SA516380194B1 - ارتباط جسم مضاد بـ FcRn لعلاج أمراض مناعة ذاتية - Google Patents

ارتباط جسم مضاد بـ FcRn لعلاج أمراض مناعة ذاتية Download PDF

Info

Publication number
SA516380194B1
SA516380194B1 SA516380194A SA516380194A SA516380194B1 SA 516380194 B1 SA516380194 B1 SA 516380194B1 SA 516380194 A SA516380194 A SA 516380194A SA 516380194 A SA516380194 A SA 516380194A SA 516380194 B1 SA516380194 B1 SA 516380194B1
Authority
SA
Saudi Arabia
Prior art keywords
antibody
amino acid
acid sequence
antigen
antibodies
Prior art date
Application number
SA516380194A
Other languages
English (en)
Inventor
كيم سون إيون
هيونج يو تاي
كاب جونج جاي
شين دونجوك
كوك بارك سونغ
ووك كيم سونغ
سون كيم مين
كيونغ اهن هاي
يونغ هاي-يونغ
جونغ سونج يونغ
Original Assignee
هانال بيوفارما كو.,ليمتد.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by هانال بيوفارما كو.,ليمتد. filed Critical هانال بيوفارما كو.,ليمتد.
Publication of SA516380194B1 publication Critical patent/SA516380194B1/ar

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/283—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against Fc-receptors, e.g. CD16, CD32, CD64
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/04—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system for myasthenia gravis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/08—Antiepileptics; Anticonvulsants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/06—Antianaemics
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/564—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for pre-existing immune complex or autoimmune disease, i.e. systemic lupus erythematosus, rheumatoid arthritis, multiple sclerosis, rheumatoid factors or complement components C1-C9
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/566—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor using specific carrier or receptor proteins as ligand binding reagents where possible specific carrier or receptor proteins are classified with their target compounds
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6854—Immunoglobulins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/567—Framework region [FR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • G01N2333/70503—Immunoglobulin superfamily, e.g. VCAMs, PECAM, LFA-3
    • G01N2333/70535—Fc-receptors, e.g. CD16, CD32, CD64 (CD2314/705F)

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Rehabilitation Therapy (AREA)

Abstract

يتعلق الكشف الحالي بجسم مضاد antibody لمضاد FcRn معزول isolated ، والذي هو عبارة عن جسم مضاد مرتبط بـ FcRn (يرمز إلى مستقبل Fc حديث الولادة، يطلق عليه أيضًا FcRP، FcRB أو مستقبل Brambell) وهو مستقبل يتمتع بألفة عالية لـ IgG أو شظية fragment منه، طريقة لتحضيره، تركيبة لعلاج مرض مناعة ذاتية autoimmune disease تشتمل على الجسم المضاد، وطريقة لعلاج وتشخيص أمراض مناعة ذاتية باستخدام الجسم المضاد. الجسم المضاد المخصص لـ FcRn وفقًا للكشف الحالي يرتبط بـ FcRn بشكل لا تنافسي مع IgG لتخفيض مستويات الأجسام المضادة الذاتية المصلية المسببة للمرض، وبالتالي يمكن استخدامه في علاج أمراض مناعة ذاتية. شكل 1.

