SE460121B - Foerfarande och utrustning foer snabb bestaemning av antalet spermaceller och/eller antalet levande spermier - Google Patents
Foerfarande och utrustning foer snabb bestaemning av antalet spermaceller och/eller antalet levande spermierInfo
- Publication number
- SE460121B SE460121B SE8800325A SE8800325A SE460121B SE 460121 B SE460121 B SE 460121B SE 8800325 A SE8800325 A SE 8800325A SE 8800325 A SE8800325 A SE 8800325A SE 460121 B SE460121 B SE 460121B
- Authority
- SE
- Sweden
- Prior art keywords
- sperm
- sample
- measured
- cells
- fluorescence intensity
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 19
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 42
- XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M propidium iodide Chemical compound [I-].[I-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CCC[N+](C)(CC)CC)=C1C1=CC=CC=C1 XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 15
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 14
- 239000000975 dye Substances 0.000 claims description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 9
- 239000008191 permeabilizing agent Substances 0.000 claims description 8
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 6
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 claims description 5
- 238000010790 dilution Methods 0.000 claims description 5
- 239000012895 dilution Substances 0.000 claims description 5
- QRLVDLBMBULFAL-UHFFFAOYSA-N Digitonin Natural products CC1CCC2(OC1)OC3C(O)C4C5CCC6CC(OC7OC(CO)C(OC8OC(CO)C(O)C(OC9OCC(O)C(O)C9OC%10OC(CO)C(O)C(OC%11OC(CO)C(O)C(O)C%11O)C%10O)C8O)C(O)C7O)C(O)CC6(C)C5CCC4(C)C3C2C QRLVDLBMBULFAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 claims description 4
- UVYVLBIGDKGWPX-KUAJCENISA-N digitonin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H]([C@]2(CC[C@@H]3[C@@]4(C)C[C@@H](O)[C@H](O[C@H]5[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O[C@H]6[C@@H]([C@@H](O[C@H]7[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)CO7)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O6)O[C@H]6[C@@H]([C@@H](O[C@H]7[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O7)O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O6)O)[C@@H](CO)O5)O)C[C@@H]4CC[C@H]3[C@@H]2[C@@H]1O)C)[C@@H]1C)[C@]11CC[C@@H](C)CO1 UVYVLBIGDKGWPX-KUAJCENISA-N 0.000 claims description 4
- UVYVLBIGDKGWPX-UHFFFAOYSA-N digitonine Natural products CC1C(C2(CCC3C4(C)CC(O)C(OC5C(C(O)C(OC6C(C(OC7C(C(O)C(O)CO7)O)C(O)C(CO)O6)OC6C(C(OC7C(C(O)C(O)C(CO)O7)O)C(O)C(CO)O6)O)C(CO)O5)O)CC4CCC3C2C2O)C)C2OC11CCC(C)CO1 UVYVLBIGDKGWPX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 claims description 4
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 2
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 claims description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 2
- 229960000988 nystatin Drugs 0.000 claims description 2
- VQOXZBDYSJBXMA-NQTDYLQESA-N nystatin A1 Chemical compound O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1/C=C/C=C/C=C/C=C/CC/C=C/C=C/[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 VQOXZBDYSJBXMA-NQTDYLQESA-N 0.000 claims description 2
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 claims description 2
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 claims description 2
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 claims description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 5
- 210000000582 semen Anatomy 0.000 description 5
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 4
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 4
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 4
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N argon Substances [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 1
- -1 argon ion Chemical class 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 1
- CPBQJMYROZQQJC-UHFFFAOYSA-N helium neon Chemical compound [He].[Ne] CPBQJMYROZQQJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000004899 motility Effects 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 1
- 238000006862 quantum yield reaction Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
- G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
- G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
- G01N21/6428—Measuring fluorescence of fluorescent products of reactions or of fluorochrome labelled reactive substances, e.g. measuring quenching effects, using measuring "optrodes"
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
- G01N15/01—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials specially adapted for biological cells, e.g. blood cells
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Optics & Photonics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
460 121 2 10 15 20 25 30 35 I detta fall ligger osäkerheten i metoden däri att en population som innehåller inte tas upp av de från början levande cellerna. flera millioner celler kvalitetsbestämmes på grundval av undersök- ning av några hundra celler. Denna metod är dessutom tidskrävande och kan inte anpassas till produktionsteknologi.
