SA517381458B1 - أجسام مضادة محسنة ضد إنترلوكين-6 (il-6) - Google Patents
أجسام مضادة محسنة ضد إنترلوكين-6 (il-6) Download PDFInfo
- Publication number
- SA517381458B1 SA517381458B1 SA517381458A SA517381458A SA517381458B1 SA 517381458 B1 SA517381458 B1 SA 517381458B1 SA 517381458 A SA517381458 A SA 517381458A SA 517381458 A SA517381458 A SA 517381458A SA 517381458 B1 SA517381458 B1 SA 517381458B1
- Authority
- SA
- Saudi Arabia
- Prior art keywords
- antibody
- antigen
- context
- binding
- ebi
- Prior art date
Links
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 claims abstract description 165
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 211
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 209
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 193
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 193
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 193
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 claims description 163
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 84
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims description 78
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 67
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 62
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 51
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 46
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 claims description 44
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 claims description 34
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 claims description 34
- 229960003989 tocilizumab Drugs 0.000 claims description 32
- 108010081667 aflibercept Proteins 0.000 claims description 19
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 18
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 18
- 101001076408 Homo sapiens Interleukin-6 Proteins 0.000 claims description 17
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 claims description 17
- 102000052611 human IL6 Human genes 0.000 claims description 17
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 17
- 102220519841 Putative neutrophil cytosol factor 1B_S30P_mutation Human genes 0.000 claims description 16
- 102200082947 rs33954632 Human genes 0.000 claims description 16
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 15
- 102220250470 rs774802052 Human genes 0.000 claims description 14
- 230000007423 decrease Effects 0.000 claims description 13
- 210000001525 retina Anatomy 0.000 claims description 13
- 210000004127 vitreous body Anatomy 0.000 claims description 13
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 claims description 12
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims description 9
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims description 9
- 210000001742 aqueous humor Anatomy 0.000 claims description 8
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 8
- 229960002833 aflibercept Drugs 0.000 claims description 7
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims description 7
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 claims description 7
- 210000004087 cornea Anatomy 0.000 claims description 6
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims description 6
- 238000013461 design Methods 0.000 claims description 5
- 210000004240 ciliary body Anatomy 0.000 claims description 4
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 3
- 101100295738 Gallus gallus COR3 gene Proteins 0.000 claims 2
- 102100023245 Asparagine-tRNA ligase, cytoplasmic Human genes 0.000 claims 1
- 241000726103 Atta Species 0.000 claims 1
- 101100116570 Caenorhabditis elegans cup-2 gene Proteins 0.000 claims 1
- 240000005589 Calophyllum inophyllum Species 0.000 claims 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 claims 1
- 102100037186 Cytochrome b-245 chaperone 1 Human genes 0.000 claims 1
- 241001633942 Dais Species 0.000 claims 1
- 101100116572 Drosophila melanogaster Der-1 gene Proteins 0.000 claims 1
- 102000017914 EDNRA Human genes 0.000 claims 1
- 101150062404 EDNRA gene Proteins 0.000 claims 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims 1
- 241001505295 Eros Species 0.000 claims 1
- ULGZDMOVFRHVEP-RWJQBGPGSA-N Erythromycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](C)C(=O)O[C@@H]([C@@]([C@H](O)[C@@H](C)C(=O)[C@H](C)C[C@@](C)(O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@H](C[C@@H](C)O2)N(C)C)O)[C@H]1C)(C)O)CC)[C@H]1C[C@@](C)(OC)[C@@H](O)[C@H](C)O1 ULGZDMOVFRHVEP-RWJQBGPGSA-N 0.000 claims 1
- 244000187656 Eucalyptus cornuta Species 0.000 claims 1
- 101000624939 Homo sapiens Asparagine-tRNA ligase, cytoplasmic Proteins 0.000 claims 1
- 241001139599 Manoa Species 0.000 claims 1
- 235000006679 Mentha X verticillata Nutrition 0.000 claims 1
- 235000002899 Mentha suaveolens Nutrition 0.000 claims 1
- 235000001636 Mentha x rotundifolia Nutrition 0.000 claims 1
- 241000282320 Panthera leo Species 0.000 claims 1
- 208000009989 Posterior Leukoencephalopathy Syndrome Diseases 0.000 claims 1
- 241000269435 Rana <genus> Species 0.000 claims 1
- 102000016941 Rho Guanine Nucleotide Exchange Factors Human genes 0.000 claims 1
- 108010053823 Rho Guanine Nucleotide Exchange Factors Proteins 0.000 claims 1
- 101150064521 cybC1 gene Proteins 0.000 claims 1
- VWTINHYPRWEBQY-UHFFFAOYSA-N denatonium Chemical compound [O-]C(=O)C1=CC=CC=C1.C=1C=CC=CC=1C[N+](CC)(CC)CC(=O)NC1=C(C)C=CC=C1C VWTINHYPRWEBQY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 claims 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims 1
- 101150048619 mdt-31 gene Proteins 0.000 claims 1
- VIKNJXKGJWUCNN-XGXHKTLJSA-N norethisterone Chemical compound O=C1CC[C@@H]2[C@H]3CC[C@](C)([C@](CC4)(O)C#C)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 VIKNJXKGJWUCNN-XGXHKTLJSA-N 0.000 claims 1
- 239000012925 reference material Substances 0.000 claims 1
- 239000011800 void material Substances 0.000 claims 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 76
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 70
- 206010012688 Diabetic retinal oedema Diseases 0.000 abstract description 42
- 201000011190 diabetic macular edema Diseases 0.000 abstract description 42
- 238000011282 treatment Methods 0.000 abstract description 41
- 208000022873 Ocular disease Diseases 0.000 abstract description 5
- 229940100601 interleukin-6 Drugs 0.000 description 160
- 238000000034 method Methods 0.000 description 121
- 210000001508 eye Anatomy 0.000 description 86
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 54
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 52
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 48
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 44
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 43
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 42
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 34
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 33
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 31
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 31
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 28
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 26
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 26
- -1 4-hydroxyproline-4-hydroxyproline 5-hydroxylysine Chemical compound 0.000 description 24
- 206010012689 Diabetic retinopathy Diseases 0.000 description 23
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 23
- 208000002780 macular degeneration Diseases 0.000 description 21
- 208000003556 Dry Eye Syndromes Diseases 0.000 description 20
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 19
- 206010064930 age-related macular degeneration Diseases 0.000 description 19
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 19
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 19
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 19
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 19
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 18
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 17
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 17
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 17
- 206010013774 Dry eye Diseases 0.000 description 16
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 16
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 16
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 16
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 16
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 15
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 15
- 201000007914 proliferative diabetic retinopathy Diseases 0.000 description 15
- 102200123491 rs72555390 Human genes 0.000 description 15
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 15
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 14
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 14
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 14
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 14
- 206010038848 Retinal detachment Diseases 0.000 description 13
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 13
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 13
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 13
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 13
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 13
- 208000008795 neuromyelitis optica Diseases 0.000 description 13
- 208000004644 retinal vein occlusion Diseases 0.000 description 13
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 13
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 12
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 12
- 208000030533 eye disease Diseases 0.000 description 12
- 229940051306 eylea Drugs 0.000 description 12
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 12
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 12
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 11
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 11
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 11
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 11
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 10
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 10
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 10
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 10
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 10
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 10
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 10
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 10
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 9
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 description 9
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 9
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 9
- 208000019793 rhegmatogenous retinal detachment Diseases 0.000 description 9
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 9
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 9
- 206010010984 Corneal abrasion Diseases 0.000 description 8
- 208000028006 Corneal injury Diseases 0.000 description 8
- 206010029113 Neovascularisation Diseases 0.000 description 8
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 8
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 8
- 206010046851 Uveitis Diseases 0.000 description 8
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 8
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 8
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 8
- 238000004422 calculation algorithm Methods 0.000 description 8
- 230000008859 change Effects 0.000 description 8
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 8
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 8
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 8
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 8
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 8
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 8
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 7
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 7
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 7
- 102100037792 Interleukin-6 receptor subunit alpha Human genes 0.000 description 7
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 7
- 101150107869 Sarg gene Proteins 0.000 description 7
- 229920002125 Sokalan® Polymers 0.000 description 7
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 7
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 7
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 7
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 7
- 108040006858 interleukin-6 receptor activity proteins Proteins 0.000 description 7
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 7
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 7
- 230000003169 placental effect Effects 0.000 description 7
- 229920005596 polymer binder Polymers 0.000 description 7
- 239000002491 polymer binding agent Substances 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 7
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 7
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 7
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 2-Propenoic acid Natural products OC(=O)C=C NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 6
- 241000282552 Chlorocebus aethiops Species 0.000 description 6
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 6
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 6
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 6
- 229920002988 biodegradable polymer Polymers 0.000 description 6
- 239000004621 biodegradable polymer Substances 0.000 description 6
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 6
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 6
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 6
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 6
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 6
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 6
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 6
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 6
- 210000003786 sclera Anatomy 0.000 description 6
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 6
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 6
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 6
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 206010059176 Juvenile idiopathic arthritis Diseases 0.000 description 5
- 208000001344 Macular Edema Diseases 0.000 description 5
- 206010025415 Macular oedema Diseases 0.000 description 5
- 206010038923 Retinopathy Diseases 0.000 description 5
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 5
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 5
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 5
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 5
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 5
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 5
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 5
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 description 5
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 5
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 5
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 5
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 5
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 5
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 5
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 5
- 201000010230 macular retinal edema Diseases 0.000 description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 5
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 5
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 5
- 231100000219 mutagenic Toxicity 0.000 description 5
- 230000003505 mutagenic effect Effects 0.000 description 5
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 5
- 229920001200 poly(ethylene-vinyl acetate) Polymers 0.000 description 5
- 229920001606 poly(lactic acid-co-glycolic acid) Polymers 0.000 description 5
- 239000004584 polyacrylic acid Substances 0.000 description 5
- 229920001610 polycaprolactone Polymers 0.000 description 5
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 5
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 5
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010032595 Antibody Binding Sites Proteins 0.000 description 4
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 208000005024 Castleman disease Diseases 0.000 description 4
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 4
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 4
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229920002148 Gellan gum Polymers 0.000 description 4
- 108700005091 Immunoglobulin Genes Proteins 0.000 description 4
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 4
- 208000017442 Retinal disease Diseases 0.000 description 4
- XTXRWKRVRITETP-UHFFFAOYSA-N Vinyl acetate Chemical compound CC(=O)OC=C XTXRWKRVRITETP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 238000000429 assembly Methods 0.000 description 4
- 230000000712 assembly Effects 0.000 description 4
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 4
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 4
- 150000002009 diols Chemical class 0.000 description 4
- 239000005038 ethylene vinyl acetate Substances 0.000 description 4
- 210000000744 eyelid Anatomy 0.000 description 4
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 4
- 230000006870 function Effects 0.000 description 4
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 4
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 description 4
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 description 4
- 201000002215 juvenile rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 4
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 4
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 4
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 4
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 4
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 4
- 229920002635 polyurethane Polymers 0.000 description 4
- 239000004814 polyurethane Substances 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N puromycin Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1C[C@H](N)C(=O)N[C@H]1[C@@H](O)[C@H](N2C3=NC=NC(=C3N=C2)N(C)C)O[C@@H]1CO RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N 0.000 description 4
- 229960003876 ranibizumab Drugs 0.000 description 4
- 238000006722 reduction reaction Methods 0.000 description 4
- 230000004264 retinal detachment Effects 0.000 description 4
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 4
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 4
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 2-(2-methoxy-5-methylphenyl)ethanamine Chemical compound COC1=CC=C(C)C=C1CCN SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 4-[4-(dimethylamino)phenyl]-n,n-dimethylaniline Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1C1=CC=C(N(C)C)C=C1 YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-M Acrylate Chemical compound [O-]C(=O)C=C NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 description 3
- 208000005590 Choroidal Neovascularization Diseases 0.000 description 3
- 206010060823 Choroidal neovascularisation Diseases 0.000 description 3
- 206010010744 Conjunctivitis allergic Diseases 0.000 description 3
- 229920001651 Cyanoacrylate Polymers 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N Ethene Chemical compound C=C VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000005977 Ethylene Substances 0.000 description 3
- IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide Chemical compound C1CO1 IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102100037362 Fibronectin Human genes 0.000 description 3
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 3
- 208000010412 Glaucoma Diseases 0.000 description 3
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical group C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 3
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000003456 Juvenile Arthritis Diseases 0.000 description 3
- MWCLLHOVUTZFKS-UHFFFAOYSA-N Methyl cyanoacrylate Chemical compound COC(=O)C(=C)C#N MWCLLHOVUTZFKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004721 Polyphenylene oxide Substances 0.000 description 3
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 3
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000005054 agglomeration Methods 0.000 description 3
- 208000002205 allergic conjunctivitis Diseases 0.000 description 3
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 description 3
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 3
- 208000024998 atopic conjunctivitis Diseases 0.000 description 3
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000011089 carbon dioxide Nutrition 0.000 description 3
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 210000004081 cilia Anatomy 0.000 description 3
- 238000005094 computer simulation Methods 0.000 description 3
- 229920006037 cross link polymer Polymers 0.000 description 3
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 3
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 3
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 3
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 3
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 3
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 3
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 3
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 3
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 3
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 3
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 3
- 238000001879 gelation Methods 0.000 description 3
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 3
- 239000000833 heterodimer Substances 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 3
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 3
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 3
- 239000003607 modifier Substances 0.000 description 3
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 3
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 3
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 3
- 229920000747 poly(lactic acid) Polymers 0.000 description 3
- 239000004632 polycaprolactone Substances 0.000 description 3
- 229920000570 polyether Polymers 0.000 description 3
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 3
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 3
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 3
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 3
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 3
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 3
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- 230000002207 retinal effect Effects 0.000 description 3
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 3
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 3
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 3
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 3
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 3
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 3
- IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-2,4-dioxo-1,3-diazinane-5-carboximidamide Chemical compound CN1CC(C(N)=N)C(=O)NC1=O IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N 4-hydroxybenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 2
- 102100027211 Albumin Human genes 0.000 description 2
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 2
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 description 2
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000189662 Calla Species 0.000 description 2
- 208000034628 Celiac artery compression syndrome Diseases 0.000 description 2
- GHXZTYHSJHQHIJ-UHFFFAOYSA-N Chlorhexidine Chemical compound C=1C=C(Cl)C=CC=1NC(N)=NC(N)=NCCCCCCN=C(N)N=C(N)NC1=CC=C(Cl)C=C1 GHXZTYHSJHQHIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 2
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 description 2
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101100234002 Drosophila melanogaster Shal gene Proteins 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 2
- 102100026120 IgG receptor FcRn large subunit p51 Human genes 0.000 description 2
- 101710177940 IgG receptor FcRn large subunit p51 Proteins 0.000 description 2
- 102000003815 Interleukin-11 Human genes 0.000 description 2
- 108090000177 Interleukin-11 Proteins 0.000 description 2
- 108010002386 Interleukin-3 Proteins 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 2
- CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-M Methacrylate Chemical compound CC(=C)C([O-])=O CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-N Methacrylic acid Chemical compound CC(=C)C(O)=O CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 2
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 2
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 2
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 2
- 229920001710 Polyorthoester Polymers 0.000 description 2
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 2
- 206010036590 Premature baby Diseases 0.000 description 2
- GOOHAUXETOMSMM-UHFFFAOYSA-N Propylene oxide Chemical compound CC1CO1 GOOHAUXETOMSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 2
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 description 2
- 101710137010 Retinol-binding protein 3 Proteins 0.000 description 2
- 102100038247 Retinol-binding protein 3 Human genes 0.000 description 2
- 241000220010 Rhode Species 0.000 description 2
- 244000166071 Shorea robusta Species 0.000 description 2
- 235000015076 Shorea robusta Nutrition 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 206010065647 Systemic leakage Diseases 0.000 description 2
- ATJFFYVFTNAWJD-UHFFFAOYSA-N Tin Chemical compound [Sn] ATJFFYVFTNAWJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 2
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005299 abrasion Methods 0.000 description 2
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 2
- 239000003732 agents acting on the eye Substances 0.000 description 2
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 description 2
- NBZANZVJRKXVBH-GYDPHNCVSA-N alpha-Cryptoxanthin Natural products O[C@H]1CC(C)(C)C(/C=C/C(=C\C=C\C(=C/C=C/C=C(\C=C\C=C(/C=C/[C@H]2C(C)=CCCC2(C)C)\C)/C)\C)/C)=C(C)C1 NBZANZVJRKXVBH-GYDPHNCVSA-N 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 2
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 2
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 2
- 238000000149 argon plasma sintering Methods 0.000 description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 2
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 2
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 2
- 229960003260 chlorhexidine Drugs 0.000 description 2
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 2
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 210000000795 conjunctiva Anatomy 0.000 description 2
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 2
- 238000013016 damping Methods 0.000 description 2
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 2
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 2
- 208000037765 diseases and disorders Diseases 0.000 description 2
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 2
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 2
- 125000001033 ether group Chemical group 0.000 description 2
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 2
- 238000005187 foaming Methods 0.000 description 2
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 2
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 2
- 235000010492 gellan gum Nutrition 0.000 description 2
- 239000000216 gellan gum Substances 0.000 description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920003063 hydroxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 2
- 229940031574 hydroxymethyl cellulose Drugs 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 2
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 2
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000004941 influx Effects 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 108010032674 lampalizumab Proteins 0.000 description 2
- 229950000482 lampalizumab Drugs 0.000 description 2
- 238000013532 laser treatment Methods 0.000 description 2
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 2
- 239000012669 liquid formulation Substances 0.000 description 2
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 2
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 2
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 2
- 125000005395 methacrylic acid group Chemical group 0.000 description 2
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 2
- WBYWAXJHAXSJNI-UHFFFAOYSA-N methyl p-hydroxycinnamate Natural products OC(=O)C=CC1=CC=CC=C1 WBYWAXJHAXSJNI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 2
- 235000010981 methylcellulose Nutrition 0.000 description 2
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 2
- 229940126619 mouse monoclonal antibody Drugs 0.000 description 2
- 238000000569 multi-angle light scattering Methods 0.000 description 2
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 2
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 2
- 229940023490 ophthalmic product Drugs 0.000 description 2
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 2
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 2
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 2
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 2
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 2
- 239000002745 poly(ortho ester) Substances 0.000 description 2
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 239000004626 polylactic acid Substances 0.000 description 2
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 2
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 2
- QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N propylparaben Chemical compound CCCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002818 protein evolution Methods 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 229950010131 puromycin Drugs 0.000 description 2
- 238000004064 recycling Methods 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 238000009738 saturating Methods 0.000 description 2
- HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N schardinger α-dextrin Chemical compound O1C(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(O)C2O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC2C(O)C(O)C1OC2CO HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 2
- 235000010413 sodium alginate Nutrition 0.000 description 2
- 239000000661 sodium alginate Substances 0.000 description 2
- 229940005550 sodium alginate Drugs 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 150000005846 sugar alcohols Polymers 0.000 description 2
- 239000004173 sunset yellow FCF Substances 0.000 description 2
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 2
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 2
- 201000004595 synovitis Diseases 0.000 description 2
- 239000012049 topical pharmaceutical composition Substances 0.000 description 2
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 2
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 2
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 2
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 2
- QCHFTSOMWOSFHM-WPRPVWTQSA-N (+)-Pilocarpine Chemical compound C1OC(=O)[C@@H](CC)[C@H]1CC1=CN=CN1C QCHFTSOMWOSFHM-WPRPVWTQSA-N 0.000 description 1
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 description 1
- IAKAIJRXUQFDRQ-ZPYUXNTASA-N (e)-but-2-enoic acid;2-methylprop-2-enoic acid Chemical compound C\C=C\C(O)=O.CC(=C)C(O)=O IAKAIJRXUQFDRQ-ZPYUXNTASA-N 0.000 description 1
- WBYWAXJHAXSJNI-VOTSOKGWSA-M .beta-Phenylacrylic acid Natural products [O-]C(=O)\C=C\C1=CC=CC=C1 WBYWAXJHAXSJNI-VOTSOKGWSA-M 0.000 description 1
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HGEFWFBFQKWVMY-DUXPYHPUSA-N 2,4-dihydroxy-trans cinnamic acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C1=CC=C(O)C=C1O HGEFWFBFQKWVMY-DUXPYHPUSA-N 0.000 description 1
- JTXMVXSTHSMVQF-UHFFFAOYSA-N 2-acetyloxyethyl acetate Chemical compound CC(=O)OCCOC(C)=O JTXMVXSTHSMVQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YVOOPGWEIRIUOX-UHFFFAOYSA-N 2-azanyl-3-sulfanyl-propanoic acid Chemical group SCC(N)C(O)=O.SCC(N)C(O)=O YVOOPGWEIRIUOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WROUWQQRXUBECT-UHFFFAOYSA-N 2-ethylacrylic acid Chemical compound CCC(=C)C(O)=O WROUWQQRXUBECT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RSGFPIWWSCWCFJ-VAXZQHAWSA-N 2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylic acid;(2r,3s,4r,5r)-2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O.OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O.OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O RSGFPIWWSCWCFJ-VAXZQHAWSA-N 0.000 description 1
- JHZRQBKLEHQTKF-UHFFFAOYSA-N 2-methyloxirane;prop-1-ene Chemical group CC=C.CC1CO1 JHZRQBKLEHQTKF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OELQSSWXRGADDE-UHFFFAOYSA-N 2-methylprop-2-eneperoxoic acid Chemical compound CC(=C)C(=O)OO OELQSSWXRGADDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BRMWTNUJHUMWMS-UHFFFAOYSA-N 3-Methylhistidine Natural products CN1C=NC(CC(N)C(O)=O)=C1 BRMWTNUJHUMWMS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CYDQOEWLBCCFJZ-UHFFFAOYSA-N 4-(4-fluorophenyl)oxane-4-carboxylic acid Chemical compound C=1C=C(F)C=CC=1C1(C(=O)O)CCOCC1 CYDQOEWLBCCFJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DBCAQXHNJOFNGC-UHFFFAOYSA-N 4-bromo-1,1,1-trifluorobutane Chemical compound FC(F)(F)CCCBr DBCAQXHNJOFNGC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940117976 5-hydroxylysine Drugs 0.000 description 1
- SUBDBMMJDZJVOS-UHFFFAOYSA-N 5-methoxy-2-{[(4-methoxy-3,5-dimethylpyridin-2-yl)methyl]sulfinyl}-1H-benzimidazole Chemical compound N=1C2=CC(OC)=CC=C2NC=1S(=O)CC1=NC=C(C)C(OC)=C1C SUBDBMMJDZJVOS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000026326 Adult-onset Still disease Diseases 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 241001136792 Alle Species 0.000 description 1
- UIERETOOQGIECD-UHFFFAOYSA-N Angelic acid Natural products CC=C(C)C(O)=O UIERETOOQGIECD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000008102 Ankyrins Human genes 0.000 description 1
- 108010049777 Ankyrins Proteins 0.000 description 1
- 235000002198 Annona diversifolia Nutrition 0.000 description 1
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 208000027496 Behcet disease Diseases 0.000 description 1
- 201000004569 Blindness Diseases 0.000 description 1
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 241000197194 Bulla Species 0.000 description 1
- GAWIXWVDTYZWAW-UHFFFAOYSA-N C[CH]O Chemical group C[CH]O GAWIXWVDTYZWAW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282832 Camelidae Species 0.000 description 1
- 241000282836 Camelus dromedarius Species 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- XXAXVMUWHZHZMJ-UHFFFAOYSA-N Chymopapain Chemical compound OC1=CC(S(O)(=O)=O)=CC(S(O)(=O)=O)=C1O XXAXVMUWHZHZMJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090001069 Chymopapain Proteins 0.000 description 1
- WBYWAXJHAXSJNI-SREVYHEPSA-N Cinnamic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C1=CC=CC=C1 WBYWAXJHAXSJNI-SREVYHEPSA-N 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 241000581364 Clinitrachus argentatus Species 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 1
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 description 1
- 102100030497 Cytochrome c Human genes 0.000 description 1
- 108010075031 Cytochromes c Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- 150000008574 D-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 208000002249 Diabetes Complications Diseases 0.000 description 1
- 206010012655 Diabetic complications Diseases 0.000 description 1
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 229920003134 Eudragit® polymer Polymers 0.000 description 1
- 206010015548 Euthanasia Diseases 0.000 description 1
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-M Fluoride anion Chemical compound [F-] KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000287227 Fringillidae Species 0.000 description 1
- 208000003098 Ganglion Cysts Diseases 0.000 description 1
- 208000007465 Giant cell arteritis Diseases 0.000 description 1
- 241000219726 Griffonia simplicifolia Species 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000777314 Homo sapiens Choline kinase alpha Proteins 0.000 description 1
- 101000777313 Homo sapiens Choline/ethanolamine kinase Proteins 0.000 description 1
- 101000800133 Homo sapiens Thyroglobulin Proteins 0.000 description 1
- 101001138544 Homo sapiens UMP-CMP kinase Proteins 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 238000012450 HuMAb Mouse Methods 0.000 description 1
- 102000003839 Human Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000144 Human Proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000004354 Hydroxyethyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920001479 Hydroxyethyl methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 229920002153 Hydroxypropyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 description 1
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 description 1
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 description 1
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 1
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 102000003996 Interferon-beta Human genes 0.000 description 1
- 108090000467 Interferon-beta Proteins 0.000 description 1
- 238000012449 Kunming mouse Methods 0.000 description 1
- 239000005517 L01XE01 - Imatinib Substances 0.000 description 1
- 240000008415 Lactuca sativa Species 0.000 description 1
- 241000282838 Lama Species 0.000 description 1
- 239000004166 Lanolin Substances 0.000 description 1
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 1
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 1
- 241000408529 Libra Species 0.000 description 1
- 241001435619 Lile Species 0.000 description 1
- 102000019298 Lipocalin Human genes 0.000 description 1
- 108050006654 Lipocalin Proteins 0.000 description 1
- 241000282560 Macaca mulatta Species 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 241000252067 Megalops atlanticus Species 0.000 description 1
- 240000000233 Melia azedarach Species 0.000 description 1
- 101100153331 Mus musculus Timp1 gene Proteins 0.000 description 1
- 201000002481 Myositis Diseases 0.000 description 1
- JDHILDINMRGULE-LURJTMIESA-N N(pros)-methyl-L-histidine Chemical compound CN1C=NC=C1C[C@H](N)C(O)=O JDHILDINMRGULE-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- WHNWPMSKXPGLAX-UHFFFAOYSA-N N-Vinyl-2-pyrrolidone Chemical compound C=CN1CCCC1=O WHNWPMSKXPGLAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000012902 Nervous system disease Diseases 0.000 description 1
- 208000025966 Neurological disease Diseases 0.000 description 1
- 101100401106 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) met-7 gene Proteins 0.000 description 1
- 108010082522 Oncostatin M Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102100030098 Oncostatin-M-specific receptor subunit beta Human genes 0.000 description 1
- 108091008606 PDGF receptors Proteins 0.000 description 1
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 1
- 208000034038 Pathologic Neovascularization Diseases 0.000 description 1
- 208000037273 Pathologic Processes Diseases 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- 241000009328 Perro Species 0.000 description 1
- 239000004264 Petrolatum Substances 0.000 description 1
- 206010034972 Photosensitivity reaction Diseases 0.000 description 1
- 208000007452 Plasmacytoma Diseases 0.000 description 1
- 102000011653 Platelet-Derived Growth Factor Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108700023400 Platelet-activating factor receptors Proteins 0.000 description 1
- 241000276498 Pollachius virens Species 0.000 description 1
- RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N Poloxamer Chemical compound C1CO1.CC1CO1 RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001054 Poly(ethylene‐co‐vinyl acetate) Polymers 0.000 description 1
- 229920000148 Polycarbophil calcium Polymers 0.000 description 1
- 206010065159 Polychondritis Diseases 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 208000007048 Polymyalgia Rheumatica Diseases 0.000 description 1
- KCLANYCVBBTKTO-UHFFFAOYSA-N Proparacaine Chemical compound CCCOC1=CC=C(C(=O)OCCN(CC)CC)C=C1N KCLANYCVBBTKTO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102220630210 Protein amnionless_R24E_mutation Human genes 0.000 description 1
- 102220630212 Protein amnionless_R30E_mutation Human genes 0.000 description 1
- 206010037596 Pyelonephritis Diseases 0.000 description 1
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 1
- 101001076459 Rattus norvegicus Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 description 1
- 241000219061 Rheum Species 0.000 description 1
- 208000025747 Rheumatic disease Diseases 0.000 description 1
- 235000004443 Ricinus communis Nutrition 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 1
- 238000011579 SCID mouse model Methods 0.000 description 1
- 241001180873 Saposhnikovia divaricata Species 0.000 description 1
- 208000034189 Sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 241000252141 Semionotiformes Species 0.000 description 1
- 239000004783 Serene Substances 0.000 description 1
- 241000705082 Sialia Species 0.000 description 1
- UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M Sodium bicarbonate-14C Chemical compound [Na+].O[14C]([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 208000005400 Synovial Cyst Diseases 0.000 description 1
- 201000009594 Systemic Scleroderma Diseases 0.000 description 1
- 206010042953 Systemic sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 208000001106 Takayasu Arteritis Diseases 0.000 description 1
- 240000004584 Tamarindus indica Species 0.000 description 1
- 235000004298 Tamarindus indica Nutrition 0.000 description 1
- 102100024554 Tetranectin Human genes 0.000 description 1
- 229920002807 Thiomer Polymers 0.000 description 1
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 description 1
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 108060008683 Tumor Necrosis Factor Receptor Proteins 0.000 description 1
- 208000035868 Vascular inflammations Diseases 0.000 description 1
- 101710123661 Venom allergen 5 Proteins 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 235000009754 Vitis X bourquina Nutrition 0.000 description 1
- 235000012333 Vitis X labruscana Nutrition 0.000 description 1
- 240000006365 Vitis vinifera Species 0.000 description 1
- 235000014787 Vitis vinifera Nutrition 0.000 description 1
- 241000282485 Vulpes vulpes Species 0.000 description 1
- 208000000208 Wet Macular Degeneration Diseases 0.000 description 1
- 229910021536 Zeolite Inorganic materials 0.000 description 1
- WMVSVUVZSYRWIY-UHFFFAOYSA-N [(4-benzoyloxyiminocyclohexa-2,5-dien-1-ylidene)amino] benzoate Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(=O)ON=C(C=C1)C=CC1=NOC(=O)C1=CC=CC=C1 WMVSVUVZSYRWIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 125000000218 acetic acid group Chemical group C(C)(=O)* 0.000 description 1
- 208000013633 acquired hemophilia Diseases 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 1
- 239000000783 alginic acid Substances 0.000 description 1
- 229960001126 alginic acid Drugs 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- BHELZAPQIKSEDF-UHFFFAOYSA-N allyl bromide Chemical compound BrCC=C BHELZAPQIKSEDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 206010002022 amyloidosis Diseases 0.000 description 1
- UIERETOOQGIECD-ARJAWSKDSA-N angelic acid Chemical compound C\C=C(\C)C(O)=O UIERETOOQGIECD-ARJAWSKDSA-N 0.000 description 1
- 238000002583 angiography Methods 0.000 description 1
- 210000001557 animal structure Anatomy 0.000 description 1
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 1
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000001098 anti-algal effect Effects 0.000 description 1
- 229940124347 antiarthritic drug Drugs 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000011230 antibody-based therapy Methods 0.000 description 1
- 239000000729 antidote Substances 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 1
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 1
- 229940072107 ascorbate Drugs 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- 230000003376 axonal effect Effects 0.000 description 1
- MQTOSJVFKKJCRP-BICOPXKESA-N azithromycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](C)C(=O)O[C@@H]([C@@]([C@H](O)[C@@H](C)N(C)C[C@H](C)C[C@@](C)(O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@H](C[C@@H](C)O2)N(C)C)O)[C@H]1C)(C)O)CC)[C@H]1C[C@@](C)(OC)[C@@H](O)[C@H](C)O1 MQTOSJVFKKJCRP-BICOPXKESA-N 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229940125717 barbiturate Drugs 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 229960000686 benzalkonium chloride Drugs 0.000 description 1
- CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N benzyl(dimethyl)azanium;chloride Chemical compound [Cl-].C[NH+](C)CC1=CC=CC=C1 CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000397 bevacizumab Drugs 0.000 description 1
- 125000002619 bicyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 210000000941 bile Anatomy 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 208000002352 blister Diseases 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 230000036760 body temperature Effects 0.000 description 1
- 229910021538 borax Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 1
- 210000005252 bulbus oculi Anatomy 0.000 description 1
- DQXBYHZEEUGOBF-UHFFFAOYSA-N but-3-enoic acid;ethene Chemical compound C=C.OC(=O)CC=C DQXBYHZEEUGOBF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000005251 capillar electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- NHWZQIYTQZEOSJ-UHFFFAOYSA-N carbonic acid;phosphoric acid Chemical compound OC(O)=O.OP(O)(O)=O NHWZQIYTQZEOSJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 238000005341 cation exchange Methods 0.000 description 1
- 238000000423 cell based assay Methods 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000006727 cell loss Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 238000012054 celltiter-glo Methods 0.000 description 1
- 230000007541 cellular toxicity Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000002490 cerebral effect Effects 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003161 choroid Anatomy 0.000 description 1
- 229930016911 cinnamic acid Natural products 0.000 description 1
- 235000013985 cinnamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000011260 co-administration Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 1
- 230000024203 complement activation Effects 0.000 description 1
- 230000004540 complement-dependent cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 150000001945 cysteines Chemical class 0.000 description 1
- UQHKFADEQIVWID-UHFFFAOYSA-N cytokinin Natural products C1=NC=2C(NCC=C(CO)C)=NC=NC=2N1C1CC(O)C(CO)O1 UQHKFADEQIVWID-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004062 cytokinin Substances 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 1
- 230000006735 deficit Effects 0.000 description 1
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 1
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 1
- YSMODUONRAFBET-UHFFFAOYSA-N delta-DL-hydroxylysine Natural products NCC(O)CCC(N)C(O)=O YSMODUONRAFBET-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 1
- 229910052805 deuterium Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 125000004386 diacrylate group Chemical group 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- RWYFURDDADFSHT-RBBHPAOJSA-N diane Chemical compound OC1=CC=C2[C@H]3CC[C@](C)([C@](CC4)(O)C#C)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1.C1=C(Cl)C2=CC(=O)[C@@H]3CC3[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@@](C(C)=O)(OC(=O)C)[C@@]1(C)CC2 RWYFURDDADFSHT-RBBHPAOJSA-N 0.000 description 1
- 150000001993 dienes Chemical class 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- HNPSIPDUKPIQMN-UHFFFAOYSA-N dioxosilane;oxo(oxoalumanyloxy)alumane Chemical compound O=[Si]=O.O=[Al]O[Al]=O HNPSIPDUKPIQMN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KPUWHANPEXNPJT-UHFFFAOYSA-N disiloxane Chemical class [SiH3]O[SiH3] KPUWHANPEXNPJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SDCJMBBHNJPYGW-UHFFFAOYSA-L disodium;hydrogen carbonate;chloride Chemical compound [Na+].[Na+].Cl.[O-]C([O-])=O SDCJMBBHNJPYGW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- MOTZDAYCYVMXPC-UHFFFAOYSA-N dodecyl hydrogen sulfate Chemical compound CCCCCCCCCCCCOS(O)(=O)=O MOTZDAYCYVMXPC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940043264 dodecyl sulfate Drugs 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- 239000008151 electrolyte solution Substances 0.000 description 1
- 239000003974 emollient agent Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 210000001163 endosome Anatomy 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- YSMODUONRAFBET-UHNVWZDZSA-N erythro-5-hydroxy-L-lysine Chemical compound NC[C@H](O)CC[C@H](N)C(O)=O YSMODUONRAFBET-UHNVWZDZSA-N 0.000 description 1
- BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N ethenylcyclopentane Chemical compound C=CC1CCCC1 BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SUPCQIBBMFXVTL-UHFFFAOYSA-N ethyl 2-methylprop-2-enoate Chemical compound CCOC(=O)C(C)=C SUPCQIBBMFXVTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- STVZJERGLQHEKB-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol dimethacrylate Substances CC(=C)C(=O)OCCOC(=O)C(C)=C STVZJERGLQHEKB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 1
- 239000010419 fine particle Substances 0.000 description 1
- FEBLZLNTKCEFIT-VSXGLTOVSA-N fluocinolone acetonide Chemical compound C1([C@@H](F)C2)=CC(=O)C=C[C@]1(C)[C@]1(F)[C@@H]2[C@@H]2C[C@H]3OC(C)(C)O[C@@]3(C(=O)CO)[C@@]2(C)C[C@@H]1O FEBLZLNTKCEFIT-VSXGLTOVSA-N 0.000 description 1
- 229960001347 fluocinolone acetonide Drugs 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005558 fluorometry Methods 0.000 description 1
- 230000003325 follicular Effects 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 238000012239 gene modification Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000005017 genetic modification Effects 0.000 description 1
- 230000030414 genetic transfer Effects 0.000 description 1
- 235000013617 genetically modified food Nutrition 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 1
- 150000004820 halides Chemical class 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000011132 hemopoiesis Effects 0.000 description 1
- 239000008241 heterogeneous mixture Substances 0.000 description 1
- KUQWZSZYIQGTHT-UHFFFAOYSA-N hexa-1,5-diene-3,4-diol Chemical compound C=CC(O)C(O)C=C KUQWZSZYIQGTHT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000487 histidyl group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C([H])=N1 0.000 description 1
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 description 1
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-M hydrogensulfate Chemical compound OS([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 235000019447 hydroxyethyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 125000004029 hydroxymethyl group Chemical group [H]OC([H])([H])* 0.000 description 1
- 239000001863 hydroxypropyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010977 hydroxypropyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000001866 hydroxypropyl methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920003088 hydroxypropyl methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 235000010979 hydroxypropyl methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N hydroxypropyl methyl cellulose Chemical compound OC1C(O)C(OC)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(OC2C(C(O)C(OC3C(C(O)C(O)C(CO)O3)O)C(CO)O2)O)C(CO)O1 UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000001421 hyperglycemia Diseases 0.000 description 1
- 230000007954 hypoxia Effects 0.000 description 1
- KTUFNOKKBVMGRW-UHFFFAOYSA-N imatinib Chemical compound C1CN(C)CCN1CC1=CC=C(C(=O)NC=2C=C(NC=3N=C(C=CN=3)C=3C=NC=CC=3)C(C)=CC=2)C=C1 KTUFNOKKBVMGRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002411 imatinib Drugs 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000008798 inflammatory stress Effects 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 238000009434 installation Methods 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 229960001388 interferon-beta Drugs 0.000 description 1
- 229940074383 interleukin-11 Drugs 0.000 description 1
- 230000004410 intraocular pressure Effects 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 230000000302 ischemic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012948 isocyanate Substances 0.000 description 1
- 150000002513 isocyanates Chemical class 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 229940039717 lanolin Drugs 0.000 description 1
- 235000019388 lanolin Nutrition 0.000 description 1
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 229960004393 lidocaine hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- YECIFGHRMFEPJK-UHFFFAOYSA-N lidocaine hydrochloride monohydrate Chemical compound O.[Cl-].CC[NH+](CC)CC(=O)NC1=C(C)C=CC=C1C YECIFGHRMFEPJK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000003712 lysosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000001868 lysosomic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 150000002734 metacrylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- IQSHMXAZFHORGY-UHFFFAOYSA-N methyl prop-2-enoate;2-methylprop-2-enoic acid Chemical compound COC(=O)C=C.CC(=C)C(O)=O IQSHMXAZFHORGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 230000000116 mitigating effect Effects 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- ODLHGICHYURWBS-FOSILIAISA-N molport-023-220-444 Chemical compound CC(O)COC[C@@H]([C@@H]([C@H]([C@@H]1O)O)O[C@@H]2O[C@H]([C@H](O[C@@H]3O[C@@H](COCC(C)O)[C@@H]([C@H]([C@@H]3O)O)O[C@@H]3O[C@@H](COCC(C)O)[C@@H]([C@H]([C@@H]3O)O)O[C@@H]3O[C@@H](COCC(C)O)[C@@H]([C@H]([C@@H]3O)O)O[C@@H]3O[C@@H](COCC(C)O)[C@@H]([C@H]([C@@H]3O)O)O3)[C@@H](O)[C@@H]2O)COCC(O)C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]3O[C@H]1COCC(C)O ODLHGICHYURWBS-FOSILIAISA-N 0.000 description 1
- BLYOHBPLFYXHQA-UHFFFAOYSA-N n,n-bis(prop-2-enyl)prop-2-enamide Chemical compound C=CCN(CC=C)C(=O)C=C BLYOHBPLFYXHQA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OVHHHVAVHBHXAK-UHFFFAOYSA-N n,n-diethylprop-2-enamide Chemical compound CCN(CC)C(=O)C=C OVHHHVAVHBHXAK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CNPHCSFIDKZQAK-UHFFFAOYSA-N n-prop-2-enylprop-2-enamide Chemical compound C=CCNC(=O)C=C CNPHCSFIDKZQAK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 230000014399 negative regulation of angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000006576 neuronal survival Effects 0.000 description 1
- 238000011587 new zealand white rabbit Methods 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 239000000574 octyl gallate Substances 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 210000001328 optic nerve Anatomy 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 230000036542 oxidative stress Effects 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000009054 pathological process Effects 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- 238000012510 peptide mapping method Methods 0.000 description 1
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012466 permeate Substances 0.000 description 1
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000002688 persistence Effects 0.000 description 1
- 229940066842 petrolatum Drugs 0.000 description 1
- 235000019271 petrolatum Nutrition 0.000 description 1
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 229940124531 pharmaceutical excipient Drugs 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- LFGREXWGYUGZLY-UHFFFAOYSA-N phosphoryl Chemical group [P]=O LFGREXWGYUGZLY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000036211 photosensitivity Effects 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 1
- 102000030769 platelet activating factor receptor Human genes 0.000 description 1
- 230000004983 pleiotropic effect Effects 0.000 description 1
- 229960000502 poloxamer Drugs 0.000 description 1
- 229920000771 poly (alkylcyanoacrylate) Polymers 0.000 description 1
- 229920000962 poly(amidoamine) Polymers 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 229920000058 polyacrylate Polymers 0.000 description 1
- 208000019764 polyarticular juvenile idiopathic arthritis Diseases 0.000 description 1
- 229950005134 polycarbophil Drugs 0.000 description 1
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 description 1
- 229920002338 polyhydroxyethylmethacrylate Polymers 0.000 description 1
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002685 polymerization catalyst Substances 0.000 description 1
- 230000000379 polymerizing effect Effects 0.000 description 1
- 208000005987 polymyositis Diseases 0.000 description 1
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 1
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 1
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 1
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 229920001299 polypropylene fumarate Polymers 0.000 description 1
- 229920001296 polysiloxane Polymers 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 229960003981 proparacaine Drugs 0.000 description 1
- 235000010232 propyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004405 propyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 229960003415 propylparaben Drugs 0.000 description 1
- 230000004845 protein aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 230000005588 protonation Effects 0.000 description 1
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 1
- 238000010526 radical polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002708 random mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 208000009169 relapsing polychondritis Diseases 0.000 description 1
- 230000003252 repetitive effect Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 102000029752 retinol binding Human genes 0.000 description 1
- 108091000053 retinol binding Proteins 0.000 description 1
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- 230000000552 rheumatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000005070 ripening Effects 0.000 description 1
- 102220290783 rs1553255533 Human genes 0.000 description 1
- 235000012045 salad Nutrition 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 238000004088 simulation Methods 0.000 description 1
- 238000009097 single-agent therapy Methods 0.000 description 1
- WBHQBSYUUJJSRZ-UHFFFAOYSA-M sodium bisulfate Chemical compound [Na+].OS([O-])(=O)=O WBHQBSYUUJJSRZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229910000342 sodium bisulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960002218 sodium chlorite Drugs 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 235000011083 sodium citrates Nutrition 0.000 description 1
- 235000011121 sodium hydroxide Nutrition 0.000 description 1
- 239000001540 sodium lactate Substances 0.000 description 1
- 235000011088 sodium lactate Nutrition 0.000 description 1
- 229940005581 sodium lactate Drugs 0.000 description 1
- 229960001922 sodium perborate Drugs 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011008 sodium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 235000010339 sodium tetraborate Nutrition 0.000 description 1
- SRWFBFUYENBCGF-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrochloride Chemical compound [Na+].Cl.[Cl-] SRWFBFUYENBCGF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- YKLJGMBLPUQQOI-UHFFFAOYSA-M sodium;oxidooxy(oxo)borane Chemical compound [Na+].[O-]OB=O YKLJGMBLPUQQOI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000008247 solid mixture Substances 0.000 description 1
- 235000010199 sorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004334 sorbic acid Substances 0.000 description 1
- 229940075582 sorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 1
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 230000010473 stable expression Effects 0.000 description 1
- 238000003153 stable transfection Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000011272 standard treatment Methods 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 description 1
- 230000003797 telogen phase Effects 0.000 description 1
- 230000016853 telophase Effects 0.000 description 1
- 206010043207 temporal arteritis Diseases 0.000 description 1
- 230000002123 temporal effect Effects 0.000 description 1
- 229960002372 tetracaine Drugs 0.000 description 1
- GKCBAIGFKIBETG-UHFFFAOYSA-N tetracaine Chemical compound CCCCNC1=CC=C(C(=O)OCCN(C)C)C=C1 GKCBAIGFKIBETG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010013645 tetranectin Proteins 0.000 description 1
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 description 1
- 150000003568 thioethers Chemical class 0.000 description 1
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 1
- DHCDFWKWKRSZHF-UHFFFAOYSA-L thiosulfate(2-) Chemical compound [O-]S([S-])(=O)=O DHCDFWKWKRSZHF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 231100000820 toxicity test Toxicity 0.000 description 1
- 230000002110 toxicologic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000027 toxicology Toxicity 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- WBYWAXJHAXSJNI-VOTSOKGWSA-N trans-cinnamic acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C1=CC=CC=C1 WBYWAXJHAXSJNI-VOTSOKGWSA-N 0.000 description 1
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 230000005945 translocation Effects 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 230000008733 trauma Effects 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BSVBQGMMJUBVOD-UHFFFAOYSA-N trisodium borate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]B([O-])[O-] BSVBQGMMJUBVOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229960000281 trometamol Drugs 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 102000003298 tumor necrosis factor receptor Human genes 0.000 description 1
- 231100000588 tumorigenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000000381 tumorigenic effect Effects 0.000 description 1
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 1
- 230000008728 vascular permeability Effects 0.000 description 1
- 210000005166 vasculature Anatomy 0.000 description 1
- 239000002525 vasculotropin inhibitor Substances 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 239000004034 viscosity adjusting agent Substances 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
- 238000002424 x-ray crystallography Methods 0.000 description 1
- 239000000230 xanthan gum Substances 0.000 description 1
- 229920001285 xanthan gum Polymers 0.000 description 1
- 235000010493 xanthan gum Nutrition 0.000 description 1
- 229940082509 xanthan gum Drugs 0.000 description 1
- 239000010457 zeolite Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
- C07K16/244—Interleukins [IL]
- C07K16/248—IL-6
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0048—Eye, e.g. artificial tears
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
- A61P27/02—Ophthalmic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/40—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against enzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/71—Decreased effector function due to an Fc-modification
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Ophthalmology & Optometry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Obesity (AREA)
- Hematology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
يتعلق هذا الاختراع بأجسام مضادة محسنة ضد إنترلوكين –6 Interleukin-6 (IL-6) وباستخدامات هذه الأجسام المضادة في معالجة أمراض مرتبطة بـ IL-6، مثل أمراض العين مثل الأوديما البقعية السكرية diabetic macular edema. انظر الشكل 16أ.
Description
أجسام مضادة محسنة ضد إنترلوكين-6 (IL-6) IMPROVED IL-6 ANTIBODIES الوصف الكامل خلفية الاختراع يتعلق مجال هذا الاختراع بإنترلوكين-6 Interleukin-6 11-6. ويشكل أكثر تحديداً يتعلق مجال هذا الاختراع بمعزّلات 1-6 واستخداماتها في معالجة الأمراض Jie أمراض العين. إن إنترلوكين-6 IL-6 هو سيتوكين متعدد النمط الظاهري pleiotropic cytokine له دور مسجل في الالتهابات dinflammation تكوّن WA الدم Ag hematopoiesis الأوعية مأوعصععمتعدة؛ تمايز cell differentiation WAY وبقاء الخلايا العصبية .neuronal survival ويتعلق الاختراع الحالي بأجسام مضادة محسنة ضد IL-6 واستخداماتها. ويكشف calla براءة الاختراع الدولي رقم 2014/074905 عن مولدات المضاد IL-6 antagonists التي تكون محددة للارتباط بالموقع ]1 لل IL-6 وطرق لاستخدام هذه المثبطات لعلاج 0 أمراض ذات صلة باذ 11-6. ويكشف طلب براءة الاختراع الدولي رقم 2007/076927 عن أجسام مضادة ل IL-6 تتضمن منطقة متغيرة للجسم المضاد التي تمنع IL-6 من الارتباط ب 0130ع» وكذلك بتراكيب وطرق لعلاج yal jal ذات صلة باذ 11-6 أساسها مولدات المضاد JL-6 ويكشف طلب براءة الاختراع الدولي رقم 2008/144763 عن أجسام مضادة وشدفات منها 5 ذات ارتباط نوعي لل IL-6 وطرق للتحري عن الأمراض أو الاضطرابات المرتبطة باذ 11-6 وطرق للحد من أو علاج الأمراض والاضطرابات المرتبطة بال 11-6 عن طريق اعطاء الأجسام المضادة المذكورة أو شدفات منها. وتكشف المراجع 690-700 ,249 Europ J Biochem )1997( تملمكل» Finch (2011) J Mol 7917 ,13101411 وطلب براءة الاختراع الدولي رقم 2004/045507 عن أجسام مضادة ل IL-6 0 واستخداماتها العلاجية. وتكشف المراجع براءة الاختراع الأمريكية رقم بي1 6277375 Rudikoff Chien «Winkler (2000), J Immunol 165, 4505-4514 ¢«(1982), PNAS 79, 1979-1983 PNAS 86, 5532-5536 )1989( و 1013-1020 ,30 Panka (1993) Mol Immunol عن توليد وتعديل الأجسام المضادة.
الوصف العام للاختراع يتعلق هذا الاختراع بأجسام مضادة ل 11-6 وشدفات Die) شدفات مرتبطة بمولد المضاد (antigen-binding fragments أو مشتقات منها بالإضافة إلى أحماض نووية nucleic acids تحمل شيفرة الأجسام المضادة ل 17-6 وشدفاتها. ويتعلق هذا الاختراع أيضاً باستخدامات هذه الأجسام المضادة؛ الشدفات أو المشتقات. ويمكن استخدام هذه الأجسام المضادة وشدفاتها أو مشتقاتها على سبيل المثال في معالجة أمراض مقترنة ب IL-6 وفي هذه التجسيدات؛ يمكن أن يرتبط (مثلاً يرتبط بشكل نوعي) الجسم المضادء؛ الشدفة أو المشتقة منه مع 17-6 على سبيل المثال IL-6 بشري. وفي هذه التجسيدات» يمكن أن يرتبط (مثلاً يرتبط بشكل نوعي) الجسم المضاد؛ الشدفة أو المشتقة منه مع الموقع ]1 في 11-6 Je) سبيل المثال الموقع ]1 في IL-6 بشري).
ويتعلق الاختراع الحالي بجسم مضاد أو شدفة مرتبطة بمولد مضاد منه تشتمل على منطقة متغيرة للسلسلة الثقيلة heavy chain variable region تشتمل على السياق برقم تعريف: 37 ومنطقة متغيرة للسلسلة الخفيفة light chain variable region تشتمل على السياق برقم تعريف: 38. ويتعلق الاختراع الحالي بجسم مضاد أو شدفة مرتبطة بمولد مضاد تشتمل على سياق للسلسلة الثقيلة يشتمل على سياق برقم تعريف: 41 وسياق للسلسلة الخفيفة يشتمل على سياق برقم تعريف: 42. ويتعلق
5 الاختراع الحالي بشدفة مرتبطة بمولد Fab antigen-binding fragment alias تشتمل على سياق للسلسلة الثقيلة يشتمل على السياق برقم تعريف: 39 أو السياق برقم تعريف: 54 وسياق للسلسلة الخفيفة يشتمل على السياق برقم تعريف: 42. ويتعلق الاختراع بجسم مضاد أو شدفة مرتبطة بمولد مضاد تشتمل على سياق للسلسلة الثقيلة يشتمل على سياق برقم تعريف: 47 وسياق للسلسلة الخفيفة يشتمل على سياق برقم تعريف: 42.
وفي تجسيدات معينة؛ يشتمل الجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد منه على منطقة تحديد تكميلية متغيرة ثقيلة السلسلة 1 variable heavy complementarity-determining VH 00181 region تشتمل على سياق برقم تعريف: 31 VH CDR2 تشتمل على سياق برقم تعريف: 32 و VH CDR3 تشتمل على سياق برقم تعريف: 33.
وفي تجسيدات؛ يشتمل الجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد على سياق منطقة
5 متغيرة للسلسلة الثقيلة يشتمل على السياق برقم تعريف: 37. وفي تجسيدات؛ يشتمل الجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد على سياق منطقة متغيرة للسلسلة الثقيلة يشتمل على السياق برقم تعريف: 37.
