KR20220100880A - 항-fcrn 항체를 이용한 온열 자가면역 용혈성 빈혈 치료 방법 - Google Patents

항-fcrn 항체를 이용한 온열 자가면역 용혈성 빈혈 치료 방법 Download PDF

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KR20220100880A
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크리스틴 모렐 코커리
조나단 앤드류 클러프트
윌리엄 토마스 시먼즈 쓰리
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이뮤노반트 사이언시스 게엠베하
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Abstract

본 개시는 신생아 Fc 수용체(FcRn) 에 결합하여 온열 자가면역 용혈성 빈혈을 예방, 조절 또는 치료하는 단리된 항-FcRn 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 이용하는 조성물, 방법, 및 용도에 관한 것이다.

Description

항-FCRN 항체를 이용한 온열 자가면역 용혈성 빈혈 치료 방법
본 개시는 2019년 11월 19일자로 출원된 미국 가출원 제62/937,395호의 우선권의 이익을 청구하며, 이의 전문이 본원에 참조로 포함된다.
본 출원은 ASCII 포맷으로 전자적으로 제출된 서열 목록을 포함하며, 이의 전문이 여기에 참조로 포함된다. 2020년 11월 12일자로 생성된 상기 ASCII 사본은 15193_0005-00304_SL.txt로 명명되며, 크기는 34,226 바이트이다.
본 개시는 신생아 Fc 수용체(neonatal Fc receptor)(FcRn)에 결합하여 온열 자가면역 용혈성 빈혈을 예방, 조절 또는 치료하는 단리된 항-FcRn 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 조성물, 용도, 및 치료 방법에 관한 것이다. 특정 양태에서, 본 개시는 항-FcRn 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하여 온열 자가면역 용혈성 빈혈을 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다. 특정 양태에서, 본 개시는 항-FcRn 항체 또는 이의 항원-결합 단편 및 적어도 하나의 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 온열 자가면역 용혈성 빈혈의 치료 또는 예방용 약학적 조성물을 제공한다.
항체는 특정 항원과 결합하는 면역학적 단백질이다. 인간 및 마우스를 포함한 대부분의 동물에서, 항체는 쌍을 이루는 중쇄 및 경쇄 폴리펩타이드로 구성되며, 각 쇄는 가변 및 불변 영역으로 지칭되는 2개의 구분된 영역으로 이루어져 있다. 중쇄 및 경쇄 가변 영역은 항체 간에 유의한 서열 다양성을 보여주며, 타겟 항원에 대한 결합을 담당한다. 불변 영역은 서열 다양성이 적고, 많은 천연 단백질과 결합하여 중요한 생화학적 이벤트를 유도한다.
정상 조건 하에서, 대부분의 IgG(즉, IgG3 이소타입을 제외한 IgG1,IgG2 및 IgG4)의 평균 혈청 반감기는 인간에서 약 21일이며(Morell et al., J.Clin. Invest. 49(4):673-80, 1970), 이는 다른 혈장 단백질의 혈청 반감기에 비해 연장된 기간이다. IgG의 이러한 연장된 혈청 반감기와 관련하여, 엔도사이토시스에 의해 세포로 들어가는 IgG는 pH 6.0에서 엔도좀 내 신생아 Fc 수용체(FcRn)와 강하게 결합하여 분해성 리소좀 경로를 피할 수 있다(Fc 감마 수용체의 한 유형인 FcRn은 또한 FcRP, FcRB 또는 브람벨 수용체로도 지칭됨). IgG-FcRn 복합체가 세포막으로 순환하면, IgG는 약염기성 pH(~7.4)의 혈류에서 FcRn로부터 빠르게 분리된다. 이 수용체-매개 리사이클링 메커니즘에 의해, FcRn은 리소좀에서의 분해로부터 IgG를 효과적으로 구출하여 IgG의 반감기를 연장시킨다(Roopenian et al., J. Immunol. 170:3528, 2003).
FcRn은 신생아 랫트의 내장에서 확인되었으며, 모유로부터 IgG의 흡수를 매개하고 순환계로 IgG 수송을 촉진하는 기능을 한다. FcRn은 또한 인간의 태반에서 단리되며, 그것은 태아의 순환계로의 모체 IgG의 흡수 및 수송을 매개한다. 성인에서, FcRn은 폐, 장, 신장의 상피 조직, 그리고 비강, 질 및 담도계(biliary tree) 표면을 포함하여 여러 조직에서 발현된다.