Description

ارتباط جسم مضاد ب ‎FERN‏ لعلاج أمراض مناعة ذاتية ‎Antibody Binding to Fcrn for Treating Autoimmune Diseases‏ الوصف الكامل
خلفية الاختراع
يتعلق الاختراع الحالي بجسم مضاد ‎antibody‏ لمضاد ‎FCRN‏ معزول ‎isolated anti‏ « والذي
هو عبارة عن جسم مضاد مرتبط ب0840 (يرمز إلى مستقبل ‎Fe‏ حديث الولادة؛ يطلق عليه أيضًا
م4 ‎FCRB‏ أو مستقبل ‎(Brambell‏ وهو مستقبل يتمتع ‎dally‏ عالية لشظية ارتباط بمولد ضد ‎antigen-binding fragment 5‏ منه ‎IgG)‏ )؛ طريقة لتحضيره؛ تركيبة لعلاج مرض مناعة ذاتية
‎autoimmune disease‏ تشتمل على الجسم المضاد؛ وطريقة لعلاج وتشخيص أمراض مناعة
‏ذاتية باستخدام الجسم المضاد. الجسم المضاد المخصص ‎By FERNY‏ للكشف الحالي يرتبط ب
‎FeRn‏ بشكل لا تنافسي مع 96ا لتخفيض مستويات الأجسام المضادة الذاتية المصلية المسببة
‏للمرض» وبالتالي يمكن استخدامه في علاج أمراض مناعة ذاتية.
‏0 الأجسام المضادة عبارة عن بروتينات مناعية التي ترتبط بمستضد معين. في معظم الحيوانات؛ بما فيها البشر والفئران» تتركب الأجسام المضادة من سلاسل زوجية ‎ALE‏ وخفيفة لعديد الببتيد 6 وكل سلسلة تتألف من منطقتين منفصلتين؛ يشار إليهما بالمناطق المتغيرة والثابتة. المناطق المتغيرة خفيفة وثقيلة السلسلة ‎light and heavy chain‏ تظهر تنوعًا متواليًا كبيرًا بين الأجسام المضادة؛ وتكون مسئولة عن ربط المستضد الهدف. المناطق الثابتة تظهر تنوعًا متواليًا
‏5 أقل؛ وتكون مسئولة عن ربط عدد من البروتينات الطبيعية لاستدعاء أحداث كيميائية بيولوجية ‎biochemical‏ هامة. في الظروف الطبيعية؛ يكون العمر النصفي لمعظم 196 باستثناء نظير196 3 في المصل حوالي 23-22 يومًا في البشرء وهي فترة طويلة بالنسبة إلى العمر النصفي لمصل بروتينات البلازما
‏8 الأخرى. بالنسبة إلى هذا العمر النصفي الطويل للمصل ل ‎IgG‏ فإن ‎IGG‏ الذي دخل
‏0 الخلايا بواسطة الالتقام الخلوي يمكن أن يرتبط بقوة بمستقبل ‎FO‏ حديث الولادة ‎FERN)‏ نوع من
‏مستقبل جاما ‎(Fe gamma‏ في الجسيمات الداخلية عند الرقم الهيدروجيني 011 6 لتفادي المسار
الليسوسومي المتدهور. عند دوران معقد 06-0140 إلى الغشاء البلازمي؛ ينفصل 1096 بسرعة عن 080 في مجرى الدم عند رقم هيدروجيني ام قاعدي قليلًا (-7.4). عن طريق آلية ‎sale]‏ ‏التدوير المتواسطة بالمستقبل هذه؛ فإن 0140 يقوم بشكل فعال بإنقاذ ‎1G‏ من التحلل في الليسوسومات ‎lysOSOMeES‏ ¢ ومن ثم يطيل من العمر النصفي لوا ( ‎Roopenian et al.‏ ‎¢3528:170J.
Immunol. 5‏ 2003). تم تحديد ‎FERN‏ في معدة فأر حديث الولادة؛ حيث يقوم بوظيفة التوسط في امتصاص الجسم المضاد 196 من لبن الأم وبنظم نقله إلى الجهاز الدوري. تم أيضًا ‎FERN Jie‏ من مشيمة بشرية ‎٠‏ حيث يتوسط في امتصاص ونقل 196 الأمومي إلى دورة الجنين . في البالغين؛ يتم التعبيير عن ‎FcRn‏ في العديد من الأنسجة؛ بما فيها الأنسجة الظهارية للرئة ‎epithelial tissues of the‏ ‎lung 0‏ ء الأمعاء ‎intestine‏ « الكلية ‎kidney‏ ؛ وكذلك الأسطح الشجرية ‎ad tree surfaces‏ ‎nasal‏ ؛ والمهبل ‎vaginal‏ ؛ والصفراء ‎biliary‏ ‎FERN‏ عبارة عن دايمر غير متجانس لا تساهمي الذي يستقر نمطيًا في الجسيمات الداخلية للخلايا البطانية والظهارية. 0140 عبارة عن مستقبل مرتبط بغشاء يتضمن ثلاثة نطاقات ألفا ثقيلة السلسلة ‎as 2 ala) heavy chain alpha domains‏ 3( ونطاق جلويين ميكروي ‎(M2f)2 B- microglobulin 15‏ مفرد خفيف السلسلة قابل للذويان ‎single soluble light‏ 07 . من الناحية البنيوية ‎Structurally‏ ينتمي إلى عائلة من جزيئات الفئة 1 لمعقد التوافق النسيجي الرئيسي التي تتضمن ]712 كسلسلة خفيفة مشتركة. سلسلة ‎FERN‏ وزنها الجزيئي حوالي 6 كيلو دالتوان وتتألف من نطاق خارجي يحتوي على النطاقات ثقيلة السلسلة 0010 2؛ و0 3؛ والنطاق خفيف السلسلة8] ‎M2‏ ويحتوي على سلسلة سكر أحادية ؛ غشاء عابر مفرد المرور؛ وذيل 0 مسيتوبلازمي قصير ‎Gus short cytoplasmic tail‏ . من أجل دراسة إسهامات ‎FERN‏ في استقرار 96ا؛ تم هندسة ‎Gall‏ بحيث تم طر جزءِ على الأقل من الجينات التي تشفر السلاسل الخفيفة 28 ‎FERN gm‏ بحيث لا يتم التعبير عن هذه البروتينات. في الفئران المذكورة؛ تم تخفيض العمر النصفي للمصل وتركيزات 196 بشكل كبير» مما يقترح آلية تعتمد على ‎FERN‏ لاستقرار 96ا. تم ‎Wad‏ اقتراح أن الأجسام المضادة لضد
‎FERN‏ البشري يمكن توليده في تلك الفئران التي تم طرد ‎FERN‏ منها وأن هذه الأجسام المضادة يمكن ‎of‏ تمنع ارتباط 6واب60- . إن تثبيط ارتباط ‎FORNIGG‏ يغير بشكل سلبي العمر النصفي لمصل 96ا من خلال منع ‎sale)‏ ‏تدوير ‎(IgG‏ بحيث يمكن علاج أمراض مناعة ذاتية التي تتسبب فيها الأجسام المضادة الذاتية. تم عرض هذه الإمكانية في نموذج فأر لأمراض فقاعية تحت الجلد ذاتية المناعة ( .ل .81 62 نا ‎Gy .)2005 <3440:115Clin.
Invest.‏ لذلك»؛ فإن العوامل التي تحجب أو تقاوم ارتباط 6 يمكن استخدامها في طريقة لعلاج أو منع أمراض ذاتية المناعية وأمراض التهاب؛ التي يسببها 0ا. 'أمراض مناعة ‎"ld‏ تغطي الأمراض التي تحدث عندما يهاجم الجهاز المناعي للجسم أنسجته 0 العادية؛ أو الأعضاء أو المكونات الأخرى في النسيج الحيوي جزاء تشوهات لم يعرف سببها في الجهاز المناعي. أمراض مناعة ذاتية هذه عبارة عن أمراض جهازية يمكنها أن تحدث في كافة أجزاء الجسم تقريبًا؛ بما فيها الجهاز العصبي؛ الجهاز المعدي المعوي؛ جهاز الغدد الصماء؛ الجلد؛ الجهاز الهيكلي؛ والنسيج الوعائي. من المعروف أن أمراض مناعة ذاتية تؤثر على حوالي 1968-5 من سكان العالم» ولكن الانتشار المبلغ ‎die‏ للأمراض المناعية أقل من المستوى الفعلي 5 بسبب قصور فهم الأمراض المناعية وطريقة تشخيص تلك الأمراض. تم دراسة أسباب الأمراض المناعية لمدة طويلة فيما يتعلق بالعوامل الوراثية والبيئية والمناعية؛ ولكن لم يتم التعرف عليها بعد بشكل واضح. كشفت العديد من الدراسات الحديثة أن عددًا من أمراض مناعة ذاتية يعود سببه إلى الأجسام المضادة ذاتية المناعة من نوع ‎IGG‏ في الواقع؛ تم التعرف بشكل كبير على العلاقة بين وجود أو غياب الأجسام المضادة ذاتية المناعة النوعية المسببة 0 للمرض وعلاج أمراض مناعة ذاتية من واقع الدراسات الخاصة بالمرض وعلاج أمراض مناعة ذاتية. وبناءً عليه؛ تم التعرف على وتجود الأجسام المضادة ذاتية المناعة النوعية المسببة للمرض والدور الباثولوجي لها في عدد كبير من أمراض مناعة ذاتية؛ وعند إزالة الأجسام المضادة ذاتية المناعة المعنية من ‎cal‏ تم الحصول سريعًا على تأثير لعلاج الأمراض.
أمراض مناعة ذاتية والأمراض المنيعة للمسضد الخيفي تتسبب فيها أجسام مضادة مسببة للمرض؛ وأمثلة نمطية على تلك الأمراض تشمل قلة العدلات المناعي ¢ متلازمة غيان ‎Guillain— alm‏ ‎Barré syndrome‏ « الصرع ‎epilepsy‏ ؛ التهاب الدماغ ذاتي المناعة ‎autoimmune‏ ‎encephalitis‏ « متلازمة إيزاك ‎Isaac’s syndrome‏ ¢ متلازمة الوحمة ‎nevus syndrome‏ ؛ الفقاع الشائع ‎pemphigus vulgaris‏ « الفقاع القرطاسي ‎dui « Pemphigus foliaceus‏ ‎Bullous pemphigoid (oad & ad)‏ « انحلال البشرة الفقاعي المكتسب ‎epidermolysis‏ ‏38 00/059 « شبيه الفقاع الحملي ‎pemphigoid gestationis‏ « شبيه الفقاع للغشاء المخاطي ‎Mucous membrane pemphigoid‏ ؛ متلازمة مضاد الشحميات الفسفورية ‎antiphospholipid syndrome‏ ؛ فقر الدم الناجم عن المناعة الذاتية ‎autoimmune‏ ‎anemia 0‏ داء غريفز الناجم عن المناعة الذاتية ‎autoimmune Grave's disease‏ « متلازمة جودباستور ‎Goodpasture's syndrome‏ ؛ الوهن العضلي الوبيل ‎myasthenia‏ ‏5 ؛ التصلب المتعدد ‎multiple sclerosis‏ ؛ التهاب المفصل الروماتويدي ‎rheumatoid‏ ‎arthritis‏ الذثبة ‎lupus‏ ؛ الفرفرية القليلة الصفيحات المجهولة السبب ‎idiopathic‏ ‎thrombocytopenic purpura‏ » التهاب الكلية الذثتبي ‎lupus nephritis‏ » او التهاب كبيبات 5 الكلى الغشائي ‎«(membranous nephropathy‏ أو ما شابه ذلك. على سبيل المثال؛ من المعروف أنه في حالة الوهن العضلي الوخيم ‎myasthenia gravis‏ ‎«(MG)‏ فإن مستقبل الأسيتيل كولين ‎(AChR) acetylcholine receptor‏ الموجود في الموصل العصبي العضلي للعضلات الإرادية يتم تدميره أو حجبه بواسطة الأجسام المضادة ذاتية المناعة 0 ضد المستقبل لإعاقة وظيفة العضلات الإرادية. من المعروف أيضًا أنه عند تخفيض الأجسام المضادة ذاتية المناعة؛ فإن العضلات تسترجع وظيفتها. بالنسبة لحالة ‎(TP‏ فإن ‎ITP‏ عبارة عن مرض يتسبب فيه تدمير الصفائح الدموية المحيطية بسبب توليد أجسام مضادة ذاتية المناعة التي ترتبط بجليكوبروتين غشاء صفيحة دموية نوعية. الأجسام المضادة المضادة للصفائح تطهو الصفائح وينجم عنها تدمير سريع للصفائح بواسطة ‎WIA‏ شبكية 5 البلعميات ‎Sie macrophages‏
بوجه عام؛ محاولات علاج ‎ITP‏ تتضمن كبت الجهاز المناعي؛ وبالتالي التسبب في زيادة مستوى الصفائح الدموية. يؤثر 110 في النساء أكثر من الرجال وهو أكثر شيوعًا في الأطفال عنه في البالغين. معدل الحدوث هو 1 من كل 10.000 شخص. ‎ITP‏ المزمن هو أحد اضطرابات الدم الرئيسية في كل من البالغين والأطفال» ويشكل مصدرًا لتكلفة كبيرة للاستشفاء والعلاج في أقسام الدم المتخصصة في الولايات المتحدة وحول العالم. هناك 20.000 حالة جديدة تقريبًا كل عام في
الولايات المتحدة؛ كما أن تكلفة رعاة ‎ITP‏ والعلاج الخاص باهظة للغاية. معظم الأطفال المصابين ب ‎ITP‏ لديهم عدد منخفض للغاية من الصفائح الدموية التي تسبب النزف المفاجئ» مع أعراض نمطية تشمل السحجات؛ بقع ‎shes‏ صغيرة على الجلد؛ نزف الأنف ونزف اللثة. على الرغم من أن الأطفال يمكنها أحيانها الشفاء دون علاج إلا أن العديد من الأطباء
0 ينصحون بالملاحظة الدقيقة وتخفيف النزف وعلاجه بنقيع جلويين جاما داخل الوريد. من المعروف أن أهم مسببات مرض التهاب الكلية الذثبي-نوع من أنواع أمراض مناعة ذاتية-هو تراكم معقد مناعي؛ الذي قد يحدث نتيجة للإنتاج المفرط غير المناسب للأجسام المضادة الذاتية ‎Jie‏ الأجسام المضادة ضد النواة؛ في الأعضاء الجهازية للتسبب في استجابات التهابية. حوالي 9670-0 من مرضى 483 لديهم مشاكل في الكلى؛ وحوالي %30 من المرضى يصابون
5 بالتهاب الكلية الذئبي؛ والمعروف ‎die‏ أنه عامل إنذار سيء في مرضى الذئبة. على الرغم من محاولة القيام بطرق لعلاج التهاب الكلية الذثبي باستخدام عوامل كابتة للمناعة؛ ‎OB‏ ‏التقارير سجلت بأنه لم يتم تحريض هدوءٍ المرض في حوالي 9622 من مرضى التهاب الكلية الذتبي حتى مع استخدام العوامل الكابتة للمناعة. كما ذكرت التقارير ‎ash Lal‏ حتى مع تحريض هدوء المرض»؛ فإن 9665-10 من المرضى قد انتكسوا وعاد إليهم مرض التهاب الكلية الذئبي عند
0 تقليل استخدام العوامل الكابتة للمناعة. في النهاية توفي 9610-5 من المرضى المصابين بالتهاب الكلية الذئبي الخطير ‎WHO) serious Lupus nephritis‏ فئة ااا و/اا ) بعد 10 سنوات؛ 5- 5 من المرضى وصلوا إلى المرض الكلوي في مراحله النهائية. وبناءة على ذلك؛ لم يسجل بعد علاج مناسب لالتهاب الكلية الذئبي.
وعلى هذا الأساس؛ فإن استخدام أجسام مضادة تتمتع بآلية جديدة تعالج أمراض مناعة ذاتية من خلال التخلص من الأجسام المضادة الذاتية المسببة للمرض يتوقع أن يكون له تأثيرات علاجية ضد أمراض مناعة ذاتية التي يتسبب فيها 96ا ‎Jie‏ الفقاع الشائع؛ التهاب النخاع والعصب البصري والوهن العضلي الوخيم؛ وكذلك الأمراض الكبيبية التي يتسبب فيها معقد مناعي مثل التهاب الكلية الذئبي أو التهاب الكلية الغشائي.
استخدمت طرق علاج أمراض مناعة ذاتية من خلال إعطاء ‎Jala IgG‏ الوريد ‎intravenous‏ ‏بكميات كبيرة على نطاق واسع ( ‎Autoimmunity‏ 553:42/00500؛ 2009). تم شرح تأثيرات من خلال آليات متنوعة؛ ولكن شرحت أيضًا من خلال آلية زيادة التخلص من الأجسام المضادة المسببة للمرض من خلال التنافص مع 96ا داخلي المنشاً ل 5050. أظهر إعطاء الجلوبين
0 المناعي البشري داخل الوريد ‎(IVIG) Intravenous administration of human‏ ‎immunoglobulin‏ بكميات كبيرة زيادة في أعداد الصفائح الدموية في الأطفال المصابين ب ‎ITP‏ ‏مناعي؛ وتبين أن ‎VIG‏ مفيد كعلاج للعديد من الحالات ذاتية المناعة الأخرى. قامت العديد من الدراسات بالتحري عن الآليات التي من خلالها يحقق ‎IVIG‏ تأثيراته في علاج أمراض مناعة ذاتية. بالنسبة إلى ‎١10‏ فإن التحريات المبكرة قادت إلى نتيجة مفادها أن تأثيرات
‎VIG 5‏ تعود بالدرجة الأولى إلى حجب مستقبلات ‎FC‏ المسئولة عن بلعمة الصفائح الدمية المطهوة بالجسم المضاد. بينت الدراسات اللاحقة أن مستحضرات ‎IVIG‏ المستنفذة من © وفرت زيادة في أعداد الصفائح الدموية في بعض مرضى ‎ITP‏ ؛ وأفادت التقارير مؤخرًا أنه تأثيرات ‎VIG‏ تعود إلى تنشيط التعبير ‎FOYRIlb‏ على الخلايا البلعمية؛ مما يؤدي إلى تثبيط بلعمة الصفائح ‎platelet‏ ‎.phagocytosis‏
‏20 ومع ذلك»؛ فإن علاجات ‎IVIG‏ لها تأثيرات جانبية كبيرة كما أنها باهظة التكلفة عند إعطاءها. علاوة على أن أنواع العلاج الأخرى المستخدمة في علاج حالات المناعة الذاتية/المنيعة للمستضد الخيفي بخلاف ‎IVIG‏ تشمل الجلوبين المناعي لمستضد 0 متعدد النسيلة؛ كورتيكوستيرويدات 05 ؛ كوابت المناعة (شاملة العلاجات الكيميائية)؛ السيتوكينات ‎cytokines‏ « فصادة البلازما ‎plasmapheresis‏ ¢ امتزاز الجسم المضاد خارج الجسم عن طريق استخدام
‎sac) 5‏ بروسوريا ‎Sie Prosorba columns‏ التدخلات الجراحية ‎Jie‏ استئصال الطحال؛
وأخرى. ومع ذلك» على نحو مشابه ل ‎(VIG‏ تتعقد هذه العلاجات أيضًا بواسطة عدم الفعالية الكافية والتكلفة العالية. ‎Wal‏ يتطلب إنتاج زيادات كبيرة في التخلص من الجسم المضاد المسبب للمرض جرعات عالية للغاية من ‎١/16‏ بسبب الآلية المفترضة لتثبيط ‎IVIG‏ لارتباط ‎FERN‏ مع الجسم المضاد المسبب للمرض (تثبيط تنافسي ‎(Mie‏ وسبب حقيقة أن ‎I9G‏ يظهر ألفة منخفضة ل ‎FCRN‏ عند رقم هيدروجيني فيزيولوجي (أي رقم هيدروجيني 7.4-7.2)؛ وتكون الجرعة السريرية النموذجية ل ‎VIG‏ حوالي 2 جرام/كيلوجرام. استخدام مثبط يقوم بشكل تنافسي بتثبيط ارتباط واب ‎FERN‏ لعلاج أمراض مناعة ذاتية هي ‎dish‏ علاجية واعدة؛ ورغم ذلك؛ فبسبب الألفة العالية ل96ا داخلي المنشاً ل ‎FERN‏ وبسبب 0 التركيزات العالية ل96ا ‎Lindl ala‏ في الدم؛ يحتمل أن يتطلب التثبيط التنافسي ل ‎FERN‏ ‏جرعات مرتفعة للغاية؛ ومن ثم يكون له أوجه التقييد مشابهة لتلك الخاصة بالعلاج الحالي ل ‎VIG‏ ‏وبناءً على ذلك؛ على الرغم من الكشف عن جسم مضاد لضد ‎FERN‏ في البراءات 118772/2006« 087289/2007« 131702/2009« 167039/2012( فهناك حاجة ‎ule 15‏ لتطوير جسم مضاد بشري محسن له ألفة عالية ‎FERN‏ ؛ ومن ثم يمكنه إزالة الجسم المضاد المسبب للمرض حتى بجرعات منخفضة وتقليل التوليد المناعي . الوصف العام للاختراع يهدف الاختراع لحل المشكلات المشار إليها أعلاه ولتقديم دواء لعلاج مرض مناعة ذاتية بشكل فعال وجذري يشمل ‎١16‏ وأخيرًا لتقديم جسم مضاد له ألفة عالية ‎FORNI‏ أو شظية منه وطريقة 0 لتحضير ما سبق.ارتباط الجسم المضاد ب 0540 أو شظية منه؛ يرتبط تحديدًا بسلسلة ال ‎FCRN‏ ‏بطريقة مستقلة عن الرقم الهيدروجيني ‎og‏ اخل يبشكل لا تنافسي مع ربط ‎Fc‏ للجسم المضاد 2 -العلاج مرض مناعة ذاتية من خلال تقليل الجسم المضاد ذاتي المنشأً في النسيج الحيوي الذي قد يكون هو المسبب للمرض مناعة ذاتية.
‎Gag‏ الكشف الحالي إلى تقديم تركيبة صيدلانية لعلاج أمراض مناعة ذاتية؛ تشتمل على ارتباط الجسم المضاد ‎FORM‏ ؛ ‎Cua‏ يكون المرض مناعة ذاتية عبارة عن قلة العدلات المناعي ؛ متلازمة غيان-باريه ‎Guillain-Barré syndrome‏ ؛ الصرع ‎epilepsy‏ ؛ التهاب الدماغ ذاتي المناعة ‎autoimmune encephalitis‏ « متلازمة إيزاك ‎syndrome‏ 1538675 ¢ متلازمة الوحمة ‎nevus syndrome‏ ؛ الفقاع الشائع ‎pemphigus vulgaris‏ « الفقاع القرطاسي
‎Bullous pemphigoid (oad & al) dui « Pemphigus foliaceus‏ « انحلال البشرة الفقاعي المكتسب ‎epidermolysis bullosa acquisita‏ « شبيه الفقاع الحملي ‎pemphigoid‏ ‏5 + شبيه الفقاع للغشاء المخاطي ‎mucous membrane pemphigoid‏ « متلازمة مضاد الشحميات الفسفورية ‎antiphospholipid syndrome‏ ؛ فقر الدم الناجم عن المناعة
‏0 الذذاتية ‎autoimmune anemia‏ ؛ داء غريفز الناجم عن المناعة الذاتية ‎autoimmune‏ ‎Grave's disease‏ ؛ متلازمة جودباستور 57/007016 ‎Goodpasture's‏ ؛ الوهن العضلي ‎myasthenia gravis Jus)‏ ؛ التصلب المتعدد ‎multiple sclerosis‏ ؛ التهاب المفصل الروماتويدي ‎lupus 4531 « rheumatoid arthritis‏ ¢ الفرفرية القليلة الصفيحات المجهولة السبب ‎idiopathic thrombocytopenic purpura‏ ¢ التهاب الكلية الذثبي ‎lupus nephritis‏
‏5 ؛ او التهاب كبيبات ‎AS‏ الغشائي ‎«(membranous nephropathy‏ أو ما شابه ذلك. لتحقيق الأهداف المذكورة أعلاه؛ يوفر الكشف الحالي جسم مضاد ضد 7010 معزول يشتمل على: ‎CDR]‏ يشتمل على متوالية حمض أميني ‎amino acid‏ واحدة أو أكثر مختارة من المجموعة المكونة من المتواليات بأرقام الهوية: 21 24 27؛ 30 33« 36 39 و 42؛
‎CDR2 0‏ يشتمل على متوالية حمض أميني واحدة أو أكثر مختارة من المجموعة المكونة من المتواليات بأرقام الهوية: 22 25« 28« 31 34 37 40 و 43؛و 53 يشتمل على متوالية حمض أميني واحدة أو أكثر مختارة من المجموعة المكونة من المتواليات بأرقام الهوية: 3 ؛ 32:29 35 38 41 و 44 أو شظية منه. أيضًاء يوفر الكشف الحالي جسم مضاد ضد ‎FERN‏ معزول أو شظية منه يشتمل على:
— 0 1 — ‎CDR]‏ يشتمل على متوالية حمض أميني واحدة التي يكون لها تجانس بنسبة 9690 على الأقل مع متوالية حمض أميني واحدة أو أكثر مختارة من المجموعة المكونة من المتواليات بأرقام الهوية: 1 27 30 33 36 39 و42؛ ‎Jaa CDR2‏ على متوالية حمض أميني واحدة التي يكون لها تجانس بنسبة 9690 على الأقل مع متوالية حمض أميني واحدة أو أكثر مختارة من المجموعة المكونة من المتواليات بأرقام الهوية: 22 25 28 31 34 37 40 و43؛ و 53يشتمل على متوالية حمض أميني واحدة التي يكون لها تجانس بنسبة 9690 على الأقل مع متوالية حمض أميني واحدة أو أكثر مختارة من المجموعة المكونة من المتواليات بأرقام الهوية: 23 26 29 32 35 38 41 و44. 0 أيضًاء يوفر الكشف الحالى جسم مضاد ضد 050 معزول يشتمل على واحدة أو أكثر من مناطق متغيرة ثقيلة السلسلة ومناطق متغيرة خفيفة السلسة تشتمل على متوالية حمض أمينى واحدة أو أكثر مختارة من المجموعة المكونة من متواليات الحمض الأميني من المتواليات بأرقام الهوية: 2 » 6 8 10 12 14 16< 18 و20. ‎(Lia‏ يوفر الكشف ‎Jal‏ جسم مضاد ضد ‎FERN‏ معزول يشتمل على واحدة أو أكثر من 5 مناطق متغيرة ثقيلة السلسلة ومناطق متغيرة خفيفة السلسة تشتمل على متوالية حمض أمينى؛ التى يكون لها تطابق بنسبة 9690 على الأقل مع واحدة أو أكثر من متواليات أحماض أمينية مختارة من المجموعة المكونة من متواليات الحمض الأميني من المتواليات بأرقام الهوية: 2 4؛ 6؛ 8؛ 10< 12 14 16<¢ 20518 أيضًاء يوفر الكشف الحالي متعدد نكليوتيد يشفر الجسم المضاد لضد ‎FORN‏ أو شظية منه يشتمل 0 على: ‎(Lad‏ يوفر الكشف الحالي متعدد نكليوتيد يشفر جسم مضاد لضد ‎FERN‏ يشتمل على متوالية واحدة أو أكثر مختارة من المجموعة المكونة من المتواليات بأرقام الهوية: 1 3 5 7 9 11؛ 3 ) 19517
— 1 1 —
أيضًاء يوفر الكشف الحالى متعدد نكليوتيد يشفر جسم مضاد لضد 0540 يشتمل على متوالية
التي يكون لها تطابق بنسبة 9690 على الأقل مع متوالية واحدة أو أكثر مختارة من المجموعة
المكونة من المتواليات بأرقام الهوية: 1 3 7 9 ¢11 ¢13 15ء 17و19.
أيضًاء يوفر الكشف الحالي ناقل تعبير ناتج الاتحاد الجيني يشتمل على متعدد النكليوتيد؛ الخلية
العائلة؛ التي يتم قطعها بالعرض بواسطة ناقل التعبير عن ناتج الاتحاد الجيني. بالإضافة إلى ذلك
يوفر الكشف الحالى طريقة لتحضير جسم مضاد يرتبط تحديدًا ب ‎FCcRn‏ أو شظية منه يشتمل
على: زراعة الخلية العائلة وإنتاج الجسم المضاد منهاء وعزل وتنقية الجسم المضاد الذي تم إنتاجه
لاستعادة الجسم المضاد لمضاد ‎FCRN‏
‎jig Wal‏ الكشف ‎Jal)‏ تركيبة صيدلانية تشتمل على الجسم المضاد لمضاد ‎FERN‏ أو شظية ‎cate 0‏ وناقل مقبول صيدلانيًا واحد أو أكثر.
‏كما ‎jig‏ الكشف الحالي طريقة لعلاج مريض يعاني من مرض مناعة ذاتية؛ تشتمل على إعطاء
‏التركيبة للمريض المذكور.
‏كذلك يوفر الكشف الحالى تركيبة تشتمل على الجسم المضاد الموسوم بوسم كشف.
‏كما يوفر الكشف الحالي طريقق لكشف ‎FERN‏ في النسيج ‎all‏ أو في المختبر باستخدام الجسم 5 المضاد لمضاد ‎FERN‏ أو شظية منه.
‏التأثيرات المميزة : الجسم المضاد الابتكاري أو شظية منه المخصص ‎FERN‏ الذي يكون عبارة
‏عن مستقبل له ألفة عالية ل96ا يتضمن الفة وانتقائية عاليتين؛ مما يسبب القليل من المشكلات
‏المتعلقة بتوليد المناعة أو لا يسببها ‎(Giles‏ ويريبط ‎FORN‏ بشكل لا تنافسي مع 06 أو ما شابه
‏ذلك لتقليل مستويات الجسم المضاد الذاتي المصلى. بموجب الخصائص المذكورة؛ يكون الجسم 0 المضاد أو شظية منه مفيدًا في علاج وتشخيص أمراض مناعة ذاتية.
‏شرح مختصر للرسومات
‏الشكل 1 يبين نتائج تحليل التعبير الوراثي للأجسام المضادة في خلايا 6110-5 وتحليل بروتينات
‏الأجسام المضادة 111618 ‎(HL161D 3 HL161C‏ التي تم الحصول عليها من خلال تنقية
— 1 2 —
بروتين ‎(A‏ على هلام ‎SDS-PAGE‏ تعت ظرف مختزل أو غير مختزل. تبين ‎call‏ تحت ظرف غير مختزل»؛ كل الأجسام المضادة 161111 تتضمن تركيبًا من نوع 196 بشري له حجم حوالي 0 كيلو دالتون» وتحت ظرف مختزل» يكون حجم السلسلة الثقيلة حوالي 5 كيلو دالتونء ويكون حجم السلسلة الخفيفة حوالي 25 كيلو دالتون؛ مما يفيد بأن الجسم المضاد تكون من
وحدات فرعية نمطية لجسم مضاد. في الشكل 1؛ المسار 1 يمثل علامة وزن جزيئي؛ المسار 2 ‎Jia‏ جسم مضاد غير مختزل 2 ميكروجرام (معالج بالا ‎NE‏ *( 3 والمسار 3 يمثل جسم مضاد مختزل 2 ميكروجرام. الشكل 2 يمثل نتائج تحليل تم إجراؤه باستخدام نظام ‎SPR‏ لتحديد التفكك الحركي ‎kinetic‏ ‎(KD) dissociation‏ لأربعة أنواع من الأجسام المضادة لمضاد ‎(HL161A ( FERN‏
‎HLI61C 111618 0‏ و1116100) التي ترتبط ب ‎FERN‏ تم الحصول على النتائج الموجودة في الشكل 2 عن طريق تحليل التفاعل بين ‎FERN‏ البشري والجسم المضاد /11161؛ ‎HL161D 4 HL161C 18‏ عند رقم هيدروجيني 6 ورقم هيدروجيني 7.4 باستخدام ‎Proteon GLC 434,‏ ونظام ‎:(Bio—Rad) 36Proteon XPR‏ الشكل 12 يبين نتائج تحليل التفاعل بين ‎FERN‏ البشري والجسم المضاد 1411617 عند الرقم
‏15 الهيدروجيني 6. الشكل 2ب يبين نتائج تحليل التفاعل بين ‎FERN‏ البشري والجسم المضاد 14116178 عند الرقم الهيدروجيني 1.4 الشكل 2ج يبين نتائج تحليل التفاعل بين ‎FCRN‏ البشري والجسم المضاد 1]1618اعند الرقم الهيدروجيني 6.
‏0 الشكل 2د يبين نتائج تحليل التفاعل بين ‎FERN‏ البشري والجسم المضاد 1618ا1اعند الرقم الهيدروجيني 1.4 الشكل 2ه يبين نتائج تحليل التفاعل بين ‎FCRN‏ البشري والجسم المضاد ©161ا4اعند الرقم الهيدروجيني 6.
الشكل 2و يبين نتائج تحليل التفاعل بين ‎FERN‏ البشري والجسم المضاد ©111616اعند الرقم الهيدروجيني 7.4. الشكل 2ز يبين نتائج تحليل التفاعل بين ‎FERN‏ البشري والجسم المضاد (111611اعند الرقم الهيدروجيني 6.
الشكل 2ح يبين نتائج تحليل التفاعل بين ‎FERN‏ البشري والجسم المضاد 1116110 اعند الرقم الهيدروجيني 7.4. الشكل 3 يبين قدرة جسمين مضادين مختارين على الارتباط بسطح الخية؛ ويبين النتائج التي تم الحصول عليها من خلال معالجة خلايا ‎293HEK‏ التي تعبر بشكل مفرط عن ‎FERN‏ بالأجسام المضادة المختارة ‎FERN‏ المرتبطة ب ‎FCRN‏ بشري موجود على سطح الخلية وتحليل الأجسام
