SI21924A

SI21924A - Cist vankomicin hidroklorid

Info

Publication number: SI21924A
Application number: SI200400334A
Authority: SI
Inventors: Rok Graheh; Andrej Bastarda
Original assignee: Lek Farmacevtska Druzba D.D.
Priority date: 2004-12-07
Filing date: 2004-12-07
Publication date: 2006-06-30
Also published as: US20100190958A1; ES2322961T3; PL1824874T3; WO2006061166A1; SI1824874T1; ATE427316T1; JP2008523003A; US8435938B2; JP4729047B2; EP1824874B1; EP1824874A1; DE602005013691D1

Abstract

Opisan je nov vankomicin hidroklorid, ki je brez prisotnih bistvenih necistoc, poznanih v komercialno dostopnih proizvodih. Z izrazom "brez bistvenih necistoc" (angl. "substantially free of impurities") je oznacena cistoca vankomicin hidroklorida, ki znasa med okoli 97% do okoli99%, zlasti med okoli 98% od okoli 99%, prednostno okoli 99%, kot je ugotovljeno z analitsko metodoHPLC v skladu z navodili iz U.S.P., NF 27 th revision, 22 (2004). Nov cist vankomicin hidroklorid (vankomicin Bhidroklorid) vsebuje manj kot 0,7% celokupnih necistoc oziroma samo ena necistoca presega 0,3%. Opisan je tudi nov postopek ciscenja surovega vankomicina s kromatografijo izpodrivanja (angl. "displacement chromatography"), s katerim dobimozelen cist antibiotik v smislu izuma, ki temelji na ugotovitvi, da se visoka cistoca vankomicin hidroklorida v skladu s postopkom v smislu izuma dobipri uporabi izbrane ozke pH vrednosti mobilne faze med 3,9 in 4,2. Vankomicin hidroklorid je poznanantibiotik,ki se v terapiji uporablja za zdravljenje tezkih stafilokoknih infekcij, zlasti z meticilin rezistentnimi sevi stafilokokov.

Description

Pričujoči izum spada v področje zdravilnih učinkovin iz skupine glikopeptidnih antibiotikov in se nanaša na čist vamkomicin hidroklorid, ki je brez prisotnosti bistvenih nečistoč, poznanih v komercialno dostopnih proizvodih in znaša čistoča vankomicin hidroklorida med okoli 97% do okoli 99%, kakor tudi na nov postopek čiščenja vankomicina z uporabo preparativne HPLC, to je metode kromatografije izpodrivanja (angl. method of displacement chromatography).

Vankomicin hidroklorid se v terapiji uporablja za zdravljenje težkih stafilokoknih infekcij, zlasti z meticilin rezistentnimi sevi stafilokokov.

Tehnični problem

Pri antibiotikih oziroma vankomicin hidrokloridu je zaradi spremljajočih nečistoč in posledično možnih stranskih učinkov za nekatere vrste uporabe pri pacientih želena visoka čistoča antibiotika. Zato obstoji stalna potreba po čistem vankomicin hidrokloridu, ki je brez prisotnosti bistvenih spremljajočih nečistoč oziroma postopku, po katerem bi se tak produkt pripravil.

