

Teplota topenia 152 až 156 °C.

Príklad 153 rel-(3R, 3aR, 6aS)-4-[4-(5,8-difluór-1,3,3a,4,9,9a-hexahydro-(3aS,9aS)-benzo[f]izoindol-2-yl)but-2E-enoyl]-3-izpropyl-1-metánsulfonyl-hexahydro-pyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón-hydrochlorid

TLC oxid kremičitý (dichlórmetán:etanol:amoniak (špecifická hmotnosť - 0,88) = 100:8:1) Rf=0,56.

Hmotnostné spektrum: MH⁺nájdené 522, MH⁺ vypočítané 522.

Teplota topenia 165 až 170 °C.

Príklad 154 (3R,3aS,6aR)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(4-piperidín-1-yl-but-3E-enoyl)hexahydro-pyrolo[3,2-b]-pyrol-2-ón-hydrochlorid

Do miešaného roztoku 0,187 g medziproduktu 113, 0,14 g 1-hydroxybenztriazolu, 0,198 g 1-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid-hydrochloridu, 4 ml dimetylformamidu a 288 μΙ trietylamínu sa pridá 0,17 g medziproduktu 122 v 1 ml

- 110dimetylformamide. reakčná zmes sa tri hodiny mieša, pridá sa 15 ml etylacetátu a reakčná zmes sa premyje 20 ml 8% roztoku hydrogénuhličitanu sodného. Do vodného podielu sa pridá 10 ml vody a zmes sa dvakrát extrahuje 10 ml etylacetátu. Zlúčené organické extrakty sa premyjú 10 ml vody a nasýteným roztokom chloridu sodného, suší sa nad síranom horečnatým, filtruje sa a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu za vzniku červeného oleja. Tento zbytok sa po absorpcii na kolónu oxidu kremičitého čistí rýchlou chromatografiou pri elúcii zmesí dichlómetánu, etanolu a 0,88 amoniaku v pomere 100:8:1. Frakcia obsahujúca požadovaný produkt sa zlúči, rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a vytvorená svetlo žltá kryštalická pevná látka sa rozpustí v 5 ml dichlórmetáne. Pridajú sa 2 ml 1M éterového roztoku chlorovodíka. Roztok sa zahustí vo vákuu a suší sa vo vákuu za vzniku 0,168 g bielej tuhej látky výslednej zlúčeniny s teplotou topenia 208 až 211 °C.

TLC oxid kremičitý (dichlórmetán:etanol:amoniak (špecifická hmotnosť - 0,88) = 100:8:1) Rf = 0,37.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 398, MH⁺ vypočítané 398.

Cirkulárny dichroizmus: λ_ΜΑχ 243,8 nm (ΔΕ -0,97 M¹ cm'¹), λ_ΜΑχ 283,8 nm (ΔΕ +2,27 M'¹ cm'¹) (MeOH);

[a]²⁰D = (+) 48,3 (c = 0,55 mg/ml, MeOH);

Chirálne HPLC (kolóna Chiracel AD; elúčne činidlo 40% roztok etanolu v n-heptáne; rýchlosť prietoku 1 ml/min): doba retencie = 7,8 min, čistota enantiomérov >99%; ¹H-NMR (400Hz, CDCI₃) : 3H d 1,00 J 7, 3H d 1,25 J 7, 1H br 1,51, 3H br 1,82, 2H br 1,92, 1H m 2,13 kvin J 11, 1H dt 2,53 J 6a 11, 1H m 2,96, 3H br 2,97, 3H s 3,24,

1H t 3,44 J 11, 2H br 3,49, 1H m 3,66, 2H 3,93 m, 2 H br 13,99 J 9, 2H m 6,73, IR(KBr): v_max(crn'¹) = 1744, 1672, 1631, 1452, 1355, 1166, 1144.

C¹³ NMR (62,9 MHz, CDCI₃) 17,1, 22,1, 23,0, 24,8, 28,6,30,0, 40,4, 51,4, 54,8,

56,8, 58,6, 62,5, 65,8, 132,3, 133,4, 166,2, 178,2 Nájdené: C 50,1, H 7,7, N 9,4, S 7,4;

Vypočítané pre Ci₉H₃₁N₃O₄S .HCl. H₂O:

C 50,5, H 7,6, N 9,3, S 7,1%.

- 111 Príklad 155 (3R,3aR,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(4-pÍperidín-1-yl-but-2E-enoyl)-hexahydropyrolo-[3,2-b]-pyrol-2-ón-hydrochlorid

Do 10 minút v atmosfére dusíka miešanej zmesi 25 mg medziproduktu 113, 16 mg 1-hydroxybenztriazolu a 23 mg 1-(3-N,N-dimetylaminopropyl)-3-etyl-karbodiimidu a 33 μΙ trietylamínu v 0,5 ml dimetylformamide sa pridá roztok 20 mg medziproduktu 124 v 0,5 ml dimetylformamide. Reakčná zmes sa 2 hodiny mieša pri teplote miestnosti a reakčná zmes sa vleje na 3 ml 8% vodného roztoku hydrogénuhličitanu sodného. Zmes sa dvakrát extrahuje 20 ml etylacetátu. Zlúčené extrakty sa dvakrát premyjú 10 ml vody. Organické podiely sa sušia nad síranom horečnaým, filtrujú sa a odparia sa za vzniku pastovitej gumy. Tento zbytok sa po absorpcii na kolónu oxidu kremičitého čistí rýchlou chromatografiou pri elúcii zmesí dichlórmetánu, etanolu a 0,88 amoniaku v pomere 100:8:1. Vytvorená biela pasta sa rozotrie a 3 ml 1,0 M éterového roztoku chlorovodíka. Zrazenina sa zoberie a suší za vzniku 17 mg jemne práškovej svetložltej tuhej látky výslednej zlúčeniny. TLC oxid kremičitý (dichlórmetán:etanol:amoniak (špecifická hmotnosť - 0,88) = 100:8:1) Rf= 0,23.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 398, MH⁺ vypočítané 398.

Príklady 158 až 159

Výsledné zlúčeniny z príkladov 158 až 159 sa pripravia podľa postupu z príkladu 62 za použitia medziproduktu 132 ako východzej zlúčeniny.

Príklad 158 rel-(3R,3aR,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-[3-(4-piperidín-1-ylmetyl-fenyl)-(E)akryloyl]-hexahydropyrolo-[3, 2-b]-pyrol-2-ón-hydrochlorid

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 474, MH⁺ vypočítané 474.

TLC oxid kremičitý (dichlórmetán:etanol:amoniak (špecifická hmotnosť - 0,88) = 100:8:1) Rf = 0,50.

- 112Teplota topenia 149 až 152 °C.

Príklad 159 rel-(3R,3aR,6aS)-4-[3-(4-dimetylaminometyl-fenyl)-(E)-akryloyl]-3-izopropyl-1metán-sulfonyl-hexahydro-pyrolo-[3, 2-b]-pyrol-2-ón-hydrochlorid

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 434, MH⁺ vypočítané 434.

TLC oxid kremičitý (dichlórmetán:etanol:amoniak (špecifická hmotnosť - 0,88) = 100:8:1) Rf=0,42.

Teplota topenia 149 až 152 °C.

Príklad 160

DL-vínan rel-(3R,3aR,6aS)-1-etánsulfonyl-4-(3-piperidín-1-yl-propionyl)-3-propylhexahydro-pyrolo-[3,2-b]-pyrol-2-ónu

Do miešanej suspenzie 44 mg 35% disperzie hydridu draselného v minerálnom oleji, premytej 2 ml hexánu, v 2 ml bezvodého tetrahydrofuránu sa v atmosfére dusíka pri teplote približne 2 °C pridá roztok 44 mg medziproduktu 133 v 3 ml bezvodného tetrahydrofuránu. Po 1,75 hodine sa zmes schladí na -75 °C a pridá sa 27 μΙ etánsulfonylchloridu. Reakčná zmes sa ďalšiu 1,5 hodinu mieša pri teplote -75 °C, a následne sa pridá 1 ml 8% roztoku hydrogénuhličitanu sodného. Reakčná zmes sa nechá ohriať na teplotu miestnosti a rozdelí sa medzi 10 ml 8% roztoku hydrogénuhličitanu sodného a 10 ml etylacetátu. Zlúčené organické extrakty sa premyjú 10 ml nasýteného roztoku chloridu sodného, suší sa nad síranom sodným, filtruje sa a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu za vzniku žltého oleja. Tento produkt sa po absorpcii na kolónu oxidu kremičitého čistí rýchlou chromatografiou pri elúcii zmesí dichlórmetánu a metanolu v pomere 7:1. Frakcia obsahujúca požadovanú zlúčeninu sa zlúči a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu za vzniku 28 mg bezfarebného oleja, ktorý sa rozpustí v 2 ml etanolu. Do reakčného roztoku sa pri miešaní pridá roztok 10,5 mg kyseliny DL-vínnej v 1 ml etanolu. Po 15 minútach miešania sa rozpúšťadlo odstráni vo vákuu a vytvorený zbytok sa vo vákuu dvakrát odparuje dosucha z éteru. Vznikne 38 mg bielej peny výslednej zlúčeniny.

-113TLC dosky oxidu kremičitého (dichlórmetán:metanol = 7:1) Rf =0,29.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 400, MH⁺ vypočítané 400.

Príklady 161 až 164

Výsledné zlúčeniny z príkladov 161 až 164 sa pripravia podľa postupu z príkladu 160 za použitia medziproduktu 133 ako východzej zlúčeniny.

Príklad 161

DL-vínan rel-(3R,3aR,6aS)-4-(3-piperidín-1 -yl-propionyl)-1 -(propán-2-sulfonyl)-3propyl-hexahydro-pyrolo[3,2-b]-pyrol-2-ónu

TLC (dichlórmetán:metanol = 7:1) Rf = 0,3.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 414, MH⁺ vypočítané 414.

Príklad 162

DL-vínan rel-(3R,3aR,6aS)-4-(3-piperidín-1-yl-propionyl)-1-(propán-1-sulfonyl)-3propyl-hexahydro-pyrolo-[3,2-b]-pyrol-2-ónu

TLC (dichlórmetán:metanol = 7:1) Rf = 0,25.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 414, MH⁺ vypočítané 414.

Príklad 163

DL-vínan rel-(3R,3aR,6aS)-1-(bután-1-sulfonyl)-4-(3-piperidín-1-yl-propionyl)-3propyl-hexahydro-pyrolo[3,2-b]-pyrol-2-ónu

TLC (dichlórmetámmetanol = 7:1) Rf = 0,3.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 428, MH⁺ vypočítané 428.

Príklad 164

DL-vínan rel-(3R,3aR,6aS)-4-(3-piperidín-1 -yl-propionyl)-3-propyl-1 -(2,2,2-trifluóretánsulfonyl)-hexahydro-pyrolo[3,2-b]-pyrol-2-ónu

- 114TLC (dichlórmetán:metanol = 7:1) Rf = 0,36.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 454, MH⁺ vypočítané 454.

Príklady 166 a 167

Výsledné zlúčeniny z príkladov 166 a 167 sa pripravia podľa postupu z príkladu 160 za použitia medziproduktu 135 ako východzej zlúčeniny.

Príklad 166

DL-vínan rel-(3R,3aR,6aS)-4-(3-piperidín-1-yl-propán-1-sulfanyl)-1-(propán-2sulfonyl)-3-propyl-hexahydro-pyrolo[3,2-b]-pyrol-2-ónu

TLC (dichlórmetán:metanol = 7:1) Rf = 0,38.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 464, MH⁺ vypočítané 464.

Príklad 167

DL-vínan rel-(3R,3aR,6aS)-1 -(bután-1 -s ulfonyl)-4-(3-piperid í n-1 -yl-propán-1 sulfonyl)-3-propyl-hexahydro-pyrolo[3,2-b]-pyrol-2-ónu

TLC (dichlórmetán:metanol = 7:1) Rf = 0,46.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 478, MH⁺ vypočítané 478.