0 المضادة المرتبطة بسطح الخلية عند الرقم الهيدروجيني 6 والرقم الهيدروجيني 7.4. ارتباط كل جسم مضاد من الجسمين المضادين /11161او1411618 ب ‎FERN‏ البشري تم التعبير عنه كقيمةا/ا تم الحصول عليها من خلال إجراء فارز ‎WIA‏ منشطة بالتألق ‎fluorescent‏ ‎(FACS) activated cell sorter‏ باستخدام جسم مضاد لماعز مضاد بشري موسوم ب ‎(FACS)‏ بعد علاج الخلايا بكل جسم مضاد عند أرقام هيدروجينية مختلفة.
5 الشكل 4 يبين نتائج تحليل القدرة على حجب ارتباط 96ا بشري بخلايا تعبر ‎Wily‏ عن ‎FORN‏ ‏بشري عند الرقم الهيدروجيني 6؛ ‎(pang‏ نتائج ملاحظة ما إذا كان الجسمان المضادان المختاران المرتبطان ب040_ بشري عند سطح الخلية يمكنهما حجب ارتباط 196 بشري ب ‎FERN‏ بشري عند مستوى الخلية. تم الحصول على هيئة حول القدرة على حجب ارتباط 1096 بشري موسوم ب 48 ب ‎FERN‏ بشري من خلال تخفيف كل من الجسمين المضادين 111618 او
0 111618 اللذين تم تأكيد ارتباطهما بالخلايا ‎293HEK‏ التي تعبر بشكل مفرط عن ‎FERN‏ ‏بشري؛ تسلسليًا ‎dan)‏ أضعاف من 200 نانو مول. الشكل 15 والشكل 5ب يعرضان نتائج تحليل تأثيرات الأجسام المضادة ‎(HLI61BHLI61A‏ ‏التي تم اختيارها من 3219 لفأر طفري تعبر عن ‎FERN‏ بشري ‎m+/+2 hBhFcRN+/+)‏ ‎mBmFcRn-/-‏ 2-/-00)؛ على الأيض الهدمي ل7196 1. عند صفر ساعة؛ تم إعطاء 5
— 4 1 — مجم/كجم من ‎Cb gu h IgG‏ و495 مجم/كجم من ‎IgG‏ بشري داخل الغشاء البريتوني لإشباع فى النسيج الحيوي ‎٠‏ بالنسبة لإعطاء العقارء عند 24؛ 48؛ 72( و96 ساعة بعد إعطاء 6ا-بيوتين» تم حقن 1196 ‎HL161B « HL1I61A‏ أو85©_داخل الغشاء البربتونى بجرعات من 5؛ 10 و20 مجم/كجم مرة واحدة يوميًا.
5 تم إجراء جمع العينة عند 24( ¢ 48« 72( 96؛ 120 و 1686ساعة بعد إعطاء ‎-١06‏ بيوتين. عند 24 48 72 و96 ساعة تم جمع الدم قبل إعطاء العقار ¢ وتم تحليل كمية 10©6١-بيوتين‏ المتبقية بواسطة طريقة ‎ELISA‏ تم التعبير عن النتائج كنسبة الكمية المتبقية عند كل نقطة زمنية إلى 00 %1 للكمية المتبقية فى عينة الدم التى تم جمعها عند 24 ساعة. الاشكال 16 - 6ج : يبين نتائج تحليل التغير في مستوى الدم ل 196 في قرد تسبب فيها إعطاء
0 جسمين مضادين ( ‎(HLI6IBHLIGIA‏ لقرد الرباحي له تطابق متوالية بنسبة 90696 مع ‎FcRn‏ بشري . تم إعطاء كل جسم مضاد من الجسمين المضادين ‎HL 16 1 B HL 161A‏ داخل الوريد لقرود الرباحي بجرعات من 5 و20 مجم/كجم مرة واحدة يوميًّا؛ ونتيجة لذلك تبين أن ‎19G‏ ‏للقرد تناقص حتى وصل إلى 9670 بالمقارنة به عند صفر ساعة؛ ونقص بحوالي 9630 وصولًا إلى اليوم 29.
5 شكل 16 : يبين تأثيرات الأجسام المضادة ‎HL161BHLI61A‏ في تخفيض 96 ‎had‏ ‏عند تركيزات مختلفة للجسم المضاد. الشكل 6ب : يبين تأثيرات الأجسام المضادة ‎HL1I61BHLIGIA‏ في تخفيض ‎badd IgG‏ (التركيز: )5 مجم/كجم) في أفراد القرود. الشكل 6ج يبين تأثيرات الأجسام المضادة /161الاو11411618 في تخفيض ‎19G‏ المصلي
(التركيز : )20 مجم/كجم) في أفراد القرود . الشكلان 17 و7ب يعرضان نتائج تحليل هيئات الحرائك الدوائية ل 11116181116178 في تجربة أجربت باستخدام قرود الرباحي. تبين أن 111618 له إجمالى ‎Cmax AUC‏ نصف عمر ‎Je‏ مقارنة ب ‎HL161A‏ .
— 5 1 — الشكل 18 يبين نتائج تحليل التغيرات في مستويات الدم في ‎IGA IgM‏ وألبومين في القرود التي يتسبب فيها إعطاء الأجسام المضادة /11161لو111618] فى تجرية أجربت على قرود الرباحي. كان هناك تغييرات طفيفة في مستويات الدم في ‎IGA (gM‏ وألبومين في القرود؛ كانت هذه التغيرات ضمن النطاقات الطبيعية لقرود الرياحى؛ مما يفيد بأن هذه التغيرات نتجت عن فروق فردية وليس بسبب تأثير مواد الاختبار. وببين ‎Bd‏ في مستوى ‎IGM‏ المصلي في القرود. الشكل 8« يبين تغيرًاً في مستوى ‎IgA‏ المصلي في القرود . الشكل 8 ج يبين تغيرًا في مستوى الألبومين المصلي في القرود. الوصف التفصيلى: لتحقيق الأهداف المذكورة أعلاه؛ يقدم الاختراع الحالي جسمًا مضادًاء الذي يمكنه الارتباط تحديدًا ب ‎iL FeRn 0‏ عالية بطريقة مستقلة عن الرقم الهيدروجيني ومكون من متوالية مشتقة من البشرء ويذلك يسبب استجابة ‎Lelie‏ ضئيلة أو لا يتسبب في استجابة مناعية عند إعطاءه في النسيج الحيوي . الأجسام المضادة ‎Gy‏ للاختراع الحالي عبارة عن جزيئات رابطة لها انتقائية ل ‎FERN‏ الأجسام المضادة يمكن أن تشتمل على أجسام مضادة أحادية النسيلة (على سبيل المثال أجسام مضادة 5 كاملة الطول لها نطاق ‎Fo‏ لجلويين مناعي)؛ تركيبات أجسام مضادة ذات تخصصية متعددة الحواتم»؛ أجسام مضادة ثنائية ‎(die il)‏ أجسام ثنائية؛ وجزيئات مفردة السلسلة؛ وكذلك شظايا جسم مضاد ‎F(ab')2 (Fab Jie)‏ و ‎«(Fv‏ ولكنها لا تقتصر على ذلك. الأجسام المضادة ‎Gy‏ للاختراع ‎As)‏ يمكن أن تكون مثلًا عبارة عن أجسام مضادة أحادية النسيلة ضد ‎FERN‏ بشري. الأجسام المضادة أحادية النسيلة تشتمل على أجسام مضادة فأرية. أيضًا تشتمل الأجسام المضادة 0 أحادية النسيلة على أجسام مضادة "خيمرية" التي يكون فيها جزء من السلسلة الثقيلة و/أو الخفيفة متطابقًا أو متشابهًا مع المتواليات المناظرة في الأجسام المضادة المشتقة من أصناف معينة ‎Jie‏ ‏فأر أو تنتمي إلى فئة أو فئة فرعية لجسم مضاد معين» حيث يكون باقي السلسة متطابقًا أو متشابهًا مع المتواليات المناظرة في الأجسام المضادة المشتقة من فصيلة أخرى أو تنتمي إلى فئة أو فئة فرعية لجسم مضاد ‎HAT‏ مثل إنسان؛ وكذلك شظايا من تلك الأجسام المضادة؛ بحيث تظهر
— 6 1 — النشاط البيولوجي المطلوب. تستخدم "الأجسام المضادة المتوافقة مع البشر" كمجموعة بعدية من "الأجسام المضادة الخيمرية". يمكن توليد أجسام مضادة بشرية بدلًا مت جعل تلك الأجسام المضادة تتوافق مع البشر. "الأجسام المضادة البشرية" هي أجسام مضادة ينتجها البشر أو يكون لها متواليات حمض أميني مناظر للأجسام المضادة التي يتم إنتاجها باستخدام أي تقنية إنتاج جسم مضاد بشري. يمكن إنتاج الأجسام المضادة البشرية باستخدام تقنيات متنوعة معروفة في الفن؛ بما فيها مكتبات عاثيات البكتيريا العارضة للجينات. يمكن تحضير الأجسام المضادة البشرية من خلال إعطاء ‎Age‏ ضد إلى حيوان محور ‎Why‏ تم تعديله لإنتاج الأجسام المضادة المذكورة استجابة لتحدي مولد الضد؛ ولكن تم تعطيل المواضع ذاتية المنشاً ‎cal‏ مثل فئران ‎Xenomice‏ محصنة. الأجسام المضادة وفقًا 0 للكشف ‎Jal‏ يمكن أن تكون فى صورة أجسام مضادة بشرية ‎Sie‏ ‏الأجسام المضادة الأصلية رباعية السلسلة هي عبارة عن جليكويروتينات رباعية القسيمات متغايرة مكونة من سلسلتين خفيفتين ‎(L) light‏ متطابقتين وسلسلتين ثقيلتين ‎heavy‏ متطابقتين (1). تشتمل كل سلسلة خفيفة على نطاق متغير على أحد الأطراف ‎(VL) end‏ ونطاق ثابت على طرفها الآخر. تشتمل كل سلسلة ثقيلة على نطاق متغير ‎(VH) variable domain‏ عند الطرف 5 لى ‎(N-terminus‏ وتشتمل على ثلاثة نطاقات ثابتة ‎(CH) constant domains‏ لسلستي 6 و ‎y‏ وأربعة نطاقات ‎CH‏ للأنواع المناظرة لما و ع. عبارة " تغْدٍ ‎١‏ تشير إلى ‎das‏ أن أجزاء ينة من النطاقات المة 15 ‎I< 3 ARC‏ 6 فى المتوالية بين الأجسام المضادة. النطاق ‎١‏ يتوسط ارتباط مولد الضد ويحدد تخصصية جسم مضاد معين لمولد الضد الخاص به. ومع ذلك؛ فإن قابلية التغير تتركز في ثلاثة قطاعات يطلق عليها 0 المناطق مفرطة التغير ‎«HVRs hypervariable regions‏ أي ‎CDRs‏ فى كل من النطاقات المتغيرة للسلسلة الخفيفة والسلسلة الثقيلة. الأجزاء الأكثر حفظًا للنطاقات المتغيرة يطلق عيها مناطق إطار العمل ‎framework regions‏ ‎(FR)‏ النطاقات المتغيرة للسلسلة الخفيفة والثقيلة تشتمل من الطرف !ا إلى الطرف © على النطاقات 41 ‎CDR3 (FR3 (CDR2 (FR2 (CDR1‏ و ‎.FR4‏
في الكشف الحالي؛ تم الحصول على أجسام مضادة لها ألفة وتخصصية ل ‎FORN‏ بشري باستخدام حيوانات محورة ‎Ws‏ لها جلوبين مناعي بشري. يمكن إنتاج الحيوانات المعدلة وراثيًا بواسطة عدم تفعيل جينات الخط الوراثي وا الحيواني وزرع مواضع جينات خط إنتاشي وا بشري. يتميز استخدام الحيوانات المحورة ‎ash Wi‏ يتم تحسين جسم مضاد بشكل طبيعي من خلال الجهاز
المناعي للحيوان دون نضج الألفة بحيث يمكن تطوير عقار جسم مضاد يتميز بتوليد منخفض للمناعة وألفة عالية في غضون وقت قصير » ‎Immunol‏ ل ‎Menoret « Eur‏ واخرين ؛ براءة امريكية رقم 20100212035 و البراءة الامريكية رقم 20090098134 2932 : 40 « 2010 . في الكشف الحالي؛ تم استخدام ‎OmniRatTM‏ (01/1؛ الولايات المتحدة) الذي يتضمن تقنية
0 حائزة على براءة اختراع لجرذان محورة ‎Wily‏ لها جلويين مناعي بشري. يمكن ل /0070148411 أن يختار بكفاءة جسم مضاد له ألفة عالية ل 0540 ابشري؛ لأنه يتضمن سلسلة ‎ALE‏ مكونة من نطاقات 0112 و0113 التي هي من جينات جرذ؛ ومناطق ‎DV‏ ول ونطاق 0111 التي هي من جينات بشرء وسلسلة خفيفة كابا وسلسلة خفيفة لامدا من البشرء لاختيار أجسام مضادة بكفاءة التي لها ألفة عالية ل ‎FcR‏ بشري ‎«Eur J Immunol <Menoret et al)‏ 40:2932«
5 2010( للحصول على جسم مضاد أحادي النسيلة له ألفة عالية ل ‎(FORN‏ تم تحصين جرذ محور ‎hy‏ ‎(OmniRatTM)‏ من خلال حقنه ب ‎FCRN‏ بشري؛ ويعد ذلك تم استخلاص ‎WIA‏ ب من الخلايا ودمجها بخلايا ورم نخاع لتوليد ورم هجين؛ الذي تم بعده تنقية الجسم المضاد من الورم الهيجين 38 المولد.
0 الجسم المضاد وفقًا للكشف الحالي يقوم بدور مثبط لا تنافسي ل 96ا في الارتباط ب ‎FERN‏ ‏ارتباط الجسم المضاد للكشف الحالي ب ‎FERN‏ ينتج ‎ate‏ تثبيط الجسم المضاد المسبب للمرض ل ‎FERN‏ مما يعزز التخلص (أي إزالة) من الجسم المضاد المسبب للمرض من جسم الخاضع لتقليل العمر النصفي للجسم المضاد المسبب للمرض.
حسب استخدام ‎Ble‏ "جسم مضاد مسبب للمرض” في هذه الوثيقة؛ فهي تشير إلى أجسام مضادة تسبب حالات مرضية أو أمراض. أمثلة على هذه الأجسام المضادة تشمل؛ ولكن لا تقتصر على؛ أجسام مضادة ضد الصفائح؛ أجسام مضاد ضد أسيتيل كولين ‎cacetylcholine‏ أجسام مضادة ضد حمض نووي ‎«anti-nucleic acid‏ أجسام مضادة ضد ‎phospholipid.id ged‏ «
أجسام مضادة ضد الكولاجين ‎«collagen‏ أجسام مضادة ضد جانجليوسيد ‎«ganglioside‏
أجسام مضادة ضد ديسموجلين ‎«desmoglein‏ إلخ. يتميز الجسم المضاد أو شظية منه ‎Gy‏ للكشف الحالي بأنه يجعل من الممكن عدم التثبيط اللا تنافسي لارتباط الجسم المضاد المسبب للمرض ب ‎FORN‏ عند رقم هيدروجيني فيزيولوجي (أي رقم هيدروجيني 7.4-7). يرتبط 5050 بالمركب الترابطي له (أي 096ا) ولا يظهر ألفة بشكل كبير ل
0 166 عند الرقم الهيدروجيني الفسيولوجي فضلًا عن الرقم الهيدوجيني الحمضي. وبذلك فإن الجسم المضاد لضد ‎FERN‏ الذي يرتبط تحديدًا ب ‎FERN‏ عند الرقم الهيدروجيني الفسيولوجي يقوم بدوره كمثبط لا تنافسي لارتباط 196 ب 0180 وفي هذه الحالة؛ فإن ارتباط الجسم المضاد لضد 040 لا يتأثر بوجود 06ا. ‎eg‏ هذا الأساس»؛ فإن الجسم المضاد الابتكاري الذي يرتبط ب ‎FERN‏ بشكل لا تنافسي مع 6وا
5 بطريقة لا تعتمد على الرقم الهيدروجيني يتميز عن المثبطات التنافسية التقليدية (أي الأجسام المضادة التي ترتبط ب ‎FERN‏ بشكل تنافسي مع 96ا) في أنها يمكنها علاج الأمراض حتى عند تركيزات منخفضة عن طريق إشارات ‎IgG‏ المتواسطة ‎(FERN,‏ علاوة على ذلك» في ‎shal‏ ‏الهجرة داخل الخلية في ‎Alla‏ مرتبطة ب ‎(FERN‏ فإن الجسم المضاد ضد 70540 ‎Bay‏ للكشف الحالي يحافظ على ارتباطه ب ‎FERN‏ بألفة أعلى من 96ا في الدم؛
0 وبذلك يمكنه تثبط ارتباط 196 ب ‎FERN‏ حتى في الجسيمات الداخلية التي تكون عبارة عن بيئات ذات رقم هيدروجيني حمضي والتي يمكن أن يرتبط فيها 196 ب ‎FERN‏ وبالتالي يعزز من التخلص من ‎AgG‏ ‏الجسم المضاد ‎dg‏ للكشف الحالي له ألفة ل ‎FORN‏ حتى في ‎diy‏ رقم هيدروجيني فيزيولوجي (أي رقم هيدروجيني 7.4-7) ‎Ally‏ لا يرتبط فيها 196 ب ‎(FERN‏ عند رقم هيدروجيني 6؛ يكون
— 9 1 — للجسم المضاد ‎Bg‏ للكشف الحالى ألفة عالية ل ‎FERN‏ مقارنة ب 96ا ‎Lae‏ مما يفيد بأنه يقوم بدور مثبط لا تنافسى. في نموذج من الكشف الحالي؛ الاختراع الحالي موجه إلى جسم مضاد يرتبط خصيصًا ب ‎FERN‏ ‏أو 2.5% شظية منه ب بشتما 1 على: 0081 يشتمل على متوالية حمض أميني التي يكون لها تجانس بنسبة 9690 على الأقل مع متوالية حمض أميني واحدة أو أكثر مختارة من المجموعة المكونة من المتواليات بأرقام الهوية: 1 27 30 33 36 39 و42؛ 2 يشتمل على متوالية حمض أميني التي يكون لها تجانس بنسبة 9690 على الأقل مع متوالية حمض أميني واحدة أو أكثر مختارة من المجموعة المكونة من المتواليات بأرقام الهوية: 22 25 28 31 34 37 40 و43؛ و ‎CDR3‏ يشتمل على متوالية حمض أميني التي يكون لها تجانس بنسبة 9690 على الأقل مع متوالية حمض أميني واحدة أو أكثر مختارة من المجموعة المكونة من المتواليات بأرقام الهوية: 23 26 29 32 35 38 41 و44. سيدرك المخضرمون فى الفن أن حذف» أو إضافة أو استبدال بعض الأحماض الأمينية فى 5 متواليات الأحماض الأمينية المذكورة في المتواليات بأرقام الهوية الورادة أعلاه يقع ‎Wall‏ ضمن نطاق الكشف الحالى. علاوة على ذلك المتوالية التى تتضمن ‎lia‏ مع متواليات النكليوتيد ومجموعة متواليات الأحماض الأمينية الموصوفة في الكشف الحالي ضمن نطاق معين تقع أيضًا في نطاق الكشف الحالي. تشير عبارة 'تشابه" إلى التشابه مع متوالية نكليوتيد أو متوالية حمض أميني واحدة على 0 الأقل مختارة من المجموعة المكونة من المتواليات بأرقام الهوية: 1 إلى 44؛ وتتضمن تشابهًا بنسبة 9690 على الأقل. يفضل أن يكون التشابه 9691 على الأقل» 9692 على الأقل.9693 على الأقل.9694 على الأقل».9695 على الأقل.9696 على الأقل.9697 على الأقل».9698 على الأقل» أو 9699 على
— 2 0 —
الأقل. تجرى مقارنة التشابه بصريًا أو باستخدام برنامج مقارنة معروف ‎Jie‏ خوارزم ‎BLAST‏ مع
إعدادات قياسية. يمكن لبرنامج متاح تجاريًا أن يعبر عن التشابه بين اثنتين أو أكثر من المتواليات
كنسبة مئوية. يمكن حساب التشابه (96) للمتواليات المتجاورة.
أيضًا الأجسام المضادة التي ترتبط خصيصًا ب ‎FERN‏ التي لها ‎KD‏ ثابت تفكك ‎dissociation‏ ‏5 000591801 من 2-0.01 نانو مول عند الرقم الهيدروجيني 6 والرقم الهيدروجيني 7.4 تقع أيضًا
ضمن نطاق الكشف الحالى. " ‎"KD‏ حسب استخدامها فى هذه الوثيقة تشير إلى ثابت تفكك
التوازن لارتباط الجسم المضاد-مولد الضد؛ ‎(Sarg‏ حسابه باستخدام المعادلة التالية: ‎KD=‏
‎«kd/ka‏ حيث تشير ‎ka‏ إلى ثابت معدل الارتباط وتشير ‎kd‏ إلى ثابت معدل التفكك. يمكن إجراء
‏قياس ادبأو ‎ka‏ عند درجة حرارة 25 م أو 37 م
‏0 في أحد الأمثلة؛ يشتمل الجسم المضاد ‎Gg‏ للكشف الحالي على: 00041 يتضمن متوالية حمض أميني برقم هوية: 21؛ 00042 يتضمن متوالية حمض أميني برقم هوية: 22؛ و ‎CDR3‏ يتضمن متوالية حمض أميني برقم هوية: 23؛ ‎CDR]‏ يتضمن متوالية حمض أميني برقم هوية: 27؛ ‎CDR2‏ يتضمن متوالية حمض أميني برقم هوية: 28؛ و ‎CDR3‏ يتضمن متوالية حمض أميني برقم هوية: 29؛
‏5 0041 يتضمن متوالية حمض أميني برقم هوية: 33( ‎CDR2‏ يتضمن متوالية حمض أميني برقم هوية: 34 “و ‎CDR3‏ يتضمن متوالية حمض أميني برقم هوية: 35 “أو ‎CDR]‏ يتضمن متوالية حمض أميني برقم هوية: 39( ‎CDR2‏ يتضمن متوالية حمض أميني برقم هوية: 40؛ و ‎CDR3‏ يتضمن متوالية حمض أميني برقم هوية: 41. متواليات الحمض الأميني المذكورة في المتواليات بأرقام الهوية أعلاه يمكن أن تكون عبارة عن
‏20 متواليات أحماض أمينية مناظرة ل 60871 إلى ‎CDR3‏ للمنطقة المتغيرة فى السلسلة الثقيلة.
‏في مثال آخرء؛ يشتمل الجسم المضاد أو الشظية المرتبطة بمولد الضد وفقًا للكشف ‎lad‏ على: ‎CDR]‏ يتضمن متوالية حمض أميني برقم هوية: 24؛ ‎CDR2‏ يتضمن متوالية حمض أميني برقم هوية: 25؛ و ‎CDR3‏ يتضمن متوالية حمض أميني برقم هوية: 26؛
— 1 2 — ‎CDR]‏ يتضمن متوالية حمض أميني برقم هوية: 30( ‎CDR2‏ يتضمن متوالية حمض أميني برقم هوية: 31؛ و 00143 يتضمن متوالية حمض أميني برقم هوية: 32؛ ‎CDR]‏ يتضمن متوالية حمض أميني برقم هوية: 36؛ ‎CDR2‏ يتضمن متوالية حمض أميني برقم هوية: 37 و ‎CDR3‏ يتضمن متوالية حمض أميني برقم هوية: 438 0041 يتضمن متوالية حمض أميني برقم هوية: 42؛ ‎CDR2‏ يتضمن متوالية حمض أميني برقم
هوية: 43؛ و ‎CDR3‏ يتضمن متوالية حمض أميني برقم هوية: 44. متواليات الحمض الأميني المذكورة في المتواليات بأرقام الهوية أعلاه يمكن أن تكون عبارة عن متواليات أحماض أمينية مناظرة ل ‎CDR1‏ إلى 60543 للمنطقة المتغيرة فى السلسلة الخفيفة. على ‎dag‏ التحديد؛ يشتمل الجسم المضاد أو الشظية المرتبطة بمولد الضد ‎ay‏ للكشف الحالي
0 على: واحدة أو أكثر من منطقة متغيرة ‎ALE‏ السلسلة ومنطقة متغيرة خفيفة السلسلة مختارة من المجموعة المكونة من؛ منطقة متغيرة ثقيلة السلسة تشتمل على ‎CORI‏ يشتمل على متوالية حمض أميني برقم هوية: 21( 00142يشتمل على متوالية حمض أميني برقم هوية: 22 و 00143 يشتمل على متوالية حمض أميني برقم هوية 23 ومنطقة متغيرة خفيفة السلسة تشتمل على ‎CORT‏ يشتمل على
5 متوالية حمض أميني برقم هوية: 24 0042 يشتمل على متوالية حمض أميني برقم هوية: 25 و 3 يشتمل على متوالية حمض أميني برقم هوية 26؛ منطقة متغيرة ثقيلة السلسة تشتمل على ‎CORI‏ يشتمل على متوالية حمض أميني برقم هوية: 7 002 يشتمل على متوالية حمض أميني برقم هوية: 28 و ‎CDR3‏ يشتمل على متوالية حمض أميني برقم هوية 29 ومنطقة متغيرة خفيفة السلسة تشتمل على ‎CORT‏ يشتمل على
0 متوالية حمض أميني برقم هوية: 30( 000142يشتمل على متوالية حمض أميني برقم هوية: 31 و 3 يشتمل على متوالية حمض أميني برقم هوية 32؛ منطقة متغيرة ثقيلة السلسة تشتمل على ‎CORI‏ يشتمل على متوالية حمض أمينى برقم هوية: 3. 00/42يشتمل على متوالية حمض أميني برقم هوية: 34 و 00143 يشتمل على متوالية
— 2 2 — حمض أميني برقم هوية 35 ومنطقة متغيرة خفيفة السلسة تشتمل على 0001 يشتمل على متوالية حمض أميني برقم هوية: 36 42|(ايشتمل على متوالية حمض أميني برقم هوية: 37 و 3 يشتمل على متوالية حمض أميني برقم هوية 38؛ و منطقة متغيرة ثقيلة السلسة تشتمل على ‎CORI‏ يشتمل على متوالية حمض أمينى برقم هوية:
39 0042يشتمل على متوالية حمض أميني برقم هوية: 40 و ‎CDR3‏ يشتمل على متوالية حمض أميني برقم هوية 41؛ ومنطقة متغيرة خفيفة السلسة تشتمل على ‎CORT‏ يشتمل على متوالية حمض أميني برقم هوية: 42؛ 42/(ايشتمل على متوالية حمض أميني برقم هوية: 43 و 3 يشتمل على متوالية حمض أميني برقم هوية 44. في أحد الأمثلة؛ يشتمل الجسم المضاد أو الشظية المرتبطة بمولد الضد وفقًا للكشف ‎Jal‏ على
0 واحدة أو أكثر من منطقة متغيرة ثقيلة السلسلة ومنطقة متغيرة خفيفة السلسلة تشتمل على متوالية حمض أميني واحدة أو أكثر مختارة من المجموعة المكونة من متواليات الأحماض الأمينية بأرقام الهوية: 2 4« 6 8« ¢10 12 14 16 18 و20. على ‎dag‏ التحديد؛ يشتمل الجسم المضاد أو الشظية المرتبطة بمولد الضد ‎Gay‏ للكشف الحالي على منطقة متغيرة ثقيلة السلسلة تشتمل على متوالية حمض أميني بأرقام الهوية: 2 4 6 8« أو
‎Ss 1 0 1 5‏ منطقة متغيرة خفيفة السلسلة تشتمل على متوالية حمض أميني بأرقام الهوية : 12 14 6 أو 20 بشكل مفصل؛ يشتمل الجسم المضاد أو الشظية المرتبطة بمولد الضد ‎By‏ للكشف ‎Jal‏ على واحدة أو أكثر من منطقة متغيرة ثقيلة السلسلة ومنطقة متغيرة خفيفة السلسلة مختارة من المجموعة المكونة من:
‏0 منطقة متغيرة ‎ALE‏ السلسلة تشتمل على متوالية حمض أميني برقم هوية: 2 ومنطقة متغيرة خفيفة السلسلة تشتمل على متوالية حمض أميني برقم هوية: 12؛ منطقة متغيرة ثقيلة السلسلة تشتمل على متوالية حمض ‎sel‏ برقم هوية: 4 ومنطقة متغيرة خفيفة السلسلة تشتمل على متوالية حمض أميني برقم هوية: 14؛
منطقة متغيرة ثقيلة السلسلة تشتمل على متوالية حمض أميني برقم هوية: 6 ومنطقة متغيرة خفيفة السلسلة تشتمل على متوالية حمض أميني برقم هوية: 16؛
منطقة متغيرة ثقيلة السلسلة تشتمل على متوالية حمض أميني برقم هوية: 8 ومنطقة متغيرة خفيفة السلسلة تشتمل على متوالية حمض أميني برقم هوية: 18؛ و
منطقة متغيرة ثقيلة السلسلة تشتمل على متوالية حمض أميني برقم هوية: 10 ومنطقة متغيرة خفيفة
السلسلة تشتمل على متوالية حمض أميني برقم هوية: 20.
'شظية” أو "شظية جسم ‎"alias‏ حسب المصطلحات المستخدمة في هذه الوثيقة للإشارة إلى جسم مضاد تشير إلى عديد بيتايد مشتق من جزيء عديد ببتيد لجسم مضاد (مثل عديد بيتايد ثقيل أو خفيف السلسلة لجسم مضاد) التي لا تشتمل على عديد ببتيد لجسم مضاد كامل الطول؛ ولكن لا
0 زالت ‎dads‏ على جزءِ على الأقل من عديد ببتيد لجسم مضاد كامل الطول. في الغالب تشتمل شظايا الجسم المضاد على متعددات الببتيد التي تشتمل على جزءء مشطور من عديد ببتيد لجسم مضاد كامل الطول» على الرغم من أن المصطلح ليس مقصورًا على تلك الشظايا المشطورة. حيث إن الشظية؛ حسب المصطلح المستخدم في هذه الوثيقة للإشارة إلى جسم مضاد؛ تتضمن شظايا تشتمل على سلاسل متعددة الببتيد مفردة مشتقة من متعددات الببتيد للجسم المضاد
5 (متعددات الببتيد لجسم مضاد ثقيل أو خفيف السلسلة مثلًا)؛ سيفهم أن شظية الجسم المضاد؛ بذاتهاء قد لا تريط مولد ضد. شظايا الجسم المضاد ‎By‏ للكشف الحالي تشمل؛ ولكن لا تقتصر على؛ أجسام مضادة مفردة السلسلة؛ أجسام مضادة ثنائية النوع؛ ثلاثية ‎og gill‏ ومتعددة النوع ‎Jie‏ أجسام ثنائية ‎SH‏ ¢ أجسام مضادة ثلاثية التكافؤ وأجسام مضادة رباعية التكافئء ‎«Fd (F(ab')2 Las (Fab Lad‏
‎scFv 20‏ أجسام مضادة نطاقية؛ أجسام مضادة مزدوجة النوعية؛ أجسام دقيقة؛ بروتين منشط لشطر بروتين رابط لمنظم ستيرول ‎sterol‏ أجسام مضادة لناتج عود اتحاد جيني خالبي؛ أجسام ثلاثية أو أجسام ثنائية؛ أجسام مضادة ‎(lily‏ أجسام نانوية»؛ مستحضرات دوائية مناعية معيارية صغيرة ‎small modular immunopharmaceuticals‏ (10/ا5)؛ بروتينات اندماج ‎(sla‏ مناعي لنطاق رابط»ء أجسام مضادة متوافقة مع الجمال؛ أجسام مضادة تحتوي على ‎WHH‏ أجسام مضادة
‎(gD‏ أجسام مضادة ‎IGE‏ ؛ أجسام مضادة ‎IgM‏ ؛ أجسام مضادة 061 ؛ أجسام مضادة ‎I9G2‏ ‏¢ أجسام مضادة 1963 ؛ أجسام مضادة 1964 ؛ مشتقات في مناطق الجسم المضاد الثابتة؛ وأجسام مضادة مخلقة بناءً على سلاسل بروتين متجاورة؛ التي لها القدرة على الارتباط ب ‎FERN‏ ‏سيتضح لمن لديهم مهارة في الفن أن أي شظية للجسم المضاد وفقًا للكشف الحالي ستظهر نفس خصائص الجسم المضاد للكشف الحالي. علاوة على ذلك؛ الأجسام المضادة ذات الطفرة في المنطقة المتغيرة متضمنة في نطاق الكشف الحالي. أمثلة على الأجسام المضادة المذكورة تشمل الأجسام المضادة المشتملة على استبدال محافظ للوحدة البنائية للحمض الأميني في المنطقة المتغيرة. حسب استخدامها في هذه الوثيقة؛ تشير عبارة "استبدال محافظ' إلى استبدال مع وحدة بنائية لحمض أميني ‎AT‏ له خصائص مشابهة للوحدة البنائية للحمض الأميني الأصلي. على سببيل ‎(Jal‏ الليزين ‎lysine‏ ؛و الأرجينين ‎arginine‏ والهستادين ‎histidine‏ لهم خصائص متشابهة في أنهم لهم سلسلة جانبية قاعدية؛ وحمض أسبارتيك ‎aspartic acid‏ وحمض جلوماتيك ‎glutamic acid‏ لهم خصائص متشابهة في أنهم لهم سلسلة جانبية حمضية. بالإضافة إلى ذلك؛ يشتمل الجليسين ‎«glycine‏ أسبارجين 707 ؛ جلوتامين ‎glutamine‏ ؛ سيرين ‎sefine‏ « ‎threonine (pigs‏ ؛ تيروسين ‎tyrosine‏ ؛ سيستيين ‎cysteine‏ وتريبتوفان ‎tryptophan‏ ‏5 على خصائص متشابهة في أن لهم سلسلة جانبية قطبية غير مشحونة؛ ويشتمل ألانين ‎alanine‏ ؛ فالين ‎valine‏ ؛ ليوسين ‎leucine‏ ؛ ثريونين ‎threonine‏ ؛ ايزوليوسين ‎isoleucine‏ ؛ برولين ‎Jad ¢ proline‏ ألانين 6 وميثيونين ‎methionine‏ على خصائص متشابهة في أن لهم سلسلة جانبية غير قطبية ‎non-polar side-chain‏ . أيضًا يشتمل تيروسين ‎tyrosine‏ ‏؛ ‎Jad‏ ألانين ‎phenylalanine‏ ؛ تريبتوفان ‎tryptophan‏ وهيستادين ‎histidine‏ على خصائص 0 مشابهة في أن لهم سلسلة جانبية ‎.aromatic side-chain ihe‏ وعلى هذا الأساس؛ سيتضح لمن لديهم مهارة في الفن ‎cdl‏ حتى عند حدوث استبدال للوحدات البنائية للحمض الأميني في المجموعات التي تظهر خصائص متشابهة كما ورد أعلاه؛ فإنها لن تظهر أي تغير معين في تلك الخصائص. وبناءً على ذلك؛ فإن الأجسام المضادة التي له طفرة يتسبب فيها الاستبدال المحافظ في المنقطة المتغيرة تكون متضمنة في نطاق الكشف الحالي.