Stanje tehnike

Vankomicin je triciklični amfoterni glikopeptidni antibiotik, ki se ga v terapiji uporablja v obliki njegove hidrokloridne soli in ga navaja tudi The Merck lndex, An Encyclopedia of Chemicals, Drugs and Biologicals, 13^Ed (2001), pod monografsko št. 9995. Prvič je bil opisan v US patentu št. 3,067,099. Vankomicin hidroklorid se uporablja za zdravljenje stafilokoknih infekcij, zlasti infekcij z meticilin resistentnimi sevi stafilokokov. Vankomicin je fermentativni produkt izoliran iz fermentacijske juhe Nocardia orientalis (prej Streptomyces orientalis, kot npr. Streptomyces orientalis NRRL 2452), ki proizvaja mešanico sorodnih ko-fermentativnih faktorjev. Faktor B (vankomicin B) je identificiran kot najvažnejši antibiotični predstavnik v mešanici in se nahaja v komercialnih proizvodih. Fermentacijsko juho vankomicina filtrirajo in filtrat nanasejo na kolono z adsorpcijsko smolo, ki razbarva in razsoli vankomicin. Smolo sperejo, eluirajo vankomicin s topilom pri nizki vrednost pH, ter nato eluat nadalje razbarvajo z aktivnim ogljem. Eluat vankomicina nato dalje čistijo s kristalizacijo pri nizki vrednosti pH medija. Kristaliziranemu vankomicinu dodajo klorovodikovo kislino in oborijo vankomicin hidroklorid v organskem topilu, kot acetonu.

Vankomicin hidroklorid se uporablja oralno ali parenteralno in se v komercialne namene nahaja v obliki suhe trdne snovi, kot suh sivo-bel prah v sterilnih vialah ali manjših stekleničkah. Ta suha trdna oblika vankomicina se pridobiva z liofilizacijo vodnih raztopin njegove hidrokloridne soli in tvori z vodo bistro raztopino z vrednostjo pH med 2,5 do 4,5.

Literatura opisuje različne postopke pridobivanja vankomicina oziroma njegove hidrokloridne soli iz fermentacijskega medija, kot opisano v zgoraj navedenem US patentu št. 3,067,099 in drugi literaturi, ki opisuje postopke obarjanja z alkalijskim hidroksidom, kot natrijevim hidroksidom, kot opisano v US patentu št. 5,037,652 ali US patentu št. 5,235,037; postopke čiščenja s pomočjo imidazol vankomicinskega kompleksa, kot opisano v US patentu št. 4,868,285; preko tvorbe fosfatov, kot opisano v patentu EP 145 484, preko tvorbe kompleksov s peptidi, kot opisano v US patentu št. 4,667,024 ali s pomočjo adsorpcije na različnih polimernih smolah, kot opisano v US patentu št. 4,440,753 ali v US patentu št. 4,874,843.

US patent št. 5,574,135 opisuje izboljšan postopek pridobivanja kristalnega vankomicina s pretokom vankomicinove fermentacijske juhe zaporedoma preko dveh adsorbentov, pri čemer dobijo očiščen vankomicin, ki ga nato kristalizirajo iz raztopine z dodatkom alkalijske raztopine pri vrednosti pH medija med 9,0 do 9,5. Opisano je, da dobijo večjo čistočo vankomicina kot v dotedaj opisanih postopkih. Čistoča vankomicina znaša po dveh kristalizacijah okoli 90%.

US patent št. 5,854,390 opisuje nov postopek čiščenja vankomicina s preparativno HPLC (angl. High Pressure Liquid Chromatography - tekočinska kromatografija visoke ločljivosti) , to je metodo kromatografije izpodrivanja (angl. method of displacement chromatography), po kateri se pripravi bistveno izboljšana čistoča vankomicin hidroklorida 95,5% area. Kromatografija poteka na reverzni stacionarni fazi z mobilno fazo iz organske ali anorganske kisline ali primernega pufra ter z različnimi izpodrinjevalci pri določeni vrednosti pH medija, temperaturi ter količini in koncentraciji vankomicina. V skladu z opisanim postopkom vsebuje prečiščeni vankomicin hidroklorid za tretjino manjši delež nečistoč kot do tedaj dostopni komercialni proizvodi.

Princip metode kromatografije izpodrivanja je znan in je bil opisan v literaturi, kot v članku G. Subramanian in drugi, Displacement Chromatography of Biomolecules, J. of Chromatography, Vol. 439, (1988), pp. 341-351 in temelji na tem, daje raznotežje vzorca med stacionarno fazo in mobilno fazo premaknjeno v smer stacionarne faze.