وفي تجسيدات؛ يشتمل الجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد على سياق سلسلة ثقيلة يشتمل على السياق برقم تعريف: 41. وفي تجسيدات؛ يشتمل الجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد على سياق سلسلة ALE يتكون من السياق برقم تعريف: 41. وفي تجسيدات معينة؛ يكون للجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد منه ألفة محسنة ل IL-6 البشري و/أو فعالية محسنة بالمقارنة مع 881-029 أو شدفة منه. وفي تجسيدات معينة؛ يكون للجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد منه ألفة محسنة ل 11-6 البشري و/أو فعالية محسنة بالمقارنة مع الجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد التي تشتمل على VH CDRI تشتمل على السياق برقم تعريف: 4؛ VH CDR2 تشتمل على السياق برقم تعريف: 5؛ واختيارياً 00183 711 تشتمل على السياق برقم تعريف: 6. (By تجسيدات معينة؛ يكون للجسم 0 المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد die ألفة محسنة ل 11-6 البشري و/أو فعالية محسنة بالمقارنة مع الجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد التي تشتمل على سياق منطقة متغيرة للسلسلة الثقيلة يشتمل على أو يتكون من السياق برقم تعريف: 17. وفي تجسيدات معينة؛ يكون للجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد die ألفة محسنة ل 11-6 البشري و/أو فعالية محسنة بالمقارنة مع الجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد التي تشتمل على السياق برقم تعريف: 5 24. وفي تجسيدات معينة؛ يكون للجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد منه ألفة محسنة ل 11-6 البشري و/أو فعالية محسنة بالمقارنة مع الجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد التي تشتمل على سياق منطقة متغيرة للسلسلة الثقيلة يشتمل على أو يتكون من السياق برقم تعريف: 11. Ay تجسيدات؛ يشتمل الجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد على سياقات ل 0 881030 أو 281-031 كما ذكر في الجدول 4. وفي تجسيدات؛ يشتمل الجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد على حقول J 281-030 أو 281-031 كما وضح في الشكل 15 Sie) حقل واحد أو أكثر لذ لع «CDR1 قعص «CH2 ¢hinge «CH1 «FR4 «CDR3 ¢FR3 «CDR2 و CH3 في سياق السلسلة الثقيلة 5 «CDR2 (FR2 «CDR1 «FRI si/ قعص قعاص <FR4 و CK في سياق السلسلة الخفيفة). وفي تجسيدات؛ يشتمل الجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد 5 على سلسلة ثقيلة وسلسلة خفيفة. وفي تجسيدات؛ تكون السلاسل الثقيلة والخفيفة مرتبطة برابطة ثنائي كبريتيد disulfide bond واحدة أو أكثر. By تجسيدات؛ يكون الجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد عبارة عن Fab وفي تجسيدات؛ يكون الجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد عبارة عن scFv وفي تجسيدات؛ يكون الجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد عبارة عن scFv «F(ab')2 <Fab' «Fab أو شدفة Fv
IL-6 تجسيدات؛ يكون للجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد ألفة متزايدة ل Ay بشري و/أو فعالية كبيرة مقارنة بالجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد المشتمل/المشتملة أو سياقات جسم مضاد موصوف في طلب براءة EBI029 على سياق مقابل واحد أو أكثر ل الاختراع الدولي رقم 2014/074905. وفي تجسيدات»؛ يكون للجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد ألفة متزايدة ل 11-6 البشري و/أو lad كبيرة مقارنة بتوسيليزوماب tocilizumab الجدول 4: لمحة dale عن السياقات (EBI-029 581-030 و EBI-031 ١ Chall سياق برقم | السياق تعريف : سياق سياق برق | QVQLVQSGAE 7100055767 | SCKASGYALS
NYLIEWVRQA PGQGLEWMGY ITPGSGTINY | © <= 1
AQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED | .(تعريف: 29
TAVYYCARSR ~~ WDPLYYYALE _ YWGQGTTVTV 1 HC
SSASTKGPSV FPLAPCSRST SESTAALGCL (IgG2) aa
VKDYFPEPVT ~~ VSWNSGALTS GVHTFPAVLQ
SSGLYSLSSV VTVPSSNFGT QTYTCNVDHK
PSNTKVDKTV ~~ ERKCCVECPP ~~ CPAPPVAGPS
VFLFPPKPKD TLMISRTPEV TCVVVDVSHE
DPEVQFNWYV ~~ DGVEVHNAKT KPREEQFNST
FRVVSVLTVV ~~ HQDWLNGKEY KCKVSNKGLP
APIEKTISKT KGQPREPQVY TLPPSREEMT
KNQVSLTCLV ~~ KGFYPSDIAV ~~ EWESNGQPEN
NYKTTPPMLD ~~ SDGSFFLYSK ~~ LTVDKSRWQQ
GNVFSCSVMH EALHNHYTQK SLSLSPGK
QVQLVQSGAE ~~ VKKPGSSVKV ~ SCKASGYALS | برق 5. [ EBL-029
NYLIEWVRQA PGQGLEWMGYV ITPGSGTINY | © “= |HC -
AQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED | ه311 أتعريف:
TAVYYCARSR ~~ WDPLYYYALE YWGQGTTVTV 10
SSASTKGPSV FPLAPCSRST SESTAALGCL
VKDYFPEPVT ~~ VSWNSGALTS GVHTFPAVLQ
SSGLYSLSSV VTVPSSNFGT QTYTCNVDHK
PSNTKVDKTV ~~ ERKCCVECPP ~~ CPAPPVAGPS
VFLFPPKPKD TLMISRTPEV TCVVVDVSHE
DPEVQFNWYV ~~ DGVEVHNAKT KPREEQFNST
FRVVSVLTVV ~~ AQDWLNGKEY KCKVSNKGLP
APIEKTISKT KGQPREPQVY TLPPSREEMT
KNQVSLTCLV ~~ KGFYPSDIAV ~~ EWESNGQPEN
NYKTTPPMLD ~~ SDGSFFLYSK ~~ LTVDKSRWQQ
GNVFSCSVMH EALHNHYTQK SLSLSPGK
سياق برقم | السياق ial تعريف: DIVMTQSPDS LAVSLGERAT INCRASESVD | 5, مدأة سباق
NYGIPEMNWY QQKPGQPPKL LIYAASNRGS | © ©~ ب GVPDRFSGSG 105 SLQAEDVAVY | (|تعريف: 0-29
YCQQSEEVPL TFGQGTKLEI KRTVAAPSVF 12 LC aa
IFPPSDEQLK SGTASVVCLL NNFYPREAKV
QWKVDNALQS GNSQESVTEQ DSKDSTYSLS
STLTLSKADY EKHKVYACEV ~~ THQGLSSPVT
KSENRGEC
QVQLVQSGAE ~~ VKKPGSSVKV ~~ SCKASGYALS | سياق سياق برق
NYLIEWVRQA PGQGLEWMGY ITPGSGTINY | © <= 1
AQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED | |تعريف: EBI-029
TAVYYCARSR ~~ WDPLYYYALE 77007 24 (IgGD)
SSASTKGPSV FPLAPSSKST SGGTAALGCL Fab HC
VKDYFPEPVT ~~ VSWNSGALTS GVHTFPAVLQ aa
SSGLYSLSSV VTVPSSSLGT QTYICNVNHK
PSNTKVDKKV EPKSCDKTHT
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYALSNYLIE سياق سياق برة
WVRQAPGQGLEWMGVITPGSGTINY AQKFQGRVTIT | 7 ©* -
ADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSRWDPLYYY | . (تعريف: EBI029 7 VH aa
ALEY 17
WGQGTTVTVSS
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRASESVDNYGIPEM | 4 مدأة سياة
NWYQO ياق ياق برقم
KPGQPPKLLIY AASNRGSGVPDRFSGSGSGTDFTLTIS thy | EBI-029
SLQAE 1 8 VL aa
DVAVYYCQQSEEVPLTFGQGTKLEIKRTV
GYALSNYLIE ا EBI-029 سيا لاق برام HC 4 تعريف: CDR1
VITPGSGTIN ا EBI-029 سيا اق برام HC تعريف: CDR2
SRWDPLYYYALEY ا EBI-029 سيا لاق برام HC 6 تعريف: CDR3
RASESVDNYGIPEMN برقم Glu | EBLO29 > 3 ديم م ا 7 تعريف: AASNRGS ا EBI-029 سيا برثم S| Cc دون 8 تعريف: QQSEEVPLT ة 2. | EBI-029
FX 3م علق 9 تعريف:
سياق برقم | السياق ١ Call : تعريف QVQLVQSGAE ~~ VKKPGSSVKV | SCKASGYVLP | ساة وق "
NYLIEWVRQA PGQGLEWMGVTTPGGGTINY | £2 ©° 7
AQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED | |تعريف: EBL-030
TAVYYCARSRWDPLYYYALE YWGQGTTVTV 1 HC
SSASTKGPSV FPLAPCSRST SESTAALGCL (IgG2) aa
VKDYFPEPVT ~~ VSWNSGALTS GVHTFPAVLQ
SSGLYSLSSV ~~ VTVPSSNFGT ~~ QTYTCNVDHK
PSNTKVDKTV 7 ERKCCVECPP ~~ CPAPPVAGPS
VFLFPPKPKD TLMISRTPEV TCVVVDVSHE
DPEVQFNWYV ~~ DGVEVHNAKT KPREEQFENST
FRVVSVLTVV ~~ HQDWINGKEY KCKVSNKGLP
APIEKTISKT KGQPREPQVY TLPPSREEMT
KNQVSLTCLV ~~ KGFYPSDIAV ~~ EWESNGQPEN
NYKTTPPMLD SDGSFFLYSK ~~ LTVDKSRWQQ
GNVFSCSVMH EALHNHYTQK SLSLSPGK
DIVMTQSPDS LAVSLGERAT INCRASESVD | ١ + ١, سياق سياق برقم
NYGIPFMNWY | QQKPGQPPKL ~~ LIYAASNRGS
GVPDRFSGSG SGTDFTLTIS SLQAEDVAVY | (|تعريف: 01-0
YCQQSEEVPLTFGQGTKLEI KRTVAAPSVF 1 LC aa
IFPPSDEQLK SGTASVVCLL NNEYPREAKV
QWKVDNALQS GNSQESVTEQ DSKDSTYSLS
STLTLSKADY EKHKVYACEV ~~ THQGLSSPVT
KSENRGEC
QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV ~~ SCKASGYVLE | سياق سياق برق
NYLIEWVRQA PGQGLEWMGVTTPGGGTINY
AQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED | (|تعريف: EBL-030
TAVYYCARSR __ WDPLYYYALE _ YWGQGTTVTV 39 (IgGD)
SSASTKGPSV FPLAPSSKST SGGTAALGCL Fab HC
VKDYFPEPVT ~~ VSWNSGALTS GVHTFPAVLQ aa
SSGLYSLSSV VTVPSSSLGT QTYICNVNHK
PSNTKVDKKYV EPKSCDKTHT
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYVLPNYLIEW | مدأة ساة وق
VROQAPGQGLEWMGVTTPGGGTINY AQKFQGRVTITA | 7 7 ب 0185757 (تعريف: .| اه للا اخاطط د معفم تناح ص 1151551 تذ 60
LEYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTA su (1gG2)
ALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSS Fab HC
GLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKT aa
VERK
QVQLVQSGAE ~~ VKKPGSSVKV — SCKASGYVLE | سياق سياق برق
NYLIEWVRQA PGQGLEWMGY TTPGGGTINY
AQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED | .|تعريف: EBL-030
TAVYYCARSR WDPLYYYALE YWGQGTTVTV SS 37 VH aa
الوصف | Gla برقم | السياق تعريف : سياق سباق برق | DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRASESVDNYGIPEM NWYQQKPGQPPKLLIY 0 (|تعريف: | AASNRGSGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVY YCOQSEEVPLTFG 38 VL aa QGTKLEIKRTV GYVLPNYLIE . EBI-030 HC سياق برقم ا CDR1 تعريف : 31 VITPGGGTIN . EBI-030 عم سياق برقم = CDR2 تعريف : 32 SRWDPLYYYALEY . EBI-030- He سياق برقم CDR3 تعريف : 33 glu | EBL030 برة RASESVDNYGIPEMN Oc CDRI برام تعريف : 34 EBI-030 ريا ة AASNRGS دورو Oc برام تعريف :
aL. | EBI-030 ة QQSEEVPLT وجو م | عاق برام تعريف : 36
Chall سياق برقم | السياق تعريف : سياق سياق برق | VKKPGSSVKV ~~ SCKASGYVLP 0701705045 : ا 2 | NYLIEWVRQA PGQGLEWMGV TTPGGGTINY AQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED | :Ciujs| EBFO3I TAVYYCARSR ~~ WDPLYYYALE 77007 7 IgG2 HC SSASTKGPSV FPLAPCSRST SESTAALGCL aa VKDYFPEPVT | VSWNSGALTS GVHTFPAVLQ SSGLYSLSSV VTVPSSNFGT QTYTCNVDHK PSNTKVDKTV ERKCCVECPP CPAPPVAGPS VFLFPPKPKD TLMISRTPEV TCVVVDVSHE DPEVQFNWYV ~~ DGVEVHNAKT KPREEQFNST FRVVSVLTVV ~~ AQDWLNGKEY KCKVSNKGLP APIEKTISKT KGQPREPQVY TLPPSREEMT KNQVSLTCLV ~~ KGFYPSDIAV ~~ EWESNGQPEN NYKTTPPMLD SDGSFFLYSK ~~ LTVDKSRWQQ GNVFSCSVMH EALHNHYTQK SLSLSPGK سياق 4 برق | QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYVLPNYLIEW VROQAPGQGLEWMGVTTPGGGTINY AQKFQGRVTITA | 7 7 - SCFV VH- | تعريف: DESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSRWDPLYYYA LEYWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQS 5 VL aa PDSLAVSLGERATINCRASESVDNYGIPFMNW YQQKP GQPPKLLIY AASNRGSGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSL QAEDVAVYYCQQSEEVPLTFGQGTKLEIKRTV سياق سباق برق | DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRASESVDNYGIPEM NWYQQKPGQPPKLLIYAASNRGSGVPDRFSGSGSGT 28 ©° : مآلا SFY | تعريف: | DFTLTISSLQAEDVAVYYCQQSEEVPLTFGQGTKLEIK RTVGGGGSGGGGSGGGGSQVQLVQSGAEVKKPGSS 53 VH aa VKVSCKASGYVLPNYLIEWVRQAPGQGLEWMGVTT PGGGTINYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSE DTAVYYCARSRWDPLYYYALEYWGQGTTVTVSS =Aa حمض أميني؛ —na حمض نووي؛ HC سلسلة ثقيلة؛ /1- سلسلة خفيفة؛ =VH المنطقة المتغيرة للسلسلة الثقيلة؛ =VL المنطقة المتغيرة للسلسلة الخفيفة ودمكن تقييم aN f المتزايدة و/أو الفعالية الكبيرة باستخدام الطرق الموصوفة هنا و/أو الطرق المعروفة بالتقنية. وفي تجسيدات؛ يتم تقييم الألفة باستخدام رنين البلازمون السطحي surface plasmon .SPR resonance وفي تجسيدات؛ يتم زيادة الألفة على الأقل بمقدار 1.5( 1.6( 1.81.7 3321.9 4 أضعاف. وفي تجسيدات؛ يتم زيادة الفعالية. وفي تجسيدات؛ يتم زيادة الفعالية تبعاً للانخفاض فى 0 التتركيز المثبط للنصف 1050 و/أو الانخفاض في التركيز المثبط بنسبة 790 1090 وفي
تجسيدات؛ يتم تخفيض 1650 بمقدار 5؛ 10( 20؛ 30؛ 40؛ أو 50 ضعف. وفي تجسيدات؛ يتم تخفيض 1050 بمقدار 50 ضعف. وفي تجسيدات؛ يتم تخفيض 1090 بمقدار 10 20 30 40 0» 60« 70« 80» 90 100 200« 300 400 أو 0 ضعف. وفي تجسيدات؛ يتم تخفيض 0 بمقدار يبلغ على الأقل 100 ضعف.
وفي تجسيدات؛ يتم خفض الفعالية» عن طريق مثلاً استخدام معايرة معروفة بالاسم التجاري HEK-Blue™ أو معايرة التكاثر T1165
1] تجسيدات؛ يثبّط الجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد تأشير مجاور-- Ag
6» مثلاً؛ كما تم تقييمها بناء على قيمة 1050 أو 1090 الناتجة بامستخدام معايرة HEK-Blue™ الموصوفة Sie cla باستخدام 1776 حر تركيزه 20 بيكو مولار.
وفي تجسيدات؛ يكون للجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد 1050 بقيمة تقل عن 47 بيكو مولار و/أو 1090 بقيمة تقل عن 4350 بيكو مولار. وفي تجسيدات؛ تقل قيمة 1050 عن 47 بيكو Ysa مثلاً تقل عن 40 30 20 10 5 4 3؛ 2؛ أو 1 بيكو مولار. وفي تجسيدات؛ تقل قيمة 1090 عن 4350 بيكو مولار» Nia تقل عن 4000 2000 1000 100« 0 40« 30 20؛ 15( أو 5 بيكو مولار. وفي تجسيدات يتم تقييم 1050 و/أو 1090 في معايرة
HEK-Blue™ 5 باستخدام IL-6 تركيزه 20 بيكو مولار.
وفي تجسيدات؛ يعيق الجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد الإنترلوكين IL-6 all ذي الفعالية الكبيرة مقارنة بتوسيليزوماب ctocilizumab مثلاً كما تم تقييمه بناء على قيم 0 التي تم الحصول عليها بمعايرة HEK-Blue™ باستخدام TL-6 تركيزه 20 بيكو مولار. وفي تجسيدات؛ يثبط الجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد الإنترلوكين 11-6 ذي الفعالية
0 الكبيرة بمقدار 900 ضعف مقارنة بتوسيليزوماب 0011203180. وفي تجسيدات؛ يكون الجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد عبارة عن 531-031 أو شدفة منه مرتبطة بمولد المضاد. وفي تجسيدات؛ يكون للجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد 1050 بقيمة تقل عن 15 بيكو Mie ¢ Noe يكون 1050 بقيمة قدرها 14.2 بيكو مولار لتثبيط 6-]1.
وفي تجسيدات؛ يعيق الجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد تأشير مقابل-- ]1
Me .6 5 كما تم تقييمها باستخدام معايرة HEK-Blue™ الموصوفة هناء Nie باستخدام IL-6 مفرط تركيزه 200 بيكو مولار. وفي تجسيدات؛ يثبّط الجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد تأشير 17-6 مفرط. Ag تجسيدات؛ Jif الجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة alge المضاد تأشير da jee IL-6 ذي الفعالية الكبيرة مقارنة بتوسيليزوماب Sie ctocilizumab بفعالية كبيرة بمقدار يزيد عن 900 ضعف مقارنة بتوسيليزوماب -tocilizumab وفي تجسيدات؛ يثبّط الجسم المضاد أو
0 الشدفة المرتبطة بمولد المضاد تأشير 11-6 المفرط الذي له 1050 بقيمة تقل عن 1 ميكرو مولار.
Ag تجسيدات؛ يثبّط الجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد تأشير IL-6 المفرط الذي له 0 بقيمة تقل عن 1 نانو مولار. وفي تجسيدات؛ يثبّط الجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد تأشير 11-6 المفرط الذي له 1050 بقيمة تقل عن 100 بيكو مولار أو تقل عن 50 بيكو مولار؛ Die له 1050 بقيمة تبلغ حوالي 15-14 بيكو مولار. وفي تجسيدات يكون الجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد عبارة عن 231-031 أو شدفة منه مرتبطة بمولد المضاد. Ag تجسيدات؛ يثبّط الجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد تأشير مجاور-- ]1 6 وتأشير مقابل-1-6. وفي تجسيدات؛ يكون الجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد فعالاً في إعاقة تأشير 1-6 في العين لمدة شهر واحد على (dB) شهرين على oJ 3 شهور على JY 4 0 شهور على (JW 5 شهور على الأقل؛ أو 6 شهور على الأقل؛ مثلاً بعد الإعطاء داخل الجسم ala وفي تجسيدات؛ يعيق الجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد تأشير IL-6 بنسبة 795 في العين لمدة شهر واحد على (JB) شهرين على JV) 3 شهور على BY) 4 شهور على الأقل» 5 شهور على الأقل؛ أو 6 شهور على الأقل؛ مثلاً بعد الإعطاء داخل الجسم ala وفي تجسيدات؛ يعيق الجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد تأشير IL-6 5 بنسبة 3/95( العين لمدة تبلغ حوالي 150 يوم. Ag تجسيدات؛ يكون للجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد آلفة متزايدة ل IL-6 البشري بالنسبة للجسم المضاد الضابط» مثلاً بالنسبة لب 281-029 أو شدفة منه. وفي تجسيدات؛ يكون للجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد لمضاد ألفة متزايدة ل 11-6 البشري بالنسبة للجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد المطابق بشكل آخر باستثناء أنه لا يشتمل على الحمض 0 الأميني المذكور الواحد أو الأكثر المختار من 728 (TST P30 و 055 بل يشتمل Yay من ذلك على حمض واحد أو أكثر من الأحماض الأمينية Die) 1 2 3 أو 4) مختار من 828؛ 530؛ 1 و 855. وفي تجسيدات؛ يتم زيادة الألفة على الأقل بمقدار 1.5ء 1.6 1.7 1.8 1.9 2 3 أو 4 أضعاف. Ag تجسيدات؛ يتم تقييم الألفة باستخدام رنين البلازمون السطحي SPR وفي تجسيدات؛ يكون للجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد فعالية كبيرة بالنسبة 5 للجسم المضاد الضابط» Sie بالنسبة لب 21029 أو شدفة منه. وفي تجسيدات؛ يكون للجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد لمضاد فعالية كبيرة بالنسبة للجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد المطابق بشكل آخر باستثناء أنه لا يشتمل على الحمض الأميني المذكور الواحد أو الأكثر المختار من 728 P30 751؛ و 055 بل يشتمل بدلاً من ذلك على حمض واحد أو أكثر من الأحماض الأمينية (مثلاً 1 2 3 أو 4) مختار من 828؛ ¢S30 151 و 555.
وفي تجسيدات؛ يتم زيادة الفعالية تبعاً للإنخفاض في التركيز المثبط للنصف 150 و/أو الانخفاض في التركيز المثبط بنسبة 790 1090. (Ag تجسيدات؛ يتم تخفيض IC50 بمقدار 5؛ 0 20« 30 40 أو 50 ضعف. وفي تجسيدات؛ يتم تخفيض 1050 بمقدار 50 ضعف. وفي تجسيدات؛ يتم تخفيض 1690 بمقدار 10 020 30 40 50 60« 70 80 90 100« 200« 300 400 أو 500 ضعف. وفي تجسيدات؛ يتم تخفيض 1290 بمقدار يبلغ على الأقل 100 Ag تجسيدات؛ يتم تقيم الفعالية باستخدام معايرة HEK-Blue™ أو معايرة التكاثر 11165. وفي تجسيدات؛ يكون للجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد 1050 بقيمة تقل عن 47 بيكو مولار و/أو 1090 بقيمة تقل عن 4350 بيكو مولار. وفي تجسيدات؛ تقل قيمة 1050 0 عن 47 بيكو مولار. مثلاً تقل عن 40؛ 30 20 10 5 44 3؛ 2؛ أو 1 بيكو مولار. وفي تجسيدات؛ تقل قيمة 1090 عن 4350 بيكو مولارء Nic تقل عن 4000 2000 1000« 100« 0 40« 30 20؛ 15( أو 5 بيكو مولار. وفي تجسيدات يتم تقييم 1050 و/أو 1090 في معايرة HEK-Blue™ باستخدام IL-6 تركيزه 20 بيكو مولار. وفي بعض التجسيدات؛ يشتمل الجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد على «V28 5 030 151؛ و G55 وبظهر الجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد ألفة محسنة لفعالية 11-6 البشري و/أو ألفة محسنة مقارنة بالجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد الجسم المضاد المطابقة بشكل AT باستثناء أنها تشتمل على 828» 530» 151 و 555. وفي تجسيدات؛ يشتمل الجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد الموصوف هنا أيضاً على منطقة متغيرة للسلسلة الخفيفة أو شدفة مرتبطة بالجسم المضاد منها تشتمل على منطقة تحديد تكميلية متغيرة خفيفة السلسلة 1 variable light complementarity-determining region «VL CDR2 «VL CDRI و .VL CDR3 وفي تجسيدات؛ تشتمل المنطقة 60181 VL على السياق برقم تعريف: 34 Jai dig المنطقة 00182 VL على السياق برقم تعريف: 35 وتشتمل المنطقة 00183 VL على سياق برقم تعريف: 36. وفي تجسيدات؛ يشتمل الجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد أيضاً على سياق المنطقة المتغيرة للسلسلة الخفيفة المشتمل على السياق برقم تعريف: 38. وفي تجسيدات؛ يتكون سياق المنطقة المتغيرة للسلسلة الخفيفة من سياق برقم تعريف: 38. Ay تجسيدات؛ يشتمل الجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد أيضاً على سياق السلسلة الخفيفة المشتمل على السياق برقم تعريف: 42. وفي تجسيدات؛ يتكوّن سياق السلسلة الخفيفة من السياق برقم تعريف: 42.
وفي تجسيدات؛ يشتمل الجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد على 1- المنطقة 0181© VH المشتملة على السياق برقم تعريف: 31؛ المنطقة VH CDR2 المشتملة على السياق برقم تعريف: 32؛ والمنطقة VH CDR3 المشتملة على السياق برقم تعريف: 33 و 2- المنطقة 00181 VL المشتملة على السياق برقم تعريف: ¢34 المنطقة 0011 VL المشتملة على السياق برقم تعريف: 35؛ والمنطقة VL CDR3 المشتملة على السياق برقم تعريف: 36. وفي تجسيدات؛ يكون الجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد عبارة عن الجسم المضاد «IgGl 1802 1803 أو 1804 أو شدفة منه. Ag تجسيدات؛ يكون الجسم المضاد أو 0 الشدفة المرتبطة بمولد المضاد عبارة عن الجسم المضاد 1501 أو 1802 أو شدفة منه. وفي تجسيدات؛ يكون الجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد عبارة عن Fab 1801 أو 18502 Fab وفي تجسيدات؛ يكون الجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد عبارة عن الجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد JgG2 وفي تجسيدات؛ يكون الجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد مصمماً لتقليل 5 فعالية JADCC التخلص منها. وفي تجسيدات؛ يكون الجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد عبارة عن جسم مضاد أحادي النسيلة أو شدفة منه مرتبطة بمولد المضاد. وفي تجسيدات؛ يكون الجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد عبارة عن جسم مضاد أحادي النسيلة بشري أو مؤنسن أو شدفة منه مرتبطة بمولد المضاد. وفي تجسيدات؛ يشتمل الجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة Alga المضاد على منطقة متغيرة للسلسلة الثقيلة مشتملة على سياق برقم تعريف: 37 ومنطقة متغيرة للسلسلة الخفيفة مشتملة على سياق برقم تعريف: 38. وفي تجسيدات؛ يشتمل الجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد على سياق السلسلة الثقيلة المشتمل على سياق برقم تعريف: 41 وسياق السلسلة الخفيفة المشتمل على سياق 5 برقم تعريف: 42. وفي تجسيدات؛ يشتمل الجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد على سياق السلسلة الثقيلة المشتمل على سياق برقم تعريف: 41 وبشكل اختياري سياق السلسلة الخفيفة المشتمل على سياق برقم تعريف: 42.
وفي تجسيدات؛ يشتمل الجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد على سياق السلسلة الثقيلة المكون من سياق برقم تعريف: 47 وسياق السلسلة الخفيفة المكون من سياق برقم تعريف: 42. وفي تجسيدات؛ يشتمل الجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد على سياق السلسلة الثقيلة المطابق لسياق برقم تعريف: 47 وسياق السلسلة الخفيفة المطابق لسياق برقم تعريف: 42. وفي أحد التجسيدات؛ يكون الجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد عبارة عن Fab وفي أحد التجسيدات؛ يكون الجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد عبارة عن Fab 61ع1. وفي أحد التجسيدات؛ يكون الجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد عبارة عن Fab يشتمل على سياق السلسلة الثقيلة المشتمل على سياق برقم تعريف: 39 وسياق السلسلة الخفيفة المشتمل على سياق برقم تعريف: 42. وفي أحد التجسيدات؛ يكون الجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد عبارة عن Fab يشتمل على سياق السلسلة الثقيلة المكون من سياق برقم تعريف: 39 وسياق السلسلة الخفيفة المكون من سياق برقم تعريف: 42. وفي أحد التجسيدات؛ يكون الجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد عبارة عن IgG2 Fab وفي أحد التجسيدات؛ يكون الجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد عبارة عن Fab يشتمل على سياق السلسلة الثقيلة المشتمل على سياق برقم تعريف: 54 وسياق السلسلة الخفيفة المشتمل على سياق برقم تعريف: 42. وفي أحد التجسيدات؛ يكون الجسم المضاد أو 0 الشدفة المرتبطة بمولد المضاد عبارة عن Fab يشتمل على سياق السلسلة الثقيلة المكون من سياق برقم تعريف: 54 وسياق السلسلة الخفيفة المكون من سياق برقم تعريف: 42. وفي بعض التجسيدات؛ يمكن أن يرتبط الجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد بواحد على الأقل من 824؛ 16227 7731 034؛ «S118 أو 7121 ل IL-6 البشري. وفي تجسيدات؛ يمكن أن يرتبط الجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد ب 24 (K27 731 034 S118 5 5 7121 ب 11-6 البشري. Ay تجسيدات؛ يمكن أن يرتبط الجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد على الأقل ب 1» 2 3 4 5 من ¢S118 034 2731 K27 R24 و IL-6 71 البشري. وفي تجسيدات؛ يمكن أن يرتبط الجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد (مثلاً يمكن أن يرتبط على وجه الخصوص) بالموقع IL-6 JIT بشري.
وفي تجسيدات؛ يمكن أن يرتبط الجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد ب IL-6 عند Ti تبلغ 70"م أو أكثر. Ag تجسيدات؛ يمكن أن يرتبط الجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد ب IL-6 عند Ty تبلغ 2°80 أو أكثر. وفي تجسيدات؛ يرتبط الجسم المضاد أو شدفة منه (مثل الشدفة المرتبطة بمولد المضاد) بواحد على الأقل من «D34 731 K27 R24 5118؛ و 7121 1 IL-6 بشري. وفي تجسيدات؛ يرتبط الجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد منه باثنين على JH من «S118 034 »731 K27 R24 و 7121 ل 11-6 بشري. وفي تجسيدات؛ يرتبط الجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد منه بثلاثة على الأقل من R24 27ل 3731 034 0 5118؛ و 7121 ل IL-6 بشري. وفي تجسيدات؛ يرتبط الجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد die بأريعة على الأقل من S118 D34 »731 1627 «R24 و 7121 ل 11-6 بشري. وفي تجسيدات؛ يرتبط الجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد منه بخمسة على الأقل من «S118 034 «Y31 «K27 «R24 و 7121 ل IL-6 البشري. وفي تجسيدات؛ يرتبط الجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد منه ب «Y31 «K27 (R24 034 8118؛ و 7121 ل IL-6 5 بشري. وفي تجسيدات؛ يكون الجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد عبارة عن جسم مضاد أحادي النسيلة أو شدفة مرتبطة بمولد المضاد منه. وفي تجسيدات؛ يكون الجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد Ble عن جسم مضاد أحادي النسيلة مؤنسن. By تجسيدات؛ يكون الجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد عبارة عن عبارة عن جسم مضاد أحادي النسيلة 0 بشري. وفي تجسيدات؛ يظهر الجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد بنسبة تقل عن 0 عند تركيز يتراوح من 100 إلى 150 ملغم/مل؛ مثلاً عند تركيز يبلغ حوالي 142 ملغم/مل؛ في PBS عند درجة حموضة قدرها 7.4. Ag تجسيدات؛ يكون للجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد خواص عقاقيرية محسنة مقارنة بعامل علاجي «SAT مثلاً مقارنة بتوسيليزوماب ctocilizumab 5 بيفاسسيزوماب cbevacizumab رانيبيزوماب «ranibizumab و/أو -Eylea® وفي تجسيدات؛ يكون للجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد احتجاز محسن في العين عند إعطائه للعين» على سبيل المثال» داخل الجسم الزجاجيء Sie عن طريق الحقن داخل الجسم الزجاجي. وفي تجسيدات؛ يشار إلى الاحتجاز المحسن في العين بناء على عمر النصف المتزايد في العين» على سبيل المثال» في الجسم الزجاجي evitreous الشبكية ددناء»» الخلط المائي aqueous humor 0 مشيمة العين choroid و/أو الصُلبة .sclera
وفي تجسيدات؛ يكون للجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد عمر نصف في الجسم الزجاجي يبلغ على الأقل 6 تمق 9 10< 1 12 13 14 ك1 16ل 17 18 9 أو 20 يوم. وفي تجسيدات؛ يبلغ عمر النصف في الجسم الزجاجي 10 أيام على الأقل. وفي تجسيدات؛ يتم تقييم عمر النصف في الجسم الزجاجي في حيوان؛ مثل الأرنب أو القرد. وفي تجسيدات؛ يتم تقييم عمر النصف في الجسم الزجاجي في الإنسان. وفي تجسيدات؛ يكون للجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد الموصوف هنا عمر نصف جهازي مخفّض Tip Jie) مخْفّض)؛ و/أو تصفية جهازية محسنة؛ Jie عمر النصف الجهازي المخفّض أو تصفية جهازية أسرع مقارنة مع تلك الخاصة بعامل AT ade مثل توسيليزوماب ctocilizumab بيفاسيزوماب cbevacizumab رانيبيزوماب ranibizumab و/أو 0 أفليبرسبت aflibercept ©82160. وفي تجسيدات؛ يكون عمر النصف الجهازي (مثل (Timp أقل من ذلك الخاص بتوسيلليزوماب tocilizamab و/أو أفليبرسبت -Eylea® aflibercept وفي تجسيدات؛ يشتمل الجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بالجسم لمضاد على Fo dia يشتمل على طفرة (مثلاً عند 1 2 3 أو 4 طفرات) عند موقع واحد أو أكثر مقابل ل 01311 (D313 254 أو 11436 (الترقيم كما في السياق برقم تعريف: 41). وفي تجسيدات؛ يتم اختيار الطفرة من واحد 5 أو أكثر من (254R 12548 D313T <H31IN 113118 H311A و 114368. وفي تجسيدات؛ يشتمل الجسم المضاد أو الشدفة المرتبطة بمولد المضاد على حقل Fe يشتمل على طفرة مقابلة ب 113118 (الترقيم كما في السياق برقم تعريف: 41). وفي تجسيدات؛ يكون الحقل Ble Fo عن الحقل Fe 1801. وفي تجسيدات؛ يكون الحقل Fo عبارة عن الحقل IgG2 Fe Ay تجسيدات» يكون الحقل Fo عبارة عن Fe dia 1861 بشري له السياق برقم تعريف: 0 50 ويشتمل بشكل اختياري على طفرة عند واحد أو أكثر من المواقع التي وضع تحتها خط (190]؛ 2+ 133 و :(H215 DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKF NWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNK ALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEW ESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHN 5 (سياق برقم تعريف: HYTQKSLSLSPGK(50 وفي تجسيدات؛ يشتمل الحقل Fe 1801 على طفرة مقابلة لواحد أو أكثر من (HO0A, <I33R »1338 0927 119017 78 و 12158 (الترقيم وفقاً للسياق برقم تعريف: 50). Ay تجسيدات» يكون الحقل Fo عبارة عن Fe dia 1802 بشري له السياق برقم تعريف: 0 51 ويشتمل بشكل اختياري على طفرة عند واحد أو أكثر من المواقع التي وضع تحتها خط (1186؛ 8+ 129 و 11211):
VECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWY VDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPA PIEKTISK TKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNG QPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYT 5 (سياق برقم تعريف: 50( QKSLSLSPGK وفي تجسيدات؛ dai الحقل Fe 1802 على طفرة مقابلة لواحد أو أكثر من 11868؛
78 1868 0887 1298 1298 و H211A (الترقيم وفقاً للسياق برقم تعريف: 51). وفي تجسيدات» تعمل طفرة ال Fe على التقليل من التراكم الجهازي للشدفة المرتبطة بالجسم المضاد أو مولد المضاد Hie) زيادة التصفية أو خفض عمر النصف؛ على سبيل المثال (Tip
0 لالشدفة المرتبطة بالجسم المضاد أو مولد المضاد. وفي تجسيدات؛ ينخفض التراكم الجهازي مقارنة بذلك لعامل علاجي Mi) Al توسيليزوماب ctocilizumab بيفاسيزوماب [مستهنعة”6ط؛ رانيبيزوماب ranibizumab و/أو أفليبيرسيبت As. (aflibercept تجسيدات؛ ينخفض التراكم الجهازي مقارنة بذلك للتوسيليزوماب tocilizumab و/أو أفليبيرسيبت +20108:80. Ag تجسيدات؛ ينخفض التراكم الجهازي مقارنة بالتراكم الجهازي للشدفة المرتبطة بالجسم المضاد أو مولد المضاد
المقابل الذي لا يشتمل على الطفرة. وفي تجسيدات؛ يتم تقييم التراكم الجهازي بعد الإعطاء داخل الجسم الزُجاجي للشدفة المرتبطة بالجسم المضاد أو مولد المضاد.
وفي جانب AT حيث تزود طريقة لتقليل التأثيرات الجهازية عند تثبيط 17-6 في الكائن الخاضع للمعالجة؛ وتتضمن الطريقة إعطاء إلى الكائن الخاضع للمعالجة جسم مضاد أو شدفة منه تشتمل على ihe Fo dis كما هو موصوف هنا. وفي تجسيدات؛ يمكن للشدفة المرتبطة بالجسم
0 المضاد أو alse المضاد تثبيط فعالية ال 11.6 ويكون لها فعالية Fe منخفضة ia) ارتباط منخفض مع (FeRn مقارنة بجسم مضاد مقابل أو شدفة منه لها حقل Fe من النمط البري. وفي بعض الحالات؛ تتضمن الطريقة المستخدمة لتخفيض التأثيرات الجهازية عند تثبيط 17-6 في الكائن الخاضع للمعالجة إعطاء للكائن الخاضع للمعالجة مضاد ل 11-6 الذي يشتمل على phi Fe dis كما هو موصوف هنا.
وفي جانب إضافي؛ حيث يزود هنا حمض نووي nucleic acid مشتمل على سياق يحمل شيفرة الشدفة المرتبطة بالجسم المضاد أو مولد المضاد الموصوف هنا. وفي تجسيدات؛ يشفر الحمض النووي سياق الحمض الأميني amino acid المكشوف die هنا. Ag جوانب؛ يشتمل الحمض النووي على سياق برقم تعريف: 40 سياق برقم تعريف: 43؛ أو سياق برقم تعريف: 48. وفي تجسيدات؛ يشفر الحمض النووي سياق الحمض النووي المكشوف aie في الجدول 4.
ويدزود هنا أيضاً ناقل مشتمل على الحمض النووي. ويزود كذلك خلية مشتملة على الحمض النووي وناقل.
وفي تجسيدات؛ تكون الشدفة المرتبطة بالجسم المضاد أو مولد المضاد ل IL-6 الموصوف هنا للاستخدام في علاج كائن خاضع للمعالجة Sie) إنسان) يعاني من المرض المرتبط ب 11-6. وفي تجسيدات؛ يكون المرض عبارة عن مرض عيني ocular مثلاً مرض عيني يتميز بمستوى مرتفع من (JL-6 على سبيل (JBN في الجسم الزجاجي vitreous 5 وفي تجسيدات؛ تستخدم الشدفة المرتبطة بالجسم المضاد أو مولد المضاد في علاج كائن خاضع للمعالجة Sle) إنسان) يعاني من الأوديما البقعية السكرية «DME diabetic macular edema اعتلال الشبكية السكري retinopathy ع10560ل» التهاب العنبية cuveitis زرق glaucoma جفاف العين Sle) dry eye مرض جفاف العين او متلازمة جفاف العين)؛ التهاب الملتحمة الأرجي «allergic conjunctivitis ألم cocular pain (pall انفصال الشبكية تشرمي المنشاً rhegmatogenous (RRD retinal detachment 0 انحلال بقعي مرتبط بالعمر age-related macular degeneration (AMD اعتلال الشبكية السكري التكاثري PDR proliferative diabetic retinopathy اتسداد الوريد الشبكي retinal vein occlusion 6170 التهاب النخاع والعصب البصري neuromyelitis optica (NMO زراعة القرنية «corneal transplant سحج القرنية «corneal abrasion أو جرح جسماني في العين. وفي تجسيدات؛ تستخدم الشدفة المرتبطة بالجسم المضاد أو مولد المضاد في علاج كائن خاضع للمعالجة (مثلاً؛ إنسان) يعاني من DME وفي جوانب؛ تستخدم الشدفة المرتبطة بالجسم المضاد أو alge المضاد ل IL-6 الموصوفة هنا في تحضير دواء لعلاج مرض مرتبط ب 11-6. وفي تجسيدات؛ يكون المرض Ble عن مرض عيني؛ مثلاً مرض عيني يتميز بمستوى مرتفع من 11-6 في الجسم الزجاجي. وفي تجسيدات؛ يكون المرض المرتبط ب IL-6 عبارة عن الأوديما البقعية السكرية «DME diabetic macular edema 0 اعتلال الشبكية السكري diabetic retinopathy التهاب العنبية cuveitis جفاف العين Sia) مرض جفاف العين او متلازمة جفاف العين)؛ انحلال بقعي مرتبط بالعمر age-related macular (AMD degeneration اعتلال الشبكية السكري التكاثري proliferative diabetic retinopathy (PDR انفصال الشبكية تشرمي المنشاً <RRD rhegmatogenous retinal detachment اتنسداد الوريد الشبكي (RVO retinal vein occlusion التهاب النخاع والعصب البصري neuromyelitis optica NMO 5 زراعة القرنية «corneal transplant سحج القرنية «corneal abrasion أو جرح جسماني في العين. Ay تجسيدات؛ يكون المرض المرتبط ب IL-6 عبارة عن الأوديما البقعية السكرية diabetic As macular edema تجسيدات؛ يتم تشكيل الدواء لنقله إلى الجسم الزجاجي في عين الكائن الخاضع للمعالجة Sli) الحقن داخل الجسم الزجاجي).
ويزود هنا أيضاً تركيب مشتمل على شدفة مرتبطة بالجسم المضاد أو مولد المضاد الموصوفة هنا. وفي التجسيدات؛ يشتمل التركيب أيضاً على sale حاملة مقبولة صيدلياً أو سواغ مقبول صيدلياً واحد أو أكثر. وفي تجسيدات؛ يستخدم التركيب في علاج مرض مرتبط بال 11-6. (Ag تجسيدات؛ يكون المرض Ble عن مرض عيني؛ مثلاً مرض عيني يتميز بمستوى مرتفع من 17-6 في الجسم الزجاجي ٠ وفي تجسيدات؛ يستخدم التركيب في علاج الأوديما البقعية السكرية diabetic macular «DME edema اعتلال الشبكية السكري diabetic retinopathy التهاب العنبية cuveitis جفاف العين SNe) dry eye مرض Cilia العين او متلازمة جفاف العين)؛ انحلال بقعي مرتبط بالعمر (AMD age-related macular degeneration _اعتلال الشبكية السكري التكاثري proliferative Juadl (PDR diabetic retinopathy 0 الشبكية تشرمي المنشاً rhegmatogenous retinal detachment طعل»؛ انسداد الوريد الشبكي (RVO retinal vein occlusion التهاب النخاع والعصب البصري neuromyelitis optica 21410 زراعة القرنية corneal transplant سحج القرنية corneal «abrasion أو جرح جسماني في العين. وتزود هنا أيضاً طريقة لمعالجة مرض مرتبط بال 11-6؛ تتضمن الطريقة إعطاء إلى كائن 5 خاضع للمعالجة مقدار فعال علاجياً من جسم مضاد لذ 11-6 أو شدفة الموصوفة هنا. وفي تجسيدات؛ يكون المرض المرتبط ب 1-6 Ble عن مرض عيني؛ مثلاً مرض عيني يتميز بمستوى مرتفع من 6 في الجسم الزجاجي. وفي تجسيدات؛ يكون المرض المرتبط ب 11-6 عبارة عن الأوديما البقعية السكرية «DME diabetic macular edema اعتلال الشبكية السكري «diabetic retinopathy التهاب العنبية Cilia cuveitis العين mje Nia) dry eye جفاف العين او متلازمة جفاف العين)؛ انحلال 0 بقعي مرتبط بالعمر cAMD age-related macular degeneration اعتلال الشبكية السكري rll (PDR proliferative diabetic retinopathy انفصال الشبكية تشرمي rhegmatogenous Lill «RRD retinal detachment اتسداد الوريد الشبكي <RVO retinal vein occlusion التهاب التخاع والعصب البصري <NMO neuromyelitis optica زراعة القرنية corneal transplant سحج القرنية «corneal abrasion أو جرح جسماني في العين. وفي تجسيدات؛ يكون المرض المرتبط ب Ble IL-6 عن الأوديما البقعية السكرية .diabetic macular edema وفي تجسيدات؛ يتم نقل الشدفة المرتبطة بالجسم المضاد أو مولد المضاد؛ أو التركيب المشتمل على الشدفة المرتبطة بالجسم المضاد أو مولد المضاد إلى الجسم الزجاجي في عين الكائن الخاضع للمعالجة Sli) الحقن داخل الجسم الزجاجي). وفي تجسيدات؛ تكون الشدفة المرتبطة بالجسم المضاد أو مولد المضاد؛ أو التركيب المشتمل على الشدفة المرتبطة بالجسم المضاد أو Age 0 المضاد للحقن داخل الجسم الزجاجي.
Ag تجسيدات؛ يكون المرض المرتبط ب 11-6 عبارة عن الأوديما البقعية السكرية diabetic macular edema وبتم نقل الجسم المضاد أو الشدفة؛ أو التركيب المشتمل على الشدفة المرتبطة بالجسم المضاد أو مولد المضاد إلى الجسم الزجاجي في عين الكائن الخاضع للمعالجة. ويزود هنا أيضاً جسم مضاد أو شدفة منه (مثلاً؛ الشدفة المرتبطة بمولد المضاد) ia) 5 جسم مضاد لذ 11-6 أو شدفة die كما هو موصوف هنا)؛ أو التركيب المشتمل على الجسم المضاد المذكور أو شدفة منه للاستخدام في علاج مرض مرتبط ب 11-6 Sie) للإستخدام في علاج كائن خاضع للمعالجة؛ مثلاً كائن بشري؛ يعاني من مرض مرتبط ب (IL-6 Ay تجسيدات؛ يكون المرض عبارة عن مرض عيني يتميز بمستوى مرتفع من IL-6 على سبيل المثال؛ في الجسم الزجاجي. وفي تجسيدات؛ يكون المرض المذكور عبازة عن الأوديما البقعية 0 السكرية (DME diabetic macular edema اعتلال الشبكية السكري cdiabetic retinopathy التهاب العنبية نازع« جفاف العين a) dry eye متلازمة جفاف العين أو مرض Cilia العين)؛ التهاب الملتحمة ١ لأرجي Pail allergic conjunctivitis بقعي مرتبط بالعمر age-related macular (AMD degeneration اعتلال الشبكية السكري التكاثري proliferative diabetic retinopathy (PDR انفصال الشبكية تشرمي المنشاً <RRD rhegmatogenous retinal detachment اتنسداد الوريد 15 الشبكي retinal vein occlusion 6170 التهاب النخاع والعصب البصري neuromyelitis optica (NMO زراعة القرنية «corneal transplant سحج القرنية «corneal abrasion أو جرح جسماني في العين. وفي تجسيدات؛ يكون المرض المذكور عبارة عن DME وفي تجسيدات؛ يكون المرض المتكور Ble عن مرض جفاف العين. وفي تجسيدات؛ يكون المرض عبارة عن متلازمة جفاف العين. وفي تجسيدات؛ يكون المرض المذكور عبازة عن التهاب العنبية uveitis وفي تجسيدات؛ 0 يكون المرض المذكور عبارة عن AMD وفي تجسيدات؛ يكون المرض المذكور عبارة عن ‘PDR وفي تجسيدات؛ يكون المرض المذكور عبارة عن زراعة القرنية ccomeal transplant سحج القرنية «corneal abrasion أو جرح جسماني في العين. وفي تجسيدات؛ يكون الجسم المضاد أو الشدفة منه (مثلاً؛ الشدفة المرتبطة بمولد المضاد) مناسب لنقله إلى الجسم الزجاجي في العين. وفي تجسيدات؛ يتم نقل الجسم المضاد أو الشدفة منه Hie) الشدفة المرتبطة بمولد المضاد) إلى الجسم الزجاجي في العين. ويزود هنا أيضاً طريقة لمعالجة مرض مرتبط بال (IL-6 تتضمن الطريقة إعطاء إلى CAS خاضع للمعالجة جسم مضاد لذ 11-6 أو شدفة aie (مثلاً؛ الشدفة die المرتبطة بمولد المضاد)؛ lie جسم مضاد لذ 11-6 أو شدفة die كما هو موصوف هنا. وفي تجسيدات؛ يتم إعطاء جسم مضاد لذ IL-6 أو شدفة منه Sie) الشدفة منه المرتبطة بمولد المضاد)؛ بمقدار فعال علاجياً. وفي 0 تجسيدات؛ يكون المرض المرتبط ب 11-6 عبارة عن مرض عيني يتميز بمستوى pipe من 11-6 في
الجسم الزجاجي. وفي تجسيدات؛ يكون المرض المرتبط ب 1176 عبارة عن الأوديما البقعية السكرية (DME diabetic macular edema اعتلال الشبكية السكري diabetic retinopathy التهاب العنبية cuveitis متلازمة جفاف (pall مرض جفاف (gall انحلال بقعي مرتبط بالعمر age-related (AMD macular degeneration اعتلال الشبكية السكري proliferative diabetic SAH <PDR retinopathy 5 انسداد الوريد الشبكي <RVO retinal vein occlusion التهاب التخاع والعصب البصري neuromyelitis optica 21410 زراعة القرنية corneal transplant سحج القرنية corneal
«abrasion أو جرح جسماني في العين. وفي تجسيدات؛ يكون الجسم المضاد أو الشدفة Hie) die الشدفة المرتبطة بمولد المضاد) مناسب لنقله إلى الجسم الزجاجي في العين. (By تجسيدات؛ يتم نقل الجسم المضاد أو الشدفة die
Sig) 0 الشدفة المرتبطة بمولد المضاد) إلى الجسم الزجاجي في عين الكائن الخاضع للمعالجة. وفي تجسيدات؛ يكون المرض المرتبط ب 11-6 عبارة عن الأوديما البقعية السكرية diabetic macular edema ويتم نقل الجسم المضاد أو الشدفة منه إلى الجسم الزجاجي في عين الكائن الخاضع
ويزود هنا أيضاً طقم مشتمل على الجسم المضاد ل 11-6 او التركيب المكشوف die هنا
5 «اختيارباً؛ تعليمات استخدامه.
ويزود هنا Lad حاوية أو جهاز؛ مثلاً جهاز لنقل العقار؛ مشتمل على الجسم المضاد ل TL- 6 او التركيب المكشوف die هنا. وفي تجسيدات؛ يكون الجهاز المذكور معداً Jail الجسم المضاد أو التركيب إلى العين؛ مثلاً إلى الجسم الزجاجي. ويزود هنا أيضاً طقم مشتمل على الحاوية أو الجهاز المذكور.
LS 20 هو مستخدم هناء Jia المصطلح "جسم مضاد" مرادف لمصطلح غلوبولين مناعي immunoglobulin ويفهم على النحو المعروف به بشكل شائع في التقنية. ولا يقتصر مصطلح الجسم المضاد على أي طريقة محددة لإنتاج الجسم المضاد. فعلى سبيل المثال» يتضمن مصطلح الجسم المضاد؛ من بين أمور أخرى؛ أجسام مضادة مأشوية؛ أجسام مضادة أحادية النسيلة؛ وأجسام مضادة عديدة النسيلة. وكما هو مستخدم هناء يكون الجسم المضاد ob) الوحدات detramer وما لم يذكر
5 خلاف ذلك؛ يتكون كل منها من زوجين متطابقين لسلاسل متعدد الببتيد «polypeptide chains ويكون لكل زوج سلسلة خفيفة واحدة وسلسلة ثقيلة واحدة. ويشتمل الطرف الأميني لكل سلسلة على منطقة متغيرة بها حوالي 100 إلى 120 أو أكثر من الأحماض الأمينية التي تلعب دوراً أساسياً في تمييز مولد المضاد. وبشتمل الجزء الطرفي الكريوكسيلي carboxy-terminal portion لكل سلسلة على منطقة ثابتة التي يكون لها دوراً أساسياً في وظيفة مستفعلة الجسم المضاد. slay على فئات
0 السلاسل الخفيفة البشرية سلاسل خفيفة كابا kappa ولامدا Jambda وتمثل فئات السلاسل الثقيلة
ميو emu دلتا «delta غاما (gamma ألفا alpha أو إبسيلون epsilon وتحدد النمط الإسوي isotype للجسم المضاد. وتمثل الأنماط الإسوية للجسم المضاد IgM 0ع1» dgA «IgG و IgE بالترتيب. وضمن السلاسل الخفيفة والثقيلة. تكون المناطق المتغيرة والثابتة مربوطة بواسطة منطقة "" التي بها حوالي 12 او أكثر من الاحماض الأمينية؛ مع السلسلة الثقيلة المحتوية أيضاً على منطقة "7" التي بها حوالي ثلاثة أو أكثر من الأحماض الأمينية.
وتشكل المناطق المتغيرة لكل زوج من السلسلة الثقيلة/الخفيفة VH) و (VL بالترتيب؛ موقع ارتباط مولد المضاد. ووفقاً لذلك» يكون للجسم المضاد ل 180 السليم؛ على سبيل المثال؛ اثنين من مواقع الارتباط. وباستثناء في الأجسام المضادة ثنائية المجموعات الوظيفية أو ثنائية الأنواع» يكون
موقعي الارتباط متماثلين.
وتظهر المناطق المتغيرة للسلاسل الثقيلة والخفيفة للجسم المضاد نفس البنية العامة للمناطق الهيكلية المحفوظة نسبياً FR الموصولة بواسطة ثلاثة من المناطق المتغيرة بشكل مفرط» وبطلق عليها أيضاً مناطق تحديد تكميلية أو 00185. وبشير المصطلح 'متغير" إلى حقيقة أنه تكون أجزاء معينة من الحقول المتغيرة مختلفة إلى حد كبير في سياق من بين الأجسام المضادة وتشارك في ارتباط ونوعية كل جسم مضاد محدد لمولد المضاد المحدد الخاص به. وتتوضع قابلية التغيير بشكل
5 أساسي في ال Ally «CDRs تكون مفصولة بواسطة مناطق هيكيلية FRs محفوظة على نحو أكبر. ويتم تعيين الأحماض الأمينية لكل حقل وفقاً لتعريفات سياقات كابات Kabat لبروتينات الغلويولين المناعي موضع الدراسة انظر المرجع ( 1987) National Institutes of Health, Bethesda, Md. )1991 لعصة)» أو المرجع Chothia and Lesk, J Mol Biol 196:901-917 (1987); Chothia et al., Nature 342:878-883 (1989) التي تصف طرق معروفة في التقنية.