FcRn은 내피 및 상피 세포의 엔도좀에 전형적으로 존재하는 비-공유 헤테로다이머이다. FcRn은 3개의 중쇄 알파 도메인(α1, α2 및 α3) 및 1개의 가용성 경쇄 β2-마이크로글로불린(β2m) 도메인을 갖는 막 결합 수용체이다. 구조적으로, 그것은 공통 경쇄로서 β2m을 갖는 주 조직적합성 복합체 클래스 1 분자의 패밀리에 속한다. FcRn 쇄는 분자량이 약 46 kDa이며, α1, α2 및 α3 중쇄 도메인 및 β2m 경쇄 도메인을 포함하고, 단일 당쇄를 갖는 엑토도메인, 단일-통과 막관통 및 상대적으로 짧은 세포질성 꼬리로 구성된다.
IgG 항상성에 대한 FcRn의 기여를 연구하기 위해, 마우스는 β2m 및 FcRn 중쇄를 인코딩하는 유전자의 적어도 한 부분을 "넉아웃"시켜 단백질이 발현되지 않도록 조작되었다. 이들 마우스에서, IgG의 혈청 반감기 및 농도는 극적으로 감소되어 IgG 항상성을 위한 FcRn-의존적 메커니즘이 제안된다. 또한, 항-인간 FcRn 항체가 이들 FcRn 넉아웃 마우스에서 생성될 수 있으며, 그 항체는 FcRn에 대한 IgG의 결합을 방해할 수 있음이 제안되었다. FcRn에 대한 IgG 결합의 억제는 IgG 리사이클링을 방해함으로써 IgG 혈청 반감기를 부정적으로 바꾼다.
자가면역 용혈성 빈혈은 연간 환자 100,000명당 약 1-3명에게 영향을 미치는 희귀하고 이질적인 질병이다(Michel, Expert Rev. Hematol. 4(6):607-18, 2011; Sokol et ak, Br. Med. J.( Clin. Res. Ed.) 282(6281):2023-7, 1981). 이 질병의 병리는 보체 활성화 여부에 관계없이 RBC 항원에 반응하는 자가항체에 의해 촉발된 정상 적혈구(RBC) 파괴 증가에 의해 유발될 수 있다(Barcellini, Transfus. Med. Hemother. 42(5):287-93, 2015). 자가면역 용혈성 빈혈은 생체 내에서 자가항체가 환자의 적혈구에 결합하는 최적 온도에 따라 온열 자가면역 용혈성 빈혈(warm autoimmune hemolytic anemia), 한랭응집소 증후군(cold agglutinin syndrome), 발작성 한랭혈색소뇨(paroxysmal cold hemoglobinuria)의 3가지 주요 유형으로 분류된다. 온열 자가면역 용혈성 빈혈은 자가면역 용혈성 빈혈의 가장 흔한 유형으로 전체 성인 사례의 ~70 내지 ~80%, 소아 사례의 ~50%를 포함한다(Sokol et ak, Br. Med. J.(Clin. Res. Ed.) 282(6281):2023-7, 1981).
온열 자가면역 용혈성 빈혈에서, 자가항체는 약 37°C에서 적혈구와 최적으로 반응한다. 열에 반응하는 IgG에 의해 코팅된 적혈구는 IgG 중쇄에 대한 Fcγ 수용체를 가지고 있는 비장 대식세포에 일반적으로 결합되며, 식세포 작용을 하거나 다음 비장을 통과하는 동안 추가로 파괴되는 미세고정세포를 형성한다(Kalfa, Hematology Am. Soc. Hematol. Educ. Program 2016(l):690-7, 2016). 고농도의 IgG 또는 보체에 친화력이 높은 IgG가 적혈구에 결합할 때 보체(C1q)는 C3b에 결합되고 활성화될 수 있다. C3b-옵소닌 처리된 적혈구는 C3b 수용체를 운반하는 간 대식세포에 의해 식균되어, 적혈구의 파괴에 추가로 기여한다(Barcellini, Transfus. Med. Hemother. 42(5):287-93, 2015; Berentsen, Transfus. Med. Hemother. 42(5):303-10, 2015; LoBuglio et al., Science 158(3808): 1582-5, 1967). 따라서, IgG와 같은 자가항체는 온열 자가면역 용혈성 빈혈의 발병기전 역할을 한다.