بالإضافة إلى ذلك؛ يمكن استخدام الجسم المضاد ‎Gy‏ للكشف الحالي كمرافق مع ‎Bale‏ أخرى. المواد التي يمكن استخدامها كمرافقات مع الجسم المضاد ‎By‏ للكشف الحالي أو شظية ‎die‏ تشمل العوامل العلاجية التي تستخدم بوجه عام لعلاج أمراض مناعة ذاتية؛ والمواد القادرة على تثبيط نشاط ‎FERN‏ وشق الذي يكون مرتبطًا فيزيائيًا بالجسم المضاد لتحسين استقراره و/أو احتجازه في دورة؛ على سبيل المثال في الدم؛ ‎(dead)‏ اللمف؛ أو أنسجة أخرى.
على سبيل المثال» يمكن أن يرتبط الجسم المضاد الرابط ل ‎FERN‏ ببوليمر ‎«Jie polymer‏ بوليمر غير مستضد مثل أكسيد بولي ألكيلين ‎polyalkylene oxide‏ وأكسيد بولي إيثلين ‎polyethylene oxide‏ البولميرات المناسبة سوف يتنوع وزنها بشكل كبير. يمكن استخدام البوليمرات التي تتضمن ‎Bll‏ ذات متوسط وزن جزيئي يتراوح من حوالي 200 إلى حوالي
0 35.000 (أو حوالي 1.000 إلى حوالي 15.000« و2.000 إلى حوالي 12.500). على سبيل المثال» يمكن أن يترافق الجسم المضاد الرابط ل ‎FERN‏ بالبوليمرات القابلة للذوبان في الماء؛ ‎Jia‏ بوليمرات بولي فينيل الأليف للماء ‎hydrophilic polyvinyl polymers‏ ؛ ‎Jie‏ بولي فينيل كحول ‎polyvinylalcohol‏ وبولي فينيل بيروليدون ‎.polyvinylpyrrolidone‏ قائمة غير مقيدة لهذه البوليمرات ‎cali‏ ولكن لا تقتصر علىء البوليمرات المتجانسة لأكسيد بولي ألكيلين
‎polyalkylene oxide homopolymers 5‏ مثل بولي إيثلين جليكول ‎polyethylene glycol‏ ‎(PEG)‏ أو بولي برويلين جليكولات ‎polypropylene glycols‏ ؛ بوليولات معالجة ببولي أوكسي إيقيل ‎polyoxyethylenated polyols‏ « أو بوليمرات مشتركة منها ويوليمرات مشتركة كتلة ‎block copolymers‏ منهاء شريطة المحافظة على قابلية الذويان في الماء للبوليمرات الكتلية المشتركة .
‏0 في نموذج ‎al‏ يتوجه الكشف الحالي إلى تركيبة صيدلانية لعلاج مرض مناعة ذاتية تشتمل على جسم مضاد لضد 0540 وناقل مقبول صيدلانيًا واحد أو أكثر. كما يتوجه الكشف الحالي إلى طريقة لعلاج مرض مناعة ذاتية تشتمل على إعطاء كمية فعالة من جسم مضاد يرتبط خصيصًا ب ‎FeRn‏ إلى مريض في حاجة له.
يمكن أن تشتمل التركيبة الصيدلانية على ناقل مقبول صيدلانيًاء أو سواخ؛ وما شابه ذلك؛ والمعروفة جيدًا في الفن. يجب أن تتوافق الناقلات المقبولة صيدلانيًا مع العنصر النشط مثل الجسم المضاد أو شظية منه وفقًا للكشف الحالي ويمكن أن يكون عبارة عن محلول ملح فيزيولجي؛ ماء معقم؛ محلول رنجر ‎Ringer's solution‏ ؛ محلول ملح منظم ‎buffered saline‏ ؛ محلول ديكستروز ‎dextrose solution‏ ؛ محلول مالتودكسترين ‎maltodextrin solution‏ « جليسرول ‎glycerol‏ ؛ إيثانول ‎ethanol‏ » أو خليط من اثنين أو أكثر مما سبق. علاوة على ذلك؛ يمكن أن تشتمل ‎LS‏ الصيدلانية وفقًا للإختراع الحالي؛ عند الضرورة؛ على مواد مضافة أخرى تقليدية؛ تشمل مضادات الأكسدة؛ محاليل منظمة؛ وعوامل كابحة للبكتريا. أيضًاء ‎(Say‏ صياغة التركيبة الصيدلانية ‎Uy‏ للكشف الحالي في صور قابلة للحقن مثل محاليل 0 مائية؛ معلقات أو مستحلبات بمساعدة مخففات؛ مشتتات؛ خوافض توتر سطحي؛ رابطات؛ ومزلقات. بالإضافة على ذلك يمك توفير التركيبة الصيدلانية ‎By‏ للكشف ‎Mall‏ عن طريق صياغتها في صورة متنوعة مثل مسحوق؛ قرص؛ كبسولة؛ ‎Bila‏ حقن»؛ مرهم» شراب سكري؛ وهكذاء وحاوية جرعة مفردة أو حاوية متعددة الجرعات مثل أمبولة أو قارورة محكمة الغلق. يمكن تطبيق التركيبة الصيدلانية ‎Gg‏ للكشف الحالي على جميع أمراض مناعة ذاتية التي يسببها 5 6و1 و ‎(FERN‏ والأمثلة النموذجية على أمراض مناعة ذاتية المذكورة تشمل» ولكن لا تقتصر ‎(le‏ قلة العدلات المناعي ؛ متلازمة غيان-باريه؛ الصرع؛ التهاب الدماغ ذاتي المناعة؛ متلازمة إيزاك» متلازمة الوحمة» الفقاع الشائع؛ فقاع قرطاسي؛ شبيه الفقاع الفقاعي» انحلال البشرة الفقاعي المكتسب؛ الفقاعي الحملي؛ شبيه الفقاعي النسيج المخاطي» متلازمة مضاد الشحميات الفسفورية؛ الأنيميا ذاتية ‎cde liall‏ مرض جراف ذاتي المناعة؛ متلازمة جودباستور؛ وهن عضلي وخيم؛ 0 تصلب لويحي متعدد؛ التهاب المفصل الروماتويدي؛ الذثئبة؛ الفرفرية قليلة الصفيحات المجهولة السبب؛ التهاب الكلية الذثبي و اعتلال الكلية الغشائي. في طريقة العلاج وفقًا للكشف الحالي؛ يمكن تحديد جرعة الجسم المضاد بطريقة مناسبة من خلال الوضع في الاعتبار شدة المرض للمربض؛ حالته؛ عمره؛ تاريخ الحالة ونحو ذلك. على سبيل المثال؛ يمكن إعطاء الجسم المضاد بجرعة تتراوح من 1 مجم/كجم إلى 2 جرام/كجم. يمكن إعطاء 5 الجسم المضاد مرة واحدة أو عدة مرات.
يوفر الكشف الحالي ايضًا طريقة لتخفيف ‎Ala‏ ذاتية المناعة أو ‎Ala‏ منيعة للمستضد الخيفي؛ تشمل إعطاء الجسم المضاد وفقًا للاختراع الحالي أو شظية من الجسم المضاد إلى خاضع في حاجة للعلاج. يوفر الكشف الحالي ‎Lad‏ علاج نوعي لضد ‎FERN‏ ‏يمكن تنفيذ الطريقة الابتكارية لتخفيف حالة ذاتية المناعة أو حالة منيعة للمستضد الخيفي أو العلاج الابتكاري لضد ‎FERN‏ من خلال إعطاء التركيبة الصيدلانية ‎Gy‏ للكشف الحالي إلى
خاضع. يمكن إعطاء التركيبة الصيدلانية ‎Gg‏ للكشف الحالي عن طريق الفم أو الحقن. يمكن إعطاء التركيبة الصيدلانية وفقًا للكشف الحالي بطرق متنوعة؛ وتشمل على سبيل المثال وليس الحصرء عن طريق ‎«pil‏ داخل الوريد؛ داخل العضلات؛ داخل الشرايين» داخل النخاع؛ داخل الجافية؛ داخل القلب؛ عبر الجلد؛ تحت الجلد؛ داخل الغشاء البريتوني؛ في المعدة والأمعاء؛ تحت
0 اللسان؛ وطرق الإعطاء الموضعية. قد تختلف جرعة التركيبة ‎By‏ للكشف الحالي بناءً على عوامل متنوعة؛ ‎Jie‏ وزن جسم المريض؛ ‎copes‏ جنسه؛ حالته الصحية ونظامه الغذائي» زمن وطريقة الإعطاء؛ معدل الإخراج؛ وشدة ‎(pal‏ ويمكن تحديدها بسهولة بواسطة شخص لديه مهارة عادية في الفن. بوجه عام؛ يمكن إعطاء 200-1 مجم/كجم؛ يفضل 40-1 مجم/كجم من التركيبة إلى المرضى المصابين بحالات
5 ذاتية المناعة أو حالات منيعة للمستضد الخيفي؛ ويفضل تصميم هذه الأنظمة لتقليل تركيز 6وا ذاتي ‎Land)‏ المصلي على أقل من 9675 من قيم علاج محدد مسبقًا. يمكن تطبيق استراتيجيات جرعات متقطعة و/أو مزمنة (متواصلة) حسب حالات المرضى. في نموذج آخر؛ يوفر الكشف الحالي ‎Wad‏ تركيبة تشخيصية تشتمل على الجسم المضاد ‎ay‏ ‏للكشف الحالي أو شظية منه؛ وطريقة تشخيصية تستخدم التركيبة التشخيصية. بعبارة أخرى؛
0 الجسم المضاد ‎Gy‏ للكشف الحالي أو شظية منه؛ الذي يرتبط ب ‎(FERN‏ يتضمن مرافق تشخيصية في المختبر أو في النسيج الحي. في نموذج آخر؛ ‎dag‏ الكشف ‎Jal)‏ إلى تركيبة لكشف ‎FERN‏ يشتمل على جسم مضاد لضد 040 أو شظية منه. يوفر الكشف الحالي أيضًا طريقة؛ أو نظام أو وسيلة لكشف 040 في النسيج الحي أو في المختبر يشتمل على علاج الجسم المضاد لضد ‎FERN‏
— 8 2 — قد تشتمل طريقة أو نظام أو وسيلة الكشف في المختبر -على سبيل المثال -على ) 1 ( جعل عينة تتلامس مع الجسم المضاد المرتبط 2 ‎«FcRn‏ )2( كشف تكون معقد بين الجسم المضاد المرتبط = ‎(dually FcRn‏ و/أو )3( جعل عينة مرجعية (عينة تحكم ‎gy ki! (li‏ مع الجسم المضاد؛ و(4) تحديد درجة تكون المعقد بين الجسم المضاد والعينة من خلال المقارنة مع تلك الدرجة فى العينة د المرجعية. يشير تغير (مثل تغير دال إحصائيًا) في تكون المعقد في العينة أو الخاضع عند مقارنته بالتكون في عينة التحكم أو الخاضع إلى وجود 7040 في العينة. طريقة ‘ أو نظام ‘ أو وسيلة الكشف فى الجسم الحيوي تشتمل على: ) 1 ( إعطاء الجسم المضاد الرابط ل ‎ JAIFCRN‏ خاضع؛ و(2) اكتشاف تكون معقد بين الجسم المضاد الرابط ل ‎FERN‏ ‏0 1 والخاضع . ‎asst‏ يمكن أن يشتمل على تحديد موقع أو زمن تكون المعقدء يمكن وسم الجسم المضاد الرابط ل ‎FERN‏ بمادة قابلة للكشف سواء بشكل مباشر أو غير مباشر لتسهيل اكتشاف الجسم المضاد المرتبط أو غير المرتبط. المواد القابلة للكشف المناسبة تشمل إنزيمات متنوعة؛ ‎Cle gana‏ ضميمة؛ مواد فلورية؛ مواد مضيئة؛ ومواد مشعة. ‎(Kay‏ اكتشاف تكون معقد بين الجسم المضاد المرتبط ب . ‎sFcRN‏ 040 5 .من خلال قياس أو تصوير الجسم ما إذا كان الجسم المضاد مرتبطًا أو غير مرتبط ب ‎FERN‏ ‏يمكن استخدام اختبار كشف تقليدي؛ على سبيل المثال؛ المقايسة الامتصاصية المناعية للإنزيم المرتبط ‎(ELISA) enzyme-linked immunosorbent assay‏ اختبار المقايسة المناعية الشعاعية ‎(RIA) radioimmunoassay‏ أو الكيمياء الهستولوجية المناعية للنسيج. بالإضافة إلى وسم الجسم المضاد ‎Lali‏ 1 ص04 يمكن قياس وجود ‎FcRn‏ فى عينة من خلال مقايسة مناعية منافسة تستخدم معيارا موسومًا بمادة قابلة ‎Cassi‏ وجسم مضاد رابط ل ‎Rn‏ ©-اغير موسوم. في أحد أمثلة هذا الاختبار؛ يتم جمع العينة البيولوجية؛ والمعيار الموسوم والجسم المضاد الرياط ل ‎FERN‏ وتحديد كمية المعيار الموسوم غير المرتبط ب 40ا0. تكون كمية ‎FERN‏ في العينة البيولوجية متناسبة عكسيًا مع كمية المعيار الموسوم غير المرتبط ب ‎FERN‏
— 9 2 — لأغراض الكشف؛ يمكن وسم الجسم المضاد وفقًا للكشف الحالى أو شظية منه بحامل تألق وحامل لون. ولأن الأجسام المضادة والبروتينات الأخرى تمتص الضوءٍ الذي تصل أطواله الموجية إلى حوالي 310 نانومترء فينبغي اختيار الجذور المتألقة ليكون لها امتصاص كبير عند أطوال موجية فوق 310 نانومتر ويفضل فوق 400 نانومتر. يمكن وسم الجسم المضاد ‎Gy‏ للكشف الحالي أو شظية منه بمجموعة متنوعة من حوامل التألق أو حوامل اللون. إحدى المجموعات الحاملة للتألق هي أصباغ زانثين؛ التي تشمل الفلوروسينات والرودامينات. مجموعة أخرى من مركبات الفلوروسنت هي تفيل أمينات . فور وسم الجسم المضاد بحامل تألق أو ‎Jala‏ لون؛ يمكن استخدامه في كشف وجود أو تموضع ال ‎FORD‏ في عينة؛ مثلًا باستخدام الفحص المجهري التألقي (مثل الفحص المجهري متحد البؤرة أو الفحص المجهري بإزالة التشوش). 0 يمكن إجراء الكشف عن وجود أو تموضع ‎FERN‏ الذي يستخدم الجسم المضاد ‎Bg‏ للكشف الحالي أو شظية منه من خلال طرق متنوعة مثل التحليل الهستولوجي؛ مصفوفات البروتين و 5 )(فرز الخلايا المنشط بالتألق). فى الكشف الحالى؛ يمكن ‎chal‏ وجود ‎FCRN‏ أو نسيج يعبر عن ‎FCRN‏ فى النسيج الحى بواسطة طريقة تصوير في النسيج الحي ‎٠.‏ تشتمل الطريقة على ) 1 ( إعطاء خاضع (مثل مريض مصاب 5 باضطراب ذاتي المناعة) جسم مضاد لضد ‎(FORD‏ مترافق مع مرقم قابل للكشف؛ و(2) تعريض الخاضع إلى وسيلة لكشف المرقم القابل للكشف المذكور إلى أنسجة أو خلايا تعبر عن ‎FORN‏ ‏على سبيل المثال؛ يتم تصوير الخاضع ‘ ‎“ia‏ بواسطة ‎NMR‏ أو وسيلة تصوير مقطعي أخرى . أمثلة على الواسمات المفيدة فى التصوير التشخيصى تشمل الواسمات المشعة؛ الواسمات المتألقة؛ النظائر المشعة للبوزيترون؛ مواد اللمعان الكيميائي؛ والمرقمات الإنزيمية. يمكن ‎Wal‏ استخدام الموسوم بنظير يعتمد على العمر النصفي ¢ النقاء النظائري للواسم المشع؛ وكيفية إدراج الواسم في الجسم المضاد. يوفر الكشف الحالي ‎Load‏ مجموعة ‎duh‏ تحتوي على جسم مضاد الذي يرتبط ب 0540" أو شظية ‎die‏ وتعليمات للاستخدام التشخيصي؛ مثلًا استخدام الجسم المضاد الرابط ل ‎FERN‏ أو شظية منه؛
— 3 0 —
لكشف ‎FeRn‏ فى المختبر » مثلا فى عينة » مثلا خزعة أو خلايا من مريض مصاب باضطراب مناعي؛ أو في النسيج الحي عن طريق تصوير مريض ‎Sie‏ يمكن أن تحتوي المجموعة الطبية ‎Sis‏ على كاشف ‎ila)‏ واحد على الأقل؛ ‎Jie‏ واسم أو عامل تشخيصي إضافي. بالنسبة للاستخدام في النسيج الحي؛ يمكن صياغة الجسم المضادة كتركيبة صيدلانية.
في نموذج آخرء يتوجه الكشف الحالي إلى متواليات متعددة النكليوتيد ‎Al‏ تشفر الجسم المضاد للكشف الحالى أو شظية منه. في أحد الأمثلة؛ متوالية عديد النكليوتيد التى تشفر الجسم المضاد ‎By‏ للكشف ‎Jal‏ أو شظية منه تكون ‎Ble‏ عن متوالية التي يكون بها نسبة تجانس 9690 على الأقل مع متوالية واحدة أو أكثر مختارة من المجموعة المكونة من المتواليات برقم الهوية: 1 5 7 11 13 15 17
0 19أو متوالية بها تجانس يزيد عن 9690 عند مقارنتها بالمتواليات المذكورة أعلاه. على ‎dag‏ التحديد؛ متوالية عديد ببتيد للجسم المضاد ‎Bg‏ للكشف ‎all‏ أو شظية منه تكون عبارة عن متوالية تشفر السلسلة الثقيلة للجسم المضاد وفقًا للكشف ‎Mall‏ وتكون برقم هوية: 1 3 5؛ 7» أو 9؛ و/أو متوالية تشفر السلسلة الخفيفة للجسم المضاد ‎ay‏ للكشف ‎ad)‏ وتكون برقم هوبة: 1 + 15 17 أو 19.
فى نموذ ‎AT z‏ ؛ يتوجه الكشف الحالى إلى ‎Jb‏ تعبير عود اتحاد جينى يشتمل على عديد النكليوتيد» خلية عائلة؛ التي يتم تحويرها بواسطة ناقل تعبير عودة الاتحاد الجيني وطريقة تحضير جسم ‎alias‏ يرتبط خصيصًا ب 7080 أو شظية منه من خلال استخدام ناقل تعبير ‎sage‏ الاتحاد الجينى والخلية العائلة. في أحد النماذج؛ يفضل إنتاج الجسم المضاد وفقًا للكشف الحالي أو شظية منه بواسطة التعبير
0 والتنقية باستخدام طريقة ‎sale)‏ الاتحاد الجيني. على ‎dag‏ التحديد؛ يتم إنتاج المناطق المتغيرة التي تشفر الجسم المضاد ‎١‏ لابتكاري الذي يرتبط خصيصًا ب داه -اعن طريق التعبير عنها فى خلايا عائلة منفصلة أو بشكل متزامن فى خلية عائلة مفردة. حسب استخدامه في هذه ‎(adsl‏ يشير مصطلح ‎JB‏ ناتج عودة الاتحاد الجيني” إلى ناقل تعبير وراثي قادر على التعبير عن البروتين المعني في خلية عائلة مناسبة ويعني بنية ‎DNA‏ تتضمن
عناصر تنظيمية أساسية مرتبطة تشغيليًا للتعبير عن إدخال حمض نووي. حسب استخدامها في هذه الوثيقة؛ تشير عبارة 'مرتبط تشغيليًا” إلى أن متوالية التحكم في التعبير عن الحمض النووي مرتبطة وظيفيًا بمتوالية حمض نووي تشفر البروتين المعني من أجل تنفيذ وظائف عامة. يمكن إجراء الارتباط التشغيلي بناقل ناتج عودة الاتحاد الجيني باستخدام تقنية إعادة اتحاد جيني معروفة جيدًا في الفن؛ ويمكن إجراء شطر وريط ‎DNA‏ في موضع نوعي بسهولة باستخدام إنزيمات معروفة بشكل عام في الفن. ناقل تعبير مناسب يمكن استخدامه في الكشف الحالي يمكن أن يشتمل على عناصر منظمة للتعبير مثل معززء مشغل؛ كودون بدء تشغيل» كودون إيقاف؛ إشارة مذيلة بعديد الأدينيلات؛ ومحسن؛ وكذلك متوالية إشارة لاستهداف الغشاء أو الإفراز. بشكل عام تعتبر كودونات بدء 0 التشغيل والإيقاف جزءًا من متوالية عديد نكليوتيد تشفر البروتين الهدف المولد للمناعة؛ وتكون ضرورية لتأدية وظيفتها في فرد تم إعطاؤه بنية ‎cin‏ ويجب أن تكون في إطار مع متوالية التشفير. المعززات عامة قد تكون تكوينية أو قابلة للتحريض. المعززات بدائية النواة تشمل؛ ولكن لا تقتصر ‎(Jo‏ معززات ‎tac dac‏ 13و 17. المعززات حقيقية النواة؛ تشمل ولكن لا تقتصر على؛ معزز فيروس قردي 40 (5740)؛ معزز 5 فيروس الورم الثديي الفأري ‎MMTV) mouse mammary tumor virus‏ (« معزز فيروس نقص المناعة البشري ‎(HIV) human immunodeficiency virus‏ مثل معزز تكرار النهاية الطويلة ‎«(LTR) Long Terminal Repeat‏ معزز فيروس مولوني ‎moloney virus‏ ‎promoter‏ ؛ معزز الفيروس المضخم للخلايا ‎(CMV) cytomegalovirus‏ معزز فيروس إيبشتاين - بار ‎epstein barr virus‏ (/81)؛ معزز فيروس ساركومة روس ‎rous sarcoma‏ ‎(RSV) virus 0‏ وكذلك معززات من جينات ‎Jie dd‏ بيتا-أكتين ‎human B-actin‏ « هيموجلويين بشري ‎human hemoglobin‏ ؛ كرياتين عضلي بشري ‎human muscle‏ 686 و ثيونين فازي بشري ‎.human metallothionein‏ ناقل التعبير الوراثي يمكن أن يشتمل على مرقم قابل للانتقاء الذي يسمح باختيار ‎WA‏ عائلة تحتوي على الناقل.يمكن استخدام ترميز الجينات للمنتجات التي تعطي أنماطًا ظاهرية قابلة
للانتقاء؛ ‎Jia‏ المقاومة للعقاقير» متطلب تغذية؛ مقاومة لعوامل مسممة للخلايا أو التعبير عن البروتينات السطحية كمرقمات عامة ‎ALE‏ للانتقاء. وحيث إن الخلايا التي تعبر عن مرقم قابل للانتقاء هي فقط التي تحيا في بيئة معالجة بعامل انتقائي؛ يمكن اختيار الخلايا المتحولة. ‎Lad‏ يمكن أن يشتمل ناقل تعبير قابل للنسخ على أصل نسخ, متوالية حمض نووي نوعي الذي يبدأ النسخ. ناقلات التعبير عن ناتج الاتحاد الجيني التي يمكن استخدامها في الكشف الحالي تشمل ناقلات متنوعة ‎Jie‏ بلازميدات ‎plasmids‏ » وفيروسات 71100565 وكوزميدات 5 . نوع ناقل ناتج ‎sage‏ الاتحاد الجيني ليس مقصورًا على ‎dag‏ التحديد ويمكن أن يقوم ناقل ناتج عودة الاتحاد الجيني بأداء وظيفته للتعبير عن جين مرغوب فيه وبنتج بروتيئًا مرغوبًا فيه في خلايا عائلة مختلفة مثل خلايا بدائية النواة وحقيقية النواة. ومع ذلك يفضل استخدام ناقل 0 يمكنه إنتاج كمية كبيرة من بروتين أجنبي مشابه لبروتين طبيعي مع التمتع بقدرة تعبير عالية مع معزز يظهر نشاطًا قويًا. في الكشف الحالي؛ يمكن استخدام مجموعة متنوعة من توليفات مضيف/ناقل تعبير وراثي للتعبير عن الجسم المضاد أو شظية منه ‎Gg‏ للكشف الحالي. على سبيل المثال؛ ناقلات التعبير المناسبة للمضيف حقيقي النواة تشمل؛ ولكن لا تقتصر على 51/40؛ فيروس الورم الحليمي البقري ‎bovine papillomavirus 5‏ « فيروس غدي ‎@dENOVIrUS‏ ؛ فيروس مرتبط بغدة ‎adeno—‏ ‎ug pd « associated virus‏ مضخم للخلايا ‎Cytomegalovirus‏ ؛ وفيروس قهقري ‎retrovirus‏ . ناقلات التعبير الوراثي التي يمكن استخدامها للمضيفات البكتيرية تشمل بلازميدات بكتيرية مثل ‎pMB9 (pBR322 (pCR1 col E1 «pUC (pGEX2T (pBluescript ¢pRSET (pET‏ 0 ومشتقات منهاء؛ بلازميد ‎Jie‏ 404 يشتمل على نطاق مضيف أوسع؛ ‎DNA‏ عاثي ممثل كمشتقات لامبدا عاثية متنوعة مثل 9+10» 9111 و ‎(NMO89‏ وعاثيات ‎DNA‏ الأخرى مثل ‎M13‏ وعاثية ‎DNA‏ خيطي مفرد الشربط. ناقلات التعبير الوراثي المفيدة في خلايا الخميرة تشمل بلازميد 02ل ومشتقات منه. ناقل مفيد في خلايا حشرات هو 00/1941.
يتم إدخال ناقل ناتج عودة الاتحاد الجيني في خلية عائلة لتكوين خلية متحولة. الخلايا العائلة
المناسبة للاستخدام في الكشف الحالي تشمل ‎WA‏ بدائية النواة مثل ‎Bacillus <E. coli‏
‎Proteus mirabilis 95600011017385 sp. (Streptomyces sp. (subtilis‏ و
‎«Pichia pastoris ‏خمائر مثل‎ «Aspergillus sp ‏فطربات مثل‎ «Staphylococcus sp
‎Neurospora 4 «.Schizosaccharomyces sp (Saccharomyces cerevisiae 5
‏38م وخلايا حقيقية النواة ‎(Jie‏ خلايا حقيقة النواة متخفضة؛ وخلايا حقيقية النوة أخرى مرتفعة
‎Jie‏ خلايا الحشرات.
‏الخلايا العائلة التي يمكن استخدامها في الكشف الحالي يفضل أن تكون مشتقة من النباتات
‏والثدييات» وأمثلة عليها تشمل» ولكن لا تقتصر على» ‎LS WIA‏ القرد ‎monkey kidney cells‏ ‎(COST) 0‏ خلايا ‎DIA SP2/0 (NSO‏ مبيض هامستر صيني ‎(W138 (CHO)‏ خلايا ‎AS‏
‎HUT ‏خلايا ورم نقوي؛ خلايا‎ (MDCK ((BHK) Chinese hamster ovary ‏رضيع الهامستر‎
‏8 وخلايا ‎[HEK293‏ يفضل استخدام خلايا ‎CHO‏
‏في الكشف الحالي؛ نقل العدوى أو التحول إلى خلية عائلة يشتمل على أي طريقة يمكن من خلالها
‏إدخال الأحماض النووية في الكائنات الحية؛ ‎(LDA‏ الأنسجة أو الأعضاء؛ وكما هو معروف في الفنء يمكن إجراء ذلك باستخدام تقنية قياسية مناسبة مختارة وفقًا لنوع الخلية العائلة. هذه الطرق
‎(Jods‏ ولكن لا تقتصر على» تخريم ‎electroporation eS‏ ¢ اندماج بروتوبلازمي
‎protoplast fusion‏ « ترسيب فوسفات كالسيوم ‎(CaPO4)calcium phosphate‏ ترسيب
‏كلوريد كالسيوم ‎«(CaCl2)calcium chloride‏ التحربك بألياف كربيد السليكون ‎silicon‏
‎dextran ‏كبريتات ديكستران‎ «—PEG ‏-؛‎ agrobacterium ‏وبكتريا زراعية‎ « carbide fiber ‏والتحول المتواسط بالتجفيف/التثبيط.‎ »- lipofectamine ‏-.ليبوفيكتامين‎ sulfate 20
‏يمكن إنتاج الجسم المضاد المخصص ل 040أو شظية منه ‎Gg‏ للكشف الحالي بكميات كبيرة
‏من خلال زراعة الخلية المتحولة المشتملة على ناقل ناتج عودة الاتحاد الجيني في وسط مغني؛
‏وظروف الوسط والزراعة المستخدمة في الكشف الحالي يمكن اختيارها بشكل مناسب بناءً على نوع
‏الخلية العائلة. أثناء الزراعة؛ يمكن التحكم في الظروف بما فيها درجة الحرارة؛ الرقم الهيدروجيني 5 للوسط ووقت الزراعة من أجل أن تكون ملائمة لنمو الخلايا والإنتاج الغزير للبروتين.
يمكن جمع الجسم المضاد أو شظية الجسم المضاد المنتج بواسطة طريقة إعادة الاتحاد الجيني حسب الوصف من الوسط أو ناتج انحلال الخلية ويمكن عزله وتنقيته بواسطة تقنيات العزل
Sambrook et al., Molecular Cloning: A laborarory ( ‏البيوكيميائية التقليدية‎
Manual, 2nd Ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press(1989); Deuscher,
M., Guide to Protein Purification Methods Enzymology, Vol. 182. 5 .((Academic Press. Inc., San Diego, CA(1990 هذه التقنيات ‎(Jodi‏ ولكن لا تقتصر على الرحلان الكهربي ‎electrophoresis‏ ؛ الطرد المركزي ‎centrifugation‏ ؛ ترشيح الهلام ‎gel filtration‏ ؛ الترسيب ‎precipitation‏ ؛ التحليل النفاذي ‎dialysis‏ » الكروماتوجرافيا ‎chromatography‏ ؛ كروماتوجرافيا التبادل الأيوني ‎ion‏ ‎exchange chromatography 0‏ » كروماتوجرافيا الألفة ‎affinity chromatography‏ « كروماتوجرافيا الامتصاص المناعي ‎immunosorbent chromatography‏ « كروماتوجرافيا البثق الحجمي ‎size exclusion chromatograophy‏ « إلخ؛ التركيز البؤري لنقطة التعادل الكهربي؛ وتعديلات متنوعة وتوليفات منها. يفضل أن يتم ‎Jie‏ وتنقية الجسم المضاد أو شظية الجسم المضاد باستخدام بروتين ‎A‏ ‏5 أظهرت الأجسام المضادة للكشف الحالي قدرات ربط ‎alge‏ ضد (قيم ‎(KD‏ من حوالي 300 ‎PM‏ أو ‎J‏ إلى حوالي 2 نانو مول أو أقل عند رقم هيدروجيني 7.4 وأظهرت أيضًا قيم ‎KD‏ من 2 نانو مول أو أقل إلى 900 ‎pM‏ أو أقل عند رقم هيدروجيني 6. الأجسام المضادة ‎Gy‏ للكشف الحالي تتضمن ألفة ربط ‎hFCRN‏ قوية من 2-0.01 نانو مول وبناءً على ذلك يعتقد أن الأجسام المضادة المرتبطة بخارج الخلايا تحافظ حتى على ارتباطها بالجسيمات الداخلية؛ مما يفيد ‎Ob‏ ‏0 الأجسام المضادة لها تأثير ممتاز في حجب ارتباط الأجسام المضادة الذاتية ب ‎.hFCRN‏ علاوة على ذلك؛ هذا التأثير في حجب ارتباط الأجسام المضادة الذاتية ب ‎hFCRN‏ تم ‎Lad‏ التأكد منه في اختبار حجب أجري باستخدام ‎WIA‏ تعبر عن ‎FERN‏ بشري و ‎FACS‏ ‏الأمثلة :
— 5 3 — فيما يلي سيتم وصف الكشف الحالي بشكل أكثر تفصيلًا بالإشارة إلى الأمثلة. سيتضح إلى الشخص الذي لديه مهارة عادية في الفن أن هذه الأمثلة هي لأغراض الشرح فقط ولا يجب تفسيرها على أنها تقيد نطاق الكشف الحالى. ‎JU‏ 1: إنشاء مكتبة تعبر عن مضاد ‎FORN‏ باستخدام جرذان محورة وراثيًا تم إجراء التحصين باستخدام إجمالي 6 جرذان محورة وراثيًا (©00701481» 01/1). تم استخدام