ويمكن أن يشير "النوع البري" إلى الأليل allele أو الأنواع الأكثر انتشاراً الموجودة في التعداد أو يشير إلى الجسم المضاد الذي تم الحصول عليه من حيوان غير معالج؛ عند المقارنة مع بالأليل أو تعدد الأشكال cpolymorphism أو الشكل المختلف أو المشتقة التي تم الحصول عليها بواسطة شكل معالجة؛ مثلاً تطفير mutagenesis باستخدام طرق موصى بها وغيرها من الطرق لتغيير الحمض الاميني للجزيء المرتبط بمولد المضاد.
judg 25 المصطلح 'شدفة الجسم المضاد" إلى gia من سلسلة سليمة (معافاه) أو مكتملة الطول أو جسم مضاد؛ وبشكل عام منطقة الارتباط المستهدفة أو المتغيرة. ومن الأمثلة على شدفات الجسم المضاد تتضمن؛على سبيل المثال لا الحصر؛ شدفات F(ab)2 ¢Fab' «Fab و .Fv وتمثل dd وظيفية" أو 'شكل متناظر للجسم المضاد للموقع UIT 11.6 شدفة حيث يمكنها منع أو تخفيض جوهرياً من قدرة ال 11-6على الارتباط بالمستقبلة؛ تخفيض قدرة المتراكب IL-6/L-6R على الارتباط
0 ب 130مع؛ أو تخفيض قدرة ddan على الارتباط ب 130مع أو لبدء التأشير. وكما هو مستخدم هناء
تمثل 'شدفة الارتباط بمولد المضاد" أو " الشدفة "Auda gl بشكل عام مرادف ل " شدفة الجسم المضاد" ويمكن أن تشير إلى شدفات؛ مثلاً Fab)2 Fab Fy وغيرها التي يمكنها منع أو تخفيض جوهرياً قدرة ال 11.6 على الارتباط بالمستقبلة؛ تخفيض قدرة المتراكب TL-6/IL-6R على الارتباط ب «gp130 أو بدء التأشير. وتكون "مشتقة' الجسم المضاد عبارة عن متعدد ببتيد الذي يتضمن CDR واحدة على الأقل للجسم المضاد المكشوف die هنا. ونموذجياً؛ يمكن للمشتق الارتباط بالموقع 11 لل AL-6 وبقصد بالمصطلح 'تنافس” بأنه يمكن للجسم المضاد الأول؛ أو شدفة aie التنافس على الارتباط مع جسم مضاد ثانٍ أو شدفة منه؛ بحيث يكون ارتباط الجسم المضاد الأول مع الحاتمة الخاصة به منخفض بشكل يمكن الكشف عنه في وجود الجسم المضاد الثاني مقارنة بارتباط الجسم 0 المضاد الأول في غياب الجسم المضاد الثاني. وفي بعض الحالات؛ يمكن أن يشير المصطلح أيضاً إلى ارتباط الجسم الثاني مع الحاتمة الخاصة به الذي يكون منخفض بشكل يمكن الكشف عنه في وجود الجسم المضاد الأول. وقد تجري آلية المنافسة المذكورة؛ في أمثلة غير محدودة؛ من خلال إعاقة فراغية؛ تغيير تصاوغي؛ الارتباط بحاتمة مشتركة. ويقصد بالمصطلح dud تطابق السياق” Led يتعلق بسياقات الأحماض النووية شقات 5 موجودة في سياقين حيث تكون مماثلة عندما تتحاذى لأقصى تشابه. وقد يكون امتداد مقارنة تطابق السياق على مدى من حوالي تسعة نكليوتيدات على الأقل؛ على سبيل المثال؛ حوالي 18 نكليوتيد على JN حوالي 4 نتكليوتيد على (JN حوالي 8 تكليوتيد على الأقل؛ حوالي 32 نكليوتيد على الأقل» حوالي 36 نكليوتيد على الأقل؛ أو حوالي 48 نكليوتيد أو أكثر. وهنالك عدد من الخوارزميات المعروفة في التقنية التي يمكن استخدامها لقياس تطابق سياق النكليوتيد. وعلى سبيل المثال» يمكن 0 مقارنة سياقات متعدد النكليوتيد باستخدام برامج Gap (FASTA أو 1 All) تعتبر برامج بالنسخة 10.0 «Wisconsin Package Version تزودها شركة «Genetics Computer Group (GCG) بمدينة ماديسون» في ولاية ويسكونسين). ويزود برنامج FASTA الذي يتضمن؛ على سبيل المثال؛ برامج (FASTA2 857/83؛ خوارزميات ونسبة تطابق السياق للمناطق ذات التداخل الأفضل بين سياقات الاستعلام والبحث انظر المراجع ((1990) 183:63-98 ¢Pearson, Methods Enzymol Pearson, Methods Enzymol 266:227- ¢Pearson, Methods Mol Biol 132:185-219 (2000) 25 (Pearson, J Mol Biol 276:71-84 (1998) ¢258 (1996) . ونموذجياً يمكن استخدام وسائط افتراضية لبرنامج محدد أو خوارزمية محددة. على سبيل المثال؛ يمكن تحديد نسبة تطابق السياق بين سياقات الأحماض النووية باستخدام برنامج FASTA مع وسائطه الافتراضية ana) الكلمة الذي يبلغ 6 وعامل NOPAM لمصفوفة النقاط) أو استخدام برنامج Gap مع وسائطه الافتراضية كما هو مزود 0 في نسخة 6.1 -GCG Version
ويقصد بالمصطلح "نسبة تطابق السياق” فيما يتعلق بسياقات الأحماض الأمينية إلى شقات موجودة في سياقين حيث تكون مماثلة Lovie تتحاذى لأقصى تشابه. وقد يكون امتداد مقارنة تطابق السياق على مدى من حوالي خمسة من شقات الحمض الأميني على الأقل؛ على سبيل المثال؛ حوالي 20 من شقات الحمض الأميني على الأقل؛ حوالي 30 من شقات الحمض الأميني على الأقل؛ حوالي 50 من شقات الحمض الأميني على الأقل؛ حوالي 100 من شقات الحمض الأميني على الأقل؛ حوالي 150 من شقات الحمض الأميني على الأقل؛ أو حوالي 200 من شقات الحمض الأميني أو أكثر. ويمكن قياس تطابق سياق مركبات متعدد الببتيد نموذجياً باستخدام برمجيات تحليلية. وهنالك عدد من الخوارزميات المعروفة في التقنية لتحديد نسبة تطابق السياق. وعلى سبيل المثال» يمكن مقارنة سياقات الأحماض الأمينية باستخدام برامج Gap (FASTA أو 017ه86؛ (التي 0 تعتبر برامج بالنسخة 10.0 «Wisconsin Package Version تزودها شركة Genetics Computer «Group (GCG) بمدينة ماديسون؛ في ولاية وبسكونسين). وتقارن برمجيات تحليل البروتين بين السياقات باستخدام قياسات التماثل الخاصة بعمليات الإبدال المختلفة؛ عمليات الحذف وعمليات التعديل La (AY) في ذلك عمليات إبدال محافظ للحمض الأميني. على سبيل المثال؛ تتضمن GCG برامج مثل "م(ة6' و Bestfit' " التي يمكن استخدامها مع الوسائط الافتراضية كما هي محددة 5 عن طريق البرامج لتحديد تجانس السياق أو تطابق السياق بين مركبات متعدد الببتيد وثيقة الصلة؛ مثلاً مركبات متعدد الببتيد المتجانسة من أنواع مختلفة من الكائنات الحية أو بين بروتين من نوع بري أو نظائره. انظرء على سبيل المثال» 6.1 GCG Version (جامعة وبسكنسون؛ بمدينة ماديسونء في ولاية وسكونسين). يمكن مقارنة سياقات مركبات متعدد الببتيد Load باستخدام برنامج FASTA يستخدم وسائط افتراضية أو موصى بهاء انظر برنامج Sie) GCG Version 6.1. FASTA FASTA2 0 و (FASTA3 الذي يزود خوارزميات ونسبة تطابق السياق للمناطق ذات التداخل الأفضل بين سياقات الاستعلام والبحث انظر المراجع ((1990) 183:63-98 ¢Pearson, Methods Enzymol و (2000) 132:185-219 .(Pearson, Methods Mol Biol وتتمثل خوارزمية Gal التي يمكن استخدامها عند مقارنة سياق مع قاعدة بيانات محتوية على عدد كبير من السياقات من كائنات حية مختلفة في البرنامج الكمبيوترزي blastp Sie (BLAST إلى cblastn باستخدام وسائط افتراضية 5 المزودة مع البرامج. انظرء على سبيل المثال» المراجع 215:403-410 Altschul et al., J Mol Biol
)1990(¢ و )1997( 25:3389-402 Altschul et al., Nucleic Acids Res ويكون البروتين أو متعدد الببتيد Lge (A 'متجانس جوهريا؛ أو 'مُنقى جوهرياً” عندما تظهر حوالي 60 إلى 775 على الأقل من العينة أنواع مفردة من متعدد الببتيد. وقد يكون متعدد الببتيد أو البروتين عبارة عن أحادي الوحدات أو متعدد الوحدات. ويمكن أن يشتمل متعدد الببتيد أو 0 البروتين على نسبة نقاء مقدارها حوالي 250 360 70 380 790 95 198 أو 799
على سبيل المثال؛ يكون لمتعدد الببتيد أو البروتين AY جوهرياً نسبة نقاء 750 760 70
0 290 295 298 أو 799. ويمكن تقييم نقاء أو تجانس البروتين باستخدام أي طريقة
مناسبة؛ Sie رحلان كهربي لهلام متعدد أ لأكربلاميد polyacrylamide gel electrophoresis لعينة
البروتين يليها بواسطة المشاهدة البصرية لواحدة أو أكثر من الروابط المقترنة بالبروتين أو متعدد
الببتيد Se) عن طريق تلطيخ الهلام)؛ استبعاد حجمي ب (HPLC تبادل كاتيوني ب HPLC رحلان
كهربي شعيري منخفض في 505؛ رسم خريطة الببتيدء أو رسم خريطة الغلايكان glycan ويمكن
تحقيق استبانة مرتفعة باستخدام طرق معروفة في dull على سبيل المثال» أو أي وسيلة تنقية أخرى .
ويقصد بالمصطلح 'متمائل جوهرياً” عند الإشارة إلى حمض نووي أو شدفة منه؛ بأنه عندما
0 يتحاذى على نحو أمثل مع عملية إيلاج نكليوتيد ملائمة أو عمليات حذفه بحمض نووي آخر (أو جديلته المتممة)؛ يكون السياق النكليوتيدي مطابق بنسبة تبلغ حوالي 785 على (JY 790 على الأقل» و 795 196 797 798 أو 799 على الأقل للقواعد النكليوتيدية» على سبيل المثال» يكون له نسبة تطابق للسياق تبلغ 785» 790» 795 796 798 أو 799 كما هو مقاس باستخدام أي خوارزمية معروفة لتطابق السياق؛ مثلاً برامج BLAST (FASTA أو .Gap
LS 15 هو مطبق على مركبات متعدد ail يقصد بالمصطلح 'تطابق جوهري" أو dla جوهري” بأن اثنين من سياقات الحمض الأميني؛ عندما تتحاذى على نحو أمثل» مثلاً بواسطة برامج GAP أو BESTFIT تستخدم أوزان فجوة افتراضية كما هو مزود مع البرامج؛ تتشارك بنسبة تطابق في السياق تبلغ حوالي 770 » 775 780 790 795 796 197( 798 أو 799 على الأقل؛ على سبيل (JE نسبة تطابق سياق تبلغ70 375 380 90ن 395 396 197 398
0 أو 799. وفي تجسيدات معينة؛ تختلف المواضع المتبقية غير المتطابقة بعمليات إبدال محافظ للحمض الأميني.
يشير "المقدار الفعال Ladle إلى مقدار العامل العلاجي المعطى الذي يحسن إشارة أو على الأقل أحد أعراض المرض المراد علاجه أو تعزيز أو تحسين التأثير (التأثيرات) الوقائية و/أو العلاجية لعلاج AT (مثلاً؛ عامل علاجي (LAT المفيد في علاج مرض مرتبط ب IL-6 ومن المفهوم أنه قد
5 .يتم إعطاء المقدار الفعال علاجياً في جرعات متعددة على امتداد فترة زمنية محددة أو كعلاج مزمن.
يشير Calle’ 'معالجة" و "علاج” إلى طريقة لتحسين واحدة أو أكثر من إشارات أو أعراض المرض. وكما هو مستخدم هناء يتضمن المصطلح aye أمراض واضطرابات. aig وصف أدناه سمات وفوائد إضافية للاختراع على نحو أكثر تحديداً.
شرح مختصر للرسومات الشكل 1 : عبارة عن رسم بياني يوضح تتائج التجارب التي تم فيها إعطاء جسم مضاد ل 6 داخل الجسم الزجاجي 171 في نموذج CNV جرذ. وتم تحديد الجسم المضاد ل VEGF كضابط إيجابي وكان الضابط السلبي عبارة عن ناقل فقط. =P 0.0054 في اليوم 15 و =p 0.0005 في اليوم 22 لمضاد ال IL-6 مقابل ضابط الناقل. الشكل 2 : عبارة عن رسم بياني يوضح نتائج تجربة ارتباط لفحص قدرة الجسم المضاد 64 الفأري على تثبيط ارتباط اذ IL-6R [IL-6 ب 0130ع. الشكل 13 : عبارة عن رسم بياني يوضح تجربة التي تم فيها فحص 020 حول قدرته على إعاقة تأشير 11-6 في غياب مقدار فائض من 117-680 الذواب. وأجريت التجربة في خلايا HEK- Blue-IL-6 0 مع 0.2 نانوغرام/مل من 11-6 و 2 ميك روغرام/مل من م11.68. الشكل Ble : G3 عن رسم بياني يوضح تجربة التي تم فيها فحص 020 حول قدرته على dle) تأشير 11-6 في وجود مقدار فائض من 1-680 الذواب. وأجربت التجربة في HEK- Wa 3116-6 مع 0.2 نانوغرام/مل من 11-6 و 2 ميك روغرام/مل من م11.68. الشكل 4 : Ble عن رسم بياني يوضح نتائج التجرية التي تم فيها إعطاء جسم مضاد ل IL- 5 6 أحادي النسيلة (إحصار ل 11-6) داخل الجسم الزجاجي في نموذج 0777 لفأر. ولم تحتوي عينات الضابط على أي علاج (العين المقابلة)؛ تم حقن داخل الجسم الزجاجي الجسم المضاد VEGF J (حصار ل ("VEGF أو حقن داخل الجسم الزجاجي لجسم مضاد ضابط لحاتمة HRP (”"جسم مضاد ضابط'). الشكل 5 : يبين ارتباط ال (IL-6 بالنسبة للجسم المضاد من النوع البري «(EBI-029) في 0 أجسام مضادة لها الطفرات التالية )1( 5556/1517 )2( I51T,/S30P (3) «S55G/I51T/A28V /5550؛ و )4( S55G/IS1T/S30P/A28V (يشار Wl) أيضاً ب 881-030). الشكل 6 : يبين التأشير الجزئي في WA مبلغة HEK-Blue™ ILO المعالجة ب IL-6 وواحدة من ال Fabs التالية: )1( «WT (EBI-029) )2( 556/1511/8287ق )3( «S55G/I51T/S30P (EBI-030)/S30P/I51T/A28V (4) 5556. 5 الشكل 7 : يبين الضيائية (قياس التكاثر المستحث ب (IL-6 في T1165.85.2.1 Wa المعالجة ب 11-6 وواحدة من ال Fabs التالية عند التركيز المبين: )1( «WT (EBI-029) )2( (EBI-030)/S30P/I51T/A28V (4) «S55G/IS1T/S30P (3) «S55G/I51T/A28V 5556. الشكل 8 : يبين التأشير الجزئي في خلايا مبلغة 17.6 HEK-Blue™ المعالجة ب 20 بيكومولار من IL-6 وتراكيز مختلفة من )1( (EBI029) 15062 281-029 الناتج في خلايا <HEK-6E )2(
(EBI030) 1802 231-030 الناتج في خلايا <HEK-6E و )3( EBI-030 1802-1131 18 (EBI030 H311A) الناتج في خلايا (HEK-6E (4) التوسيليزوماب «(TOCI) tocilizumab و )5( EBI- 2 الناتج في تجميعة CHO ثابتة -(EBI-030 CHO) الشكل 9 : يصور نموذج الحركيات الدوائية الموصوف في المثال 20. الشكل 10 : يصور تأثير إزدياد فعالية الجسم المضاد على مدة تثبيط ال 11-6 في العين؛ كما تمت محاكاته باستخدام نموذج الحركيات الدوائية الموصوف في المثال 20. الشكل 11 : يبين تركيز العقار من 831-029 EBI-030- <EBI-030 <EBI-029-H311A (Eylea® 11311 والتوسيليزوماب tocilizumab 102 في الجسم الزجاجي على امتداد الفترة الزمنية بعد الإعطاء داخل الجسم الزجاجي. 0 الشكل 12 : يبين تركيز العقار من <EBI-030 EBI-029 81-030-113114ق «Eylea® والتوسيليزوماب TCZ tocilizumab في شبكية العين على امتداد الفترة الزمنية بعد الإعطاء dala الجسم الزجاجي. الشكل 13 : يبين تركيز العقار من <EBI-030 EBI-029 81-030-113114ق «Eylea® والتوسيليزوماب tocilizumab 102 في الخلط المائي على امتداد الفترة الزمنية بعد الإعطاء داخل 5 الجسم الزجاجي. الشكل 14 : يبين تركيز العقار من <EBI-030 EBI-029 81-030-113114ق «Eylea® والتوسيليزوماب TCZ tocilizumab في مشيمة العين على امتداد الفترة الزمنية بعد الإعطاء داخل الجسم الزجاجي. الشكل 115 : يصور مواقع ال «CDRI (FRI قعص «CDR2 قعص «CHI ¢FR4 «CDR3 «CH2 hinge 8), 0 و CH3 في سياقات السلسلة الثقيلة من 581-029 (سياق برقم تعريف: 11)؛ 2810 (سياق برقم تعريف: 41)؛ و 281-031 (يشار إلى 21-031 أيضاً هنا ب EBI-030- (H311A (سياق برقم تعريف: 47). الشكل 15ب : يصور مواقع (FRI لال (FR4 «CDR3 (FR3 «CDR2 (FR2 و CK في سياقات السلسلة الخفيفة <EBI-029) 281-030 و 281-031 التي لها نفس سياق السلسلة الخفيفة) 5 (ياق برقم تعريف: 12). الشكل 116 : يبين التأشير الجزئي في WA مبلغة HEK-Blue™ IL-6 المعالجة ب 20 بيكومولار من 11-6 وتراكيز مختلفة من ال EBI-031 أو التوسيليزوماب .tocilizumab الشكل 16ب : يبين التأشير الجزئي في WA مبلغة HEK-Blue™ IL-6 المعالجة ب 200 بيكومولار من 11-6 المفرط وتراكيز مختلفة من ال 581-031 أو التوسيليزوماب ممستعنانم). 0 الشكل 17 : يبين نتائج المحاكاة الحسابية الموصوفة في المثال 24.
الشكل 18 : يبين رسم تخطيطي لثلاثة أنواع مختلفة من الأنماط الإسوية البنيوية للأجسام المضادة 1502 نتيجة لخلط AUS الكبريتيد disulfide shuffling
الشكل 19 : يبين مخططات استشرابية RP-HPLC لعينات :EBI-031 غير المعالجة (اللوحة العلوية)؛ 5 ملي مولار من DTT (اللوحة الوسطى)؛ 10 ملي مولار من السيستئين cysteine (اللوحة
السفلية).
الشكل 20 : يبين مخططات استشرابية RP-HPLC لعينات 131-031 المجمعة من خطوط خلوية مختلفة من :EBI-031 مستنبت بمقياس 200 لتر لخط خلوي نسيلي (اللوحة العلوية)» مستنبت بمقاس 10 لترات لخط خلوي أصلي (اللوحة الوسطى)؛ وتجميعة محولة تحويلاً خمجياً بشكل ثابت للخلايا (اللوحة السفلية).
0 الشكل 21 : يبين مخطط استشرابي dual RP-HPLC 231-031 المجمعة من مستنبت بمقاس 0 لتر لخط خلوي نسيلي؛ وتم تعيين وقياس آية أشكال إسوية الممثلة بكل ذروة في المخطط الإستشرابي. الشكل 22 : Ble عن رسم بياني يبين بيانات الحركيات الدوائية من القرد الأخضر الأفريقي African green monkey 16797 كما هو موصوف في المثال 26.
5 الشكل 22ب : Ble عن رسم بياني يبين بيانات الحركيات الدوائية من القرد الأخضر الأفريقي (16679)؛ كما هو موصوف في المثال 26. الشكل 23 : Ble عن رسم بياني يبين بيانات الحركيات الدوائية من القرود الخضراء الأفريقية K797) أو (K679 والمنحنيات المتوافقة. الشكل 24 : يبين تركيز العقار من 211-031 في الخلط الزجاجي على امتداد الفترة الزمنية
0 بعد الإعطاء داخل الجسم الزجاجي. الشكل 24ب : يبين تركيز العقار من 011-031 في الخلط المائي على امتداد الفترة الزمنية بعد الإعطاء داخل الجسم الزجاجي. الشكل 224 : يبين تركيز العقار من 131-031 في مشيمة العين على امتداد الفترة الزمنية بعد الإعطاء داخل الجسم الزجاجي.
5 الشكل 24 : يبين تركيز العقار من 21-031 في الملتحمة على امتداد الفترة الزمنية بعد الإعطاء داخل الجسم الزجاجي. الشكل 24ه .| : يبين تركيز العقار من 251-031 في قرنية العين على امتداد الفترة الزمنية بعد الإعطاء داخل الجسم الزجاجي. الشكل 24 : يبين تركيز العقار من 151-031 في الجسم الهدبي للقزحية على امتداد الفترة
0 الئزمنية بعد الإعطاء داخل الجسم الزجاجي.
الشكل 24 : يبين تركيز العقار من 12131-031 في عدسات العين على امتداد الفترة الزمنية بعد الإعطاء داخل الجسم الزجاجي. الشكل 24ح : يبين تركيز العقار من 281-031 في الشبكية على امتداد الفترة الزمنية بعد الإعطاء داخل الجسم الزجاجي. الشكل 24ط : يبين تركيز العقار من 211-031 في الصلبة على امتداد الفترة الزمنية بعد الإعطاء داخل الجسم الزجاجي. الوصف التفصيلي: يؤدي ال 11-6 دوراً أساسياً في العديد من الأمراض Mie التهاب المفاصل الزوماتويدي rheumatoid arthritis وتشير التقارير إلى أنه يكون منظماً على مستوى Je في العديد من 0 الأمراض؛ بما في ذلك أمراض العين. ويمكن لذ 11-6 العمل عبر التشكيلات مجاور -ومقابل-. وفي تشكيلة المجاور؛ يعتقد بأن ال IL-6 الحرّ يرتبط بمستقبلة 11-6 المرتبطة بالغشاء (يشار إلى ال -][ 68 أيضاً ب IL-6Ra و ¢(CD126 ومن ثم يتفاعل المتراكب IL-6R/IL-6 مع ال gp130 (يشار ad) أيضاً ب 00130؛ مستقبلة أونكوستاتين ام IL-6R concostatin M بيتاء ومحول إشارة 11-6)؛ لتنشيط التأشير في الخلايا المحتوية على المتراكب. وفي تشكيلة المقابل» يرتبط ال 11-6 Sad بمستقبلة IL 5 6 الذوابة ©11-6:. ومن ثم يمكن SIL-6R/IL-6 Shall الإرتباط ب 130مع الموجود في الغشاء الخلوي. idling الاختلاف الرئيسي بين هذه التشكيلات في أن معظم أنواع WAY تعبر عن 0130ع على نحو أكبر من التعبير عن 17-68 الذي يكون التعبير ate أكثر تحديداً. وبذلك؛ في الأمراض التي يكون من المرغوب تخفيض تأشير ال IL-6 على سبيل المثال؛ في تلك حيث يكون من المرغوب تثبيط على نحو واسع تأشير ال (IL-6 يكون من المفيد تثبيط كل من تأشير ال IL-6 المجاور- و 0 المقابل-. وقام مقدمو الطلب بتصميم هندسياً مضادات ال IL-6 على سبيل المثال؛ الاجسام المضادة لذ 11-6؛ الشدفات؛ والمشتقات التي يمكنها التثبيط من تأشير كل من تشكيلة المجاور والمقابل بواسطة 6. وبالإضافة إلى ذلك؛ قام مقدمو الطلب بتصميم هندسياً مضادات ال 11.6 المذكورة للحصول على تصفية جهازية أكثر سرعة. وبتم وصف مضادات ال 11-6؛ على سبيل المثال؛ الاجسام المضادة ل IL-6 أو شدفات أو مشتقات منهاء في براءة الاختراع الدولية رقم 2014/074905. ويتعلق الاختراع 5 الحالي بأجسام مضادة ل IL-6 محسنة واستخداماتها. وكما استخدم هناء تشمل الأشكال أو المصطلحات المفردة Can’ a’ و "the! كلاً من المراجع الفردية والجمعية ما لم ينص السياق غير ذلك بوضوح. سمات مضادات ال IL-6 11-68
بشكل عام؛ يرتبط مضاد ال IL-6 11-68 الموصوف هنا بشكل خاص بالموقع ]1 (الموقع 2) من ال 11-6 ويكون مفيداً لمعالجة مرض عيني ذي الصلة ب IL-6 وأمراض أخرى معينة. ويمثل المرض العيني ذي الصلة ب 1176 مرض حيث تكون الأعراض أو الفعالية الحيوية غير المرغوب بها للمرض مرتبطة بالتعبير عن أو وجود ال 11-6. وفي بعض التجسيدات؛ يكون ال 1-68 الذي له ألفة مرتفعة لكل من ال 11-6 SV والمرتبط» مستقر نسبياً في الكائن الحي؛ ويمكنه تثبيط الارتباط ب 0 لرابطة 11-6 مع 11-68 (المشار إليه بمتراكب 11-68/11-6 أو ((IL-6R/IL-6 ويمكن أن يكون له تأثير علاجي. وبشكل ple يمثل ال 11768 جسم مضاد أو يكون مشتق من جسم مضاد. فعلى سبيل المثال» يكون ال 11-6 عبارة عن Fab مؤنسن عالي الالفة الذي يمكنه الارتباط بشكل خاص بالموقع IT ل 11-6 ويعيق على نحو فعال كل من تأشير 17-6 المجاور- و المقابل-. وفي Jie 0 آخرء يمثل ال 11-68 جسم مضاد مكتمل الطول؛ على سبيل (JU) جسم مضاد ل 1801 أو 02 وفي بعض التجسيدات؛ يُشكل اذ Fab أيضاً على شكل سياق ذي Fo مصمم هندسياً Fe- engineered sequence أو يكون عبارة عن جسم مضاد كامل الطول antibody 1011-16081. وفي بعض التجسيدات»؛ يكون لذ TL-6a ذي ال Fo المصمم هندسياً Fab Sia) ذي Fe مصمم هندسياً) 5 تصفية جهازية أسرع مقارنة بضابط ملاتم؛ Sle مقارنة بالجسم المضاد؛ الشدفة؛ او المشتقة منها المناظرة التي لا تشتمل على ال Fo المصمم هندسياً. وتوصف هذه السمات وسمات أخرى لذ IL-6a بشكل إضافي هنا. وقد صمم مقدموا الطلب مولدات المضاد IL-6 antagonists التي ترتبط بشكل انتقائي بالموقع 11 في 11-6 لتزويد تثبيط كلي لإرسال إشارات ال 11-6 نظراً لأنه يمكن للجزيئات أن تثبط ارتباط ال 0 130مع باذ «IL-6 بغض النظر Le إذا يكون ال 11-6 خالياً من الغشاء TL-6R أو SIL-6R أو مرتبطاً به. وبالإضافة لذلك؛ يمكن لاستهداف الربيطة 17-6 مقابل مستقبلة ال 11-6 أن يتجنب السمية والتصفية التي تتوسطها المستقبلة نظراً للسمية الخلوية التي تتوسطها الخلايا المعتمدة على الجسم المضاد .ADCC antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity ونظراً لأنه يلعب IL-6 دوراً مرضياً ووقائياً في abe) فإن استخدام المضاد IL) IL-6 5 66) لمعالجة مرض مصاحب لزيادة ال 11-6 يمكنه أن يحسن أوجه محددة لحالة مرضية؛ إنما يمكنه كذلك أن يتسبب في حدوث تأثيرات عكسية؛ مثل» تأثيرات جهازية. ويمكن لهذه الإزدواجية في مسارات ال 17-6 (أي قابلية أن يكون له تأثيرات مرغوية و/أو غير مرغوية) أن تجعل من غير المرغوب معالجة اضطراب مرتبط بال 1176 باستخدام عامل تثبيط جهازي .systemic inhibitor ووفقاً لذلك» يمكن أن تكون التراكيب والطرق المزودة هنا Basie لطرق المعالجة التي تثبط فعالية IL- 0 6 واحدة على الأقل؛ إنما لا يكون لها تأثيراً غير مفيد على الفعالية الإيجابية لل 11-6 إلى حدٍ ما
نظراً لأنه يمكن تحضير التراكيب للإعطاء الموضعي؛ مثلاً للإعطاء الموضعي في العين. فعلى سبيل الثال؛ في أوجه محددة؛ يُعد ال 11-68 بحيث يكون له حجماً مناسباً لإعطائه في مكان محدد. وفي بعض التجسيدات؛ يتمثل ال 11-68 في جسم مضاد كامل الطول. وفي بعض التجسيدات؛ يشتق اذ 11-6 من جسم مضاد ويكون بكمية حيث قد يكون لها مدة بقاء أطول في الجسم الزجاجي في العين وتسرب جهازي محدود. وفي بعض التجسيدات؛ يتمثل ال 11-68 في جسم مضاد معدل Sle) modified antibody جسم مضاد له حقل Fe معدل) حيث يكون له مدة بقاء أطول في الجسم الزجاجي في العين و/أو تسرب جهازي محدوداً بشكل أكبر مقارنة بجسم مضاد غير معدل مناظر. وفي بعض التجسيدات؛ يتمثل ال 11-68 في جسم مضاد 1802. وفي بعض الأوجه؛ يتمثل ال 11-68 في 11-68 صغير نسبياً Jie شدفة لجسم مضاد أو 0 مشتق aT لجسم مضاد حيث يقل عن جسم مضاد كامل الطول؛ مثل؛ Fab المشتق من جشم مضاد 6. وفي بعض الحالات؛ يكون لذ IL-6a حجماً يمكنه من المرور من gia واحد في النسيج AY حيث يكون له حراكيات عالية مقارنة بجسم مضاد 11-6 كامل الطول مناظر. وفي بعض التجسيدات؛ يتمثل ال 11-60 في Fab حيث تم تصميمه هندسياً ليكون Ba Baja حيث من المحتمل بدرجة أكبر أن يكون له مدة بقاء أطول في المكان الذي يعطى فيه مقارنةً بال Fab لوحده؛ Sie تتم ديمرة ال IL- 5 66 بواسطة حقل Ag Fe تجسيدات محددة؛ يتم تصميم حقل ال Fe هندسياً بحيث يكون لشق ال Fe ارتباط FeRn مخفض أو متناقص Cus يمكنه خفض التراكم الجهازي مقارنةً بنفس sale الارتباط TL-6 التي تتضمن النمط البري Fe ويمكن أن يتمثل حقل ال Fe الذي تم تصميمه هندسياً في؛ Sli حقل 1801 أو JgG2 Jia وعادةً ما يكون لمولدات المضاد ال 11-6 الموصوفة هنا ألفة عالية بشكل GIS للجسم 0 المستهدف الخاص بهاء 11-6 بحيث يكون فعالاً في التخفيف من تأثير غير مرغوب واحد على الأقل ل 11-6 وتكون ثابتة بشكل كافٍ لتكون Bute كمواد علاجية therapeutics وعموماً؛ يكون لذ Sle dL-6a J PK 11-68 مناسب لاستخدامه في العين عمر نصف طويل بدرجة كافية في موقع الإعطاء؛ مثلاً؛ الجسم الزجاجي؛ لتوفير أثر علاجي. وفي الأمثلة غير المحددة؛ يمكن أن يكون لذ PK عمر نصف لا يقل عن 8 أيام؛ 10 can 14 call 21 يوم 28 يوم أو 30 يوم. تعريف ارتباط مولدات المضاد ال 11-6 بالموقع II عموماً؛ يمكن استخدام df طريقة معروفة في التقنية لتكوين جزيء حيث يمكنه الارتباط بال (IL-6 على سبيل المثال» يمكن فحص مكتبات متعدد الببتيد polypeptide أو المكتبات الجزيئية لتحديد المركبات المرشحة في اختبار ما لتحديد قدرة متعدد الببتيد polypeptide أو مركب على 0 الإرتباط باذ 11-6. وحالما تم تحديد مذل هذا المركب المرشح؛ يمكن تحديد موقع الارتباط binding
site للمركب باستخدام الطرق المعروفة في التقنية. فعلى سبيل المثال؛ يمكن اختبار الجزيء لتحديد القدرة على الارتباط بال IL-6 الذي تم تطفيره في الموقع of الموقع CII أو الموقع Ag TIT التجسيدات؛ يحتفظ ال TL-6a الموصوف هنا بالقدرة على الارتباط بالمتراكب م11-6/11-68 ويا gars (IL-6 ارتباط المتراكب م11-6/1-680 بال 80130. وفي التجسيدات؛ يمكن أن يتنافس IL-6a الموصوف هنا مع 130مع للارتباط بالمتراكب 116/1160 مثلاً بواسطة الارتباط بالموقع 11 في Sass IL-6 اختبار فعاليات الارتباط هذه باستخدام الطرق المعروفة في التقنية. ويمكن اختبار المركبات المرشحة 11-68 على سبيل المثال؛ باستخدام نظام اختبار HEK- Blue™ IL-6 (إنفيفوجن dInvivoGen سان دييغو «(San Diego وتكون خلايا HEK-Blue™ IL- 6 عبارة عن خلايا HEK293 حيث أدخل عليها بشكل ثابت ال TL-6R البشري و جين SEAP Jil 0 قابل للتحريض بأل 51413 .STAT3-inducible reporter gene وبوجود ال IL-6 يتم تنشيط 3 وتتم إفراز ال .SEAP ويتم تقييم ال SEAP باستخدام» على سبيل QUANTI- «Jil Blue™ (إنفيفوجن dInvivoGen سان دييغو «(San Diego وتؤدي إضافة المضاد 11-6 إلى الخلايا إلى منع الإفراز أو خفض مستوى ال SEAP كنتيجة لتثبيط ال TL-6 الحر والمرتبط بالمستقبلة القابلة للذويان. وبشير ال Kp إلى ثابت الاتزان ay الارتباط binding affinity equilibrium constant للتفاعل بين الجسم المضاد ومولد المضاد المحدد أو للتفاعل بين شدفة الجسم المضاد ومولد المضاد. وفي التجسيدات؛ يرتبط الجسم المضاد أو شدفة الارتباط بمولد المضاد الموصوفة هنا بمولد المضاد (IL-6 Sli) له قيمة Kp حيث تقل عن أو تساوي ال 250 بيكو جزيئي؛ مثلاً تقل عن أو تساوي ال 5 بيكو جزيتي؛ 220 بيكو جزيئي؛ 210 بيكو جزيئي؛ 205 بيكو جزيئي؛ 150 بيكو جزيئي؛ 0 100 بيكو جزيتي؛ 50 بيكو جزيتي؛ 20 بيكو جزيئي؛ 10 بيكو جزيئي؛ أو 1 بيكو جزيئي. ويمكن أن تحدد ded ال Kp باستخدام الطرق المعروفة في التقنية؛ على سبيل المثال باستخدام الرنين البلازموني السطحي ¢surface plasmon resonance على سبيل المثال باستخدام نظام من نوع بياكير (علامة تجارية ) .BiaCore™ وبشير Kor إلى ثابت معدل التفكك dissociation rate constant للتفاعل بين الجسم المضاد 5 ومولد المضاد المحدد أو متراكب شدفة الجسم المضاد ومولد المضاد. ويمكن تحديد ثابت معدل التفكك باستخدام الرنين البلازموني السطحي plasmon resonance 066]:»_ على سبيل المثال باستخدام نظام من نوع بياكور (علامة تجارية ) 31800:8777. وبمكن أن يسهم Kofr البطيء نسبياً في الحصول على سمات مرغوية لمادة علاجية؛ Sie مما يسمح بإعطاء عامل التثبيط بشكل أقل تكرراً لكائن بحاجة لهذه المعالجة. 0 النوحية
في بعض التجسيدات؛ يرتبط ال 11-68 الموصوف هنا نوعياً بجسيم مستهدف؛ مثل؛ 6-]1. ogee يشير مصطلح "الارتباط النوعي LS" specific binding استخدم هنا إلى أنه يرتبط الجزيء بشكل مفضل بجزيء مختار ويظهر الفة أقل بكثير لجزيء AT واحد أو أكثر. وفي التجسيدات؛ تقل ألفة الارتباط لجزيء AT عن تلك للجسيم المستهدف بمقدار يبلغ 1 2؛ 3 أو أكثر.
LS 5 وصف أعلاه؛ يمكن أن يوجد ال 11.6 على شكل IL-6 حر و IL-6 مرتبط ب م1168 قابل للذويان. وقد حدد مقدموا الطلب الموقع ]1 في ال 11-6 بصفته جسم مستهدف أمثل بالنسلة للمضاد 11-6 مقارنةٌ بعامل التثبيط الذي يرتبط بالموقع 1 في IL-6 ويمكن لعامل التثبيط الذي يرتبط بالموقع 1 تثبيط ارتباط ال 11-6 all باذ 11-680. غير أنه؛ لا يمكن لعامل التثبيط هذا أن يمنع الفعالية التي تبدأها المتراكبات IL-6/IL-6R الموجودة مسبقاً باستثناء الاستبدال الذي تحدده قيمة Kot
Shall 0 وكبديل آخرء يعتبر عامل التثبيط الذي يرتبط بال dL-6Ra مناسباً بدرجة أقل نظراً لأنه قد يكون له قدرة محدودة على منع فعالية 11.6 ما لم يوجد في تراكيز الإشباع. ونظراً لأنه يكون مقدار مستقبلة ال 11-6 عالياً إلى حدٍ ما عموماً مقارنة بمقدار ال (IL-6 فإنه يكون عامل التثبيط المرتبط بال 11-680» مناسباً بدرجة Jaf نظراً لأنه قد يكون له قدرة محدودة على منع فعالية 1.6 ما لم يوجد في تراكيز الإشباع. ونظراً لأنه يكون مقدار مستقبلة ال 11-6 الياً إلى حدٍ ما عموماً مقارنة
5 بمقدار ال 11-6؛ فإن هذه الطريقة قد تتطلب إعطاء مقدار كبير على نحو غير مرغوب لتركيب حييث يثبط فعالية ال 17-6 بواسطة الارتباط بالمستقبلة. وفي التجسيدات؛ يمكن لمولدات المضاد 17-6 الموصوفة هنا Sie) الأجسام المضادة والشدفات والمشتقات منها الموصوفة هنا) أن تعيق فعالية ال IL-6 حتى عندما يرتبط ال IL-6 بال JL-6R ووفقاً لذلك؛ تتمثل (gan) فوائد ال TL-6a الموصوف هنا في أنه قد يستلزم إعطاء مقدار أقل نسبياً من التركيب لتحقيق تأثير علاجي مقارنة بعامل التثبيط
20 الذي يستهدف مستقبلة ال 11-6. وقد أثبت أنه يتم تصفية الأجسام المضادة للمستقبلة بشكل سريع بواسطة التصفية التي تتوسطها المستقبلة حيث تحدد بشكل كبير lg PK dad مما يستلزم استخدام جرعات ST إعطاء جرعات بشكل اكثر تكراراً» أو كليهما. وإضافة لذلك؛ تطرح الأجسام المضادة للمستقبلة و الأجسام المضادة IL-6 للموقع 1 مشكلةٌ تتمثل في أنها يمكن أن تزيد من تركيز النسيج في ال IL-6 بواسطة تعطيل مسار التصفية التي تتوسطها المستقبلة العادية في الربيطة؛ مما يعرض
5 الكائن لإحتمالية وجود مستويات غير مرغوبة في ال 11-6 في نسيج ما. وبالإضافة لذلك؛ قد يستلزم استخدام عامل تثبيط يستهدف ال 11-6180 وجود عامل التثبيط بالقرب من كلا الموقعين اللذين يراد تثبيطهما وموقع ما حيث لا يكون ذلك مرغوياً؛ مثل المعالجة الجهازية. samy استخدام ال 11-68 الذي يرتبط بالموقع II الموقع الذي يرتبط به ال 80130؛ بالتثبيط بواسطة ال IL-6 الحر و ال IL-6 المرتبط بال 11-6 إنما لا ينشط كذلك مسار ال IL-6 بواسطة 130مع. ووفقاً لذلك» دون الرغبة
0 بالتقيد ab نظرية؛ تعد مولدات المضاد ال IL-6 الموصوفة هنا للارتباط بكلا شكلي ال 11-6 (القابل
للذويان والمرتبط بالمستقبلة)؛ بشكل نوعي ترتبط مولدات المضاد ال IL-6 بالموقع ]1 في (IL-6 حيث يكون قابلاً للوصول إليه بكلا الشكلين. ويمكن للتراكيب التي تحتوي على 117-68 كما وصف هنا أن تثبط إرسال إشارات المجاور والمقابل بواسطة ال 11-6. وفي بعض الحالات؛ تعد المركبات والطرق المزودة هنا لتزويبد إعاقة لل 1-6 فعالة تكفي dalled 5 إشارة أو عرض واحد على الأقل لاضطراب مرتبط بال 11-6؛ على سبيل المثال تثبيط تولد الأوعية angiogenesis و/أو الالتهاب. وتعتبر المركبات الموصوفة هنا مفيدة لمعالجة أمراض العين التي تتميز بمستوى عالٍ غير مرغوب من ال 11-6 في الجسم الزجاجي (انظر المرجع 15:257 Yuuki et al., J Diabetes Compl Funatsu et al., Ophthalmology 110: 1690,(2003); Oh et al., Curr Eye Res 35:1116 ;)2001(
(2010); Noma et al., Eye 22:42 (2008); Kawashima et al., Jpn J Ophthalmol 51:100 10 (2007); Kauffman et al., Invest Ophthalmol Vis Sci 35:900 (1994); Miao et al., Molec .(Vis 18:574(2012)
وعموماً؛ يكون ال 11-68 الموصوف هنا Ble عن مضاد فعال في عملية إرسال إشارات Ay .6 بعض التجسيدات؛ يكون لل 1-6 الموصوف هنا ألفة Alle نحو 11-6 على سبيل
المثال؛ قيمة 1050 أقل من أو تساوي 100 بيكوجزيئي في اختبار HEK-Blue IL-6 باستخدام IL- 6 تركيزه 10 بيكوجزيئي. ويمكن تحديد الألفة العالية لل TL-6a على أساس Kp dad لل dL-6a على سبيل المثال Kp ded التي لا تزيد عن 1 نانوجزيئي؛ لا تزيد عن 500 بيكوجزبئي؛ لا تزيد عن 0 بيكوجزيتي؛ لا تزيد عن 300 بيكوجزيئي؛ لا تزيد عن 240 بيكوجزيتي؛ أو لا تزيد عن 200 بيكوجزيئي.
ولإنتاج 1-68 إحيائي Sle) بروتين أو متعدد ببتيد Jie polypeptide جسم مضاد؛ شدفةء أو مشتقة منه) حيث يعتبر مفيداً لمعالجة اضطراب مرتبط بزيادة التعبير عن 11-6 أو فعاليته؛ فإنه يكون من المرغوب Bale أن يكون لذ 11-6 الإحيائي إنتاجية عالية. فعلى سبيل JB لا تقل الإنتاجية productivity المناسبة عن 1 غم/لتر Sle) 2 غم/لترء 5 غم/لترء أو 0 غم/لتر).
ولإعطاء مضاد 11-6 بشكل فعال؛ يستلزم أن يكون لعامل التثبيط قابلية ذويان متوافقة مع
5 التتركيز الذي يتم إعطاؤه عنده. فعلى سبيل المثال ؛ في Als الجسم المضاد كامل الطول 11-68؛ فإن الذوبانية لا تقل عن 20 ملغم/مل» لا تقل عن 10 ملغم/مل» لا تقل عن 5 ملغم/مل» أو لا تقل عن [ ملغم/مل.
وبالإضافة لذلك؛ للحصول على معالجة قابلة للتطبيق؛ ينبغي أن يكون لعامل التثبيط ثبات dle عند درجة Bla الجسم في أماكن الإعطاء والفعالية بالإضافة إلى ثبات التخزين. وفي
0 التجسيدات؛ يكون لعامل التثبيط Ti des لا تقل عن 60م Sie) لا تقل عن 2°60 لا تقل عن 5م لا تقل عن 2°65 لا تقل عن 2°70 لا تقل عن 73"م؛ أو لا تقل عن 75”م). وفي
التجسيدات؛ يكون لعامل التثبيط ثبات عالٍ عند درجة حرارة الجسم في أماكن الإعطاء والفعالية بالإضافة إلى ثبات التخزين. وفي التجسيدات؛ يكون لعامل التثبيط قيمة Tonser لا تقل عن 45أم؛ Oe لا تقل عن 50"م؛ لا تقل عن 51"م؛ لا تقل عن 2°55 لا تقل عن 70"م؛ أو لا تقل عن 0م. ويمكن تحديد طرق تحديد كل من قيمتي ال Tin و Toner باستخدام الطرق المعروفة في التفنية. ويمكن اختيارمولدات المضاد التي يكون لها السمات المرغوية من أنواع من الجزيئات المعروفة في dail) على سبيل المثال الأجسام المضادة؛ بما في ذلك الشدفات ومشتقات الجسم المضاد 11-6 المستهدف للموقع 17 الذي يحافظ عموماً على السمات الكافية للجسم المضاد IL-6 الأصلي Sie) خواص الارتباط (Aust pall وتتضمن مولدات المضاد هذه قدفات ميكل cscFys شدفات Fy التي تم تصميمها هندسياً لتتضمن شق (Fe والأجسام المضادة كاملة الطول التي تم
0 تصميمها هندسياً ليكون لها نمطاً مختلفاً عن الجسم المضاد IL-6 المستهدف للموقع IT الأصلي. Ag بعض الأوجه؛ يشتمل ال 1-6 المكشوف aie هنا على موقع ارتباط مولد المضاد بجسم مضاد بشري حيث يمكنه التنافس أو التنافس المتبادل مع جسم مضاد أو شدفة منه حيث يمكنها الارتباط بالموقع ]1 في ال JL-6 فعلى سبيل (JB) يمكن أن يتكون الجسم المضاد أو الشدفة منه من حقل VH وحقل VL مكشوف عنهماء وبشتمل حقلا ال VH وال VL على مجموعة من
CDRs 5 للجسم المضاد المرتبط بالموقع 17-6 المكشوف عنه. ويمكن استخدام أية طريقة مناسبة لتحديد الحقل و/أو الحاتمة epitope المرتبطة باذ (IL-6a على سبيل المثال؛ بواسطة تطفير مواقع مختلفة على ال 11-6. وتؤثر تلك المواقع التي تمنع فيها الطفرات ارتباط ال IL-6a وربيطة ال 11-6 أو تقلل منه في الارتباط باذ 17-68 بشكل مباشر أو تؤثر بشكل غير مباشر على موقع الارتباط مثلاً؛ بواسطة التأثير على شكل ال JJL-6 ويمكن استخدام 0 طرق af لتحديد الأحماض الأمينية المرتبطة باذ IL-6 فعلى سبيل المثال؛ يمكن استخدام مسح ارتباط الببتيد cpeptide-binding scan مثل اختبار المناعة المرتبط بالإنزيم الذي أساسه PEPSCAN .PEPSCAN-based enzyme linked immuno assay (ELISA) وفي عملية من هذا النوع لمسح ارتباط الببتيد؛ يتم فحص الببتيدات المتراكبة بشكل قصير التي يتم اشتقاقها من مولد المضاد بشكل منتظم للارتباط بعضو الارتباط binding member ويمكن قرن الببتيدات بشكل تساهمي بسطح 5 حامل لتشكيل صفيف من الببتيدات. ويمكن أن يكون للبتيدات شكلاً خطياً أو محدداً. ويمكن انتاج الشكل المحدد باستخدام ببتيدات بها شق سيستثين cys cysteine طرفي عند كل طرف في سياق الببتيد. ويمكن قرن شقات ال cys تساهمياً بشكل مباشر أو غير مباشر بسطح dala بحيث يتم الاحتفاظ بالببتيد بشكل حلقي. ووفقاً لذلك؛ يمكن أن يشتمل ببتيد مستخدم في الطريقة على شق cys مضاف إلى كل طرف في سياق الببتيد المناظر لشدفة مولد المضاد. ويمكن كذلك استخدام ببتيدات 0 ثائية الحلقة Cus double looped peptides يوضع شق اذ cys بشكل إضافي عند أو بالقرب من
منتصف سياق الببتيدات. ويمكن قرن شقات ال cys تساهمياً بشكل مباشر أو غير مباشر بسطح حامل بحيث تشكل clang) شكلاً ثنائي الحلقة؛ بوجود حلقة واحدة على كل جانب Gal ال cys المركزي. ويمكن تكوين الببتيدات صناعياً؛ وعليه يمكن لشقات ال cys أن تصمم هندسياً في مواقع مرغوية؛ بالرغم من أنها لا توجد طبيعياً في سياق الموقع IT الخاص بال IL-6 وبشكل اختياري؛ يمكن اختبار الببتيدات الخطية والمحددة باستخدام اختبار ارتباط الببتيد. ويمكن أن يتضمن اختبار ارتباط الببتيد تحديد Sie) باستخدام (ELISA مجموعة من الببتيدات التي يرتبط بها عضو الارتباط حيث يكون للببتيدات سياق من الأحماض الأمينية المناظرة لشدفات ال 17-68 Sle) الببتيدات التي تتضمن شقات متجاورة يبلغ عددها Joa ¢5 10 أو 15 في ال 11-68)؛ ومحاذاة الببتيدات من أجل تحديد أثر الشقات المرتبطة بواسطة عضو الارتباط» حيث يشتمل الأثر على شقات مألوفة للببتيدات 0 المتراكبة. وبشكل بديل أو إضافي؛ يمكن استخدام طريقة مسح ارتباط الببتيد لتحديد الببتيدات التي يرتبط بها ال 11-68 بنسبة إشارة:ضجيج مختارة على الأقل.
ويمن استخدام طرق أخرى معروفة في التقنية لتحديد الشقات المرتبطة بالجسم المضاد؛ و/أو لتأكيد نتائج مسح ارتباط الببتيدات؛ بما في ذلك على سبيل المثال؛ التطفير الموجه نحو الموقع site. Sle) directed mutagenesis كما هو موصوف هنا)؛ تبادل دوتيريوم الهيدروجين hydrogen «deuterium exchange 5 طيف الكتلة emass spectrometry الرنين النووي المغنطيسي nuclear (NMR magnetic resonance و Ga تصوير البلورات بالأشعة السينية .X-ray crystallography Sale ما يتمثل ال 11-6 المفيد كما وصف هنا في جزيء جسم مضاد بشري»؛ جزيء جسم مضاد مؤنسن؛ أو شدفة ارتباط منه. وعموماً؛ يتمثل الجسم المضاد في جسم مضاد أحادي النسيلة. ويمكن أن يكون أصل هذا الجسم المضاد بشري؛ فأري ؛ جرذي؛ (lan أرنبي ؛ غنمي؛ خنزيري ؛ أو
0 بقري ويمكن تكوينه وفقاً للطرق المعروفة لأولئك المتمرسين في التقنية. Losec يشتمل ال 11-68 على الأقل على ال CDRs لجسم مضاد حيث يمكنه الارتباط بشكل نوعي ب 17-6 IL-6 Sle) بشري)؛ بالموقع 11 في ال IL-6 ويمكن أن تكون البنية المعدة لحمل ال CDR أو مجموعة ال CDRs وفقاً للاختراع عبارة عن سياق سلسلة ثقيلة أو خفيفة لجسم مضاد أو جزءِ كبير منه حيث يوضع CDR أو مجموعة ال CDRs في موقع مناظر لذ CDR أو 5 مجموعة ال CDRs في حقول متغيرة للجسم المضاد VH و VL الموجودة طبيعياً المشفرة بواسطة جينات الغلويلين المناعي معادة الترتيب. ويمكن تحديد بنيات ومواقع الحقول المتغيرة للغلويولينات المناعية بالرجوع إلى كابات Kabat ومعاونيه» 1983م (انظر المرجع National Institutes of «(Health وتحديثاته التي يمكن إيجادها تحت عنوان Kabat" " باستخدام محرك البحث في الإنترنت. ويكون ال 68-.11؛ كما كشف عنه Ble Bale lia عن جسم مضاد Gua يشتمل Bale على 0 حقل VH و/أو حقل VL لجسم مضاد. وبشتمل VH Jia على مجموعة من CDRs للسلسلة ثقيلة
«VHCDRs ويشتمل حقل VL على مجموعة من CDRs للسلسلة خفيفة ay .VLCDRs تزويد أمثلة لهذه ال CDRS هنا في الأمثلة. ويمكن أن يشتمل جزيء الجسم المضاد على حقل VH لجسم مضاد حيث يشتمل على VHCDR2 «VHCDRI و VHCDR3 وهيكل. (Sag أن يشتمل بشكل بديل أو أن يشتمل كذلك على VL dia لجسم مضاد حيث يشتمل على 710011 VLCDR2 و VLCDR3 5 وهيكل. ويتم الكشف هنا عن مولدات المضاد IL-6 التي تشتمل على 7110011 و/أو VHCDR2 و/أو VHCDR3 مثل تلك التي كشف عنها هنا و/أو 710011 و/أو VLCDR3 l/s VLCDR2 مثل تلك المكشوف عنها هنا. ويمكن أن يشتمل ال 17-68 على واحد أو أكثر من اذ CDRs في أي من الأجسام المضادة؛ الشدفات أو المشتقات الموصوفة هنا. وبمكن أن يشتمل ال 11-68 على 0 مجموعة من ال «VHCDR2 «VHCDRI is) VHCDRs و 17100(83). ويمكن اشتقاق ال CDRs من واحد أو أكثر من الأجسام المضادة؛ الشدفات أو المشتقات الموصوفة هنا. فعلى سبيل المثال» يمكن اشتقاق ال VLCDRs من جسم مضاد مماثل ل أو مختلف عن اذ .VHCDRs وعموماً؛ تتم مزاوجة حقل VH مع حقل VL لتزويد موقع ارتباط الجسم المضاد بمولد المضاد. فعلى سبيل المثال» تتم مزاوجة حقل HC للسياق برقم تعريف: 1 أو السياق برقم تعريف: 3 مع dis ال 16 للسياق برقم تعريف: 2. وفي التجسيدات؛ يشتمل جزيء الجسم المضادء الشدفة؛ أو المشتقة منه على 7110011؛ «VHCDR2 و VHCDR3 للسياق برقم تعريف: 37. وفي التجسيدات؛ يشتمل جزيء الجسم المضاد؛ الشدفة؛ أو المشتقة die على 7100181» ¢«VLCDR2 و/أو VLCDR3 للسياق برقم تعريف: 38. ويمكن أن يشتمل IL-6a الموصوف هنا على مناطق ثابتة في الجسم المضاد أو أجزاء منهاء 0 مثلاً مناطق ثابتة في الجسم المضاد البشري أو أجزاء منها. فعلى سبيل المثال» يمكن أن يرتبط حقل VL عند الطرف الكربوني بالحقول الثابتة للسلسلة الخفيفة للجسم المضاد بما في ذلك سلاسل CK أو CL بشرية. وعلى نحو مماثل» يمكن أن يرتبط 11-68 قائم على VH is عند الطرف الكربوني له لسلسلة ثقيلة للغلوبولين المناعي Dia) حقل (CHI برمتها أو جزء منها مشتقة من أي نمط إسوي للجسم المضاد؛ TgE (IgA «IgG lie و 1814 وأي من الأصناف الثانوية للنمط الإسوي؛ بشكل 5 محدد IgGl 1802 1803 و 1804. وفي التجسيدات؛ يتم تصميم الجسم المضاد أو شدفة الارتباط بمولد المضاد هندسياً لخفض أو التقليل من فعالية ال ADCC وفي التجسيدات؛ يتمثل الجسم المضاد وفقاً للاختراع في جسم مضاد 1502. وفي التجسيدات؛ يشتمل الجسم المضاد وفقاً للاختراع على هيكل 1802 منطقة ثابتة؛ أو منطقة Fe 1802 كما وصف هنا. ويمكن أن توجد الأجسام المضادة 1802 في صورة ثلاثة أشكال إسوية بنيوية رئيسية: -1802
<A 1802-8 و IgG2-A/B (انظر المرجع Wypych J. et al.