Príklad 168

DL-vínan rel-(3R,3aR,6aS)-1-(benzo[1,2,5]tiadiazol-4-sulfonyl)-4-(3-piperidín-1-ylpropionyl)-3-propyl-hexahydro-pyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón

Do miešanej suspenzie 43 mg 35% disperzie hydridu draselného v minerálnom oleji, premytej približne 5 ml hexánu, v 2 ml bezvodého tetrahydrofuránu sa v atmosfére dusíka pri teplote 0 °C pridá roztok 33 mg medziproduktu 133 v 2 ml bezvodného tetrahydrofuránu. Reakčná zmes sa 2 hodiny mieša pri teplote 0 °C, roztok sa schladí na -75 °C a pridá sa roztok 76 mg 2,1,3-benzotiadiazol-4- 115sulfonylchloridu v 2 ml bezvodého tetrahydrofuránu. Reakčná zmes sa 1,5 hodiny mieša pri teplote -75 °C. Pridajú sa 2 ml 8% vodného roztoku hydrogénuhličitanu sodného a reakčná zmes sa nechá ohriať na teplotu miestnosti. Zmes sa rozdelí do 50 ml etylacetátu a 150 ml 8% vodného roztoku hydrogénuhličitanu sodného. Podiely sa oddelia a vodný podiel sa premyje 50 ml etylacetátom. Zlúčené organické extrakty sa sušia nad síranom horečnatým, filtruje sa a zahustí vo vákuu za vzniku žltej gumy. Táto sa po absorpcii na kolónu oxidu kremičitého čistí rýchlou chromatografiou pri elúcii zmesí dichlórmetánu a metanolu v pomere 9:1. Po odparení rozpúšťadla vo vákuu vznikne 36 mg bezfarebného oleja, ktorý sa rozpustí v 2 ml etanolu a 10,7 g kyseliny (D,L)-vínnej. Prchavý podiel sa po 15 minútach odstráni vo vákuu za vzniku 50 mg hnedej tuhej látky výslednej zlúčeniny.

TLC dosky oxidu kremičitého (dichlórmetán:metanol = 7:1) Rf = 0,41.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 506, MH⁺ vypočítané 506.

Príklad 173 rel-(3R,3aR,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(4-pyrolidín-1-yl-metylbenzoyl)hexahydropyrol[3,2-b]-pyrol-2-ón-hydrochlorid

Do miešaného roztoku 30 mg medziproduktu 136 v 3 ml bezvodého dichlórmetánu sa pridá 7,3 μΙ pyrolidínu. Po niekoľkých minútach sa pridá 25,2 mg triacetoxybórhydridu sodného a reakčná zmes sa 3 dni mieša. Do zmesi sa za energického miešania behom 10 minút pridá 1 ml nasýteného roztoku hydrogénuhličitanu sodného. Organický podiel sa čistí chromatografiou, podiely obsahujúce výslednú zlúčeninu sa zlúči a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu za vzniku 25 mg bezfarebného oleja. Tento produkt sa rozpustí v 2 ml dichlórmetánu a 1 ml 1,0M roztoku chlorovodíka v dietyléteri. Rozpúšťadlo sa odparí vo vákuu za vzniku 27 mg bielej tuhej látky výslednej zlúčeniny.

TLC dosky oxidu kremičitého (dichlórmetán:metanol = 7:1) Rf = 0,18.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 434, MH⁺ vypočítané 434.

- 116Príklady 174 až 175, 177 až 179, 182 až 187

Výsledné zlúčeniny z príkladov sa pripravia podľa postupu z príkladu 173 za použitia medziproduktu 136 ako východzej zlúčeniny.

Príklad 174 rel-(3R,3aR,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(4-pyrolidín-1-yl-metylbenzoyl)hexahydropyrolo[3,2-b]-pyrol-2-ón-hydrochlorid

TLC (dichlórmetán:metanol = 9:1) Rf = 0,25;

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 448, MH⁺ vypočítané 448.

Príklad 175 rel-(3R,3aR,6aS)-4-(4-dimetylamino-metylbenzoyl)-3-izopropyl-1-metánsulfonylhexahydropyrolo[3,2-b]-pyrol-2-ón-hydrochlorid

TLC (dichlórmetán:metanol = 4:1) Rf =0,31.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 408, MH⁺ vypočítané 408.

Príklad 176 rel-(3R,3aR,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-[4-(4-metyl-piperazín-1-ylmetyl)benzoyl]-hexahydropyrolo[3,2-b]-pyrol-2-ón-dihydrochlorid

Do miešaného roztoku 45 mg medziproduktu 136 v 2 ml bezvodého roztoku dichlómetánu sa v atmosfére dusíka pridá 7 μΙ kyseliny octovej, 14,5 μΙ N-metylpiperazínu a 38 mg triacetoxybórhydridu sodného. Reakčná zmes sa 20 hodín mieša, pridá sa 1 ml nasýteného roztoku hydrogénuhličitanu sodného a reakčná zmes sa energicky 10 minút mieša. Zmes sa zriedi 10 ml hydrogénuhličitanu sodného a 10 ml dichlórmetánu. Po oddelení podielov sa vodný podiel dvakrát extrahuje 10 ml metylénchloridu. Zlúčené organické extrakty sa sušia nad síranom sodným, filtrujú sa a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu za vzniku číreho oleja, ktorý

-117sa po absorpcii na kolónu oxidu kremičitého (Merck 9385) čistí rýchlou chromatografiou pri elúcii zmesou metylénchloridu a metanolu v pomere 9:1. Podiely obsahujúce požadovanú zlúčeninu sa zlúčia a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu za vzniku číreho oleja, tento produkt sa rozpustí v 8 ml dichlórmetánu a pridá sa 1 ml 1M éterového roztoku chlorovodíka. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu za vzniku 52,5 g okrovej tuhej látky výslednej zlúčeniny.

TLC oxid kremičitý (dichlórmetán:metanol = 9:1): Rf = 0,08.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 463, MH⁺ vypočítané 463.

Príklady 177 až 179

Výsledné zlúčeniny z príkladov sa pripravia podľa postupu z príkladu 173 za použitia medziproduktu 136 ako východiskovej zlúčeniny.

Príklad 177 rel-(3R,3aR,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(4-morfolín-4-ylmetylbenzoyl)hexahydro-pyrolo[3,2-b]-pyrol-2-ón-hydrochlorid

TLC (dichlórmetán:metanol = 9:1) Rf = 0,27.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 450, MH⁺ vypočítané 450.

Príklad 178 rel-(3R,3aR,6aS)-4-(4-azepín-1-ylmetylbenzoyl)-3-izopropyl-1-metánsulfonylhexahydro-pyrolo[3,2-b]-pyrol-2-ón-hydrochlorid

TLC (dichlórmetán:metanol = 9:1) Rf = 0,25.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 462, MH⁺ vypočítané 462.

Príklad 179 rel-(3R,3aR,6aS)-3-izopropyl-4-[4-(izopropylamino-metyl)-benzoyl]-1-metánsulfonyl-hexahydro-pyrolo[3,2-b]-pyrol-2-ón-hydrochlorid

- 118TLC (dichlórmetámmetanol = 9:1) Rf = 0,25.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 422, MH⁺ vypočítané 422.

Príklad 180 rel-(3R,3aR,6aS)-4-(4-cyklopropylamín-metylbenzoyl)-3-izopropyl-1-metánsulfonylhexahydro-pyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón-hydrochlorid

Do miešaného roztoku 70 mg medziproduktu 136 v 7 ml bezvodého dichlórmetánu sa v atmosfére dusíka pri teplote miestnosti pridá 14,1 μΙ cyklopropylamínu a 78,4 mg triacetoxy-bórhydridu sodného. Reakčná zmes sa 22 hodín mieša, pridá sa ďalších 7,1 μΙ cyklopropylamínu a 39,2 mg triacetoxy-bórhydridu sodného. Po nasledujúcich 26 hodinách sa reakčná zmes zahustí vo vákuu za vzniku bieleho prášku, ktorý sa po absorpcii na kolónu oxidu kremičitého (Merck 9385) čistí rýchlou chromatografiou pri elúcii 2%, a následovne 5% roztokom metanolu a dichlórmetánu za vzniku bielej peny. Tento produkt sa rozpustí v 5 ml bezvodého tetrahydrofuránu a pridá sa 1 ml 1,0M roztoku chlorovodíka v dietylétere. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu za vzniku 71 mg jemného bieleho prášku výslednej zlúčeniny.

Hmotnostné spektrum s vysokou rozlišovacou schopnosťou:

MH⁺(merané) 420,19505; MH⁺pre C21H30N3O4S = 420,195704 chyba = 0,5 ppm; Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 420, MH⁺ vypočítané 420.

Príklad 181 rel-(3R,3aR,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-{4-[(metylpropylamino)-metyl]benzoyl}-hexahydropyrolo[3,2-b]-pyrol-2-ón-hydrochlorid

Do miešaného roztoku 30 mg medziproduktu 136 v 3 ml bezvodého dichlórmetánu sa pridá 9,8 μΙ N-metylpropylamínu a 25,2 mg triacetoxy-bórhydridu sodného. Reakčná zmes sa 48 hodín mieša, pridá sa 1 ml nasýteného roztoku hedrogénuhličitanu sodného a 2 ml vody a reakčná zmes sa energeticky 10 minút mieša. Produkt sa izoluje z organického podielu napipetovaním dvoch rovnako veľkých častí na dve 500 mg dopredu pripravené kolóny oxidu kremičitého, ktorými

-119sa nechá prechádzať metylénchlorid, pokiaľ rozpúšťadlo nedosiahne vrchol stĺpca. Prebytok rozpúšťadla sa odstráni vo vákuu, a nasledovne sa vykoná elúcia ďalším množstvom rozpúšťadla do skúmaviek pre odber frakcií - dvakrát objem stĺpca dichlórmetánu, dvakrát objem stĺpca chloroformu, dvakrát objem stĺpca éteru, dvakrát objem stĺpca etylacetátu, dvakrát objem stĺpca acetonitrilu, štyrikrát objem stĺpca metanolu. Objem stĺpca je približne 2,5 ml. Frakcia obsahujúca výsledný produkt sa zlúči a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu za vzniku voľných báz, ktoré sa rozpustia v 2 ml metylénchloridu a pridá sa 1 ml 1,0Mroztoku chlorovodíka v éteri. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu za vzniku tuhej látky, ktorá sa rozotrie v éteri, filtruje sa a suší za vzniku 26,7 mg bielej tuhej látky výslednej zlúčeniny.

TLC oxid kremičitý (dichlórmetámmetanol = 9:1) Rf = 0,23.

Hmotnostné spektrum: MH⁺nájdené 436, MH⁺ vypočítané 436.

Príklady 182 až 187

Výsledné zlúčeniny z príkladov sa pripravia podľa postupu z príkladu 173 za použitia medziproduktu 136 ako východzej zlúčeniny.

Príklad 182 rel-(3R,3aR,6aS)-4-(4-dietylamino-metylbenzoyl)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-hexahydropyrolo[3,2-b]-pyrol-2-ón-hydrochlorid

TLC (dichlórmetán:metanol = 9:1) Rf = 0,2.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 436, MH⁺ vypočítané 436.

Príklad 183 hydrochlorid metylesteru 1 -[4-(rel-6R-izopropyl-4-metánsulfonyl-5-oxo-hexahydro(3aS,6aR)-pyrolo[3,2-b]-pyrol-1-karbonyl)benzyl]-pyrolidín-2S-karboxylovej kyseliny

TLC (dichlórmetán.metanol = 9:1) Rf = 0,48.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 492, MH⁺ vypočítané 492.

-120Príklad 184 rel-(3R,3aR,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-[4-(oktahydro-izochinolín-2-ylmetyl)benzoyl]hexahydropyrolo[3,2-b]-pyrol-2-ón-hydrochlorid

TLC (dichlórmetán:metanol = 9:1) Rf = 0,36.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 502, MH⁺ vypočítané 502.

Príklad 185 rel-(3R,3aR,6aS)-4-[4-(4-acetyl-piperazín-1-ylmetyl)-benzoyl]-3-izopropyl-1 -metán sulfonyl-hexahydropyrolo[3,2-b]-pyrol-2-ón-hydrochlorid

TLC (dichlórmetán.metanol = 9:1) Rf = 0,38.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 491, MH⁺ vypočítané 491.