‎FERN‏ بشري كمولد مناعي. كلا باطني قدم الجرذان تم تحصينها ثمان مرات ب 0.0075 مجم من ‎FERN‏ بشري ‎JS)‏ مرة) ‎Gis‏ إلى جانب مع مادة مضافة عند فواصل 3 أيام لمدة 24 ‎Wag‏ ‏في اليوم 28؛ تم تحصين الجرذان ب10-5 ميكروجرام من مولد مناعة مخفف في محلول منظم ب ‎.PBS‏
‏10 في اليوم 28؛ تم جمع مصل الجرذ واستخدم في قياس عيار الجسم المضاد. في اليوم 31؛ تم قتل الجرذان بالقتل الرحيم» وتم استرجاع العقدة الليمفاوية المأبضية والعقدة اللمفاوية الإربية للاندماج مع خلايا ورم نقوي ‎.P3X63/AG8.653 myeloma cells‏ تم إجراء ‎ELISA (las‏ لقياس عيار الجسم المضاد في مصل الجرذ. على وجه التحديد تم تخفيف 0 البشري في محلول منظم ‎PBS‏ (رقم هيدروجيني 6 أو رقم هيدروجيني 7.4) لعمل 2
‏5 ميكروجرام/ملي لتر من محلول؛ وتم تغليف 100 ميكرو لتر من لمحلول على كل عين من ‎Gib‏ ب ‎che 6‏ وتم تحضينه عند درجة حرارة 4 م لمدة 18 ساعة على الأقل. تم غسل كل عين 3 مرات ب 300 ميكرو لتر من محلول غسل منظم (960.05 توين 20 في ‎(PBS‏ لإزالة ‎FcRn‏ ‏البشري غير المرتبط» وبعد ذلك تم إضافة 200 ميكرو لتر من محلول إعاقة منظم إلى كل عين وتحضينه عند درجة حرارة الغرفة لمدة ساعتين.
‏0 تتم تخفيف عينة مصل اختبار عند 100/1؛ وبعد ذلك تم تخفيف المحلول بشكل متسلسل مرتين لعمل إجمالي 10 عينات اختبار تتضمن عامل تخفيف من 100/1 إلى 256.000/1). بعد ‎J‏ لإعاقة ؛ تم غسل كل عين ب 300 ميكرو لتر من عامل شطف منظم ‎STK‏ ذلك أضيفت كل عينة اختبار إلى كل خلية وتم تحضينها في درجة حرارة الغرفة لمدة ساعتين. بعد الغسل ثلاث مرات؛
أضيفت 100 ميكرو لتر من 1: 50.000 تخفيف لجسم مضاد كشف ثانوي في محلول منظم
إلى كل عين وتم تحضينها في درجة حرارة الغرفة لمدة ساعتين.
بعد الغسل مرة أخرى ثلاث مرات؛ أضيفت 100 ميكرو لتر من محلول ‎TMB‏ إلى كل عين وسمح
لها بالتفاعل عند درجة حرارة الغرفة لمدة 10 دقائق؛ ويعد ذلك أضيفت 10 ميكرو لتر من 1 مول 5 محلول إيقاف يحتوي على حمض كبربتيك ‎sulfuric acid‏ إلى كل عين لإيقاف التفاعل؛ بعد ذلك
تم قياس ‎OD dad‏ عند 450 نانومتر من خلال قارئ أطباق دقيق. بالنسبة لعيار ‎IgG‏ لمضاد
5 الناتج عن التحصين كان أعلى من ذلك الموجود في مصل الجرذان قبل التحصين؛ الذي لم
يكن محصدًا مع قيمة ‎OD‏ عند 450 نانومتر في ظرف التخفيف 100/1 تعادل 1.0 أو أعلى؛
مما يفيد بأن الجرذان تم تحصينها بصورة جيدة.
0 تتم إنشاء إجمالي ثلاث ‎lie‏ ورمية هجينة ‎of‏ ب؛ ج مدمجة باستخدام بولي إيثلين جليكول. على وجه التحديد؛ تم استخدام الجرذان المتحورة وراثيًا 1 و5 لإنشاء المكتبة الورمية الهجينة ‎of‏ وتم استخدام الجرذان 2 و6 لإنشاء المكتبة الورمية الهجينة ب؛ وتم استخدام الجرذان 3 و4 لإنشاء المكتبة الورمية الهجينة ج. تم زراعة خليط اندماج مكتبة ورمية هجينة لإنشاء كل مكتبة ورمية هجينة في وسط يحتوي على ‎sad HAT‏ 7 أيام بحيث يتم اختيار فقط الخلايا المندمجة ممع
‎HAT 5‏ تم جممع الخلايا الورمية الهجينة القابلة للحياة في وسط ‎HAT‏ وزراعتها في وسط ‎HT‏ لمدة حوالي ‎all 6‏ وبعد ذلك تم جمع المادة الطافية؛ وتم قياس كمية ‎19G‏ الجرذي في المادة الطافية باستخدام طقم ‎ELISA‏ لقياس ‎IgG‏ الجرذي (40-05101800). على وجه التحديد؛ تم تخفيف كل ‎die‏ عند 1 . وتم إضافة 100 ميكرو لتر من التخفيف إلى كل عينة من طبق ‎ELISA‏ وخلطه ب
‏0 6واضد جرذي ‎Ble‏ مع بيروكسيداز» متبوعًا بالتفاعل عند درجة حرارة الغرفة ‎saad‏ 15 دقيقة. تم إضافة 100 ميكرو لتر من محلول ‎TMB‏ إلى كل عين وسمح له بالتفاعل في درجة حرارة الغرفة لمدة 10 دقائق؛ ويعد ذلك أضيفت 50 ميكرو لتر من 1 مول محلول إيقاف يحتوي على حمض كبريتيك إلى كل عين لإيقاف التفاعل. تاليا تم قياس ‎OD dad‏ عند 450 نانومتر عن طريق قارئ أطباق دقيق.
المثال 2: تقييم ألفة ربط مولد الضد وقدرة إعاقة ربط ‎IGG‏ للأجسام المضادة لضد 150140
لمكتبات ورم هجيني
لتحليل ارتباط الأجسام المضادة ب ‎CRN‏ ابشري»؛ تم إجراء نفس تحليل ‎die) ELISA‏ رقم
هيدروجيني 6 وعند رقم هيدروجيني 7.4) كما ذكر أعلاه. نتائج تقييم ارتباط ‎hFERN‏ للمكتبات الورمية الهجينة الثلاث ‎of‏ ب» ج تشير إلى أن ألفة ارتباط 150140 كانت أعلى في الترتيب
أ>ج>ب عند كل من الرقم الهيدروجيني 6 والرقم الهيدروجيني 7.4.
من خلال استخدام مزرعة المواد الطافية للمكتبات الورمية الهجينة الثلاث» تم إجراء تقييم ألفة
أرتباط 10140 بواسطة 150140 عند 5 نانوجرام/ملي لتر و25 نانوجرام/ملي لتر عند الرقم
الهيدروجيني 6 والرقم الهيدروجيني 7.4. تم فصل خلايا ‎HEK293‏ التي تعبر عن ‎FOR‏ بشري
0 مستقر من قارورة؛ ‎dang‏ ذلك تعليقها في محلول منظم ‎BSA 960.05( Jeli‏ في ‎(PBS‏ عند الرقم الهيدروجيني 6 أو الرقم الهيدروجيني 7.4). تم تخفيف المعلق إلى كثافة خلية من 106*2 خلية/ملي لترء وأضيفت 50 ميكرو لتر من التخفيف إلى كل عين من الطبق ذي ال96 عيئًا. بعد ذلك؛ تم إضافة 50 ميكرو لتر من مزرعة المادة الطافية للمكتبة الورمية الهجينة إلى كل من 10 نانوجرام/ملي لتر و50 نانوجرام/ملي لتر إلى كل عين وتعليقها للسماح للجسم المضاد ‎Ob‏ يرتبط.
5 تتم تخفيف جسم مضاد لضد ‎IgG‏ ماعز لضد 196 ل 8488/أرنب بنسبة 1:200 في منظم تفاعل» وأضيفت 100 ميكرو لتر من التخفيف إلى كل عين وخلطت بحبيبات الخلية لإجراء تفاعل ارتباطه ويعد ذلك أضيفت 150 ميكرو لتر من منظم التفاعل إلى كل عين. تم إجراء القياس في ‎.FACS (BD)‏ على نحو مشابه لنتائج ‎(ELISA‏ يمكن ملاحظة أن المكتبة الورمية الهجينة أ أظهرت أعلى ألقة ارتباط.
0 .تم إجراء تقييم قدرة المنع ل ‎FERN‏ البشري للمكتبة الورمية الهجينة بواسطة ‎FACS‏ عند الرقم الهيدروجيني 6. على وجه التحديد؛ تم تعليق خلايا ‎HEK293‏ البدائية وخلايا ‎HEK293‏ التي تعبر بشكل مفرط عن ‎FCRN‏ البشري في محلول تنظيم التفاعل )%0.05 ‎BSA‏ في ‎«PBS‏ رقم هيدروجيني 6). تم إضافة ]105% ‎WIA‏ إلى طبق ب 96 عين؛ وتم معالجتها بكل من 4 نانو
— 3 8 —
مول لكل مادة طافية من مزرعة المكتبة الورمية الهجينة 5 0.4 نانو مول من 10 أضعاف تخفيف المادة الطافية. لتأكيد قدرة المنع ل ‎<hIgG‏ تم إضافة 100 نانو مول من 8488-1961 إلى كل عين؛ وبعد ذلك تم تحضينها في الثلح لمدة 90 دقيقة. بعد اكتمال ‎ede lal)‏ تم غسل حبيبات الخلية ب100
ميكرو لتر من محلول تنظيم التفاعل؛ ونقلت إلى أنبوب سفلي مدور على شكل حرف ‎U‏ متبوعًا بالقياس في ‎FACS‏ تم قياس كمية ال 100 نانو مول من 488-01961م المتبقية في الخلايا المستقرة التي تعبر بشكل مفرط عن ‎FERN‏ البشري؛ ويعد ذلك تم حساب المنع (76). تم استخدام 71061 كنظير تحكم؛ وكتحكم إيجابي؛ تم استخدام الجسم المضاد 161-179 11 الذي تم تطويره سابقًا لتقييم تأثير منع الجسم المضاد بشكل تقارني. تم تحليل كل تحكم عند
0 تركيزات 1 ميكرومتر و2 ميكرومتر؛ وتم قياس عينة المكتبة الورمية الهجينة عند تركيزين 0.4 نانو مول و4 نانو مول. نتيجة لذلك؛ وجد أن المكتبة الورمية الهجينة أ أظهرت أعلى تأثير منع. ‎Jie :3 JU‏ نسيلة ورمية هجينة بواسطة ‎FACS‏ واختيار الأجسام المضادة استخدام المكتبة الورمية الهجينة أ التي تظهر أعلى ألفة ارتباط ل 0540 ]بشري وأعلى تأثير مانع؛ تم عزل ‎Jill‏ بواسطة ‎FACS‏ (قياس الجريان الخلوي) وبالتالي الحصول على ‎Ja)‏ 442
5 1 نسيلة مفردة . تم ‎SY)‏ النسائل ‎f‏ لأحادية المعزولة في وسط ‎HT‏ وتم جمع المادة الطافية. تم اختيار النسائل الورمية الهجينة التي تعبر عن الجسم المضاد المرتبطة ب ‎ShFCRN‏ المادة الطافية بواسطة ‎[FACS‏ نتيجة لذلك» يتضح أن 100 نسيلة ‎(M1-M100)‏ ارتبطت بشكل قوي بخلايا ‎HEK293‏ التى تعبر عن 5-06]40. تم ‎RNA Jie‏ عن النسائل الأحادية ال100 التى تم اختيارها بواسطة تحليل ‎FACS‏ وتم تحديد
0 متوالية ‎.RNA‏ في الخطوة الأولى لتحديد المتوالية؛ تم تحديد توالى 88 من النسائل الأحادية ال100؛ وتم تقسيمها ‎ag‏ لمتوالية الحمض الأميني إلى إجمالي 35 مجموعة ‎Gl)‏ إلى 638). تم تخفيف المواد الطافية ‎de pall‏ للنسائل الممثلة للمجموعات ال33 ؛مع استبعاد نسيلتين ‎G33)‏ و 5) التي لم يكن وسطها ‎(Alia‏ عند تركيز 100 نانوجرام/ملي لترء وتم تقييم ألفة الارتباط ل البواسطة ‎ELISA‏
— 3 9 —
بنفس الطريقة الموصوفة أعلاه؛ تم إجراء تقييم لألفة الارتباط ب ‎hFCRN‏ عند الرقم الهيدروجيني 6 و7.4. ترتيب ألفة الارتباط للنسائل كان متشابهًا بين الرقمين الهيدروجينيين» وظهرت قوة الارتباط عند مستويات متنوعة. علاوة على ذلك» تم إجراء تقييم التأثيرات المانعة ل 10140بالنسبة لل 33 نيلة بواسطة ‎FACS‏
عند الرقم الهيدروجيني 6. تم حساب المنع )%( بناءً على قيمة ‎MFI‏ التي تم قياسها. بناءً على نتائج تحليل نسبة المنع المئوية عند تركيز 1667 ‎pM‏ تم تقسيم النسائل إلى إجمالي المجموعات الأربع التالية: المجموعة ً: 976100-70 المجموعة ب؛ 9670-30 المجموعة ‎z‏ 9630-10 والمجموعة ‎Ha‏ %10 أو أقل.
0 بالنسبة للتحليل الحركي للنسائل الورمية الهجينة بواسطة ‎(SPR‏ تم توقيف ‎FCRN‏ البشري وبعد ذلك تم إجراء التحليل بواسطة المزرعة الورمية الهجينة كحليلة. معظم النسائل باستثناء بضع نسائل أظهرت ‎kON‏ من 106 مول أو أعلى وقيمة ‎ koff‏ 3-10 مول أو أدنى. خلاصة ما سبق ؛ تبين أن جميع النسائل لها قيمة ‎KD‏ تتراوح من 0 9-1 إلى 10 - 1 مول.
من بين النسائل الورمية الهجينة الخمس ؛ تم تحويل جينات ال18 نسيلة التي لا تتضمن موقع ‎-N‏ ‏مرتبط بالجليكوزيل ‎N—glycosylation‏ أو سيستين حر ‎free cysteine‏ فى متواليات ‎CDR‏ ‏للمجموعتين أ و ب التي تم تقسيمها وفقًا لنتائج تحليل التأثيرات المانعة ‎J‏ 0540 ]إلى متواليات ‎IgG‏ بشرية كاملة. على وجه التحديد؛ تم فحص تشابه متوالية الحمض الأميني بين ‎VH‏ و ا/اللأجسام المضادة
0 ال18 المختارة ومجموعة الأجسام المضادة للخط الإنتاشي البشري باستخدام برنامج ‎BLAST‏ وا من صفحة الشبكة العنكبوتية ‎NCBI webpage‏ من أجل استنسال جينات الأجسام المضادة ال18؛ تم إقحام مواقع تمييز إنزيم التقييد في كلا طرفي الجينات بالطريقة التالية. تم إقحام ‎EcoRI/Apal‏ في النطاق المتغير ثقيل السلسلة ‎heavy—‏
— 0 4 — ‎¢(VH) chain variable domain‏ تم إقحام ‎EcoRI/Xhol‏ في النطاق المتغير خفيف السلسلة ‎light-chain lambda variable‏ ((2)-ا/ا)؛ تم إقحام مواقع تمييز إنزيم التقييد ‎EcoRI/Nhel‏ ‏في النطاق المتغير ‎LIS‏ خفيف السلسة ‎.(VL(k)) light-chain kappa variable domain‏ في حالة النطاق المتغير خفيف السلسلة؛ تم ريط المتوالية الجينية لمتغير لامبدا خفيف السلسلة ‎(VL(A))light—chain lambda variable 5‏ بجين المنطقة الثابتة خفيفة السلسلة البشرية ر()©ا) أثناء استنسال الجين» وتم ربط متوالية جين متغير كابا خفيف السلسلة ‎light-chain‏ ‎(VL (k)kappa variable‏ بجين المنطقة الثابتة خفيفة السلسلة البشرية ‎human light—‏ ‎.(LC(k) chain constant‏ عند الاستنسال في ناقلات التعبير الوواثي ‎pPCHOL.0‏ للتعبير عن الأجسام المضادة في الخلايا 0 الحيوانية؛ تم إقحام الجينات خفيفة السلسلة وثقيلة السلسلة بعد الانشطار بإنزيمات التقييد ‎Avrll (Pacl (EcoRV‏ و ‎.5851217١‏ ‏من أجل فحص ما إذا كانت ناقلات التعبير الوراثي ‎pPCHOL.0‏ المحتوية على جينات الأجسام المضادة 1811 المختارة منسجمة مع المتواليات الجينية المخلقة؛ تم إجراء ‎Ju‏ ل ‎DNA‏ ‏من خلال استخدام ناقلات التعبير الوراثتى 001101.0 التي تكون عبارة عن أنظمة تعبير خلوية حيوانية تحتوي على كافة جينات الأجسام المضادة خفيفة السلسة وثقيلة السلسلة؛ تم التعبير عن 6 بشري كامل. تم الحصول على الجسم المضد البشري من خلال نقل عدوى بلازميد ‎DNA‏ بشكل انتقالي إلى كل جسم مضاد فى الأجسام المضادة في ‎WDA‏ 0110-5 وتنقية الجسم المضاد» وإفرازه في الوسط بواسطة عمود البروتين ‎j‏ . 0 تم حقن ‎IgG‏ البشري في الفئران ‎mpB2m- «mFcRn—/- h2m+/+ 1932 (hFcRn+/+‏ ‎(Jackson Laboratory)‏ (-/ وبعد ذلك تم إعطاء الأجسام المضادة البشرية ال18 المحولة إلى متواليات 96| البشرية إلى الفئران من أجل فحص ما إذا كانت الأجسام المضادة ستؤثر على الأيض الهدمي ل ‎19G‏ البشري.
— 1 4 — بناءً على نتائج التحليل المختبرية لألفة الارتباط (0>ا)لمولد الضد وتحليل ألفة ارتباط ‎FCRN‏ ‏بشري وتأثير الإعغاقة بواسطة ‎(FACS‏ ونتائج التحليل في النسيج ‎all‏ للأيض الهدمي ل 6وا بشري تم اختيار أربعة بروتينات للجسم المضاد لضد ‎FCRN‏ بشري ‎«HL161B «HL161A)‏ ‎HL161C‏ و ‎(HL161D‏ التي كانت أكثر فعالية في التجاوب (الشكل 1).
علاوة على ذلك؛ تم تحضير جسم مضاد 1141161814 لا يتضمن موقع ل١-‏ مرتبط بالجليكوزيل من خلال استبدال أساباراجين ‎(N) substituting asparagine‏ عند الموقع 83 من إطار العمل المتغير للسلسلة الثقيلة للجسم المضاد 111618 بالليزين ‎lysine‏ (6ا). تم عرض متواليات النكليوتيد» متواليات الحمض الأمينى ومتواليات ‎CDR‏ للمناطق المتغيرة خفيفة السلسلة وتقيلة السلسلة لكل جسم مضاد فى الجداول 1 ¢ 2 و3.
0 1 الجدول 1 ‎H‏ ‏متواليات عديد النكليوتيد للنطاقات المتغيرة ثقيلة السلسلة وخفيفة السلسلة للأجسام المضادة المختارة ل 0140 ابشري. اسم الجسم | متوالية النطاق المتغير-ثقيل السلسلة | متوالية النطاق المتغير-خفيف السلسلة المضاد رقم | متوالية عديد النكليوتيد رقم هوية | متوالية عديد النكليوتيد هوية المتوالية tcttacgtgc 11 GAAGTGCAGC 1| HL161A tgacccagcc TGCTGGAATC 001019 CGGCGGAGGC tctgtggcte CTGGTGCAGC ctggccagac CTGGCGGCTC cgccagaatc TCTGAGACTG acctgtggcg TCCTGCGCCG gcaacaacat CCTCCGAGTT cggctccacc CACCTTCGGC tccgtgcact AGCTGCGTGA ggtatcagca TGACCTGGGT gaagcccggce CCGACAGGCT caggcccccg CCCGGCAAGG tgctggtggt GCCTGGAATG gcacgacgac GGTGTCCGTG tccgaccgge ATCTCCGGCT cttctggcat CCGGCGGCTC ccctgagegg CACCTACTAC ttctccgget GCCGACTCTG ccaactccgg TGAAGGGCCG caacaccgcc GTTCACCATC accctgacca TCCCGGGACA tctccagagt ACTCCAAGAA ggaagccggc CACCCTGTAC gacgaggccg CTGCAGATGA actactactg ACTCCCTGCG ccaagtgcga GGCCGAGGAC 7170 gactcctcect ACCGCCGTGT ccgaccacgt ACTACTGCGC tcttacgtgce 13 | caactgttgc tccaggaatc 3| HL161B tgacccagtc cggtcctggt cttgtaaagc ccccteegtg catctgagac tctctccctt tccgtggctc acctgtaccg ttagcggagg ctggccagac aagtctttcc tcaagcttct cgccagaatc cctactgggt gtggatcaga acctgtggcg cagcctcccg gaaaagggtt gcaacaacat ggagtggatt ggcacaatat cggctccaag actactccgg caacacttac tccgtgcact tataacccca gcctgaagag ggtatcagca caggctgact atctctgtcg gaagcccggce acaccagtaa aaatcacttt caggcccccg tctctgaatc tgtcttcagt tgctggtggt gaccgcagcc gtacgacgac gacaccgccg tgtattattg tccgaccgge cgctcggege gececgggatte cctctggcat tgacaggcta tctggattca ccctgagegg tggggccagg ggacattggt ttctccgect tacagtgtct agt ccaactccgg caacaccgcc accctgacca tctccagagt ggaagccggce gacgaggccg actactactg ccaagtgtgg 7170 gactcctcct ccgaccacgt tcttacgtgce 15 | cagctgctge tgcaagaatc 5١ HL161B tgacccagtc cggccctgge ctggtgaaac K ccccteegtg cctccgagac actgtccctg tccgtggctc acctgcaccg tgtccggegg ctggccagac 16060190166 tccagcttct cgccagaatc cctactgggt ctggatccgg acctgtggcg cagccccctg gcaacaacat gcaagggcct cggctccaag ggaatggatc ggcaccatct tccgtgcact actactccgg caacacctac ggtatcagca tacaacccca gcctgaagtc gaagcccggce ccggctgacc atctccgtgg caggcccccg acacctccaa gaaccacttc tgctggtggt agcctgaagc tgtcctecgt gtacgacgac gaccgccgct tccgaccgge gacaccgccg tgtactactg cctctggcat tgccagaagg ccctgagegg gccggcatce tgaccggcta ttctccgect cctggactct tggggccagg ccaactccgg gcaccctggt gacagtgtcc caacaccgcc tcc accctgacca tctccagagt ggaagccggce gacgaggccg actactactg ccaagtgtgg 7170 gactcctcct ccgaccacgt
GACATCCAGA 17 CAGGTGCAGC 7١ HL161C
TGACCCAGTC TCGTGCAGTC
ACCATCATCC CGGCGCAGAG
CTTTCCGCAT GTCAAAAAGC
CTGTCGGAGA CTGGTGCATC
TAGAGTGACT TGTGAAAGTG
ATCACCTGCA AGTTGCAAGG
GGGCTTCTCA CTAGCGGCTA
AGGTATTTCC CACCTTTACC
AACTACCTCG GGATGTTATA
CCTGGTTCCA TGCATTGGGT
GCAAAAGCCA ACGCCAAGCC
GGTAAAGCCC CCCGGACAAG
CAAAGAGCTT GCTTGGAATG
GATCTACGCC GATGGGGCGT
GCTTCTAGTC ATCAACCCAA
TGCAGAGTGG ACTCTGGCGG
AGTTCCTAGT GACTAATTAC
AAGTTCTCCG GCCCAGAAGT
GCTCTGGCAG TTCAGGGAAG
TGGCACAGAT GGTGACTATG
TTTACCTTGA ACAAGGGACA
CCATTTCCAG CATCCATATC
CCTGCAGTCT CACCGCTTAT
GAGGATTTCG ATGGACCTGT
CTACCTACTA CTCGACTGCG
TTGTCAGCAG GTCTGATGAT
7170 TATGACAGCT ACAGCCGTTT
ATCCCCCCAC ATTACTGCGC
AGCTATGAGC 19 19 CAGCTGCAGT 9| HL161D
TGACCCAGCC TGCAGGAGTC
TCTGAGCGTA AGGCCCCGGT
TCTGTCGCTC TTGGTTAAGC
TCGGCCAGAC CTTCTGAAAC
AGCCAGAATT CCTTTCTCTC
ACCTGTGGCG ACATGCACAG
GCAATAACAT TATCCGGTGG
AGGATCCAAA CTCCATCTCC
AATGTTCACT AGTTCAAGTT
GGTATCAGCA ACTACTGGGG
AAAACCTGGC ATGGATCCGG
CAAGCTCCCG CAACCCCCAG
TGCTCGTGAT GAAAAGGGCT
CTACCGGGAC GGAGTGGATT
TCTAACCGAC GGCAATATAT
CCAGTGGAAT ATTACTCTGG
CCCCGAACGC GTCCACCTAT
TTTAGCGGTT TACAACCCTT
CCAACTCTGG CCCTGATGAG
AAATACAGCT TAGAGTGACC
ACTCTGACTA ATCAGCGTGG
TCTCCAGGGC ACACAAGCAA
TCAGGCCGGG AAACCAATTC
GATGAGGCCG AGCCTGAAGC
ATTACTACTG TTTCTAGCGT
CCAGGTGTGG GACCGCTGCC
7170 GACTCAAGCA GACACAGCTG
CAGTGGTCTT TCTATTACTG
الجدول 2. متواليات الحمض الأميني للنطاقات المتغيرة ثقيلة السلسلة وخفيفة السلسلة للأجسام المضادة المختارة ل (4ا0 البشري. اسم الجسم | متوالية النطاق متوالية النطاق المتغير -خفيف السلسلة رقم | متوالية الحمض | رقم هوية متوالية الحمض الأميني هود | الأميني | المتوالية
المتو الية ‎Syvltgppsv svapgqtari 12 | Evqllesggg 2١ HL161‏ ‎tcggnnigst Ivgpggsirl A‏ ‎svhwyqqgkpg scaaseftfg‏ ‎gapvlvvhdd scvmtwvrga‏ ‎sdrpsgiper fsgsnsgnta pgkglewvsv‏ ‎titisrveag deadyycqvr isgsggstyy‏ ‎dsssdhvifg ggtkltvigq adsvkgrfti‏ ‎pkaapsvitl srdnskntly‏ ‎lgmnslraed‏ ‎tavyycakTp‏ ‎wwirspffdy‏ ‎wgqgtlvtvss‏
Syvltgspsv svapgqtari 14 glllgesgpg 4| HLI161 tcggnnigsk Ivkpsetlsl B svhwyqqgkpg tctvsggsls gapvlvvydd sdrpsgiper ssfsywvwir fsasnsgnta tltisrveag gppgkglewi deadyycqvw gtiyysgnty dsssdhvvfg ggtkltvigq ynpslksrit pkaapsvitl isvdtsknhf sinlssvtaa dtavyycarr agiltgylds wgqgtlvtvss
Syvltgspsv svapgqtari 16 glllgesgpg HL161 tcggnnigsk Ivkpsetisl BK svhwyqqgkpg tctvsggsls gapvlvvydd sdrpsgiper ssfsywvwir fsasnsgnta tltisrveag gppgkglewi deadyycqvw gtiyysgnty dsssdhvvfg ggtkltvigq ynpslksrit pkaapsvitl isvdtsknhf sIKlssvtaa dtavyycarr agiltgylds wgqgtlvtvss
DIQMTQSPSS 18 | QVQLVQSG HL161
LSASVGDRVT AE Cc
ITCRASQGIS VKKPGASV
NYLAWFQQKP KV
GKAPKSLIYA SCKASGYT
ASSLQSGVPS FT
KFSGSGSGTD GCYMHWV
FTLTISSLQS RQA
EDFATYYCQQ PGQGLEW
YDSYPPTFGG MGR
GTKVEIKRTV INPNSGGT
AAPSVFI NY
AQKFQGRV
™
TRDTSISTA
Y
MDLSRLRS
DD
TAVYYCAR
DY
SGWSFDY
WGQ
GTLVTVSS
SYELTQPLSV 20 | QLQLQESG | 10| HL161
SVALGQTARI PG D
TCGGNNIGSK LVKPSETL
NVHWYQQKPG SL
QAPVLVIYRD TCTVSGGS
SNRPSGIPER IS
FSGSNSGNTA SSSYYWG
TLTISRAQAG WIR
DEADYYCQVW QPPGKGLE
DSSTVVFGGG Wi
TKLTVLGQPK GNIYYSGS
AAPSVTL TY
YNPSLMSR
VT
ISVDTSKN
QF
SLKLSSVT
AA
DTAVYYCA
RQ
LSYNWND
RLF
DYWGQGT
LVT VSS
— 5 1 — ‏للنطاقات المتغيرة ثقيلة السلسلة وخفيفة السلسلة للأجسام المضادة‎ CDR ‏الجدول 3. متواليات‎ ‏المختارة ل (4ا0 البشري.‎ ‏للنطاق المتغير ثقيل السلسلة | للنطاق المتغير خفيف السلسلة‎
CDR CDR ‏الجسم‎ ‎CDR ‏المضاد‎ ‎CDR3 | 2 CDR1 CDR2| 1 3 ‏رقم هوية‎ 26 25 24 23 22 21 ‏المتوالية‎ ‎tpww | visgsg vrdsss | ddsdrp | ggnnigsts HL161
Irspff | gstyya| scvmt dhvi 5 vh A dy | dsvkg ‏رقم هوية‎ 32 31 30 29 28 27 ‏المتوالية‎ ‎HL161 ‎ragilt | tiyysgn gvwds | ddsdrp | ggnnigsk B gyld | tyynpsl| fsywv ssdhvv 5 svh (HL16 ks 1BK) ‏رقم هوية‎ 38 37 36 35 34 33 ‏المتوالية‎
— 2 5 — ‎DYS | RINPN‏ ‎QQYD‏ ‎AASSL | RASQGI| GW | SGGT| GCYM | HL161‏ ‎SYPPT‏ ‎QS | SNYLA| SFD| NYAQ H C‏ ‎F‏ ‎Y| KFQG‏ رقم هوية 39 40 1 422 43 44 المتوالية قا ‎NIYYS‏ ‎YN‏ ‎QVWD | RDSN | GGNNIG GSTY | SYYW | HL161‏ ‎WN‏ ‎SSTVV RPS | SKNVH YNPSL G D‏ ‎DRL‏ ‎MS‏ ‎FDY‏ ‏المثال 4: قياس ألفة ارتباط مولد الضد للأجسام المضادة ‎HL161A/HL161B/HL161C/HL161D‏ بواسطة ‎SPR‏ ‏تم قياس ألفة الارتباط للأجسام المضادة 1411617 ‎HL161C (HL161B‏ و ‎HL161D‏ ‏بواسطة ‎SPR‏ عن طريق تثبيت 100140 قابل للذويان فى الماء كمركب ‎July‏ على رقاقة ‎Proteon GLC (Bio-Rad) 5‏ وقياس الألفة. تم إجراء تحليل حركي باستخدام نظام ‎Proteon‏ ‎XPR36‏ تم تثبيت ‎shFcRn‏ على رقاقة ‎GLC‏ وتم السماح لعينة جسم مضاد بالتفاعل عند تركيز 5؛ وتم الحصول على نتائج ‎.sensogram‏ ‏في التحليل الحركي تم استخدام نموذج ارتباط لانجموير 1: 1؛ وتكرر التحليل ستة مرات عند كل من الرقم الهيدروجيني 6 والرقم الهيدروجيني 7.4؛ وتم حساب متوسط قيمة ‎KD‏ بعد خطوة 0 التثبيت؛ تم تنشيط الرقاقة تحت ظروف ‎(EDAC/NHS 0.5X‏ 30 ميكرو لتر /دقيقة و300 ثانية. من أجل التثبيت»؛ تم تخفيف ‎ShFCRN‏ في محلول منظم بالأسيتات (رقم هيدروجينى 5.5) إلى تركيزات 2 ميكروجرام/ملي لتر و250 ميكرو لترء وتم السماح للتخفيف بالتدفق على الرقاقة
— 3 5 — بمعدل 30 ميكرو لتر/دقيقة. عند الوصول إلى مستوى تثبيت من 300-200 ‎(RU‏ تم إيقاف التفاعل. بعد ذلك تم إجراء إلغاء التنشيط باستخدام إيثانول أمين بمعدل 30 ميكرو لتر/دقيقة لمدة 300 ثانية. بعد ذلك تم تخفيف الأجسام المضادة ‎١11161‏ ضعفين بشكل متسلسل من تركيز 10 نانو مول إلى 5 نانو مول؛ 2.5 نانو مول؛ 1.25 نانو مول 0.625 نانو مول؛» 0.312 نانو مول؛ وهكذا 3 ‎alls‏ تحضير العينات . تم إجراء تخفيف العينة باستخدام 1 ‎X PBST‏ (رقم هيدروجيني 7.4( أو 08511 ‎X‏ (رقم هيدروجيني) عند كل رقم هيدروجيني. بالنسبة لتحليل العينة؛ تم ‎shal‏ ‏الارتباط عند 50 ميكرو لتر/دقيقة لمدة 200 ثانية؛ وتم إجراء خطوة التفكيك عند 50 ميكرو لتر/دقيقة لمدة 600 ثانية؛ بعد ذلك تم إجراء إعادة التوليد باستخدام محلول منظم بالجليسين (رقم 0 ميدروجيني 2.5) عند 100 ميكرو لتر/دقيقة لمدة 18 ثانية. تم تكرار التحليل الحركي لكل عينة ست مرات؛ ويعد ذلك تم قياس متوسط ألفة الارتباط مولد الضد ‎(KD)‏ تم عرض المتغيرات الحركية للأجسام المضادة؛ التي نتجت عن تحليل ‎SPR‏ في الجدول 4 أدناه (الأشكال 2 إلى 2ح). ا ا ‎a‏ ‏اال ‏ميد أ ‎LL‏ للا اه اا ا خض [09]) ‎|(lkoff)so‏ زمار ‎KD M)|(lkoffys-f | | KD‏ ‎#606١0١‏ لق ا 6--10*1.80- 7 -10*»2.47- ‎106x1.3 106x1.81{HL161A‏ 4 10 4 10 ‎-10x1.76-10x1.25 —-10x8.07|-10x7.35‏ ‎105x9.12JHL161B‏ )1057.10 4 10 3 9 ‎~10%2.32{-10x3.16| 1061-361 0x1.91|-10x3.32 71 Tiere‏