Journal of Biological Chemistry. 283:16194-16205 ,2008( وتنتج هذه التغايرية البنيوية عن التشكيلات المختلفة لروابط ثنائي الكبريتيد disulfide التي تصل أذرع Fab بمنطقة الرزة -hinge region وفي الشكل الإسوي IgG2- <B يشتمل كلا ذراعي Fab على روابط ثنائي كبربتيد disulfide التي تصل السلسلة الثقيلة و الخفيفة بمنطقة الرزة. ويتمثل الشكل الإسوي TgG2-A/B في نمط هجين بين الشكلين الإسويين 1802-4 و Cus 08 يشتمل ذراع Fab واحد فقط على روابط ثنائي disulfide a pS التي تريط السلسلة الثقيلة والخفيفة الموجودة في ذراع ال Fab الواحد بمنطقة الرزة. ويحدث تحويل الجسم المضاد 1802 بين اثنين من أو كافة الأشكال الإسوية البنيوية المختلفة؛ المشار إليها أيضاً بخلط روابط ثنائي الكبريتيد disulfide بشكل طبيعي في جسم الحي أو في أنبوب الاختبار للأجسام المضادة التي 0 توجد طبيعياً والمأشوية. ونتيجة لذلك؛ تشتمل التركيبات المكونة من الأجسام المضادة 1802 في dul على خليط غير متجانس من الأشكال الإسوية 1802-8 1802-8 و 1802-4/8. ومكن أن يكون للأشكال الإسوية 1802 المختلفة خواص وظيفية فريدة ومختلفة؛ مثل الاختلافات في الثبات؛ التكتل» dag ll ارتباط مستقبلة Fe أو الفعالية. ويمكن أن يؤثر وجود أشكال إسوية متعددة أو مستويات عالية من الشكل الإسوي المحدد في تركيبة الجسم المضاد 1802 بشكل سلبي على الثبات؛ 5 التكتل» أو الفعالية. ويزود الاختراع الحالي جسماً مضاداً حيث يكون له Bal التي تتمثل في أن يوجد بشكل رئيسي بالشكل الإسوي 1802-8 أو 1gG2-A/B ولا يوجد الجسم المضاد وفقاً للاختراع الراهن بالشكل الإسوي 1802-3 أو لا يوجد بالشكل الإسوي 1802-3 لمقدار كبير من الزمن. وعليه؛ تعد التراكيب والتركيبات التي تشتمل على الجسم المضاد وفقاً للاختراع Jaf تغايراً مقارنة بالأجسام المضادة 1802 0 الأخرى المعروفة في التقنية؛ وعليه؛ تفضل بشكل أكبر لاستخدامها في تطبيق علاجي. وتتضمن التراكيب التي تشتمل على الجسم المضاد وفقاً للاختراع بشكل رئيسي الأشكال الإسوية 1502-8 و/أو 19G2-A/B للجسم المضاد. وفي أحد التجسيدات؛ يتضمن التركيب الذي يشتمل على الجسم المضاد الموصوف هنا ما لا يقل عن 50» 60» 70 80 90 95 96 97؛ 98 أو 799 من الشكل الإسوي 1502-8 أو 1gG2-A/B للجسم المضاد. وفي أحد التجسيدات؛ 5 يتضمن التركيب الذي يشتمل على الجسم المضاد الموصوف هنا ما لا يقل عن 60« 70« 80؛ 90 95 96 97 98 أو 799 من الشكلين الإسوبيين 1502-8 و 1gG2-A/B معاً. وفي هذه التجسيدات؛ لا يتضمن التركيب الذي يشتمل على الجسم المضاد الموصوف هنا مقداراً كبيراً من الأشكال الإسوية 1502-13 للجسم المضاد. فعلى سبيل المثال؛ يشتمل التركيب على ما يقل عن 10؛ 5 1 0.5؛ أو 70.1 من الأشكال الإسوية 1502-3 للجسم المضاد. وفي بعض الحالات؛ يتم تعديل الجسم المضاد وفقاً للاختراع كذلك باستخدام الطرق المعروفة
في التقنية التي تؤدي إلى تشكيل سياق له نمط أليلي allotype محدد؛ على سبيل المثال نمط أليلي Cua يسود في مجموعة من أصل جغرافي محدد. وفي بعض الحالات؛ يتم تعديل منطقة ثابتة للسلسلة الثقيلة البشرية لتحقيق هذا الغرض. ويمكن أن يكون ال TL-6a عبارة عن جزيء لجسم مضاد؛ شدفة ارتباط منه؛ أو شكل مغاير» به واحد أو أكثر من «CDRs على سبيل المثال»؛ مجموعة من (CDRs داخل هيكل الجسم المضاد. فعلى سبيل المثال؛ يمكن تطعيم واحد أو SST من CDRs أو مجموعة ال CDRs لجسم مضاد Mi) جسم مضاد أو شدفة أو مشتقة منه كما وصف هنا) في هيكل (مثلاً؛ هيكل بشري) لتزويد جزيء لجسم مضاد. ويمكن أن تشتق المناطق الهيكلية من سياقات جينات الخط الإنتاشي البشري؛ أو أن يكون من أصل غير الخط الإنتاشي. ويمكن تعديل الشقات الهيكلية VH و/أو VL كما شرح وتم تمثيله هناء على سبيل المثال باستخدام تطفير موجه نحو الموقع. ويمكن shal تغييرات على الأحماض الأمينية في واحدة أو أكثر من المناطق الهيكلية و/أو واحدة أو أكثر من CDRs مشتقة من جسم مضاد 11-68 يستهدف نحو الموقع ]1 في ال IL-6 (المسمى هنا ب "جسم مضاد IL-6 مرجعي ("reference IL-6 antibody باستخدام الطرق والمتغيرات 5 المعروفة في التقنية. ويتم هنا تضمين مولد المضاد 11-6 الناتج الذي يحتفظ بالارتباط بالموقع ]1 في 11-6 (مثلاً الموقع TT في 11-6 بشري) و يكون له ale ما لا يقل عن نفس ألفة الارتباط أو ألفة lel مقارنةٌ بالجسم المضاد IL-6 المرجعي. وفي بعض الحالات؛ لتحسين متغير مثل الثبات؛ يمكن إدخال تغيير حيث يتسبب في حدوث انخفاض في أآلفة الارتباط لل IL-6a المشتق مقارنةً باذ IL-6a المرجعي (مثلاً؛ الجسم المضاد المرجعي) لتكوين 1-68 مفيد. وفي بعض التجسيدات؛ Nie في 0 بعض الحالات حيث يتعلق المرجع بارتباط 70 أو متغير الحركيات الدواثية pharmacokinetic Jie PK parameter عمر النصف في عمر النصف الزجاجي أو الجهازي (مثلاً؛ في all البلازماء مصل cal بلازما الدم؛ cas الكلى؛ نسيج AT أو مائع في الجسم)؛ فإنه يمكن أن يتمثل الجسم المضاد المرجعي في جسم مضاد حيث لا يرتبط نوعياً باذ 11-6. ويمكن أن يتضمن تغيير في سياق الأحماض الأمينية لمتعدد الببتيد 17-68 استبدال شق 5 واحد أو أكثر من شقات الأحماض الأمينية بحمض أميني غير موجود طبيعياً أو غير قياسي؛ تعديل شق واحد أو أكثر من شقات الأحماض الأمينية ليصبح في صورة شكل غير موجود طبيعياً أو غير قياسي؛ أو ادخال واحد أو أكثر من حمض أميني غير موجود طبيعياً أو غير قياسي في السياق. وتوصف أمثلة أعداد ومواقع التغييرات في السياقات وفقاً للاختراع في مكان AT هنا. وتتضمن الأحماض الأمينية الموجودة طبيعياً الأحماض الأمينية .1 القياسية التي يبلغ عددها 20 المحددة gs 0 ف فى كت للع لد ¢W (FP قى كاد «Q ات «C كل (R لل له E وفقاً لشيفرتها
أحادية الحرف القياسية. وتتضمن الأحماض الأمينية غير القياسية أي شق آخر حيث يمكن دمجه في سلسلة متعدد ببتيد أو ينتج من تعديل شق حمض أميني موجود. ويمكن أن تتمثل لأحماض الأمينية غير القياسية في تلك الموجودة طبيعياً أو غير الموجودة طبيعياً. وتكون العديد من الأحماض الأمينية غير القياسية الموجودة طبيعياً معروفة في Jie dum 4-هيدروكسي برولين -4 chydroxyproline 5 5-هيدروكسي ليزين ¢5-hydroxylysine 3-مثيل هستيدين «3-methylhistidine و 7١-أسيتيل سيرين 11-20607156:106. وستوضع شقات الأحماض الأمينية تلك التي تشتق من موقع ألفا فقط عند الطرف النتروجيني لسياق الحمض الأميني. وعادة ما يكون الحمض الأميني عبارة عن حمض أميني .1. By بعض الحالات؛ يتمثل الحمض الأميني في حمض أميني 0. ويمكن أن يشتمل التغيير بناء على ذلك على تعديل الحمض الأميني .1 ليصبح في صورة؛ أو استبداله ب 10 حمض أميني WD وتعرف الأشكال المضاف إليها مثيل 6091 أسيتيل acetyl و/أو فسفوريل phosphoryl للأحماض الأمينية «lS ويمكن أن تخضع الأحماض الأمينية في الاختراع الحالي لهذا التعديل. ويمكن أن تشتمل سياقات الأحماض الأمينية في حقول الجسم المضاد وأعضاء الارتباط وفقاً للاختراع على أحماض أمينية غير طبيعية أو غير قياسية كما وصف هنا. ويمكن دمج الأحماض الأمينية غير القياسية Si) الأحماض الأمينية 0) في سياق أحماض أمينية باستخدام الطرق المعروفة في التقنية؛ Se في تصنيع الجزيء أو التعديل ما قبل التصنيع أو استبدال الحمض الأميني. وفي بعض الحالات؛ يستخدم الحمض الأميني D لزيادة PK dad لل AL-6a (Sag تكوين مناطق VH أو VL جديدة حيث تحمل السياقات المشتقة من ال lg CDR للاختراع باستخدام التطفير العشوائي random mutagenesis لواحد أو JST من سياقات الأحماض 0 النوووية VH و/أو VL المختارة لتكوين طفرات داخل الحقل المتغير بأكمله. فعلى سبيل المثال؛ يمكن استخدام تفاعل البوليمراز المتكرر PCR polymerase chain reaction الخاضع للخطأً (انظر المرجع )2006( 1:755-768 ٠ (Chao et al., Nature Protocols, وفي بعض التجسيدات؛ يتم إجراء واحدة أو اثنتين من عمليات استبدال داخل الحقل المتغير بأكمله أو مجموعة اذ (CDRs ويمكن استخدام الطرق الأخرى المعروفة في التقنية لتكوين طفرات؛ على سبيل المثال التطفير الموجه نحو 5 مواقع؛ عادةً في واحد أو أكثر من .CDRs وتتمثل إحدى الطرق لإنتاج جسم مضاد 11-68 في تغيير حقل VH مثل تلك الموصوفة هنا بواسطة إضافة؛ إلغاء؛ استبدال أو ادخال واحد أو أكثر من الأحماض الأمينية. ويمكن دمج الحقل 1 المتغير مع حقل VL dia Ji) VL المكشوف عنه هنا)؛ حيث يمكن كذلك تغييره أو كما وصف هنا وباستخدام الطرق المعروفة في التقنية. ويتم اختبار هذا الجزيئات التي تم تغييرها لتحديد 0 قدرتها على الارتباط بالموقع 17 في ال 11.6 وبشكل اختياري لتحديد الخواص المرغوية Jie الألفة
العالية مقارنة بتلك لجزيء مرجعي. وفي بعض الحالات؛ يمكن أن يشتمل VL dis أو VH متغير على هذه التغييرات التي يبلغ عددها 1 2؛ 3 4 أو 5 Sa) عمليات استبدال للأحماض الأمينية
التي يبلغ عددها ١1 2 3؛ 4 أو 5). وفي التجسيدات؛ يتمثل ال 11-6 وفقاً للاختراع في شدفة أو جسم مضاد Cum يرتبط بالموقع 11 في ال 11.6 ويشتمل على موقع ارتباط مولد المضادء مثلاً يمكن أن يرتبط بالموقع !1 في IL-3 6 ويتم الحصول عموماً على شدفات الجسم المضاد Wy للاختراع By من جزيء لجسم مضاد مرجعي (أصلي)؛ Jie جزيء لجسم مضاد يشتمل على سياق برقم تعريف: 41 و سياق برقم تعريف: 2. ويمكن تكوين شدفات الجسم المضاد باستخدام الطرق المعروفة في التقنية DNA (Jie المأشوب؛ الانقسام الإنزيمي enzymatic cleavage (مثلاً باستخدام ببسين pepsin أو باباثين «(papain الانقسام الكيميائي chemical cleavage لجسم مضاد Sie) الاختزال الكيميائي chemical reduction للروابط الجسرية لثنائي الكبربتيد (disulfide وتتضمن شدفات الجسم المضاد التي تشتمل على موقع ارتباط الجسم المضاد بمولد المضادء دون حصرها 3 جزيئات مثل «Fv «scFv «Fab-SH «Fab' (Fab «Fd «dAb ومناطق متغيرة ثابتة ثنائي الكبريتيد disulfide stabilized variable region disulfide dsFy ويمكن تصميم جزيئات الجسم المضاد الأخرى المختلفة التي تتضمن مواقع ارتباط مولد 5 المضاد في الجسم المضاد هندسياً؛ بما في ذلك (F(ab)3 (F(ab’)2 Sie أجسام ثنائية؛ أجسام ثلاثية؛ أجسام del) وأجسام صغيرة. وتوصف أمثلة جزيئات الجسم المضاد وطرق تكوبنها واستخدامها فيما ola عن هوليجر Holliger وهدسون Hudson في عام 2005م في المرجع Nat Biotechnol 23:1126-6. وتتمثل أمثلة غير محددة لشدفات الارتباط في شدفة Fab مكونة من «VL 711؛ حقل لسلسلة خفيفة ثابتة CL و حقول لسلسلة ثقيلة ثابتة 1 ¢CH1 شدفة Fd مكونة من حقول VH 0 و «CHL شدفة Fy مكونة من حقول VH و VL في جسم مضاد مفرد؛ شدفة ماهمل مكونة من حقل VH أو ¢VL حقول CDR مفصولة؛ شدفة (F(ab')2 شدفة ثنائية التكافؤ bivalent fragment حيث تشتمل على شدفتي Fab متصلتين؛ جزيء 77 ذي سلسلة مفردة scFv حيث يرتبط حقل VH وحقل VL بواسطة رابط ببتيدي حيث يسمح باقتران الحقلين معاً لتشكيل موقع ارتباط ge المضاد؛ ديمر Fy ذي سلسلة مفردة AS النوعية Ji) المكشوف die في طلب براءة الاختراع الدولي رقم 1993/011161) و جسم ثنائي؛ حيث يتمثل في شدفة متعددة التكافؤ أو متعددة النوعية يتم تكوينها باستخدام جين اندماجي (مثل المكشوف عنه في طلب براءة الاختراع الدولي رقم 94/13804). ويمكن تثبيت scFv (Fy أو جزيئات الجسم الثنائي بواسطة دمج الروابط الجسرية لثنائي الكبربتيد disulfide التي تريط حقول VH و (aig VL كذلك استخدام الأجسام الصغيرة التي تشتمل على scFv مرتبط بحقل CH3 بصفتها ه11-6. وتتضمن الشدفات والمشتقات الأخرى لجسم مضاد التي 0 يمكن استخدامها بصفتها 11-68 شدفة Cua (Fab' تختلف عن شدفة Fab بواسطة إضافة بعض
شقات للأحماض الأمينية عند طرف الكربوكسيل carboxyl في حقل CHI للسلسلة الثقيلة؛ بما في ذلك سيستثين cysteine واحد أو أكثر ناتج من منطقة الرزة في الجسم المضاد؛ و 1700511 حيث يتمثل في شدفة Fab' فيها يحمل شق (شقات) السيستثين cysteine في الحقول الثابتة مجموعة ثيول thiol حرة. وفي بعض الحالات؛ يتم تعديل 11-68 الذي يمثل شدفة الجسم المضاد كيميائياً لتحسين أو إضافة خاصية مرغوية؛ على سبيل المثال المعالجة باستخدام متعدد (إثيلين) غليكول poly(ethylene)glycol لزيادة عمر النصف أو الدمج. ويتمثل dAb (جسم مضاد حقلي) في شدف ارتباط بمولد المضاد مونمرية صغيرة لجشم مضاد (المنطقة المتغيرة لسلسلة ثقيلة أو خفيفة). وتوجد شدفة dAbs 711 طبيعياً في عائلة الجمال Sig) 0 الجمال و حيوانات اللامة) ويمكن إنتاجها بواسطة تمنيع جمل بمولد مضاد مستهدف؛ فصل الخلايا البائية B cells النوعية Algal المضاد وتنسيل جينات pile AD من LAY البائية المستقلة. ويمكن أن يتمثل ال 11-68 وفقاً للاختراع الحالي في dAb يشتمل على حقل VH أو VL كما وضح جوهرباً هناء أو حقل VH أو VL حيث يشتمل على مجموعة من CDRs كما وضح جوهرياً هنا. وتشتمل الأجسام المضادة للاختراع الحالي على أجسام مضادة ثنائية الخصوصية حيث يتم 5 دمج منطقتين متغيرتين مختلفتين في نفس الجزيء. ويمكن دمج 11-68 كجزءِ من جسم مضاد ثنائي الخصوصية تم تحضيره باستخدام طرق معروفة في التقنية؛ على سبيل المثال» يتم تحضيره كيميائياً أو من WDA ورمية هجينة. (Say أن يكون مثل هذا الجزيء عبارة عن شدفة لجسم مضاد ثنائي الخصوصية لنوع تمت مناقشته أعلاه. وفي مثال غير محدّد لطريقة alg جسم مضاد ثنائي الخصوصية هي بيتي تكنولوجي BITE™ technology (علامة تجارية) حيث يمكن استخدام حقول 0 الارتباط لجسمين مضادين ذات خصوصية مختلفة وريطها Hale عن طريق ببتيدات مرنة قصيرة. وهذا يعمل على دمج جسمين مضادين على سلسلة متعدد ببتيد مفردة قصيرة. (Sarg إنشاء أجسام ثنائية scFv بدون منطقة (Fe باستخدام حقول متغيرة chad تعمل على تخفيض تأثيرات التفاعل المضاد -للأنماط الذاتية بشكل محتمل. ويمكن إنشاء أجسام مضادة ثنائية الخصوصية بصفته (IgG 2 ثنائي الخصوصية؛ (FabPEG كأجسام ثنائية أو غيرها ك scFv ثنائي الخصوصية. 5 وبالإضافة إلى ذلك؛ يمكن ربط اثنين من الأجسام المضادة ثنائية الخصوصية باستخدام طرق روتينية معروفة في التقنية لتشكيل أجسام مضادة رباعية التكافؤ. وتكون الأجسام الثنائية ثنائية الخصوصية؛ المقابلة للأجسام المضادة ثنائية الخصوصية بأكملها مفيدة جزئياً لأنه يمكن بنائها وتعبيرها في الأجسام الثنائية الموجودة في E.coli (وببتيدات متعددة أخرى عديدة؛ Jie شدفات الجسم المضاد) لخصوصيات ترابط صحيحة يمكن اختيارها سريعاً 0 باستخدام عرض عاثي (طلب براءة الاختراع الدولية رقم 1994/13804) من المكتبات. وإذا تم
الحفاظ على ذراع واحدة للجسم الثنائي ثابتة؛ على سبيل (Joa) بخصوصية موجهة مقابل الموقع II ل IL-6 من ثم يمكن صنع مكتبة حيث تتفاوت الذراع GAY) وجسم مضاد ذو خصوصية مختارة (Kay صنع الأجسام المضادة ثنائية الخصوصية بأكملها عن طريق طرق بديلة مصممة هندسياً كما هو موصوف في طلب براءة الاختراع الدولية 1996/27011؛ طلب براءة الاختراع
الدولية رقم 1998/50431 وطلب براءة الاختراع الدولية رقم 2006/028936. وفي بعض الحالات؛ يشتمل IL-6a وفقاً للاختراع على موقع ارتباط لمولد مضاد في جزيء ليس الجسم المضاد؛ على سبيل المثال؛ بواسطة دمج واحد أو أكثر من «CDRs مثلاً مجموعة من 0185©؛ في سقالة بروتينية ليست جسم مضاد؛ كما هو موصوف بشكل إضافي أدناه. وفي بعض 0 الحالات؛ يتم دمج CDRs في سقالة ليست جسم مضاد. (Sars توفير موقع الارتباط ]1 ل IL-6 عن طريق ترتيبة من CDRs على سقالة بروتينية ليست جسم cline مثل الفيبرونيكتين أو سيتوكروم من نوع lB عن Goh الاختيار عشوائيا أو تغيير بقايا الحمض الأميني لحلقة في سقالة بروتينية لمنح خصوصية الارتباط للموقع ]1 ل 11-6. وتكون السقالات لتصميم مواقع الارتباط الجديدة في البروتينات هندسياً معروفة في التقنية. على سبيل المثال؛ يتم الكشف عن السقالات البروتينية لتقليد 5 الجسم المضاد في طلب براءة الاختراع الدولية رقم 200034784 Ally تصف بروتينات (تقلد الجسم المضاد) تشتمل على حقل من نوع فيبرونيكتين111 له dala عشوائية واحدة على الأقل. ويمكن توفير سقالة مناسبة حيث يتم فيها تطعيم واحدة أو أكثر من Nis «CDRs مجموعة من HCDRs عن طريق أي عضو حقلي لفصيلة جين الغلوبيولين المناعي. ويمكن أن تكون السقالة بروتين بشري أو غير بشري. وأحد ميزات السقالة البروتينية التي ليست جسم مضادء بأنها يمكن أن تعمل على 0 توفير موقع ارتباط بالمولد المضاد في جزيء سقالة أصغر و/أو أسهل للصنع من بعض جزيئات الأجسام المضادة على الأقل. وقد يمنح الحجم الصغير لعضو الارتباط خواص فسيولوجية مفيدة؛ Nie القدرة على الدخول (WAN الاختراق بعمق داخل الأنسجة أو الوصول إلى الأهداف في التراكيب الأخرى؛ أو للارتباط في تجاويف بروتينية للمولد المضاد المستهدف. Bale تكون البروتينات التي لها أساس ثابت وواحد أو أكثر من الحلقات المتغيرةء حيث يكون سياق الحمض الأميني للحلقة أو 5 الحلقات متغير بشكل محدد أو بشكل عشوائي لخلق موقع ارتباط بمولد المضاد الذي يرتبط بمولد المضاد المستهدف. وتشتمل Jie هذه البروتينات على حقول ارتباط-180 لبروتين A من aureus .5؛ ترانسفيرين» تيترانيكتين» فيبرونيكتين Sle) استخدام الحقل العاشر من نوع فيبرونيكتين]1 )؛ ليبوكالين بالإضافة إلى غاما-مبلور وسقالات أفيلين Affilin™ (علامة تجارية) (بروتينات سيل؛ هالي؛ ألمانيا). وتتضمن الأمثلة على الطرق الأخرى أجسام صغيرة صناعية بناءً على سيكلوتيدات - 0 بروتينات صغيرة لها روابط ثنائية الكبريتيد داخل الجزيء؛ بروتينات صغيرة Sli) فيرسابوديز
(علامة تجارية) ¢Versabodies™ اميونكس انك cAmunix Inc ماونتن فيو؛ كاليفورنيا) وبروتينات متكررة الأنكرين (داربينز» Sle من مولكيولارز بارتنرز أغ؛ واجيستراس زوريش-مكليرن سوسرا). وتشتمل مثل هذه البروتينات أيضاً على حقول بروتينية صغيرة مصممة هندسياً lie على سبيل المثال» حقول-مناعية (انظر على سبيل المثال» نشرة براءات الاختراع الأمريكية ذات الأرقام 2003/082630 و2003/157561). وتحتوي الحقول المناعية على منطقة تحديد تكميلية (CDR) واحدة على الأقل لجسم مضاد. ويمكن أن يشمل 17-68 أحماض أمينية إضافية؛ Hie لنقل ميزات وظيفية أخرى إلى الجزيء بالإضافة إلى القدرة على الارتباط بمولد مضاد. وفي بعض الحالات؛ يحمل 11.68 علامة يمكن الكشف عنهاء أو يتم إرفاقها مع مادة سامة 0 أو توسيم شق أو إنزيم Sle) عن طريق رابط أو رابطة ببتيدية). على سبيل المثال؛ يمكن أن يشتمل 11.68 على موقع حفزي (مثلاًء في Jin إنزيمي) بالإضافة إلى موقع ارتباط مولد مضاد lia) موقع ارتباط للموقع ]1 ل 11-6)؛ حتى يرتبط موقع الارتباط بمولد المضاد مع مولد المضاد وبالتالي يوجه الموقع الحفزي إلى IL-6 أو 11-6/متراكب JL-6R ويمكن أن يعمل الموقع الحفزي؛ في بعض الحالات» على تثبيط الوظيفة البيولوجية ل TL-6 إضافياً؛ Sle عن طريق انقسام (IL-6 11-6؛ أو 5 أي جزيء آخر مشترك مع د11-6/متراكب 6-]1. وفي بعض الجوانب»؛ يتضمن الاختراع جسم مضاد ل 11-68 الذي تم تعديله بالمقارنة مع الجسم المضاد المرجعي لتبديل؛ على سبيل المثال؛ زيادة أو انخفاض أو حذف وظيفة التأثير البيولوجي ل ه11-6. وفي أحد الأمثلة؛ يتم تعديل منطقة Fe أو يتم استبدال حقل Fe الأصلي بحقل Fe معدل لتبديل الحركيات الدوائية لل TL-6a المعدل بالمقارنة مع الأصل غير المعدل. وفي بعض 0 التجسيدات؛ يتم تصميم 11-68 هندسياً ليكون به هيكل 1802. وفي تجسيدات أخرى؛ يكون 11-68 عبارة عن هيكل ل 1802 أو 1801 وبه Fe معدل يزيد من all الارتباط لذ ه1776 عند درجة حموضة يبلغ 6.0 ولا يعمل على تبديل ألفة الارتباط عند درجة حموضة 7.0 فعلياً بالمقارنة مع الأصل أو 11-6 مرجعي آخر. وفي التجسيدات؛ يتم تعديل Fe Jia ويكون 11-68 به تراكم جهازي منخفض؛ jac نصف منخفض» و/أو تصفية جهازية مرتفعة بالمقارنة مع الأصل أو مرجع آخر ل 11-68. وفي بعض التجسيدات؛ يتم تعديل الجسم المضاد 1-68 ليزيد من تعديل الجزء المكمل وسمية الخلايا التي تعتمد على الجزء المكمل. وفي جوانب أخرى؛ يتم تعديل الجسم المضاد ل IL- 6a ليزيد من قدرة الجسم المضاد بالمقارنة مع الجسم المضاد المرجعي لتنشيط الخلايا الفعالة والمشاركة في سمية الخلايا التي تعتمد على الجسم المضاد ©800. وفي بعض الحالات؛ يمكن تعديل الأجسام المضادة التي تم الكشف عنها هنا لتحسين قدرتها على تنشيط الخلايا الفعالة والمشاركة 0 في سمية الخلايا التي تعتمد على الجسم المضاد ADCC ولتحسين قدرتها على تعديل الجزء المكمل
والمشاركة في سمية الخلايا التي تعتمد على الجزءِ المكمل CDC وفي بعض التجسيدات؛ يتم تعديل الأجسام المضادة التي تم الكشف عنها هنا لتخفيض قدرتها على تعديل الجزء المكمل والمشاركة في سمية الخلايا التي تعتمد على الجزءِ المكمل 00©2. وفي تجسيدات gal يتم تعديل الأجسام المضادة لتخفيض قدرتها على تنشيط الخلايا الفعالة والمشاركة في سمية الخلايا التي تعتمد على الجسم المضاد ©806. وفي تجسيدات lad GAT يمكن تعديل الأجسام المضادة التي تم الكشف عنها هنا لتقليل قدرتها على تنشيط الخلايا الفعالة والمشاركة في سمية الخلايا التي تعتمد على الجسم المضاد ADCC ولتقليل قدرتها على تعديل الجزء المكمل والمشاركة في سمية الخلايا التي تعتمد على الجزءِ المكمل CDC ومن المفيد Bale تجنب النقل المتكرر لجرعة 11-68 على سبيل المثال؛ عند نقلها عن 0 طريق حقنها في العين. ولتسهيل هذه السمة؛ في بعض التجسيدات؛ أن يكون jee النصف عند موقع Sle (Jail الجسم الزجاجي؛ ل 11-68 كما تم الكشف عنه هنا هو 4 أيام على الأقل» على سبيل المثال» 7آيام على «J 9 أيام على «JV 11 يوم على الأقل؛ أو 14 يوم على الأقل. وفي بعض التجسيدات؛ متوسط عمر النصف ل 11-68 هو يومين على الأقل؛ 3 أيام على الأقل؛ 4 أيام على الأقل؛ 5 أيام على الأقل؛ 6 أيام على الأقل» 7 أيام على الأقل؛ 8 أيام على الأقل؛ 9 أيام 5 على الأقل»؛ 10 أيام على الأقل» 11 يوم على الأقل؛ 12 يوم على الأقل ؛ 13 يوم على الأقل» 14 يوم على الأقل» 15 يوم على الأقل؛ 16 يوم على الأقل؛ 17 يوم على «BY 18 يوم على الأقل؛ 9 يوم على «BY 20 يوم على (BY) 25 يوم على (JY) 30 يوم على الأقل» 40 يوم على الأقل؛ 50 يوم على الأقل؛ أو 60 يوم على الأقل. وتكون طرق زيادة عمر النصف للجسم المضاد معروفة في التقنية؛ على سبيل المثال كما هو موصوف في براءة الاختراع الأمريكية رقم 6277375 0 وشرات طلب براءة الاختراع الدولية ذات الأرقام 1998/23289 و 1997/3461. وفي بعض التجسيدات؛ يكون عمر النصف لذ 11-68 أكبر من موقع نقل الهدف؛ مثلاً الجسم الزجاجي؛ من عمر النصف الجهازي؛ مثلاً, عمر النصف في الدم؛ المصلء البلازماء Call) الكبد؛ الكلية؛ أو مائع جسمي أو نسيج آخر. وفي تجسيد AT يوفر الاختراع أداة للتصنيع بما في ذلك حاوية. وتشتمل الحاوية على 5 تركيب يحتوي على 11-68 كما تم الكشف die هناء ووليجة تغليف أو علامة تشير بأنه يمكن استخدام التركيب dalled الاضطراب المتعلق ب 11-68. وعادة؛ يكون التركيب عبارة عن 11-68 في تركيب يشتمل على سواغ مقبولة صيدلياً. Ay بعض الحالات؛ يكون الاختراع عبارة عن طقم تشتمل على تركيب يحتوي على IL-6a كما تم الكشف عنه هناء وتعليمات لإعطاء جرعة من التركيب للكائن الذي بحاجة ليخضع للمعالجة. وفي التجسيدات حيث يكون 17-68 مرغوب (dy مثلاً؛ لتحسين احتجاز 17-68 عند أو بالقرب
من موقع JE) يمكن ربط شق يمكن أن يزيد من الحجم لكنه لا يؤثر فعلياً بشكل عكسي على وظيفة TL-6a (مثلاًء ألفة الارتباط ل 11-6 لذ 11-6 أو متراكب (IL-6 [/IL-6R ب 11-68. على سبيل JU ¢ يمكن تصميم Fab هندسياً بشكل وراثي ليتم تعبيره كمتعدد ببتيد مفرد يحتوي على Fab وشق .Fc 5 وفي التجسيدات حيث يكون حجم 11-68 صغير نسبياً مرغوياً به؛ يمكن استخدام شدفات IL-6 على سبيل المثال؛ شدفة Fab أو scFv ويكون حجم الجسم المضاد IgG حوالي 2.5 10% ale sii” )150 كيلودالتون)» ويكون حجم Fab حوالي x8.3 10 !! نانوغرام )50 كيلودالتون)؛ ويكون حجم scFv حوالي 4.2 x 11710 نانوغرام (25 كيلودالتون). وفي بعض التجسيدات؛ يكون حجم 11.68 الذي تم وصفه هنا اقل من حوالي x8.3 1710 نانوغرام )50 كيلودالتون). ويمكن أن 0 يكون حجم مثل هذه المضادات؛ على سبيل المثال» أقل من أو يساوي x8.3 10 !! نانوغرام )50 كيلودالتون) وأكبر من 1.7 x 10 !! نانوغرام (10 كيلودالتون)؛ أقل من أو يساوي x8.3 10 !! نانوغرام )50 كيلودالتون) وأكبر من 3.3 x 10 '' نانوغرام (20 كيلودالتون)؛ أو أقل من أو يساوي ale sili 10 3 (50 كيلودالتون) وأكبر من أو يساوي 4.2 Xx 10 !! نانوغرام )25 كيلودالتون). وفي بعض الحالات؛ يمكن تحسين ثبات المادة المضادة لل Sle (qL-6 جسم مضاد أو مثبط آخر به كبريتيدات (ASE عن طريق خلق تغيير حيث يكون واحداً أو أكثر من الجسور ثنائية الكبربتيد ثابتاً أكثر في الجزيء الأصلي. ويمكن أن يكون من الفوائد الأخرى lial 1-68 معينة التي تم وصفها هنا هو توفر الجزيئات الفعالة التي لها حجم مناسب لنمط النقل؛ موقع النقل؛ أو لنمط النشاط. على سبيل المثال؛ (Sa استخدام 11-68 في نسق Fab لطلب موضعي. وبتم وصف طرق لتصميم مثل هذه الجزبئات 0 هندسياً وتكون معروفة في التقنية. مؤشرات/مرض مرتبط ب IL-6 تشتمل الأمراض التي يمكن معالجتها ب د11-6 للاختراع على تلك الأمراض حيث يتم ريط IL-6 المرتفعة بحالة المرض أو المتطلبات السابقة لحالة المرض. وتشتمل مثل هذه الأمراض على تلك حيث يدار تولد الأوعية والالتهاب عن طريق إسهام 11-6 بباثولوجيا المرض. وهذا يتضمن 5 أمراض حيث ترتفع IL-6 بالمقارنة مع المستويات الطبيعية؛ Sie حيث ترتفع 17-6 داخل الجسم الزجاجي (مثلاً؛ الأوديما البقعية السكرية؛ اعتلال الشبكية السكري؛ التهاب القزحية) او أنسجة العين. وتشتمل الأمثلة على أمراض عين معينة تتضمن؛ بدون تحديدات؛ العين الجافة Sle) مرض العين الجافة dry eye disease أو متلازمة العين الجافة (dry eye syndrome التهاب الملتحمة التحسسي callergic conjunctivitis التهاب العنبية cuveitis انحلال بقعي مرتبط بالعمر age-related macular (AMD degeneration 30 اعتلال الشبكية السكري التكاثري proliferative diabetic retinopathy
«PDR الأوديما البقعية السكرية diabetic macular edema DME انفصال الشبكية تشرمي المنشاً Jaws) (RRD Rhegmatogenous retinal detachment الوريد الشبكي retinal vein occlusion (RVO التهاب النخاع والعصب البصري 2NMO neuromyelitis optica وتشتمل الاضطرابات العينية (AY) التي يمكن معالجتها على تلك المتسببة عن طريق صدمة Jie زرع قرنية corneal ctransplant 5 خدش قرنية corneal abrasion أو إصابة فيزيائية Jie ذلك بالعين. ووفقاً لذلك؛ يشتمل الاختراع على معالجة كائن خاضع للمعالجة به مرض مرتبط ب IL-6 مع 11-68 الموصوف هنا. وفي بعض التجسيدات؛ يعتبر المرض المرتبط ب 11-6 مرض التهابي. وفي بعض التجسيدات؛ يكون المرض عبارة عن زرق glaucoma وفي بعض التجسيدات؛ يكون المرض عبارة عن ألم بالعين. 10 وفي بعض التجسيدات؛ تشتمل معالجة الكائن الخاضع للمعالجة أيضاً على تحديد سواء كان بالكائن الخاضع للمعالجة مرض مرتبط ب 11-6 أو oY واختيارياً؛ سواء كان الكائن الخاضع للمعالجة مقاوم لمعالجات تثبيطية (gal ليست لل (ie IL-6 المنشطات أو العلاج بمضاد- VEGF وهناك مشكلة واحدة بالعلاجات التي أساسها جسم مضاد معين الفعالة عند موضع خاص ia العين؛ على سبيل المثال داخل الجسم الزجاجي؛ وهي بأنها تؤثر عكسياً على نتائج إعطاء الجرعة الجهازية. وهناك حل واحد وهو بتوفير علاجات يمكن أن يتم نقلها موضعياً على نحو معارض len كما هو ممثل من قبل الجزيئات الموصوفة هنا. ولأن بعض العلاجات التي يتم نقلها موضعياً؛ مثلاً؛ إلى داخل الجسم الزجاجي؛ ستظهر إلى حد ما Bilan من المفيد تصميم جزيء له تقلب جهازي سريع نسبياً. وقد عمل مقدم الطلب على تصميم أمثلة الأجسام المضادة ل TL-6 هندسياً مصممة لتقلب جهازي سريع؛ Sie بالمقارنة مع الجزيء الأصلي أو الجسم المضاد المرجعي. وقد 0 "تم تحقيق ذلك عن Gob تبديل حقل Fe لتعديل ارتباط FeRn بالجزيء؛ ia لتخفيض إعادة التدوير بواسطة FcRn لذ JL-6a الأوديما البقعية السكرية DME تتضمن الأوديما البقعية السكرية DME انسداد وتسريب الأوعية الدموية؛ مما يؤدي إلى تخفيض الحدة pad) والعمى بشكل محتمل. وتشتمل المعالجات المعيارية ل DME على إعطاء الجرعة موضعياً للمنشطات أو الأجسام المضادة لمضاد VEGF 5 وعلى أية Js يكون معظم المرضى مقاومين لهذه العلاجات. وتتضمن مسببات مرض الأوديما البقعية السكرية مكونات تولد الأوعية؛ الالتهاب؛ والتوتر المؤكسد. ويتم تخفيض 11-6 عن Gob نقص الأكسجين وفرط سكر الدم ويمكن أن يزيد من الالتهاب الوعائي؛ النفاذية الوعائية؛ وتولد الأوعية المرضي. ويمكن أن يعمل IL-6 بشكل مباشر على تحفيز تعبير (Kass VEGF أن يعمل على ضبط التوعي الحديث المشيمي choroidal neovascularization في النماذج الحيوانية. وفي 0 مرضى DME تكون مستويات IL-6 العينية مرتبطة إيجابياً بالسماكة البقعية وشدة المرض. وتزيد
مستويات 17-6 بشكل منقول في المرضى اللذين يفشلون في العلاج المضاد ل VEGF في حين تنقص في المرضى المستجيبين لمضاد VEGF ووفقاً «iN يكون إعطاء الجرعة لذ IL-6a الموصوف هنا لمعالجة مرضى السكري معاً مع العلاج المضاد لذ VEGF أو كبديل للمعالجة المضادة لل «VEGF من بينها المرضى اللذين لا يستجيبون للعلاج المضاد لل 712017. وقد تعمل معالجة الأوديما البقعية باستخدام 11-68 على تحسين السلامة عن طريق إزالة الحاجة إلى تثبيط أي من الآليتين بشكل كامل لتثبيط مسبب المرض» وبالتالي حفظ بعض من المرغوب؛ القواعد الفسيولوجية لكل سيتوكينين. ووفقاً لذلك» يمكن أن تعمل المعالجة ب 17-68 الموضعي معاً مع تثبيط VEGF على
تخفيض تكرار الجرعة وتخفيض التأثيرات العكسية للمعالجة. وفي DME يكون هناك علاقات موجبة بين مستويات IL-6 الزجاجية وكلاً من شدة المرض 0 والكائنات الخاضعة للمعالجة المقاومة لذ VEGF . ووفقاً لذلك؛ يمكن استخدام 11.68 كما هو موصوف هنا لمعالجة الكائنات الخاضعة للمعالجة المقاومين للمعالجة بالمنشطات؛ العلاج المضاد لل (VEGF أو كليهما. وفي بعض الحالات؛ يتم استخدام 17-60 معاً مع العلاج المضاد لذ VEGF أو للعلاج
بالمنشطات؛ Sie لمعالجة DME ويمكن استخدام IL-6 الموصوفة هنا لمعالجة الاضطرابات Jie السرطان؛ Nie سرطان 5 البروستات ¢prostate cancer لوكيميا منسععانعا» ورم نقوي متعدد cmultiple myeloma مرض التهابي (مثل مرض تكاثتري التهابي مزمن (chronic inflammatory proliferative diseases ومرض مناعي ذاتي» Jie التهاب المفاصل الروماتيدي crheumatoid arthritis مرض كاستلمان (قَرْط lilt للعقدة الليمفاوية Cel Gey أو «giant or angiofollicular lymph node hyperplasia sel! ورم عابي ليمغومي cal Lp «lymphoid hamartoma للعقدة الليمفاوية [ole gl الْجْرَببي) 0 الإلتهاب المفصلي juvenile idiopathic arthritis (nial (بما فيه الالتهاب المفصلي اليفعي متعدد المفاصل polyarticular juvenile idiopathic arthritis و الالتهاب المفصلي_ اليفعي الجهازي (systemic juvenile idiopathic arthritis مرض ستيل (بما فيه التهاب مفصلي يفعي مجهول السبب juvenile idiopathic arthritis ومرض ستيل البادئ في البالغين adult onset Still’s ¢(discase مرض ستيل البادئ في البالغين؛ الداء النشواني من نوع (A ألم العضلات الروماتيدي «polymyalgia rheumatica 5 تهدأة الالتهاب الزليل lal سلبي المصل seronegative symmetrical synovitis مع وذمة اتطباعية (pitting edema التهابات مفصلية لفقرة espondyloarthritides مرض بهجت (بما فيه معالجة المظاهر_العينية)؛ تصلب الشرايين catherosclerosis الصدفية psoriasis 483 حمامية جهازية «systemic lupus erythematosis التهاب العضلات polymyositis (اعتلال عضلي التهابي (inflammatory myopathy التهاب 0 الغضاريف relapsing polychondritis (SU الناعور المكتسب من نوع A acquired hemophilia
(A التصلب المتعدد cmultiple sclerosis أنيميا بسبب الالتهاب» ومرض كرون .Crohn’s disease وتكون مضادات 11-6 مفيدة Load لمعالجة أمراض عصبية معينة؛ على سبيل (Jal «depression SY) ومرض الزهايمر .Alzheimer’s disease وتشتمل الأمراض الأخرى التي يمكن معالجتها باستخدام IL-6a الموصوف هناء بدون تحديد؛ على تصلب جهازي systemic sclerosis التهاب شرياني تاكاياسو (Takayasu arteritis التهاب الشريان ذو الخلايا العملاقة giant cell arteritis دا «graft versus host disease Bal Jia pa ومتلازمة دورية مرتبطة بمستقبلات عتسمتمدر: TNF-receptor-associated periodic TNF TRAPS الجرعة 10 ويمكن إعطاء جرعة من الجسم المضاد 11-6 أو شدفة منه إلى الكائن الخاضع للمعالجة Sle) مريض) الذي يعبر Nis مستويات عالية غير طبيعية من IL-6 ويمكن إعطاء جرعة من الجسم المضاد أو شدفة die مرة واحدة؛ أو يمكن إعطاء الجرعة مرات عدة. (Sarg إعطاء جرعة من الجسم المضاد؛ء على سبيل (JB) من 3 مرات في اليوم إلى مرة واحدة كل ست شهور أو أكثر. ويمكن أن يكون إعطاء الجرعة مجدولاً مثلاً 3 مرات في cand) مرتين في اليوم؛ مرة في اليوم؛ مرة 5 كل يومين» مرة كل 3 oll مرة في الأسبوع» مرة كل أسبوعين» مرة كل «ged مرة كل شهرين» Be كل 3 شهور؛ ومرة كل 6 شهور. (Sarg إعطاء جرعة من الجسم المضاد أو شدفة die مرة واحدة بشكل مستمر عن طريق مضخة صغيرة أو بطريقة أخرى Sie كبسولة بطيئة الإطلاق قابلة للزرع أو عن طريق خلية ممحفظة تنتج الجسم المضاد أو شدفة منه. (Sarg إعطاء جرعة من الجسم المضاد أو شدفة die عن طريق alia) الفم؛ داخل الأنف؛ بالاستنشاق» داخل الوريد؛ تحت الجلا؛ 0 داخل العضلات؛ بالحقن؛ داخل العين»؛ داخل الورم. (Sag إعطاء جرعة من الجسم المضاد أو شدفة die مرة واحدة؛ على الأقل مرتين أو على الأقل فترة من الزمن حتى تتم معالجة الحالة؛ تخفيفها أو شفائها. ويمكن إعطاء جرعة من الجسم المضاد أو شدفة die لمدة من الزمن طالما الحالة ما زالت موجودة. وسيتم إعطاء جرعة من الجسم المضاد أو شدفة منه aS من التركيب الصيدلي كما هو موصوف أعلاه. وستكون الجرعة من الجسم المضاد Bile في مدى يتراوح من 0.1 إلى 100 5 ملغم/كغم؛ 0.5 إلى 50 ملغم/كغم؛ 1 إلى 20 ملغم/كغم؛ ومن 1 إلى 10 ملغم/كغم. وبمكن أن يتم قياس تركيز المصل من الجسم المضاد أو شدفة منه عن طريق أي طريق مناسبة. وتكون هناك سمة واحدة لمركبات معينة موصوفة هنا وهي بأنها تحتاج جرعة غير متكررة lus على سبيل المثال» مرة واحدة في الأسبوع» مرتين في الأسبوع» 3 مرات في الأسبوع؛ مرة كل أربع أسابيع؛ مرة كل أسبوعين» مرة كل 8 أسابيع» مرة كل 12 أسبوع؛ مرة كل 16 أسبوع؛ مرة كل 32 أسبوع؛ مرة 0 واحدة كل ped مرة كل شهرين» مرة كل 3 شهور» مرة كل 6 شهور. وفي بعض الحالات يتم إعطاء
جرعة المركب على أساس الحاجة؛ المحددة على سبيل المثال من خلال حالة الكائن الخاضع للمعالجة. وهناك سمة لمضادات 11-6 الموصوفة هنا والتي تسمح لإعطاء الجرعة بشكل غير متكرر نسبياً وهي توليفة من قدرة عالية تم الحصول dade على الأقل bits عن طريق إبطاء Jud بمجرد ما يرتبط ب 11-6 والقدرة على نقل تركيز عالي نسبياً من المركب.
وفي بعض الحالات؛ يتم إعطاء 177-68 كعلاج أحادي الدواء. Ag تجسيدات أخرى؛ يتم إعطاء جرعة 1-68 بشكل مصاحب مع methotrexate lof dine أو أي عقار مضاد لالتهاب المفاصل معدل لمرض CAT توليد الأجسام المضادة
يمكن إنتاج الجسم المضاد لذ 11-68 أو مشتقاتها أو شدفة منه باستخدام طرق معروفة في
0 التقنية We منهجية الجسم المضاد أحادي النسيلة (مثلاًء Kohler and Milstein (1975) Nature 495 :6 ) ويمكن استخدام تقنيات أخرى أيضاً لإنتاج أجسام مضادة أحادية النسيلة عن Gob استحالة مكونة للورم أو فيروسية لخلايا لمفية من نوع B
ويمكن تحضير الأجسام المضادة بشكل خيمري أو مؤنسن بناءً على سياق الجسم المضاد أحادي النسيلة الفأري المحضر باستخدام طرق معروفة في التقنية. ويمكن الحصول على DNA
5 الذي يرمز إلى السلاسل الخفيفة والثقيلة للغلوبيولينات المناعية من ورم هجين فأري مراد دراسته وتصميمه هندسياً ليحتوي على سياقات غلوبيولينات مناعية غير فأرية (مثلاً؛ بشرية) باستخدام تقنيات حيوية جزيئية قياسية. على سبيل المثال؛ لإنشاء جسم مضاد خيمري؛ يكون ربط المناطق المتغيرة الفأرية بمناطق ثابتة بشرية باستخدام طرق معروفة في التقنية (انظر Sie براءة الاختراع الأمريكية رقم 4816567). ولإنشاء جسم مضاد مؤنسن؛ يمكن إدخال مناطق CDR الفأرية إلى هيكل بشري
0 باستخدام طرق معروفة في التقنية (انظر Sle براءة الاختراع الأمريكية رقم 5225539 وبراءات الاختراع الأمريكية ذات الأرقام 5530101؛ 5585089؛ 5693762؛ و 6180370).
وفي تجسيدات أخرى؛ يمكن أن يرتبط IL-6a الموصوف هنا ) lie جسم مضاد لمضاد IL-6 أو مشتقاتها أو شدفة منه) بالتحديد ب 17-6 بشري. وفي تجسيدات أخرى»؛ يمكن أن يرتبط IL- 6a بموقع 11 ل 11-6 Mia) موقع 11 ل 11-6 بشري).
وفي بعض التجسيدات؛ يكون الجسم المضاد ل 17-68 عبارة عن جسم مضاد بشري أحادي النسيلة. ويمكن تكوين مثل الأجسام المضادة هذه باستخدام (fy معدلة وراثياً أو معدلة كروموسومياً تشتمل على أجزاء لجهاز مناعي بشري أكثر من أن يكون جهاز فأري. وتشتمل الفئران المعدلة وراثياً أو المعدلة كروموسومياً هذه على Tg oh بشري" مثلاً هيو ماب (علامة تجارية) HuMAb Mouse® وكم ماوس (علامة تجارية) KM Mouse® (انظر مثلاًء براءات الاختراع الأمريكية ذات
الأرقام ¢5545806 ¢5569825 ¢5625126 ¢5633425 ¢5789650 5877397؛ ¢5661016
8 5874299؛ 5 5770429( وبراءة الاختراع الأمريكية رقم 5545807؛ أرقام نشرات 7©: طلب براءة الاختراع الأوروبية رقم 92/03918» طلب براءة الاختراع الأوروبية رقم 7 طلب براءة الاختراع الأوروبية رقم 94/25585؛ طلب براءة الاختراع الأوروبية رقم 2 طلب براءة الاختراع الأوروبية رقم 98/24884,؛ وطلب براءة الاختراع dug yo) رقم
99/45962؛ ورقم نشرة calla PCT براءة الاختراع الأوروبية 01/14424). وفي جانب آخرء يمكن زيادة الأجسام المضادة البشرية المضادة لل 17-6 باستخدام lB يحمل سياقات غلوبيولين مناعي بشرية على جينات محورة وكروموسومات محورة؛ Sle فأر يحمل جينات محورة وكروموسومات محورة بشرية ذات سلسلة ثقيلة وسلسلة خفيفة. ويتم وصف Jie هذه الفئران
بالتفصيل في نشرة PCT رقم طلب براءة الاختراع الدولية رقم 02/43478.