Príklad 186 rel-(3R,3aR,6aS)-4-[4-(2,5-dimetyl-pyrolidín-1-yl-metyl)-benzoyl]-3-izopropyl-1metánsulfonyl-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón-hydrochlorid

TLC (dichlórmetán.metanol = 9:1) Rf = 0,23.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 462, MH⁺ vypočítané 462.

Príklad 187 hydrochlorid amidu kyseliny rel-1-[4-(6R-izopropyl-4-metánsulfonyl-5-oxo-hexahydro-(3aS,6aR)-pyrolo[3,2-b]pyrol-1-karbonyl)benzyl]-piperidín-4-karboxylovej

TLC (dichlórmetán.metanol = 9:1) Rf = 0,04.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 491, MH⁺ vypočítané 491.

Príklad 188 rel-(3R,3aR,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-[4-piperazín-1-ylmetyl-benzoyl)hexahydro-pyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón-dihydrochlorid

- 121 Výsledná zlúčenina sa pripraví podľa postupu prípravy medziproduktu 12 za použitia medziproduktu 138 ako východzej zlúčeniny.

TLC oxid kremičitý (dichlórmetámmetanol = 9:1) Rf = 0,05.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 449, MH⁺ vypočítané 449.

Príklady 189 až 193

Výsledná zlúčenina sa pripraví podľa postupu z príkladu 173 za použitia medziproduktu 137 ako východzej zlúčeniny.

Príklad 189 rel-(3R,3aR,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-[3-(4-piperazín-1-ylmetyl)-benzoyl]hexahydro-pyrolo[3,2-b]-pyrol-2-ón-dihydrochlorid

TLC oxid kremičitý (dichlórmetán:metanol = 9:1) Rf = 0,17.

Hmotnostné spektrum: MH⁺nájdené 463, MH⁺ vypočítané 463.

Príklad 190 rel-(3R,3aR,6aS)-4-(3-cyklopropylamín-metylbenzoyl)-3-izopropyl-1-metánsulfonylhexahydro-pyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón-hydrochlorid

TLC oxid kremičitý (dichlórmetán:metanol = 9:1) Rf = 0,27.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 420, MH⁺ vypočítané 420.

Príklad 191 hydrochlorid amidu kyseliny rel-1-[3-(6R-izopropyl-4-metánsulfonyl-oxo-hexahydro(3aS,6aR)-pyrolo[3,2-b]-pyrol-1-karbonyl)benzyl]-piperidín-4-karboxylovej

TLC (dichlórmetán:metanol = 9:1) Rf = 0,12.

Hmotnostné spektrum: MH⁺nájdené 491, MH⁺ vypočítané 491.

- 122Príklad 192 rel-(3R,3aR,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(3-piperidín-1-yl-metylbenzoyl)hexahydropropyl[3,2-b]pyrol-2-ón-hydrochlorid

TLC (dichlórmetán:metanol = 9:1) Rf = 0,24.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 448, MH⁺ vypočítané 448.

Príklad 193 rel-(3R,3aR,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(3-pyrolidín-1-yl-metylbenzoyl)hexahydro-pyrolo[3,2-b]-pyrol-2-ón-hydrochlorid

TLC (dichlórmetán:metanol = 9:1) Rf = 0,2.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 434, MH⁺ vypočítané 434.

Príklad 194 rel-(3R,3aR,6aS)-1-metánsulfonyl-4-(4-piperidín-1-yl-metyl-benzénsulfonyl)-3propyl-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón-hydrochlorid

V 4 ml dimetylformamide sa rozpustí 86 mg medziproduktu 139 a pridá sa 50 mg uhličitanu draselného, pridá sa 27 μΙ piperidínu a reakčná zmes sa 4 hodiny mieša. Reakčná zmes sa vleje do vody a extrahuje sa etylacetátom. Zlúčené organické extrakty sa premyjú vodou, nasýteným roztokom chloridu sodného, suší sa nad síranom horečnatým a zahustí sa za vzniku 82 mg bielej tuhej látky. Tento produkt sa rozpustí v 5 ml dichlórmetánu a pridá sa 1 ml 1m éterového roztoku chlorovodíka. Prchavý podiel sa odstráni vo vákuu za vzniku 86 mg bielej tuhej látky výslednej zlúčeniny.

TLC (dichlórmetán:metanol = 9:1) Rf = 0,5.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 484, MH⁺ vypočítané 484.

Príklady 189 až 193

- 123Výsledná zlúčenina sa pripraví podľa postupu z príkladu 194 za použitia medziproduktu 139 ako východzej zlúčeniny.

Príklad 195 rel-(3R,3aR,6aS)-4-(4-azepín-1-ylmetylbenzénsulfonyl)-1-metánsulfonyl-3-propylhexahydro-pyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón-hydrochlorid

TLC (dichlórmetán:metanol = 9:1) Rf = 0,4.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 498, MH⁺ vypočítané 498.

Príklad 196 rel-(3R,3aR,6aS)-4-(4-dimetylamino-metylbenzénsulfonyl)-1-metánsulfonyl-3-propylhexahydro-pyrolo[3,2-b]-pyrol-2-ón-hydrochlorid

TLC (dichlórmetán:metanol = 9:1) Rf = 0,436.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 444, MH⁺ vypočítané 444.

Príklady 197 až 199

Výsledná zlúčenina príkladov sa pripraví podľa postupu uvedeného v príklade 194 za použitia medziproduktu 140 ako východzej zlúčeniny.

Príklad 197 rel-(3R,3aR,6aS)-4-(4-dimetylamino-metylbenzénsulfonyl)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón-hydrochlorid

TLC (dichlórmetán:metanol = 9:1) Rf = 0,36.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 444, MH⁺ vypočítané 444.

Príklad 198 rel-(3R,3aR,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(4-piperidín-1-ylmetyl-benzénsulfonyl)-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón-hydrochlorid

- 124TLC (dichlórmetán:metanol = 9:1) Rf = 0,33.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 484, MH⁺ vypočítané 484.

Príklad 199 rel-(3R,3aR,6aS)-4-(4-azepín-1-ylmetylbenzénsulfonyl)-3-izopropyl-1-metánsulfonylhexahydropyrolo[3,2-b]-pyrol-2-ón-hydrochlorid

TLC (dichlórmetán.metanol = 9:1) Rf = 0,41.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 498, MH⁺ vypočítané 498.

Príklady 200 až 201

Výsledná zlúčenina príkladov sa pripraví podľa postupu uvedeného v príklade 194 za použitia medziproduktu 141 ako východzej zlúčeniny.

Príklad 200 rel-(3R,3aR,6aS)-4-[4-(2,6-dimetyl-piperidín-1-yl-metyl)benzoyl]-3-izopropyl-1metánsulfonyl-hexahydropyrolo[3,2-b]-pyrol-2-ón-hydrochlorid

TLC (dichlórmetán:metanol = 9:1) Rf = 0,38.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 476, MH⁺ vypočítané 476.

Príklad 201 rel-(3R,3aR,6aS)-4-{4-[(diizopropylamino)metyl]benzoyl}-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-hexahydropyrolo[3,2-b]-pyrol-2-ón-hydrochlorid

TLC (dichlórmetán:metanol = 9:1) Rf = 0,4.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 464, MH⁺ vypočítané 464.

- 125Príklad 206

DL-vínan rel-(3R,3aR,6aS)-1 -benzénsulfonyl-4-(6-piperidín-1 -yl-hexanoyl)-3-propylhexahydro-pyrolo-[3,2-b]-pyrol-2-ón-hydrochlorid

Výsledná zlúčenina sa pripraví podľa postupu z príkladu 168 za použitia medziproduktu 134 ako východzej zlúčeniny.

TLC (dichlórmetámmetanol = 7:1) Rf = 0,49.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 490, MH⁺ vypočítané 490.

Príklad 210 rel-N-[4-(6R-izopropyl-4-metánsulfonyl-5-oxo-hexahydro-(3aS,6aR)-pyrolo-[3,2-b]py rol-1 -sulfonyl)fenyl]acetamid

Výsledná zlúčenina sa pripraví podľa postupu z príkladu 63 za použitia medziproduktu 86 ako východzej zlúčeniny.

TLC (chloroform:metanol = 9:1) Rf = 0,59.

Hmotnostné spektrum: MNH₄ ⁺ nájdené 461, MNH₄ ⁺ vypočítané 461.

Príklady 211 až 220

Výsledné zlúčeniny z príkladov 211 až 220 sa pripravia z medziproduktu 26 podľa postupu z príkladu 63.

Príklad 211 rel-(3R,3aR,6aS)-1-metánsulfonyl-4-(4-nitro-benzén-sulfonyl)-3-propyl-hexahydropyrolo[3,2-b]-pyrol-2-ón

TLC (chloroform:metanol = 9:1) Rf = 0,89.

Hmotnostné spektrum: MNH₄ ⁺ nájdené 449, MNH₄ ⁺ vypočítané 449.

- 126Príklad 212 rel-(3R,3aR,6aS)-1-metánsulfonyl-4-[4-(2-oxo-pyrolidín-1-yl)benzénsulfonyl]-3propyl-hexahydropyrolo[3,2-b]-pyrol-2-on

TLC (chloroform:metanol = 9:1) Rf = 0,57.

Hmotnostné spektrum: MNH₄ ⁺ nájdené 487, MNH₄ ⁺ vypočítané 487.

Príklad 213 rel-N-[2-chlór-4-(4-metánsulfonyl-5-oxo-6R-propyl-hexahydro-(3aS,6aR)-pyrolo[3,2

b]-pyrol-1-sulfonyl)fenyl]-acetamid

TLC (chloroform:metanol = 9:1) Rf = 0,57.

Hmotnostné spektrum: MNH₄ ⁺ nájdené 495/497, MNH₄ ⁺vypočítané 495/497.

Príklad 214 rel-(3R,3aR,6aS)-4-(4-butoxy-benzénsulfonyl)-1-metán-sufonyl-3-propylhexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón

TLC (chloroform:metanol = 98:2) Rf = 0,62.

Hmotnostné spektrum: MNH₄ ⁺ nájdené 476, MNH₄ ⁺vypočítané 476.

Príklad 215 rel-(3R,3aR,6aS)-4-(4-chlór-benzénsulfonyl)-1-metán-sufonyl-3-propyl-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón

TLC (chloroforrrrmetanol = 9:1) Rf = 0,82.

Hmotnostné spektrum: MNH₄ ⁺ nájdené 438/440, MNH₄ ⁺vypočítané 438/440.

Príklad 216 rel-(3R,3aR,6aS)-1-metánsufonyl-3-propyl-4-(4-trifluórmetyl-benzénsulfonyl)hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón

- 127TLC (chloroform:metanol = 9:1) Rf = 0,82.

Hmotnostné spektrum: MNH₄ ⁺ nájdené 472, M N H₄ ⁺vypočítané 472.

Príklad 217 rel-(3R,3aR,6aS)-1-metánsufonyl-4-(4-metánsulfonyl-benzénsulfonyl)-3-propylhexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón

TLC (chloroform:metanol = 98:2) Rf = 0,52.

Hmotnostné spektrum: MNH₄ ⁺ nájdené 482, MNH₄ ⁺vypočítané 482.

Príklad 218 rel-4-(4-metánsufonyl-5-oxo-6R-propylhexahydro-(3aS,6aR)-pyrolo[3,2-b]-pyrol-1 sulfonyl)benzonitril

TLC (chloroform:metanol = 98:2) Rf = 0,62.

Hmotnostné spektrum: MNH₄ ⁺ nájdené 429, M N H₄ ⁺vypočítané 429.

Príklad 219 rel-(3R,3aR,6aS)-4-benzénsulfonyl-1-metánsufonyl-3-propyl-hexahydropyrolo[3,2

b]pyrol-2-ón

TLC (chloroform:metanol = 90:10) Rf = 0,84.

Hmotnostné spektrum: MNH₄ ⁺ nájdené 387, MNH₄ ⁺vypočítané 387.

Príklad 220 rel-(3R,3aR,6aS)-1-metánsufonyl-4-(4-metoxy-benzénsulfonyl)-3-propyl-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón

TLC (chloroform:metanol = 90:10) Rf = 0,87.