다양한 구체예에서, 본 개시는 온열 자가면역 용혈성 빈혈을 앓고 있는 환자를 치료하기 위한 치료 방법, 용도 및 조성물을 제공한다. 본 개시는 보다 구체적으로, 다양한 구체예에서, 치료적 유효량의 항-FcRn 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 환자에게 투여함으로써 온열 자가면역 용혈성 빈혈을 앓고 있는 환자를 치료하는 방법을 제공한다. 다양한 구체예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 약학적 조성물로서 제제화된다. 또한, 본 명세서에 개시된 항체, 항원-결합 단편, 및 약학적 조성물의 치료 용도를 제공한다.
다양한 구체예에서, 본 명세서에 개시된 항체, 항원-결합 단편, 또는 약학적 조성물을 사용한 치료는 환자, 예를 들어, 온열 자가면역 용혈성 빈혈을 앓고 있는 환자, 및/또는 환자의 시료에서 적어도 하나의 자가항체 및/또는 병원성 항체(예를 들어, 적어도 하나의 IgG, 예를 들어, 병원성 IgG(예를 들어, 병원성 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4), 혈청 IgG1, 혈청 IgG2, 혈청 IgG3, 또는 혈청 IgG4)의 수준을 감소시킨다. 다양한 구체예에서, 본 명세서에 개시된 항체, 항원-결합 단편, 또는 약학적 조성물을 사용한 치료는 치료 전 환자 및/또는 시료에서 적어도 하나의 자가항체 및/또는 병원성 항체의 수준에 비해 환자 및/또는 환자의 시료의 적어도 하나의 자가항체 및/또는 병원성 항체(예를 들어, 적어도 하나의 IgG)의 수준을 적어도 약 25%, 약 35%, 약 45%, 약 50%, 약 60%, 약 70%, 또는 약 80%만큼 감소시킨다. 다양한 구체예에서, 본 명세서에 개시된 항체, 항원-결합 단편, 또는 약학적 조성물을 사용한 치료는 환자, 예를 들어, 온열 자가면역 용혈성 빈혈을 앓고 있는 환자, 및/또는 환자의 시료에서 적어도 하나의 IgG의 수준을 감소시킨다. 다양한 구체예에서, 하나 이상의 IgG는 병원성 IgG(예를 들어, 병원성 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4)를 포함한다. 다양한 구체예에서, 적어도 하나의 IgG는 혈청 IgG1을 포함한다. 다양한 구체예에서, 하나 이상의 IgG는 혈청 IgG2를 포함한다. 다양한 구체예에서, 적어도 하나의 IgG는 혈청 IgG3을 포함한다. 다양한 실시양태에서, 적어도 하나의 IgG는 혈청 IgG4를 포함한다.
다양한 구체예에서, 하나 이상의 자가항체 및/또는 병원성 항체(예를 들어, 적어도 하나의 IgG) 수준의 최대 감소는 항체, 항원-결합 단편, 또는 약학적 조성물의 투여 후 약 5일 내지 약 30일 후에 발생한다. 일부 구체예에서, 하나 이상의 자가항체 및/또는 병원성 항체(예를 들어, 하나 이상의 IgG) 수준의 최대 감소는 항체, 항원-결합 단편 또는 약학적 조성물의 단일 투여용량 후 약 8일 후에 발생한다. 일부 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편, 또는 약학적 조성물의 약 3 내지 4회 투여용량(dose) 후에 정상 상태에 도달한다.