وتكون أجهزة الحيوان ذو الجين المحور الأخرى التي تعبر جينات الغلوبيولينات المناعية البشرية متوفرة في التقنية ويمكن استخدامها لزيادة الجسم المضاد 11-68. على سبيل المثال؛ يمكن استخدام جهاز ذو جين محور بديل يشار إليه ب Xenomouse™ (أبجينكس»؛ انك)؛ (Sag وصف مثل هذه (old على سبيل المثال» في براءات الاختراع الأمريكية ذات الأرقام 5939598؛ 1 ¢6114598 6150584؛ و6162963. وعلاوة على ذلك»؛ تكون أجهزة الحيوان ذو
5 الكروموسوم المحور الأخرى التي تعبر جينات الغلوبيولينات المناعية البشرية متوفرة في التقنية ويمكن استخدامها لزيادة الجسم المضاد IL-6 على سبيل المثال» يتم وصف الفئران التي تحمل OS من الكروموسومات المحورة ذات السلسة الثقيلة والكروموسومات المحورة ذات ALL الخفيفة في توميزوكو ومعاونيه (97:722-727 Proc Natl Acad Sci USA ,2000). ويمكن تحضير الأجسام المضادة البشرية أحادية النسيلة Lad باستخدام فئران SCID حيث يتم إعادة تشكيل الخلايا المناعية
0 البشرية حتى يتم توليد استجابة الجسم المضاد البشري عند كسب المناعة. ويتم وصف مثل هذه الفئران» على سبيل المثال» في براءات الاختراع المريكية ذات الأرقام 5476996 و5698767. مكتبة عاثيات البكتيريا العارضة للجينات
في بعض الحالات؛ يتم إنتاج الجسم المضاد IL-6a أو مشتقاته أو شدفة منه بطريقة تشتمل على تصنيع مكتبة من الأجسام المضادة البشرية باستخدام عاثية؛ غريلة المكتبة باستخدام 11-6؛ 5 مثلاًء 11.6 بشري؛ أو شدفة منه؛ Jie عاثية ترتبط ب (IL-6 والحصول على الجسم المضاد من العاثية. (Sarg عزل الجسم المضاد البشري المأشوب Load عن طريق غريلة مكتبة الجسم المضاد التوافقي المأشوب. dale تكون المكتبة عبارة عن مكتبة عاثية عارضة لجين scFv مولد عن طريق VH cDNAs 5 VL المحضر من MRNA المعزول من WIA 3. وتكون طرق تحضير وغريلة مثل 0 هذه المكتبات معروفة في التقنية. وتكون الأطقم لتوليد مكتبات عاثيات البكتيريا العارضة للجينات
متوفرة تجارياً (مثلاًء -27 the Pharmacia Recombinant Phage Antibody System, catalog no. ¢9400-01 و 240612 ٠ (the Stratagene SurfZAP™ phage display kit, catalog no. ويمكن استخدام طرق وكواشف أخرى في توليد وغريلة مكتبات عاثيات البكتيريا العارضة للجينات في التقنية (انظر Sle براءة الاختراع الأمريكية رقم 5223409؛ نشرات PCT ذات الأرقام طلب براءة الاختراع الدولية 92/18619 طلب براءة الاختراع الدولية 92/17271» طلب براءة الاختراع الدولية 1 . طلب براءة الاختراع الدولية 92/15679؛ طلب براءة الاختراع الدولية 93/01288؛ طلب براءة الاختراع الدولية 92/01047,؛ طلب براءة الاختراع الدولية 92/096960 Fuchs etal, Hay et al., Hum Antibod Hybridomas 3:81-85 ¢Bio/Technology 9:1370-1372 (1991) McCafferty et al., Nature 348:552- ¢Huse et al., Science 246:1275-1281 (1989) ¢(1992) EMBO J 12:725-734 (1993) ¢554 (1990) 10 لم Hawkins et al., J Mol Biol ¢Griffiths et Gram et al., Proc Natl ¢Clackson et al., Nature 352:624-628 (1991) ¢226:889-896 (1992) ¢Garrad et al., Bio/Technology 9:1373-1377 (1991) ¢Acad Sci USA 89:3576-3580 (1992) ¢tHoogenboom et al., Nuc Acid Res 19:4133-4137 (1991) و Barbas et al., Proc Natl Acad Sci USA 88:7978-7982 (1991) وفي مثال لعزل وإنتاج الأجسام المضادة البشرية ل IL-6 بميزات مرغوية؛ أولاً يتم استخدام الجسم المضاد البشري ل 11-6 لاختيار سياقات ذات سلسلة خفيفة وسلسلة ثقيلة لها نشاط ارتباط مشابه تجاه 6-]1؛ باستخدام طرق طبع حاتمة موصوفة في نشرة 701 ذات الرقم طلب براءة الاختراع الدولية 93/06213. وتكون مكتبات الجسم المضاد المستخدمة هنا في هذه الطريقة عبارة عن مكتبات scFv محضرة وتمت غريلتها كما هو موصوف في نشرة PCT طلب براءة الاختراع الدولية 0 ذات الرقم 92/01047؛ )1990( 348:552-554 Griffiths et al., 5 ¢McCafferty et al., Nature EMBO J 12:725-734 (1993)
ويمجرد أن يتم اختيار حقول VL و1711 البشري الابتدائي؛ يتم shal تجارب "امزج واوصل"؛ حيث يتم اختيار أزواج مختلفة من قطع VH و VL مختارة ابتدائياً لارتباط IL-6 لاختيار توليفات من زوج VL/VH مفضلة. ولاختيار سمات مفضلة ل 11-68 يمكن تبديل قطع VL و/أو VH لزوج
5 مختار بشكل عشوائي. ويمكن تحقيق نضوج الألفة خارج الجسم هذاء على سبيل Jha عن Gob
تضخيم حقول VH و.آ7١ باستخدام بادئات PCR مكملة ل CDR لواحدة أو لكل من حقول (VL VH
والتي تحتوي هذه البادئات على خليط عشوائي للقواعد النيوكليوتيدية الأربعة عند مواقع معينة حتى
ترمز منتجات PCR الناتجة إلى قطع VL VH يتم إدخال طفرات عشوائية إلى VL وأ/و VH
ويمكن sale) غريلة قطع VL VH المبدلة بشكل عشوائي لارتباط Sia (IL-6 بالموقع ]1 ل 11-6.
وما يلي غريلة وعزل الجسم المضاد 1762 من مكتبة عرض الغلوبيولينات المناعية المأشوية؛
يمكن استعادة الأحماض النووية التي ترمز الأجسام المضادة المختارة من حزمة العرض He) من جينوم العاثية) وتنسيلها Led إلى نواقل تعبير أخرى باستخدام تقنيات DNA مأشوية معروفة في التقنية. (Sarg تعديل ie الأجسام المضادة هذه لإنتاج شدفة جسم مضاد ie تلك الموصوفة هنا. الحركيات الدوائية PK pharmacokinetics يمكن إجراء اختبار ل PK باستخدام طرق موصوفة هنا و/أو طرق معروفة في التقنية. وهناك حاجز واحد للتحديدات اللازمة للحيوان» على سبيل المثال» تحديد PK وهي بأن ل 11-6 البشري أقل بنسبة 750 ils مع ذلك الموجود في بعض الحيوانات المستخدمة Bale لمثل هذا الاختبار. وهناك طريقة واحدة لاختبار PK وهي استخدام J ذو جينات محورة يعبر IL-6 البشري. By بعض التجسيدات؛ يتم استخدام رئيسات غير بشرية لتحديد PK 10 وفي بعض التجسيدات؛ يتم تبديل الجسم المضاد لمضاد IL-6 لتعديل PK الخاص به؛ Sle عن طريق تعديل حساسية درجة الحموضة لارتباط 10180. ويتم وصف طريقة للحصول على die هذه الطفرات في الأمثلة؛ ووفقاً لذلك» في بعض التجسيدات؛ يكون لل PK 11-68 معدل Liles بالمقارنة مع 11-68 الأصلي أو الجزيء المرجعي. وفي بعض الحالات؛ لا يتم تعديل PK أو تحسينه داخل الجسم الزجاجي. وفي بعض التجسيدات؛ يكون لل 11-68 PK جهازية مخفّضة Ole) عمر 5 نصف منخفض و/أو تصفية زائدة؛ مثلاً كما تم فحصه في مائع الدوران مثل cal البلازماء الليمف؛ أو المصل) بالمقارنة مع 1-6 الأصلي أو الجزيء المرجعي. نماذج لاختبار مضادات IL-6 يمكن اختبار مضادات 11-6 في نماذج مرض لنقل مرتبط ب (IL-6 بالتحديد لفعالية معالجة والتأثيرات المؤذية المحددة على خواص 11-6 المفيدة. على سبيل المثال؛ يمكن اختبار التهاب العنبية 0 في نماذج التهاب Lie تجريبية ذاتية المناعة في الجرذان أو الفثران ) Caspi, Invest Ophthalmol (Vis Sci 52:1873; Agarwal et al., 900:443-69, 2012 باستخدام بروتين رابط للريتينول المستقبل الضوئي البيني IRBP في كسب مناعة sald مساعدة فرينويد كاملة (CFA وتشتمل نماذج أخرى على تلك المعروفة في التقنية لالتهاب عيني محفز بالخلايا الشجيرية؛ نقل مقتبس WAL من نوع 7 فعالة مستنبتة؛ EAU عفوي في (IRBP TCR Tg (hi التهاب عيني محفز بالإندوتوكسين؛ التهاب 5 الحويضة ذاتي المناعة ))2011( 53:3264 ‘Haruta et al., Invest Ophthalmol Vis Sci (Yoshimura et al., Rheumatology 48:347-354 (2009) . ومن الأجهزة الأخرى التي يمكن استخدامها لفحص تأثيرات 17-68 في معالجة مرض مرتبط ب (IL-6 على سبيل Jad نموذج توعي Cuda مشيمي CNV choroidal neovascularization Krzystolik et al., Arch Ophthalmol ¢(Izumi-Nagai et al., Am J Pathol 170:6 (2007) (2002) 120:338( ونماذج لها علاقة بمرض السكري مثل تلك الوصوفة في كيرن ومعاونيه ) Animal
Update Report «¢ (Models Of Diabetic Complications Consortium (P01 DK57733) وتكون النماذج الحيوانية مفيدة لاختبار 11-68 في التهاب «(September 2001 — January 2004)
Asquith et al. (Eur J Immunol 39:2040-4 )2009(( المفاصل الروماتويدي في التقنية؛ مثلاًء انظر .and Kollias et al. (Ann Rheum Dis 70:1357-62 (2011) وتكون نماذج التوعي DME 5 AMD J تمثيلية؛ مثلاً؛ للحالات البشرية CNV وتكون نماذج 5 اعتلال Sie ischemic retinopathies الحديث الشبكي؛ مثلاً لدراسة اعتلالات الشبكية الدماغية retinopathy of أو اعتلال الشبكية قبل التنضوج diabetic retinopathy الشبكية السكري
Sle وتكون هناك نماذج التوعي الحديث الشبكي والمشيمي معروفة في التقنية (انظر prematurity 29(6):500-19. doi: ¢Grossniklaus, H.E. et al. Prog Retin Eye Res. 2010 Nov
Saisin, Y et al. (2003) Journal of ¢10.1016/j.preteyeres.2010.05.003. Epub 2010 May 19 0
Takahashi, .ا et al. (2003) Investigative ¢Cellular Physiology, 195:241-248
Lima e Silva, R. et al. (2007) FASEB ¢Ophthalmology & Visual Science, 44(1):409-415
Tobe et al. (1998) American Journal of Pathology, 153(5):1641- ¢Journal, 21:3219-3230
Dong, A et al. (2011) PNAS, 108(35): 14614-14619; Dong et al. (2009) J Cell ¢1646
Smith, LE et al. 1994 Invest Ophthalmol Vis Sci 1994; 35:101- ¢Physiol 219:544-552 5
Shen, J. et al. (2007) Investigative Ophthalmology & Visual Science, 48(9):4335- ¢111 «CNV (4341؛ ويمكن استخدامها لدراسة فعالية 11-68. ويمكن تحفيز التوعي الحديث المشيمي عن طريق الليزر؛ الضوء؛ الجراحة؛ أو التعديلات الجينية. وتكون نماذج للتوعي الحديث Sle
Smith, LE et في .له «Mia معروفة في التقنية ويتم وصفهاء oxygen الشبكي المحفز بالأكسجين
Shen, J. et al. (2007) Investigative ¢1994 Invest Ophthalmol Vis Sci 1994; 35:101-111 0 .Ophthalmology & Visual Science, 48(9):4335-4341 ويمكن استخدام نموذج فقر الدم الموضعي/نقص التروية. انظر مثلاً Zheng, Let al. Investigative Ophthalmology & Visual Science, vol. 48 no. 1 pp. 361-367, 2007 على سبيل المثال» في اليوم الأول» يتم إدخال 30 إيرة قياسية متصلة بكيس مائع إلى قرنية فثران مخدرة ويرتفع الضغط داخل العين 100 إلى حوالي 120 مليمتر زتبق لتوليد فقر دم موضعي. وبعد 30- 0 دقيقة» تتم إزالة الإبرة؛ وتتم معايرة TOP ويحدث إعادة تدفق لدوران الشبكية. ويمكن تقييم تعبير واسمات الالتهاب التي تتضمن TNF-0 و 1014-1 عن طريق لطخة ويسترن و qPCR في اليوم (Ss .2 إضافي؛ يمكن تقييم فقد خلية عقدية بواسطة علم الأنسجة في اليوم 14-3 وبتم قياس الانحلال الشعري بواسطة تقنية هضم التريبسن في اليوم 14-10. وللدراسات العلاجية؛ يتم حقن 0 أداة اختبار (مثلاًء 1 ميكرولتر من التركيز الصحيح؛ مثلاً 20 ملغم/مل؛ من (IL6a داخل الجسم
الزجاجي إما قبل أو بعد بفترة قصيرة من تحفيز فقر الدم الموضعي. العلاجات المؤتلفة في بعض التجسيدات؛ يتم إعطاء 11-68 بتوليفة مع كيان علاجي ثان. على سبيل المثال؛ يتم إعطاء IL-6a في نظام العلاج الذي يتضمن مثبط VEGF مثل» رانيبيزوماب 18010120008 + في بعض التجسيدات؛ يتم إعطاء 11-68 في نظام علاج يتضمن مثبط (PDGF على سبيل (JO جسم مضاد PDGR أو جسم مضاد لمستقبلات PDGF (على سبيل المثال؛ إماتينيب -(imatinib بعض التجسيدات؛ يتم إعطاء 11-68 بتوليفة مع مثبط مسار مكمل؛ على سبيل المثال؛ لامباليزوماب .05 أو مثبط (D (مثبط العامل lampalizumab
IL-6 مضاد Ja يمكن نقل مضاد أو تركيبة 11-6 الموصوفة هنا موضعياً؛ إما في اتصال مباشر مع أو بالقرب من خلية أو نسيج يستهدف لتثبيط JL-6 وتشمل الأمثلة غير المحددة على طرق النقل هذه الحقن؛ أو التسريب؛ أو غرس مادة تحتوي على مضاد 11-6. وفي تجسيدات؛ يتم إعطاء IL-6a أو تركيب داخل العين؛ على سبيل (Jad) داخل الجسم الزجاجي؛ على سبيل (JB) عن طريق الحقن داخل الجسم الزجاجي؛ وليجة عينية؛ أو النقل الجيني. Ag 15 بعض التجسيدات؛ يُعطى التركيب 1168 كتركيبة عينية. ويمكن أن تشمل الطرق إعطاء تركيب 117-68 وحامل مقبول عينياً. في بعض التجسيدات؛ تكون التركيبة العينية سائلة أو شبه صلبة أو وليجة أو غشاء أو جسيم مجهري أو جسيم دقيق. يمكن إعطاء تركيب 117-68 على سبيل المثال» موضعياً أو عن طريق الحقن (على سبيل المثال؛ حقن داخل الجسم الزجاجي). في بعض التجسيدات؛ يتم صياغة التركيب 11-68 للاعطاء داخل الجسم الزجاجي. 20 في بعض التجسيدات؛ يتم صياغة التركيب 11-68 لإعطاء موضعي؛ على سبيل المثال؛ إلى العين. يمكن أن تكون التركيبة الموضعية عبارة عن تركيبة سائلة أو شبه صلبة؛ على سبيل المثال؛ يمكن أن تشتمل التركيبة الموضعية على محلول مائي؛ أو معلق مائي؛ أو مرهم أو هلام. يمكن تطبيق تركيبة ه1176 عينية موضعياً على الجزءِ الأمامي من العين» تحت الجفن العلوي؛ على الجفن السفلي وفي الجوف السفلي. عادةً؛ تكون التركيبة العينية معقمة. يمكن أن تحتوي تركيبة IL-6a 5 عينية على واحدة أو أكثر من سواغات صيدلية مناسبة لتحضير تركيبات عينية. ومن أمثلة هذه السواغات العوامل الحافظة» عوامل دارئة منظمة لدرجة الحموضة؛ عوامل الاستخلاب»؛ العوامل المضادة للأكسدة والأملاح لتنظيم الضغط الاسموزي. التركيبات العينية؛ بما في ذلك المراهم والمعلقات؛ Bale ما تكون اللزوجة التي تناسب الطريق المختار للاعطاء. في بعض التجسيدات؛ يكون للتركيبة العينية لزوجة تتراوح من Mos 1000 إلى حوالي 30000 سنتيبواز. 30 في بعض التجسيدات؛ تكون التركيبة عبارة عن تركيبة سائلة تشتمل على بوليمر. ويمكن
استخدام Jie هذا البوليمر لتحسين التوافر البيولوجي؛ ورفع اللزوجة؛ أو تقليل الصرف من العين لتركيبة السائل. وتشمل البوليمرات المناسبة؛ على سبيل المثال لا الحصرء تلك الموصوفة في Wagh (Asian J Pharm, 2:12-17, 2008) .اه ا©. في أمثلة غير محددة؛ يكون البوليمر هو هيالوروناز الصوديوم sodium hyaluronase الشيتوزان chitosan دكسترين حلقي cyclodextrin (على سبيل المثال؛ هيدروكسي بروييل- =f دكسترين حلقي ¢(hydroxypropyl-B-cyclodextrin وحمض متعدد غالاكتوروتيك 012010:001عزاهم» زبلوغلوكان exyloglucan صمغ زنتان xanthan صمغ جيلان ¢gellan تيومر cthiomer متعدد (أورثو استر) Ae) poly(ortho ester) سبيل المثال»؛ ( Einmahl, (Adv Drug Deliv Rev 53:45-73, 2001 + أو متعدد سكاريد بذرة التمر الهندي tamarind seed Ae) polysaccharide سبيل المثال» -48:3396 Ghelardi et al., Antimicrob Agents Chemother
0 3401,2004(. وفي بعض التجسيدات؛ يمكن أن تشتمل التركيبة التي تشتمل على تركيب 17-68 من أجل النقل العيني على واحد أو أكثر من العوامل الخافضة للتوتر السطحي؛ والمواد المساعدة؛ المواد الدارئة المنظمة لدرجة الحموضة؛ والمواد المضادة للأكسدة؛ وإسوية التوترء والمواد الحافظة (على سبيل المثال» حمض إثيلين ثنائي أمين رباعي الأسيتيك Ethylenediaminetetraacetic acid Ga) «EDTA 5 كلوريد بينزالكونيوم باك (BAK benzalkonium chloride كلورايت الصوديوم sodium chlorite بيريورات الصوديوم sodium perborate متعدد polyquaterium-11—pg lS (¢ مواد مكثفة أو مواد معدلة للزوجة (على سبيل المثال» سليلوز كاربوكسي مثيل «carboxymethyl cellulose سليلوز هيدروكسي chydroxymethyl cellulose Jie كحول متعدد فينيل «polyvinyl alcohol غليكول متعدد إثيلين cpolyethylene glycol غليكول 400 400 cglycol سليلوز بروييلين غليكول 0 ميدروكسي مثيل «propylene glycol hydroxymethyl cellulose هدروكس بروبيل-غوار chydroxpropyl-guar حمض الهيالورونيك chyaluronic acid وسليلوز هيدروكسي بروبيل (hydroxypropyl cellulose وما شابه ذلك. ويمكن أن تشمل المواد المضافة في التركيبة؛ على سبيل المثال لا الحصر؛ كلوريد الصوديوم sodium chloride بيكريونات الصوديوم sodium bicarbonate حمض السورييك csorbic acid بارابين cmethyl parabenddiadl _بارابين البروبيل paraben 5 اهم كلور هيكسيدين cu) chlorhexidine الخروع؛ و بيريورات الصوديوم sodium
.perborate في بعض التجسيدات؛ يتم استخدام الماء المنقى أو منزوع الأيونات في التركيب. ويمكن تعديل درجة الحموضة بإضافة أي من الأحماض أو القواعد أو الدرائات المنظمة لدرجة الحموضة التي يمكن ضبطها من الناحية الفسيولوجية والمقبولة عينياً إلى حدود تتراوح من حوالي 5.0 إلى 7.4 8.5؛ على سبيل المثال» درجة الحموضة 7.0 أو درجة الحموضة 7.3 أو درجة الحموضة أو 0
أو درجة الحموضة 7.5 وتشمل الأمثلة المقبولة Lie من الأحماض الأستيك acetic والبوريك boric والسيتريك citric واللاكتيك lactic والفسفوريك phosphoric والهيدروكلوريك hydrochloric وما شابه ذلك؛ ومن أمثلة القواعد هيدروكسيد الصوديوم sodium hydroxide وفوسفات الصوديوم sodium phosphate وبورات الصوديوم sodium borate وسيترات الصوديوم sodium citrate وأسيتات الصوديوم sodium acetate ولاكتات الصوديوم sodium lactate والتروميثامين tromethamine وثلاثي هيدروكسي مثيل أمينو ميثان ctrishydroxymethylamino-methane وما شابه ذلك. وتشمل أمثلة الأملاح والدارئات المنظمة لدرجة الحموضة التي يمكن استخدامها في تركيبة سيترات Sufcitrate العنب dextrose بيكريونات الصوديوم16 5168:0008 sodium » كلوريد الأمونيوم ammonium chloride ومخاليط من الأحماض والقواعد المذكورة أعلاه. في بعض التجسيدات؛ قد يتراوح الضغط الاسموزي للتركيب العيني من حوالي 10 ملي أسمولر 41 إلى حوالي 400 ملي أسمولرء على سبيل المثال» 200 إلى 400 ملي أسمولر» أو 0 إلى 370 ملي أسمولر. بشكل عام؛ يمكن تعديل الضغط الاسموزي باستخدام أملاح أو سواغات مقبولة من الناحية الفسيولوجية وعينياً. وفي بعض التجسيدات؛ يتم تضمين كلوريد الصوديوم sodium A chloride تركيبة؛ على سبيل المثال؛ كلوريد الصوديوم sodium chloride موجود في تركيبة 5 بتركيز يتراوح من 70.01 إلى 71 بالوزن؛ أو من 70.05 إلى 70.45 بالوزن؛ على أساس الوزن الكلي للتركيب. مقادير مكافئة من ملح واحد أو أكثر مكونة من كاتيونات Jie البوتأسيوم potassium والأمونيوم ald Ly ammonium ذلك والأنيونات مثل الكلوريد chloride والسترات citrate والاسكوريات ascorbate والبورات borate والفوسفات bicarbonate «lig Sally phosphate والكبريتات sulfate والثيوكبريتات thiosulfate وثنائي الكبريتات bisulfate وثاني كبريتات الصوديوم sodium bisulfate 0 وكبربتات ١ لأمونيوم ammonium sulfate وما شابه ذلك ويمكن أيضاً أن تستخدم بالإضافة إلى أو Ya من كلوريد الصوديوم sodium chloride لتحقيق الأسمولية ضمن النطاق المطلوب. في بعض التجسيدات»؛ يستخدم السكر Jie مانيتول cmannitol سكر العنب «dextrose السوربيتول sorbitol الجلوكوز glucose وما شابه ذلك لضبط الأسمولية. وفي بعض التجسيدات؛ تتضمن الطرق تشكيل أو تزويد مستودع للعامل في اتصال مع 5 السطح الخارجي للعين. مستودع يشير إلى مصدر عامل لا يتم إزالته بسرعة عن طريق الدموع أو غيرها من آليات تصفية العين. وهذا يسمح بتراكيز مستمرة وعالية لعامل موجود في المائع على السطح الخارجي للعين بتطبيق واحد. وفي بعض التجسيدات؛ يمكن أن يبقى المستودع لمدة تصل إلى ثماني ساعات أو أكثر. وفي بعض التجسيدات؛ تتضمن تركيبة المستودع العيني؛ على سبيل المثال لا الحصرء؛ معلقات بوليمرية مائية ومراهم وولائج صلبة. وفي بعض التجسيدات؛ يكون التركيب شبه الصلب عبارة عن تركيبة سائلة تزيد اللزوجة عند
تطبيقها على العين» ile بسبب وجود بوليمر في التركيبة السائلة حيث تحدث زيادة في اللزوجة مع تغيير في درجة الحرارة؛ درجة الحموضة» تركيز المحلول الكهرلي. يمكن أن يكون البوليمر على سبيل المثال» سليلوز اسيتوفثالات ccelluloseacetophthalate حمض متعدد أكريليك polyacrylic 40 صمغ جيلان ¢gellan gum هيالوروناز chyaluronase شيتوزان «chitosan أملاح حمض الألجنيك alginic (على سبيل المثال؛ ألجينات الصوديوم ny (sodium alginate بوليمر إسهامي كتلي من أكسيد الإثيلين ethylene oxide وأكسيد البروييلين propylene oxide (على سبيل المثال؛ بلورانيك Pluronic® المتوفر من شركة باسف؛ بولوكسامير :00102006). في بعض التجسيدات؛ يكون حمض متعدد أكريليك polyacrylic عبارة عن حمض أكريليك acrylic متقاطع الروابط (مثل كاربول ©00:00001). وفي بعض التجسيدات؛ يشتمل التركيب شبه الصلب على خليط من الكربوبول carbopol 0 بوليمر إسهامي كتلي من أكسيد الإثيلين ethylene oxide وأكسيد البروييلين propylene toxide خليط من سليلوز المثيل methyl cellulose وسليلوز هيدروكسي إثيل hydroxyethyl ¢cellulose أو خليط من غليكول متعدد إثيلين polyethylene glycol وبوليمر إسهامي كتلي من أكسيد الإثيلين ethylene oxide وأكسيد البروييلين .propylene oxide بعض التجسيدات؛ تكون التركيبة العينية التي تحتوي على 11.68 Ble عن مرهم أو هلام. 5 وفي بعض التجسيدات؛ تكون التركيبة العينية عبارة عن حاملة نقل أساسها الزيت. على سبيل (Jad) يمكن أن تشتمل التركيبة على قاعدة نفطية أو لانولين 1800110 يضاف إليها التركيب 11-68 (على سبيل المثال عند 0.1 إلى 72)؛ والسواغات. (Sarg أن تشمل القواعد الشائعة؛ على سبيل المثال لا الحصرء الزيوت المعدنية والبترولاتوم petrolatum وتوليفات منها. في بعض التجسيدات؛ يتم تطبيق مرهم على شكل شريط على الجفن السفلي. وفي بعض الحالات؛ تكون التركيبة العينية عبارة عن وليجة عينية. في تجسيدات؛ يعطى التركيب داخل الجسم الزجاجي عن طريق وليجة عينية. على سبيل المثال» تكون الوليجة العينية خاملة حيوياً؛ لينة؛ قابلة للتحلل حيوباً؛ مرنة لزجة؛ مستقرة للتعقيم بعد التعرض للعوامل العلاجية؛ مقاومة للعدوى من البكتيريا المحمولة جواً؛ قابلة للتحلل حيوياً» موافقة حيوياً؛ و/أو مرنة لزجة. في بعض التجسيدات» تحتوي الوليجة على مادة رابطة مقبولة die 5 على سبيل (JE مادة رابطة من البوليمر. Balog ما تكون المادة الرابطة من البوليمر و تركيب 11-60 مشتتة داخل المادة الرابطة أو مربوطة بمادة رابطة من البوليمر. في بعض التجسيدات؛ يتم إطلاق العامل ببطء من المادة الرابطة من خلال حل أو حلمأة رابطة تساهمية. في بعض التجسيدات؛ يكون البوليمر قابل للتحلل Ligon (قابل للذوبان) ويمكن لمعدل ala التحكم في معدل إطلاق العامل المشتت فيه. وفي USE آخرء تكون المادة الرابطة للبوليمر عبارة عن بوليمر قابل 0 لللتحلل يتفكك بالحلمأة بحيث يطلق العامل المريوط عليه أو مشتت فيه. وفي تجسيدات أخرى؛ يمكن
أن تكون المادة الرابطة والعامل محاطين بطلية بوليمرية إضافية للتحكم في الإطلاق بشكل إضافي. في بعض التجسيدات؛ تحتوي الوليجة على بوليمر قابل للتحلل حيوياً مثل متعدد كابرولاكتون «PCL polycaprolactone وهو بوليمر إسهامي من أسيتات الإثيلين/فينيل ethylene/vinyl acetate «EVA سيانوكريلات متعدد ألكيل cpolyalkyl cyanoacrylate متعدد يوريثان 01076106 نايلون nylon 5 أو متعدد (1ل-لاكتيد-00-غليكوليد) PLGA poly(dl-lactide-co-glycolide) أو بوليمر إسهامي من أي من هذه. في بعض الحالات؛ يتم تشتيت العامل في المادة الرابطة أو مشتت بين تركيب المونمر المستخدم لصنع المادة الرابطة قبل البلمرة. في بعض التجسيدات؛ يكون مقدار العامل من حوالي 0.1 إلى حوالي 250 أو من حوالي 2 إلى حوالي 720. ويمكن استخدام المادة الرابطة لبوليمر قابلة للتحلل حيوياً أو تتفكك حيوباً بحيث لا يجب إزالة الوليجة المستهلكة من العين. بينما
0 .يتم يتفكك البوليمر القابل للتحلل حيوياً أو يتفكك Lim أو يتحلل؛ يتم إطلاق العامل. في تجسيدات (AT تتكون الوليجة العينية من بوليمرء بما في ذلك؛ على سبيل المثال لا الحصرء تلك الموصوفة في Wagh, et al., "Polymers used in ocular dosage form and drug delivery systems”, Asian J.
Pharm., pages 12-17 (January 2008) في بعض التجسيدات؛ تتكون الوليجة من بوليمر مختار من متعدد فينيل بيروليدون PVP polyvinylpyrrolidone أو acrylate 5 أكريلات أو ميثاكريلات methacrylate بوليمر أو بوليمر إسهامي (مثل عاثلة ®Eudragit من البوليمرات من روهم Rohm أو ديغوسا (Degussa سليلوز هيدروكسي مثيل hydroxymethyl cellulose حمض متعدد أكربليك polyacrylic متعدد (أميدوامين) دندريمرات poly(amidoamine) cdendrimers _متعدد (ثنائي Jie سيلوكسان) (عصة»017)01016171:110م» وأكسيد متعدد إثيلين cpolyethylene oxide متعدد (لاكتيد-مع-غليكوليد) ¢poly(lactide-co-glycolide) متعدد (2- 0 هيدروكسي إثيل poly(2-hydroxyethylmethacrylate)(<Dla Ste » كحول متعدد فينيل polyvinyl (alcohol ؛ أو متعدد (بروبيلين فوماربت)(10008:21 Ag poly(propylene بعض التجسيدات؛ تحتوي الوليجة على Gelfoam® وفي بعض التجسيدات؛ تكون الوليجة عبارة عن حمض متعدد اكريليك polyacrylic 450 كيلو دالتون x7 AT) 1710 نانوغرام) متقارن السيستائين cysteine يمكن أن تتكون الوليجة من لب يحتوي على تركيب 11-68 وأنبوب خارجي (على سبيل المثال» كما هو موضح في نشرة طلب براءة الاختراع الأمريكية رقم 20040009222). في بعض الحالات؛ يمكن أن يكون الأنبوب الخارجي die شبه منفذء أو غير منفذ للعقار. في بعض التجسيدات؛ يتضمن اللب مادة رابطة من البوليمر التي ليس لها تأثير كبير على معدلإطلاق تركيب11-60. في بعض الحالات؛ الأنبوب الخارجي؛ مادة رابطة لبوليمر للب؛ أو كليهما قابل للتحلل حيوباً. يمكن تقسيم المنتج الذي تم بثقه تشاركياً في وسائل نقل العقار. في بعض التجسيدات؛ تكون 0 الوسيلة غير مطلية بحيث تكون الأطراف المعنية مفتوحة؛ أو تكون الوسيلة مطلية ب على سبيل
المثال» بطبقة منفذة لتركيب 11-68؛ شبه منفذ لتركيب 11-68 أو قابل للتحلل حيوياً. في تجسيدات معينة؛ يتم مزج تركيب 11-68 و بوليمر واحد على الأقل في شكل مسحوق. في بعض التجسيدات؛ يكون التركيب العيني غشاء عيني. تشمل البوليمرات المناسبة لهذه الأغشية؛ ولكن لا تقتصر على؛ تلك الموصوفة في Els Wagh, etal. ومعاونوه. (أعلاه). في بعض التجسيدات؛ يكون الغشاء عبارة عن عدسة لاصقة ناعمة؛ على سبيل (JE عدسة تتألف من بوليمرات إسهامية من NN ثنائي إثيل أكريلاميد N,N-dicthylacrylamide وحمض ميثاكريليك methacrylic متقاطع الروابط مع ثنائي ميثاكريلات إثيلين -ethyleneglycol dimethacrylate sale وفي تجسيدات معينة؛ يكون 11.68 عبارة عن وليجة في شكل أنبوبي؛ (Sang تقسيمها. في بعض التجسيدات؛ يصاغ التركيب 11-60 بمقدار فعال ladle مطلي أو مشتت في 0 -_مادة رابطة للبوليمر؛ بحيث يكون تركيب 1-68 في شكل حبيبي أو جسيمي. في بعض التجسيدات؛ يتم إطلاق تركيب 11-68 من التركيبة كعقار من حبيبات تذوب داخل أو في salad) الرابطة؛ وتشتت في المادة الرابطة؛ وبتم إطلاقها في المائع الفسيولوجي المحيط بها. في بعض التجسيدات؛ يقتصر معدل الإطلاق أساساً على معدل تفكك التركيب 11-6 من الحبيبات/الجسيمات إلى المادة الرابطة؛ وخطوات التشتت من خلال المادة الرابطة والتشتت في المائع المحيط هو في المقام الأول لا يحد 5 .من معدل الإطلاق. في تجسيدات معينة؛ تكون المادة الرابطة للبوليمر غير قابلة للتحلل حيوياً؛ بينما في تجسيدات أخرى تكون قابلة للتحلل حيوياً. ويمكن تشكيل حشيات مواد رابطة للبوليمر غير ALB للتحلل حيوباً نموذجية من متعدد يوريثان ¢polyurethane متعدد سليكون ¢polysilicone متعدد (pli) -م- أسيتات فينيل) (EVA poly(ethylene-co-vinyl acetate) _كحول متعدد فينيل epolyvinyl alcohol ومشتقات وبوليمرات إسهامية منها. (Kang تشكيل حشيات مواد رابطة للبوليمر قابلة للتحلل Ls النموذجية من متعدد انهيدريد cpolyanhydride وحمض amie الأكتيك <polylactic وحمض متعدد polyglycoliceld Kile ؛ متعدد أورثواستر ¢polyorthoester متعدد الكيل سياتوكريلات epolyalkylcyanoacrylate ومشتقاته ويوليمرات منه. في بعض الحالات» يتم صياغة التركيب 11-68 في مادة كولاجينية. على سبيل المثال» يمكن أن تكون الوليجة وليجة عقار عيني قابل للذوبان (على سبيل المثال» غشاء بيضاوي بوليمري يمكن allay) 5 في الكيس الملتحمة العلوي لنقل العقار؛ وليجة إهليلجية الشكل OCUSERT® (fie (نظام بيلوكاريين عيني علاجي» طوته شركة ألزا (Alza التي تتكون من أسيتات فينيل الإثيلين ethylene ¢vinyl acetate لاكريسيرت ©1.20150:1؛ وليجة على شكل قضيب مصنوعة من السليلوز tcellulose أنظمة نقل عقار عينية جديدة new ophthalmic drug delivery systems NODS » مصنوعة من متعدد (فينيل الكحول) ¢poly(vinyl alcohol) أو ولاج Jie تلك الموصوفة في Fabrizio (Adv Drug Rev 16: 95-106, 1998( 0 «ناع0. في بعض الحالات؛ تتكون الوليجة من كولاجين أو جيلاتين أو
بوليمر؛ حيث يتم اختيار البوليمر من متعدد كابرولاكتون PCL polycaprolactone وهو بوليمر إسهامي من أسيتات الإثيلين عدءانرطاء/فينيل EVA vinyl acetate سيانوكريلات متعدد ألكيل cyanoacrylate الإعللة01م؛ متعدد يوريثان polyurethane نايلون 07100؛ متعدد —dl) لاكتيد-م0ع- غليكوليد) PLGA poly(dl-lactide-co-glycolide) أو بوليمر إسهامي من أي من هذه؛ في بعض الحالات؛ يتم زرع الوليجة تحت الجفن العلوي؛ وفي بعض الحالات» يتم زرع وليجة في all الخلفي من العين؛ في الحيز المشيمي؛ أو في الصلبة. وفي بعض التجسيدات؛ يتم زرع الوليجة داخل الجسم الزجاجي أو تحت الشبكية. في بعض التجسيدات؛ يتم حقن الوليجة تحت الشبكية. طرق الإعطاء والتقنيات لتحضيرها مبينة في المرجع Remington's: The Practice of Science of Pharmacy,
(20th edition (Lippincott Williams & Wilkins, 2006 . وفي تجسيدات أخرى» توفر وليجة تحتوي على تركيب 117-68 إطلاقاً مستمراً للعامل إلى الجسم الزجاجي للعين. كما هو مستخدم هناء "الإطلاق المستمر” يعني أن التركيب يطلق عامل على مدى فترة طويلة من الزمن بطريقة مسيطر عليها. في بعض التجسيدات؛ تطلق وليجة العامل بمعدل بحيث يبقى تركيز العامل المائي أقل من تركيز العامل الزجاجي أثناء الإطلاق. وفي بعض التجسيدات؛ يكون تركيز العامل المائي من حوالي 0.002 ميكروغرام/مل إلى حوالي 0.01 5 ميكروغرام/مل أو من حوالي 0.01 ميكروغرام/مل» إلى حوالي 0.05 ميكروغرام/مل؛ أو أقل من حوالي 0.05 ميكروغام/مل. وفي بعض التجسيدات؛ يتم إطلاق العامل بمعدل حوالي 1 ميكروغرام/يوم إلى حوالي 50 ميكروغرام/يوم؛ أو من حوالي 1 ميكروغرام/يوم إلى حوالي 10 ميكروغرام/يوم. وفي بعض التجسيدات؛ تحتوي الوليجة أيضاً على عامل علاجي إضافي؛ كما هو مفصل أعلاه؛ على سبيل المثال؛ أسيتونيد فلوسينولون fluocinolone acetonide (مثل تلك الموجودة
0 في الوليجة العينية ©661186:1). في بعض التجسيدات؛ يتكون التركيب العيني من كريات مجهرية أو جسيمات دقيقة. في بعض التجسيدات؛ تشمل الكريات المجهرية الجيلاتين. في بعض التجسيدات؛ يتم حقن الكريات المجهرية إلى الجزه الخلفي من العين؛ في الحيز المشيمي؛ في الصلبة؛ في الجسم الزجاجي أو تحت الشبكية. في بعض التجسيدات؛ تشتمل الكريات المجهرية أو الجسيمات النانوية على بوليمر يتضمن؛ 5 على سبيل المثال لا الحصر»؛ تلك الموصوفة في )2008 ,2:12-17 -Wagh, et al. (Asian J Pharm في بعض التجسيدات»؛ يكون البوليمر عبارة عن الشيتوزان chitosan حمض متعدد الكريوكسيليك Jie polycarboxylic acid حمض متعدد أكريليك polyacrylic جسيمات الألبومين calbumin استرات حمض الهيالورونيك hyaluronic acid حمض متعدد ايتاكونيك «polyitaconic متعدد (بيوتيل) سيانوكريلات cpoly(butyl)cyanoacrylate متعدد كابرولاكتون ع001708010186100؛ متعدد (أيزوبيوتيل) كابرولاكتون ع0017)8000171(8000166100» متعدد (حمض اللاكتيك-0©-حمض
الغليكوليك) «poly(lactic acid-co-glycolic acid) أو متعدد (حمض اللاكتيك) -poly(lactic acid) في بعض التجسيدات؛ تشتمل الكريات المجهرية أو الجسيمات النانوية على جسيمات دهنية صلبة. في بعض التجسيدات؛ يتكون التركيب 11-68 من راتنج التبادل الأيوني. وفي بعض التجسيدات» يكون راتنج التبادل الأيوني هو زيوليت zeolite غير عضوي أو zh عضوي اصطناعي. في بعض التجسيدات؛ يتضمن راتنج التبادل الأيوني؛ على سبيل المثال لا الحصر؛ تلك الموضحة في واغ ومعاونوه (Wagh, etal. أعلاه. في بعض التجسيدات؛ يكون راتنج التبادل الأيوني
Ble عن حمض متعدد أكربليك polyacrylic acid معادل جزئياً. يمكن تزويد تركيب 11-60 في معلق مائي بوليمري. في بعض التجسيدات؛ يتم تعليق تركيب 11-68 أو عامل تعليق بوليمري في وسط مائي (على سبيل المثال؛ لها الخصائص كما هو 0 موضح أعلاه). وتشمل أمثلة عوامل التعليق البوليمرية؛ على سبيل المثال لا الحصر؛ FS dextrans غليكولات متعدد إثيلين «polyethylene glycols متعدد فينيل بيروليدون cpolyvinylpyrolidone هلام متعدد السكريات polysaccharide جيلريت Gelrite® بوليمرات سليلوزية مثل هيدروكسي بروبيل مثيل سيليولوز chydroxypropyl methylcellulose بوليمرات تحتوي على carbory SS مثل بوليمرات أو بوليمرات إسهامية من حمض الأكزيليك acrylic و 5 المطريات البوليمرية الأخرى. وفي بعض التجسيدات؛ يكون عامل التعليق البوليمري قابل للانتفاخ بالماء؛ بوليمر غير قابل للذويان؛ ولا سيما البوليمر المحتوي على الكربوكسي carboxy متقاطع الروابط. في بعض التجسيدات؛ يتكون عامل التعليق البوليمري من حوالي 790 إلى حوالي 799.9؛ أو من حوالي 795 إلى حوالي 799.9 بالوزن على أساس الوزن الكلي للمونومرات الموجودة؛ لواحدة أو أكثر من المونمرات غير المشبعة من أحادي الإثيلين monoethylenically التي تحتوي على 0 كربوكسي carboxy في بعض التجسيدات؛ يتضمن المونومر غير المشبع من أحادي الإثيلين الذي يحتوي على كريوكسي carboxy حمض acrylic lb SY ١ وحمض الميثاكريليك methacrylic وحمض الإيثاكريليك ethacrylic وحمض المثيل أكريليك methylacrylic (حمض الكروتونيك (crotonic وحمض مجاور - ألفا- مثيل كروتونيك cis-.alpha.-methylcrotonic (حمض الأنجليك (angelic حمض مقابل-» -مثيل كروتونيك strans-o-methylerotonic acid (acid) (حمض 5 اتتيجليك (tiglic + حمض »- بيوتيل كروتونيكوئعة co-butylerotonic حمض ألفا-فينيل أكربليك calpha.-phenylacrylic حمض »- بنزيلاكريليك corbenzylacrylic حمض »- هكسيل حلقي اكريليك ca-cyclohexylacrylic حمض فنيل أكريليك phenylacrylic (حمض سيناميك ¢(cinnamic حمض الكوماريك coumaric (حمض أورثو -هيدروكسي سيناميك o- (hydroxycinnamic ؛ وحمض الأمبيليك umbellic (حمض بارا-هيدروكسي كوماريك p- (hydroxycoumaric 0 .3 بعض التجسيدات؛ يتم ربط البوليمر تقاطعياً بواسطة عامل ربط تقاطعي
متعدد الوظائف (على سبيل Jal عامل ريط تقاطعي ثنائي الوظيفة). في بعض التجسيدات؛ يتم احتواء عامل الريط التقاطعي بمقدار من حوالي 70.01 إلى حوالي 75؛ أو من حوالي 70.1 إلى حوالي 75.0؛ أو من حوالي 70.2 إلى حوالي AT استناداً إلى الوزن الكلي للمونومرات الموجودة. في بعض التجسيدات؛ تكون عوامل الربط التقاطعي عبارة عن عاومل ربط تقاطعي مونومرات لا تكون متعدد الكينيل متعدد إيثر nonpolyalkenyl polyether ربط تقاطعي ثنائية الوظيفة Jie ثنائي فينيل غليكول divinyl glycol 2 .3-ثنائي هيدروكسي هكسا-1 ؛5-ديين 2,3-dihydroxyhexa- ¢1,5-diene 2 .5-ثنائي مثيل-1 ء5-هيكساديين 1,5-06:801606 -1ل2,5-010061, ثنائي فينيل بنزين cdivinylbenzene ل 1<7-ثنائي اليل اكريلاميد AEN 7 «N,N-diallylacrylamide اليل ميثاكريلاميد ¢N,N-diallymethacrylamide متعدد الكينيل متعدد إيثر polyalkenyl polyether التي 0 تحتوي على اثنين أو أكثر من مجموعات إيثر ألكينيل alkenyl ether لكل جزيء؛ على سبيل المثال مجموعات إيثر ألكينيل llalkenyl ether تحتوي على مجموعات ©-1:0] طرفية تم تحضيرها بتحويل كحول متعدد هيدريك polyhydric إلى إيثر ctherfying يحتوي على ما لا يقل عن of ذرات كريون carbon وما لا يقل عن ثلاث مجموعات هيدروكسيل hydroxyl مع هاليد ألكينيل Jie alkenyl halide بروميد الأليل allyl bromide أو ما شابه ذلك؛ على سبيل المثال» سكروز 5 متعدد أليل sucrose 1إ1ل01م» خماسي ايربثربتول متعدد أليل pentacrythritol الزللة01م أو ما شابه ذلك. عوامل ريط تقاطعي لها درجة بلمرة كبيرة غير محبة للماء ثنائية الأولفين لها الأوزان الجزيئية من حوالي 400 إلى حوالي 5000؛ Jie ثنائي اكريلات diacrylates غير قابلة للذويان ومتعدد أكريلات polyacrylates و ميثاكريلات methacrylates من ديولات diols وكحولات متعدد الهيدريك «polyols ثنائي أكريلات Su أيزوسيانات هيدروكسي diisocyanate hydroxyalkyl JS acrylate 20 أو منتجات تفاعل ميثاكريلات methacrylate من بوليمرات أولية لها طرف من أيزو سيانات isocyanate prepolymers من ديولات متعدد إستر polyester diols ديولات متعدد polyether diols yi أو ديولات متعدد سيلوكسان polysiloxane diols مع ميثاكريلات هيدروكسي
ألكيل chydroxyalkylmethacrylates وما شابه ذلك. في بعض التجسيدات؛ يتم تصنيع بوليمرات الربط التقاطعي من مونومر أو مونومرات غير 5 مشبعة من أحادي الإثيلين تحتوي على الكريوكسي carboxy غير المشبع من أحادي الإثيلين ethylene بينما يكون البوليمر السفلي غير المشبع من أحادي الإثيلين ethylene موجوداً إلى جانب عامل أو عوامل ربط تقاطعي. وفي بعض التجسيدات؛ تكون البوليمرات عبارة عن بوليمرات حيث تم استبدال حوالي 740؛ ويفضل من حوالي 70 إلى حوالي 720 بالوزن من المونمر أو المونمرات غير المشبعة من أحادي الإثيلين ethylene التي تحتوي على الكريوكسي carboxy بواحد 0 أو أكثر من المونمر أو المونمرات غير المشبعة من أحادي الإثيلين ethylene التي تحتوي على
الكربوكسي carboxy تحتوي فقط على بدائل غير ضارة من الناحية الفسيولوجية والعينية» بما في
ذلك استرات esters حمض ١ لأكريليك acrylic وميثاكريليك Jie methacrylic ميثاكريلات المثيل methacrylate الإطاعصص أكريلات إقيل cethyl acrylate أكريلات بيوتيل «butyl acrylate 2-إثيل هكسيل اكريلات 2-ethylhexylacrylate ميثاكريلات أوكتيل coctyl methacrylate 2 -هيدروكسي
إثيل ميثاكريلات ¢ 2-hydroxyethylmethacrylate 3-هيدروكسي بروبيل أكريلات -3 chydroxypropylacrylate وما شابه lh أسيتات فينيل evinyl acetate 17 -فينيل بيروليدون N- vinylpyrrolidone » وما شابه ذلك (على سبيل المثال» مولر ومعاونوه براءة الاختراع الأمريكية رقم 0 في بعض التجسيدات؛ تشمل البوليمرات متعدد كاريوفيل (نوفيون 1-11( ( Noveon ¢polycarbophil (AA-1 كاريويول «Carbopol® دوراسايت ©1070516. وفي بعض التجسيدات؛
0 تم تحضير البوليمرات متقاطعة الروابط ببلمرة المونومرات بمعلق أو مستحلب؛ باستخدام حفازات البلمرة بالجذور الحرة التقليدية؛ إلى حجم الجسيمات الجاف لا تزيد عن حوالي 50 ميكرومتر في
قطر كروي مكافئ. في بعض التجسيدات؛ يكون متوسط حجم الجسيمات الجافة من حوالي 1 إلى
حوالي 30 ميكرومتر» أو من حوالي 3 إلى حوالي 20 ميكرومتر في قطر كروي مكافئ. في بعض التجسيدات؛ يتم الحصول على جسيمات البوليمر عن طريق طحن ميكانيكي لجسيمات بوليمر أكبر.