En annan metod grundas på den observatíonen att en hastig- hetsberoende, frekvensmodulerad komponent finns i det ljus som sprides av huvuddelen av spermierna när spermaprovet belyses med monokromatiskt ljus från en helium-neon-laser. Spermiernas hastig- hetsfördelning kan bestämmas med hjälp av Fouriertransformation av frekvensspektret från Dopplersignalen. Denna metod är även använd- har för mätning av koncentrationen av spermier (LAZYMOT device of BIG Biotechnik GmbH., Mönchengladbach, Västtyskland, använd för undersökning av motiliteten). Å andra sidan är de kända metoderna inte lämpade för att fastställa ett noggrant och reproducerbart resultat och de är dess- utom komplicerade och dyrbara för vidare användning inom industriel- la processer för framställning av sperma. Ändamålet med föreliggande uppfinning är att åstadkomma ett förfarande och en utrustning för att utföra en enkel och förhållande- vis billig kvalitetsbestämning av sperma med en noggrannhet som tillfredsställer produktionskraven.
Uppfínningen bygger på den kunskapen att fluorescensegen- skaperna hos propidiumjodid, såsom den spektrala fördelningen och kvantumutbytet av fluorescens från utsänt ljus ändras genom växel- verkan med och bindning av färgämnet till nukleinsyror. Bindningen av färgämnesmolekylerna uppträder såsom en signifikant ökning av den fluorescensnivá som är karaktäristisk för det fria färgämnet.
Spermaproven kvalitetsbestämmes pá den basis att i jämförelse med de intakta cellerna upptas propidiumjodid mycket snabbt av de döda cellerna som har en membran med ökad permeabilitet, varigenom en ökning i intensitet observeras jämfört med densamma hos det fria färgämnet. Detta är en mycket snabb process, varigenom även en högre fluorescensintensitet erhålles som är proportionell mot det totala antalet spermier. ' Föreliggande uppfinning hänför sig således till ett förfa- rande för snabb bestämning av antalet spermier i spermaprov ochlel- ler proportionen av levande spermier, varvid det fluorescerande färgämnet propidiumjodid upplöses i en buffert och intensiteten (Fo) 10 15 20 25 30 35 3 460 121 mätes, varefter spermaprovet tillsättes och intensiteten (P2) bestämmas, efter mätning av intensiteten (Fl) och tillsättning av ett cytoplasmamembranpermeabiliserande medel, varefter till- sättes en buffert och ett permeabiliserande medel till bufferten och intensiteten (P3) mätes samt därefter intensiteten (Fu) hos den rena bufferten och slutligen intensiteten (P5) hos sperma- blandningen som tillsats till bufferten, och koncentrationen av celler beräknas genom användning av formeln: (P2-P3) - (P5-Fu) cellkoncentration = a . miljoner/mms Fo där a är multiplikationsprodukten av kalibreringskurvans lutning med förutspädningsförhållandet, samt proportionen av levande cel- ler beräknas genom användning av formeln: (F -P ) - (F -F ) 190 _ ___Ä__2______É__E__ _ (P2-P3) - (P5-Fu) levande celler % = 100.
Såsom cytoplasmamembranpermeabiliserande medel kan företrä- desvis tillsättas saponin, digitonin eller nystatin till det fär- gade cellprovet, varigenom membranet hos varje cell blir permea- belt.