Hmotnostné spektrum: MNH₄ ⁺ nájdené 417, MNH₄ ⁺vypočítané 417.

- 128Príklady 221 až 226

Výsledná zlúčenina sa pripraví podľa postupu z príkladu 122 za použitia medziproduktu 26 ako východiskovej zlúčeniny.

Príklad 221 rel-(3R,3aR,6aS)-4-(4-dimetylamino-benzénsulfonyl)-1-metánsufonyl-3-propylhexahydro-pyrolo[3,2-b]-pyrol-2-ón

TLC (chloroform:metanol = 90:10) Rf = 0,91.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 430, MH⁺vypočítané 430.

Príklad 222 rel-(3R,3aR,6aS)-1-metánsufonyl-4-(3-nitro-benzénsulfonyl)-3-propyl-hexa-hydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón

TLC (chloroform:metanol = 98:2) Rf = 0,35.

Hmotnostné spektrum: MNH₄ ⁺ nájdené 449, MNH₄ ⁺vypočítané 449.

Príklad 223 rel-(3R,3aR,6aS)-1-metánsufonyl-3-propyl-4-(3-trifluórmetyl-benzénsulfonyl)-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón

TLC (chloroform:metanol = 98:2) Rf = 0,60.

Hmotnostné spektrum: MNH₄ ⁺ nájdené 472, MNH₄ ⁺vypočítané 472.

Príklad 224 rel-(3R,3aR,6aS)-4-(3,5-bis-trifluórmetyl-benzénsulfonyl)-1-metánsufonyl-3-propylhexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón

TLC (chloroform:metanol = 98:2) Rf = 0,64.

Hmotnostné spektrum: MNH₄ ⁺ nájdené 540, MNH₄ ⁺vypočítané 540.

- 129Príklad 225 rel-(3R,3aR,6aS)-1-metánsufonyl-3-propyl-4-(2-trifluórmetyl-benzénsulfonyl)-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón

TLC (chloroform:metanol = 98:2) Rf = 0,60.

Hmotnostné spektrum: MNH₄ ⁺ nájdené 472, MNH₄ ⁺vypočítané 472.

Príklad 226 rel-(3R,3aR,6aS)-1-metánsufonyl-4-(2-nitro-benzénsulfonyl)-3-propyl-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón

TLC (chloroform:metanol = 98:2) Rf = 0,47.

Hmotnostné spektrum: MNH₄ ⁺ nájdené 449, M N H₄ ⁺vypočítané 449.

Príklady 227 až 230

Výsledné zlúčeniny z príkladov 227 až 230 sa pripravia podľa postupu uvedeného v príklade 122 za použitia medziproduktu 86.

Príklad 227 rel-(3R,3aR,6aS)-3-isopropyl-1-metánsufonyl-4-(4-metánsulfonyl-benzénsulfonyl)hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón

TLC (dichlórmetán:metanol = 98:2) Rf = 0,50.

Hmotnostné spektrum: MNH₄ ⁺ nájdené 482, MNH₄ ⁺vypočítané 482.

Príklad 228 rel-(3R,3aR,6aS)-3-isopropyl-1-metánsufonyl-4-(4-trifluórmetyl-benzénsulfonyl)hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón

TLC (dichlórmetán:metanol = 98:2) Rf = 0,70.

Hmotnostné spektrum: MNH₄ ⁺ nájdené 472, MNH₄ ⁺vypočítané 472.

- 130Príklad 229 rel-(3R,3aR,6aS)-3-isopropyl-1-metánsulfonyl-4-(4-nitro-benzénsulfonyl)-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón

TLC (chlorofomrmetanol = 98:2) Rf = 0,55.

Hmotnostné spektrum: MNH₄ ⁺ nájdené 449, M N H₄ ⁺vypočítané 449.

Príklad 230 rel-(3R,3aR,6aS)-4-(4-butoxy-benzénsulfonyl)-3-isopropyl-1-metánsufonyl-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón

TLC (dichlórmetán:metanol = 98:2) Rf = 0,61.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 459, MH⁺vypočítané 459.

Príklad 231 rel-(3R,3aR,6aS)-4-(furán-2-karbonyl)-1-metánsulfonyl-3-propyl-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón

Do miešaného roztoku 75 mg medziproduktu 26 v 3 ml bezvodného dichlórmetánu sa pridá 185 μΙ trietylamínu a 34 μΙ 2-furoylchloridu. Vytvorený reakčný roztok sa pri teplote miestnosti mieša v atmosfére dusíka 18 hodín. Po zriedení 75 ml dichlórmetánu sa reakčná zmes premyje 25 ml nasýteného roztoku chloridu sodného, suší sa nad síranom sodným, filtruje sa a zahustí vo vákuu za vzniku okrovej peny, ktorá sa čistí rýchlou chromatografiou pri elúcii dichlórmetánom, a nasledovne zmesou chloroformu a metanolu v pomeroch 99:1, a potom 70:30. Podiely obsahujúce požadovanú zlúčeninu sa zahustia vo vákuu za vzniku 83 mg bielej tuhej látky výslednej zlúčeniny.

TLC (chlorofomrmetanol = 98:2) Rf = 0,29.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 341, MH⁺vypočítané 341.

- 131 Príklady 232 až 233

Výsledné zlúčeniny z príkladov 232 až 233 sa pripravia podľa postupu z príkladu 228 za použitia medziproduktu 26.

Príklad 232 rel-(3R,3aR,6aS)-1-metánsulfonyl-3-propyl-4-(tiofén-2-karbonyl)-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón

TLC (chloroform:metanol = 98:2) Rf = 0,35.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 357, MH⁺vypočítané 357.

Príklad 233 rel-(3R,3aR,6aS)-4-benzoyl-1-metánsulfonyl-3-propyl-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol2-ón

TLC (chloroform:metanol = 9:1) Rf = 0,77.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 351, MH⁺vypočítané 351.

Príklad 234 rel-(3R,3aR,6aS)-4-(4-amino-benzénsulfonyl)-1-metánsulfonyl-3-propyl-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón

Do roztoku 70 mg výslednej zlúčeniny príkladu 211 v 12 ml etanolu sa pridá 45 mg 10% roztoku paládia na aktívnom uhlí v 2 ml etanolu. Vytvorená suspenzia sa 19 hodín mieša v atmosfére vodíka a pri teplote miestnosti. Reakčná zmes sa filtruje cez celit J2 vo vákuu. Po zahustení vo vákuu vznikne okrová pena, ktorá sa čistí rýchlou chromatografiou pri elúcii zmesi dichlórmetánu a acetonitrilu v pomeroch 92:8, 85:15, a potom 75:25. Vzniknú podiely, ktoré sa zahustia vo vákuu za vzniku 33 mg bielej tuhej látky výslednej zlúčeniny.

TLC (dichlómetán:acetonitril = 7:3) Rf = 0,84.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 402, MH⁺vypočítané 402.

- 132Príklad 235 rel-(3R,3aR,6aS)-4-(3-amino-benzénsulfonyl)-1-metánsulfonyl-3-propyl-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón-hydrochlorid

Výsledná zlúčenina sa pripraví podľa postupu z príkladu 234 za použitia výslednej zlúčeniny z príkladu 222 ako východiskovej zlúčeniny.

TLC voľnej bázy (dichlórmetán:acetonitril = 9:1) Rf = 0,46.

Hmotnostné spektrum: MNH₄ ⁺ nájdené 419, M N H₄ ⁺vypočítané 419.

Príklady 236 rel-(3R,3aR,6aS)-4-(2-amino-benzénsulfonyl)-1-metánsulfonyl-3-propyl-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón

Výsledná zlúčenina sa pripraví podľa postupu z príkladu 234 za použitia výslednej zlúčeniny z príkladu 226 ako východiskovej zlúčeniny.

TLC voľnej bázy (dichlórmetán:acetnitril = 9:1) Rf = 0,62.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 402, MH⁺vypočítané 402.

Príklad 237 rel-(3R,3aR,6aS)-4-(4-amino-benzénsulfonyl)-3-isopropyl-1-metánsulfonyl-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón

Výsledná zlúčenina sa pripraví podľa postupu príkladu 234 za použitia výslednej zlúčeniny príkladu 229 ako východiskovej zlúčeniny.

TLC voľnej bázy (dichlórmetán:acetonitril = 9:1) Rf = 0,46.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 402, MH⁺vypočítané 402.

Príklad 238 rel-(3R,3aR,6aS)-1-metánsulfonyl-3-propyl-4-(pyridín-2-karbonyl)-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón

-133 Do miešaného roztoku 50 mg medziproduktu 26 v 10 ml acetonitrilu sa pridá 28 mg kyseliny pikolínovej, 78 mg 1-(3-N,N-dimetylaminopropyl)-3-etyl-karbodiimid hydrochloridu a 55 mg 1-hydroxybenztriazolu. Vytvorená reakčná zmes sa 19 hodín mieša pri teplote miestnosti, a potom sa zahustí vo vákuu za vzniku gumy ako zvyšku. Tento produkt sa rozpustí v 100 ml dichlórmetánu a roztok sa premyje 35 ml vodného roztoku hydrogénuhličitanu sodného. Organický podiel sa premyje 35 ml nasýteného roztoku chloridu sodného, suší sa nad síranom sodným, filtruje sa a zahustí vo vákuu. Vznikne červenohnedá guma, ktorá sa čistí rýchlou chromatografiou pri elúcii zmesí dichlórmetánu a acetonitrilu v pomere 9:1, a potom 8:2. Frakcia obsahujúca požadovanú zlúčeninu sa zahustí vo vákuu za vzniku 47 mg bielej tuhej látky výslednej zlúčeniny.

TLC voľnej bázy (dichlórmetán:acetonitril = 7:3) Rf = 0,50.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 352, MH⁺vypočítané 352.

Príklady 239 až 242, 244 až 247

Výsledné zlúčeniny z príkladov 239 až 242 a 244 až 247 sa pripravia podľa postupu uvedeného v príklade 238 za použitia medziproduktu 26.

Príklad 239 rel-(3R,3aR,6aS)-4-(4-butoxybenzoyl)-1-metánsulfonyl-3-propyl-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón

TLC (dichlórmetán:acetnitril = 9:1) Rf = 0,48.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 423, MH⁺vypočítané 423.

Príklad 240 rel-(3R,3aR,6aS)-1-metánsulfonyl-4-(1-metyl-1H-pyrol-2-karbomyl)-3-propylhexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón

I.R. v_max 1748, 1612, 1357, 1145 cm'¹

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 354, MH⁺vypočítané 354.

- 134 Príklad 241 rel-N-[5’(4-metánsulfonyl-5-oxo-6R-propyl-hexahydro-(3aS,6aR)-pyrolo[3,2-b]pyrol

1-karbonyl)pyridín-2-yl]-acetamid

TLC (dichlórmetán:acetnitril = 7:3) Rf = 0,38.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 409, MH⁺vypočítané 409.

Príklad 242 rel-(3R,3aR,6aS)-1-metánsulfonyl-3-propyl-4-(1H-pyrol-2-karbonyl)-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón

TLC (dichlórmetán:dietyleter = 5:1) Rf = 0,60.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 340, MH⁺vypočítané 340.

Príklad 244 rel-(3R,3aR,6aS)-1-metánsulfonyl-3-propyl-4-(4-trifluór-metylbenzyl)-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón

TLC (dichlórmetán:acetnitril = 9:1) Rf = 0,48.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 419, MH⁺vypočítané 419.

Príklad 245 rel-(3R,3aR,6aS)-1-metánsulfonyl-4-(4-metánsulfonyl-benzyl)-3-propyl-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón

TLC (dichlórmetán:acetnitril = 7:3) Rf = 0,59.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 429, MH⁺vypočítané 429.

Príklad 246 rel-(3R,3aR,6aS)-1-metánsulfonyl-3-propyl-4-(pyridín-4-karbonyl)-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón

- 135 TLC (dichlórmetárracetnitril = 6:4) Rf = 0,50.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 352, MH⁺vypočítané 352.