Posamezne komponente vzorca izpodrivajo ena drugo, izpodrinjevalec z večjo afiniteto do stacionarne faze pa komponente zmesi potiska iz kolone.

US patent št. 4,885,275 opisuje nove in stabilne koncentrirane vodne raztopine vankomicin hidroklorida, brez spremljajočega gela, ter nov postopek liofilizacije vankomicin hidroklorida, ki se ga dobi v obliki suhega, dobro topnega in pretočnega prahu iz navedenih koncentriranih raztopin.

Opis rešitve tehničnega problema s primerom

Izum temelji na nalogi rešiti problem poznan iz stanja tehnike tako, da se pripravi nov čist vankomicin hidroklorid, ki je brez prisotnosti bistvenih nečistoč, poznanih v komercialno dostopnih proizvodih, s pomočjo novega postopka kromatografskega čiščenja vankomicina, s katerim bi dobili želeno izredno visoko čistočo vankomicin hidroklorida. Z izrazom čist vankomicin hidroklorid brez bistvenih nečistoč (angl. substantially free of impurities') je označena čistoča, ki znaša med okoli 97% do okoli 99%, zlasti med okoli 98% do okoli 99%, prednostno okoli 99%, kot ugotovljeno z analitsko metodo HPLC v skladu z navodili U.S. Pharmacopeia, United States Pharmacopeia, The National Formulary NF, 27^nd revision, 22 (2004), Monografija: Vancomycin Hydrochloride. Z izrazom čist vankomicin hidroklorid je označen vankomicin B hidroklorid, ki je identificiran kot najvažnejši faktor vankomicin hidroklorida v komercialnih proizvodih.

US patent št. 5,854,390 opisuje postopek čiščenja vankomicina s kromatografijo izpodrivanja na reverzni stacionarni fazi pri vrednosti pH mobilne faze med okoli 2 do okoli 10, prednostno med okoli 2 do okoli 6, medtem ko primer navaja vrednost mobilne faze s pH 3,0, ki se nato po nanosu na kolono v mobilni fazi raztopljenega vankomicina izpodriva z izpodrinjevalcem (angl. displacing agent) za vankomicin iz kolone in sledečim zbiranjem frakcij in liofilizira združene frakcije po kvaliteti. Pri tem je lahko uporabljena velikost delcev stacionarne faze (reverzne faze) od nekaj pm do nekaj sto pm, pri čemer primer navaja velikost delcev stacionarne faze 12 pm.

Nepričakovano in presenetljivo smo ugotovili, da problem poznan iz stanja tehnike rešimo z novim postopkom čiščenja surovega vankomicina s kromatografijo izpodrivanja s stacionarno fazo (reverzno fazo) ob izbrani ozki vrednosti pH mobilne faze med 3,9 in 4,2, pri čemer se lahko uporablja velikost delcev stacionarne faze od nekaj pm do nekaj sto pm, vendar prednostno z izbrano velikostjo delcev stacionarne faze 5 pm. Kot stacionarno fazo uporabimo oktadecil-silikagel.

Postopek čiščenja surovega vankomicina (vodna raztopina z vrednostjo pH 3,2) s kromatografijo izpodrivanja na reverzni fazi v skladu z izumom obsega sledeče stopnje;

a. stabilizacija kolone v kateri je stacionarna faza z mobilno fazo z vrednostjo pH med 3,9 do 4,2;

b. nanos v mobilni fazi raztopljenega surovega vankomicina na kolono;

c. nanos izpodrinjevalca za izpodrivanje vankomicina iz kolone in zbiranje frakcij eluata;

d. združevanje in koncentriranje frakcij eluata s čistočo več kot 97%;

e. uravnavanje pH vrednosti raztopine vankomicina med 8,5 do 9,0 z vodno raztopino amonijaka ali alkalijske baze;