Uppfinningen avser vidare en utrustning för utförande av förfarandet, vilken innefattar en kyvetthållareenhet, en till denna ansluten ljuskälla, en ingängsoptík med ett optiskt filter och två linser, vilka efter val av det lämpliga spektralområdet projicerar ljuset från ljuskällan mot provet, som är placerat på den termostabila kyvetthållaren, en utgångsoptik som är vinkelrät mot ingångsoptikens axel och innefattar ett optiskt filter samt två linser, vilka genom ljusdetektorn, som är förbunden med kyvett- hållareenheten, projicerar emissionen från provet, som är placerat på kyvetthållaren, en högspänningsenhet för ljusdetektorn och de- tekteringselektronik som mottar signalerna från ljusdetektorn.
Ett schema över utrustningen enligt uppfinningen är visat i fig. 1.
Utrustningen fungerar på följande sätt: Anordningen igång- sättes genom tillslagning av huvudströmbrytaren och en högspän~ ning pàlägges på högspänningsenheten 9 som matar ljusdetektorn 8.
Högspänningen ger upphov till en emissionsintensitet som är gott och väl mätbar med den valda förstärkningen av detekteringselektro- 460 121 u 10 15 20 25 30 35 niken 10 som mottar signalerna från ljusdetektorn 8.
För att mäta emissionsintensiteten hos proven som användes sättes provet som är placerat i kyvetten och som skall mätas in i kyvetthállaren 2, varefter emissionsintensiteten återges automa- tiskt av utrustningens detekteringselektronik 10.
För att utföra en komplett serie av mätningar, exempelvis för bestämning av proportionerna av levande celler i ett sperma- prov vars kvalitet skall bestämmas, måste emissionsintensiteten från sex prov som framställts på olika sätt mätas. Värderingen göres därefter genom bestämning av proportionen av levande celler samt den absoluta koncentrationen av celler hos provet som kvali- tetsbestämmes.
Graden av förstärkning samt graden av filtrering som minskar det elektroniska bakgrundsbruset kan varieras med flera grader.
Lämpligen låter man värdet av högspänningen som pâkopplas på den fotoelektronmultiplikatoI~sonxanvändes såsom detektor uppträda på en registrerare.
Huvudfördelarna med förfarandet och utrustningen enligt upp- finningen kan summeras på följande sätt. a) De är enklare och billigare än någon känd teknik. b) Noggranna och reproducerbara resultat erhålles snabbt vilka därmed kan införas i teknologin för framställning av sperma. c) De är användbara för bestämning av den noggranna propor- tionen av levande celler i förhållande till döda. d) En objektiv bestämning av motståndskraften hos ett val- fritt ejakulat och slutligen förutsägelsen av det biologiska vär- det av sperman som testas blir möjlig genom den serie av under- sökningar av spermaprov som utsättes för en provbelastning. e) Mätning av den absoluta koncentrationen av spermier blir också möjlig. f) Förfarandet är mera känsligt än förfarandena enligt känd teknik. g) Genom bindning av färgämnet propidiumjodid ökar fluore- scensen signifikant, vilket medför en större upplösning.
Förfarandet enligt uppfinningen belyses ytterligare i detalj med hjälp av följande icke begränsande exempel.
En kalibreringskurva för galtsperma visas i fig. 2 samt en dylik för tjursperma i fig. 3. 10 15 20 25 30 35 s 460 121 Exempel Andelen av levande celler bestämmes på följande sätt. 1. Fluorescensintensiteten FO hos propidiumiodid (PI) upp- löst i en buffert mätes på 1600 ul av en färgämneslösning med en koncentration av 25 mg/1 av PI vilken också tjänar såsom standard. 2. Spermaprovet som skall undersökas och är utspätt i förväg med 40 ul av bufferten tillsättes och intensiteten Fl mätes. 3. Såsom permeabiliserande medel tillsättes H0 ul av en eta- nollösning som innehåller 50 mg/ml av digitonin till cellprovet och intensiteten P2 mätes.