5 وفي تجسيدات أخرى؛ سيكون لهذه البوليمرات وزن جزيئي من حوالي 250000 إلى حوالي 00+ ومن 3000000000 إلى 40000000000. وفي تجسيدات أخرى؛ تكون جسيمات البوليمر متقاطع الروابط أحادية التشتيت؛ مما يعني أن لها توزيع حجم الجسيمات بحيث
يقع ما لا يقل عن 280؛ حوالي 790 أو حوالي 795 من الجسيمات ضمن نطاق ميكرومتر من
توزيع حجم الجسيمات الرئيسي. وفي تجسيدات أخرى؛ يعني حجم الجسيمات أحادية التشتيت أنه لا
0 يوجد أكثر من حوالي 720 حوالي 210؛ أو حوالي 75 من الجسيمات بحجم أقل من uml وفي بعض التجسيدات؛ يتراوح معلق البوليمر المائي من حوالي 0.05 إلى حوالي 71؛ من حوالي 0.1
إلى حوالي 70.5؛ أو من حوالي 0.1 إلى حوالي 70.5 من العامل ومن حوالي 0.1 إلى حوالي
0 من حوالي 0.5 إلى حوالي 26.5 من حوالي 0.5 إلى حوالي 722.0؛ من حوالي 70.5 إلى
حوالي 721.2 من حوالي 0.6 إلى حوالي 510.9 من حوالي 0.6 إلى حوالي 70.8 من عامل
5 تعليق البوليمر. على الرغم من أن المشار إليها بالمفرد؛ ينبغي أن يكون مفهوماً أن واحد أو أكثر من أنواع عامل التعليق البوليمري يمكن استخدامه مع المقدار الإجمالي الذي يقع ضمن نطاقات المذكورة. في أحد التجسيدات؛ يمكن ربط مقدار جسيمات البوليمر المتقاطعة الروابط بشكل خفيف
غير القابلة للذويان» ودرجة الحموضة؛ والضغط الاسموزي مع بعضها البعض ومع درجة التقاطع لإعطاء تركيب له لزوجة تتراوح من حوالي 500 إلى حوالي 100.000 سينتيبواز» ويفضل أن يكون
0 من حوالي 1000 إلى حوالي 0 أو حوالي 1000 إلى حوالي 104000 سينتيبواز» كما تم
قياسه في درجة حرارة الغرفة (حوالي 25 “م) باستخدام مقياس لزوجة من نوع بروكفيلد ديجيتال إل في تي Brookfield Digital LVT مجهز بالمغزل رقم 25 و مهايئ عينة صغير 13R عند 12 دورة في الدقيقة. Ay بعض التجسيدات؛ تكون اللزوجة من حوالي 10 إلى حوالي 400 سنتتيبواز؛ من حوالي 10 إلى حوالي 200 ستتيبواز أو من Jos 10 إلى حوالي 25 loan 5 في بعض التجسيدات؛ قد تصاغ المعلقات البوليمرية المائية بحيث تحتفظ بنفس أو إلى حد كبير بنفس اللزوجة في العين التي كانت لها قبل الإعطاء للعين. وفي بعض التجسيدات؛ يمكن أن تصاغ بحيث يكون هناك زيادة تهليم عند الاتصال مع مائع الدموع. على سبيل المثال؛ عندما يتم إعطاء التركيبة التي تحتوي على دوراسايت DuraSite® أو بوليمر من نوع حمض متعدد اكريليك polyacrylic آخر مماثل للعين عند درجة حموضة أقل من حوالي 6.7؛ قد ينتفخ البوليمر عند 0 الاتصال مع مائع الدموع لأنه يحتوي على درجة حموضة أعلى (حوالي 7) . قد يؤدي هذا التهلم أو الزيادة في التهلم إلى احتباس الجسيمات المعلقة؛ وبالتالي تمديد زمن البقاء للتركيب في العين. في بعض التجسيدات؛ يتم إطلاق العامل ببطء مع تحلل الجسيمات العالقة بمرور الوقت. وفي بعض التجسيدات»؛ طريق النقل هذا يزبد من daly المريض وزيادة زمن اتصال العامل مع أنسجة العين» وبالتالي زيادة مدى امتصاص العقار ومدة العمل للتركيبة في العين. سيتم إطلاق العوامل المحتواة في أنظمة نقل العقار هذه من المواد الهلامية في معدلات تعتمد على عوامل مثل العقار نفسه وشكله المادي؛ ومدى تحميل العقار ودرجة الحموضة في النظام؛ وكذلك على أي مواد مساعدة لنقل العقار؛ مثل راتنجات Jalal الأيوني المتوافقة مع سطح العين؛ lly قد تكون موجودة أيضاً. في بعض التجسيدات؛ يتم توفير مضاد 17-6 لكائن خاضع للمعالجة يستخدم النقل الجيني؛ على سبيل المثال؛ النقل الجيني المحلي. هذا النقل يمكن أن يكون عن طريق نظام تعبير انتقالي؛ 0 نظام التعبير المستقر (على سبيل المثال؛ المدمج) مثل نظام نقل فيروس المصنع من قبل (مدينة كامبريدج؛ ولاية ماساتشوستس) بلوببيرد بيو (Cambridge, MA) Bluebird Bio أو النقل في مصنع الخلايا مثل تلك المصنعة من قبل شركة نيوروتيش (مدينة كمبرلاند؛ ولاية رود ايلاند) Neurotech .(Cumberland, Rhode Island) ويمكن الجمع بين جميع السمات التقنية بشكل فردي في جميع التوليفات الممكنة لمثل هذه 5 السمات. يجب أن تعتبر التجسيدات السابقة في جميع الجوانب توضيحية بدلاً من الحد من الاختراع الموصوف هنا. الأمثلة توضح الأمثلة التالية غير المحددة تجسيدات للاختراعات الموصوفة هنا. Jie 0 1: التحقق من نموذج حصار IL-6 محلي في توليد أوعية مشيمية جديدة CNV
لتحديد ما إذا كان حصار 1.6 المحلي يمكن أن تكون فعال لمعالجة أمراض العين؛ على سبيل المثال» الأوديما البقعية السكرية DME أو Dai) البقعي المرتبط بالعمر AMD age-related macular degeneration الرطب؛ تم إعطاء جسم alias ل IL-6 موضعياً باستخدام نظام نموذجي لتوليد أوعية جديدة مشيمية. نموذج CNV model CNV الذي تم dia بالليزر انظر eyecro.com/in-) (vivo/laser-induced-choroidal-neovascularization-cnv/ 5 يعيد انتاج_العديد من العمليات المرضية الكامنة وراء DME بما في ذلك الالتهاب والأوعية الدموية. أجريت دراسات في الفتران في إيكرو (مدينة اوكلاهوماء ولاية أوكلاهوما) (Oklahoma City, OK) EyeCRO خضعت ستة حيوانات في كل مجموعة للمعالجة بالليزر الثنائي في اليوم 0 لإنتاج ثلاثة آفات لكل عين. في الأيام 53 0 تم إعطاء 3 ميكروغرام من جسم مضاد ل 11.6 جرذي متعدد النسائل من شركة أر اد 0 دي سيستمز إيه إف 506؛ مدينة منيابوليس؛ ولاية منسوتا ( R&D Systems AF506; Minneapolis, (MN لمجموعة الاختبار عن طريق الحقن داخل الجسم الزجاجي (BVT حين أن PBS أو مضاد- VEGE جسم مضاد لمضاد VEGF متعدد النسائل من شركة أر اند دي سيستمز إيه <a) 506 (R&D Systems AF564) إلى حاملة و مجموعات الضابط الإيجابي؛ على التوالي. تم إجراء تصوير الأوعية في الجسم الحي في الأيام 15 و 22 لقياس منطقة الآفة. في كل من اليومين 15 و 22؛ خفضت المجموعة المعالجة المضادة ل 11-6 بشكل كبير الأوعية الدموية مقارنة بضبط الحاملة. لم يكن هناك فرق كبير في الاستجابة بين المجموعة المعالجة بمضاد 11-6 ومضاد VEGF الضابط الإيجابي. يظهر الشكل 1 نتائج هذه التجرية. وتظهر هذه البيانات أن 11-68 على سبيل المثال؛ الأجسام المضادة لمضاد IL6 تعطى داخل الجسم الزجاجي IVT يمكن أن JIE من الأوعية الدموية في نموذج CNV جرذي إلى مستويات مماثلة لمضاد VEGF الضابط الإيجابي (م = 0.0054 في 0 اليوم 15 وم = 0.0005 في اليوم 22 لمضاد TL-6 مقابل ضبط الحاملة). تشير هذه البيانات إلى أن الحصار المحلي ل 11-6 يمكن أن يكون مفيداً لمعالجة أمراض العيون مثل الأمراض التي تنطوي على التسرب الوعائي؛ على سبيل المثال» وذمة البقعة. مثال 2: مضادات الأجسام المضادة 11-6 المرشحة تم تطوير مضادات الأجسام المضادة IL-6 المرشحة باستخدام العملية التي شملت أولاً 5 التطعيمات. تم chal التطعيمات في اتجاه المخترعين من قبل منظمة أبحاث العقود contract research organization 080. تم حقن خمسة فثئران من النوع C/BALB تحت الجلد ب 80 ميكروغرام 11-6 بشري من الشركة أر اند دي سيستمز» cath 206-IL/CF ¢ مدينة منيابوليس؛ ولاية منسوتا (R&D Systems, cat# 206-IL/CF, Minneapolis, MN) في PBS يحتوي على كلوريد الصوديوم تركيزه NaCl 1 جزيئي مع مساعد فرويد. تم إجراء اثنين من التعزيزات ب 80 ميكروغرام
— 6 7 — JL-6 abd g Sue 50 9 تم حصاد الخلايا الطحالية من أعلى فأر عيار وصهرها مع خلايا ورم نخاعي P3x763Ag8.653 myeloma لتشكيل الأورام الهجينة ‘hybridomas سائل الورم الهجين الطافي تم غريلته لربط 11-6 والتضاد. لاختبار ELISA الريط» تم طلي ألواح كوستر 9018 9018 Costar مع 1 ميكروغرام/مل IL-6 بشري في PBS طوال الليل في 4"م. تم إعاقة العيون ب PBS يحتوي على 72 (BSA وغسلهاء ومن ثم حضنت مع 50 ميكرولتر من كل سائل طافي هجين مخفف 1: 2 مع PBS يحتوي على 72 BSA بعد 60 دقيقة؛ تم غسل العيون ثلاث مرات ب 300 ميكرولتر PBS تحتوي على 70.1 توين -20 1»8©0-20. ثم تمت إضافة HRP alae فأري مخفف 1: 3000 في 085-858 إلى كل عين وحضنت لمدة 30 دقيقة. تم غسل العيون كما هو موضح أعلاه ثم تم إضافة ركيزة 363 '» 55'-رباعي مثيل بنزيدين -3,3,5,5 TMB tetramethylbenzidine 0 وقياس الإشارة في 450 و 550 نانو مولار. لدراسات التضادء حضنت خلايا HEK-Blue™-IL6 ناقلة (شركة انفيفوجين؛ مدينة سان دييغو» ولاية كاليفورنيا) مع تراكيز متزايدة من IL-6 بشري في وجود 00 السائل الطافي الهجين المخفف ٠ بعد 24-20 ساعة تم خلط 20 ميكرولتر من السائل الطافي مع 180 ميكرولتر كوانتيبلو QuantiBlue™ (شركة انفيفوجين) وامتصاصية تقاس عند 655 نانو مولار . 15 واستناداً إلى الدراسات الرابطة والتضاد؛ تم اختيار الورم الهجين 64 من قبل مقدمي الطلب بشكل رئيسي ومستنسخ فرعياً في 080. تم اختبار الورم الهجين 64 (فأري أحادي النسيلة) بشكل إضافي للقدرة على تثبيط ارتباط متراكبات IL-6/IL-6Ro لذ 80130 باستخدام اختبار مقايسة امتصاصية للإنزيم (ELISA enzyme-linked immunosorbant assay Jai all خفض الورم الهجين 4 عند تركيز 1.5 ميكروغرام/مل بشكل ملحوظ ارتباط متراكبات IL-6/IL-6Ra ل 80130 يجمد 0 بواسطة Lal) (الشكل 2). وقد تم إعادة غريلة النسائل الفرعية وتكبير الحقول المتغيرة للنسيلة الفرعية 64.58 بواسطة RACE PCR 5 وترتيبها بسياق. الماوس سياقات الحقل الفأرية المتغيرة (المشار إليها باسم (M64 هي كما يلي : ١64 VH (سلسة AL متغيرة) QVQLQQSGAELVRPGTSVKVSCKASGYAFSNYLIEWVKQRPGQGLEWIGVITP 5 GSGTINYNEKFKGKAVLTADKSSSTVYMQLSSLTSDDSAVYFCAKSRWDPLYY (سياق برقم تعريف 13( YALEYWGQGTSVTVSS m64 1 (سلسة خفيفة متغيرة) DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASESVDNYGISEMNWFQQKPGQPPKLLIYAA 0
SNQGSGVPARFSGSGSGTDFSLNIHPMEEDDTAMYFCQQSKEVPLTFGAGTKLE
(سياق برقم تعريف 14( LK
لإنشاء سياقات مؤنسنة؛ تم تطعيم المناطق التي تحدد التكامل complementarity 1164 CDRs determining regions في ولائج خط جرثومي بشري مختارة للتشابه مع سياق فأري بواسطة خوارزمية حسابية. وكانت السياقات المؤنسنة (المشار إليها باسم (HOG كما يلي (تم وضع خط المقادير المتبقية المعدلة مقارنة مع سياقات (m64 ولها حوالي 779.5 تعريف 711 و 784.4 تعريف
VL 5 مع السياقات الفأرية: h64 VH QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYAFSNYLIEWVRQAPGQGLEWMGVIT PGSGTINY AQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSRWDPLYY (سياق برقم تعريف15) YALEYWGQGTIVTVSS 10 VL 164 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRASESVDNYGISFMNWYQQKPGQPPKLLIY A ASNQGSGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLOAEDVAVYYCQQSKEVPLTFGQGTKL (سياق برقم تعريف 16( EIK 15 يتم تصنيع السياقات المؤنسنة بواسطة DNA2.0 (مينلو بارك؛ كاليفورنيا)؛ ثم نسّلت إلى نواقل التعبير المشتقة من 01783.1»م كالتحامات diane مع الحقول الثابتة ل 1501 البشري. وبتم التعبير عن IgGs عن طريق تخميج تحويلي انتقالي في خلايا Freestyle™-293 (إنفيتروجين cInvitrogen جراند آيلاند؛ نيويورك) aig تنقيته بواسطة الاستشراب على البروتين-8. وفي كل من دراسات الارتباط والمقاومة» أظهرت hod IgG انخفاض كبير في الفعالية بالمقارنة مع سابقتها 0164. 0 والتالي؛ تم استخدام عرض الخميرة لاستعادة الألفة المفقودة.
ولتنفيذ الإنضاج الألفوي المصمم لاستعادة أو تحسين ألفة 1164180 المؤنسن؛ يعاد تنسيل سياقات الجسم المضاد 164 لتوليد جزيء Fab في نواقل الخميرة المشتقة من 7702/07 بحيث تلتحم سلسلة FabH مع الشدفة المضادة 4015.3 FITC scFv عبر رابط 645(3) (سياق برقم تعريف: 29). وتم لاحقاً إنشاء مكتبة أشكال متغايرة 1:64 بواسطة PCR المعرض للخطاً باتباع بروتوكول تشاو
5 ومعاونيه Chao et al (انظر المرجع: 1:755-768 Nature Protocols, ,2006). وتم التعبير عن أشكال متغايرة 1164 والسطح المحجوز بواسطة الخميرة الموسومة ب FITC-PEG-NHS ثم تم احتضانها مع 1-6 البشري المضاف إليه بيوتين. وتم الكشف عن 1-6 المرتبط باستخدام ستريتافيدين-800» وتم اختيار الخلايا بالمقدار الأعلى من IL-6 المرتبط بالنسبة لمقدار Fabs المعروض بواسطة فارز BD FACSAria™ WAY وبعد 4 دورات من الاختيار؛ تم تحديد وتتبع 0 سياقات مجموعة من الأشكال المتغايرة ذات الألفة الأعلى. ويكون سياق النسيلة المحددة بواسطة الإنضاج الألفوي (يشار إليه ب (h64-1.4 كما يلي بالطفرات المحددة (أي؛ متغيرة بالمقارنة مع سياقات (VL 5 h64 VH المبينة بالخط الغامق و0015 المبين تحتها خط. وتمثل هذه الحقول المتغيرة برقم 8 (إضافة إلى جزيئات 020 و 11.68 029 الموصوفة أدناه). ومن الجدير بالملاحظة أن Fabs
الكاملة تتضمن CHI CK lis 1801. وفي سياق هذا الطلب؛ يقصد بالإشارة إلى سلسلة ثقيلة أو سلسلة خفيفة "701 بسياق حمض أمينو amino acid أن السياق قد يكون ed من Fab وظيفية تتكون من السياق المشتق من سلسلة خفيفة وسياق مشتق من سلسلة ثقيلة. (018VH) h64-1.4 VH (حقل متغير) QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYALSNYLIEWVRQAPGQGLEWMGYIT 5 PGSGTINYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSRWDPLYY (سياق برقم تعريف: 17( YALEYWGQGTTVTVSS (018VL) 164-1.4 VL (حقل متغير) DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRASESVDNYGIPEMNW YQQKPGQPPKLLIYA ASNRGSGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQOQSEEVPLTFGQGTKL 0 (سياق برقم تعريف: 18( EIKRTV وأعيد تنسيل الحقول المتغيرة 164-1.4 إلى ناقل IgGl البشري pcDNA3 وتم التعبير عنه في صورة 1861 LK الطول في Freestyle™-HEK293 Wa (من شركة لايف تيكنولوجيز Life (Technologies + وكان IgG المنقى الناتج فعالاً أكثر بشكل ملحوظ من جسم مضاد 164 الأصلي في كل من دراسات الارتباط والمقاومة الخلوية. وعند اختبار الألفة باستخدام نظام خميرة»؛ تزداد الألفة من 343 بيكومولار للجزيء المؤنسن الأصلي إلى 43 بيكومولار. وازدادت فعالية المقاومة حوالي 0 أضعاف عند فحصها باستخدام نظام الخلية 06ن11816-81. وأعيد تنسيق 186 164-1.4 في صورة Fab لاستخدامه في العلاجات العينية وغيرها. ويشكل إضافي» تم إجراء دورة أخرى من تشكيل المكتبة والاختيارات التي أساسها خميرة لتحسين الألفة بشكل 0 إضافي. وبعد 4 دورات من الاختيار؛ كان هناك إغناء كبير للشكل المتغاير VH بواسطة الطفرة 77 . وبشار إلى الأجسام المضادة؛ الأشكال المتغايرة والشدفات منها المشتملة على الشكل المتغاير 7 بأجسام مضادة 11-68 019 الأشكال المتغايرة؛ والشدفات منها. المثال 3: اختيار النسق لدراسة التنسيقات الملائمة للمضاد 11-6 الذي أساسه جسم مضاد؛ يتم فحص الأجسام 5 المضادة 11-6 المختارة WS وصف أعلاه لتحديد التعبير الانتقالي؛ الثبات؛ خواص التكدس؛ All dal il و1650 باستخدام أشكال SCFV(VL-Vi) 3 ¢scFv(Vi-VL) «Fab من السياقات 018. alg توضيح نتائج هذه الدراسات لواحد من الجزيئات 11-68 المرشحة (سياقات تحتوي على المنطقة المتغيرة 018) في الجدول 1 الجدول 1
— 0 7 — ألفة الترابط Kip 0 بيكومولار 0 بيكومولار 0 مع 10 بيكومولار من | 255 بيكومولار 0 بيكومولار 5 بيكومولار IL-6 وتظهر هذه البيانات طريقة لتحديد سمات رئيسية لتنسيقات متعددة لمضاد من نوع IL-6 أساسه جسم مضاد وتوضح أنه بالنسبة للمضادات IL-6 المحتوية على المناطق المتغيرة 018 يكون للنسق 018Fab أكثر السمات تفضيلاً في الفئات الرئيسية؛ أي؛ التعبير؛ الثبات؛ التكدس» وألفة الترابط مقارنة بتشكيلة scFv وتقع 150 ل Fab 018 ضمن المدى المعقول للاستخدام العلاجي. المثال 4: أمثلة على أجسام مضادة (JL-6a شدفات؛ ومشتقات منها عرف مقدمو الطلب السياقات التالية باستخدام الطرق الموصوفة هنا. وتمثل السياقات المبين تحتها خط CDRs للسلاسل الثقيلة والخفيفة. وقد يتم إيجاد سياقات أخرى خلال المواصفة. سياق السلسلة الثقيلة لمتعدد ببتيد 018 (الطول الكلي؛ ©001811) في هيكل IgGl QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYALSNYLIEWVRQAPGQGLEWMGYVIT ~~ 0 PGSGTINYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVY YCARSRWDPLYY YALEYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVT VSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNT KVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVV DVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLN 5 GKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLV KGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNV (سياق برقم تعريف: 19( FSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK سياق السلسلة الثقيلة لحمض نووي nucleic acid 018 (الطول الكلي؛ ©001811) في هيكل IgGl 20 CAAGTGCAGCTGGTGCAGTCAGGGGCCGAGGTTAAGAAGCCAGGGAGCAG CGTCAAGGTATCTTGTAAAGCGTCTGGTTACGCCCTTTCAAACTACCTGATC GAATGGGTGAGGCAGGCTCCCGGCCAAGGCCTGGAATGGATGGGAGTTATC ACCCCTGGGAGCGGCACCATTAATTACGCCCAGAAATTTCAGGGACGAGTG ACGATTACCGCCGACGAGTCCACCAGTACTGCCTACATGGAGCTGTCCTCAC 5 TCCGCAGCGAGGACACGGCAGTTTACTACTGCGCCCGGAGTCGATGGGACC CTCTTTACTATTATGCTCTGGAATACTGGGGCCAGGGAACGACCGTTACAGT GTCATCTGCTAGCACAAAAGGACCATCAGTCTTCCCACTTGCTCCTTCATCT AAGAGCACAAGTGGTGGCACTGCAGCCCTTGGCTGCCTGGTGAAAGATTAT TTCCCCGAACCTGTTACAGTTTCTTGGAACTCCGGTGCACTGACATCCGGAG 0 TACACACTTTCCCAGCTGTGCTGCAGAGCTCAGGACTGTATAGCCTGTCTTC GGTGGTCACTGTTCCATCGTCGAGTCTTGGCACACAGACATATATTTGCAAC GTCAATCACAAGCCCTCCAACACAAAAGTGGATAAGAAGGTCGAGCCCAAA TCTTGTGACAAGACCCATACGTGTCCTCCCTGTCCCGCCCCTGAACTGCTGG GAGGCCCTTCTGTGTTCCTGTTCCCACCTAAGCCAAAGGACACTCTGATGAT 5
— 7 1 —
CAGCCGGACTCCCGAGGTTACCTGTGTGGTGGTGGATGTGTCTCATGAAGA
CCCTGAGGTTAAGTTCAATTGGTACGTGGATGGCGTCGAGGTGCATAACGC
AAAAACCAAGCCGAGAGAGGAGCAGTACaatAGCACCTATAGAGTAGTGAG
CGTCCTGACTGTCTTACATCAGGATTGGCTCAATGGTAAAGAATATAAGTGC
AAGGTAAGCAACAAGGCCCTACCCGCACCAATAGAGAAGACCATCTCCAAG 5
GCGAAAGGTCAGCCCAGGGAGCCCCAGGTTTATACACTGCCTCCCTCACGC
GACGAATTAACAAAGAATCAGGTGTCTCTCACCTGTCTCGTCAAGGGCTTTT
ACCCTTCCGACATCGCCGTGGAGTGGGAATCCAATGGCCAGCCTGAGAACA
ATTATAAGACAACTCCCCCAGTCCTGGATTCAGATGGGTCGTTCTTTCTATA
TAGTAAGTTGACCGTGGATAAGTCTCGCTGGCAACAGGGGAACGTGTTCTC 10
TTGCTCTGTTATGCATGAAGCGCTGCACAATCATTATACCCAGAAGTCCCTG
TCCCTGAGCCCCGGGAAG (20 (سياق برقم تعريف: في هيكل 1801. وتم وضع (018FabHC) 018 Fab سياق السلسلة الثقيلة لمتعدد الببتيد خط تحت CDRs QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYALSNYLIEWVRQAPGQGLEWMGNVIT 5 PGSGTINYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSRWDPLYY YALEYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVT VSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNT (سياق برقم تعريف: 1( KVDKKVEPKSC 20 سياق السلسلة الخفيفة لمتعدد الببتيد بالطول الكامل 018 (fIO18LC) وتم وضع خط تحت
CDRs
DIVMTQSPDS LAVSLGERAT INCRASESVD NYGIPEMNWY QQKPGQPPKL
LIYAASNRGS GVPDRFSGSG SGTDFTLTIS SLQAEDVAVY YCQOQSEEVPL
TFGQGTKLEI KRTVAAPSVF IFPPSDEQLK SGTASVVCLL NNFYPREAKV
QWKVDNALQS GNSQESVTEQ DSKDSTYSLS STLTLSKADY EKHKVYACEV 5
THQGLSSPVT KSFNRGEC (2 (سياق برقم تعريف: 029 IL-6 5 020 سياق السلسلة الخفيفة للمضادات Load وتمثل هذه
IgGl في هيكل (018LC) 018 بالطول الكامل nucleic acid سياق السلسلة الخفيفة للحمض النووي
GACATAGTGA TGACTCAAAG TCCGGACAGC CTGGCGGTGT CACTCGGCGA
ACGGGCAACT ATCAACTGCC GAGCCAGCGA GAGCGTCGAT AATTACGGCA ~~ 30
TCCCCTTCAT GAACTGGTAT CAGCAGAAGC CAGGACAGCC GCCCAAGCTG
CTTATCTACG CCGCTTCCAA CCGGGGATCA GGGGTGCCCG ATCGATTTAG
TGGAAGCGGT AGTGGGACCG ATTTCACACT GACCATCAGC TCCCTTCAGG
CCGAGGATGT GGCTGTCTAT TATTGTCAGC AATCCGAGGA AGTGCCGCTC
ACGTTTGGTC AGGGAACCAA ACTGGAGATC AAGCGGACCG TAGCGGCGCC 5
TAGTGTCTTC ATCTTCCCAC CCTCCGACGA ACAGCTGAAG TCTGGCACTG
CTTCCGTCGT GTGCCTGCTC AACAACTTTT ACCCTAGAGA GGCAAAAGTT
CAATGGAAAG TAGACAATGC CTTGCAGTCC GGGAACTCCC AGGAGTCTGT
CACAGAGCAG GATAGTAAGG ACTCAACCTA CAGCCTGTCC AGCACACTGA
CCCTCTCCAA AGCCGACTAC GAGAAGCACA AAGTGTACGC TTGCGAAGTT 0
ACGCATCAGG GGCTGTCCTC ACCCGTTACA AAAAGTTTTA ACAGAGGGGA
GTGC (26 (سياق برقم تعريف: (غامق؛ مائل) AT9V عدا 018FabHC بنفس السياق ل «(019FabHC) 019 السلسلة الثقيلة
QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYALSNYLIEWVRQA PGQGLEWMGYITPGSGTINY AQKFQGRVTI TADESTSTVY MELSSLRSED TAVYYCARSRWDPLYYYALEYWGQGTTVTV SSASTKGPSV FPLAPSSKST SGGTAALGCL VKDYFPEPVT VSWNSGALTS GVHTFPAVLQ SSGLYSLSSV (سياق برقم تعريف: 3( VTVPSSSLGT QTYICNVNHK PSNTKVDKKYV EPKSC VH 019 (المنطقة المتغيرة/ (019HC QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYALSNYLIEWVRQA PGQGLEWMGYITPGSGTINY AQKFQGRVTI TADESTSTVY MELSSLRSED (سياق برقم تعريف: 27( TAVYYCARSRWDPLYYYALEYWGQGTTVTV SS Jia سياق السلسلة الخفيفة المضادة (متعدد الببتيد وحمض نووي (nucleic acid 019 (019LC) نفس 018LC (سياق برقم تعريف: 4( CDRI1 of 018HC (VH CDR1 018):GYALSNYLIE (سياق برقم تعريف: 5( CDR2 of 018HC (VH CDR2 018): VITPGSGTIN (سياق برقم تعريف: 6( CDR3 of 018HC (VH CDR3 018):SRWDPLYYYALEY (سياق برقم تعريف: 7( CDRI1 of 018LC (VL CDR1):RASESVDNYGIPFMN (سياق برقم تعريف: 8( CDR2 of 018LC (VL CDR2):AASNRGS (سياق برقم تعريف: 9( CDR3 of 018LC (VL CDR3):QQSEEVPLT (سياق برقم تعريف: 4( CDRI1 of 019HC (VH CDR1 019):GYALSNYLIE (سياق برقم تعريف: 5( CDR2 of 019HC (VH CDR2 019): VITPGSGTIN (سياق برقم تعريف: 6( CDR3 of 019HC (VH CDR3 019):SRWDPLYYYALEY المثال 5: حاتمة ورسم خارطة بنيوية رسم خارطة حاتمة تم رسم خارطة dala وظيفية على المضادات 11-6 المرشحة المختارة. ووجد أن الجسم المضاد المرشح (الجسم المضاد الفأري 64) لم يقلل ارتباط 1-680 ب IL-6 في ELISA مما يشير إلى أن الجسم المضاد المرشح غير مرتبط بالموقع 1. وأجربت تجارب إضافية أظهرت أن الجسم المضاد الخيمري الفأري 64 يقلل ارتباط المتراكب 116/1680 ب 80130 في ELISA مما يشير إلى أن كل من الموقع ]1 أو الموقع 111 ل IL-6 يخفي موقع الترابط للجسم المضاد. ووجد أيضاً أن 0 الجسم المضاد الفأري 64 لم يعق بشكل ملحوظ ارتباط الجسم المضاد 811-65 في الموقع TIT المعرف (إميونوتيك cImmunotech مرسيليا؛ فرنسا) مع IL-6 مما يشير إلى أن الجسم المضاد المرشح يريط الموقع TT مع 11-6. وتظهر هذه البيانات أنه قد يتم توليد الأجسام المضادة للموقع IT وتظهر طريقة لتعريف هذه الأجسام المضادة.
ولتعريف الحاتمة بشكل إضافي؛ تولدت طفرات في 11.6 في الخميرة كالتحامات مع 4015.3 (انظر المراجع: Boder et al., 2000, Proc Natl Acad Sci USA 97, 10701-10705; Chao et Nat Protoc 1, 755-768 , 2006 ..لة). وكانت الطفرات المعبر عنها في 11-6 البشري بالطفرات الفردية أو الزوجية التالية: ¢Y31E R30E «D27E/R24E 348ل «VI21E/S118R 2171578 .R179E 5 1617128 »11620/01598 5 ويتم استخدام جزيئات الطفرات المعبر Wie 1776 في دراسات الارتباط مع (Fab) 018. ولوحظ انخفاض الألفة ل (Fab) 018 في 1278/8248 7318 0348 «VI2IR [S118R وتم تحديد موقعها جميعاً في الموقع 11 ل 11-6. وبالتالي» يتضمن الاختراع الموصوف هنا جسم مضاد مرتبط بواحد على (J 2 3 4؛ 5؛ أو 6 أحماض أمينية amino 5 في الموقع 24 27 31 34 ¢118 و121 من IL-6 البشري أو الموقع المكافئ في IL- 0 6. التعريف البنيوي لحاتمة الموقع 1[ تم حساب المسافات التالية بتحديد الموقع 17 بنيوياً. وتعتمد الحسابات على بنية بلورية سداسية الوحدات 0/1126ه0130/1-6ع» 109141 PDB (انظر المرجع: ,2003 Boulanger et al., ٠ (Science 300: 2101-2104 وتمتد 1 Helix من 11-6 بين الموقع 1 والموقع IT وتنتج شقات معينة 15 تتقع بجوار الموقع TT لكنها تحتوي على سلاسل جانبية تتجه نحو الموقع of مثلاًء 830. وتشير D2 و03 إلى حقول خارج الخلية ل JIL-6Ra وتم تحديد الأحماض الأمينية amino acids التالية ل IL-6 بأنها تقع ضمن 0.5 نانومتر (5 أنجستروم) من «Q111 «E110 ¢D34 ¢Y31 «R30 ¢ Q28¢K27 24 119 :gpl130-D2-D3 K128 3 «F125 »0124 «V121 «S118 «M117 ¢Al114 3 20 وتم تحديد الأحماض الأمينية amino acids بأنها تقع ضمن 0.7 نانومتر (7 أنجستروم) من «E23 :gp130-D2-D3 24ل 25ل 27ل «R30 029 «Q28 31 1034 المجاء «Q102 «S118 «M117 0116 ¢V115 ¢All14 «R113 ¢A112 «Q111 «E110 +9 16120 7121 K128 3 «F125 «Q124 «L122 وبالتالي» قد يكون جزيء Sle جسم مضاد أو شدفة منه يرتبط مع واحد أو أكثر من الأحماض الأمينية amino acids 11-6 التي تقع ضمن0.5 نانومتر (5 أنجستروم) أو 0.7 نانومتر )7 أنجستروم) من الموقع ]1 عبارة عن 11-68. ويتم تزويد سياق 11-6 البشري أدناه للرجوع إليه Jia) السياق المبين تحته خط السياق الدليلي). وتكون الأحماض الأمينية التي تقع ضمن 0.7 نانومتر (7 أنجستروم) من gp130-D2- D3 بالخط المائل. ويكون ترقيم الحمض الأميني؛ مثلاً؛ الطفرات المستخدمة لتعريف الحاتمة؛ بدون 0 وجود السياق الدليلي:
6 البشري MNSESTSAFGPVAFSLGLLLVLPAAFPAPVPPGEDSKDVAAPHRQPLTSSERIDK QIRYILDGISALRKETCNKSNMCESSKEALAENNLNLPKMAEKDGCFQSGFNEE TCLVKIITGLLEFEVYLEYLQNRFESSEEQARAVOMSTKVLIQFLQKK AKNLDAIT TPDPTTNASLLTKLQAQNQWLQDMTTHLILRSFKEFLQSSLRALRQM 5 (سياق برقم تعريف: 21( وأجربت تجارب اختبار الشدفة Fab للجسم المضاد المؤنسن h64-1.4 ووضحت أنه كان من الممكن إعاقة إرسال إشارة 17-6 في الموقع المجاور والمقابل؛ وهذا يعزى إلى استهداف الموقع ]1. ولم يتم تغيير فعالية شدفة Fab في وجود مستقبلة 11-6 القابل للذويان ©1-6:. وهذا بعكس مضاد 0 1168180 الذي قلل من الفعالية في وجود SILER وأعاق إرسال الإشارة في الموقع المجاور فقط. وتظهر هذه التجارب أنه قد يتم استخدام جسم مضاد أو شدفة من الجسم المضاد مثل شدفة Fab التي تستهدف الموقع IT لتثبيط كل من إرسال الإشارة في الموقع المجاور والمقابل ل 1-6. JE) 6: دراسات الحيوانات الرئيسية لأن نشاط الحيوانات غير الرئيسية قد يختلف بشكل كبير عن نشاط الحيوانات الرئيسية؛ يتم أيضاً فحص المضادات المرشحة IL-6 بشكل نموذجي لتحديد PK ووسائط أخرى باستخدام حيوانات رئيسية. ويختلف IL-6 البشري عن 11-6 لقرد الرياح وقرد الريزيوس عند 7 مواقع؛ وأحدها يكون في الموقع ]1 (الحمض الأميني amino acid 28) ويكون نفسه في الموقع ]1 ل 11-6 للقرد الأخضر الافريقي. samy أن هذا يقلل ارتباط جسم مضاد يشتمل على سياقات 018 بواسطة حوالي 4-3 مرات فقط. وتعد القدرة على الارتباط ب 11-6 من حيوان رئيسي ميزة مفيدة للمضاد (IL-6 مما يسهل تطور 0 المرشح كعقار» مثلاً؛ بواسطة تفعيل اختبار مثل اختبار السمية في حيوانات رئيسية. وكما هو الحال في أغلب الأجسام المضادة (IL-6 لم تتفاعل الأجسام المضادة ضد IL-6 الموصوفة هنا تقاطعياً مع 11-6 من قارض؛ أرنب؛ أو كلب بسبب تجانس السياق المنخفض. ومع ذلك» في دراسات الألفة؛ وجد أن Fab 018 يريط 11-6 لقرد الرياح والقرد الأخضر الافريقي بألفة بشرية بشكل تقريبي (الجدول 2). 5 الجدول 2: ألفة أحادية التكافؤؤ Fab 018 للعديد من 11-6 في أنواع متعددة
تظهر هذه البيانات أيضاً القدرة ل 17-6 كما وصف هنا للريط بشكل محدد والقدرة على تطور جزيء له مزايا تتيح الاختبار. Sle لدراسات السمية والتكاثرية؛ في حيوان مناسب. المتال 7: زيادة التعبير عن IL-6a 5 لزيادة التعبير عن متعددات الببتيد لذ Faby 018 Fab 019»؛ تم إنشاء تركيبات تضيف 5 أحماض أمينية amino acids إضافية DKTHT) (سياق برقم تعريف: 30)) للسلسلة الثقيلة في [CHI المنطقة المفصلية باستخدام طرق معروفة في التقنية. ووضح سياق السلسلة الثقيلة المعدلة 018Fab أدناه باعتباره السياق برقم تعريف: 24. وبتم الاشارة للسياق المعدل 018 هنا ب 020 وبتم الاشارة إلى السياق 019 المعدل هنا ب 021. وحسن الجزيء 020 (السلسلة الثقيلة 020Fab والسلسلة 0 الخفيفة (018Fab التعبير بالمقارنة مع Fab الأصلي الذي له سلاسل 018Fab Ald وسلاسل خفيفة -018Fab ولم يظهر جزيء 019 أي فرق كبير في الألفة بالمقارنة مع الجزيء 020. وتم زيادة التعبير عن كل من 020 و 019 بنحو الضعفين؛ على التوالي؛ ولم تتأثر الألفة بالتغيير. السلسلة الثقيلة 020 Fab) مع DKTHT (سياق برقم تعريف: 30) عند طرف الكريوكسي (carboxy QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYALSNYLIEWVRQA 5 PGQGLEWMGYVITPGSGTINY AQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCARSRWDPLYYYALE YWGQGTTVTV SSASTKGPSV FPLAPSSKST SGGTAALGCL VKDYFPEPVT VSWNSGALTS GVHTFPAVLQ SSGLYSLSSV (سياق برقم تعريف: VTVPSSSLGT QTYICNVNHK PSNTKVDKKYV EPKSCDKTHT 20 24( تم قياس المقاومة IL-6 باستخدام 020Fab في الخلايا المبلغة HEK-Blue™ IL-6 (إنفيفوجن dInvivoGen سان دييغو» كاليفورنيا). وتم حضن LIAN في خليط من 10 بيكومولار من IL-6 وتراكيز متفاوتة من كل من الجسم المضاد 020 أو IL-6Ra (انظر المرجع: Cell Sciences, ¢(Canton, MA مع أو بدون 50 نانومولار من 1-6©0. وبعد 24-20 ساعة من الحضن؛ تم خلط المحلول الطافي من مستنبت الخلية مع 180 ميكرولتر من الركيزة QuantiBlue™ (من شركة انفيفوجين (InvivoGen وتم حضنها لمدة ساعة واحدة؛ وتم لاحقاً قياس الامتصاصية عند 655 نانومتر. وببين الشكل 3 والشكل 3ب بيانات من هذه التجارب؛ حيث تظهر قدرة 020 على تثبيط نشاط IL-6 في وجود أو غياب JL-6R المثال 8: أجسام مضادة IL-6 1802
— 7 6 — أعيد تنسيق 018 إلى هيكل 1802 البشري متماثل النمط لتقليل ارتباط FeyR وتقليل ADCC بالمقارنة مع الجسم المضاد المنسق 1501 باستخدام طرق معروفة في التقنية. ويشكل إضافي؛ من المتوقع أن يؤدي إعادة تنسيق 018 لنسق بطول كلي؛ le 1802 إلى تقليل معدل التصفية من الجسم الزجاجي بسبب الحجم الكبير للجزيئات. بناء/تنقية الأجسام المضادة ضد 102 11.6 لبناء الأجسام المضادة 1502 البشرية باستخدام سياقات لمضاد 11-6 الموصوفة أعلاه؛ تم تضخيم حقل ثابت 1502 البشري ب PCR من cDNA بواسطة مواقع الحصر Nhel و1101 عند الأطراف النهائية N- و -©؛ على التوالي. وتم تنقية منتج PCR وهضمه بواسطة أنزيمات الحصر Nhel ولطصلا» ثم ربطه بناقل 0115 يحتوي على حقل متغير لمضاد 11.6 أي السياق برقم تعريف: Jl) ١ 0 أعلاه). ونتج عن هذا سياق سلسلة ثقيلة 1802 بطول كامل. واستخدمت البلازميدات التي تحتوي على السلسلة الخفيفة بالطول الكامل التي تحتوي على سياق 018 لتزويد السلسلة الخفيفة. ومن أجل تقليل ارتباط FeRn بشكل إضافي Milly تقليل إعادة تدوير 17-68؛ تم توليد الطفرات النقطية في السلسلة الثقيلة. وتم توليد الطفرات بواسطة تطفير QuikChange® (من شركة اجيلنت تيكنولوجيز Agilent Technologies » سانتا JUS كاليفورنيا). وتمت عملية تخميج تحوبلي 5 مشتركة لبلازميدات السلسلة الثقيلة والخفيفة باستخدام متعدد (إثيلين امين) poly(ethylenimine) PET إلى 100 مل من مستنبتات انتقالية من HEK293-6E WA واستنبتت لتتيح التعبير لمدة حوالي 5 أيام. وأدى هذا إلى توليد أجسام مضادة تحتوي على شق يرتبط بالموقع ]1 في IL-6 والبنية 1802. وسميت هذه البنيات هنا التي تحتوي على CDRs 018 ب 0181802 أو 0291802. وتم توليد الطفرات النقطية عند الشقات 1253. 20 وتم التعبير عن الجزيء 1802 بشكل جيد وأعاق 11-6 في المعايرات الخلوية مع تحسين طفيف بالفعالية بالمقارنة مع ه0201. السياقات الناضجة 029 ue CDRs) تحتها خط) السلسلة الثقيلة 029 QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYALSNYLIEWVRQA PGQGLEWMGYITPGSGTINY AQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED 5
TAVYYCARSRWDPLYYYALE YWGQGTTVTV SSASTKGPSV FPLAPCSRST
SESTAALGCL VKDYFPEPVT VSWNSGALTS GVHTFPAVLQ SSGLYSLSSV
VTVPSSNFGT QTYTCNVDHK PSNTKVDKTV ERKCCVECPP CPAPPVAGPS
VFLFPPKPKD TLMISRTPEV TCVVVDVSHE DPEVQFNWYV DGVEVHNAKT
KPREEQFNST FRVVSVLTVV HQDWLNGKEY KCKVSNKGLP APIEKTISKT 0
KGQPREPQVY TLPPSREEMT KNQVSLTCLV KGFYPSDIAV EWESNGQPEN
NYKTTPPMLD SDGSFFLYSK LTVDKSRWQQ GNVFSCSVMH EALHNHYTQK
SLSLSPGK(11 (سياق برقم تعريف:
— 7 7 — السلسلة الخفيفة 029 DIVMTQSPDS LAVSLGERAT INCRASESVDNYGIPEMNWY QQKPGQPPKL LIYAASNRGS GVPDRFSGSG SGTDFTLTIS SLQAEDVAVY YCQQSEEVPLTFGQGTKLEI KRTVAAPSVF IFPPSDEQLK SGTASVVCLL NNFYPREAKV QWKVDNALQS GNSQESVTEQ DSKDSTYSLS STLTLSKADY 5 (سياق برقم تعريف: 12( EKHKVYACEV THQGLSSPVT KSFNRGEC ارتباط FcRn المعدل قد يكون ل 11-6 تأثيرات جهازية إيجابية محددة. Jilly من المفيد تصميم 11-68 بحيث يكون له قدرة احتجاز جيدة في الجسم الزجاجي ولكن له عمر نصف جهازي محدود. ويجب أن يقلل 0 انخفاض أو التخلص من ارتباط 76180 من التراكم الجهازي لأي عقار يرشح إلى الدورة الدموية؛ وبالتالي تحسين سلامة JL-6a وبالتالي» بسبب إمكانية زيادة حركة المرور في وسط 780 لتدفق الأجسام المضادة من العين» تم Lad تعديل 18062 020 لإزالة ارتباط FeRn عن Goh إضافة طفرات Fe عند الشقات 1254« 11311 أو 11436 (انظر السياق برقم تعريف: 23( المرقمة وفقاً لمارتن ومعاونية Martin 15 .لة cet (اتظر المرجع: )2001( 867-877 ,7:4 «(Molecular Cell, وتم توضيح المواقع المطفرة بالخط الغامق في السياق برقم تعريف: 23؛ وتم تطفير 1254 إلى A أو R وتم تطفير 11311 إلى A أو 8©» وتم تطفير 11311 إلى N مع تطفير D313 إلى 1 وتم تطفير 11436 إلى A (يبداً الترقيم بعد السياق الدليلي؛ المبين تحته خط في السياق برقم تعريف: 23). وتم تسمية الأجسام المضادة IL-6 التي تحتوي هذه السياقات ب «0181802. السلسلة الثقيلة لمضاد IL-6 1802 (خط عادي: ¢VH خط مائل: (CH (بدون سياق دليلي) يوضح مواقع الطفرات (مبينة بالخط الغامق) QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYALS NYLIEWVRQA PGQGLEWMGV ITPGSGTINY AQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCARSR WDPLYYYALE YWGQGTTVTV SSASTKGPSV FPLAPCSRST SESTAALGCL VKDYFPEPVT ~~ VSWNSGALTS GVHTFPAVLQ SSGLYSLSSV ~~ VIVPSSNFGT 5 QTYTCNVDHK PSNTKVDKTV ERKCCVECPP CPAPPVAGPS VFLFPPKPKD TLMISRTPEV TCVVVDVSHE DPEVQFNWYV DGVEVHNAKT KPREEQFNST FRVVSVLTVV HQDWLNGKEY KCKVSNKGLP APIEKTISKT KGQPREPQVY TLPPSREEMT KNQVSLTCLV KGFYPSDIAV EWESNGQPEN NYKTTPPMLD SDGSFFLYSK LTVDKSRWQQ GNVFSCSVMH EALHNHYTQK SLSLSPGK 30 (سياق برقم تعريف: 23( السلسلة الثقيلة لمضاد 11-6 1802 (خط عادي: ¢VH خط مائل: (CH بسياق دليلي (مبين تحته خط) يوضح مواقع الطفرات (مبينة بالخط الغامق) MDW TWRILFLVAAATGAHSQVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYALS NYLIEWVRQA PGQGLEWMGV ITPGSGTINY AQKFQGRVTI TADESTSTAY 5 MELSSLRSED TAVYYCARSR WDPLYYYALE YWGQGTTVTV SSASTKGPSV FPLAPCSRST ~SESTAALGCL VKDYFPEPVI VSWNSGALTS GVHTFPAVLQ
— 8 7 — SSGLYSLSSV ~~ VIVPSSNFGT QTYTCNVDHK PSNTKVDKTV ~ERKCCVECPP CPAPPVAGPS VFLFPPKPKD TLMISRTPEV TCVVVDVSHE DPEVQFNWYV DGVEVHNAKT KPREEQFNST FRVVSVLTVV HQDWLNGKEY KCKVSNKGLP APIEKTISKT ~~ KGQPREPQVY TLPPSREEMT KNQVSLTCLV ~~ KGFYPSDIAV EWESNGQPEN NYKTTPPMLD SDGSFFLYSK LTVDKSRWQQ GNVFSCSVMH 5 (سياق برقم تعريف: 28( EALHNHYTQK SLSLSPGK وبالتالي؛ تتضمن بعض التجسيدات جسم مضاد له سياق سلسلة ثقيلة مصورة في السياق برقم تعريف: 23 بطفرات عند 1254 (مثلاًء A أو «(R 11311 (مطفرة إلى A أو «(BE 11436 (مطفرة إلى ه)ء أو 0313 (مطفرة إلى (T مع 11311 المطفرة إلى 1. ويالتالى يزود السياق برقم تعريف: 25 سياق بحيث؛ من الممكن استخدامه عندما يطفر عند 3 (مثلاً» 11338 أو HI90A Skis) HI90 «(T133R أو ((H315A Sie) 11315 «(HI90E أو D192 مع 11190 Sie) 01927 مع (HI9ON في جسم مضاد؛ شدفة؛ أو مشتق منها لانتاج متعدد الببتيد به رابطة Fe مختزلة عند درجة حموضة منخفضة؛ lie درجة الحموضة 5.5 أو درجة الحموضة للجسيمات الحالة و/أو متعدد الببتيد له عمر نصف جهازي محدد بالمقارنة مع الجزيء J 15 لأصلي أو مرجعي AT لا يتضمن السياق . SASTKGPSV FPLAPCSRST SESTAALGCL VKDYFPEPVT VSWNSGALTS GVHTFPAVLQ SSGLYSLSSV VTVPSSNFGT QTYTCNVDHK PSNTKVDKTV ERKCCVECPP CPAPPVAGPS VFLFPPKPKD TLMISRTPEV TCVVVDVSHE DPEVQFNWYV DGVEVHNAKT KPREEQFNST FRVVSVLTVV HQDWLNGKEY KCKVSNKGLP APIEKTISKT KGQPREPQVY TLPPSREEMT KNQVSLTCLV 0 KGFYPSDIAV EWESNGQPEN NYKTTPPMLD SDGSFFLYSK LTVDKSRWQQ (سياق برقم تعريف: 25( GNVFSCSVMH EALHNHYTQK SLSLSPGK السلسلة الخفيفة لمضاد (I1gG2) IL-6 (خط عادي : ¢VK خط مائل (CK DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRASESVDNYGIPFMNWYQQKPGQPPKLLIYA 5 ASNRGSGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQSEEVPLTFGQGTKL EIKRTVAAPSVF IFPPSDEQLK SGTASVVCLL NNFYPREAKV QWKVDNALQS GNSQESVTEQ DSKDSTYSLS STLTLSKADY EKHKVYACEV THQGLSSPVT (سياق برقم تعريف: 22( KSFNRGEC 0 المثال 9: ثبات التشكيلة تم اختبار الثبات لشدفة Fab لمضاد 1561/11-6 (تحتوي على الحقل 18610111) بواسطة تحديد .1 الابتدائيى في 7135 ثم في مجموعة من المحاليل المنظمة والسواغات باستخدام قياس الفلورة بالمسح التفاضلي. ووجد أن محلول السترات citrate المنظم؛ درجة حموضته 5.5 يزيد من Tin إلى أكثر من 80 م . وبالتالي في بعض التجسيدات ؛ يتم تزويد IL-6a في محلول السترات citrate المنظم وفي يعض الحالات لها Tm = 80م على ا لأقل .
وتم اختبار التكدس باستخدام SEC-MALS ولم يلاحظ أي تكدس عند 20 ملغم/مل في محلول ملحي منظم من الفوسفات .PBS phospate Jal 10: الأجسام المضادة الحساسة لدرجة الحموضة لتحسين PK قد يكون ل IL-6 تأثيرات جهازية إيجابية محددة. وبالتالي من المفيد تصميم 117-68 بحيث يكون له قدرة احتجاز جيدة في الجسم الزجاجي ولكن له عمر نصف جهازي محدود. ويجب أن يقلل انخفاض أو التخلص من ارتباط 7680 من التراكم الجهازي لأي عقار يرشح إلى الدورة الدموية؛ وبالتالي تحسين سلامة IL-6 وبالتالي؛ بسبب إمكانية زيادة حركة المرور في وسط 76180 لتدفق الأجسام المضادة من العين؛ تم أيضاً تعديل 1802 020 لإزالة ارتباط FeRn عن طريق إضافة طفرات Fe عند الشقات 1253» (H310 أو 11435 المرقمة وفقاً لمارتن ومعاونيه (Martin et al., 0 (انظر المرجع: )2001( 867-877 ,7:4 «(Molecular Cell, وتم تسمية الأجسام المضادة المشار Leal) هنا بالأجسام المضادة IL-6pH أو مضاد TL-6pH أدناه. توليد أجسام مضادة لها ألفة ارتباط شديدة التأثر بدرجة الحموضة يكون pKa للهستيدين histidine حوالي 6.0 وتعمل الهستيدينات 115001065 التي يتم إدخالها عند سطوح الارتباط البينية على قطع الارتباط عند إضافة بروتون protonation إلى السلسلة الجانبية 5 عند درجة حموضة منخفضة. وباستخدام الجسم المضاد الذي يستهدف الموقع ]1 في 11-6 كما هو موصوف أعلاه؛ يتم توليد مكتبة تحتوي على أشكال مغايرة غنية بالهستيدين histidine في مناطق التحديد التكميلية بدءاً من 018 وبتم غريلة المكتبة لتحديد الارتباط شديد التأثر بدرجة الحموضة باستخدام طريقة عرض الخميرة yeast display وكانت المكتبة المتولدة Ble عن مكتبة تركيبية تحتوي على CDRs مشفرة بواسطة روامز منحلة بحيث يكون كل شق عبارة عن شق من ball البري 0 (أي مماثل لذلك في الجسم المضاد الأصلي) أو عبارة عن شق هستيدين. وأجريت هذه الغريلة عن طريق الفرز المتبادل للارتباط العالي عند درجة حموضة فسيولوجية (7.4) والارتباط المنخفض عند درجة حموضة الجسيم الداخلي endosome (5.5). وتم تحديد الطافر الذي يختار الخميرة والذي له ألفة ارتباط عالية نسبياً عند درجة حموضة تبلغ 7.4 Kd) أحادي التكافؤ يبلغ 407 بيكومولار للطافر بالمقارنة مع 192 بيكومولار للجزيء 5 الأصلي) dally ارتباط منخفضة نسببياً عند درجة حموضة تبلغ 5.5 Kd) أحادي التكافؤ يبلغ 2.362 نانومولار للطافر بالمقارنة مع 195 بيكومولار للجزيء الأصلي). وهذا يمثل تغير بمقدار حوالي 5.8 مرة في الألفة عند درجة حموضة تبلغ 5.5. ويحتوي هذا الطافر على طفرات هستيدين histidine متعددة في 0011 للسلسلة الخفيفة. وبالتالي» يظهر هذا الطافر ألفة ارتباط مماثلة لتلك للجزيء الأصلي عند درجة حموضة تبلغ 7.4 وفقد ملحوظ في الألفة عند درجة حموضة تبلغ 5.5 وتم إثبات
هذه النتيجة باستخدام (ELISA فرز الخلايا المنشط بمادة فلورية Fluorescence-Activated Cell (FACS Sorting وتحليل رنين البلازمون السطحي SPR بواسطة الطرق المعروفة في التقنية. وتظهر هذه البيانات أنه يمكن توليد 11-68 الذي أساسه الجسم المضاد بحيث يكون له سمات استهداف الموقع IT في 11-6 الذي يمكن استخدامه لتثبيط كل من الفعالية عند الموقع المجاور والمقابل في IL-6 وله حركيات دوائية محسنة بالمقارنة مع الجسم المضاد الأصلي أو جسم مضاد آخر يشتمل على Fe dis من النمط البري وهذا يتحقق جزئياً على الأقل عن طريق تغيير الارتباط عند درجة الحموضة التي تبلغ 5.5. المثال 11: فعالية حصار IL-6 الموضعي في نموذج فأري لتوليد أوعية جديدة مشيمية choroidal CNV neovascularization بالليزر لتحديد إذا ما كان حصار IL-6 الموضعي فعالاً في علاج مرض العين؛ مثلاً الأوديما البقعية السكرية DME أو الانحلال البقعي المرتبط بالعمر AMD الرطب؛ تم إعطاء جسم مضاد ل IL-6 أحادي النسيلة موضعياً في نموذج لتكون أوعية جديدة مشيمية. وتم استخدام نموذج CNV المستحث بالليزر كما وصف سايشن ومعاونوه في المرجع Saishin et al.