Príklad 247 rel-(3R,3aR,6aS)-1-metánsulfonyl-3-propyl-4-(pyridín-3-karbonyl)-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 352, MH⁺vypočítané 352.

I.R. v_max 1746, 1647, 1356, 1146 cm’¹

Príklady 248 až 249

Výsledné zlúčeniny z príkladov 248 až 249 sa pripravia podľa postupu uvedeného v príprave výslednej zlúčeniny z príkladu 238 za použitia medziproduktu 86 ako východiskovej zlúčeniny.

Príklad 248 rel-(3R,3aR,6aS)-4-(furán-2-karbonyl)-3-isopropyl-1-metánsulfonyl-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón

TLC (etylacetát:cyklohexán = 1:1) Rf = 0,24.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 341, MH⁺vypočítané 341.

Príklad 249 rel-(3R,3aR,6aS)-3-isopropyl-1-metánsulfonyl-4-(tiofén-2-karbonyl)-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón

TLC (etylacetát:cyklohexán = 1:1) Rf = 0,32.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 357, MH⁺vypočítané 357.

- 136Príklad 250 až 252

Výsledné zlúčeniny z príkladov 250 až 252 sa pripravia podľa postupu z príkladu 173 za použitia medziproduktu 142 ako východiskovej zlúčeniny.

Príklad 250 rel-(3R,3aR,6aS)-3-isopropyl-1-metánsulfonyl-4-(5-piperidín-1-ylmetyl-furán-2karbonyl)-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón-hydrochlorid

TLC (dichlórmetán:metanol = 9:1) Rf = 0,40.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 438, MH⁺vypočítané 438.

Príklad 251 rel-(3R,3aR,6aS)-4-(5-dimetylamino-metyl-furán-2-karbonyl)-3-isopropyl-1-metánsulfonyl-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón-hydrochlorid

TLC (dichlórmetámmetanol = 9:1) Rf = 0,42.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 398, MH⁺vypočítané 398.

Príklad 252 rel-(3R,3aR,6aS)-4-(5-cyklopropylamino-metyl-furán-2-karbonyl)-3-isopropyl-1metánsulfonyl-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón-hydrochlorid

TLC (dichlórmetámmetanol = 9:1) Rf = 0,56.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 410, MH⁺vypočítané 410.

Príklad 253 rel-(3R,3aR,6aS)-4-(3-dimetylamino-metyl-benzyl)-3-isopropyl-1-metánsulfonylhexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón-hydrochlorid

Výsledná zlúčenina sa pripraví podľa postupu z príkladu 173 za použitia medziproduktu 137 ako východiskovej zlúčeniny.

- 137TLC (dichlórmetán.metanol = 9:1) Rf = 0,19.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 408, MH⁺vypočítané 408.

Príklad 254 rel-(3R,3aR,6aS)-1-metánsulfonyl-4-[4-(4-metylpiperazín-1-yl)but-2E-enoyl]-3propyl-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón-dihydrochlorid

Výsledná zlúčenina sa pripraví podľa postupu z príkladu 137 za použitia medziproduktu 114 ako východiskovej zlúčeniny.

TLC (dichlórmetán:etanol:0,88 amoniak = 100:8:1 Rf = 0,15.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 413, MH⁺vypočítané 413.

Príklad 255 rel-(3R,3aR,6aS)-3-isopropyl-1-metánsulfonyl-4-(4-piperidín-4-ylbutyryl)-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón-hudrochlorid

Pri teplote miestnosti sa 2,5 hodiny mieša roztok 95 mg medziproduktu 143 a 0,3 ml kyseliny trifluóroctovej v 5 ml dichlórmetánu. Za stáleho miešania sa pridá 20 ml 8% roztoku hydrogénuhličitanu sodného a reakčná zmes sa ďalej 10 minút mieša. Zmes sa dvakrát extrahuje 15 ml dichlórmetánu, zlúčené organické extrakty sa premyjú 20 ml vody, sušia sa nad síranom sodným, filtrujú sa a zahustia vo vákuu za vzniku gumy. Tento produkt sa rozpustí v 10 ml dietyléteru a za stáleho miešania sa pridá 0,2 ml 1,0M éterového roztoku chlorovodíka. Vytvorená suspenzia sa 15 minút mieša, éter sa dekantuje a vytvorený roztok sa suší vo vákuu za vzniku 50 mg okrového prášku výslednej zlúčeniny.

TLC oxid kremičitý (dichlórmetán:etanol:amoniak (špecifická hmotnosť = 0,88) = 100:8:1) Rf= 0,05.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 400, MH⁺vypočítané 400.

Príklad 256 rel-(3R,3aR,6aS)-3-isopropyl-1-metánsulfonyl-4-[4-(1-metylpiperidín-4-yl)butyryl]hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón-hydrochlorid

-138 Do miešaného roztoku výslednej zlúčeniny z príkladu 255 a 1 kvapky ľadovej kyseliny octovej v 3 ml dichlórmetánu sa pridá 30 mg paraformaldehydu, a po 3 minútach sa pridá 42 mg triacetoxybórhydridu sodného. Reakčná zmes sa 2,5 hodiny mieša, pridá sa 105 mg triacetoxybórhydridu sodného a v miešaní sa pokračuje 16 hodín. Za stáleho miešania sa pridá 10 ml 8% vodného roztoku hydrogénuhličitanu sodného a reakčná zmes sa dvakrát extrahuje 10 ml dichlórmetánu. Zlúčené organické podiely sa sušia nad síranom sodným, filtrujú sa a zahustia za vzniku gumy, ktorá sa po absorbcii na kolóne oxidu kremičitého čistí rýchlou chromatografiou pri elúcii zmesí dichlórmetánu, etanolu a amoniaku (špecifická hmotnosť 0,88) v pomere 100:8:1. Vytvorená guma sa rozpustí v 5 ml dietyléteru a behom miešania sa pridá 0,1 ml 1,0M éterového roztoku chlorovodíku. Éter sa dekanuje a vytvorená tuhá látka sa suší vo vákuu za vzniku 17 mg okrového prášku výslednej zlúčeniny.

TLC oxid kremičitý (dichlórmetán:etanol:amoniak (špecifická hmotnosť = 0,88) = 100:8:1) Rf = 0,27.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 414, MH⁺vypočítané 414.

Príklad 257 rel-(3R,3aR,6aS)-3-cyklopropyl-1-metánsulfonyl-4-(4-piperidín-4-ylbut-2E-enoyl)hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón-hydrochlorid

Reakčná zmes 0,025 g medziproduktu 113, 33 μΙ trietylamínu, 0,023 g 1-(3dimetylamínopropyl)-3-etylkarbodiimid-hydrochloridu, 0,016 g 1-hydroxybenztriazolu a 0,5 ml dimetylformamidu sa 15 minút mieša v atmosfére dusíka. Do vytvorenej suspenzie sa pridá roztok medziproduktu 149 v 0,5 ml bezvodného dimetylformamidu a reakčná zmes sa 2,5 hodiny mieša, a potom sa vleje do 1 ml 8% vodného roztoku hydrogénuhličitanu sodného. Reakčná zmes sa dvakrát extrahuje 10 ml etylacetátu, zlúčené organické extrakty sa dvakrát premyjú 10 ml vody, sušia sa nad síranom horeČnatým a odparujú sa za vzniku žltého oleja/gumy. Tento produkt sa čistí rýchlou chromatografiou na kolóne pri elúcii zmesí dichlórmetánu, etanolu a amoniaku v pomere 100:8:1 za vzniku žltého filmu. Po rozotrení s 2 ml

- 1391 ,ΟΜ éterového roztoku chlorovodíka vznikne 0,013 g žltej tuhej látky výslednej zlúčeniny.

TLC (dichlórmetán:etanol:amoniak = 100:8:1) Rf = 0,6.

Hmotnostné spektrum: MH⁺ nájdené 396, MH⁺vypočítané 396.

Výsledky biologických skúšok:

1. Zlúčeniny boli podrobené skúškam s elastázou in vitro tak, ako bolo opísané vyššie. V nasledujúcej tabuľke sú zhrnuté hodnoty IC₅o v mikromoloch pre zlúčeniny podľa vynálezu z jednotlivých príkladov:

Príklad	HNE IC50 μΜ
1	0,036
2	0,137
6	0,07
7	0,134
8	0,029
23	0,075
29	0,139
57	0,027
60	0,047
61	0,242
62	0,01
63	0,006
64	0,026
72	0,037
73	0,074
94	0,081
95	0,084
96	0,134
98	0,159

- 140-

103	0,104
114	0,042
117	0,027
118	0,073
119	0,034
120	0,042
121	0,014
122	0,004
123	0,014
124	0,008
125	0,013
126	0,01
127	0,04
128	0,03
129	0,014
130	0,047
131	0,102
132	0,083
133	0,061
134	0,023
135	0,041
136	0,022
137	0,045
138	0,042
139	0,055
140	0,036
141	0,176
142	0,055
143	0,033
144	0,071
145	0,039

- 141 -

146	0,034
147	0,096
148	0,035
149	0,046
150	0,05
151	0,085
152	0,021
153	0,114
154	0,022
155	0,426
158	0,019
159	0,017
160	0,119
161	1,029
162	0,062
163	0,103
164	0,413
166	0,287
167	0,038
168	0,208
173	0,065
174	0,013
175	0,074
176	0,09
177	0,02
178	0,068
179	0,047
180	0,042
181	0,042
182	0,043
183	0,046

- 142-

184	0,012
185	0,033
186	0,053
187	0,043
188	0,067
189	0,062
190	0,024
191	0,041
192	0,061
193	0,05
194	0,06
195	0,068
196	0,034
197	0,153
198	0,127
199	0,099
200	0,053
201	0,046
210	0,103
211	0,14
212	0,03
213	0,04
214	0,464
215	0,028
216	0,087
217	0,04
218	0,026
219	0,01
220	0,012
221	0,027
222	0,107

- 143-

223	0,62
224	0,41
225	0,12
226	0,087
227	0,118
228	0,068
229	0,167
230	0,092
231	0,035
232	0,078
233	0,062
234	0,011
235	0,009
236	0,018
237	0,029
238	0,009
239	0,018
240	0,033
241	0,022
242	0,022
244	0,011
245	0,009
246	0,021
247	.0,028
248	0,06
249	0,068
250	0,021
251	0,043
252	0,014
253	0,076
254	0,097

- 144-

255	0,144
256	0,078
257	0,062

2. Zlúčeniny z príkladov 2, 29, 57, 60, 61, 62, 63, 117, 118, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155,

158, 159, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186,

187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 200, 201, 248, 249, 250, 251, 252, 253 a 254 boli podrobené skúškam na škrečkoch ďalej uvedeným spôsobom, pri účinnej dávke menej ako 40 mg/kg bola dosiahnutá dĺžka účinku najmenej 6 hodín.

Model na perorálne podanie na stanovenie intracelulárnej inhibície elastázy na infiltrátoch pľúc, vyvolaných IL-8

Dospelé škrečky s hmotnosťou 100 až 150 g sa náhodne rozdelia do skupín po štyroch a cez noc sa chovajú nalačno. V narkóze 3% plynným izofluoranom sa škrečkom perorálne podá 1 ml vody/100 g ako prostredie alebo účinná látka, rozpustená v tomto prostredí. Súčasne alebo neskôr sa zvieratám podá do priedušnice 1 mikrogram rekombinantného ľudského IL-8 v 100 mikrolitroch sterilného fyziologického roztoku. Po 6 hodinách po podaní IL-8 sa zvieratá usmrtia intraperitoneálnym podaním pentobarbitónu. Pľúca sa vymyjú 2 x 2,5 ml sterilného fyziologického roztoku a stehenné kosti sa vyberú.

Intracelulárna elastáza sa pripraví z neutrofilov, prítomných vo vymývacej kvapaline a z kostnej drene stehenných kostí. Neutrofily sa rozrušia ultrazvukom a materiál sa odstredí na získanie vnútrobunkových granúl. Tie sa potom rozrušia striedavým zmrazením a rozpustením a pôsobením ultrazvuku. Potom sa vykonajú skúšky na elastázu a myoloperoxidázu na stanovenie účinnosti sledovaných látok a na úpravu výsledkov na množstvo neutrofilov.