H. Istället för spermaprovet tillsättes H0 ul av PBS (fos- fatbuffertsaltlösning) let tillfärgämneslösningen och fluorescensintensiteten F samt därefter det permeabiliserande med- 3 för den sålunda framställda lösningen bestämmes (1600 ul av PI-lösning + 40 ul av buffert + 40 ul av etanoldigitoninlösning). 5. Intensiteten Fu hos 1800 ul av buffertlösníngen mätes.
B. Intensiteten P5 bestämmes efter tillsättning av 40 ul av den i förväg utspädda sperman till bufferten.
Andelen av intakta celler beräknas från de intensiteter som mätts genom användning av formeln: 100 _ (ri-fo) - (P5-ru) _ (P2-P3) - (P5-Fu) Levande celler % = 100 Det antalet cel- ler som finns i provet kan bestämmas samtidigt från de intensite- Antalet celler bestämmas på följande sätt: ter som mätits ovan inom mätningarna för bestämning av proportionen levande celler. Skillnaden mellan de mätta intensiteterna P2 och P3, d.v.s. värdet av P2 - P3, härrör från det totala antalet per- meabiliserade celler och den är därför proportíonell mot antalet celler i provet. Inom området 1x10S till 1,5x106 celler/ml visar värdet P2 - P3 en linjär korrelation med koncentrationen av celler.
Inom detta område kan man därför med hjälp av kalibrering erhålla antalet celler i provet ur värdet P2 - F som uppmätts under för- farandets förlopp. Den icke specifika iâtensitetsökningen P5 - Fu som härrör från spermierna måste också tas i beaktande i detta fall.
Beräkningen utföres på följande sätt: Spermiekoncentrationen i miljoner/mm =a . 460 121 s 10 15 20 25 30 35 där a har det ovan angivna värdet.
Kalibreringskurvan kan åstadkommas genom användning av en flödescytometer och ett cellprov som är märkt med PI såsom följer.
Den cellsuspension som skall testas utspädes till en koncen- tration av 0,5x106 till 2x106 celler /ml genom användning av PBS- buffert. Under kylning med is behandlas 1 ml av den utspädda sus- pensionen med 1 ml av 1%-ig NP-H0-lösning (Nonidet P-40, SIGMA, Deisenhofen, Förbundsrepubliken Tyskland). Under inverkan av denna behandling förstöras samtliga celler och deras membran blir permeab- la för PI.
Efter denna behandling färgas provet genom tillsättning av PI upplöst i PBS-buffert till en slutkoncentration av 30 ul/ml av färgämnet.
Det färgade provet analyseras i en flödescytometer, exempel- vis i en anordning av typen Dickinson FACS III, genom användning av en flödeshastighet av 1500 celler/sekund. Exciteringen åstad- kommes med hjälp av en argonjonlaser med våglängden H88 nm, medan emissionen registreras genom att ett spärrfilter införes, vilket är ytpermeabelt i området ovanför B20 nm.
Under förloppet av analysen räknas de celler som passerar ge- nom systemet med hjälp av anordningen på basis av registreringen av fluorescensintensiteten hos PI. Eftersom PI upptas likformigt av spermierna i provet under inverkan av behandlingen motsvarar detta antal det absoluta antalet av celler. Genom den noggranna mot- räkningen av mängden av prov som förbrukas vid mätningen och un- der beaktande av utspädningsfaktorerna erhålles den ursprungliga koncentrationen av celler i provet, vilken är lika med fluorescens- intensitetskvoten (P2-P3) - (P5-Fu) Fo som uppmätts på samma prov i en spektrofluorimeter. Vid fram- ställning av en serie utspädníngar av provet och under användning av en serie av parallella cytometríska och spektrofluorimetriska mätningar bestämmes det absoluta antalet av celler som tillhör in- tensitetskvoten som mätts i spektrofluorimetern inom olika koncen- trationsområden, varvid dennas noggrannhet erhålles genom uppre- pade undersökningar ett flertal gånger i samma mätpunkter. Efter- lf! 10 'z 460 121 som värdet av kvoten av fluorescensíntensiteterna står i linjär korrelation med antalet celler kan en regressionslinje av mät- ningarna för godtyckliga arter av spermier uppritas på grundval av_vilken det antal celler som tillhör en bestämd intensitets- kvot kan bestämmas .