다양한 구체예에서, 본 명세서에 개시된 항체, 항원-결합 단편, 또는 약학적 조성물을 사용한 치료는 환자, 예를 들어, 온열 자가면역 용혈성 빈혈을 겪는 환자, 및/또는 환자의 시료에서 총 혈청 IgG의 수준을 감소시킨다. 다양한 구체예에서, 본 명세서에 개시된 항체, 항원-결합 단편, 또는 약학적 조성물을 사용한 치료는 치료 전 환자 및/또는 시료의 총 혈청 IgG 수준에 비해 환자 및/또는 환자의 시료의 총 혈청 IgG 수준을 적어도 약 25%, 약 35%, 약 45%, 약 50%, 약 60%, 약 70%, 또는 약 80%만큼 감소시킨다. 다양한 구체예에서, 본 명세서에 개시된 항체, 항원-결합 단편, 또는 약학적 조성물을 사용한 치료는 치료 전 환자 및/또는 시료의 총 혈청 IgG 수준에 비해 매주 투여의 약 1주 또는 2주 후 환자 및/또는 환자의 시료에서 총 혈청 IgG의 수준을 적어도 약 40%(예를 들어 약 40% 내지 약 50%)만큼 감소시킨다. 다양한 구체예에서, 본 명세서에 개시된 항체, 항원-결합 단편, 또는 약학적 조성물을 사용한 치료는 치료 전 환자 및/또는 시료의 총 혈청 IgG 수준에 비해 매주 투여의 약 3주 후 환자 및/또는 환자의 시료에서 총 혈청 IgG의 수준을 적어도 약 60%(예를 들어, 약 60% 내지 약 70%)만큼 감소시킨다. 다양한 구체예에서, 본 명세서에 개시된 항체, 항원-결합 단편, 또는 약학적 조성물을 사용한 치료는 치료 전 환자 및/또는 시료의 총 혈청 IgG의 수준에 비해 매주 투여의 약 5주 후 환자 및/또는 환자의 시료에서 총 혈청 IgG의 수준을 적어도 약 70%(예를 들어, 약 70% 내지 약 80%)만큼 감소시킨다. 다양한 구체예에서, 총 혈청 IgG 수준의 최대 감소는 항체, 항원-결합 단편 또는 약학적 조성물의 투여 후 약 5일 내지 약 30일 후에 발생한다. 다양한 구체예에서, 총 혈청 IgG 수준의 최대 감소는 항체, 항원-결합 단편 또는 약학적 조성물의 약 3 내지 5회 투여용량 후(예를 들어, 약 4회 투여용량 후) 발생한다.
다양한 구체예에서, 본 명세서에 개시된 항체, 항원-결합 단편, 또는 약학적 조성물을 사용한 치료는 환자, 예를 들어, 온열 자가면역 용혈성 빈혈을 겪는 환자 및/또는 환자의 시료에서 헤모글로빈 수준을 증가시킨다. 다양한 구체예에서, 본 명세서에 개시된 항체, 항원-결합 단편, 또는 약학적 조성물을 사용한 치료는 치료 전 환자 및/또는 시료의 헤모글로빈 수준에 비해 환자 및/또는 환자의 시료에서 헤모글로빈의 수준을 적어도 약 5%, 약 10%, 약 15%, 또는 약 20%(예를 들어, 약 5% 내지 약 30%) 증가시킨다. 다양한 구체예에서, 본 명세서에 개시된 항체, 항원 결합 단편, 또는 약학적 조성물을 사용한 치료는 치료 전 환자 및/또는 시료의 헤모글로빈 수준에 비해 매주 투여의 약 1 또는 2주 후 환자 및/또는 환자의 시료에서 헤모글로빈의 수준을 적어도 약 10%(예를 들어, 약 10% 내지 약 15%) 증가시킨다. 다양한 구체예에서, 본 명세서에 개시된 항체, 항원-결합 단편, 또는 약학적 조성물을 사용한 치료는 치료 전 환자 및/또는 시료의 헤모글로빈 수준에 비해 매주 투여의 약 1주 또는 2주 후 환자 및/또는 환자의 시료에서 헤모글로빈의 수준을 적어도 약 20%(예를 들어, 약 20% 내지 약 25%) 증가시킨다. 일부 구체예에서, 환자 및/또는 환자의 시료에서 헤모글로빈 수준의 증가(예를 들어, 약 10%, 약 20% 또는 그 이상의 증가)는 전체 치료 기간 또는 그의 일부 동안 유지된다. 일부 구체예에서, 환자 및/또는 환자의 시료에서 헤모글로빈 수준의 증가(예를 들어, 약 10%, 약 20% 또는 그 이상의 증가)는 적어도 2, 3, 또는 4주 동안 유지된다(예를 들어, 4주 이상). 일부 구체예에서, 환자 및/또는 환자의 시료에서 헤모글로빈 수준의 증가(예를 들어, 약 10%, 약 20% 또는 그 이상의 증가)는 약 2 내지 약 6주 동안 유지된다.
다양한 구체예에서, 본 개시는 온열 자가면역 용혈성 빈혈을 치료 또는 예방하기 위한 치료 방법, 용도, 및 조성물을 제공한다.