Journal of Cellular Physiology, 195:241-248 (2003) في هذا المثال. وقد أحدث نموذج CNV المستحث بالليزر 5 العديد من العمليات الممرضة التي تسبب الأوديما البقعية السكرية La DME في ذلك الالتهاب وتولد الأوعية. وتم إعطاء جسم مضاد أحادي النسيلة ل IL-6 الفأري (MP5-20F3) وهو عبارة عن جسم مضاد متماثل النمط ضد 1861 جرذي يتم شراؤه من شركة بيو اكس سيل (Bio X Cell كتالوج رقم (BE0046 إلى مجموعة الاختبار عن طريق الحقن داخل الجسم الزجاجي intravitreal injection IVT 20 وتم إعطاء المجموعات الضابطة حقنة داخل الجسم الزجاجي من مصيدة VEGF أو حقنة Jabs الجسم الزجاجي من جسم مضاد ضابط متماثل النمط ضد بيروكسيداز فجل الخيل HRP horseradish peroxidase (1801 جرذي ضد بيروكسيداز Jad الخيل؛ النسيلة (HRPN الذي تم شراؤه من شركة بيو اكس سيل X Cell 8:0؛ كتالوج رقم 810088). وفي كل مجموعات الأجسام المضادة؛ تم حقن 20 ميكروغرام من البروتين في حجم مقداره 1 ميكرولتر في العينة الخاضعة 5 لاللاختبار وتركت العين في الجانب المقابل بدون علاج واستخدمت كضابط إضافي. وقتلت الفئران قتلاً رحيماً في اليوم السابع بعد المعالجة بالليزر وتم صبغ القواعد المسطحة المشيمية باستخدام صبغة ليكتين lectin من نبتة غريفونيا سيمبليسيفوليا Griffonia Simplicifolia GSA لقياس منطقة الإصابة. ويظهر الشكل 4 النتائج حيث تظهر المجموعة المعالجة بالجسم المضاد ل IL-6 انخفاض ملحوظ Lilian] في توليد الأوعية الجديدة بالمقارنة مع المجموعة المعالجة
بالجسم المضاد الضابط (م(<0.05). وبالمتوسط أظهرت المجموعة المعالجة بالجسم المضاد ل IL- 6 انخفاضاً في تولد الأوعية الجديدة بالمقارنة مع الضابط الإيجابي ضد VEGF وتظهر هذه البيانات أن 11-68 جسم مضاد أحادي النسيلة ضد 11-6 الذي يتم إعطاءه داخل الجسم الزجاجي؛ يقلل بشكل ملحوظ تولد الأوعية الجديدة في نموذج 0177 فأري. وتشير هذه النتائج أيضاً إلى أن الجسم المضاد ل 17-6 يمكن أن يسبب انخفاضاً في تولد الأوعية الجديدة بنفس مقدار الانخفاض الذي يسببه الجسم المضاد ل ayy VEGF أكثر. وتشير هذه البيانات أن التثبيط الموضعي ل 11-6 يكون مفيداً في معالجة أمراض العين Jie الأمراض التي تتضمن التسرب الوعائي AMD «(Jie الرطب أو الأوديما البقعية ie الأوديما البقعية السكرية. المثال 12: توليد جسم مضاد ل IL-6 محسن تم توليد أشكال متغايرة من الأجسام المضادة ل 81-029. ولتحديد مدى مشاركة الطفرات ¢S55G 5 1517 5300 17 على أفضل وجه؛ تم إدخال توليفات محددة في ناقل عرض EBI- Fab 029 من النمط البري وتم قياس آلفة الارتباط وتظهر النتائج في الشكل 5. وبعد التنافس طوال الليل باستخدام 11-6 تركيزه 2 ميكرومولار» اشتملت كل الطوافر على مستويات عالية جوهرياً من 116 بيوتبنيلي وبقيت على سطح الخلية بالنسبة للعرض بالمقارنة مع Fab 881-029 من النمط 5 البري. وكان ترتيب ألفة الارتباط من الأعلى إلى الأدنى كما يلي: [I51T/S30P > S55G/I51T/A28V > 5556 [I51T/S30P/A28V 5550 > 5550/1517 > wt وبشار إلى الطفرة الرباعية S55G/IS1T/S30P/A28V هنا ب .EBI-030 وتظهر أدناه سياقات \EBI-030 0 سياقات CDR 030: (السياق برقم تعريف: 31( CDRI1 of 030HC (VH CDR1 030): GYVLPNYLIE (السياق برقم تعريف: 32( CDR2 of 030HC (VH CDR2 030): VITPGGGTIN (السياق برقم تعريف: 33( SRWDPLYYYALEY :)030 قعص CDR3 of 030HC (VH (السياق برقم تعريف: 34( of 030LC (VL CDR1 030): RASESVDNYGIPFMN له (السياق برقم تعريف: 35( CDR2 of 030LC (VL CDR2 030): AASNRGS (السياق برقم تعريف: 36( CDR3 of 030LC (VL CDR3 030): QQSEEVPLT سياقات المنطقة المتغيرة للسلسلة الثقيلة 030 (الطفرات بالنسبة للسياق 029 المبين بالخط الغامق) QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYVLP NYLIEWVRQA PGQGLEWMGY TTPGGGTINY AQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCARSR (السياق برقم تعريف: 37( WDPLYYYALE YWGQGTTVTV SS
— 8 2 —
سياقات المنطقة المتغيرة للسلسلة الخفيفة 1030 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCRASESVDNYGIPEMNWYQQKPGQPPKLLIYA ASNRGSGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQOSEEVPLTFGQGTKL (السياق برقم تعريف: 38( EIKRTV
سياق متعدد الببتيد للسلسلة الثقيلة Fab (IgG1) 030 (الطفرات المبين تحتها خط في «CDRs بالنسبة للسياق 029 المبين بالخط الغامق) QVQLVQSGAE VKKPGSSVKYV SCKASGYVLP NYLIEWVRQA PGQGLEWMGY TTPGGGTINY AQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCARSR WDPLYYYALE YWGQGTTVTYV SSASTKGPSV FPLAPSSKST SGGTAALGCL VKDYFPEPVT VSWNSGALTS GVHTFPAVLQ SSGLYSLSSV VTVPSSSLGT 10 (السياق برقم تعريف: 39( QTYICNVNHK PSNTKVDKKYV EPKSCDKTHT وفي تجسيدات معينة؛ لا يكون السياق 0161111 (السياق برقم تعريف: 30) عند طرف الكريوكسي carboxy في السياق برقم تعريف: 39 موجوداً في السياق Fab سياق الأحماض النووية للسلسلة الثقيلة للسياق Fab 030:
CAAGTGCAGCTGGTGCAGTCAGGGGCCGAGGTTAAGAAGCCAGGGAGCAG CGTCAAGGTATCTTGTAAAGCGTCTGGTTACGTCCTTCCAAACTACCTGATC GAATGGGTGAGGCAGGCTCCCGGCCAAGGCCTGGAATGGATGGGAGTTACC ACCCCTGGGGGCGGCACCATTAATTACGCCCAGAAATTTCAGGGACGAGTG ACGATTACCGCCGACGAGTCCACCAGTACTGCCTACATGGAGCTGTCCTCAC 20 TCCGCAGCGAGGACACGGCAGTTTACTACTGCGCCCGGAGTCGATGGGACC CTCTTTACTATTATGCTCTGGAATACTGGGGCCAGGGAACGACCGTTACAGT GTCATCTGCTAGCACAAAAGGACCATCAGTCTTCCCACTTGCTCCTTCATCT AAGAGCACAAGTGGTGGCACTGCAGCCCTTGGCTGCCTGGTGAAAGATTAT TTCCCCGAACCTGTTACAGTTTCTTGGAACTCCGGTGCACTGACATCCGGAG 25 TACACACTTTCCCAGCTGTGCTGCAGAGCTCAGGACTGTATAGCCTGTCTTC GGTGGTCACTGTTCCATCGTCGAGTCTTGGCACACAGACATATATTTGCAAC GTCAATCACAAGCCCTCCAACACAAAAGTGGATAAGAAGGTCGAGCCCAAA (السياق برقم تعريف: 40( TCTTGTGACAAAACACACACA 0 ويمكن إنتاج السياق 030 في صورة سياق متعدد ببتيد للسلسلة الثقيلة :1gG2 Fab QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYVLPNYLIEWVRQAPGQGLEWMGVTT PGGGTINYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSRWDPLY YYALEYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPV TVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSN TKVDKTVERK 35 (السياق برقم تعريف: 54( المثال 3 1 : التعبير عن شدفات Fab المتغايرة وتنقيتها تم توليد ولائج inserts في حقل السلسلة الثقيلة تحتوي على توليفات الطوافر التالية: «S55G/I51T/A28V 8556/1511/530» و S55G/I5S1T/S30P/ A28V 581-030 من نواقل عرض الخميرة عن طريق الهيضم الثناتي باستخدام .Nhel-HF/BamHI-HF وتم تنفية الولائج عن
طريق الرحلان الكهربائي على هلام أغاروز agarose gel electrophoresis بنسبة 71 وتم leh) في ناقل تعبير من كائن ثديي مشتق من pTTS يحتوي على سياق دليلي» حقل CHI 1801 بشري؛ dad) تمييز His عند الطرف الكريوني. وتم اختيار الخلايا المتحولة باستخدام «LB-Amp وتم تحضيرها بشكل صغير؛ وتم التحقق من الولائج عن طريق تتبع السياقات sequencing وأجري تخميج تحويلي انتقالي على خلايا HEK-6E (من كناديان ربيسيرتش كاونسيل Canadian Research (Council لكل سلسلة ثقيلة في Fab الطافر المقترنة مع السلسلة الخفيفة EBI-029 من النمط البري (التي تم الكشف عنها هنا باعتبارها سياق برقم تعريف: 12) باستخدام PEI ككاشف للتخميج التحويلي. وتم أيضاً التعبير عن Fab 281-029 من النمط البري كضابط (تم الكشف عن السلسلة الثقيلة Fab من النمط البري في صورة سياق برقم تعريف: 24). وتم جمع السوائل الطافية بعد خمسة 0 أيام وتم تنقية Fab shal المعبر عنها عن طريق الاستشراب الألفوي باستخدام أغاروز Ni-NTA (من شركة لايف تكنولوجيز (Life Technologies وتم مبادلة البروتين المنقى بشكل منظم في محلول ملحي منظم بالفوسفات phosphate درجة حموضته 7.4 بعدة دورات من زيادة التركيز/ تخفيف التركيز وتم تحديد تركيز البروتين ونقاوته عن طريق تحديد الامتصاصية 280 واستخدام الرحلان الكهريائي على هلام متعدد أكريلاميد باستخدام كبريتات دوديسيل الصوديوم sodium
.SDS-PAGE dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis 5 المثال 14: إظهار الأجسام المضادة المتغايرة لألفة ارتباط محسنة كما تم تحديدها باستخدام رنين
البلازمون السطحي تم قياس الألفة لجزيئات Fab 029 المتغايرة ل 1-6 باستخدام رنين البلازمون السطحي SPR بواسطة مطياف من نوع SR7000Dc .وتم تثبيت IL-6 البشري بتركيز يبلغ 20 0 ميكروغرام/مل في أسيتات الصوديوم sodium acetate تركيزها 10 ملي مولار ودرجة حموضتها 4.5 على شريحة SoS مثيل دكستران carboxymethyl dextran تركيزه x8.3 19710 ناتوغرام (500 كيلو دالتون)» عن طريق الاقتران بالأمين القياسي. وتم حقن عدة محاليل مخففة بشكل متسلسل من كل جزيء من جزيئات Fab في حمض 4-(2-هيدروكسي إثيل)-1-بيبرازين إيثان كبريتونيك -2(-4 HEPES hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonic acid تركيزه 10 ملي مولارء كلوريد 5 الصوديوم NaCl Sodium chloride تركيزه 150 ملي مولار ودرجة حموضته 7.3 عند 25”"م بمعدل تدفق يبلغ 25 ميكرولتر/دقيقة. وبعد 4 دقائق تم إيقاف التحميل وقياس التفكك باستخدام محلول منظم متدفق HEPES) بتركيز 10 ملي مولارء NaCl بتركيز 150 ملي مولار؛» ودرجة حموضة تبلغ 3.) لمدة خمس دقائق. وانطبيقت منحنيات الاستشفاف في مخطط الاستشعار بدرجة ضعيفة مع نموذج الارتباط 1: 1؛ ريما بسبب الاتجاهات المختلطة ل 11-6 على الشريحة أو ارتباط الجسم 0 المضاد غير التوعي. وبشكل بديل انطبقت هذه المنحنيات مع جزيئين (جزيء منخفض UY) وجزيء
مرتفع الألفة يرمز لهما ب 'منخفض الألفة' و'مرتفع الألفة" في الجدول 3) باستخدام برمجيات Gus TraceDrawer تمثل kdl ¢kal و1101 معدل الارتباط معدل التفكك؛ وثابت الارتباط عند الاتزان للجزيئات منخفضة الألفة وتمثل 602 102 و (KD2 معدل الارتباط معدل التفكك؛ وثابت الارتباط عند الاتزان للجزيئات مرتفعة الألفة. وكان لكل جزيئات Fab الطافرة معدل تفكك أبطأ بشكل ملحوظ من we 231-029 Fab بالترتيب التالي من الأعلى إلى الأدنى من حيث LN) WT <S$55G [I51T/ A28V <S55G [I51T/ S30P >5556 (EBI-030) /I51T/S30P/A28V .(EBI-029) الجدول 3: نتائج SPR للأجسام المضادة الطافرة KD2 kd2 ka2 KDI kdl kal Fab ٠ ام JF to eI 7/7 ]8.06 291 36 3.65 ]145 0.40 كو i نا لاله 8556 S30P/A28V 7.95 2.70 3.39 3.25 0.0 I] EE 0] RA 0 المثال 15: إظهار أجسام مضادة متغايرة لفعالية محسنة مضادة في خلايا 11/6 مبلغة من نوع HEK- Blue™ استخدم خط خلايا 1/6 مبلغة من نوع HEK-Blue™ (من شركة انفيفوجن (Invivogen لمقارنة فعالية تثبيط التأشير ل 17.6 بين شدفات EBI-029 Fab طافرة مختلفة. وكانت HEK- WA Blue™ 66 عبارة عن خط 11812293 معدل يعبر بشكل ثابت عن الجين IL-6R ويحتوي على 5 حين مبلغ تم إفرازه من فسفاتاز قلوي alkaline phosphatase خاضع للتحكم بمعزز صغري من انترفيرون-بيتا mode (IFNP) مع أريعة مواقع ارتباط STATS ولقياس مقاومة (JL6 تم خلط 10 ميكرولتر من 11.6 بشري تركيزه 400 بيكومولار (من شركة آر آند دي سيستمز R&D Systems من نوع (206-IL-010/CF مع 10 ميكرولتر من كل شكل مغاير من الأشكال Fab في مدى من التراكيز على لوح به 96 lie وتم حضنه عند درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة. وأضيف تريسين trypsine 20 إلى خلايا HEK-Blue™ IL6 في الطور اللوغارتمي log phase وأعيد تعليقها في أوساط المعايرة
(وسط إيجل معدل لدلبيكى «(DMEM) Dulbecco's Modified Eagle's medium 4.5 غم/لتر غلوكوز؛. مصل من جنين البقر (FBS) Fetal bovine serum مثبط بالحرارة تركيزه 710 آ- غلوتامين (L-glutamine تركيزه 2 ملي مولار من شركة بن ستيب (Pen-Step بتركيز يبلغ 280000 خلية/مل. وتم إضافة 180 ميكرولتر من معلق الخلايا لكل عين تحتوي على مخاليط Fab[IL-6 5 للحصول على تركيز نهائي من 11-6 يبلغ 20 بيكومولار. وتم حضن الخلايا عند 37 درجة مئوية في جو من ثاني أكسيد الكربون تركيزه 75 لمدة 20 ساعة. ثم خلط 20 ميكرولتر من السائل الطافي من كل عين مع 180 ميكرولتر من الكاشف Quanti-Blue™ (من شركة إنفيفوجن (Invivogen وحضن عند 2°37 لمدة 40 دقيقة قبل قياس الامتصاصية عند 650 نانومولار بواسطة قارئة الألواح حداله:ا60م5. وتم طرح إشارة الخلفية من العيون التي لا تحتوي على 1-6 ثم قسمة الناتج
0 على الخلايا المعالجة ب IL-6 بدون استخدام متبط للحصول على ded التأشير الجزئي. وأظهرت كل الطوافر فعالية أكبر جوهرياً بالمقارنة مع wi EBI-029 Fab بالترتيب التالي للفعالية المضادة: WT <855G [I51T/ S30P<S55G [I51T/ A28V <S55G (EBI-030) /IS1T/S30P/A28V
6 وتظهر النتائج في الشكل (EBI-029) 71165 المثال 16: إظهار الأجسام المضادة المغايرة فعالية مضادة محسنة في معايرة التكاثر
إن الخلايا T1165.85.2.1 (من شركة آر آند دي سيستمز (R&D Systems عبارة عن خط خلايا ورم البلازماويات فأرية murine plasmacytoma cell line تتكاثر استجابة ل IL-6 فأري ؛ جرذي أو بشري. ولقياس المقاومة من طوافر Fab 211-029 تم خلط 25 ميكرولتر من IL-6 بشري تركيزه 2 نانوغرام/مل (من شركة آر 31 دي سيستمز R&D Systems من نوع (CF[206-IL-010 مع 25 ميكرولتر من كل شكل مغاير من أشكال Fab في مدى من التراكيز على لوح به 96 عيناً وتم حضنه
0 عند درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة. وتم تكوير T1165 WAY في الطور اللوغاريتمي وأعيد تعليقها في أوساط المعايرة (وسط روزويل بارك ميموريال انستتيوت Roswell Park Memorial (RPMI) Institute 1640« مصل من جنين البقر (FBS) تركيزه 710 ,1-غلوتامين —glutamine آ» تركيزه 2 ملي مولار من شركة بن ستيب (Pen-Step بتركيز يبلغ 102 خلية/مل. وتم إضافة 0 ميكرولتر من معلق الخلايا لكل عين تحتوي على مخاليط 70/116 للحصول على تركيز
5 نهائي من 11-6 يبلغ 0.5 نانوغرام/مل. وتم حضن الخلايا عند 37 درجة مئوية في جو من ثاني أكسيد الكريون تركيزه 75 لمدة 72 ساعة. ثم أضيف 100 ميكرولتر من الكاشف Cell-Titer Glo® (من شركة بروميجا (Promega إلى كل عين وحضن عند درجة حرارة الغرفة لمدة 10 دقائق. وتم قياس التألق بواسطة قارئة الألواح 145 «ة500004. وأظهرت كل الطوافر فعالية أكبر Wass بالمقارنة مع wt 281-029 Fab بدون dad ملحوظة لتأشير IL-6 خلال مدى من التراكيز Fab
0 المفحوصة (انظر الشكل 7).
المثال 17: مقارنة الخواص الشبيهة بالعقار للأجسام المضاد المتغايرة تم تحديد الثبات الحراري لكل شكل من أشكال Fab المغايرة عن طريق قياس الفلورة بالمسح التفاضلي (DSF) differential scanning fluorimetry وتم خلط 2 ميكرولتر من البروتين بتركيز أو 5 ملغم/مل مع 18 ميكرولتر من PBS و2 ميكرولتر من صبغةعع0:80 50x Sypro في 5 لوح تفاعل بلمرة انزيمية متسلسل به 96 عين من نوع 3101280. وتم معالجة اللوح في نظام BioRad CFX96 RT-PCR مع زيادة درجة الحرارة خطياً من 2725 إلى 2°95 وتم قياس الفلورة خلال هذا الزمن. وتم حساب ,7 باعتبار أنه أدنى نقطة للمشتقة الأولى في منحنى الانصهار. وكان لكل الأشكال المغايرة قيم ,1 مقاسة بين 76 و78"م بشكل يتفق مع قيمة Try المقاسة ل 881-029 wt Fab عند 76 .a 10 ولقياس التكدس؛ تم تقييم العينات بواسطة SEC-MALS باستخدام HPLC من نوع Agilent 0 متحداً مع أداة قياس التبعثر الضوئي light scattering instrument من نوع Wyatt miniDawn TREOS وأداة قياس دليل الاتكسار refractive index instrument من نوع Wyatt -Optilab rEX وتم حقن 100-20 ميكروغرام من البروتين وتدفق بمعدل 1 مل/دقيقة. وكان لكل الأشكال المغايرة أوزان جزيئية تتراوح بين X7.5 1110 و10*8.6 !! نانوغرام (45000 و52000 5 دالتون) مقاسة بواسطة التبعثر الضوئي بشكل يتفق مع Fab 231-029 من النمط البري. وتشير النتائج أن 81-030 له سلوك مماثل تماماً EBI-029 من حيث الخواص الشبيهة بالعقار. المثال 18: إنتاج أجسام مضادة كاملة الطول ل 1802 من نوع EBI-029 و231-030 وأجسام مضادة ل IgG2 باستخدام حقول Fo الطافرة 0 إعادة تشكيل 881-029 3 EBI-030 إلى 1802 و1802 Fc طافر تم تضخيم الحقول المتغيرة للسلسلة الثقيلة 281-029 5 EBI-030 متضمنة السياق الدليلي ¢MDWTWRILFLVAAATGAHS) السياق برقم تعريف: 49( بواسطة تفاعل بلمرة انزيمية متسلسل باستخدام نواقل Fab باستخدام البادئات التي تعمل على إدخال الموقع EcoRI عند الطرف النيتروجيني والموقع Nhel عند الطرف الكربوني. وتم تنقية نواتج تفاعل البلمرة الانزيمية المتسلسل 5 على هلام أغاروز agarose تركيزه 71 وهضمت مرتين باستخدام Nhel-HF & 56011-1117. وبالمثل تم هضم نواقل هيكلية أساسها 0115 تحتوي على سياق السلسلة الثقيلة 1802 من النمط البري أو حقل 1202 متغاير يحتوي على طفرة H311A) H311A تقابل الترقيم في السياق برقم تعريف: 41 ؛ وهذا يقابل 60 في الترقيم المذكور في المرجع 867-877 ,7:4 Martin et al., Molecular Cell, )2001(( بواسطة Nhel-HE/EcoRI-FH وتم تنقيتها على هلام أغاروز تركيزه 71. وتم ربط الولائج 0 في الهيكل المهضوم باستخدام الإنزيم Quikligase (من نيو إنجلاند بيولابس New England
٠ 8 7 ٠ وتم «(Life Technologies تم تحويلها في خلايا 10010 (من شركة لايف تكنولوجيز «(Biolabs . صغير وتتبع سياقاتها للتحقق من الوليجة J وتم تحضير النسائل . LB-Amp اختيارها بواسطة من أجل تقليل التراكم FeRn الموجودة في Fo لتخفيض ألفة الارتباط H311A وتم اختيار الطفرة الجهازي للجزيئات التي تنطلق من نسيج العين. التعبير عن الأشكال المغايرة 1802 وتنقيتها عن طريق التخميج التحويلي الانتقالي 5
EBI-030 881-030 IgG2 581-029 1502-1131 18 831-029 1802 تم التعبير عن وتم تخميج النواقل .11816-62 WA عن طريق التخميج التحويلي الانتقالي في dgG2-H311A باستخدام 211-029 LC التي تحتوي على كل سلسلة ثقيلة بشكل مشترك باستخدام بلازميد 5 ككاشف للتخميج التحوبلي. وتم جمع السوائل الطافية بعد 5 أيام وتم تنقية جزبئات 1802 المعبر PEI وتم مبادلة البروتين المنقى باستخدام محلول . A= ig pl) عنها بالاستشراب الألفوي باستخدام أغاروز 0 درجة حموضته 7.4 بعدة دورات من زيادة التركيز/ تخفيف التركيز وتم تحديد تركيز (PBS منظم من . SDS-PAGE البروتين والنقاوة بواسطة ا لامتصاصية عند 280 نانومتر
CHO إنتاج تجميعة ثابتة من خلايا 881-030 أو ¢EBI-030 1802 831-029 1802 تنتج CHO تم توليد تجميعات ثابتة من (Life Technologies (من شركة لايف تكنولوجيز Freedom CHO-S باستخدام طقم IgG2-H311A 5 وفقاً لتعليمات الصانع. وباختصار تم تنسيل كل سلسة ثقيلة عن طريق الهضم/ الربط القياسي في
CHO-S وتم تخميج التركيبات تحويلياً في خلايا .81-029 LC ناقل 1.0 0110م بالاشتراك مع وتم اختيار التجميعات الثابتة التي يزيد فيها تركيز البيورومايسين Freestyle MAX باستخدام كاشف ويعد دورتين من الانتقاء تم فرز التجميعات (MTX Methotrexate وميثوتروكسات Puromycin لتحديد انتاج الجسم المضاد عن طريق الاستشراب التحليلي للبروتين-8 وتم اختيار المجموعات 0 الأعلى إنتاجاً من أجل تحديد أكبر مقياس والتنسيل الثانوي. وتبين السياقات أدناه. موضوع تحتها خط): CDRs السياق متعدد الببتيد للسلسلة الثقيلة 030 (في هيكل 1802؛
QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYVLP NYLIEWVRQA PGQGLEWMGYV
TTPGGGTINY AQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCARSR 5
WDPLYYYALE YWGQGTTVTV SSASTKGPSV FPLAPCSRST SESTAALGCL
VKDYFPEPVT VSWNSGALTS GVHTFPAVLQ SSGLYSLSSV VTVPSSNFGT
QTYTCNVDHK PSNTKVDKTV ERKCCVECPP CPAPPVAGPS VFLFPPKPKD
TLMISRTPEV TCVVVDVSHE DPEVQFNWYV DGVEVHNAKT KPREEQFNST
FRVVSVLTVV HQDWLNGKEY KCKVSNKGLP APIEKTISKT KGQPREPQVY 0
TLPPSREEMT KNQVSLTCLV KGFYPSDIAV EWESNGQPEN NYKTTPPMLD
SDGSFFLYSK LTVDKSRWQQ GNVFSCSVMH EALHNHYTQK SLSLSPGK
(41 (السياق برقم تعريف:
— 8 8 — السياق متعدد الببتيد للسلسلة الخفيفة 030 (في هيكل CDRs dgG2 موضوع تحتها خط): DIVMTQSPDS LAVSLGERAT INCRASESVD NYGIPFMNWY QQKPGQPPKL LIYAASNRGS GVPDRFSGSG SGTDFTLTIS SLQAEDVAVY YCQOSEEVPL TFGQGTKLEI KRTVAAPSVF IFPPSDEQLK SGTASVVCLL NNFYPREAKV QWKVDNALQS GNSQESVTEQ DSKDSTYSLS STLTLSKADY EKHKVYACEV 5 (السياق برقم تعريف: 42( THQGLSSPVT KSFNRGEC 1030 سياق الأحماض النووية للسلسلة الثقيلة
CAAGTGCAGCTGGTGCAGTCAGGGGCCGAGGTTAAGAAGCCAGGGAGCAG
CGTCAAGGTATCTTGTAAAGCGTCTGGTTACGTCCTTCCAAACTACCTGATC
GAATGGGTGAGGCAGGCTCCCGGCCAAGGCCTGGAATGGATGGGAGTTACC 0
ACCCCTGGGGGCGGCACCATTAATTACGCCCAGAAATTTCAGGGACGAGTG
ACGATTACCGCCGACGAGTCCACCAGTACTGCCTACATGGAGCTGTCCTCAC
TCCGCAGCGAGGACACGGCAGTTTACTACTGCGCCCGGAGTCGATGGGACC
CTCTTTACTATTATGCTCTGGAATACTGGGGCCAGGGAACGACCGTTACAGT
GTCATCTGCTAGCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCC 15
AGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTAC
TTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCTCTGACCAGCGGC
GTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCA
GCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAACTTCGGCACCCAGACCTACACCTGCA
ACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGACAGTTGAGCGC 0
AAATGTTGTGTCGAGTGCCCACCGTGCCCAGCACCACCTGTGGCAGGACCG
TCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGA
CCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCCGAGG
TCCAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAA
AGCCACGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTTCCGTGTGGTCAGCGTCCTCA 5
CCGTCGTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCT
CCAACAAAGGCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAACCAAAG
GGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGA
TGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCA
GCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTAC 0
AAGACCACACCTCCCATGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCA
AGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCT
CCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCC
TGTCTCCGGGTAAA (43 (السياق برقم تعريف: :030 مياق الأحماض النووية للسلسلة الخفيفة 5
GACATAGTGATGACTCAAAGTCCGGACAGCCTGGCGGTGTCACTCGGCGAA
CGGGCAACTATCAACTGCCGAGCCAGCGAGAGCGTCGATAATTACGGCATC
CCCTTCATGAACTGGTATCAGCAGAAGCCAGGACAGCCGCCCAAGCTGCTT
ATCTACGCCGCTTCCAACCGGGGATCAGGGGTGCCCGATCGATTTAGTGGA
AGCGGTAGTGGGACCGATTTCACACTGACCATCAGCTCCCTTCAGGCCGAG 0
GATGTGGCTGTCTATTATTGTCAGCAATCCGAGGAAGTGCCGCTCACGTTTG
GTCAGGGAACCAAACTGGAGATCAAGCGGACCGTAGCGGCGCCTAGTGTCT
TCATCTTCCCACCCTCCGACGAACAGCTGAAGTCTGGCACTGCTTCCGTCGT
GTGCCTGCTCAACAACTTTTACCCTAGAGAGGCAAAAGTTCAATGGAAAGT
AGACAATGCCTTGCAGTCCGGGAACTCCCAGGAGTCTGTCACAGAGCAGGA 5
TAGTAAGGACTCAACCTACAGCCTGTCCAGCACACTGACCCTCTCCAAAGC
CGACTACGAGAAGCACAAAGTGTACGCTTGCGAAGTTACGCATCAGGGGCT
— 9 8 — (السياق برقم تعريف: GTCCTCACCCGTTACAAAAAGTTTTAACAGAGGGGAGTGC 44( السياق متعدد الببتيد للسلسلة الثقيلة 030 الذي يحتوي على الطفرة 311A) H311A مبينة بالخط الغامق و0015 موضوع تحتها خط)؛ وبشار إلى هذا السياق Lad بسياق متعدد الببتيد ا للسلسلة الثقيلة 031:
QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYVLP NYLIEWVRQA PGQGLEWMGYV
TTPGGGTINY AQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCARSR
WDPLYYYALE YWGQGTTVTV SSASTKGPSV FPLAPCSRST SESTAALGCL
VKDYFPEPVT VSWNSGALTS GVHTFPAVLQ SSGLYSLSSV VTVPSSNFGT
QTYTCNVDHK PSNTKVDKTV ERKCCVECPP CPAPPVAGPS VFLFPPKPKD 0
TLMISRTPEV TCVVVDVSHE DPEVQFNWYV DGVEVHNAKT KPREEQFNST
FRVVSVLTVV AQDWLNGKEY KCKVSNKGLP APIEKTISKT KGQPREPQVY
TLPPSREEMT KNQVSLTCLV KGFYPSDIAV EWESNGQPEN NYKTTPPMLD
SDGSFFLYSK LTVDKSRWQQ GNVFSCSVMH EALHNHYTQK SLSLSPGK
(47 (السياق برقم تعريف: 15 :031 سياق الأحماض النووية للسلسلة الثقيلة
CAAGTGCAGCTGGTGCAGTCAGGGGCCGAGGTTAAGAAGCCAGGGAGCAG
CGTCAAGGTATCTTGTAAAGCGTCTGGTTACGTCCTTCCAAACTACCTGATC
GAATGGGTGAGGCAGGCTCCCGGCCAAGGCCTGGAATGGATGGGAGTTACC
ACCCCTGGGGGCGGCACCATTAATTACGCCCAGAAATTTCAGGGACGAGTG 0
ACGATTACCGCCGACGAGTCCACCAGTACTGCCTACATGGAGCTGTCCTCAC
TCCGCAGCGAGGACACGGCAGTTTACTACTGCGCCCGGAGTCGATGGGACC
CTCTTTACTATTATGCTCTGGAATACTGGGGCCAGGGAACGACCGTTACAGT
GTCATCTGCTAGCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCC
AGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTAC 5
TTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCTCTGACCAGCGGC
GTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCA
GCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAACTTCGGCACCCAGACCTACACCTGCA
ACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGACAGTTGAGCGC
AAATGTTGTGTCGAGTGCCCACCGTGCCCAGCACCACCTGTGGCAGGACCG 0
TCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGA
CCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCCGAGG
TCCAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAA
AGCCACGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTTCCGTGTGGTCAGCGTCCTCA
CCGTCGTGGCCCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCT 5
CCAACAAAGGCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAACCAAAG
GGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGA
TGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCA
GCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTAC
AAGACCACACCTCCCATGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCA 0
AGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCT
CCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCC
TGTCTCCGGGTAAA (48 (السياق برقم تعريف:
المثال 19: مقارنة فعالية EBI-030 IgG2 مقابل 1802 131-029 في معايرة HEK-Blue-IL6 تم استخدام خط الخلايا المبلغة 11.6 HEK-Blue™ (من شركة إنفيفوجين (Invivogen لمقارنة فعالية تثبيط تأشير 11.6 بين الأجسام المضادة 1802 ل EBI-029 و 5131-030. وتمت مقارنة مستحضرات البروتين الثلاثة المنقاة من HEK-6E WIA وهي: <EBI-030 IgG2 <EBI-029 IgG2 و IgG2-H311A 281-030 (المشار al أيضاً » 031 أو ((EBI031 بالإضافة إلى مستحضر 2 281-030 الناتج في تجميعة CHO ثابتة. وبشكل إضافي؛ تم تضمين توسيليزوماب (Tocilizumab وهو شكل محسن للجسم المضاد ل 11.6 كضابط. ولقياس التضاد ل 11/6 تم خلط IL-6 بشري (R&D Systems 206-IL-010/CF) بتركيز قدره 400 بيكو مولار مع تغيير تراكيز كل جسم مضاد في لوح به 96 عين وحضن لمدة 30 دقيقة. وأضيف التريبسين لخلايا HEK-Blue™ 0 116 في الطور اللوغاريتمي وأعيد تعليقها في وسط المعايرة (DMEM) 4.5 غم/لتر غلوكوز FBS ¢glucose مثبط بالحرارة بنسبة 710 « 1-غلوتامين [glutamine تركيزه 2 ملي مولار؛ من شركة بين -ستيب (Pen-Step بتركيز 280000 خلية/مل. وأضيف 180 ميكرولتر من المعلق الخلوي إلى كل عين بها مخاليط IL-6/Fab لجعل التركيز النهائي ل 11-6 يبلغ 20 بيكو مولار. وتم حضن الخلايا عند 37"م في جو من د60 بسنبة 75 لمدة 20 ساعة. ومن ثم خلط 20 ميكرولتر من 5 السائل الطافي من كل عين مع 180 ميكرولتر من المادة المفاعلة Quanti-BlueTM (من شركة إنفيفوجين (Invivogen وحضن الناتج عند 37"م saad 40 دقيقة قبل قياس الامتصاص عند 650 نانو مولار على bass لألواح من النوع 115 -SpectraMax وتم توضيح النتائج في الشكل 8 وفي الجدول 5. وأظهر 281-030 (بما في ذلك EBI-030 الناتج في HEK WA مع أو بدون الطفرة 113118 و 231-030 الناتج في خلايا (CHO فعالية 0 محسنة بدرجة كبيرة (انخفاض قدره حوالي 50 ضعف في 1050 وزيادة تزيد عن 100 ضعف في (IC90 مقارنة = 281-029). وكانت الزيادة في الفعالية أكبر من الزيادة في الألفة المقاسة بواسطة .SPR الجدول 5: قيم IC50 و IC90 EBL030 ]09 }11 88100031 ]0.6 ]124 J 281-031 (المشار Lad ad) هنا ب (EBI-030 IgG2-H311A تركيز 1050 يقل عن 5 تركيز 281-029 بمقدار يزيد عن 75 ضعف وله تركيز 1690 يقل بحوالي 350 ضعف عن تركيز
.EBI-029 ول 281-030 الناتج في HEK WIA تركيز 1050 يقل عن تركيز 231-029 بمقدار يزيد عن 50 ضعف وله تركيز 1090 يقل ب 4000 ضعف تقريباً عن 581-029. المثال 20: التحليل النموذجي للفعالية المتزايدة بالنسبة لمدة محاصرة 11-6 في الجسم الزجاجي تمت محاكاة أثر القدرة المتزايدة على مدى ومدة محاصرة 11-6 الذي يلي الإعطاء داخل الجسم الزجاجي باستخدام نموذج الحركيات الدوائية (الشكل 9). وتم تعريف المعادلات التفاضلية التي تصف التغييرات في الجسم المضاد IL-6 cA all الحر (IL ومتراكب الجسم المضاد/6-]1 AIL على النحو التالي: 2ه + d/dt(A) = -A¥kae - A¥IL*k1 d/dt(IL) = kpi — IL*kie — A*IL¥k1 + 2 d/dt(AIL) = -AlL*kaie + A*IL*k1 - AIL*k2 0 حيث kae يمثل معدل تصفية الجسم المضاد all من الجسم الزجاجي؛ kl يمثل معدل الارتباط للجسم المضاد/1-6؛ معدل التفكك لمتراكب الجسم المضاد/1.6؛ kpi معدل إنتاج 11-6 kei يمثل معدل تصفية 1-6 الحر عن الجسم الزجاجي؛ وع01»! يمثل معدل تصفية متراكب الجسم المضاد/- ]1 6 عن الجسم الزجاجي. وتم تحديد قيم الوسائط الأولية والمعدلات كما هو موضح في الجدول 6. الجدول 6: قيم الوسائط الأولية والمعدلات CN pes تم حساب Ag بناء على افتراض الآتي جرعة قدرها 50 ميكرولتر من جسم مضاد تركيزه 0 ملغم/مل في عين الإنسان مع حجم جسم زجاجي قدره 5 مل. وتم تقدير To بناء على القيم المقاسة سريرياً ل 11-6 في الجسم الزجاجي في مرضى DME فبلغت 200 بيكو غرام/مل تقريباً. وتم 0 تقدير kl بناء على معدلات ارتباط الجسم المضاد النموذجية (AES M's! حيث تفاوت k2 ليحاكي قيم الفعالية التي تتراوح من 100 بيكو مولار إلى 1 بيكو مولار. وتفاوت kae من أعمار النصف
للتصفية في الجسم الزجاجي المقاسة في الأرنب والبالغة 11 يوم تقريباً بناء على مقياس قدره 1.8 كما قيس مسبقاً ل PK البشري. وتم قياس kie عند jee النصف للتصفية البالغ 24 ساعة؛ وتم حساب kpi على أساس ILo*kie وتم إجراء عمليات المحاكاة للجسم المضاد الحر و1176 all باستخدام برمجية Berkeley Madonna 5 خلال فترة قدرها 300 يوم (الشكل 10). وتم اختيار gia من محاصرة 11-6 بنسبة 795 لقياس مدة التثبيط. ويتنباً النموذج أن زيادة فعالية الجسم المضاد يؤدي بشكل ملحوظ إلى إطالة مدة تثبيط 11-6 في العين من 130 يوم ل =k1/k2 100 بيكو مولار إلى 200 يوم ل 41/12 10 بيكو مولار إلى 225 يوم ل 1/12 1 بيكو مولار. المثال 21: الحركيات الدوائية ل IL-6a 10 تم إجراء تجارب الحركيات الدوائية PK في ذكور أرانب نيوزلندية بيضاء مزودة من فارم أودتيما PharmOptima (في بورتيج؛ بولاية ميتشجن). وبلغ عمر كافة الحيوانات 13-12 شهر وبلغ وزنها 2.61 إلى 3.42 كغم. وتمت مقارنة البروتينات التالية - EBI-029-IgG2 (سياق برقم تعريف: 11 وسياق برقم تعريف: 12(« 231-029-1802-11311/8 (سياق برقم تعريف: 10 وسياق برقم تعريف: 12(« 251-030 (سياق برقم تعريف: 41 وسياق برقم تعريف: 42)؛ EBI-030-1gG2- 5 113118 (سياق برقم تعريف: 47 وسياق برقم تعريف: 42)» Fab 531-029 (سياق برقم تعريف: 4 وسياق برقم تعريف: 12)؛ Eylea® (مصيدة «(VEGF وتوسيليزوماب (107؛ جسم مضاد ل 11.68). وتم تشكيل كافة البروتينات بتركيز 13.8 ملغم/مل في (PBS عند درجة حموضة قدرها 7.4. لا يرتبط 581-029-1:02 «EBI-030-IgG2-H311A 281-030 <EBI-029-1gG2-H311A <EBI-029 Fab وتوسيليزوماب بمولدات المضاد المستهدفة الخاصة بها في الأرنب؛ بينما يرتبط Eylea® 0 ب VEGF أرنبي. ولتحقق من PK داخل الجسم الزجاجي؛ تم حقن 9 حيوانات ب 50 ميكرولتر من مادة الاختبار في كل عين. وقبل الحقن؛ تم وضع هيدروكلوريد ليدوكاثين Lidocaine hydrochloride (قابل للحقن بنسبة 72)؛ بروياراكائين Proparacaine بنسبة 70.5« أو تتراكائين Tetracaine بنسبة 7 على سطح العين. وأجربت عمليات الحقن في وسط الجسم الزجاجي باستخدام 300 ميكرولتر 5 من حقنة أنسولين BD (إبرة قياسها 631 xX 16/5 بوصة) مدخلة خلال all الظهري الصدغي للعين. ولتحقق من PK الجهازي؛ تم حقن 3 حيوانات 2 100 ميكرولتر من مادة الاختبار من خلال وريد الأذن. وتم جمع عيانات دم متسلسلة من 3 حيوانات في كل من الأذرع IVT و iv عند 0.083 1 ؛ 8 24 72 168« 240؛ و 336 وخففت بنسبة 1: 1 باستخدام محلول سيترات -فوسفات- 0 دكستروز Citrate-Phosphate-Dextrose ووضعت على الثلج. وتم جمع البلازما عن طريق الطرد
المركزي لعينات الدم المبردة بمعدل سرعة 4000 دورة في الدقيقة لمدة 10 دقائق عند 4أم وخزنت
مجمدة عند -80"م. وتم جمع الأنسجة العينية من كلتا العينين لكافة الحيوانات في IVT ghd عند 0.25« 24؛ 168( و 336 ساعة بعد الجرعة. وتم قتل الحيوانات قتلاً رحيماً بواسطة جرعة زائدة من الباربيتورات داخل الوريد. ولجمع الخلط المائي؛ مباشرة بعد القتل الرحيم؛ تم إدخال حقنة مع إبرة تحت القرنية وشحب الخلط المائي ببطء. وتم نقل الخلط المائي إلى أنبوب ples مسبقاً ووضع على الجليد الجاف أو جُمّد عند -80"م. ولجمع الخلط الزجاجي؛ تم إدخال شريحة صغيرة في الصضلبة لعين مستأصلة باستخدام مشرط وشحب الجسم الزجاجي من خلال فتحة بواسطة حقنة. وتم قياس العينة عن طريق التدرجات الموجودة على الحقنة؛ ونقلت إلى أنبوب معلم مسبقاً؛ ووضعت على الجليد الجاف أو
0 جمدت عند -80م. ولجمع شبكية العين والمشيمة؛ تم إدخال شريحة صغيرة بواسطة مشرط في الصلبة لعين مستأصلة؛ بشكل موازي وذيلي نحو الحوف. وتم استخدام مقص لمواصلة الفتح حول كرة العين؛ وفصلها إلى نصفين. وتم وضع الكرة الخلفية بحيث يكون gall الداخلي موجهاً نحو الأعلى. وياستخدام سكين خيشومية؛ تم جمع الشبكية بعناية من الكرة. ويمجرد جمع الشبكية من الكرة؛ تم 5 جمع المشيمة بطريقة مماثلة من باقي الكرة. وتم نقل كل من العينين»؛ على حدة؛ إلى أنابيب معروفة بالاسم التجاري Precellys® معلمة وموزونة مسبقاً؛ ثم تم توزينها ووضعها على الثلج الجاف أو جمدت عند -80"م. وتم تخفيف الشبكية والأنسجة المشيمية عشرة أضعاف في محلول ملحي منظم
بالفوسفات «PBS Phosphate Buffered Saline وتم مجانستها؛ وتخزينها عند -80 co وتم تقييم تراكيز البروتين في كل نسيج بواسطة معايرة -ELISA وبالنسبة ل (EBI-029-1gG2 <EBI-030-IgG2-H311A 581-030 <EBI-029-IgG2-H311A 0 و Fab 581-029 تم طلي ألواح كوستار ذات حجم نصفي باستخدام 11.6 بشري تركيزه 1 ميك روغرام/مل في PBS لمدة ساعة واحدة عند درجة حرارة الغرفة. وتم سد العيون 2 PBS يحتوي على 72 من (BSA ومن ثم حضنت باستخدام مجموعة من المحاليل المخففة لكل عينة باستخدام PBS + 75 بلازما أرنبية + 70.05 من المادة المعروفة بالاسم التجاري Tween-20 بصفتها المادة المخففة. وتم دمج كل منحنى قياسي باستخدام 5 البروتين المنقى أيضاً على كل لوحة. وتم حضن العينات عند درجة حرارة الغرفة لمدة 60 دقيقة ثلاث مرات باستخدام 300 ميكرولتر PBS يحتوي على 70.05 من 1»2©0-20. ومن ثم تمت إضافة المادة Anti-kappa-HRP (من شركة جين واي إنك. (Genway Inc. مخففة بنسبة 1: 10000 في PBS 71 من (BSA 70.05 من Tween-20 إلى كل عين وحضنت لمدة 30 دقيقة. وتم غسل العيون كما هو مبين أعلاه ثم أضيفت ركيزة من 3؛ 33 5؛ “5-رباعي die بنزيدين -3,3,5,5 TMB tetramethylbenzidine 0 وتم قياس slay) عند 450 و 550 نانومتر على قارئة ١ لألواح
+0 50600. وتم حساب تراكيز البروتين بناء على المنحنى القياسي باستخدام برمجية Softmax 6. وتم تكرار كل معايرة ELISA على 3 ألواح مستقلة على الأقل وتم تدوين متوسط زمن النصف. وبالنسبة لتوسيليزوماب 100111200026؛ تم تحديد تركيز البروتين بواسطة معايرة ELISA كما هو مبين أعلاه باستثناء أنه تم استخدام شدفة Fab مضادة لتوسيليزوماب anti-Tocilizumab Fab (BioRad HCA252) ككاشف احتجاز 5 IgG-Fe-HRP مضاد بشري (Sigma A0170) بصفتهما الجسم المضاد الكاشف. وتم استخدام معايرتي ELISA مختلفتين لقياس Bylea® الحر والإجمالي. وبالنسبة Bylea® J الحرء تم طلي العيون ب VEGF مأشوب (من شركة آر أند دي سيستمز R&D (Systems وتم الكشف عن البروتين المقيد باستخدام IgG-Fe-HRP مضاد بشري (0170م .(Sigma 0 ولقياس Eylea® الإجمالي؛ تم استخدام جسم مضاد Fo بشري )12136 (Sigma للاحتجاز وتم استخدام IgG-CH2-HRP مضاد بشري (BioRad MCAG47P) للكشف. وتم تكرار كل معايرة ELISA على 3 ألواح مستقلة وتم تدوين متوسط زمن النصف. ملخص النتائج: في معظم الحيوانات» تمت ملاحظة تشكل جسم مضاد قوي ضد البروتين المحقون عند 5 النقاط الزمنية 240 و 336 ساعة. ولأن تشكل الجسم المضاد هذا قد يؤثر على تصفية البروتين أو يتعارض مع (ELISA فإن تحليل البيانات محدد بالنقاط الزمنية لغاية 168 ساعة. وبالنسبة ل PK في الجسم الزجاجي؛ تمت تصفية كافة البروتينات 111-029 و 1802 221-030 بنحو Wad بشكل ملحوظ (1(/2< 9.3< 9.0» 15.7و 9.8 يوم <EBI-029-H311A (EBI-029 J 581-030 و EBI- «030-H311A على الترتيب) مقارنة ب «(ag 6.3 =Ti2) Eylea® توسيليزوماب Tocilizumab «(ase 4.8 =Tin) 0 أو الشدفة (as 3.9 =Tin) EBI-029 Fab (الشكل 11( الجدول 7). وتمت ملاحظة توجهات مماثلة في الشبكية؛ مشيمة العين؛ والمحلول المائي حيث تراكم 581-030 و EBL 030-H311A بمستويات عالية مقارنة ب Eylea® وتوسيليزوماب Tocilizumab (انظر الشكل 12 والشكل 13). ويمكن الكشف عن كافة البروتينات في البلازما بعد الإعطاء في الجسم الزجاجي حيث تراكم ¢<EBI-030 <EBI-029 وتوسيليزوماب Tocilizumab بمستويات lel من Eylea® أو -881] 030-H311A 5 (انظر الشكل 14). وبالمثل؛ تمت تصفية Eylea® و EBI-030-H311A من البلازما بنحو أسرع بعد الإعطاء داخل الجسم الزجاجي حيث يكون عمر EBI-030-H311A J Chall مكافثاً تقريباً لزمن النصف ل 1802 من النوع البري بسبب انخفاض ارتباط FeRn (الجدول 7). الجدول 7: نتائج الحركيات الدوائية
EBI-029 93 EBI-029-H311A| 9.0 EBI-030 15.7 EBI-030-H311A| 9.8 EBI-029 Fab 3.9 توسيليزوماب 4.8 EBI-029 77 EBI-030 69 EBI-030-H311A| 33 TCZ 50 المثال 22: قابلية ذويان 231-031 عند تراكيز مرتفعة تم زيادة تركيز 281-031 المنقى من 3 ملغم/مل إلى 142 ملغم/ مل في PBS درجة حموضته 7.4 باستخدام جهاز زيادة تركيز دوار من نوع Amicon Ultra-15 . وتم تقييم المستحضرات قبل وعد زيادة التركيز لتحديد التكدس عن طريق المعالجة في عمود SEC أبعاده 77.8 30 من نوع Tosoh G3000SWXL متحد مع أداة قياس التبعثر الضوئي من نوع Wyatt miniDawn TREOS وأداة لقياس دليل الانكسار من نوع 1876 -Wyatt Optilab وتم حقن 20 ميكروغرام من البروتين 0 وتدفق بمعدل 1 مل/دقيقة في PBS وكان gall الكتلي للذروة عند الوزن الجزيئي المتوقع الذي يبلغ حوالي 2.5 1710 نانوغرام (150 كيلو دالتون) مساوياً للتركيزين (790.9 ل 3 ملغم/مل و791.3 ل 142 ملغم/مل من المستحضر) مما يشير إلى عدم حدوث زيادة ملحوظة في تكدس البروتين أثناء زيادة التركيز. وتظهر هذه النتائج أن 831-031 يمكن زيادة تركيزه إلى 142 ملغم/مل بتكدس قليل (<210). 5 المثال 23: إعاقة 281-031 لتأشير 11.6 عند الموقع المجاور والمقابل استخدم خط خلايا مبلغة من نوع 11.6 HEK-Blue™ (من شركة إنفيفوجن (Invivogen لمقارنة فعالية 881-031 وتوسيليزوماب tocilizumab لإعاقة تأشير 11.6 عند الموقع المجاور والمقابل. وفيما يتعلق بالتأشير عند الموقع المجاورء تم خلط 11.6 الحر (التركيز Ale = 20
بيكومولار) مع 231-031 أو توسيليزوماب tocilizumab عند مدى من التراكيز في لوح به 96 عيناً وحضنت عند درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة. وتم إضافة تررسين إلى خلايا HEK-Blue™ IL6 في الطور اللوغاريتمي وأعيد تعليقها في أوساط معايرة (وسط (DMEM 4.5 غم/لتر غلوكوز» FBS مثبط بالحرارة تركيزه 710 غلوتامين L-glutamine تركيزه 2 ملي مولار من شركة بن ستيب Pen- (Step 5 وتم إضافة 50000 خلية إلى كل عين في pas نهائي يبلغ 200 ميكرولتر. وتم حضن الألواح عند 37"م في جو من ثاني أكسيد الكريون تركيزه 75 لمدة 20 ساعة. وثم خلط 50 ميكرولتر من السائل الطافي من كل عين مع 150 ميكرولتر من الكاشضف Quanti-Blue™ (من شركة إنفيفوجن (Invivogen وحضن عند 37"م لمدة 40 دقيقة قبل قياس الامتصاصية عند 650 نانومولار بواسطة قارئة الألواح M5 *10ه90600. وتم طرح إشارة الخلفية من العيون التي لا تحتوي على 1-6 ثم 0 قسمة الناتج على الخلايا المعالجة ب 1-6 بدون استخدام مثبط للحصول على ded التأشير الجزئي. حيث أعاق 881-031 (1650 = 14.2 بيكومولار) 11-6 الحر بفعالية أكبر بمقدار أكبر من 900 مرة بالمقارنة مع توسيليزوماب 1C50) tocilizumab = 12.9 نانومولار) (الشكل 116( ولقياس إعاقة تأشير في الموقع المقابل؛ أجريت التجارب كما هو موصوف أعلاه باستثناء استخدام 17-6 مفرط بتركيز نهائي يبلغ 200 بيكومولار بدلاً من IL-6 الحر. ويعتبر IL-6 المفرط عبارة عن gia التحام جيني بين IL-6 ومستقبلة 116 القابلة للذويان (انظر المرجع Fischer etal, «(Nature Biotechnology 15:142-145 (1997) ونقوم EBI-031 بإعاقة 11-6 المفرط بفعالية =IC50) 32 بيكومولار) بينما لم يستطع توسيليزوماب tocilizumab تثبيط التأشير بشكل ملحوظ إلى تركيز يبلغ 1 ميكرومولار (انظر الشكل 16[ب). وتظهر هذه النتائج أن 881-031 يرتبط مع 11-6 بشري عند الموقع CI أو الموقع الذي 0 يتلامس مع 130م,؛ بألفة تبلغ بيكومولار Gang تأشير IL-6 ومتراكب 11-680/11-6: في معايرات الخلايا بفعالية أكبر بمقدار 900 مرة بالمقارنة مع توسيليزوماب tocilizumab JU 24: عمليات محاكاة حسابية لكبت تأشير IL-6 بواسطة 211-031 داخل الجسم الزجاجي تم إجراء عمليات محاكاة حسابية كما هو موصوف في المثال 20 للتنبؤ بالفترة الزمنية اللازمة لكبت 795 من تأشير 17-6 عن طريق إعطاء 231-031 داخل الجسم الزجاجي لإنسان. وتم 5 ضبط k2 عند 0/0.12 بحيث =k1/k2 14 بيكومولار كما هو مقاس بواسطة معايرة الفعالية وتم ضبط التصفية 2/11 عند اليوم 18 على أساس عمر النصف للتصفية داخل الجسم الزجاجي في Cul] التي تم معايرتها بمقدار يبلغ 1.8 للبشر. وتم وصف كل الوسائط الأخرى في الجدول 6. psig النموذج أن 111-031 يجب أن يعيق تأشير IL-6 بنسبة 795 لمدة حوالي 150 يوم بعد الإعطاء داخل الجسم الزجاجي (الشكل 17). وتشير نتائج هذه النمذجة إلى أن 81-031 يمكن أن 0 يعيق تأشير 11-6 جوهرياً في العين لفترة dune) طويلة مثلاً تصل إلى حوالي 6 أشهر.
المثال 25: تحديد خصائص الأشكال المتماثلة من 181-031 إن 881-031 عبارة عن جسم مضاد ل 1802. وكما هو موصوف أعلاه؛ توجد الأجسام المضادة ل 1802 في ثلاثة أشكال متماثلة بنيوية مختلفة وهي 1802-4 1802-3 و IgG2-A/B (انظر الشكل 18). وفي هذا المثال أجربت التجارب لتحديد الأشكال المتماثلة البنيوية في عينات 881031. تحليل RP-HPLC تم استخدام الاستشراب بسائل عالي الأداء معكوس الطور RP-HPLC لفصل الأشكال المتماثلة البنيوية المختلفة من 881-031. وتم استمثال طريقة RP-HPLC التحليلية المحسنة التي استخدمت سابقاً لفصل الأشكال المتماثلة البنيوية في وسط ثنائي الكبريتيد disulfide ل 1802 (انظر 0 المرجع؛ 1120:112-120 ,2006 (Dillon et al., Journal of Chromatography A, لفصل EBI- 031. تم تحميل عينات EBI-031 تحتوي على حوالي 30 ميكروغرام في عمود من نوع 201108 ela) 30058-8 150 ملم % 2.1 abe 5.0 ميكرومترء 30 تاتومتر ( 300 أنجستروم)). وتم ضيط درجة حرارة العمود عند 2°73 وكان الطور المتحرك Ble A عن she يحتوي على TRA day 5 70.1 وكان الطور المتحرك B عبارة عن كحول أيزودروبيل IPA isopropyl alcohol بنسية 5 أسيتونتريل ACN acetonitrile بنسبة 40 مام بنسبة 724.9 و حمض ثلاثي فلوروأسيتيك TPA 1000086116 acid ينسبة 20.1 pls معدل التدفق 0.5 مل/دقيقة. وتم موازنة العمود أولاً باستخدام الطور المتحرك A بنسبة 100 والطور المتحرك 8 بنسبة 710 لمدة دقيقتين يليه مزيج 5 متدرج التركيز_ من 10 إلى 725 لمدة دقيقتين. وأجري التصويل باستخدام . مزيج 8 متدرج التركيز بشكل خطي من 25 إلى 7232 خلال 21 دقيقة. وتم مراقبة امتصاصية الأشعة فوق البنفسجية عند 4 نتاتومتر و/أو 280 ناتومتر. ولتحديد إذا ما كان الانحلال مرتبط بثنائي الكبريتيد edisulfide تم معالجة العينات باستخدام ثنائي ثيوثريتول DTT dithiothreitol تركيزه 5 ملي مولار وسيستثين cysteine تركيزه 10 ملي مولار عند درجة حرارة الغرفة لمدة دقيقتين ثم حلل بواسطة طريقة RP-HPLC (الشكل 19). وتؤدي المعالجة 5 ب DTT الذي هو عبارة عن عامل اختزال فعال إلى اختزال الجسم المضاد JgG2 مما يؤدي إلى فصله إلى ذروتين مبكرتين (الذروة 0 والذروة 1( (الشكل 19( اللوحة المتوسطة). وتؤدي المعالجة بالسيستئين cysteine الذي يعتبر عامل اختزال أكثر اعتدالاً بالمقارنة مع DTT إلى ازاحة توزيع الشكل المتمائل باتجاه الذروتين المبكرتين (الذروة 0 والذروة 1) أيضاً ولكن ليس بالمدى المشاهد في العينة المعالجة ب DTT (الشكل 19( اللوحة السفلية).
وتظهر البيانات أن طريقة RP-HPLC تعمل على فصل الأشكال المتماثلة البنيوية التي ترتبط مع AUS الكبربتيد disulfide بشكل مختلف. وتم التحقق من بنيات الارتباط بثنائي الكبربتيد 06 المختلفة عن طريق ربط الببتيد غير المختزل وتحليل الطيف الكتلي :mass spectrometry حيث تحتوي ذروة التصويل المبكرة (الذروة 1) على الشكل المتمائل [gG2-A/B وتحتوي ذروة التصويل الأخيرة (الذروة 2) على الشكل المتماثل 1802-8. ومن الجدير بالأهمية أنه لم يتم الكشف عن الشكل المتماثل 3[ من 1502-8 (الذروة 0) في العينة 531-031 (الشكل 19( اللوحة العلوية).
مقارنة عينات 531-031 المختلفة باستخدام تحليل RP-HPLC الموصوف أعلاه؛ تم تحليل عينات 281-031 التي تم جمعها من خطوط WIA مختلفة تعبر عن 281-031 لمقارنة توزيع الأشكال المتماثلة للأجسام المضادة
0 الناتجة. حيث تم جمع عينات 281-031 من مستنبت بمقياس 200 لتر من خط WIS نسيلية؛ مستنبت بمقياس 10 لتر من خط خلايا أصلية وتجميعة خلايا مخمجة تحوبلياً بشكل ثابت. وتم تنقية 2811 باستخدام طريقة الاستشراب ثلاثية المراحل من خطوط WIA نسيلية وأصلية تعبر عن .EBI-031 وتم تنقية 831-031 من تجميعة WAY المخمجة تحويلياً بشكل ثابت باستخدام تنقية البروتين WA وتم تحليل العينات بواسطة الطرق الموصوفة أعلاه.