Multiplikationsprodukten från lutningen hos regressions- linjen med utspädningen av spermaprovet som undersökes ger koefficienten u, vilken efter multiplicering med den uppmätta fluorescensintensitetskvoten ger den ursprungliga koncentrationen av celler i provet.
Kalibreringskurvan kan också konstrueras genom hämocytometrísk räkning.
Beräkningarna kan företrädesvis utföras med hjälp av en dator.
Claims (3)
1. Förfarande för snabb bestämning av antalet spermier i spermaprov och/eller proportionen av levande spermier, k ä n n e t e c k n a t av att det fluorescerande färgämnet propidiumjodid upplöses i en buffert och färgämneslösningens fluorescensintensitet (FO) mätes, spermaprovet tillsättes därefter och fluorescensintensiteten (P1) mätes, ett cytoplasma- membranpermeabiliserande medel tillsättes sedan och fluorescens~ intensiteten (P2) mätes, varjämte en buffert och ett permea- biliserande medel tillsättes till färgämneslösningen och fluorescensintensiteten (P3) mätes, fluorescensintensiteten (Fu) hos den rena buffertlösningen mätes och slutligen mätes fluorescensintensiteten (P5) hos spermablandningen tillsatt till bufferten, och koncentrationen av celler beräknas genom användning av formeln: (P2-P3) - (P5-Fu) Cellkoncentration =Q/ ' miljoner/mm3 F o däri! är multiplikatíonsprodukten av kalibreringskurvans lut- ning med förutspädningsförhållandet, samt proportionen av levande celler beräknas genom användning av formeln: (F -F ) - (F -F ) Levande celler % = 100 - -l-9---É-ï- . 100. (P2-P3) - (P5-Fu)
2. Förfarande enligt krav 1, k ä n n e t e c k n a t av att propidiumjodid användes i en koncentration av 12,5 mg/liter till 25 mg/liter.
3. Förfarande enligt krav 1, k ä n n e t e c k n a t av att saponin, digitonín eller nystatin användes såsom cyto- plasmamembranpermeabiliserande medel. H. Utrustning för utförande av förfarandet enligt krav 1, 2 k ä n n e t e c k n a d av en kyvetthållarenhet (1), en till denna ansluten ljuskälla (5), en ingângsoptik innefattande 460 121 ett optiskt filter (U) och två linser (3), vilka efter val av det lämpliga spektralområdet projicerar ljuset från ljus- källan (5) till provet (11) som är placerat på den termo- stabila kyvetthàllaren (2), en utgångsoptik som är vinkel- rät mot ingångsoptikens axel och innefattar ett optiskt filter (7) samt två linser (6), vilka genom ljusdetektorn (8), som är förbunden med kyvetthållarenheten (1), projicerar emissionen från provet (11), som är placerat på kyvetthålla- ren, en hågspänningsenhet (9) för ljusdetektorn och detekte- ringselektroník (10) som mottar signalerna från ljusdetektorn (8).