— 4 5 — ‎—-10x1.78-10x1.24 —-10x1.43(-10x1.38‏ ‎105x9.70HL161D‏ 105%6.99 3 9 3 9 لا يوجد ‎SST IRR‏ ‎9-10x1.4/4-10x4.6] 1053.2 1‏ رتباط ارتباط رتباط المثال 5: تحليل ارتباط الأجسام المضادة ‎HL161A/HLI61B‏ ب 0540-البشري بواسطة ‎FACS‏ ‏من خلال استخدام خلايا ‎HEK293‏ المستقرة التى تعبر عن 0640 البشري ؛ تم تحليل الارتباط 2 ‎FRn‏ عند كل رقم هيدروجيني باستخدام نظام ‎FACS‏ تم إجراء اختبار ارتباط ‎FERN‏ باستخدام 805 في محلول منظم تفاعل عند الرقم الهيدروجيني 6 والرقم الهيدروجيني 7.4. على ‎dag‏ ‏التحديد تم غسل 100.000 خلايا ‎HEK293‏ مستقرة تعبر عن ‎FORN‏ البشري بمحلول منظم 5 وطردها مركزيًا في طاولة طرد مركزي دقيقة بسرعة 4500 دورة في الدقيقة لمدة 5 دقائق للحصول على حبيبات الخلية. تم إضافة الجسم المضاد إلى 100 ميكرو لتر من 285/10 ملي مول ‎EDTA‏ برقم هيدروجيني 0 6 أو رقم هيدروجيني 7.4. تم تعليق حبيبات الخلايا المتبقية في محلول منظم تفاعل» وتم ‎shal‏ ‏عد الخلايا. أضيفت 10 ميكرو لتر من معلق الخلية إلى شريحة؛ وتم عد عدد الخلايا في معلق الخلية في نظام 1010؛ بعد ذلك تم تخفيف معلق الخلية بمحلول منظم تفاعل إلى تركيز خلوي من 106*2 خلايا/ملي لتر. تم تخفيف كلي عينة جسم مضاد إلى 500 نانو مول. للتحليل عند الرقم الهيدروجيني 6؛ تم تخفيف التخفيف إلى 20 نانو مول في طبق سفلي على شكل حرف ‎١7‏ ‏5 ذي 96 عين؛ وأضيفت 50 ميكرو لتر من التخفيف إلى كل عين. للتحليل عند الرقم الهيدروجيني 7.4؛ تم تخفيف ‎de‏ جسم مضاد 500 نانو مول بواسطة التخفيف المتسلسل 3 أضعاف؛ وتحليها عند تركيز يتراوح من 250 نانو مول إلى 0.11 نانو مول. أضيفت 50 ميكرو لتر من الخلايا المخففة إلى 106*2 خلية/ملي لتر إلى كل عين وتم تعليقها.
— 5 5 — تم تركيب الطبق في عضو دوار عند درجة حرارة °4 م وتدويره بزاوية °15 درجة و10 دورة في الدقيقة لمدة 90 دقيقة. بعد اكتمال التفاعل» تم إخراج الطبق من العضو الدوار وطرده مركزيًا عند 0 دورة في الدقيقة لمدة 10 دقائق؛ وتم إزالة المادة الطافية. تم تخفيف جسم مضاد ماعز ضد ‎higG 8‏ عند 1: 200 في محلول منظم تفاعل؛ وأضيفت 100 ميكرو لتر من تخفيف الجسم المضاد إلى كل عين وتعليقها.
‎(Ul‏ تم تركيب الطبق مرة أخرى في عضو دوار عند درجة حرارة 4" م وتدويره بزاوية 15" درجة و10 دورة في الدقيقة لمدة 90 دقيقة. بعد اكتمال ‎cde lal‏ تم إخراج الطبق من العضو الدوار وطرده مركزيًا عند 2000 دورة في الدقيقة لمدة 10 دقائق وأزيلت المادة الطافية. بعد تنفيذ إجراء الغسل مرة أخرى؛ أضيفت 100 ميكرو لتر من محلول منظم التفاعل إلى كل عين ‎LY‏ حبيبات
‏0 الخلية؛ وتم نقل الطبق إلى أنبوب اختبار أزرق. بعد ذلك أضيفت 200 ميكرو لتر من محلول منظم التفاعل إلى كل عين» وبعد ذلك أجرى القياس فى ‎.FACS‏ تم إجراء قياس ‎FACS‏ تحت الظروف التالية: 108 ‎FS‏ فولط»ء 426 ‎SS‏ فولت» 324 1ا- فولت» 300 ‎FL2‏ فولت. تم تحليل هذه ‎LIAN‏ بواسطة ‎FACS‏ باستخدام البرنامج الحاسويبي ‎BD FACSDivaTM‏ ‎(BD Bioscience)‏ 76.1.3. تم التعبير عن النتائج كمتوسط شدة الفلورة ‎(MFI)‏ (الشكل 3).
‏5 الأجسام المضادة 41161/8! و 111618 اأظهرت قيم ‎MFI‏ تعادل 10.59 و8.34 على التوالي؛ بتركيز 10 نانو مول ورقم هيدروجيني 6. عند رقم هيدروجيني 7.4 وتركيز يتراوح من 0.11- 0 نانو ‎(se‏ أظهرت الأجسام المضادة قيم 5050 (تركز فعال بنسبة 9650) تعادل 2.46 نانو مول و1.20 نانو مول على التوالي» كما تم تحليلها بواسطة 4 ‎parameter logistic‏ 007 باستخدام قيم ‎MFI‏
‏0 المثال 6: تحليل تأثيرات المنع للأجسام المضادة 11161/11411618 بواسطة ‎FACS‏ ‏تم معالجة ‎HEK293 WIA‏ التي تعبر عن 77040 على سطح ‎WAN‏ بالجسمين المضادين اللذين تم ‎(las‏ ألفة ارتباطهم بسطح خلية ‎FORD‏ بشري؛ وتم فحص تأثيرات المنع للأجسام المضادة بناءً على تخفيض في ارتباط 71961 الموسوم ب 8168-1100-4868 . تم تنفيذ إجراء التحليل بالطريقة التالية.
تم إضافة 2 ملي مول من ‎NTE X1‏ كل نوع من خلايا ‎HEK293‏ البدائية وخلايا ‎HEK293‏ ‏المستقرة التي تعبر بشكل مفرط عن 70/40 البشري؛ التي تم تحضينها في محضن 965 ‎CO2‏ ‏عند درجة حرارة 37 م لمدة دقيقة واحدة. تم استرجاع الخلايا من القوارير؛ وأضيفت 8 ملي لتر من محلول منظم التفاعل (رقم هيدروجيني 6) إليهاء بعد ذلك تم نقل الخلايا إلى أنبوب مخروطي ملي لتر. تم طرد معلق الخلايا عند 2000 دورة في الدقيقة لمدة 5 دقائق ‎AY‏ المادة الطافية؛ وأضيف 1 ملي لتر من محلول تنظيم التفاعل (رقم هيدروجيني 6) إلى كل حبيبة خلية. بعد ذلك تم نقل معلق الخلية إلى أنبوب 1.5 ‎Eppendorf‏ ملي لتر جديد. ‎WE‏ تم طرد معلق الخلية مركزيًا عند 4000 دورة في الدقيقة لمدة 5 دقائق وأزيلت المادة الطافية. بعد ذلك أضيف محلول منظم تفاعل (رقم هيدروجيني 6) إلى حبيبة الخلية المتبقية؛ وتم عد عدد الخلايا في معلق 0 الخلية. أخيرًا تم تخفيف معلق الخلية بمحلول منظم التفاعل إلى تركيز خلية يعادل 2.5* 106 خلية/ملي لتر. تم تخفيف كل عينة جسم مضاد إلى 400 نانو مول؛ ويعد ذلك خففت بواسطة تخفيف متسلسل 4 أضعاف في طبق سفلي على شكل حرف ‎V‏ ب96 عيئًا. أضيفت 50 ميكرو لتر من العينة المخففة إلى تركيز نهائي من 200 نانو مول إلى 0.01 نانو مول إلى كل عين. بعد ذلك أضيفت 10 5 ميكرو لتر من 816*»488-01961/ مخفف ب1 ميكرو مول من محلول تنظيم التفاعل (رقم هيدروجيني 6). ‎Hal‏ تم إضافة 40 ميكرو لتر من ‎WIS‏ مخففة إلى تركيز خلوي يعادل 2.5 ‎Xx‏ ‏6 خلية/ملي لتر إلى كل عين وتم تعليقها. تم تركيب الطبق في عضو دوار عند درجة حرارة °4 م وتدويره بزاوية 15" درجة و10 دورة في الدقيقة لمدة 90 دقيقة. بعد اكتمال التفاعل؛ تم إخراج الطبق من العضو الدوار وطرده مركزيًا عند 2000 دورة في الدقيقة ‎sad‏ 10 دقائق لإزالة 0 المادة الطافية. أضيفت 100 ميكرو لتر من محلول منظم التفاعل إلى كل عين لإذابة حبيبات ‎lal)‏ وتم نقل الطبق إلى أنبوب اختبار أزرق. بعد ذلك أضيفت 200 ميكرو لتر من محلول منظم التفاعل إلى كل ‎cope‏ وبعد ذلك أجرى القياس في ‎FACS‏ تم إجراء قياس ‎FACS‏ تحت الظروف التالية: ‎FS 108‏ فولطء 426 ‎SS‏ فولت» 324 ‎FLT‏ فولت؛ 300 ‎FL2‏ فولت. تم تحليل هذه الخلايا
بواسطة ‎FACS‏ من خلال استخدام البرنامج الحاسوبي 76.1.3 ‎FACSDivaTM‏ ‎.(Bioscience)‏ ‏تم التعبير عن النتائج كمتوسط شدة الفلورة ‎.(MFI) Mean Fluorescence Intensity‏ تم معالجة ‎MFI‏ لمجموعة الاختبار بعد طرح قيمة ‎MFI‏ المقاسة للخلايا بمفردها (إشارة خلفية). تم
حساب النسبة المئوية ل ‎MFT‏ للأنبوب المحتوي على المنافس بالنسبة إلى 96100 من أنبوب تحكم ‎Alexa Fluor 488)‏ بمفرده؛ ولا يوجد منافس). عندما كانت ‎MFI‏ أقل من ال ‎MFI‏ للأنبوب المحتوي على المنافس 061| البشري؛ تم تحديد أن الجسم المضاد المنافس له معدل تنافس مرتفع. بناءً على تأثيرات المنع المقاسة (96) للأجسام المضادة 111617 و 111618 تحت ظروف رقم هيدروجيني 6 وتركيز يتراوح من 0.01-
0 200 نانو مول؛ تم ‎parameter logistic regression—4 chal‏ نتيجة لذلك؛ تبين أن الأجسام المضادة 1111617 و ‎HL161B‏ أظهرت قيم 050 (تركيز مثبط بنسبة 9650) تعادل 2 نانو مول و2.24 نانو مول على التوالي (الشكل 4). المثال 7: اختبار تأثيرات ‎HLIGIA/HLIGLB‏ في 32 فأر متحور ‎iy‏ 005650 (1932) ‎hFCRN‏ -/-
5 .تم حقن 106 بشري في ‎(hFcRn+/+ (ly‏ 1932 +/ 2007م -/ ماع عاص ‎mB2m-/-)‏ ‏تعبر عن ‎FERN‏ بشري ‎(Jackson Laboratory)‏ وبعد ذلك تم ‎clas]‏ 111617 و ‎HL161B‏ بالإضافة إلى ‎19G‏ بشري إلى الفئران من أجل فحص ما إذا كانت الأجسام المضادة ستؤثر على الهدم الأيضي ل 96البشري. تم توزيع الأجسام المضادة ‎HL1I61A‏ و ‎HL161B‏ و6والبشري ‎«Greencross)‏
‎(IVglobulinS 0‏ للإعطاء لمدة 4 أيام بجرعة ¢5 10 و20 ملي جرام/كجم وتخزينها؛ وتم استخدام محلول منظم ‎PBS‏ ( محلول ملح منظم بالفوسفات) (رقم هيدروجيني 7.4) كناقل و20 مجم/كجم من 1961 تحكم. تم موائمة فئران 0140 1932 بشري لمدة حوالي 7 أيام وتم تقديم الماء والغذاء لها حتى الشبع. تم التحكم بشكل أوتوماتيكي في درجة الحرارة (23 + 2 ‎op‏ الرطوية (55 + %5( ودورات ضوءٍ 12 ساعة/ظلام 12 ساعة. تكونت كل مجموعة حيوانات من 4 ‎OE‏
لاستخدام 06ا البشري ككاشف أثر؛ تم تحضير 7196 مصاحب بالبيوتين باستخدام طقم ‎(Pierce)‏ فئة: 21327). عند ‎joa‏ ساعة؛ تم إعطاء 5 مجم/كجم من 96ا١-بيوتين‏ و495 مجم/كجم من 106 بشري داخل الغشاء البريتوني لإشباع ‎IgG‏ النسيج الحيوي. عند 24 48 2 و96 ساعة بعد إعطاء 06ا-بيوتين؛ تم حقن كل عقار داخل الغشاء البريتوني بجرعات 5؛ 10و20 مجم/كجم مرة واحدة يوميًا. بالنسبة لجمع الدم؛ تم استعمال القتل الرحيم مع الفئران برفق بالإيزوفوران ‎«(JW Pharmaceutical)‏ ويعد ذلك تم جمع الدم من الضفيرة الحجاجية الخلفية باستخدام أنبوب شعري دقيق لهيماتوكريت معالج بالهيبارين ‎heparinized Micro-hematocrit‏ ‎(Fisher)capillary tube‏ عند 24 48« 72« 96 120 و168 ساعة بعد إعطاء ‎—1gG‏ ‏بيوتين. عند 24 48 72( 96 ساعة؛ تم إعطاء العقار بعد جمع الدم. 0 على الفور بعد استقبال 0.1 ملي تلر من كل الدم في أنبوب ‎«Eppendorf‏ تم فصل البلازما بالطرد المركزي وتخزينها في مجمد عميق ‎deep freezer (Thermo)‏ عند درجة حرارة -70 م حتى التحليل. تم تحليل مستوى 71061-البيوتين في الدم الذي تم جمعه بواسطة ‎ELISA‏ بالطريقة التالية. تم إضافة 100 ميكرو لتر من نيوترافيدين ‎Pierce)‏ 31000) إلى طبق 96 عين ‎(Costar)‏ فئة 5 رقم: 2592) إلى تركيز من 1.0 ميكروجرام/ملي لترء وبعد ذلك تغليفها عند درجة حرارة 4 م لمدة 6 ساعة. تم غسل الطبق ثلاث مرات بمحلول منظم أ )%0.05 توين-20؛ 10 ملي محلول ‎(PBS‏ رقم هيدروجيني 7.4)؛ وبعد ذلك تحضينه في محلول منظم ‎PBS‏ يحتوي على 761 ‎BSA‏ (رقم هيدروجيني 7.4) عند درجة حرارة الغرفة ‎Baal‏ ساعتين. تاليا تم غسل الطبق ثلاث مرات بمحلول منظم ‎of‏ وبعد ذلك تم تحضير طبق نيوترافيدين بمحلول 0 منظم يحتوي على 960.5 ‎BSA‏ (رقم هيدروجيني 7.4) من أجل أن يتناظر مع 1 ميكروجرام/ملي لتر. تم تخفيف عينة دم بشكل متسلسل 1000-500-ضعف في محلول منظم ب )100 ملي مول ‎(MES‏ 150 ملي مول ‎BSA (NaCl‏ 0.596 خالي من ‎IgG‏ 960.05 توين-20؛ رقم هيدروجيني 6)؛ وأضيفت 150 ميكرو لتر من التخفيف إلى كل عين في الطبق. تم السماح للعينة المضافة بالتفاعل عند درجة حرارة الغرفة لمدة ساعة واحدة. تاليا تم غسل الطبق ثلاث مرات
— 9 5 — بالمحلول المنظم ‎of‏ وبعد ذلك أضيفت 200 ميكرو لتر من ‎١‏ نانو مول جسم مضاد ماعز ‎I9G‏ ‏ضد بشري مترافق مع ‎HRP‏ إلى كل عين وتحضينها عند درجة حرارة 37 م لمدة ساعتين. تاليا تم غسل الطبق ثلاث مرات بمحلول منظم بارد كالثلج ب؛ وبعد ذلك أضيفت 100 ميكرو لتر من محلول الطبقة الأساسية تتراميثيل بنزيدين ‎(RnD) tetramethylbenzidine‏ فئة رقم: 07999) إلى كل عين وسمح لها بالتفاعل في درجة حرارة الغرفة لمدة 15 دقيقة. أضيفت 50 ميكرو لتر من 1.0 مول محلول حمض كبريتيك ‎«Samchun) sulfuric acid solution‏ فئة رقم 52129) إلى كل عين لإيقاف التفاعل؛ ويعد ذلك تم قياس الامتصاص عند 450 نانومتر. تم ضبط تركيز 06ا-بيوتين ‎biotin‏ بعد 24 ساعة (تقريبًا «1108ل 96١-بيوتين‏ في الفتران» قبل حدوث الأيض الهدمي ل 06ا-بيوتين)عند 96100؛ وتم عرض النسب المئوية للتركيز عند نقاط 0 زمنية أخرى بالنسبة إلى التركيز عند 24 ساعة في الشكل 10. أشارت نتائج التحليل إلى أن الأعمار النصفية للناقل وال20 مجم/كجم ل ‎IgG]‏ التحكم كانت 103 ساعة و118 ساعة على التوالى. ومع ذلك؛ فإن العمر النصفي ل ‎IGG‏ الدم بالنسبة للجسم المضاد ‎HLIGLA‏ الذي أظهر الفة ممتازة في الارتباط ب 0]40”البشري وتأثير منع ممتاز في التحليل المختبري وأسرع أيض هدمي ل ‎oh gC 5‏ 1932 المتحولة وراثيًا 40ا01] البشري كانت 30 23 و18 ساعة عند جرعات مختلفة. علاوة على ذلك؛ الجسم المضاد 11411618 أظهر أعمار نصفية ل 6واتساوي 41؛ 22 و21 ساعة. هذا يفيد أن الأجسام المضادة غير المعتمدة على الرقم الهيدروجيني والغير منافسة ل ©ابالنسبة ‎hFeRn‏ لها تأثير على زيادة الأيض الهدمي للأجسام المضادة داخلية المنشاً (الشكلان ‎i5‏ و5ب). 0 المثال 8: اختبار تأثيرات ‎HLI61AMHL161B‏ في القرود من خلال استخدام قرود رياحي تتشابه بنسبة 9096 مع ‎FERN‏ البشري؛ تم تحليل مستويات وا ‎IgM IgA‏ والألبومين للقرد من خلال إعطاء الأجسام المضادة ‎HL161A‏ و 111618 وتم تحليل هيئات الحرائك الدوائية ‎(PK)‏ للأجسام المضادة. )1( تحليل التغير في التعبير عن الجلويين المناعي 6 في دم القرد
‎Yl‏ تم قياس التغير في 06| القرد بواسطة تحليل 5115/8. تم تحميل 100 ميكرو لتر من الجسم المضاد ‎Fe ١196‏ ضد البشر ‎(ABO-104A (BethylLab)‏ في كل عين من الطبق ذي ال96 ‎(Costar) Le‏ فئة رقم 2592) إلى تركيز يعادل 4.0 ميكروجرام/ملي لترء ويعد ذلك تغليفه عند 4م لمدة 16 ساعة. تم غسل الطبق ثلاث مرات بمحلول منظم غسيل )%0.05 توين-20؛ 10 ملي مول ‎PBS‏ رقم هيدروجيني 7.4)؛ وبعد ذلك تحضينه بمحلول منظم يحتوي على 9761 ‎BSA‏ (رقم هيدروجيني 7.4) عند درجة حرارة الغرفة ‎Baal‏ ساعتين. تم استخدام 06| القردي القياسي عند تركيز يتراوح من 500-3.9 نانوجرام/ملي لتر ¢ وتم تخفيف ‎die‏ الدم 80.000 ضعف في محلول منظم ‎PBS‏ (رقم هيدروجيني 7.4) يحتوي على 761 ‎(BSA‏ وتم تحميل التخفيف في الطبق وتحضينه عند درجة حرارة الغرفة لمدة ساعتين. تاليًا؛ تم 0 غسل الطبق ثلاث مرات بمحلول منظم بارد غسل؛ ‎sang‏ ذلك تم تحميل 100 ميكرو لتر من تخفيف 20.000ضعف من الجسم المضاد لضد ‎<hlgG (Biorad‏ (201005 في الطبق وسمح لها بالتفاعل عند درجة حرارة الغرفة لمدة ساعة واحدة. بعد أن تم غسل كل طبق؛ تم تحميل 100 ميكرو لتر من محلول الطبقة الأساسية تتراميثيل بنزيدين ‎(RnD) tetramethylbenzidine‏ فئة رقم: ‎(DY999‏ في الطبق وسمح لها بالتفاعل في درجة 5 حرزارة الغرفة لمدة 7 دقائق؛ بعد ذلك أضيفت 50 ميكرو لتر من 1.0 مول محلول حمض كبربتيك ‎«<Samchun)‏ فئة رقم 52129) إلى كل عين لإيفاف التفاعل. من أجل التحليل» تم قياس الامتصاص ‎(OD) absorbance‏ باستخدام قارئّ امتصاص 450 نانومتر و540 نانومتر ‎VersaMax (MD)‏ :ا©1/100). نتيجة لذلك؛ تبين ‎caf‏ عند إعطاء كل من الأجسام المضادة ‎HLIGLA‏ و 1411618 داخل ‎all‏ في قرد ‎Ab‏ بجرعات 5 و20 0 مجم/كجم ‎Ba‏ واحدة أسبوعيًاء انخفض مستوى ‎IGG‏ في القرد بطريقة تعتمد على الجرعة؛ وقامت الأجسام المضادة ‎HL161‏ بمنع تفاعل ‎I9G-FCRN‏ بشكل فعال. 5 مجم/كجم من 1161/8 خفضت مستوى 0966| في القرد إلى 9647.1 في اليوم 9 و20 مجم/كجم من ‎HLIGLA‏ خفضت مستوى 06 في القرد إلى 9629.6 في اليوم 10. 5 مجم/كجم من 111618 خفضت مستوى 4196 القرد إلى 9053.6 في اليوم ¢10 و20 مجم/كجم من
‎HL161B‏ خفضت مستوى 96 في القرد إلى 9631 في اليوم 9؛ بما يفيد بأن الجسمين المضادين أظهرا نتائج متشابهة (الجدول 5 والأشكال 6أ و6ج). علاوة على ذلك؛ تم مقارنة التغير بين الأفراد في مستوى ‎19G‏ في القرد عن طريق إعطاء 1111617 و 1111618 داخل الوريد؛ ونتيجة لهذاء تبين أن مستوى 06 في القرد انخفض بين الأفراد بطريقة متشابهة جدًا. الجدول 5. التغير (96) في مستوى ‎19G‏ في القرد عن طريق إعطاء 11116178 و ‎HL161B‏ ‏اليوم الناقل 411618 | 411618. ‎rr‏ ‏انهم للك - ‎a‏ ‎i I‏ تشقن ‎di‏ ‎i Wa I‏
‎3.131.01١ 6.9454.3 ١ 5.0233.8 | 4.4247.1| 14.3+117.6 5‏ ‎4.953.6١١ 5.8429.6| 8.9+49.7| 16+01‏ | 4.332.8 ‎6.530.44١ 4.2+47.7| 18.9+114.6‏ |4.2+54.7 | 9.1439.9 13.1+109.5 |3.1+51.7 5.32.91 |4.7+56.5 | 9.1446.7 21.21 |6.4252.9 |9.2435.7 |3.8458.7 | 7.6+45.4 17.7+128.9 |4.2454.7 | 9.6237.8 |4.2460.6 | 11.3+53.8 666 0 |10.3+59.5 |7.4+40.2 |4.4+56.7 | 10.0+48.4 ‎ 8.4+92.5‏ |6.7+62.4 |8.9+47.6 |6.0+61.8 | 9.5¢54.0 15.24107.1 |6.5+71.9 |13.3+61.8 | 4.4+64.9 | 6.0£56.8 5.6+104.0 |6.8+77.7 |22.4+72.2 | 7.4+70.8 | 5.8462.4 8.3+102.4 6.7814 |20.5+77.9 | 5.1+74.8 | 10.8+65.4 )2( تحليل هيئات الحرائك الدوائية ل ‎HLIGIAHLI61B‏ في دم قرد تم تحليل ‎cilia‏ الحرائك الدوائية ‎J(PK)‏ 111161748 و 111618 بعد الإعطاء داخل الوريد بواسطة ‎ELISA‏ تنافسي. على ‎dag‏ التحديد؛ تم تحضير محلول من 2 ميكروجرام/ملي لتر من نيوترافيدين» وتم تغطية 100 ميكرو لتر من المحلول في كل عين من الطبق 96 عين؛ وبعد ذلك تحضينها عند درجة حرارة 4 م لمدة 18 ساعة. تم شطف الطبق ثلاث مرات ب300 ميكرو لتر من محلول منظم شطف )0.05 توين 20 يحتوي على 10 ملي مول ‎PBS‏ رقم هيدروجيني 4 7( ؛ ويعد ذلك تم تحضين كل عين ب % محلول منظم 2 ‎PBS‏ (رقم هيدروجيني 4 7( يحتوي على ‎BSA‏ عند درجة حرارة 25 م لمدة ساعتين. تم تخفيف 750140 معالج بالبيوتين ب ‎PBS‏ إلى 1 ميكروجرام/ملي لترء؛ وبعد ذلك أضيفت 100 0 ميكرو لتر من التخفيف إلى كل عين من الطبق ذي 96 ‎the‏ وتحضينها عند درجة حرارة 25 م
— 3 6 — لمدة ساعة واحدة. تاليّاء تم غسل الطبق ثلاث مرات ب 300 ميكرو لتر من محلول منظم غسل لإزالة 0040 غير المرتبطء وبعد ذلك أضيفت ‎due‏ قياسية (20-0.156 نانوجرام/ملي لتر) إلى كل عين وتحضينها عند درجة حرارة 25 م لمدة ساعتين. ‎WG‏ تم غسل الطبق ثلاث مرات بمحلول منظم غسيل؛ وأضيفت 100 ميكرو لتر من 1: 10.000 من تخفيف جسم مضاد الكشف في ‎PBS 5‏ إلى كل عين وتحضينها عند درجة حرارة 25 م لمدة ‎del‏ ونصف . أخيرًا تم غسل الطبق ثلاث مرات؛ وأضيفت 100 ميكرو لتر من محلول 1148 إلى كل محلول منظم وتحضينها في درجة حرارة الغرفة لمدة 5 دقائق ويعد ذلك أضيفت 50 ميكرو لتر من 1 مول حمض كبريتيك كمحول إيقاف تفاعل إلى كل عين لإيقاف التفاعل. تاليًا تم قياس الامتصاص عند 450 نانومتر عن طريق قارئ أطباق دقيق. تم عرض تتائج التحليل ل 11116178 و 0 1618الافي الجدول 6 أدناه؛ وكما يتضح من الجدول» زادت هيئة الحرائك الدوائية للأجسام المضادة بطريقة معتمدة على الجرعة. العمر النصفي (11/2) للأجسام المضادة كان ‎lag 12-6 Joa‏ وهو أقصر من العمر النصفي المعروف بشكل عام للأجسام المضادة. علاوة على ذلك تبين أن العمر النصفىي؛ عند ملاحظته بشكل كلى» ‎AUC‏ و ‎HL161B Cmax‏ كانت ‎Jef‏ من تللك التى تعود إلى 111617 ‎psa) 5‏ 7أ و7ب). الجدول 6. نتائج التحليل لهيئات الحرائك الدوائية ل ‎HLIGTA‏ و 1111618 بجرعات مختلفة. ا الله اا - #ااالا ‎٠١‏ 0-8 ا للد عا ال ل ا رن ‎Ea‏ ‏ا ‎eed‏ 1 4-7 صغر-7 57 +31 1.601 + 6.9501 + 0.9 (5 مجم/كجم) 7 - 5 +25 1388 + 10.3334 + 2.8 ‎HL161A‏ 69 +138 13.047 0.69.0
-4 6 — 9 + 14-7 4 * 125 6 +1.6 2114 1 + ‎joa HL161B‏ -7 178 +56 9 + 1.3 1356 )5 مجم/كجم) ‎SE‏ 1 +9 2772 + 9.4466 + 0.5 21.867 + صفر -7 823 + 38 1.0+11.7 ‎HL161B‏ 1088 20 مجم/كد 6 + )20 مجم/كجم) 14-7 868 + 66 +0.9 1501 )3( تحليل التغير في مستويات الأجسام المضادة ‎IgM‏ و ‎HA‏ دم قرد تم إجراء تحليل ‎ELISA‏ لقياس مستويات ‎IgM‏ و هوافي دم قرد بطريقة مشابهة لطريقة ‎ELISA‏ ‏لقياس مستويات 06ا. على وجه التحديد؛ تم إضافة 100 ميكرو لتر من جسم مضاد ‎IgM‏ ضد القرد ‎«Alpha Diagnostic)‏ 70033( أو الجسم المضاد ‎«IgA (Alpha Diagnostic‏ )70043 إلى كل عين من الطبق ذي 961 ‎Bae‏ إلى تركيز 2.0 ميكروجرام/ملي لترء وبعد ذلك تغطيتها عند درجة حرارة 4 م لمدة 16 ساعة. تم غسل الطبق ثلاث مرات بمحلول منظم غسل )%0.05 توين-20 يحتوي على 10 ملي مول ‎PBS‏ رقم هيدروجيني 4 7( 13 ويعد ذلك تحضينه 2 1 96 محلول منظم ‎PBS‏ (رقم هيدروجيني 7.4( يحتوي على 85/8 عند درجة حرارة الغرفة لمدة ساعتين. تم تحليل ‎IgM‏ القياسي للقرد 0 بتركيز 1.000-7.8 نانوجرام/ملي لترء وتم تحليل ‎IgA‏ عند 2.000-15.6 نانوجرام/ملي لتر. تم تخفيف عينة ‎pall‏ 10.000-أو 20.000 ضعف في 961 محلول منظم ‎PBS‏ (رقم هيدروجيني 7.4) يحتوي على ‎BSA‏ وأضيف التخفيف إلى كل عين وتم تحضينه عند درجة حرارة الغرفة لمدة ساعتين. تاليا تم غسل الطبق ثلاث مرات بمحلول منظم غسل؛ ‎dang‏ ذلك
أضيفت 100 ميكرو لتر من تخفيف 5.000 ضعف من لك جسم مضاد ثانوي ااواضد القرد ‎Alpha Diagnostic)‏ 70031( والجسم المضاد الثانوي ‎IgA‏ ضد القرد ‎KPL)‏ -074-11 1) إلى كل عين وسمح له بالتفاعل عند درجة حرارة الغرفة لمدة ساعة واحدة. تم أخيرًا غسل الطبق ثلاث مرات»؛ وأضيفت 100 ميكرو لتر من محلول الطبقة الأساسية 3 3 5 5”- تتراميثيل بنزيدين (800؛ فئة رقم: 07999) إلى كل عين وسمح لها بالتفاعل في درجة حرارة
الغرفة لمدة 7 دقائق. ‎(A‏ تم إضافة 50 ميكرو لتر من 1.0 مول حمض كبريتيك ‎Samchun)‏ فئة رقم: 52129) إلى كل عين لإيقاف التفاعل. تم قياس الامتصاص لكل عين بقارئ امتصاص 450 و540 ناتومتر ‎.(Model: VersaMax MD)‏
(4) تحليل التغير في مستويات ألبومين ‎albumin‏ في دم قرد تم إجراء تحليل تغير مستويات الألبومين في دم قرد باستخدام طقم ‎ELISA‏ تجاري ‎Assaypro)‏ ‏فئة رقم: ‎(EKA2201-1‏ بشكل مختصر؛ تم تخفيف مصل قرد كعينة اختبار 4000 ضعف؛ وأضيفت 25 ميكرو لتر من التخفيف إلى كل عين من الطبق ذي ال96 ‎tie‏ مغلفة بجسم مضاد قادر على الأرتباط بألبومين القرد. تم إضافة 25 ميكرو لتر من محلول ألبومين قرد معالج
5 بالبيوتين إلى كل عين وتحضينها عند درجة حرارة 25 م لمدة ساعتين. تم غسل الطبق ثلاث مرات ب200 ميكرو لتر من محلول منظم غسل؛ وبعد ذلك أضيفت 50 ميكرو لتر من 1: 100 تخفيف من جسم مضاد مترافق مع ستريبتافيدين -بيروكسيداز ‎streptavidin—peroxidase‏ إلى كل عين وتحضينها عند درجة حرارة 25 م لمدة 30 دقيقة. ‎Baal‏ تم غسل الطبق ثلاث مرات؛ وبعد ذلك أضيفت 50 ميكرو لتر من طبقة أساسية إلى كل عين وتحضينها في درجة حرارة الغرفة
لمدة 10 دقائق. تاليا تم إضافة 50 ميكرو لتر من محلول إيقاف تفاعل إلى كل عين؛ وتم قياس الامتصاص عند 450 نانومتر. ونتيجة لذلك»؛ لم تلاحظة التغيرات الواضحة في مستويات ‎gM‏ ‏هوا والألبومين للقرد عن طريق إعطاء الأجسام المضادة ‎HLI61A‏ و 1618 اخلال فترة الاختبار (الأشكال 8 إلى 8ج).
وبناءً على هذا نستنتج أن الجسم المضاد 11161 يتدخل فقط في مستويات 96 ولا يؤثر على
مستويات ‎IgM‏ و ‎IgA‏ مما يفيد بأنه لن يكون له تأثير كبير على نقص المناعة من خلال نقس
مستويات الجلوبين المناعي. بالإضافة إلى ذلك؛ لم يلاحظ تغير كبير في مستوى ألبومين القرد
خلال فترة الاختبار؛ مما يفيد بأن الأجسام المضادة 1111617 و 111618 تمنع فقط تفاعلات
‎IgG-FcRn 5‏ على ‎dag‏ التحديد.
‏(5) تحليل المستويات البيوكيميائية للدم ومكونات ‎urinary Jel‏
‎Baal‏ تم ‎shal‏ تحليل بيوكيميائي للدم وتحليل بولي بواسطة إعطاء الأجسام المضادة باستخدام
‏عينات في اليوم 14 من الاختبار. تم تحليل مرقمات بيوكيميائية ‎(pall‏ شاملة اسبارات
‎alanine ‏ألانين أمنيوترانسفيراز‎ (AST) aspartate aminotransferase ‏أمينوترانسيفيراز‎ ‏كرباتين‎ (ALP) alkaline phosphatase ‏ألكالين فوسفاتاز‎ «(ALT) aminotransferase 0
‎«(TBIL) total bilirubin ‏بيليروبين كلي‎ ((CPK) creatine phosphokinase ‏فوسفوكيناز‎
‏جلوكوز ‎(GLU) glucose‏ كوليسترول كلي ‎¢(TCHO) total cholesterol‏ تراي جليسيريد
‎«(Alb) albumin ‏ألبومين‎ «(TP)total protein ‏)؛ بروتين كلي‎ 1 6
‎blood urea nitrogen ‏الدم‎ Lys ‏نيتروجين‎ «(A/G) albumin /globulin ‏ألبومين/جلويين‎ ‎inorganic phosphorus ‏فوسفور غير عضوي‎ (CRE) creatinine ‏كرباتينين‎ (BUN) 5
‏(١)؛‏ كالسيوم ‎(Ca) calcium‏ صوديوم ‎¢(Na) sodium‏ بوتاسيوم ‎(K) potassium‏ وكلوريد
‎Hitachi 7180 ‏باستخدام نظام‎ (Cl) chloride
‏علاوة على ذلك؛ تم تحليل المرقمات لتحليل البول؛ شاملة الكريات البيضاء ‎«(LEU) leukocyte‏
‎«(PRO) protein ‏(40الا)؛ البروتين‎ urobilinogen ‏يوروبيلينوجين‎ «(NIT) nitrate ‏النيترات‎ ‎specific ‏الجاذبية النوعية‎ (BLO) occult blood all ‏؛ الدم‎ pH ‏الرقم الهيدروجيني‎ 20
‎(SG) gravity‏ جسم الكيتون ‎«(KET ( ketone body‏ نيليرويين ‎¢(BIL)nilirubin‏ جلوكوز
‏86 (لاا©)؛ وحمض أسكوربيك ‎¢(ASC) ascorbic acid‏ باستخدام نظام ‎Mission‏
‏0 . على الرغم من وجود تغيرات طفيفة في المستويات؛ فإنه تم تضمين المستويات المقاسة
‏في معدلات المستويات الطبيعية لقرود الرباحي.