f. suspendiranje v vodi iz stopnje e) izločene soli vankomicina in uravnavanje vrednosti pH medija med okoli 3,0 do okoli 3,5 s klorovodikovo kislino;

g. precipitacija vankomicin hidroklorida iz raztopine z organskim topilom;

h. izolacija čistega vankomicin hidroklorida

Kolono stabiliziramo s primerno mobilno fazo. Mobilna faza mora imeti zaradi manjše stabilnosti vankomicina a alkalnem mediju zmerno kisel pH, ki ga uravnavamo s primerno kislino ali primernim pufrom do pH vrednosti med 3,9 do 4,2. Mobilna faza je lahko z vodo razredčena organska ali anorganska kislina, kot ocetna, mravljinčna, propionska, klorovodikova, borova, fosforjeva, žveplova kislina ali pufri s kationi alkalijskih kovin, z amonijakom ali z amini, kot natrijev acetat, amonijev acetat ali amonijev fosfat. Zaradi boljše omočitve stacionarne faze lahko k mobilni fazi dodamo nekaj procentov (okoli 3%) nižjega C-1-C4 alkohola, kot metanola, etanola, acetonitrila ali kombinacijo teh. Postopamo tako, da na kolono nanesemo v mobilni fazi raztopljen surov vankomicin ter nato izpodrinjevalec za izpodrivanje vankomicina s koncentracijo med 5 do 150 mg/ml mobilne faze in zbiramo frakcije eluata vankomicina s čistočo več kot okoli 97%. Združene in koncentrirane frakcije eluata vankomicina po kvaliteti čistoče koncentriramo do koncentracije vankomicina med 50 do 150 mg/ml, nato koncentratu dodamo primerno topilo, kot metanol in uravnamo vrednost pH medija med 8,5 do 9,0 z vodno raztopino alkalijske baze ali amonijevega hidroksida, ter nato pri tem dobljeno raztopino vankomicina ohladimo do temperature med - 20°C do 5°C. Pri tem izločeno sol vankomicina odfiltriramo, ponovno suspendiramo v vodi in uravnamo vrednost pH medija med 3,0 do 3,5 s klorovodikovo kislino in s sledečo precipitacijo vankomicin hidroklorida iz vodne raztopine v organsko topilo, kot v izopropanol. Pri tem izločeni čist vankomicin hidroklorid odfiltriramo in posušimo v vakuumu pri temperaturi do 30°C.

Ugotovili smo, da najboljše rezultate dobimo, če koncentratu združenih eluatov vankomicina s čistočo več kot 97% uravnavamo pH vrednosti raztopine vankomicina med 8,5 do 9,0 z vodno raztopino amonijaka ali alkalijske baze. Kot alkalijsko bazo lahko uporabimo natrijev hidroksid, kalijev hidroksid, zemljoalkalijske hidrokside, kot kalcijev hidroksid idr.

Za pripravo komercialne oblike vial pa čist vankomicin hidroklorid liofiliziramo na načine, poznane iz stanja tehnike.

Čistočo vankomicin hidroklorida smo ugotavljali z analitsko metodo HPLC (angl. High Pressure Liquid Chromatography) v skladu z navodili U. S. Pharmacopeia, United States Pharmacopeia The National Formulary, 27^nd revision, 22 ( 2004), Monografija: Vancomycin Hydrochloride.

V skladu s postopkom v smislu izuma dobimo čist vankomicin hidroklorid, brez prisotnosti bistvenih nečistoč, poznanih v komercialno dostopnih proizvodih in v visokem celokupnem dobitku. V skladu z že zgoraj omenjeno analitsko metodo