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB8801870A GB2214518A (en) | 1988-01-28 | 1988-01-28 | Process and equipment for the rapid determination of the spermium cell count and/or living spermium count |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SE8800325D0 SE8800325D0 (sv) | 1988-02-02 |
| SE8800325L SE8800325L (sv) | 1989-08-03 |
| SE460121B true SE460121B (sv) | 1989-09-11 |
Family
ID=10630656
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SE8800325A SE460121B (sv) | 1988-01-28 | 1988-02-02 | Foerfarande och utrustning foer snabb bestaemning av antalet spermaceller och/eller antalet levande spermier |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4880732A (sv) |
| JP (1) | JPH01210863A (sv) |
| AU (1) | AU596270B2 (sv) |
| CH (1) | CH675485A5 (sv) |
| DE (1) | DE3806556A1 (sv) |
| ES (1) | ES2006560A6 (sv) |
| FR (1) | FR2626979B1 (sv) |
| GB (1) | GB2214518A (sv) |
| NL (1) | NL8800239A (sv) |
| SE (1) | SE460121B (sv) |
Families Citing this family (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2561170B2 (ja) * | 1990-07-13 | 1996-12-04 | 剛 野間 | リンパ球の抗原特異的インターロイキンー２反応性の測定法 |
| ES2044778B1 (es) * | 1992-04-02 | 1994-09-01 | Esteve Carmen Blanco | Metodo analitico para la determinacion de la capacidad fecundante de una muestra de semen humano. |
| US5935800A (en) * | 1994-10-31 | 1999-08-10 | Beth Israel Deaconess Medical Center | Assays and kits for determining male fertility |
| RU2130183C1 (ru) * | 1997-02-06 | 1999-05-10 | Габбасов Зуфар Ахнафович | Измеритель количества сперматозоидов или эритроцитов, движущихся в заданном диапазоне скоростей |
| CN1219048C (zh) * | 1998-02-19 | 2005-09-14 | 医疗电子系统有限公司 | 精子分析系统 |
| WO2000054026A1 (en) * | 1999-03-05 | 2000-09-14 | Hatting-Ks | Determination of sperm concentration and viability for artificial insemination |
| US6359683B1 (en) * | 2000-04-27 | 2002-03-19 | Becton, Dickinson And Company | Method for determining the volume of particles suspended in liquids |
| KR100834588B1 (ko) * | 2001-05-24 | 2008-06-02 | 엠.이.에스. 메디컬 일렉트로닉 시스템즈 엘.티.디. | 정액 분석 |
| TW201109654A (en) * | 2009-09-14 | 2011-03-16 | Univ Nat Taiwan | Biochip system, method for determining sperm quality and method for isolating sperm |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4146604A (en) * | 1973-05-31 | 1979-03-27 | Block Engineering, Inc. | Differential counting of leukocytes and other cells |
| US4559309A (en) * | 1982-09-01 | 1985-12-17 | Memorial Sloan Kettering Cancer Center | Flow cytometry-fluorescence measurements for characterizing sperm |
| GB2145112B (en) * | 1983-04-27 | 1987-02-18 | Milk Marketing Board | Sorting living spermatozoa |
| NZ207393A (en) * | 1983-08-05 | 1987-03-31 | Neal Lloyd First | Staining dna in living cells |
| US4693972A (en) * | 1984-01-16 | 1987-09-15 | Becton, Dickinson And Company | Composition and method for rapid detection of microorganisms in clinical samples |
| US4683213A (en) * | 1985-04-22 | 1987-07-28 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Method for predicting the fertility of male mammals |
-
1988
- 1988-01-28 GB GB8801870A patent/GB2214518A/en not_active Withdrawn
- 1988-02-01 NL NL8800239A patent/NL8800239A/nl not_active Application Discontinuation
- 1988-02-02 SE SE8800325A patent/SE460121B/sv not_active IP Right Cessation
- 1988-02-02 AU AU11185/88A patent/AU596270B2/en not_active Ceased
- 1988-02-04 FR FR888801284A patent/FR2626979B1/fr not_active Expired - Fee Related
- 1988-02-08 US US07/153,599 patent/US4880732A/en not_active Expired - Fee Related