Claims (45)

1. PATENTOVÉ NÁROKY

   1. Pyrolopyrolónové deriváty všeobecného vzorca I

   R¹

   R³ kde

   R¹ znamená alkyl s 1 až 6 atómami uhlíka, alkenyl s
2. 2 až 6 atómami uhlíka, aryl, arylalkyl s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, arylalkenyl s 2 až 4 atómami uhlíka v alkenylovej časti, heteroaryl, heteroarylalkyl s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti alebo heteroarylalkenyl s 2 až 4 atómami uhlíka v alkenylovej časti alebo niektorú z uvedených skupín, v ktorých je arylová alebo heteroarylová časť substituovaná najmenej jedným substituentom zo skupiny alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka, atóm halogénu, tetrazolyl, trifluórmetylsulfónamid, NR⁹CO-alkyl s 1 až 8 atómami uhlíka, -(CH2)m-NR⁴R⁵, -CN, -COOR⁹, -CONR⁹R¹⁰, -NO2, -SO₂-alkyl s 1 až 6 atómami uhlíka, -CF₃, alkoxyskupina s 1 až 6 atómami uhlíka, -(CH₂)_n-NR⁴R⁵, alkenyl s 2 až 8 atómami uhlíka-NR⁴R⁵, -(CH2)nCONR⁴R⁵, -(CH2)_nNR⁹CO-alkyl s 1 až 6 atómami uhlíka, alkenyl s 2 až 8 atómami uhlíka-COOR⁹, -(CH₂)_nCOOR⁹ a alkenyl s 2 až 8 atómami uhlíka-COR⁴R⁵,

   X znamená niektorú zo skupín o o

   II °k ⁰ Π — C — · —- S —. alebo -C-O^- kde karbonylová skupina je viazaná na atóm dusíka kruhu,

   R² znamená alkyl alebo alkenyl vždy s 2 až 4 atómami uhlíka alebo alkoxyskupinu alebo alkyltioskupinu vždy s 1 až 3 atómami uhlíka,

   R³ znamená alkyl s 1 až 6 atómami uhlíka, -CH₂(CF₂)₀-4CF₃, aryl alebo heteroaryl s jedným kruhom alebo dvoma kondenzovanými kruhmi, z ktorých jeden môže byť

   - 146nasýtený, pričom arylové a heetroarylové skupiny sú prípadne substituované najmenej jedným substituentom zo skupiny alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka, atóm halogénu, -NR⁷R⁸, -SO2NR⁷R⁸, -CONR⁷R⁸, -alkylester s 1 až 6 atómami uhlíka v alkylovej časti, -CN, -CH2OH, -O-alkyl s 1 až 6 atómami uhlíka, CF₃ alebo nitroskupina, ďalej môže R³ znamenať arylalkyl, arylalkyl-NH- vždy s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti alebo arylalkenyl s 2 až 4 atómami uhlíka v alkenylovej časti, alebo ide o skupiny, v ktorých arylová časť je substituovaná najmenej jedným substituentom zo skupiny alkyl s 1 až 4 atómami uhlíika alebo atóm halogénu,

   R⁴ a R⁵ nezávisle znamenajú atóm vodíka, alkyl alebo alkoxyskupinu vždy s 1 až 4 atómami uhlíka, -(CH2)mCONR¹¹R¹², -CO-alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka alebo fenyl, prípadne substituovaný najmenej jedným substituentom zo skupiny alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka alebo atómom halogénu alebo môžu byť R⁴ a R⁵ spolu spojené a skupina NR⁴R⁵ potom znamená mono-, bi- alebo tricyklický systém, obsahujúci 4 až 15 atómov v kruhu, v ktorom môže byť najmenej jeden z kruhov prerušený aspoň jedným heteroatómom zo skupiny O, N a S, pričom najmenej jeden uhlíkový atóm kruhu prípadne predstavuje karbonylovú skupinu, alebo môže skupina -(CH2)_nNR⁴R⁵ znamenať skupinu vzorca 1a

   -(CH₂)_rf (CH₂) a

   NR⁶ (CH₂ ) &

   (1a) kde R⁶ znamená atóm vodíka, karboxy-alkylester s 1 až 6 atómami uhlíka v alkylovej časti, n¹ znamená 0 až 6 a a a b nezávisle znamenajú celé číslo 0 až 3, pričom a + b je v rozmedzí 3 až 5,

   R⁷, R⁸, R⁹, R¹⁰, R¹¹ a R¹² nezávisle znamenajú atóm vodíka alebo alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka, m znamená celé číslo 0 až 8, n znamená celé číslo 1 až 9, ako aj soli a solváty týchto látok.

   -1472. Pyrolopyrolónové deriváty všeobecného vzorca I podľa nároku 1, v ktorých R² znamená.n-propyl alebo izopropyl.
3. 3. Pyrolopyrolónové deriváty všeobecného vzorca I podľa nároku 2, v ktorých R² znamená izopropyl.
4. 4. Pyrolopyrolónové deriváty všeobecného vzorca I podľa niektorého z nárokov 1 až 3, v ktorých R³ znamená alkyl s 1 až 6 atómami uhlíka.
5. 5. Pyrolopyrolónové deriváty všeobecného vzorca I podľa nároku 4, v ktorých R³ znamená metyl.
6. 6. Pyrolopyrolónové deriváty všeobecného vzorca I podľa niektorého z nárokov 1 až 5, v ktorých X znamená skupinu -CO- alebo -SO2.
7. 7. Pyrolopyrolónové deriváty všeobecného vzorca I podľa nároku 6, v ktorých X znamená -CO-.
8. 8. Pyrolopyrolónové deriváty všeobecného vzorca I podľa niektorého z nárokov 1 až 7, v ktorých R¹ znamená alkenyl-NR⁴R⁵ s alkenylovou časťou s 2 až 8 atómami uhlíka.
9. 9. Pyrolopyrolónové deriváty všeobecného vzorca I podľa nároku 8, v ktorých R¹ znamená -CH=CH-CH₂-NR⁴R⁵.
10. 10. Pyrolopyrolónové deriváty všeobecného vzorca I podľa niektorého z nárokov 1 až 7, v ktorých R¹ znamená fenyl, furanyl, tiofenyl alebo pyrolyl, substituovaný skupinou -(CH₂)_n-NR⁴R⁵, kde n‘ znamená celé číslo 1 až 5.
11. 11. Pyrolopyrolónové deriváty všeobecného vzorca I podľa nároku 10, v ktorých n‘ znamená celé číslo 1 až 3.

    - 148
12. 12. Pyrolopyrolónové deriváty všeobecného vzorca I podľa nároku 8 až 11, v ktorých skupina -NR⁴R⁵ znamená zvyšok morfolínu, pyrolidínu, piperidínu, azepínu, piperazínu alebo 4-metylpiperazínu alebo jeden zo symbolov R⁴ a R⁵ alebo oba tieto symboly znamenajú alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka a druhý z týchto symbolov, v prípade, že neznamená alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka, znamená atóm vodíka.
13. 13. Pyrolopyrolónové deriváty všeobecného vzorca I podľa niektorého z nárokov 1 až 7, v ktorých R¹ znamená fenyl, substituovaný skupinou -NHCO-alkyl s 1 až 8 atómami uhlíka v alkylovej časti.
14. 14. Pyrolopyrolónové deriváty všeobecného vzorca I podľa nároku 13, v ktorých R¹ znamená fenyl, substituovaný skupinou -NHCOMe.
15. 15. Pyrolopyrolónové deriváty všeobecného vzorca I podľa nároku 1, zo skupiny rel-(3R,3aR,6aS)-1-metánsulfonyl-4-(4-piperidín-1-yl-but-2-(E)-enoyl-3-propylhexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3R,3aR,6aS)-4-(6-azepín-1-ylhexanoyl-3-izopropyl-1-metánsulfonylhexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3R,3aR,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(3-pipridín-1-yl-propionyl)hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3R,3aR,6aS)-1-metánsulfonyl-4-(4-piperidín-1-yl-metyl-benzoyl)-3-propylhexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-N-[4-(4-metánsulfonyl-5-oxo-6R-propylhexahydro-(3aS,6aR)-pyrolo[3,2-b]pyrol1-sulfonyl)fenyl]acetamid,

    - 149 rel-(3R,3aR,6aS)-1-metánsulfonyl-4-[(metylfenylamino)-acetyl]-3-propylhexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-N-[4-(4-metánsulfonyl-5-oxo-6R-propylhexahydro-(3aS,6aR)-pyrolo[3,2-b]pyrol1 -karbonyl)fenyl]acetamid, rel-4-(4-metánsulfonyl-5-oxo-6R-propylhexahydro-(3aS,6aR)-pyrolo[3,2-b]pyrol-1sulfonyl)-N-(2-piperidín-1-yletyl)benzamid, rel-N-(2-dimetylaminoetyl)-4-(4-metánsulfonyl-5-oxo-6R-propylhexahydro(3aS,6aR)-pyrolo[3,2-b]pyrol-1-sulfonyl)-benzamid, rel-(3R,3aR,6aS)-1-metánsulfonyl-4-[4-(4-metylpiperazín-1-karbonyl)benzénsulfonyl]-3-propylhexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3R,3aR,6aS)-4-(4-metánsulfonyl-5-oxo-6-propylhexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-1yl)-4-oxo-but-2E-énová kyselina vo forme etylesteru, kyselina rel-4-(4-metánsulfonyl-5-oxo-6R-propylhexahydro-(3aS,6aR)-pyrolo[3,2-b] py rol-1 -yl)-4-oxo-but-2E-énová, rel-(3R,3aR,6aS)-1-(4-metánsulfonyl-5-oxo-6R-propylhexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-1 yl)-4-(4-metylpiperazín-1 -yl)-but-2E-én-1,4-dión, rel-(3R,3aR,6aS)-4-but-2E-enoyl-1-metánsulfonyl-3-propylhexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-όη, rel-(3R,3aR,6aS)-1-metánsulfonyl-4-[3-[4-(4-metylpiperazín-1-ylmetyl)fenyl]-(E)akryloyl]-3-propylhexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3R,3aR,6aS)-1-metánsulfonyl-4-[3-[4-(4-piperidín-1-ylmetyl)fenyl]-(E)-akryloyi]3-propylhexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón,

    -150 rel-N-[4-[3-(4-metánsulfonyl-5-oxo-6R-propylhexahydro-(3aS,6aR)-pyrolo[3,2-b]pyrol-1-yl)-3-pxo-(E)-propenyl]fenyl]acetamid, rel-(3R,3aR,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(4-piperidín-1-ylbut-2E-enoyl)hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3R,3aR,6aS)-4-(4-azepín-1-yl-but-2E-enoyl)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3R,3aR,6aS)-4-(4-cyklopropylamino-but-2E-enoyl)-3-izopropyl-1-metánsulfonylhexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3R,3aR,6aS)-4-[4-(4-acetylpiperazín-1-yl)-but-2E-enoyl]-3-izopropyl-1-metánsuIfonylhexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3R,3aR,6aS)-4-[4-(2,6-dimetylpiperidín-1-yl)-but-2E-enoyl]-3-izopropyl-1-metánsulfonylhexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, metylester kyseliny 1 -[4-(rel-6R-izopropyl-4-metánsulfonyl-5-oxo-hexahydro(3aS,6aR)-pyrolo[3,2-b]-pyrol-1-yl)-4-oxo-but-2E-enyl]pyrolidín-2S-karboxylovej, rel-(3R,3aR,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-[4-(metylpropylamÍno)-but-2Eenoyl]hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3R,3aR,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(4-morfolín-4-yl-but-2E-enoyl)hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3R,3aR,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-[4-(4-metylpiperazín-1-yl)-but-2Eenoyl]hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3R,3aR,6aS)-4-(4-diizopropylamino-but-2E-enoyl)-3-izopropyl-1-metánsulfonylhexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón,