HPLC smo ugotavljali število in procentualni delež nečistoč v vzorcih komercialnega produkta vankomicin hidroklorida - Vancomycin Hydrochloride, USP, proizvajalca American Pharmaceutical Partners, Lot: 130373, Exp.: 04/05, vankomicin hidroklorida pripravljenega v skladu s postopkom opisanim v US patentu št. 5,854,390 in v vzorcu vankomicin hidroklorida, pripravljenega v skladu s pričujočim izumom. Pri tem smo v komercialnem vzorcu vankomicin hidroklorida ugotovili dvanajst (12) nečistoč z vsebnostjo nad 0,1%, izmed katerih je bilo pet (5) nečistoč z vsenostjo vsake nad 0,3%, kar prikazuje kromatogram na sliki št. 1. Na sliki št. 2 je kromatogram vzorca vankomicin hidroklorida, pripravljenega v skladu z opisom iz US patenta št. 5,854,390. Za razliko od stanja tehnike oziroma komercialnega vzorca proizvoda smo ugotovili v čistem vankomicin hidrokloridu, pripravljenim v skladu s pričujočim izumom le dve (2) nečistoči z vsebnostjo nad 0,1%, od tega le eno (1) nečistočo z vsebnostjo nad 0,3%. To pomeni, da nov čist vankomicin hidroklorid v smislu izuma vsebuje manj kot 0,7% celokupnih nečistoč oziroma samo eno nečistočo, ki je večja kot 0,3%. Na sliki št. 3 je kromatogram vzorca vankomicin hidroklorida, pripravljenega v skladu s pričujočim izumom.

Izpodrinjevalec je izbran iz skupine, ki obsega:

- višji n-alkohol z C4-C10 ogljikovimi atomi

- (di)oksialkohol (alkohol-eter) - spojina tipa R-O-Y-OH ali R-O-Y-O-Y-OH z etersko vezjo in hidroksilnim koncem, kjer je R C-1-12 alkil radikal, Y alkilenska skupina,

- kvarterna amonijeva sol s splošno formulo RiR₂R3R₄NX, pri čemer so Ri, R₂, R3 in R₄ enaki ali različni in pomenijo fenil, benzil ali C-i-i₂ alkil radikal, X je klorid, bromid ali jodid,

- natrijev dodecil sulfat ali njegov hidroksi derivat

Prednostno uporabimo kot izpodrinjevalec n-pentanol v obliki raztopine v mobilni fazi.

Izhodni surovi in delno očiščen vankomicin se lahko pripravi na načine, poznane iz stanja tehnike. Vankomicin je fermentativni produkt, ki ga lahko npr. izolirajo iz fermentativne juhe Streptomyces orientalis NRRL 2425 tako, da fermentativno juho vankomicina filtrirajo in filtrat nanesejo na kolono z adsorpcijsko smolo, ki razbarva in razsoli vankomicin. Smolo sperejo, eluirajo vankomicin s primernim topilom pri nizki vrednosti pH medija, ter nato eluat razbarvajo z aktivnim ogljem. Eluat vankomicina nato še čistijo s kristalizacijo pri nizki vrednosti pH medija. Kristaliziranemu vankomicinu dodajo klorovodikovo kislino in oborijo vankomicin hidroklorid v organskem topilu, kot acetonu.

Prednostno pa izoliramo in delno očistimo vankomicin iz fermentacijske juhe Streptomyces orientalis na način kot opisano v US patentu št. 5,853,720; po katerem fermentativni juhi Streptomyces orientalis odstranimo micelij in druge trdne snovi s separacijsko metodo mikrofiltracije. Dobljeni permeat delno očistimo na koloni akrilatne smole Amberlite XAD 16 in po eluiranju s primernim topilom, kot v kislem metanolu (dodatek ocetne kisline), združene eluate koncentriramo z reverzno ozmozo. Nato sledi še čiščenje koncentrata z aktivnim ogljem, pri čemer dobimo razbarvani koncentrat (surovega) vankomicina, ki ga uporabimo za nanos na kolono v smislu izuma.

Pričujoči izum se nadalje nanaša tudi na uporabo novega čistega vankomicin hidroklorida za pripravo zdravila za zdravljenje bakterijskih infekcij in na liofiliziran čist vankomicin hidroklorid v sterilni obliki v vialah in primeren za injekcijsko uporabo.