- 1988-02-12 JP JP63029052A patent/JPH01210863A/ja active Pending
- 1988-02-12 ES ES888800385A patent/ES2006560A6/es not_active Expired
- 1988-02-18 CH CH601/88A patent/CH675485A5/de not_active IP Right Cessation
- 1988-03-01 DE DE3806556A patent/DE3806556A1/de not_active Withdrawn
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| SE8800325D0 (sv) | 1988-02-02 |
| US4880732A (en) | 1989-11-14 |
| NL8800239A (nl) | 1989-09-01 |
| SE8800325L (sv) | 1989-08-03 |
| AU1118588A (en) | 1989-08-03 |
| CH675485A5 (sv) | 1990-09-28 |
| DE3806556A1 (de) | 1989-09-07 |
| FR2626979A1 (fr) | 1989-08-11 |
| AU596270B2 (en) | 1990-04-26 |
| ES2006560A6 (es) | 1989-05-01 |
| JPH01210863A (ja) | 1989-08-24 |
| GB2214518A (en) | 1989-09-06 |
| GB8801870D0 (en) | 1988-02-24 |
| FR2626979B1 (fr) | 1990-07-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Hanley et al. | Fluorescence lifetime imaging: multi‐point calibration, minimum resolvable differences, and artifact suppression | |
| JP3707620B2 (ja) | 光散乱技術を使用した網赤血球分析方法と装置 | |
| Kachel et al. | Fluvo-metricell, a combined cell volume and cell fluorescence analyzer. | |
| US6421121B1 (en) | Method and apparatus for rapid particle identification utilizing scattered light histograms | |
| SE446911B (sv) | Foerfarande foer beredning av en cellsuspension frforfarande for beredning av en cellsuspension franaan ett blodprov foere raekning av antalet roeda o ett blodprov fore rekning av antalet roda och vitch vita blodkroppar samt blodplaettar a blodkroppar samt blodplettar | |
| DK154457B (da) | Fremgangsmaade til automatisk cellevolumenbestemmelse | |
| EP0420944A1 (en) | Optical inspection of food products | |
| SE454219B (sv) | Sett och anordning for att meta blodets koaguleringstid | |
| Westerman et al. | A direct method for the quantitative measurement of red cell dimensions | |
| US5197017A (en) | Potentiophotometric fibrinogen determination | |
| CN101874206A (zh) | 通过间接免疫荧光测定的终点效价确定方法及其评估方法 | |
| SE460121B (sv) | Foerfarande och utrustning foer snabb bestaemning av antalet spermaceller och/eller antalet levande spermier | |
| SE442347B (sv) | Komposition for provning av biologiska vevnader eller vetskor innehallande ett dna-interaktivt fergemne och ett avexciterande emne, samt ett sett att anvenda kompositionen | |
| Mendelsohn et al. | A comparison of scanning and two-wavelength microspectrophotometry | |
| SU938936A1 (ru) | Устройство дл поиска измененных клеток в цитологическом препарате | |
| JPH04337460A (ja) | 尿中の細胞分析装置および方法。 | |
| Murdoch | Can C IV emission be used as a luminosity indicator? | |
| EP1464966A1 (en) | Apparatus and method for determining the concentration and motility of light scattering particles | |
| McGregor et al. | Diffusion of dyes into polymer films. Part 1.—Microdensitometric technique | |
| Thomsen | Treatment and splitting of samples for bacteria and meiofauna biomass determinations by means of a semi-automatic image analysis system. | |
| US6218190B1 (en) | Method for testing a cell suspension | |
| JPS56137140A (en) | Optical measuring method of blood coagulation | |
| Lewis | Automation in haematology-present and future trends | |
| RU2054177C1 (ru) | Способ определения деструктивной формы острого панкреатита | |
| Myśliwski et al. | Increase of size and dry mass of mouse erythrocytes depending on age of donors |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| NUG | Patent has lapsed |
Ref document number: 8800325-6 Effective date: 19910911 Format of ref document f/p: F |