    - 151 rel-(3R,3aR,6aS)-4-(4-dietylamino-but-2E-enoyl)-3-izopropyl-1-metánsulfonylhexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3R,3aR,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(4-pyrolídín-1-yl-but-2E-enoyl)hexa hydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rei-(3R,3aR,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-[4-(metoxymetylamino)-but-2Eenoyl]hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3R,3aR,6aS)-4-(4-dimetylamino-but-2E-enoyl)-3-izopropyl-1-metánsulfonylhexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3R,3aR,6aS)-4-[4-(2,5-dimetylpyrolidín-1-yl)-but-2E-enoyl]-3-izopropyl-1~ metánsulfonyl-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-2-[[4-(6R-izopropyl-4-metánsulfonyl-5-oxo-hexahydro-(3aS,'6aR)-pyrolo[3,2-b]pyrol-1-yl)-4-oxo-but-2E-enyl]metylamino]acetamid, rel-(3R,3aR,6aS)-3-izopropyl-4-(4-izopropylamino-but-2E-enoyl)-1-metánsulfonylhexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, amid kyseliny rel-1 -[4-(6R-izopropyl-4-metánsulfonyl-5-oxo-hexahydro-(3aS,6aR) pyrolo[3,2-b]pyrol-1-yl)4-oxo-but-2E-enyl]-piperidín-4-karboxylovej, rel-(3R,3aR,6aS)-4-[4-(5,8-difluór-1,3,3a,4,9,9a-hexahydiO-(3aS,9aS)benzo[f]-izoindol-2-yl)-but-2E-enoyl]-3-izopiOpyl-1-metánsulfonylhexahydiOpyrolo[3,2-b]pyiOl-1ón, (3R,3AR,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(4-piperidín-1-yl-but-2E-enoyl)hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón,

    - 152 rel-(3R,3AR,6aS)-3-izopropyl-1 -metánsulfonyl-4-[3-(4-piperidín-1 -ylmetylfenyl)-(E)akryloyl]hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3R,3aR_l6aS)-4-[3-(4-dimetylaminometylfenyl)-(E)-akryloyl]-3-izopropyl-1metánsulfonylhexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3R,3aR,6aS)-1-etánsulfonyl-4-(3-piperidín-1-yl-propionyl)-3-propylhexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3R,3aR,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(4-pyrolidín-1-yl-metylbenzoyl)hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3R,3aR,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(4-piperidín-1-yl-metylbenzoyl)hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3R,3aR,6aS)-4-(4-dimetylaminometylbenzoyl)-3-izopropyl-1-metánsulfonylhexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3R,3aR,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-[4-(4-metylpiperazín-1-yl-metyl)benzoyl]-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3R,3aR,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(4-morfolín-4-yl-metylbenzoyl)hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3R,3aR,6aS)-4-(4-azepín-1-ylmetylbenzoyl)-3-izopropyl-1-metánsulfonylhexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3R,3aR,6aS)-3-izopropyl-4-[4-(izopropylaminometyl)benzoyl]-1-metánsulfonylhexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3R,3aR,6aS)-4-(4-cyklopiOpylaminometylbenzoyl)-3-izopropyl-1-metánsulfonylhexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón,

    -153 rel-(3R,3aR,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-[4-[(metylpropylamino)metyl]benzoyl]-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3R,3aR,6aS)-4-(4-dietylaminometylbenzoyl)-3-izopropyl-1-metánsulfonylhexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, metylester kyseliny 1 -[4-(rel-6R-izopropyl-4-metánsulfonyl-5-oxo-hexahydro (3aS,6aS)-pyrolo[3,2-b]pyrol-1-karbonyl)benzyl]pyrolidín-2S-karboxylovej, rel-(3R,3aR,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-[4-(oktahydroizochinolín-2-ylmetyl)benzoyl]-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3R,3aR,6aS)-4-[4-(4-acetylpiperazín-1-ylmetyl)benzoyl]-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3R,3aR,6aS)-4-[4-(2,5-dimetylpyrolidín-1-ylmetyl)benzoyl]-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, amid kyseliny rel-1-[4-(6R-izopropyl-4-metánsulfonyl-5-oxo-hexahydro-(3aS,6aR) pyrolo[3,2-b]pyrol-1-karbonyl)benzyl]piperidín-4-karboxylovej, rel-(3R,3aR,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(4-piperazín-1-ylmetylbenzoyl)hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3R,3aR,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-[3-(4-metylpiperazín-1-ylmetyl)benzoyl]-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3R,3aR,6aS)-4-(3-cykIopropylaminometylbenzoyl)-3-izopropyl-1-metánsulfonylhexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, amid kyseliny rel-1 -[3-(6R-izopropyl-4-metánsulfonyl-5-oxo-hexahydro-(3aS,6aR) pyrolo[3,2-b]pyrol-1-karbonyl)benzyl]piperidín-4-karboxylovej,

    - 154rel-(3R,3aR,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(3-piperidín-1-ylmetylbenzoyl)hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3R,3aR,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(3-pyrolidín-1-ylmetylbenzoyl)hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3R,3aR,6aS)-1-metánsulfonyl-4-(4-piperidín-1-ylmetylbenzénsulfonyl)-3propylhexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3R,3aR,6aS)-4-(4-azepín-1ylmetylbenzénsulfonyl)-1-metánsulfonyl-3-propylhexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3R,3aR,6aS)-4-(4-dimetylaminometylbenzénsulfonyl)-1-metánsulfonyl-3-propylhexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3R,3aR,6aS)-4-(4-dimetylaminometylbenzénsulfonyl)-3-izopropyl-1-metánsulfonylhexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3R,3aR,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(4-piperidín-1-ylmetylbenzénsulfonyl)-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3R,3aR,6aS)-4-(4-azepín-1-ylmetylbenzénsulfonyl)-3-izopropyl-1-metánsulfonylhexahydŕopyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3R,3aR,6aS)-4-[4-(2,6-dimetylpiperídín-1-ylmetyl)benzoyl]-3-izopropyl-1-metánsulfonylhexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3R,3aR,6aS)-4-[4-[(diizopropylamino)metyl]benzoyl]-3-izopropyl-1-metánsulfonylhexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3R,3aR,6aS)-1-benzénsulfonyl-4-(6-piperidín-1-ylhexanoyl)-3-propylhexahydropyrolo[3,2-b]pyroi-2-ón,

    -155rel-N-[4-(6R-izopropyl-4-metánsulfonyl-5-oxo-hexahýdro-(3aS,6aR)-pyrolo[3,2-b]· pyrol-1-sulfonyl)fenyl]acetamid, re-(3R,3aR,6aS)-1-metánsulfonyl-4-[4-(2-oxo-pyrolidín-1-yl)benzénsulfonyl]-3propylehxahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3R,3aR,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(4-metánsulfonylbenzénsulfonyl) hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3R,3aR,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(4-trifIuórmetylbenzénsulfonyl)hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3R,3aR,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(4-nitrobenzénsulfonyl)-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3R,3aR,6aS)-4-(4-butoxybenzénsulfonyl)-3-izopropyl-1-metán-sulfonylhexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3R,3aR,6aS)-4-(furán-2-karbonyl)-1-metánsulfonyl-3-propylhexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3R,3aR,6aS)-1-metánsulfonyl-3-propyl-4-(tiofén-2-karbonyl)-hexahydropyrolo[3,2-b]-pyrol-2-ón, rel-(3R,3aR,6aS)-4-(4-aminobenzénsulfonyl)-1-metánsulfonyl-3-propylhexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3R,3aR,6aS)-4-(3-aminobenzénsulfonyl)-1-metánsulfonyl-3-propylhexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3R,3aR,6aS)-4-(2-aminobenzénsulfonyl)-1-metánsulfonyl-3-propýlhexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón,

    - 156 rel-(3R,3aR,6aS)-4-(4-aminobenzénsulfonyl)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3R,3aR,6aS)-1-metánsulfonyl-3-propyl-4-(pyridín-2-karbonyl)-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3R,3aR,6aS)-1 -metánsulfonyl-4-(1 -metyl-1 H-pyrol-2-karbonyl)-3-propylhexahydro-pyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-N-[5-(4-metánsulfonyl-5-oxo-6R-propylhexahydro-(3aS,6aR)-pyrolo[3,2-b]-pyrol1-karbonyl)pyridín-2-yl]acetamid, rel-(3R,3aR,6aS)-1-metánsulfonyl-3-propyl-4-(1H-pyrol-2-karbonyl)-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3R,3aR,6aS)“1-metánsulfonyl-3-propyl-4-(pyridín-4-karbonyl)-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3R,3aR,6aS)-1-metánsulfonyl-3-propyl-4-(pyridín-3-karbonyl)-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3R,3aR,6aS)-4-(furán-2-karbonyl)-3-izopropyl-1-metánsulfonylhexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3R,3aR,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(tiofén-2-karbonyl)-hexa-hydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3R,3aR,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(5-piperidín-1-ylmetyl-furán-2karbonyl)-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3R,3aR,6aS)-4-(5-dimetylaminometylfurán-2-karbonyl)-3-izopropyl-1metánsulfonylhexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón,

    - 157 rel-(3R,3aR,6aS)-4-(5-cyklopropylaminometylfurán-2-karbonyl)-3-izopropyl-1metánsulfonylhexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3R,3aR,6aS)-4-(3-dimetylaminometylbenzoyl)-3-izopropyl-1-metánsulfonylhexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3R,3aR,6aS)-1-metánsulfonyl-4-[4-(4-metylpiperazín-1-yl)-but-2E-enoyl]-3propylhexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3R,3aR,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(4-piperidín-4-ylbutyryl)-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3R,3aR,6aS)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-[4-(1-metylpiperidín-4-yl)butyryl]hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, rel-(3R,3aR,6aS)-3-cyklopropyl-1-metánsulfonyl-4-(4-piperidín-1-yl-but-2E-enoyl)hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón, alebo farmaceutický prijateľné soli, solváty alebo enantioméry ktorejkoľvek z týchto látok.
16. 16. Pyrolopyrolónový derivát všeobecného vzorca I podľa nároku 1, ktorým je (3S,3aS,6aR)-3-izopropyl-1-metánsulfonyl-4-(4-piperidín-1-yl-but-2E-enoyl)-hexahydropyrolo[3,2-b]pyrol-2-ón alebo jeho farmaceutický prijateľná soľ alebo jeho solvát.
17. 17. Spôsob výroby pyrolopyrolónových derivátov všeobecného vzorca I podľa nároku 1, v y z n a č u j ú c i sa tým, žesa

    i) na zlúčeninu všeobecného vzorca II

    158 (H) pôsobí zlúčeninou všeobecného vzorca

    R¹COOH, RCOY, R¹OCOY alebo R¹SO₂Y, kde Y je reaktívna skupina, napríklad atóm halogénu, alebo sa ii) vykoná sulfonylácia zlúčeniny všeobecného vzorca III (Hl) pôsobením zlúčeniny YO₂SR³, kde Y je reaktívna skupina, napríklad atóm halogénu, ako je atóm chlóru alebo sa iii) pri príprave zlúčeniny všeobecného vzorca I, v ktorom X znamená skupinu

    O

    -C-0 na zlúčeninu všeobecného vzorca IV

    -159-

    R³ (IV) kde Y má vyššie uvedený význam, pôsobí zlúčeninou všeobecného vzorca R¹OH, alebo sa iv) pri príprave zlúčeniny všeobecného vzorca I, v ktorom R² znamená alkyl alebo alkenyl vždy s 2 až 4 atómami uhlíka na zlúčeninu všeobecného vzorca V pôsobí postupne s bázou a potom so zlúčeninou všeobecného vzorca R²Y, kde Y je reaktívna skupina vo vyššie uvedenom význame a R²’ znamená alkyl alebo alkenyl vždy s 2 až 4 atómami uhlíka, alebo sa

    v) cyklizuje zlúčenina všeobecného vzorca VI (VI) alebo jej ester, vytvorený na karboxylovej skupine, alebo sa

    -160vi) pri príprave zlúčenín všeobecného vzorca I, v ktorom X znamená skupinu

    O o —'s'— oxiduje zlúčenina vzorca VII kde X^a znamená atóm síry alebo SO alebo sa vii) pri príprave zlúčeniny všeobecného vzorca I oxiduje zodpovedajúca zlúčenina všeobecného vzorca VIII kde X^a znamená atóm síry alebo skupinu SO, alebo sa viii) pri príprave zlúčeniny všeobecného vzorca I, v ktorom R¹ znamená aryl, substituovaný skupinou -(CH₂)m'NR⁴R⁵, kde m‘ znamená celé číslo 1 až 8, podrobí redukčnej aminácii zodpovedajúca zlúčenina všeobecného vzorca IX