Izum podrobneje pojasnjuje, vendar z ničemer ne omejuje naslednji primer:

PRIMER

Postopek čiščenja surovega vankomicina s kromatografijo izpodrivanja

Stacionarna faza je YMC-pack ODS-AQ oktadecil-silikagelna kolona (reverzna faza) 20 x 250 mm z velikostjo delcev 5 pm (firma YMC Co. Ltd., Kyoto, Japonska). Mobilna faza je sestavljena iz 5 mM vodne raztopine amonijevega acetata, ki mu dodamo 3%-ni delež metanola (V / V) in uravnamo vrednost pH medija na 4,0 z ocetno kislino. Izpodrinjevalec je 2%-na raztopina n-pentanola v mobilni fazi.

Nanos na kolono (vzorec) je 25 ml vodne raztopine surovega vankomicina (pH vrednost je uravnana s klorovodikovo kislino na 3,2 , s koncentracijo vankomicina 100 mg/ml), kateri dodamo 9,6 mg amonijevega acetata, 0,75 ml metanola in uravnamo pH na 4,0 z dodatkom vodne raztopine amonijaka ali ocetne kisline. Pretok mobilne faze, izpodrinjevalca, kot tudi nanos vzorca je 8 ml/min.

Postopamo tako, da na kolono sprano z 250 ml mobilne faze nanesemo vzorec in nato eno minuto spiramo najprej z mobilno fazo ter nato začnemo z nanašanjem izpodrinjevalca. Ko se v eluatu pojavi vankomicin, zbiramo frakcije vsake 2 minuti. Ko se koncentracija vankomicina v eluatu zniža na polovico maksimalne koncentracije, prenehamo z zbiranjem frakcij in speremo kolono z 250 ml metanola. Nato kolono ponovno speremo z mobilno fazo.

Frakcije eluata s kromatografsko čistočo nad 97,5% (ugotovljeno z analitsko metodo HPLC v skladu z že omenjenimi navodili iz USP 27-NF 22, 2004) združimo, jih koncentriramo v vakuumu do koncentracije vankomicina 140 mg/ml. K 12,5 ml dobljenega koncentrata dodamo najprej 100 ml metanola, nato uravnamo vrednost pH medija z 1M vodno raztopino amonijaka od pH 8,5 do 9,0, ter nato dobljeno raztopino ohladimo do 0°C. Pri tem izločeno oborino odfiltriramo, jo speremo z 20 ml na 0°C ohlajenega metanola in nato suspendiramo v 10 ml vode in med mešanjem uravnamo vrednost medija na pH 3,2 z 2 M klorovodikovo kislino, pri čemer se oborina raztopi. Dobljeni raztopini dodamo 50 ml izopropanola, jo nato ohladimo do 0°C in odfiltriramo pri tem dobljeni vankomicin hidroklorid, ki ga posušimo v vakuumu pri temperaturi 30°C. Pri tem dobimo 1,5 g (60% dobitek) čistega vankomicin B hidroklorida v obliki belega prahu in čistoče 99,3% (ugotovljeno z metodo HPLC v skladu z navodili iz USP 27-NF 22, 2004), ki ga hranimo v polietilenskih Alu-Alu bags pod dušikovo atmosfero.

Claims

PATENTNI ZAHTEVKI

1. Čist vankomicin hidroklorid brez bistvenih nečistoč.
2. Čist vankomicin hidroklorid po zahtevku 1, označen s tem, da znaša čistoča med okoli 97% do okoli 99%.
3. Čist vankomicin hidroklorid po zahtevku 1, označen s tem, da znaša čistoča med okoli 98% do okoli 99%.
4. Čist vankomicin hidroklorid po zahtevku 1, označen s tem, da znaša čistoča okoli 99%.
5. Čist vankomicin hidroklorid po zahtevku 1, označen s tem, da vsebuje manj kot 0,7% celokupnih nečistoč, kot določeno z metodo HPLC.
6. Čist vankomicin hidroklorid po zahtevku 1, označen s tem, da vsebuje samo eno nečistočo katere vsebnost je nad 0,3%.
7. Postopek čiščenja surovega vankomicina, ki obsega sledeče stopnje:

a) stabilizacija kolone v kateri je stacionarna faza z mobilno fazo z vrednostjo pH med 3,9 do 4,2;

b) nanos v mobilni fazi raztopljenega surovega vankomicina na kolono

c) nanos izpodrinjevalca za izpodrivanje vankomicina iz kolone in zbiranje frakcij eluata;

d) združevanje in koncentriranje frakcij eluata s čistočo več kot 97%;

e) uravnavanje pH vrednosti raztopine vankomicina med 8,5 do 9,0 z vodno raztopino amonijaka ali alkalijske baze;

f) suspendiranje v vodi iz stopnje e) izločene soli vankomicina in uravnavanje vrednosti pH medija med okoli 3,0 do 3,5 s klorovodikovo kislino:

g) precipitacija vankomicin hidroklorida iz raztopine z organskim topilom,

h) izolacija čistega vankomicin hidroklorida
8. Postopek po zahtevku 7a), označen s tem, da je stacionarna faza oktadecil-silikagel z velikostjo delcev 5 pm.
9. Postopek po zahtevku 7a), označen s tem, da je mobilna faza organska ali anorganska kislina, izbrana iz skupine, ki obsega ocetno kislino, mravljinčno kislino, propionsko kislino, klorovodikovo kislino, borovo kislino, fosforjevo kislino, žveplovo kislino ali pufri s kationi alkalijskih kovin z amonijakom ali amini izbrani iz skupine, ki obsega natrijev acetat, amonijev acetat, amonijev fosfat ali njihove mešanice, ki vsebujejo še nižji Ci-C₄ alkohol ali acetonitril.
10. Postopek po zahtevku 9, označen s tem, da je nižji C1-C4 alkohol metanol ali etanol.
11. Postopek po zahtevku 7a), označen s tem, da je mobilna faza sestavljena iz vodne raztopine amonijevega acetata, metanola in ocetne kisline.
12. Postopek po zahtevku 7e), označen s tem, da se uravnava pH vrednost raztopine vankomicina z vodno raztopino amonijaka ali alkalijske baze izbrane iz skupine, ki obsega natrijev hidroksid, kalijev hidroksid ali zemljoalkalijske hidrokside.
13. Postopek po zahtevku 7c), označen s tem, da je izpodrinjevalec izbran iz skupine, ki obsega:

- višji n-alkohol z C₄-Cio ogljikovimi atomi

- (di)oksialkohol (alkohol-eter) - spojina tipa R-O-Y-OH ali R-O-Y-O-Y-OH z etersko vezjo in hidroksilnim koncem, kjer je R C1-12 alkil radikal, Y alkilenska skupina,

- kvartema amonijeva sol s splošno formulo RiR₂R3R4NX, pri čemer so Ri, R₂, R₃ ali R₄ enaki ali različni in pomenijo fenil, benzil ali Cm₂ alkil radikal, X je klorid, bromid ali jodid,

- natrijev dodecil sulfat ali njegov hidroksi derivat
14. Postopek po zahtevku 7c), označen s tem, da je izpodrinjevalec raztopina npentanola v mobilni fazi.
15. Postopek po zahtevku 7g), označen s tem, da je organsko topilo izopropanol.
16. Uporaba čistega vankomicin hidroklorida po kateremkoli od zahtevkov 1 do 6, za pripravo zdravila za zdravljenje bakterijskih infekcij.
17. Liofiliziran čist vankomicin hidroklorid po kateremkoli od zahtevkov 1 do 6 v sterilni obliki v vialah in primeren za injekcijsko uporabo.