Claims (1)

  1. عناصر الحماية 1- جسم مضاد ‎antibody‏ ل 0140 معزول ‎isolated‏ أو شظية ارتباط بمولد ضد ‎antigen-binding fragment‏ منه؛ يشتمل على منطقة متغيرة ذات سلسلة ثقيلة ‎heavy‏ ‎chain‏ تشتمل على 0051 يشتمل على متوالية حمض أميني ‎amino acid‏ لمتوالية رقم: 27؛ 2 يشتمل على متوالية حمض أميني ‎amino acid‏ _لمتوالية رقم: 528 ‎CDR3‏ يشتمل على متوالية حمض أميني ‎amino acid‏ لمتوالية رقم: ¢29 ومنطقة متغيرة ذات سلسلة خفيفة ‎light chain‏ تشتمل على 00141 يشتمل على متوالية حمض أميني ‎amino acid‏ _لمتوالية رقم: ‎CDR2 .0‏ يشتمل على متوالية حمض أميني ‎amino acid‏ لمتوالية رقم: 31 و0053 يشتمل على متوالية حمض أميني ‎amino acid‏ _لمتوالية رقم: 32.
    2- الجسم المضاد ‎antibody‏ أو شظية ارتباط بمولد ضد ‎antigen-binding fragment‏ منه وفقاً لعنصر الحماية 1؛ يشتمل على منطقة متغيرة ذات سلسلة تقيلة ‎heavy chain‏ تشتمل على متوالية حمض أميني ‎acid‏ 800100 لمتوالية رقم: 4 ومنطقة متغيرة ذات سلسلة خفيفة ‎light‏ ‏0 تشتمل على متوالية حمض أميني ‎amino acid‏ _لمتوالية رقم: 14؛ أو منطقة متغيرة ذات سلسلة ثقيلة ‎heavy chain‏ تشتمل على متوالية حمض أميني ‎amino acid‏
    5 لمتوالية رقم: 6 ومنطقة متغيرة ذات سلسلة خفيفة ‎light chain‏ تشتمل على متوالية حمض أميني ‎amino acid‏ _لمتوالية رقم: 16. 3- الجسم المضاد ‎antibody‏ أو شظية ارتباط بمولد ضد ‎antigen-binding fragment‏ منه وفقاً لعنصر الحماية 1 أو عنصر الحماية 2؛ ‎Gus‏ يريط الجسم المضاد ‎antibody‏ أو شظية
    ارتباط بمولد ضد ‎antigen-binding fragment‏ منه ال ‎FERN‏ بقيمة ‎KD‏ ثابت الانفصال من 1 إلى 2 نانومولار عند رقم هيدروجيني 6.0 أو رقم هيدروجيني ‎pH‏ 7.4.
    4- الجسم المضاد ‎antibody‏ أو شظية ارتباط بمولد ضد ‎antigen-binding fragment‏ منه وفقاً لعنصر الحماية 1؛ حيث يكون الجسم المضاد ‎antibody‏ عبارة عن جسم مضاد أحادي
    النسيلة ‎«monoclonal antibody‏ جسم مضاد ‎antibody‏ فأري؛ جسم مضاد ‎antibody‏ ‏خيمري؛ جسم مضاد ‎antibody‏ متوافق مع البشر؛ أو جسم مضاد ‎antibody‏ بشري. 5- الجسم المضاد ‎antibody‏ أو شظية ارتباط بمولد ضد ‎antigen-binding fragment‏ منه وفقاً لعنصر الحماية 1؛ حيث يشتمل الجسم المضاد ‎antibody‏ أو شظية ارتباط بمولد ضد ‎antigen-binding fragment‏ منه على جسم مضاد ‎antibody‏ كامل الطول؛ ‎Fab‏ ‎«sCFV (Fv (F(ab’)2‏ جسم مضاد مزدوج النوعية ‎dual-specific antibody‏ ؛ جسم ثنائي ‎bibody‏ ؛ جسم دقيق ‎minibody‏ ؛ جسم ثلاثي ‎tribody‏ ؛ جسم مضاد ثنائي النوعية ‎bispecific antibody‏ ؛ جسم مضاد ثلاثي النوعية ‎antibody‏ 1150601116 ؛ جسم مضاد متعدد النوعية ‎Multispecific antibody‏ « جسم مضاد ثنائي ‎8S diabody‏ جسم مضاد ثلاثي ‎ESI triabody‏ جسم مضاد ‎iI tetrabody eb)‏ جسم مضاد داخلي ‎¢intrabody‏ مستحضر صيدلي مناعي معياري صغير ‎small modular‏ ‎«(SMIP) immunopharmaceutical‏ أو بروتين اندماجي لجلوبولين مناعي لنطاق ارتباط ‎binding—domain immunoglobulin fusion protein‏ ¢ و/أو حيث يشتمل الجسم المضاد ‎Je antibody 5‏ جسم مضاد ‎<IgD antibody‏ جسم مضاد ‎IgE antibody‏ جسم مضاد ‎«IgM antibody‏ جسم مضاد ‎(IgGl antibody‏ جسم ‎antibody alias‏ 962 جسم مضاد ‎<IgG3 antibody‏ أو جسم مضاد ‎1gG4 antibody‏ ‎Jo -6‏ نوكليوتيد ‎jis polynucleotide‏ الجسم المضاد ‎antibody‏ أو شظية الارتباط بمولد 0 الضد ‎antigen-binding fragment‏ منه وفقاً لعنصر الحماية 1. 7- ناقل تعبير وراثي ناتج من معاودة الارتباط الجيني ‎recombinant expression vector‏ للبولي نوكليوتيد ‎polynucleotide‏ وفقًا لعنصر الحماية 6. 5 8- خلية ‎host cell dle‏ منقول إليها العدوى بناقل التعبير الوراثي الناتج من معاودة الارتباط الجيني ‎Gy recombinant expression vector‏ لعنصر الحماية 7.
    9- طريقة لتحضير جسم مضاد ‎antibody‏ ل ‎FCRn‏ أو شظية ارتباط بمولد الضد ‎antigen—‏ ‎«aie binding fragment‏ تشتمل على: استتبات الخلية العائلة ‎host cell‏ ؛ ‎Gag‏ لعنصر الحماية 8 لإنتاج الجسم المضاد ‎antibody‏ أو شظية الارتباط بمولد الضد ‎antigen-binding‏ ‏71 منه؛ وعزل وتنقية الجسم المضاد ‎antibody‏ المُنتّج أو شظية الارتباط بمولد الضد ‎antigen-binding fragment 5‏ منه. 0- تركيبة صيدلانية تشتمل على الجسم المضاد ‎antibody‏ أو شظية الارتباط بمولد الضد ‎antigen-binding fragment‏ منه وفقاً لعنصر الحماية 1 حيث يتم ترقيم الجسم المضاد ‎antibody‏ أو شظية الارتباط بمولد الضد ‎antigen-binding fragment‏ منه بملصق كشف.
    1- تركيبة صيدلانية تشتمل على الجسم المضاد ‎antibody‏ أو شظية الارتباط بمولد الضد ‎fragment‏ 8019©0-100109 منه وفقاً لعنصر الحماية 1؛ مادة حاملة مقبولة من الناحية الصيدلانية.
    -_ 0 7 -_ الا ا الخد« ا ااا اد - ‎REE EEE Na 0 A NE‏ 0 ا
    ‎a .‏ سس حير 8 + + + > * - - ® جا الخ ابلا اجا اخ وا د ماد ‎FE‏ 4 ‎ae‏ ل 0 ‎a‏ ‏3 ‏00000 .- ‎a‏ ‏ا => ‎EEE‏ ‎Co .‏ ‎ES ¥ £3 x x EY‏ = £3 *« ® 36 ‎Fad > RE Fe dow a‏ يب هر مج © 3 اين الم حي ‎of‏ ‎i‏ ‏3 ‏اا ا - ا 4 © د ا ‎Ll NYY‏ - _ : 0 * * > # .“ا = ب ‎Ed ES‏ ل == ا ل نب 7 = كنم حب با ينا 4 ار اجر ما ‎3g‏ ‎AS‏ ‏1 ‏الا ‏ا © ‎I‏ 1 اا م3 ل ا رن ل اي ا أ _ ا ‎EY > = + 3 » - > + oy‏ ب" ها ‎EE‏ مهد 2% ‎be - 4 fad‏ : 3 3< ‎١ : | 5‏
    + : en : Os 3 i & To ‏ل لضي‎ os As 4 3 oF 8 ‏ا‎ ‏تمك ل ٍْ جد‎ . 1 8 ‏ا ا ا‎ ] 1 : 8 HE ‏ال ا اق ا‎ Rs 7 2 ‏ب ا‎ ES ‏ا‎ ‎: 1 3 N = ES TO ‏ال‎ . : 22 = ri TR NX ¥ RE rian 3 1 © 0-0 ‏ا‎ BCP SR a = £ * $ i N i RE oni aly 0 : ‏اه ا ل ل ا ل ا ا ل ا ها الاج‎ & : FET Er TERT LR a . 0 ‏اق ا 3 ل‎ LET id Wen Qa 0 . Ce RA : er 1 ‏ا ها اه ص الات اس اللي ا 8 0 0 سج‎ : Sa 5 ¥ » 1 TE NE ) x 8 8 ‏لها‎ ad ‏ا و متسر‎ Few PLS <2 ny ‏الزمن (ثانية)‎ (ir) ‏شكل‎ ‎: : ca i : ‏ل‎ NE RR. ‏إْ ايه‎ & TIM Sse ‏يد‎ i Si EON ES ‏م‎ fen 2 ‏ا‎ TOT I as ; 3 SE Ee TURN a 3 BN press SRE RE ERT Ee " RS SEE TR ‏ا ا‎ { ‏ا‎ ٍ N EE E EER nied BE 0 * IE SET Ne | ‏ان ابيط بي اوضق ا‎ ‏اجام‎ EE rT ١ FETTER ‏و‎ ‎= 2 i § 8 ‏ا‎ & > = 7 > ) WF 8 ‏يجي‎ ‎¥s ERE SATEEN GB RR me TR x ISL PF mae Ea ‏الصا اي ال‎ ‏ال‎ : Bada ‏ل ا ا ا ا‎ TE ّ ‏ب‎ fs ‏بايا ا سنن ل ال كر‎ ‏ا الاش ا‎ ao ‏الا 0 = 5 3 ا ا اا‎ ‏ا‎ ‏و جك + ع و تست كم وا‎ Aaa 2 TE Xo Fad Jy se ‏الجن‎ ‏الزمن (ثانية)‎ 2 fe & (wf } ‏شكل‎
    % ¥ Xp 3 x T 8 ‏إٍْ‎ FE 2 Av ‏ا ل ا‎ 2 Fe ‏الك‎ ‎3 i : & EER ‏اا‎ EAA it ; : Te eT ay : dE ‏م ا‎ ; 4 Poy Adi : CE ‏ا‎ ‎ZF] Fae “SN PE LE es hh ‏جك ال فال‎ = : SEE RRR LS A fed : 5 ‏ال ا ال ا ا ل . الل او‎ RA 3 A GT CR i a RR REE EE i A Fae SER eae 1 RR RS ha goo AEE TR ١ ‏الس سسحت سحن 4 = : > ّ ا ب‎ Fa ‏ساي‎ Rn ‏.دك‎ $a 5 ea ‏لح‎ « ‏الث اثائية‎ 0 1 ‏الزمن. (ثانية)‎ (EY) ‏شكل‎ ‎: CRS ْ: SY : SA : 0 IN Sn fe : RE ‏الا‎ ‎wo 5 ‏الي‎ EER Ni Pogo Es AN 3 : NE SE NN ‏ف‎ : & ral ER aR? PW i PE ‏بجا‎ EEN a Ta. 3 ‏ا اا ا‎ ‏ا ا ل لح ا اله‎ 1 T= se SONAR ‏يح ا 0 حي‎ ‏دي‎ Ex : § 2 ‏اي ةوالت 6 ل‎ ‏الما ا‎ x ‏ا‎ Se Rr A 1 ‏ال‎ ‎& iN § aE soli RE ‏ا ل‎ - 0 ERR TREN ‏الح اتج ل 0 5 اتا الما ال الاي ححا شف ام‎ ‏ليمي‎ 8 3 San 0 RNR Tianna TEES RU BREE SERN SRR . RETR ‏ا مج اا ا‎ a + ‏سجر سيو‎ ax fea ‏يك‎ Hoax a 4 ‏الخ للحا‎ ges ‏امد قت‎ ‏إْ‎ : ay : ٍْ ‏متاق‎ ‏ال‎ &x 3 : N Tew Fo 0 i & Msi 9 = ‏د‎ : & EER Ro.
    Ce ¥ § : & SEE REN 1 ٍ i : & Ea EEE Ci ¥ RR SNC CSE 3 i : N a ّ ‏ا ا‎ 0 SIN id i : ‏ال ا ا‎ de fu CR ‏ا‎ RR - : No £78 RR a x i : N iF Se ‏ألا و ال ا‎ ‏الابيد‎ i N 1 8 ER ‏ااا‎ ee ‏ام لحو‎ 1 ES oe ‏اا‎ a Sa ve fd an PIERRE a na ‏مغل‎ WETTER ‏سدسم ا ا ل ا ا ل‎ ® oy ‏اساي‎ haa ¥ ops 4 - 2 : ¥ fax ‏لازال‎ Hw x ¢ SE) 5 ‏ا‎ ‎{ ¥ ) EY od Ed ‏؟ ل‎ I 4 a if
    7 ; ad : Ra : ‏اما ار‎ ‏ميض & ار ا‎ = 2 I ‏اال ذا م‎ : i & Eee ‏ب اا‎ FN SodSs : 4 ‏باستو ا‎ Rl ‏ممما‎ 0 Fo Po CUES TUNER * & i 8 SF Ren ‏ت-‎ SESE SO : ‏ل‎ RRs css ey ‏اا‎ i § 8 3 Sp ‏ل‎ : 1 = Na SS ‏باحس‎ ‎[ial PEF ‏ا ا ا لا ال‎ an Dn TONE 5 ‏ج‎ 8 ‏الي‎ PVE ae RE Se ne ea EN ianadinnatn ia She FEIT Tae ae 8 ‏ل‎ Te ‏ا انهل هي‎ “HRN ‏ااا ات ا‎ FE EET ‏مح الما ا سا تدا لحا اا الما ل‎ 1 + . . Xa gen ‏شرن‎ Yana 5 + ‏مدخ‎ Maa ‏الزمن (ثانية‎ ‏"و‎ iS > ‏مركي ف‎ 1 ; 8 fa & H ‘ 8 8 od ; ; AdW 2 ; ANE : 3 ‏ال ل‎ ES ol EE Na CE NN ‏د‎ PAS ETE 5 CE a ‏اا‎
    ‎oF. ‏يا الات ا‎ i INE EEE PRR ‏ل‎ i 1 — % SANE IR ERED ‏ال اي اا‎ 8 58 = } . aN FS ‏ال ال اا‎ 0 a 3 ‏ا لا ا ات ل ا‎ RE TR ERE es Fi 4) 3 ‏ا ا‎ NR Nd ‏اا الا ا ال ا لشت‎ om oo ech URN AT ‏قا لال تاد ا‎ 0 SER Sule NE Att BRE Na ERY Rant : RN ‏صقر‎ Eo Al 1 ‏ا ال ا ا‎ WN Baa go RB 3 RAR FE ‏ا‎ RTI TES ‏ا ل ا اق‎ 130 YEE OR My Ss 3 83 ¥ ‏عب‎ 8 9 RS i Fou JRun Yan fax Tex Hoax FEET WN ‏الزمن (ثانية)‎ fag is 5 ١ {J Y } ١ ٍ : 1 ‏حمر‎ i La & I : ANN ‏يخ‎ ‎LER 0 Adel 8 1 8 3 Re Noa SENN XR PR 0 ‏الا ا ا‎ NERS TT ‏جا اال‎ ‏اي الال ا‎ TINIE ‏لق‎ 1 5 1 CN al © DANE ‏اا‎ ‏لاسا ايا ل‎ ١ ١ ‏والأاية‎ ‎ِ E EA RE RN A RR ‏ات ا‎ = ١ ‏ان اللا‎ a) 0 bea Ne ee 8 5 SEN RETR ITAL EETT ‏ا‎ ‎1 2 : 5 ‏ال ا ا ا‎ IW 5 NW goes 8 WERT AS RN 8 oe 3 CALE Na RNa Ba EL A A ‏ا‎ EE RRR 5 = mT a. IP ‏ال‎ NN ‏ل لاا الا‎ JRE EI ‏ال ا‎ ‏الصف‎ 8 NER Bp 8 5 EY so 1 HERMIT : 0 AA xm 4 ٍ 4 : : & ¥ oy owe haa ¥ ow ‏جا‎ fe SE Hoan con 8 ‏ا‎ 1 (rv) ‏من (ثانية) شكل‎
    ا اا مات الا ا اا اح ل ا جر ‎N H H 8:‏ ‎H H by‏ : ال | ‎Rag 8 Sod‏ ‎i TY a i‏ : ‎i oF & i‏ الال اي ‎i‏ ‎Lon oe H i # 8‏ ‎Yet + : fi: 4 :‏ ‎i 9 HS i $ 8‏ ‎a 3 2 H H RN ps‏ ‎Eo § ged 0 !‏ و ؛: 8 ; 5 ‎TUNE‏ ‎i 3 :‏ 8 5 : 8 3 ا ‎H‏ 2 : ‎i Ee E 8‏ 5 : ‎RAS: & ; H x H‏ ‎H La $‏ 3 & : 8 ا 8 ب : : لش 8 لهي 1 إٍْ ا 1 سس ير ‎H i‏ ملف لسسس سس ساي ‎Ng‏ > 5 * متا ‎A‏ ‎wiv wa kl ER So Lev fe ER] § vs re Yeas‏ 8 ‎IE IR‏ ا اا مركي # ال ةا غير يرا لاوجو تركيل 97 ‎{la}‏ ‎{r } CAG etd:‏ ‎AAA 2 3 A AT AR AR AR AR AR A A RAR‏ م م ات ‎AA AEA AEA AEA AREA AAA‏ ‎H 1 :‏ 3 ‎i H { i‏ ‎BELG J 3 i:‏ ‎PE‏ دنا ‎Cd PTE‏ ‎wr Eo) i i 3 H‏ ‎i 8 2 i‏ ب ‎Chex‏ ‎i 5 Posed 0 i‏ ‎i 2 i 3 5 8‏ ‎wed ¥ ad 9 8‏ ‎i i ¥ i‏ : & 1 3 ‎SE 5 [EE i 8‏ ‎Awd nN TENA 8 :‏ 8 95 | الما 3 ‎ey‏ ‎i‏ 9 ال ال ‎i i 5 i‏ 2 لا ومع : ل 3< ‎REE & H‏ : نج ‎H‏ * : ب ‎i‏ ‏: ب 1 ‎H‏ لقن ‎EE‏ ‏إٍْ ما 0 ‎EE FOS H‏ ! )تتا ا نجي ا ال اق ‎H 3 HS‏ : ‎Pod 8‏ 3 ‎RRR‏ سس ات بت سات ات د ات ‎hp‏ « 5 > ‎ts Tes Laas wink ot 3 [3 Tay‏ ا ل جعي الم اح ا اي ‎$a aH‏ تقر كو ‎TES‏ 85( فول تل ‎Fey 5‏ ‎A Ff fa‏ ‎i NDS‏ ‎he‏ ا ا : ‎HR‏ تي ا كي تت نت هو حك فوا ا ل ‎B 8 SS AN Ra SE ©‏ ‎SS 1 8‏ 3 : ‎SH‏ ست ااا ‎hE‏ : ال الا اللا ال : ال الا : ‎ax : 0 :‏ يا الا اا : ‎wg‏ ‎fe‏ ب 1 ‎N‏ : 4 5 ا > ‎Ne‏ : ! ‎wd NL‏ © ‎Chk, SE‏ : ‎Mos LL i SONU‏ ا يحل ا ا ا ا ا ‎g‏ ‎H Py] ME ee nin ee RY ee RO SOR‏ ‎H Bi‏ لا ‎wR and Re hig‏ 1-7 = ‎Noe i‏ : ‎HEERLY bY Wn‏ والح تس : ا اا الم ولاش ااا 3 : ‎i‏ 7 ‎Nd‏ \ جا اي للد : 8 ‎Peo sing Re FLERE en NX 0 ¥ cere SER‏ 3 ا 0 0 ‎H R‏ ‎Pa ia Re MLE 0 0‏ = 0 : بح ‎Mea 1‏ : المحم ‎Ca = .‏ : ‎HEISAS ap Ng, 1‏ : يه ‎H ARRAS RAR ARRAS, <>»‏ 1 :1 : 3 : > مله ¥ ‎hd‏ : ‎Yo oN + i = = g i -‏ ‎ax in vii (ES BETTS‏ ل £8 3 ‎Sas‏ ‎FS‏ 2 سا 4 ‎at‏ إساعة ‎big‏ ‏1 5 ٍ 2 ! { حال 4 *
    : Ne ‏ب‎ 2 ‏ا‎ ARETE Se RRR RRR, Ry ‏ل‎ ER Ne ‏اح‎ eee ‏ا ب‎ : REN i 5 ‏الجن أ‎ ‏الا اا 8 لا‎ 0 0 Be : ACN +, 8 es BUC NO I I. os on : NN i : MN Nog ‏ا‎ ‎EE Et ‏لحن ا »)هه جا‎ : : EAN A ‏اليا ات‎ : ‏رمه‎ : 3 REARS 8 3 = 8 : 51 = Eo ‏ا‎ EI I B PoSeEeSNSL go :- ‏ام ا يست ال مت‎ i : il vn IRIN > Lo ‏ام اتانيه تا‎ SR FE : : ‏اح ا‎ 7 soo ‏ا‎ LASSE re Ng ‏لا‎ ‎: ¥ a 3 : ua : ‏تقد‎ ‎ey : ‏ا‎ ee CN, = RE. « 3# Ed 8 HE we aR MT ‏جو‎ UEC ‏يبهد‎ VEE 8# Bs 3 ian ‏ادال ا‎ : RAR PY FIT 1 ‏ااا‎ + ‏ا‎ ‎7 ‏يي‎ 3 8 is Red 3 ‏ا الوا لير‎ ‏مايق تال اص الهاج‎ CREE ‏د‎ pa Co 3 ‏مقايل تقل‎ rv re ‏د ع‎ ‏ب 4 ا‎ 3 : e : ْْ ‏ا‎ ‏لم‎ i i yoy 3 Ta : : H HEE 1 i 1 EEE. ‏ااي اق اا ا‎ 0 by ‏ا‎ Cee wie BL : : TUE Lad BEE : H ١ 5 ¥ 10230 SHEL NEI } i i ‏جا‎
    ‎. 5 > EYE 4 9 ‏اال‎ : 8 + ¥ SRE A Sen 2% 8 31 RPE) Lf ١ 3 ry SER b> EINE RS Le 3 1 ‏بست فت اس > د‎ 1: RY TR ‏ا ا 31 ني المت‎ : : < ‏الا‎ # lia 1 Lo EERIE ‏شوج‎ ‎oe bs RE rian Toa LL ied x RE GT i. ‏اا‎ cone eR SERIE RE SOE ‏المي وا وق‎ 4 be 7 SE SR SS ¢ . Raa eR = 1 ‏ا الال ال ا‎ 8 BS Sr TRE ‏لاي‎ 8# : ‏ل الات ا امس ا‎ Vea: ‏ال ال ل‎ ‏الا اك اللا لفك‎ Bee ‏ل مح و اا مجحب امسا ل سا اح اا‎ ETT wy Tu RE SERRE Si a BR EE ‏ا‎ 5 ENE = ge i EE RE. a ore REN ‏الم‎ os oy £3 TONE a RR REN ‏ل لد ا‎ BRAT ER ‏ب‎ ‎& : pad ‏ا‎ NEE EEN TE we + & i ‏الت الا ا ااا الا امد‎ cr J ‏ا تج‎ 03 ‏خنع‎ I ‏اح الا ل‎ 3 : SR PRA Ra eR 8 : ‏ال‎ : ‏ا‎ : a oe RR 8 ‏ا م‎ ] 3 a : : : : : : : : : : : :
    "2. ‏همق‎ _ ٠ |: ‏5ط‎ A CE CS SH SSS SNE SE SI OW GN ‏يب«‎ ‎8 aan ‏جم‎ x Lo 3 Bag aa AR day ali
    8 i ‏فت ليت‎ Soin 8 7 ‏ات د ا‎ sn BEY GY ‏تمصي‎ 5 in i N = i N ‏ما ا ااا قار لل‎ 0 bos NY CN 1 ba ‏ا‎ es PONE sel FORE TE ‏ا‎ ‎i A ‏مح الما ا ا ا‎ PAGER ‏ال‎ EE ‏الدج‎ ‎ee GRE CT ERE EE ER eR ‏ارد‎ ‏اتج‎ EE ‏ل‎ <3 & Aenean eo 3 EE 0 ‏السام الا‎ ‏الاجم‎ by ‏المج الع‎ gy i #4 Sees i ‏حي‎ #4 2 boa i Rn EC CH A Food TF A ‏كز عدت جدءةك_د4‎ ARE.
    XE VE VY ‏يال‎ ‎3 Re Se BE ‏ل‎ ‏بعد الحرعة الأوني‎ Sb ‏شكل (أب‎ 1» ‏ا ا‎ ٍ sss HUTR EA ‏لضا‎ ‎1 ‏ا ا د«‎ BS ‏اا العا لضت ال ما‎ 8 3 * 4 ‏ا سا 533 ا ا ا ااا ااا الا الا ا‎ J bx 0 ‏رحب‎ i 5 ‏عب‎ ‎x ¥ Nn 2 1 0 ‏ال ا ا اا ا ا«‎ FS a ‏ل‎ ‎: ‏م يا‎ & ¥ mens AN + ‏ل حا‎ = ST ae 3 RN Ea 3 ‏ب‎ ‏يدا‎ : 8 2 Co Sees sew 3 \ 8 ‏ع اك الي او‎ 1 ‏اناق وح‎ SRR ‏الل وحن الا‎ ‏ا‎ ٍ [3 ANY ‏ااا أ‎ as RE ‏الما امس‎ 85 3 EDN REIN Ce SEES is ES EN ‏اال ا سس ا اا‎ a lt 0 : ‏الا اا ااا‎ Sey ‏اد ال ا‎ wl 5 +4 RR Naw 5 ‏نل‎ SE ‏الم فلا فليا ملف فلي‎ 5 i Be RRR Ge ‏ل‎ ‎3 © RE SRE ‏امي‎ ‎ie i ons RX vy: cE ‏ا‎ ‎3 Eh ‏امك‎ 4+ 4 2# 13 J 2d ‏ا‎ ‎> 8 0 0 + rosy ؟٠ ‏؟ مهس‎ CF ‏جح‎ FTW E ORE BT ‏نم35‎ TT ‏ج؟‎ 5 ONE ‏يوج‎ ‎0 ‏ب اج‎ 8 $a N ‏الأولى‎ Read ‏الأيام بعد‎ ‏مر ليا‎ < ya 3 c ; :
    — 7 7 — i dR LER Ta RN Xx cal ea A i Ne sas ot J Sd 3 ‏مح‎ ‎; He INN = 1 ) N 6: ‏امس لاي 3 ل ا‎ ‏مجم رحج ا د 5 و هما‎ © ‏لح ناي‎ ‏ب-‎ ّ N 8 Nu x x SX \ IX 3 3 ‏ا‎ AR <3 LE . 3 ‏ا ل‎ X 3 he i! bY 8 ‏يا ا‎ RY 5 ‏ا ملل نه‎ <> ‏ا ا أل ] تت‎ ‏"ب .كه‎ Saal ‏اس‎ ‎3 : : 1 ‏اللا‎ RRS on 3 ¥ oy % ; ‏ل‎ Bh SE Se nS <1 | i 0 # 0 4 Ya pe ( v ‏شك‎ {abl} ‏الزمن‎ ‏كك ا مك‎ ١ ‏عو‎ st 8 8 A Ne TCO.
    Fo igus . ‏دام يح ال‎ ‏جل دي‎ Na L SN ‏سج © مجم ركهم‎ CHA TY A ‏ض‎ ‎= 1 0 2 . 2 0 ‏أ‎ ‎p 3 3 Now} ‏ا‎ I TE LN 3 ‏اجو‎ 5 0: 0 8 0 1 AN \ 0 ‏ل‎ ‎3 B WG <6 8 8 8 by : Ne 0 0 AA ES ‏ا الاي ا‎ Xe ‏حي‎ 0 BE “a ded 2 ٍ ‏بس‎ go ins gS ‏ال‎ ied 1 a 3 hE ‏م‎ ‏الزمن (بالأيام)‎ ‏ل‎ 7 (vs
    ال الما ‎TREES N‏ ‎Fe PNET 3. BR‏ ل ‎TRUE‏ ‏م 1 : ‎Tg‏ 1 ] يي ا 5 5 ‎o‏ ‏ل عن اذ اد الا ‎SE‏ : ٍ ‎Noi 3 det TAS LY :‏ اوس ‎aw‏ ٍْ ‎cote hE Ee de tied 8 §‏ : ‎Sa‏ د ‎RE‏ ا ‎ECE‏ الا 2 ا 1 8 اد تيا ‎ATR‏ : 0 ‎sis 1 3‏ 8 امات تتح اله ‎STREETER‏ : ا اس ون مسمس ‎Eh a‏ الما ‎EI SX‏ ‎WFR Be] + Regs Sn SS‏ ٍ ‎We somes‏ ا ا أ التي ا لجا قرا د عدا ‎CREE DA ٠‏ ست أ ‎x SN Se‏ : ا ا ا ‎ok EN ENA AIRES‏ ; ‎Nd Bu‏ % ا ‎gS Sh‏ لالط ها 7 ; 5 ددا ‎METER‏ لببسشغنثللستتتت تا“ 3 ‎ere HET 38 Rempel Tr‏ ٍ ِ ‎RES SPC‏ 1 سد "0 جيب : & 3 0 ا ‎AL TE FY v 3‏ ا + كذ ‎H x CY‏ ]8 شن ‎To‏ ‎TH tk Pe‏ م 5 ‎Ta‏ 2 : ‎Re 38 8‏ ف & ‎A‏ لآ 1 “ياج بعد المجرطا ‎Fe‏ را ‎FERY‏ ‏الأيام + 4 شكل ‎BY‏ { ‎ie EERE ER RE‏ ‎<I 5‏ ‎BT AT ns ¥‏ ا ‎Ch‏ ا ا ‎RRM ST‏ © 5 يا ا لات ا تا ااا اج مج ‎veg gry‏ : الل" 0 § . ااا ل 5 ال ‎ES : i 3‏ = خا لي ا ‎Ted‏ - اي : ا 1 0 8 ال ل ل ا ل الا ‎av 5 EEE NRE Tear‏ ‎SR Be SNC SN NR a‏ ا م ل ‎By tes So NR SER‏ بدي ‎X ENR‏ 3 ل ا ا ‎RY TIN SRR RR‏ = الل ‎a‏ ان ‎RETR‏ ‎We Ga‏ 107 ‎i RS RE Ea‏ 5 ‎eee N 0‏ ال ا ] 7 ‎a by ha‏ ايب ال ل ‎snide Ren _ S Spl ne‏ } 4 ‎NA 2‏ نج حرا اع مي ; & ال ‎I~) En ene‏ ‎ou CAR‏ ا 8 1 ‎oe‏ ال ا لالس ا ٍْ ب التو ا مر امي ااا سه 3« ‎eee,‏ ب . | | : 5 3 ¥ كج وا #ة مجح ‎ha CON SC‏ ‎Tw hs Ak ORK oy‏ الج 5 3 لأيام بعد ‎CAYCE A Red‏ الآيام بعد الجرغة الأوثي شكل ‎A)‏ ‏: = الت اي ‎UR‏ ‏ب ; : الات اطي ا ل 8 * ل : ‎YoYo oa = i eer‏ : 3 ا حا ا الوك ا 1 0 يخا ‎Re‏ ل ال ‎BS Lx‏ ‎i‏ م ‎Ea‏ ا أ ا 8 : امو اا ; ال ا ‎CHa aad Ng RL‏ 5 ا الس اس الا تاي ال #ما الوا ‎Sof RRR ER TRIS‏ ا ‎Ry a 2 Re :‏ ميهي اذ ‎EA I‏ 85 5 . 0-0 اللا تيج اسمن ‎ed‏ التي الوح : ‎fo‏ ‏بل ‎NRA‏ ل ل“ ‎RS‏ يا ل ل ‎RORY vl‏ الول 8 ‎ree.
    RE RETR S Tang‏ : = ‎SR‏ الت حي : ‎i o‏ ‎A ! RARER RS‏ : ل ‎Na I‏ ‎Sng‏ ااا ا 1 0 ‎Sig eee‏ ‎reper‏ "م : ‎J‏ ‎LOT NO IE SL SF RE A P J‏ بجا حم وج جلا ‎Asn RUE RCE ENE FE I‏ ‎yw &‏ امعد ‎et]‏ } الآيام بد الورك الاونين ا ) ‎(z A‏ ا 4 ‎J‏ ا
    لاله الهيلة السعودية الملضية الفكرية ا ‎Sued Authority for intallentual Property‏ ‎RE‏ .¥ + \ ا 0 § 8 ‎Ss o‏ + < م ‎SNE‏ اج > عي كي الج ‎TE I UN BE Ca‏ ‎a‏ ةا ‎ww‏ جيثة > ‎Ld Ed H Ed - 2 Ld‏ وذلك بشرط تسديد المقابل المالي السنوي للبراءة وعدم بطلانها ‎of‏ سقوطها لمخالفتها ع لأي من أحكام نظام براءات الاختراع والتصميمات التخطيطية للدارات المتكاملة والأصناف ع النباتية والنماذج الصناعية أو لائحته التنفيذية. ‎Ad‏ ‏صادرة عن + ب ب ‎٠.‏ ب الهيئة السعودية للملكية الفكرية > > > فهذا ص ب ‎101١‏ .| لريا ‎1*١ v=‏ ؛ المملكة | لعربية | لسعودية ‎SAIP@SAIP.GOV.SA‏
SA516380194A 2014-04-30 2016-10-30 ارتباط جسم مضاد بـ FcRn لعلاج أمراض مناعة ذاتية SA516380194B1 (ar)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201461986742P 2014-04-30 2014-04-30
PCT/KR2015/004424 WO2015167293A1 (en) 2014-04-30 2015-04-30 Antibody binding to fcrn for treating autoimmune diseases