    - 161 Η (IX) . (CH2)mM aryl pôsobením zlúčeniny všeobecného vzorca HNR⁴R⁵, alebo sa ix) pri príprave zlúčeniny všeobecného vzorca I, v ktorom R¹ znamená skupinu -(CH₂)_nNR⁴R⁵, podrobí redukčnej aminácii zodpovedajúca zlúčenina všeobecného vzorca X pôsobením zlúčeniny všeobecného vzorca HNR⁴R⁵, alebo sa

    - 162x) pri príprave zlúčeniny všeobecného vzorca I, v ktorom R¹ znamená aryl, substituovaný skupinou -(CH₂)_m'NR⁴R⁵, kde m‘ znamená celé číslo 1 až 8, na zodpovedajúcu zlúčeninu všeobecného vzorca XI

    Hal — (CHA·;

    kde Hal znamená atóm halogénu, najmä chlóru alebo brómu, pôsobí zlúčeninou všeobecného vzorca HNR⁴R⁵, alebo sa xi) pri príprave zlúčeniny všeobecného vzorca I, v ktorom R¹ znamená skupinu -(CH₂)_nNR⁴R⁵ alebo alkenyl-NR⁴R⁵ s alkenylovou časťou s 2 až 8 atómami uhlíka, na zodpovedajúcu zlúčeninu všeobecného vzorca XII

    Hal

    I

    Alk i

    X

    R³

    - 163 kde

    Alk znamená alkenyl s 2 až 8 atómami uhlíka alebo -(CH₂)_n-,

    Hal znamená atóm halogénu, najmä chlóru alebo brómu, pôsobí zlúčeninou všeobecného vzorca HNR⁴R⁵, alebo sa xii) pri príprave zlúčeniny všeobecného vzorca I, kde R¹ obsahuje alkylpiperazinylovú skupinu s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti alkyluje zodpovedajúca zlúčenina vzorca I, kde piperazínová skupina nie je alkylovaná, alebo sa xiii) pri príprave zlúčeniny všeobecného vzorca I, v ktorom R¹ obsahuje N-alkylpiperazinylovú skupinu, uskutoční redukčná alkylácia zodpovedajúcej nealkylovej zlúčeniny všeobecného vzorca I, alebo sa xiv) premení zlúčenina všeobecného vzorca I na inú zlúčeninu všeobecného vzorca I, alebo sa xv) jeden z enantiomérov zlúčeniny všeobecného vzorca I z racemickej zmesi izoluje a čistí, a potom sa v prípade potreby premení výsledná voľná kyselina alebo báza všeobecného vzorca I na fyziologicky prijateľnú soľ alebo obrátene alebo sa určitá soľ premení na inú fyziologicky prijateľnú soľ.
18. 18. Farmaceutický prostriedok, vyznačujúci sa tým, že ako svoju účinnú zložku obsahuje aspoň jeden pyrolopyrolónový derivát podľa niektorého z nárokov 1 až 16 spolu s najmenej jedným fyziologicky prijateľným nosičom alebo riedidlom.
19. 19. Pyroiopyroiónové deriváty všeobecného vzorca I podľa niektorého z nárokov 1 až 16 na použitie na liečebné účely.

    - 16420. Pyrolopyrolónové deriváty podľa niektorého z nárokov 1 až 16 na použitie na liečenie alebo prevenciu chronického zápalu priedušiek.
20. 21. Pyrolopyrolónové deriváty podľa niektorého z nárokov 1 až 16 na použitie na liečenie alebo prevenciu chronických obštrukčných pľúcnych chorôb.
21. 22. Použitie pyrolopyrolónových derivátov všeobecného vzorca I podľa niektorého z nárokov 1 až 16 na výrobu liečiva na liečenie alebo prevenciu chronického zápalu priedušiek.
22. 23. Použitie pyrolopyrolónových derivátov všeobecného vzorca I podľa niektorého z nárokov 1 až 16 na výrobu liečiva na liečenie alebo prevenciu chronických obštrukčných pľúcnych ochorení.
23. 24. Pyrolopyrolónový derivát všeobecného vzorca II kde R² a R³ majú význam, uvedený v nároku 1, alebo derivát tejto látky s chráneným atómom dusíka pyrolidínovej skupiny alebo soľ tohto derivátu ako medziprodukt na výrobu pyrolopyrolónových derivátov všeobecného vzorca I.
24. 25. Pyrolopyrolónový derivát všeobecného vzorca III

    R¹ (III)

    - 165kde R¹, X a R² majú význam, uvedený v nároku 1, alebo derivát tejto látky s chráneným atómom dusíka pyrolidínovej skupiny alebo soľ tohto derivátu.
25. 26. Pyrolopyrolónový derivát podľa nároku 24 alebo 25, v ktorom R² znamená izopropyl.
26. 27. Zlúčenina všeobecného vzorca XXII^a .H.

    H R²

    H

    COOH (XXI l^a)

    H NH.

    kde R² znamená alkyl alebo alkenyl vždy s 2 až 4 atómami uhlíka alebo alkyltioskupinu s 1 až 3 atómami uhlíka, alebo derivát tejto látky, v ktorom je jeden z atómov dusíka chránený alebo sú chránené oba atómy dusíka a/alebo je chránená karboxylová skupina vo forme alkylesteru s alkylovou časťou s 1 až 6 atómami uhlíka, alebo soľ tejto látky.
27. 28. Zlúčenina všeobecného vzorca XXII¹

    H R²

    L..H 'COOH (XXI ľ)

    H NH.

    kde R² má význam, uvedený v nároku 27, alebo derivát tejto látky, v ktorom je jeden z atómov dusíka chránený alebo sú chránené oba atómy dusíka a/alebo je chránená karboxylová skupina vo forme alkylesteru s alkylovou časťou s 1 až 6 atómami uhlíka alebo soľ tejto látky.

    - 166
28. 29. Zlúčenina podľa nároku 27 alebo 28, v ktorej je primárna aminoskupina chránená trifluóracetylovou skupinou.
29. 30. Zlúčenina podľa niektorého z nárokov 27 až 29, v ktorej R² znamená izopropyl.

    .H.
30. 31. Zlúčenina všeobecného vzorca XX¹

    H '^^XCOOH (XX¹)

    H NHL alebo derivát tejto látky, v ktorom je chránený jeden z dusíkových atómov alebo sú chránené oba atómy dusíka a/alebo je chránená karboxylová skupina vo forme alkylesteru s 1 až 6 atómami uhlíka v alkylovej časti alebo soľ tejto látky.
31. 32. Zlúčenina podľa niektorého z nárokov 27 až 31, v ktorej je karboxylová skupina chránená tvorbou alkylesteru s 1 až 6 atómami uhlíka v alkylovej časti, s výhodou sa vytvára etylester.
32. 33. Zlúčenina všeobecného vzorca XXIII¹ (XXIII¹) kde R² má význam, uvedený v hlavnom nároku, alebo derivát tejto látky, v ktorom je chránený jeden z atómov dusíka alebo oba dusíkové atómy alebo soľ tejto látky.

    - 16734. Zlúčenina všeobecného vzorca XXIII¹ podľa nároku 33, v ktorej R² znamená izopropyl.
33. 35. Zlúčenina vzorca XXIIIa (XXI Ila) alebo derivát tejto látky s chráneným atómom dusíka alebo s oboma chránenými atómami dusíka alebo soľ tejto látky.
34. 36. Zlúčenina všeobecného vzorca XXIX²

    NHCOCFj (XXIX²) kde alkyl obsahuje 1 až 6 atómov uhlíka a s výhodou ide o etyl, alebo derivát tejto látky s chráneným atómom dusíka v kruhu alebo soľ tejto látky.
35. 37. Zlúčenina podľa nároku 36, všeobecného vzorca XXIX¹ (XXIX¹) kde alkyl obsahuje 1 až 6 atómov uhlíka a s výhodou ide o etyl, alebo derivát tejto látky s chráneným atómom dusíka v kruhu alebo soľ tejto látky.

    - 16838. Zlúčenina vzorca XXVIII² (XXVIII²) alebo derivát tejto látky s chráneným atómom dusíka v kruhu alebo soľ tejto látky.
36. 39. Zlúčenina podľa nároku 38, vzorca XXVIII¹ (XXVIII¹) alebo derivát tejto látky s chráneným atómom dusíka v kruhu alebo soľ tejto látky.
37. 40. Zlúčenina podľa niektorého z nárokov 24 až 39, v ktorej je najmenej jeden atóm dusíka podľa potreby chránený ochrannou skupinou zo skupiny CBZ, BOC a trifluóracetyl.
38. 41. Zlúčenina podľa nároku 40, v ktorej je ochrannou skupinou na atóme dusíka CBZ.
39. 42. Zlúčenina všeobecného vzorca V (V) kde R¹, X a R³ majú význam, uvedený v hlavnom nároku alebo soľ tejto látky.

    - 169
40. 43. Zlúčenina podľa niektorého z nárokov 24 až 42 vo forme jedného z čistených enantiomérov.
41. 44. Spôsob výroby zlúčeniny všeobecného vzorca XXVIII² (XXVIII²) alebo derivátu tejto látky s chráneným atómom dusíka v kruhu alebo soli tejto látky, vyznačujúci sa tým, že sa

    i) cyklizuje zlúčenina všeobecného vzorca XLIV¹ (XLIV¹) kde RX je zlúčenina, schopná premeniť atóm síry v skupine SMe na sulfóniovú skupinu, alebo derivát tejto látky s chráneným atómom dusíka v amidovej skupine, potom sa ii) prípadne chráni produkt zo stupňa i) alebo sa tento produkt zbaví ochrannej skupiny a/alebo sa vytvorí soľ tohto produktu.
42. 45. Spôsob výroby podľa nároku 44, v y z n a č u j ú c i sa t ý m, že sa zlúčenina všeobecného vzorca XLIV¹ použije vo forme čisteného enantioméru všeobecného vzorca XLIV²

    - 170SMeRX* (XLIV²)

    P²NH CONH,
43. 46. Spôsob výroby zlúčeniny všeobecného vzorca ΧΧΙΙ^ε (XXII³) kde R² má význam, uvedený v nároku 27, alebo derivátu tejto látky s najmenej jedným chráneným atómom dusíka a/alebo chránenou karboxylovou skupinou vo forme alkylesteru s 1 až 6 atómami uhlíka v alkylovej časti alebo soli tejto látky, vyznačujúci sa tým, že sa

    i) na zlúčeninu vzorca XXIX³ (XXIX³) alebo na derivát tejto látky s najmenej jedným chráneným atómom dusíka, pôsobí zlúčeninou všeobecného vzorca XXX

    Oalkyl 'OSi(alkyi)₃ (XXX)

    - 171 kde R² má význam, uvedený v nároku 27, alebo derivátom tejto látky, v ktorom je O-alkylová skupina nahradená skupinou OSi(alkyl)₃, potom sa ii) prípadne chráni atóm dusíka alebo sa z neho odštiepi ochranná skupina a/alebo sa zbaví ochrannej skupiny na karboxylovej skupine produkt zo stupňa i).
44. 47. Spôsob podľa nároku 44 alebo 45, v y z n a č u j ú c i sa t ý m, že sa zlúčenina všeobecného vzorca XXVIII³ alebo jej derivát s chráneným atómom dusíka v kruhu premení na pyrolopyrolónový derivát všeobecného vzorca I podľa nároku 1.
45. 48. Spôsob podľa nároku 46, v y z n a č u j ú c i sa t ý m, že sa zlúčenina všeobecného vzorca XXI l^a alebo jej derivát s najmenej jedným chráneným atómom dusíka a/alebo chránenou karboxylovou skupinou vo forme alkylesteru s 1 až 6 atómami uhlíka v alkylovej časti premení na pyrolopyrolónový derivát všeobecného vzorca I podľa nároku 1.