وتظهر النتائج المبينة في الشكل 20 أن كل العينات 881-031 احتوت على الأشكال المتماثلة 1gG2-A و 8/-1502 ولكن لم تحتو على مقدار كبير من JgG2-B وتثبت هذه البيانات أن الجسم المضاد 1802 281-031 يتم انتاجه في مزيج أقل تجانساً بالمقارنة مع الأجسام المضادة 2 الأخرى؛ سواء تم الانتاج من خط WIA نسيلية تعبر عن 881-031؛ خط خلايا أصلية تعبر عن <EBI031 أو من مجموعة WIA غير متجانسة تعبر بشكل ثابت عن 881-031. ويظهر الشكل
0 21 توزيع الأشكال المتماثظلة من عينة 881-031 من مستنبت بمقياس 200 لتر من خط خلايا نسيلية تعبر عن 531-031 اللوحة العلوية في الشكل 20. وتم أيضاً قياس المساحات تحت المنحنيات؛ وتظهر التوزيعات بين الأشكال المتماثلة في الجدول أسفل الشكل. المثال 26: الحركيات الدوائية في دراسات الحيوانات الرئيسية
تم فحص الحركيات الدواثية 291-031 في دراسات الحيوانات الرئيسية. حيث تم فحص اثنين 5 من ذكور القرود الخضراء الأفريقية بحقنها ب 50 ميكرولتر من 0131031 تركيزه 50 ملغم/مل في الجسم الزجاجي للعين. واستخدمت برمجيات مادونا Madonna software من أجل توفيق المنحنيات. وتم dada البيانات الناتجة من دراسة الحيوانات الرئيسية باستخدام توفيق المنحنيات. وتم تعريف المعادلات التفاضلية التي تصف التغيرات في الجسم المضاد في الجسم الزجاجي (A) والجسم المضاد خارج الجسم الزجاجي؛ مثلاً جهازياً (A) كما يلي: d/dt(A) = -A*kae 30
d/dt(Ap) = A*kae(Dil) - Ap*kape وتعرف قيم الوسائط الابتدائية والمعدلات في الجدول التالي: الجدول 8: قيم الوسائط الابتدائية والمعدلات in العضاد الأولي eet وتشمل الاعتبارات الأخرى من أجل التوفيق: تعويم التخفيف وثوابت المعدلات من أجل التوفيق. وتم المحافظة على الجسم المضاد الأولي في الجسم الزجاجي (Init A) ثابتاً (2 x 50 مل بتركيز 50 ملغم/مل في 5 مل من العين). وتظهر نتائج النمذجة المبينة في الأشكال 22 22ب و23 أن ثوابت معدل الاطراح في الجسم الزجاجي تؤدي إلى أعمار نصفية تبلغ 4.6 و 5.7 يوم بالترتيب للقردين. وتم حساب متوسط ثابت معدل الاطراح في الجسم الزجاجي حيث وجد بأنه يساوي 2 يوم. وتم نمذجة الاطراح الجهازي فكان يساوي 1.1 يوم و 0.63 يوم (بمتوسط يبلغ 0.85 يوم). 0 توثثبت هذه النتائج أن عمر النصف half-life ل 211-031 في الجسم الزجاجي أطول بشكل ملحوظ من عمر النصف الجهازي في الحيوانات الرئيسية. المثال 27: الحركيات EBI-031 Jase cual تجربة أخرى للحركيات الدوائية PK حيث تم حقن 50 ميكرولتر من محلول تركيزه 0 ملغم/مل من 831-031 داخل الجسم الزجاجي في عيون الأرانب. وكانت النقاط الزمنية التي تم 5 عندها الفحص 1» 3 7 و14 يوم (مثلاً 24 72 168 و336 ساعة). وتم تحليل حيوانين (أربع عيون) في كل نقطة زمنية. وأجريت طرق اعطاء التركيبة 811-031 وجمع النسيج العيني وتحديد تركيز البروتين كما هو موصوف في المثال 21. وتظهر النتائج في الأشكال 24-124ط. وعند تحليل تركيز البروتين للأيام 14-1 في الخلط الزجاجي؛ تم تحديد أن jee النصف ل 281-031 يساوي 8.95 يوم (الشكل 24). غير أنه تم 0 الكشف عن استجابة قوية للجسم المضاد في اليوم 14؛ من شأنها أن تؤثر على النتائج. وعندما تم تحليل تركيز البروتين في الأيام 7-1 في الخلط الزجاجي؛ تم تحديد عمر النصف ل 81-031 بأنه يساوي 18.88 يوم. وتم أيضا الكشف عن 5131031 في حجيرات العين الأخرى بعد الحقن داخل الجسم الزجاجي. ولقد نفذ 51-031 أيضاً في الخلط المائي (الشكل 24ب)؛ مشيمة العين (الشكل 24ج)؛ ملتحمة
العين (الشكل 24د)؛ قرنية العين (الشكل 24ه)؛ الجسم الهدبي (الشكل 24و)؛ عدسة العين (الشكل 24 الشبكية (الشكل 24ح)؛ والصلبة (الشكل 24ط). وكان تركيز العقار في هذه الأنسجة أقل من التراكيز التي تم الكشف عنها في الجسم الزجاجي بمرة أو مرتين. وبتضمن نطاق عناصر الحماية التالية تجسيدات أخرى.
Claims (2)
- عناصر الحماية 1- جسم مضاد أو gin مرتبط بمولد المضاد حيث يشتمل على منطقة متغيرة للسلسلة الثقيلة heavy chain variable region لها سياق برقم تعريف: 37 ومنطقة متغيرة للسلسلة الخفيفة light chain variable region لها سياق برقم تعريف: 38. 2- جسم مضاد أو sia مرتبط بمولد المضاد Gus يشتمل على سياق للسلسلة الثقيلة heavy chain sequence 5 برقم تعريف: 41 وسياق للسلسلة الخفيفة light chain sequence برقم تعريف: 42؛ أو جسم مضاد أو ga مرتبط بمولد المضاد حيث يشتمل على سياق للسلسلة الثقيلة برقم تعريف: 41 وسياق للسلسلة الخفيفة برقم تعريف: 42( حيث يتضمن الجسم المضاد أو ead) المرتبط بمولد المضاد Bib (على سبيل المثال» طفرة واحدة؛ طفرتين» 3 أو 4 طفرات) عند موقع واحد أو JST مقابل D313 11311 J 1254 أو 11436 (مرقمة كما في السياق برقم تعريف: 41). 3- جزءِ مرتبط بمولد مضاد Cus Fab antigen-binding fragment يشتمل على سياق سلسلة ald heavy chain sequence برقم تعريف : 39 أو برقم تعريف: 54 وسياق سلسلة خفيفة برقم تعريف: 42. 4- الجسم المضاد أو الجزءِ المرتبط بمولد المضاد وفقاً لعنصر الحماية 1؛ حيث يكون للجسم المضاد أو للجزء المرتبط بمولد المضاد lata) محسناً في العين عند اعطائه داخل الجسم الزجاجي بالمقارنة مع ذلك للتوسيليزوماب tocilizumab و/أو أفليبيرسيبت )م21106:66. 5- الجسم المضاد أو الجزءِ المرتبط بمولد المضاد وفقاً لعنصر الحماية 1؛ حيث يشتمل الجسم المضاد أو الجزءٍ المرتبط بمولد المضاد على طفرة (على سبيل المثال» طفرة واحدة؛ طفرتين» 3 أو 4 طفرات) عند موقع واحد أو أكثر مقابل «D313 »11311 J 1254 أو 11436 dais) كما في السياق برقم التعريف: 41). 6- الجسم المضاد أو gall المرتبط بمولد المضاد وفقاً لعنصر الحماية 2 حيث تختار الطفرة المذكورة من واحد أو أكثر من I254R 12548 031317 01311177 13118 H311A و 1436]. 7- الجسم المضاد أو gall المرتبط بمولد المضاد وفقاً لعنصر الحماية 2 حيث تتمثل الطفرة المذكورة في الطفرة 113118 (منرقمة كما في السياق برقم التعريف: 41). 8- الجسم المضاد أو gall المرتبط بمولد المضاد وفقاً لعنصر الحماية 2 Cus تؤدي الطفرة المذكورة إلى التقليل من التراكم الجهازي للجسم المضاد أو gall المرتبط بمولد المضاد بالمقارنة مع التراكم الجهازي للجسم المضاد أو للجزءٍ المرتبط بمولد المضاد الذي لا يشتمل على الطفرة. 9- الجسم المضاد أو hall المرتبط بمولد مضاد وفقاً لعنصر الحماية 2 حيث تؤدي الطفرة المذكورةإلى التقليل من التراكم الجهازي للجسم المضاد أو shall المرتبط بمولد المضاد بالمقارنة مع التراكم الجهازي للجسم المضاد أو للجزءٍ المرتبط بمولد المضاد الذي لا يشتمل على الطفرة؛ حيث يتم تقييم التراكم الجهازي بعد اعطاء الجسم المضاد أو gall المرتبط بمولد المضاد Jala الجسم الزجاجي. 10- الجسم المضاد أو الجزءٍ المرتبط بمولد المضاد وفقاً لعنصر الحماية 1؛ حيث يكون للجسم المضاد أو الجزءٍ المرتبط بمولد المضاد Chal عمر جهازي systemic half-life أقصر من ذلك للتوسيليزوماب tocilizumab و/أو أفليبيرسيبت .aflibercept 1- الجسم المضاد أو الجزءٍ المرتبط بمولد المضاد وفقاً لعنصر الحماية 1؛ حيث يتمثل الجسم المضاد أو gall المرتبط بمولد المضاد في النمط الإسوي من الغلويولين المناعي Immunoglobulin 10 ع1 1gG2-A أو النمط الإسوي (IgG2-A/B وليس النمط الإسوي 1gG2- 3 2- جسم مضاد أو ga مرتبط بمولد المضاد حيث يشتمل على سياق للسلسلة الثقيلة heavy chain sequence برقم تعريف: 47 وسياق للسلسلة الخفيفة برقم تعريف: 42. 3- تركيب يشتمل على الجسم المضاد أو hall المرتبط بمولد المضاد وفقاً لعنصر الحماية 1 واختيارياً؛ مادة حاملة مقبولة صيدلانياً. 4- التركيب وفقاً لعنصر الحماية 13( حيث يشتمل التركيب على نسبة لا تقل عن 60 70« 80؛ 90 95 أو 799 من الأنماط الإسوية من الغلويولين المناعي IgG2- Ig Immunoglobulin A أو TgG2-A/B للجسم المضاد؛ أو توليفة منهما. 5- التركيب وفقاً لعنصر الحماية 13؛ حيث يشتمل التركيب على نسبة تقل عن 10 5 2 1 أو 70.5 من الأنماط الإسوية من الغلويولين المناعي Ig Immunoglobulin 1502-3 للجسم المضاد. 6- حمض نووي nucleic acid يشتمل على سياق يحمل شيفرة جسم مضاد أو جزءٍ مرتبط بمولد المضاد وفقاً لعنصر الحماية 1. 7- ناقل يشتمل على الحمض النووي nucleic acid وفقاً لعنصر الحماية 16. 5 18- خلية تشتمل على الناقل وفقاً لعنصر الحماية 17.Vo اليوم YY اليوم سي اانا تا ل TNE 1 i RRO Fen Cui Epa 1 Bae ata Youd Bon اال ف.ك 8 Su Sn Penida 2 سب_ ا = ina i. 1 ال 3 I سواغ ا اتا 1 Phe 3 سب د al : nm ب ; TT 0 وعم 7 الا 6ع - = CASE wr مضادد Kl1 i. rr ا 1 3 a ee Blan مضاد-6- [_] 2 NZ 3 be ا مضاد-ة5-اا ص ا ب ا فص ا ا 0 الأ الا. .ولا Y iol, oe 3 RGEC rea Sad I Ean ال ل ين 0 سر ا a EEE اللا ey a. - ا | صر ا ا الأ م ا الا 1 ا الا تالا ...ما 7 ال د ...م ١ الشكل ٠ ١ ¢ JE — - AY a ot Ww on RU Ni I ee oe vod eeeFS . r PBS mAb 64 الشكل ؟IL-6 حصار ١7 4 8 م ا 1 & 2 La _ إ © © op ! IE CA IS be i i a \ 4 : ا \ 8 0 #قوور٠(ر7 لسك Coreen) ee) 0" Vv. [بروتين] (نانومولار) a-lL-6Ra EB-020@ الشكل ؟أ حصار 8510 ال56/5-هاا ١ 0 7 = ١ | 0 oe onl وو حت اي 5 1 ا ُ A ا VE ِ PH VY | ١ 8 we PT 7 [بروتين] (تانومولار) ناماه EBI-020 © الشكل "بSn : . FEN عين معا ال ا i itt tty H i ١ Ep i Pe i rey A H ry A H " Ys 4 i ik <r H 5 2 و 4 PRES — Iris Heit tit yrs 1 ال ا SAA 3 | EE Lemp ار Fm rors 4 i جد >< د ححا جب 22 v SENSI ma ry - HE NRE SN Be smb A ا SRNR Eee Sa rE Z اك رك را ا ال خخ ار كم م رك كرا ال 2 لجح ل oO poe Ya RNIN So Al AT =~ : 7 1 ny A FI AN NN IY CCR RR RR Es H امح احاح ا PERI vA] ER I RE مر ل بحت 2 ا ا ا Vos > EEN Fhe اا A, 7 CR I SEE م م رك را g NNR re Manoa 7 f a مرك رس رع رك رك ركرك ال ا ا ال S| 72 2 وي 0 لمجي يي امح ا ا الا ا DIRE ES TE SOI Mk H @tmF Val 1 5 4 2 w i 7 1 Oo = Ki = 1 ع الشكل ؛? ب الها الج 2 ا ب م oa EON : 7 يل 3 = Wo 3 0“ على wen دا SS سا رق 3 Low © اليا 8085 g Te . مب ا - = يبا 2 ٠ M : - ~ كر ار ام << 1007 I قت ا نو ws : ةو od =< ب ا 2 = i pt 0 3 ريا — wl 0 [EA I ES | = 1 CON 2 Y-2dY = جا يا ,5 ضا - % اج El 0 85 wo نا امح Es EE Em م ما حرق ل ايه 2k 88 > to = RE Ng Nits CONN جب ب 7 -لا 2 - : ب 5 ا ا FEL ١ Fin 28 رب ca NE if ¥ - 3 2 = en E 1 =a nt ا ندI. ¥ م 5 7 3 ِِ ,2 0 5 1 i خض جا Ral ol RE 03 Bak [ET الا اي لنا EE 4 ب a © 2 ليا رق 3خ يي الا = 12 7 3 3 > 5 الشكل ©+ SCE EN WT سه JN AIBVASTT/SSSG وض 3 8 5308/1511/5556 سن oy \, A A 0 A28V/S30P/ISTT/SS5G سهد VY - Xx . OB eo 6 wa . QO, i IA « 8... اا ايك با ل oy ey cre XH On - . RANA” a= «= A اا سروس ف ا ل ١ ١ Yoo c=] (نانومولار) [Fab] 1 الشكلب مرت <q WT ope ا \ - A28VASTT/S55G هل ربت _ سو 5308/1511/5556 ا a) You, AY سهد 51175556ا/53080/لا8عة Youre + ١ x 6 ool oN Mo a re. 1 م بيط طلا 8 ب oc mone. ie ا a i] Sa LS «vy cA k A Yau (نانومولار) [Fab] الشكل أ٠: * 7 8-029 aA 0 81-030 x ١ ا mae مدا الجا ا 1 81-0300410 = 4 Ch MR | ا EBI-030 H311A © 0 توسيليزوماب \ خلا © 1 I 00:1 ١ ب , 7 LE R \ ١ Cx \ \ \ ١ اد AN تركيز الجسم المضاد (تأنومولار) A الشكلاه Kaie/ م | \ 1 } “١ k 1 1 Sy ل + مله = \ iL k 2 ST FE 1 5 4 الم Kae | ~~ rn ee rd koi 9 الشكلo N 7 : 1 . a 7 - ° > > + [NE VO! SSS NS WO SE SI و ا ان لانن EE ١ i ١ : : ; ١ i ٍ i | ; | 1 ; i | : إٍْ 1 : i : ! i i : : 1 : : : | i : i : i a \ | 1 | 1 ا 1 ! 1 حا حا RATAN SA sEERY Ll HE إٍْ ١ إٍْ 1 : 9D 3 9.8 2083 ا I ا ال 313 ا ا ا ل 1 راي CIMT اا ع ما . ol | | en PHO A BS | | : | | i | | ا ةا أ سا - 1 إٍْ إٍْ إٍْ 1 اه a i HS | : | ال ميد كا /إنا ا ال ا eS FOOL الا i i > 1 | الا الس 1 | i pO Noe, | | i ل re i | ٍ ب السك الكو ند ات لال اا 1 : “ ا 1 امسا 1 hn | 1 ~., ia | | { | | سا — RCE 1 ~. IRC i { ; | تم = © © 5ج »0# ل H 1 كم ب 1 XX | 1 1 Tha © = ا | ١ 7 | | | [SY 1 SNL #2 * 7 7 + EN | 1 ب hs : | | | أ به ب foe | ١ Hoa إٍْ حا ب : : LA 7 كت ! اا 1 ا ل Ce 1 ! | 7 < ب" اتح اي ا تعض معي ا 1١ 534 pei 1 1 Te AES HN | 201 ; 0 I EE EE | SNL 2 i JRC 1 ITN u : | “ اا ال الس ال NY i > | اا 1 ا 1 | J SONY = RE YATE BUR SU EE ARE YO بي “on, | NE EA ١ الا Fe LNT 30١ DP 3 | لا SELL oY SR الما ا اا الا ا ا ا سد ا nz 3 1 3 1 ب 1 1 Fan Lon . | اال 7 Rt A iv ١ نب 1 1 H 1 1 A : 1 : 1 1 . RTH اا ا fi | | 1 1: | Hh, ١ ARIAS ا i ات FO EE TEER IY a اي ال | 1 1 | | 50 NE £1 | قا ا ات اا الل | ا ا ا 0 POON Ly 1 7 : | = A 2 إٍْ 1 ; ; ; od EEA ; : Poa : 1 1 1 1 ! ! ا 0 ١ : 1 ١ 1 1 J J | ; 1 | ; SE) i ON ¥ i {iy إٍْ 1 ; ; i i RY 1 0 | 1 ماهلإ EO IS ب” اللس” لا ااغوؤووإو قوق ]ا 8 2 4 ا ١ ١ 118 11:0 ا ١ ١ 0: 80١ | | i 1 ٠ ; 2 i ءه : HE ١! | ١ i : ; 1 ES PF : i :أ | Pod فخ أ اث 2 1 : 1 ا ك > كب > ل ي ك >> ل ٍ كرا oO 1 : | ل ا د ل فار د ا ا أ 2 ST ; i : < Ee دده ده اه k | من 1 1 ا AR عل اع ات ا ع ددج o امل 3 HRS EE AE HE EE IS a : 00| | i EB Ry > إٍْ ١ لب 1 1 : | ZZ Cad I إٍْ Es = ا ات Po ١ : سا Pa ٍْ ٍ i | | ل سامرلا i i J 1 = § سي ; der 1 1 1 i 1 1 أ أ ييا ما م د ل ل ما م ا ماعل بعر سم با عه عه ماه جاه عا ب عه عد عأ عام بار بع مده ري ام تع :ا ااا انال أ ال ال ال . يي »> 3 Lal < > ~ a w — xX >» xX X للا xX لاا الا ء ص حر حر حر Id 2 EE > الشكل ٠١ا. a —" an © A bE EBI029-H311A © 3 I : gp EBIOI0 و RT i إيليا a C7 »* ١ | 2, Yoo ١ - الزمن (بالساعات) ١١ الشكللشبكية العين PK قمية ااا لاا سسا م واو EEE ERT Bees الاإستجابة المناعية 2 ا 22 ل لها 2 RN EBI-029 © 2 0: NL a A A AA 1 ٠١١ ص ا ا سب افك . ا Ro ni ERI-030 8 = اتا ا ااا is hr ا > & i (Se, en —_ : 8 ل EBI-030-H311A A : TG Ere 3 ok i إيليا a 2ه ٠١ ee ب or 3 J Ze he 2 7 ب ا A 27 ا ١ ام X Yer Ye. vou £0 الزمن (بالساعات) VY الشكلEN a - ANN اي الك اتج fo AON REA NN RN : RN 8 الا بم ال ا NR TN NEE ANN NN . hod NIN Na UII Vv RN 3 . BAN NN RATE EROS 7 RE AN VAN NN 3 ال اممو ب Na RR 5 NNR AA Ne ES ا A SAAN 3 3 BIE Ar’ | : J EY i ra = أ ا 1 0 010 : إٍْ id : ~ لا ١0 إٍْ A [I 72 أ eres اش مب © 1 4 4 # Oe يدا وي > و= . و8853 : = - 2 كر ال سان * الكل اناد ني EE 0 ب | i] i i TSC pm (SHER) = © 1 m0 Ld ANNE : MN Ns > ON SERN جه احاح لب NORA Ny . FIN AR GN NER OE Sa he ENR AV SN NR, NTE ا ار دا ال NNN PO NNN PR NARS =, A Rae SNA EN أحبب“> : 3 جا م و إٍْ 3 Hi 5 4 if 3 FO 0 i RAY ا | BA z RTA الا | 0١ FN EY ا ١ ل جا عو يم (RTD) ١٠١ الشكلالتراكم الجهازي بعد إعطاء جرعة ١ داخل الجسم الزجاجي EBI-029 م EI EBI-030 سه 3 Ava i EBI-030-H311A > 7 مولا fe LL 7 إ: y= سه إيلي 3 / py, TCL سه I Dan / N° 2 Soe / pi 3 ya" ~~ رم AX 1 م يي ae ; Ra 1 ا 0 a ¢ Nd vo. ®/ مر 0 م 4 Wa Yeu Id 2 J ا Veo Yi re AN الزمن (بالساعات) VE الشكلFRI GORI, FR2 |, CDR? FR3 28 30 4 | 20 | 80 | 7 RRI-029 QVOLVOSGAEVKKPGSSVKVSCRASGYALSNYLIEWVROAPGOGLERNGYITPGSGTINYAQKEQGRYTT EBI-030 QVOLVQSGAEVKKPGSSVEVSCKASGYVLPNYLIEWVROAPGQGLEWMGVTTRPGGGT INYAQRFQGRYTI 231-031 QVQLVQSGAEVKKPGSSVEVSCKASGYVLPNYL IEWVROAPCOGLEWNGYTTPGGGT INYAQRFQGRVTL FR3 COR3 FR4 CH لسمسسسسسس سس سسي6ق. لمتسستسسسستيه »>>> »ااا ااا كا لاسأ ١ 80 3 : 100 1 ً He | 130 | 140 EBI-029 TADESTSTAVHELSSLRSEDTAVYYCARSRWDPLYYYALEYWGOGTTVIVSSASTKGPSVFELAPCSRST EBI-030 TADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSRWDPLYYYALEYWGOGTTVTVSSASTXGPSVFPLAPCSRST 531-031 TADESTSTAYMELSSLESEDTAVYYCARSRWDPLYYYALEVWGOGTTVIVISASTKGPSVFPLAPCSRAT CHI : 139 160 ki 19 10 | 200 20 281-029 000 281-030 SESTAALGCLVEDYFPEPVIVSWNSGALTSGVHTFPAVLOSSGLYSLSSVVTVESSNFGTQTYTCRVDER EBI-031 510170171515077 ييا 0 Hinge CH2 : 20 230 240 He 7 | 270 | 20 EBI~029 )يي 131-030 PSNTRVDRTVERKCCVECPPCPAPPYAGPSVELFPPEPADTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVOFNWYV EBI-031 PSNTKVDRIVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPEPADTLMISRTPEVICVVVDVSHEDPEVOFNWTV CH2 i CHa 230 01 : 3 30 30 | 340 | A EBI-029 DGVEVANAKTKPREEQFYSTERVYSVLIVYHODRLNGKE YXCRY SNKGLPAPIRX TI SKTRGOPREFOVY 231-030 DGVEVHNAKTKPREEZQFNSTFRVVSYLTVVHQDWLNGKE YKCKVSNRGLPAPIEK TI SKTRGOPREPQVY 531-031 DGVEVINAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVAQDWLNGKE YECKVSNKGLPAPIEKTISKTRGOPREPOVY ا ل س سسسمسسته SN ا ا أ الأ لأ أ يي 207029 TLPPSREEHTRNQVSLTCLVKGEYPSLIAVEWENGOPENNYRTTPPMLDSDGSFFLY SKLTVDRSRWOD ERI-030 TLPPSREEMTRNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWE SNGOPENNYRTTPPMLDSDGSFFLY SKLTVDRSRWOG 231-031 TLPPSREEMTKNQUVSLTCLVEGEYPSLIAVEWESNGOPENNYRTTPPMLDSDGSFFLY SKLTVDRSRWQQ CH3 4 a TR1-029 GEVFSCSVMEEALENBYTORSLALSPGK 281-030 GNVFSCSVMHERLENHYTQKSLSLSPGK ERI-031 GEVFSCSVMHEALENBYTQRSLSLSPGK fyo الشكلFR1 CORI FR2 CDR2 FR3 _— ee lle Bh 1 2 3 i 3 !( 7 ! 1 ص I 011711105705 LAVELGERAT IRCRASE 570111511001) FR3 COR3 FR4 CK 0 10 He 10 | He | 16 AUN FUSUN FDIS FUE FOUR PUSS BUTE DUDE DEUS PRUNE DUO PUD DEDIE PUT SGTPFTLTISSLOAR DVAVYYCOOSEEVPLIFGOGTKIE TKRTVAAP SVFIFPRSDEQLESGTASYVCLL CK 10 1 ٍ 0 ٍ 10 20 ae NNFYPREARVQWRVINAL OSONSQESVTRQDSKDS TY SL8 STLTLSKADYER HRVYACEVTHOGLESPYT = RSPHRGEC Ye الشكلIL-6) بشري) تأشير مجاور Cee © 4 م Bq EBI-031 © بي 3[ توسيليزوماب شأ we y ًً 8 ٍ 3 ا \ د © , 3 5 \ \ 8 - بل ل 0 > يا ood yy د اعم ال CE SN كيه صا أبروتين] (ثانومولار) الشكل 11تأشير مقابل (6-اا بشري) You fh ed Bl an 0 of N= a \ Ur Deere I 3 1 5 ER 031 © x | 03-ا8غ ا توسيليزوماب ا+. 1 : : : NT on ١ لا أ ب" dees [بروتين] (نانومولار) اب ١ الشكل0 :ا 70 bo >» be 2 — 0 - T EEE ل ل أ CNL ال ا 0 7 of | ١ لذ ١ ١ SIE EE ا ١ ١ لل ١ 7 و ل 0 الل 0 ‘ | | of | | إ bo أ ل" i | I~ ff i | bd 0 ْم ا اال ا اانا ل EA BE 0 LE Lol IE HEE EET a 07 اال« i SEE BIER R= = IVA م oN ذا ا ثم ارا اد د الخ a الل لل Pd ب ب \ A Lo SEE EE اسم PE ل ا لض — © حم FT م wl 3 م اشر لل Sx XOX OX x XX ذم كد : ae Ie - i Ie - - - 1 ١١7 الشكل0 ey OQ لم > رع 0 بت >» i Ng SING 8-89 TY 4 Hp وو 5-5 وا مركن 2 “ 5 ص of? om له << oN o ال SON SNE & 0 Os 5-35 5-5 & DDD J, Dd وال مركتي $5 5-5 2 of Jo a of 0 i أ وح ® =
- 2. وان SN SONS 5-5 و في rrr : - 2 OF fo, S888 o 2 ص وو a of YA الشكلم 61 م - ; J j \Yo. - Ca تركيزه © ملي جزيني DTT معالج ب 1 2 7 0 2 HiCa. معالج ب 5لا0 تركيزه 1 = د wor ملي ٠ = Fa a ] Tove Aer Neen AW¥re Vive Tees YAcer Yeers YT.oes Thess الدقائق V4 الشكلRP-HPLC للشكل الإسوي لرايطة ثنائي الكبريتيد - مقارنات لعينات 81-031 NBL0071-08-06 / ا (قيأس ٠٠0 لثرء IA Cis \ أ rH 2 خط خلايا نسيلي) \ 2 ve 0 NBL0O043-10-04 ف" (قياس ٠١ لتر i : خط خلايا أصلي) | rn 2 ve Y 1 مادة مرجعية داخلية Ca (تجميعة مخمجة تحويلياً بشكل ثابت؛ vo y, المادة ١١ المبكرة) م" 2 10 ITN Vian Ye YA ee Yoon YY... Yeo مل م يار اج الدقائق الشكل 0(NBLOO71-08-06) 5281-1 8058 من ٠٠١ لتر مفاعل (gpa خط خلايا نسيلي) RP-HPLC للشكل الإسوي_لرابطة ثنائي الكبريتيد NBLOO71-08-06 eV 1 الشكل الإسوي 8 = 1 ها ارا © الشكل الإدوي >" eo] BANG | Cod | 1 is § H 1 § 0 = FA : أ 1 | IS < EE ' ا Cav a أ 00 |2 لشكلالإسوي 0 | لإا 8 BRR H | No — << مسمس يي سس سمس و سوه 1 1 SE 2 .ميج لمكا ارم امير نر اليه الدقائق المساحة 7 المساحة .| درجة حرارة ABA الإسم م 4م 7 الشكل الإسوي 5 ا ITEGRAL د الشكل الإسوي B/Ava. iv ا م الشكل الإسوي لل الشكل ١Hef i | i ER ا ord 0 ١ : : ord ا IH i | i | | i do Ph ا od qd : : | Pd i 1 | H 1 | H [I | 1 i 0 i | : | | i : 1 لغ Pooh 0 SS SN SO SEN SS NE Ed RN SU I SU SN BS} I Poo { he i i i Nhe i 1 1 i [I i 1 1 1 1 1 rod إٍْ ا إٍْ إٍْ إٍْ 1 ob I Ij i : i i io PE : : ; : ; | 1 ا 700 | | إ Poor Hi i | i I: ١ : : : ! : 0 : ! 1 1 i i : i | : 1 { ! ا 1 ا ا | اتات سا I ! Li | | 1 1 1 1 | |sassvsagsl ا RENE EN 8 ا ١ ١ داج ١ ماج | Fw os bX . 4 3 SE | 3132 12 0 2 11135 أ ” Tod ا | .5 ؟ 0 . : io EE 7:7 ; ا EE i pl . a SE oe | 0 ; . 4 25 HEY و Re ; EE إٍْ 1 | ! i 1 | 1 : i | 1 ١ أ ا i i I ] TT ; 7 ا YB EN NN OF Lo ١ : : : gf iL ر a ارا ات EE EE ]/ /8»؟ 0 I EE EF A i | | 1 | | 1 | | ]ا [EE I ES RE IF A ار EE i : | FA | إٍْ 7 ا ا EE Eo Coo i 1 1 1 01 1 1 1 7 1 ا 7 | : i : i ١ ١ 1 id ; [I 1 ; 1 ١ i 1 Hs لا ااا تتام op Po A i | ا : : ! i 0 1 i | | | | EE | | 1 = 1 ا ل 0 ; : ; = | ; Col 1 ! i Ea : : NT : Ea : ار [A Po] li Lo 4 EE 5 ا ها لاسلس r= ! : ! irs إٍْ اس ا Loo : i : : : ET A i ; i ; i | ET i Lo i : إٍْ ا : EE ; ! i : | : | 1 إٍْ 4 اا ا | J | ا | | ! I A ا 1 ; i 1 ; bog : | 01 ! ! 1 ا 1 م ا 1 | 1 1 | [I ا حرطا ١ ١ ل ا bof 1 ١ 1 ad ١ ١ ! i i ; | لما ; i | i i i TNE ANN EA 0 ااا ١ ب iA | | : | : : | شرا ما ا i | IS | | | | ١ ا إٍْ ا ال ا ا : bol © ا SN NEU SE A [ESE 7 J WN NS SUS SN § ا : | ع7 إٍْ 1 : [I EE EE ا 2 SANE EE Co N/A Po ا Co Po Co Yi NE تل“ ال NO] Ee إٍْ : إٍْ إٍْ Ho حم إٍْ الا إٍْ PY | i ا إٍْ الحا ا i Eh i : إٍْ يح ا إٍْ ا إٍْ إٍْ الا i : يحل أ I i 0 i i i اكد 0 i i i 0 . i i re : الح EE i ; Se ال EE | اسح ; EE Se i i . ا لس ااال ا ا _ للا ا الس سسجتت تت ال oT ب" 0 7 & + 6 + a + 6 a w 3 = حر سر انر سو سر اس PR wg fern 1 0 dy 12 7 لمح dy 1 0 الشكل YY الشكل YY if = HE 8 Ho 2 ااا اا Ww i % مس توفيق — ow 4 ¥ توفيق mn EE ريق 2 | \ 881031 (K679) & Dr Ne 881031 (K797) X خم Na Youn go اب ٠ Yo Ye Te الزمن (بالأيام) الشكل ؟؟الخلط الزجاجي ا 3 $ سم ١ 1 ma yauxY.d 3 2 3 1 A) XY. eo ! ٠ Yon Ya a Sa الزمن (بالساعات) Ive الشكل : الخلط المائي و5 ب + = i HE = i 1 8 wo fy xy os ا i 8 2 i “4 + 2 = Nxt B 0 vy ٠ Yaa You Yue $a الزمن (بالساعات) الشكل ؛ "ب مشيمة العين _ of 1 5 1 © اب .* ل v 3 ¥ 2 ] 3 i 1 ٠ Vou Yoo as Sha الزمن (بالساعات) avi الشكلالقرنية الملتحمة إ: - Ty axy ® wed 8 : T © <> 2 م 8 & 1 لذا a xt o 0 Wx _ ? 0 3 كرحا Z [ 2 "yx TLY . ل را - إل أ 2 0 3 5 ٠ Yor عر Yao fan . Yer Yao Fav مر الزمن (بالساعات) الزمن (بالساعات) الشكل 6 ؟د AYE الشكل الجسم الهدبي للقرنية = العدسات : جسم الهدبي = 38 3 بم 4 x pe 7 m 1 1 mn J ل 00 3 ليا : — . fe) 3 1 0 3 3 ١١١ . 3 "on v ¥ ل ٠ . Yee Yeo Ta. fan . Yeo Yee Fao faa الزمن (بالساعات) الزمن (بالساعات) الشكل ؛ "ز الشكل ؛ ؟و الصلبة الشبكية بسب * a A ١ 2 بن 3 ا B 1 د m Voxel = ue. ييا a A FARA N 32 A z a 2 yen 2h 3 3 . بحي 0 . Yeo Yao Yoo $a . Yao Yao Tor fan الزمن (بالساعات) الزمن (بالساعات) Yeon Vi الشكل Lys الشكللاله الهيلة السعودية الملضية الفكرية ا Sued Authority for intallentual Property RE .¥ + \ ا 0 § 8 Ss o + < م SNE اج > عي كي الج TE I UN BE Ca a ةا ww جيثة > Ld Ed H Ed - 2 Ld وذلك بشرط تسديد المقابل المالي السنوي للبراءة وعدم بطلانها of سقوطها لمخالفتها ع لأي من أحكام نظام براءات الاختراع والتصميمات التخطيطية للدارات المتكاملة والأصناف ع النباتية والنماذج الصناعية أو لائحته التنفيذية. Ad صادرة عن + ب ب ٠. ب الهيئة السعودية للملكية الفكرية > > > فهذا ص ب 101١ .| لريا 1*١ v= ؛ المملكة | لعربية | لسعودية SAIP@SAIP.GOV.SA
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201462077105P | 2014-11-07 | 2014-11-07 | |
| US201462087448P | 2014-12-04 | 2014-12-04 | |
| US201562247705P | 2015-10-28 | 2015-10-28 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SA517381458B1 true SA517381458B1 (ar) | 2020-07-09 |
Family
ID=54602042
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SA517381458A SA517381458B1 (ar) | 2014-11-07 | 2017-05-03 | أجسام مضادة محسنة ضد إنترلوكين-6 (il-6) |
Country Status (32)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US11142571B2 (ar) |
| EP (3) | EP3632931A1 (ar) |
| JP (1) | JP6594438B2 (ar) |
| KR (2) | KR102636726B1 (ar) |
| CN (1) | CN107249631B (ar) |
| AU (1) | AU2015342882B2 (ar) |
| BR (1) | BR112017008672A2 (ar) |
| CA (1) | CA2965689C (ar) |
| CL (1) | CL2017001135A1 (ar) |
| CO (1) | CO2017005404A2 (ar) |
| CR (1) | CR20170231A (ar) |
| DK (1) | DK3215530T3 (ar) |
| EA (1) | EA035199B1 (ar) |
| ES (1) | ES2756275T3 (ar) |
| HK (1) | HK1244008A1 (ar) |
| HR (1) | HRP20191945T1 (ar) |
| HU (1) | HUE046181T2 (ar) |
| IL (1) | IL251858B (ar) |
| MA (1) | MA51554A (ar) |
| MX (2) | MX2017005992A (ar) |
| MY (1) | MY185114A (ar) |
| PE (1) | PE20171107A1 (ar) |
| PH (1) | PH12017500809A1 (ar) |
| PL (1) | PL3215530T3 (ar) |
| PT (1) | PT3215530T (ar) |
| RS (1) | RS59805B1 (ar) |
| SA (1) | SA517381458B1 (ar) |
| SG (2) | SG11201703574VA (ar) |
| SI (1) | SI3215530T1 (ar) |
| UA (1) | UA122673C2 (ar) |
| WO (1) | WO2016073890A1 (ar) |
| ZA (1) | ZA201702985B (ar) |
Families Citing this family (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP6959912B2 (ja) | 2015-09-23 | 2021-11-05 | ジェネンテック， インコーポレイテッド | 抗ｖｅｇｆ抗体の最適化変異体 |
| BR112018017031A2 (pt) * | 2016-02-23 | 2019-01-22 | Sesen Bio Inc | formulações de antagonista de il-6 e usos das mesmas |
| US20200347143A1 (en) * | 2016-12-19 | 2020-11-05 | Glenmark Pharmaceuticals S.A. | Novel tnfr agonists and uses thereof |
| CA3055985A1 (en) | 2017-03-22 | 2018-09-27 | Genentech, Inc. | Hydrogel cross-linked hyaluronic acid prodrug compositions and methods |
| PE20191758A1 (es) | 2017-03-22 | 2019-12-12 | Genentech Inc | Composiciones de anticuerpo optimizadas para el tratamiento de trastornos oculares |
| CN109867723B (zh) * | 2017-12-05 | 2022-06-17 | 南京金斯瑞生物科技有限公司 | 抗人il6单克隆抗体及其制备方法和用途 |
| IL296256A (en) | 2020-03-13 | 2022-11-01 | Genentech Inc | Antibodies against interleukin-33 and uses thereof |
| JP2023519213A (ja) | 2020-03-24 | 2023-05-10 | ジェネンテック， インコーポレイテッド | Ｔｉｅ２結合剤および使用方法 |
| WO2022079161A1 (en) | 2020-10-15 | 2022-04-21 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Non-covalent protein-hyaluronan conjugates for long-acting ocular delivery |
| CN114525235B (zh) * | 2022-02-25 | 2023-07-14 | 郑州大学 | 一种提高人表皮生长因子分泌生产效率的方法 |
| WO2024088921A1 (en) * | 2022-10-24 | 2024-05-02 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Predicting response to il-6 antagonists |
Family Cites Families (78)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4816567A (en) | 1983-04-08 | 1989-03-28 | Genentech, Inc. | Recombinant immunoglobin preparations |
| US4548990A (en) | 1983-08-15 | 1985-10-22 | Ciba-Geigy Corporation | Crosslinked, porous polymers for controlled drug delivery |
| US5225539A (en) | 1986-03-27 | 1993-07-06 | Medical Research Council | Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies |
| US5476996A (en) | 1988-06-14 | 1995-12-19 | Lidak Pharmaceuticals | Human immune system in non-human animal |
| US5223409A (en) | 1988-09-02 | 1993-06-29 | Protein Engineering Corp. | Directed evolution of novel binding proteins |
| GB8823869D0 (en) | 1988-10-12 | 1988-11-16 | Medical Res Council | Production of antibodies |
| US5530101A (en) | 1988-12-28 | 1996-06-25 | Protein Design Labs, Inc. | Humanized immunoglobulins |
| US6150584A (en) | 1990-01-12 | 2000-11-21 | Abgenix, Inc. | Human antibodies derived from immunized xenomice |
| JP3068180B2 (ja) | 1990-01-12 | 2000-07-24 | アブジェニックス インコーポレイテッド | 異種抗体の生成 |
| US6673986B1 (en) | 1990-01-12 | 2004-01-06 | Abgenix, Inc. | Generation of xenogeneic antibodies |
| US6075181A (en) | 1990-01-12 | 2000-06-13 | Abgenix, Inc. | Human antibodies derived from immunized xenomice |
| US5427908A (en) | 1990-05-01 | 1995-06-27 | Affymax Technologies N.V. | Recombinant library screening methods |
| GB9015198D0 (en) | 1990-07-10 | 1990-08-29 | Brien Caroline J O | Binding substance |
| AU665190B2 (en) | 1990-07-10 | 1995-12-21 | Cambridge Antibody Technology Limited | Methods for producing members of specific binding pairs |
| US5877397A (en) | 1990-08-29 | 1999-03-02 | Genpharm International Inc. | Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes |
| US5545806A (en) | 1990-08-29 | 1996-08-13 | Genpharm International, Inc. | Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies |
| US5770429A (en) | 1990-08-29 | 1998-06-23 | Genpharm International, Inc. | Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies |
| ATE158021T1 (de) | 1990-08-29 | 1997-09-15 | Genpharm Int | Produktion und nützung nicht-menschliche transgentiere zur produktion heterologe antikörper |
| US5633425A (en) | 1990-08-29 | 1997-05-27 | Genpharm International, Inc. | Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies |
| US6300129B1 (en) | 1990-08-29 | 2001-10-09 | Genpharm International | Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies |
| US5874299A (en) | 1990-08-29 | 1999-02-23 | Genpharm International, Inc. | Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies |
| US6255458B1 (en) | 1990-08-29 | 2001-07-03 | Genpharm International | High affinity human antibodies and human antibodies against digoxin |
| US5661016A (en) | 1990-08-29 | 1997-08-26 | Genpharm International Inc. | Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes |
| US5789650A (en) | 1990-08-29 | 1998-08-04 | Genpharm International, Inc. | Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies |
| US5814318A (en) | 1990-08-29 | 1998-09-29 | Genpharm International Inc. | Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies |
| US5625126A (en) | 1990-08-29 | 1997-04-29 | Genpharm International, Inc. | Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies |
| DK0564531T3 (da) | 1990-12-03 | 1998-09-28 | Genentech Inc | Berigelsesfremgangsmåde for variantproteiner med ændrede bindingsegenskaber |
| ATE363532T1 (de) | 1991-03-01 | 2007-06-15 | Dyax Corp | Verfahren zur herstellung bindender miniproteine |
| ES2315612T3 (es) | 1991-04-10 | 2009-04-01 | The Scripps Research Institute | Genotecas de receptores heterodimericos usando fagemidos. |
| DE4122599C2 (de) | 1991-07-08 | 1993-11-11 | Deutsches Krebsforsch | Phagemid zum Screenen von Antikörpern |
| WO1993006213A1 (en) | 1991-09-23 | 1993-04-01 | Medical Research Council | Production of chimeric antibodies - a combinatorial approach |
| EP0617706B1 (en) | 1991-11-25 | 2001-10-17 | Enzon, Inc. | Multivalent antigen-binding proteins |
| JPH07503132A (ja) | 1991-12-17 | 1995-04-06 | ジェンファーム インターナショナル，インコーポレイティド | 異種抗体を産生することができるトランスジェニック非ヒト動物 |
| AU4116793A (en) | 1992-04-24 | 1993-11-29 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Recombinant production of immunoglobulin-like domains in prokaryotic cells |
| WO1994013804A1 (en) | 1992-12-04 | 1994-06-23 | Medical Research Council | Multivalent and multispecific binding proteins, their manufacture and use |
| JPH08509612A (ja) | 1993-04-26 | 1996-10-15 | ジェンファーム インターナショナル インコーポレイテッド | 異種抗体を産生することができるトランスジェニック非ヒト動物 |
| US5731168A (en) | 1995-03-01 | 1998-03-24 | Genentech, Inc. | Method for making heteromultimeric polypeptides |
| FR2734739B1 (fr) | 1995-06-01 | 1997-07-11 | Gec Alsthom Stein Ind | Dispositif de surveillance d'un broyeur a boulets |
| TW311927B (ar) | 1995-07-11 | 1997-08-01 | Minnesota Mining & Mfg | |
| EP0795743A3 (en) | 1996-03-15 | 1998-02-25 | Japan Tobacco Inc. | Method and apparatus for infra-red moisture measurement |
| US5839430A (en) | 1996-04-26 | 1998-11-24 | Cama; Joseph | Combination inhaler and peak flow rate meter |
| WO1998023289A1 (en) | 1996-11-27 | 1998-06-04 | The General Hospital Corporation | MODULATION OF IgG BINDING TO FcRn |
| US6277375B1 (en) * | 1997-03-03 | 2001-08-21 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Immunoglobulin-like domains with increased half-lives |
| IL132560A0 (en) | 1997-05-02 | 2001-03-19 | Genentech Inc | A method for making multispecific antibodies having heteromultimeric and common components |
| US6358058B1 (en) | 1998-01-30 | 2002-03-19 | 1263152 Ontario Inc. | Aerosol dispensing inhaler training device |
| WO2000034784A1 (en) | 1998-12-10 | 2000-06-15 | Phylos, Inc. | Protein scaffolds for antibody mimics and other binding proteins |
| EP3214175A1 (en) | 1999-08-24 | 2017-09-06 | E. R. Squibb & Sons, L.L.C. | Human ctla-4 antibodies and their uses |
| PT1354034E (pt) | 2000-11-30 | 2008-02-28 | Medarex Inc | Roedores transgénicos transcromossómicos para produção de anticorpos humanos |
| ATE472609T1 (de) | 2001-04-26 | 2010-07-15 | Amgen Mountain View Inc | Kombinatorische bibliotheken von monomerdomänen |
| US20030157561A1 (en) | 2001-11-19 | 2003-08-21 | Kolkman Joost A. | Combinatorial libraries of monomer domains |
| CA2466034C (en) | 2001-11-08 | 2012-12-18 | Protein Design Labs, Inc. | Stable aqueous pharmaceutical formulations of daclizumab antibodies |
| CA2484632C (en) | 2002-05-07 | 2012-12-11 | Control Delivery Systems, Inc. | Processes for forming a drug delivery device |
| EP1572103A4 (en) * | 2002-11-15 | 2008-02-13 | Centocor Inc | ANTI-ANGIOGENIC USES OF IL-6 ANTAGONISTS |
| WO2005062955A2 (en) | 2003-12-23 | 2005-07-14 | Rinat Neuroscience Corp. | Agonist anti-trkc antibodies and methods using same |
| EP1776384B1 (en) | 2004-08-04 | 2013-06-05 | Mentrik Biotech, LLC | Variant fc regions |
| MX2007002856A (es) | 2004-09-02 | 2007-09-25 | Genentech Inc | Metodos para el uso de ligandos receptores de muerte y anticuerpos c20. |
| US8802820B2 (en) | 2004-11-12 | 2014-08-12 | Xencor, Inc. | Fc variants with altered binding to FcRn |
| ES2382164T3 (es) | 2005-12-30 | 2012-06-05 | Merck Patent Gmbh | Anticuerpos anti-IL-6 que impiden la unión de la IL-6 en complejo con el IL-6R( ) a la GP130 |
| JP2009529339A (ja) | 2006-03-13 | 2009-08-20 | アブリンクス エン．ヴェー． | Ｉｌ−６を標的とするアミノ酸配列およびそれを含みｉｌ−６介在シグナル伝達に関連する疾患および疾病を治療するポリペプチド |
| NZ572807A (en) | 2006-05-19 | 2011-10-28 | Alder Biopharmaceuticals Inc | Culture method for obtaining a clonal population of antigen-specific b cells |
| MX2009012492A (es) * | 2007-05-21 | 2010-01-20 | Alder Biopharmaceuticals Inc | Anticuerpos para il-6 y sus usos. |
| CA2699435A1 (en) | 2007-09-14 | 2009-03-19 | Sanofi Pasteur Biologics Co. | Pharmaceutical compositions containing clostridium difficile toxoids a and b |
| WO2009070243A2 (en) | 2007-11-21 | 2009-06-04 | Amgen Inc. | Wise binding agents and epitopes |
| US20100187601A1 (en) | 2007-12-12 | 2010-07-29 | Fujio Masuoka | Semiconductor device |
| CN101969929B (zh) | 2008-01-15 | 2014-07-30 | Abbvie德国有限责任两合公司 | 粉末状蛋白质组合物及其制备方法 |
| WO2010015608A1 (en) | 2008-08-05 | 2010-02-11 | Novartis Ag | Compositions and methods for antibodies targeting complement protein c5 |
| JP5033921B2 (ja) | 2008-09-12 | 2012-09-26 | 株式会社ケーディエフ | 噴水装置 |
| WO2010039750A2 (en) | 2008-10-01 | 2010-04-08 | Monsanto Technology Llc | Transgenic plants with enhanced agronomic traits |
| US8992920B2 (en) | 2008-11-25 | 2015-03-31 | Alderbio Holdings Llc | Anti-IL-6 antibodies for the treatment of arthritis |
| CA2744055A1 (en) | 2008-11-26 | 2010-06-03 | Glaxo Group Limited | Polypeptides, antibody variable domains & antagonists |
| BRPI1007005A2 (pt) | 2009-01-29 | 2016-03-22 | Medimmune Llc | anticorpo isolado , ácido nucleico isolado n vetor, célula isolada , linhagem de célula isolada , composição farmacêutica, e, uso de um anticorpo anti-il-6 |
| JO3417B1 (ar) | 2010-01-08 | 2019-10-20 | Regeneron Pharma | الصيغ المستقرة التي تحتوي على الأجسام المضادة لمضاد مستقبل( interleukin-6 (il-6r |
| WO2012007896A1 (en) | 2010-07-12 | 2012-01-19 | Covx Technologies Ireland, Ltd. | Multifunctional antibody conjugates |
| PE20150361A1 (es) | 2012-07-13 | 2015-03-14 | Roche Glycart Ag | Anticuerpos biespecificos anti-vegf/anti-ang-2 y su utilizacion en el tratamiento de enfermedades vasculares oculares |
| WO2014066468A1 (en) | 2012-10-25 | 2014-05-01 | Medimmune, Llc | Stable, low viscosity antibody formulation |
| SG11201502876RA (en) | 2012-11-08 | 2015-06-29 | Eleven Biotherapeutics Inc | Il-6 antagonists and uses thereof |
| EP3019243A4 (en) | 2013-07-12 | 2017-03-15 | Ophthotech Corporation | Methods for treating or preventing ophthalmological conditions |
| WO2016073894A1 (en) | 2014-11-07 | 2016-05-12 | Eleven Biotherapeutics, Inc. | Therapeutic agents with increased ocular retention |
-
2015
- 2015-11-06 JP JP2017543332A patent/JP6594438B2/ja active Active
- 2015-11-06 BR BR112017008672-7A patent/BR112017008672A2/pt active Search and Examination
- 2015-11-06 EA EA201791005A patent/EA035199B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2015-11-06 PT PT157975384T patent/PT3215530T/pt unknown
- 2015-11-06 MY MYPI2017000609A patent/MY185114A/en unknown
- 2015-11-06 IL IL251858A patent/IL251858B/en unknown
- 2015-11-06 DK DK15797538T patent/DK3215530T3/da active
- 2015-11-06 SG SG11201703574VA patent/SG11201703574VA/en unknown
- 2015-11-06 SI SI201530995T patent/SI3215530T1/sl unknown
- 2015-11-06 EP EP19189890.7A patent/EP3632931A1/en active Pending
- 2015-11-06 EP EP23189385.0A patent/EP4268843A3/en active Pending
- 2015-11-06 US US15/524,727 patent/US11142571B2/en active Active
- 2015-11-06 KR KR1020177014412A patent/KR102636726B1/ko active IP Right Grant
- 2015-11-06 KR KR1020247004699A patent/KR20240023450A/ko not_active Application Discontinuation
- 2015-11-06 SG SG10202103420PA patent/SG10202103420PA/en unknown
- 2015-11-06 EP EP15797538.4A patent/EP3215530B9/en active Active
- 2015-11-06 ES ES15797538T patent/ES2756275T3/es active Active
- 2015-11-06 CA CA2965689A patent/CA2965689C/en active Active
- 2015-11-06 MX MX2017005992A patent/MX2017005992A/es unknown
- 2015-11-06 MA MA051554A patent/MA51554A/fr unknown
- 2015-11-06 RS RS20191447A patent/RS59805B1/sr unknown
- 2015-11-06 AU AU2015342882A patent/AU2015342882B2/en active Active
- 2015-11-06 UA UAA201705592A patent/UA122673C2/uk unknown
- 2015-11-06 PE PE2017000804A patent/PE20171107A1/es unknown
- 2015-11-06 CR CR20170231A patent/CR20170231A/es unknown
- 2015-11-06 PL PL15797538T patent/PL3215530T3/pl unknown
- 2015-11-06 HU HUE15797538A patent/HUE046181T2/hu unknown
- 2015-11-06 CN CN201580065652.6A patent/CN107249631B/zh active Active
- 2015-11-06 WO PCT/US2015/059532 patent/WO2016073890A1/en active Application Filing
-
2017
- 2017-04-28 ZA ZA201702985A patent/ZA201702985B/en unknown
- 2017-05-02 PH PH12017500809A patent/PH12017500809A1/en unknown
- 2017-05-03 SA SA517381458A patent/SA517381458B1/ar unknown
- 2017-05-05 CL CL2017001135A patent/CL2017001135A1/es unknown
- 2017-05-08 MX MX2021008663A patent/MX2021008663A/es unknown
- 2017-05-30 CO CONC2017/0005404A patent/CO2017005404A2/es unknown
-
2018
- 2018-03-10 HK HK18103370.4A patent/HK1244008A1/zh unknown
-
2019
- 2019-10-25 HR HRP20191945TT patent/HRP20191945T1/hr unknown
-
2021
- 2021-09-13 US US17/473,696 patent/US20220169719A1/en not_active Abandoned
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| SA517381458B1 (ar) | أجسام مضادة محسنة ضد إنترلوكين-6 (il-6) | |
| US11459386B2 (en) | IL-6 antagonists and uses thereof | |
| US11529415B2 (en) | Antibodies specific for IL-21 and uses thereof | |
| WO2016073894A1 (en) | Therapeutic agents with increased ocular retention |