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SA516380194B1 true SA516380194B1 (ar) 2020-10-14

Family

ID=54358928

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SA516380194A SA516380194B1 (ar) 2014-04-30 2016-10-30 ارتباط جسم مضاد بـ FcRn لعلاج أمراض مناعة ذاتية

Country Status (21)

Country Link
US (5) US10544226B2 (ar)
EP (2) EP4241852A3 (ar)
JP (1) JP6449441B2 (ar)
KR (2) KR101954906B1 (ar)
CN (2) CN111138540B (ar)
AU (2) AU2015253915B2 (ar)
CA (2) CA3095295C (ar)
DK (1) DK3137504T3 (ar)
EA (1) EA038470B1 (ar)
ES (1) ES2952583T3 (ar)
FI (1) FI3137504T3 (ar)
HU (1) HUE062403T2 (ar)
IL (2) IL248159B (ar)
MX (2) MX2016014210A (ar)
NZ (2) NZ726089A (ar)
PL (1) PL3137504T3 (ar)
PT (1) PT3137504T (ar)
RS (1) RS64542B1 (ar)
SA (1) SA516380194B1 (ar)
SG (1) SG11201608208VA (ar)
WO (1) WO2015167293A1 (ar)

Families Citing this family (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106957365B (zh) 2016-01-11 2021-03-16 上海交通大学 一种单克隆抗体FnAb8及其应用
EA201892427A1 (ru) 2016-04-25 2019-10-31 ГУМАНИЗИРОВАННЫЕ АНТИ-FcRn АНТИТЕЛА С СОЗРЕВШЕЙ АФФИННОСТЬЮ
DK3491025T3 (da) * 2016-07-29 2024-01-15 Momenta Pharmaceuticals Inc Fcrn-antistoffer og anvendelsesmetoder heraf
JP6827113B2 (ja) 2017-01-21 2021-02-10 広州白雲山漢方現代薬業有限公司Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ Ｈａｎｆａｎｇ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏ．，Ｌｔｄ． シェーグレン症候群の治療におけるペオニフロリン−６’−ｏ−ベンゼンスルホン酸の使用
WO2018229249A1 (en) * 2017-06-15 2018-12-20 Ucb Biopharma Sprl Method for the treatment of immune thrombocytopenia
JP7420720B2 (ja) 2017-12-13 2024-01-23 モメンタ ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド ＦｃＲｎ抗体およびその使用方法
MX2021004351A (es) 2018-10-16 2021-05-31 UCB Biopharma SRL Metodo para el tratamiento de miastenia grave.
BR112021008778A2 (pt) 2018-11-06 2021-08-31 Immunovant Sciences Gmbh Métodos de tratamento da oftalmopatia de graves usando anticorpos anti-fcrn
GB2589049C (en) * 2019-04-11 2024-02-21 argenx BV Anti-IgE antibodies
IL292889A (en) 2019-11-19 2022-07-01 Immunovant Sciences Gmbh Methods for the treatment of warm autoimmune hemolytic anemia using anti-fcrn antibodies
CN114341184B (zh) * 2020-02-10 2023-04-04 北京拓界生物医药科技有限公司 抗FcRn抗体、其抗原结合片段及其医药用途
CN115776879A (zh) * 2020-06-29 2023-03-10 韩兀生物制药股份有限公司 抗fcrn抗体制剂
US20230416355A1 (en) * 2020-08-06 2023-12-28 Stelexis Therapeutics, Llc Il-8 antibodies and methods of use thereof
CN113484526A (zh) * 2021-08-11 2021-10-08 上海迈晋生物医药科技有限公司 一种抗FcRn抗体或其抗原结合片段生物学活性的检测方法
WO2023091920A1 (en) * 2021-11-16 2023-05-25 The University Of Chicago Polypeptides for detection and treatment of coronavirus infection
CN114573698B (zh) * 2022-03-16 2023-01-06 沈阳三生制药有限责任公司 一种FcRn抗原结合蛋白及其制备方法和应用
US11926669B2 (en) 2022-05-30 2024-03-12 Hanall Biopharma Co., Ltd. Anti-FcRn antibody or antigen binding fragment thereof with improved stability
WO2023235679A1 (en) 2022-05-30 2023-12-07 Hanall Biopharma Co., Ltd. Anti-fcrn antibody or antigen binding fragment thereof with improved stability
WO2024023271A1 (en) * 2022-07-27 2024-02-01 Ablynx Nv Polypeptides binding to a specific epitope of the neonatal fc receptor
WO2024052357A1 (en) 2022-09-06 2024-03-14 Immunovant Sciences Gmbh Methods of treating graves' disease using anti-fcrn antibodies
WO2024052358A1 (en) 2022-09-06 2024-03-14 Immunovant Sciences Gmbh Methods of treating chronic inflammatory demyelinating polyneuropathy using anti-fcrn antibodies

Family Cites Families (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5714350A (en) * 1992-03-09 1998-02-03 Protein Design Labs, Inc. Increasing antibody affinity by altering glycosylation in the immunoglobulin variable region
WO2005013912A2 (en) 2003-08-08 2005-02-17 The Research Foundation Of State University Of Newyork Anti-fcrn antibodies for treatment of auto/allo immune conditions
US7662928B2 (en) * 2003-08-08 2010-02-16 The Research Foundation Of State University Of New York Anti-FcRn antibodies for treatment of auto/allo immune conditions
WO2006118772A2 (en) * 2005-04-29 2006-11-09 The Jackson Laboratory Fcrn antibodies and uses thereof
EP1986690A4 (en) 2006-01-25 2009-05-13 Univ New York State Res Found ANTIBODIES AGAINST FCRN FOR THE TREATMENT OF AUTO / ALLO IMMUNOIDES
CN101784664B (zh) 2007-06-01 2013-04-10 Omt公司 用于抑制内源性免疫球蛋白基因和生产转基因人独特型抗体的组合物和方法
EP3670538A1 (en) 2008-04-25 2020-06-24 Dyax Corp. Antibodies against fcrn and use thereof
CA2837527C (en) * 2011-06-02 2019-05-28 Dyax Corp. Fc receptor binding proteins
KR20130071961A (ko) * 2011-12-21 2013-07-01 한올바이오파마주식회사 ＦｃＲｎ 특이적 인간 항체 및 이를 포함하는 자가면역 질환 치료용 조성물
GB201208370D0 (en) * 2012-05-14 2012-06-27 Ucb Pharma Sa Antibodies
MY172430A (en) 2013-04-29 2019-11-25 Hoffmann La Roche Human fcrn-binding modified antibodies and methods of use
KR101815265B1 (ko) * 2013-06-20 2018-01-04 한올바이오파마주식회사 FcRn 특이적 인간 항체 및 이를 포함하는 자가면역 질환 치료용 조성물

Also Published As

Publication number Publication date
IL248159A0 (en) 2016-11-30
CN111138540B (zh) 2023-07-25
NZ737666A (en) 2018-10-26
EP4241852A3 (en) 2023-11-15
KR101889466B1 (ko) 2018-08-21
PT3137504T (pt) 2023-08-18
CN106459215B (zh) 2019-12-24
AU2018203582B2 (en) 2019-05-02
CN111138540A (zh) 2020-05-12
EP3137504A4 (en) 2018-02-28
EP3137504B1 (en) 2023-05-10
ES2952583T3 (es) 2023-11-02
CA3095295A1 (en) 2015-11-05
EA038470B1 (ru) 2021-09-01
RS64542B1 (sr) 2023-09-29
AU2018203582A1 (en) 2018-06-14
CN106459215A (zh) 2017-02-22
DK3137504T3 (da) 2023-08-14
AU2015253915B2 (en) 2018-05-10
IL280613B (en) 2021-12-01
MX2016014210A (es) 2017-05-01
SG11201608208VA (en) 2016-11-29
PL3137504T3 (pl) 2023-10-16
WO2015167293A1 (en) 2015-11-05
IL248159B (en) 2021-02-28
CA2945086C (en) 2020-12-29
CA3095295C (en) 2023-01-10
KR101954906B1 (ko) 2019-03-08
JP6449441B2 (ja) 2019-01-09
US11613578B2 (en) 2023-03-28
US20200109201A1 (en) 2020-04-09
US20170210801A1 (en) 2017-07-27
HUE062403T2 (hu) 2023-10-28
US20230235063A1 (en) 2023-07-27
IL280613A (en) 2021-03-25
US20240092913A1 (en) 2024-03-21
MX2021005193A (es) 2021-09-08
FI3137504T3 (fi) 2023-08-07
US20190135917A1 (en) 2019-05-09
AU2015253915A1 (en) 2016-12-01
BR112016025319A2 (pt) 2017-12-12
KR20160145779A (ko) 2016-12-20
EP4241852A2 (en) 2023-09-13
KR20180093128A (ko) 2018-08-20
NZ726089A (en) 2017-12-22
EP3137504A1 (en) 2017-03-08
JP2017522043A (ja) 2017-08-10
CA2945086A1 (en) 2015-11-05
US10544226B2 (en) 2020-01-28
EA201692192A1 (ru) 2017-04-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
SA516380194B1 (ar) ارتباط جسم مضاد بـ FcRn لعلاج أمراض مناعة ذاتية
US10280207B2 (en) FcRn-specific human antibody and composition for treatment of autoimmune diseases
DK1960432T3 (en) Anti-ICAM-antistof der inducerer apoptose
SA516371109B1 (ar) 1a أجسام مضادة خاصة لمركب ترابطي يشبه عامل تنكرز ورم وتركيباتها واستخدامها
UA126897C2 (uk) Антитіла проти dr5 і способи їх застосування
SA519401906B1 (ar) أجسام مضادة ومتعددات ببتيد موجهة ضد cd127
US10336825B2 (en) Antibody binding to FcRn for treating autoimmune diseases
EP3229829B1 (en) Method for the treatment of idiopathic pulmonary fibrosis
US8828387B2 (en) Antibody having anti-cancer activity
CA3037008A1 (en) Methods for treating cancer with bavituximab based on levels of .beta.2-glycoprotein 1, and assays therefor
CN116323657B (zh) 同时靶向PD-L1和TGFβ的双功能分子及其医药用途
KR20220100880A (ko) 항-fcrn 항체를 이용한 온열 자가면역 용혈성 빈혈 치료 방법
WO2022068894A1 (zh) 同时靶向pd-l1和vegf的双功能分子及其医药用途
WO2021160153A1 (zh) 一种靶向人cd47的单域抗体及其用途
TWI623324B (zh) 用於治療自體免疫病的與fcrn結合的抗體
US20210032340A1 (en) Methods for treating cancer with bavituximab based on levels of beta2-glycoprotein 1, and assays therefor
JP2024520635A (ja) 抗体及びそれを生成する方法
BR112016025319B1 (pt) Anticorpo anti-fcrn isolado, polinucleotídeos, vetor de expressão recombinante, composições e método para detectar fcrn in vitro