다양한 구체예에서, 본 개시는 (i) 치료적 유효량의 항-FcRn 항체 또는 이의 항원-결합 단편; 또는 (ii) 적어도 하나의 약학적으로 허용 가능한 담체 및 치료적 유효량의 항-FcRn 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약학적 조성물을 환자에게 투여하는 것을 포함하는 이를 필요로 하는 환자에서 온열 자가면역 용혈성 빈혈을 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다.
다양한 구체예에서, 본 개시는 이를 필요로 하는 환자에서 온열 자가면역 용혈성 빈혈을 치료 또는 예방하는 방법에 사용하기 위한 항-FcRn 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 제공하며, 상기 방법은 (i) 치료적 유효량의 항체 또는 항원-결합 단편, 또는 (ii) 적어도 하나의 약학적으로 허용 가능한 담체 및 치료적 유효량의 항체 또는 항원-결합 단편을 포함하는 약학적 조성물을 환자에게 투여하는 것을 포함한다.
다양한 구체예에서, 본 개시는 (i) 치료적 유효량의 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 또는 (ii) 적어도 하나의 약학적으로 허용 가능한 담체 및 치료적 유효량의 항체 또는 항원-결합 단편을 포함하는 약학적 조성물을 환자에게 투여하는 것을 포함하는 이를 필요로 하는 환자에서 온열 자가면역 용혈성 빈혈을 치료 또는 예방하는 방법에 있어서의 항-FcRn 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 용도를 제공한다.
다양한 구체예에서, 본 개시는 (i) 치료적 유효량의 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 또는 (ii) 적어도 하나의 약학적으로 허용 가능한 담체 및 치료적 유효량의 항체 또는 항원-결합 단편을 포함하는 약학적 조성물을 환자에게 투여하는 것을 포함하는 이를 필요로 하는 환자에서 온열 자가면역 용혈성 빈혈을 치료 또는 예방하는 의약의 제조에 있어서의 항-FcRn 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 용도를 제공한다.
다양한 구체예에서, 본 개시는 이를 필요로 하는 환자에서 온열 자가면역 용혈성 빈혈의 치료 또는 예방에 항체 또는 항원-결합 단편을 사용하기 위한, 항-FcRn 항체 또는 이의 항원-결합 단편 및 설명서를 포함하는 키트를 제공한다.
다양한 구체예에서, 본 개시는 이를 필요로 하는 환자에서 온열 자가면역 용혈성 빈혈의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 약학적 조성물을 제공하며, 약학적 조성물은 적어도 하나의 약학적으로 허용 가능한 담체 및 항-FcRn 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다.
본 명세서에서 개시된 치료 방법, 용도 및 조성물의 일부 구체예에서(예를 들어, 온열 자가면역 용혈성 빈혈의 치료 또는 예방을 위한), 항체 또는 항원-결합 단편은 서열번호: 27의 아미노산 서열(HCDR1), 서열번호: 28의 아미노산 서열(HCDR2) 및 서열번호: 29의 아미노산 서열(HCDR3)을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호: 30의 아미노산 서열(LCDR1), 서열번호: 31의 아미노산 서열(LCDR2) 및 서열번호: 32의 아미노산 서열(LCDR3)을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 서열번호: 21의 아미노산 서열(HCDR1), 서열번호: 22의 아미노산 서열(HCDR2) 및 서열번호: 23의 아미노산 서열(HCDR3)을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호: 24의 아미노산 서열(LCDR1), 서열번호: 25의 아미노산 서열(LCDR2) 및 서열번호: 26의 아미노산 서열(LCDR3)을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 약 170 mg 내지 약 1500 mg이다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원 결합 단편의 치료적 유효량은 약 300 mg 내지 약 800 mg이다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 약 340 mg 또는 약 680 mg이다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 매주 1회 투여되는 약 340 mg 또는 약 680 mg이다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 피하 주사로 매주 1회 이상 투여되는 약 340 mg 또는 약 680 mg이다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원 결합 단편의 치료적 유효량은 적어도 2주(예를 들어, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 7주, 8주, 10주, 12주 또는 그 이상) 동안 매주 1회 투여되는 약 340 mg 또는 약 680 mg(예를 들어, 약 680 mg)이다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 적어도 4주 동안 매주 1회 투여되는 약 340 mg 또는 약 680 mg(예를 들어, 약 680 mg)이다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 적어도 7주 동안 매주 1회 투여되는 약 340 mg 또는 약 680 mg (예를 들어, 약 680 mg)이다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원 결합 단편의 치료적 유효량은 적어도 12주 동안 매주 1회 투여되는 약 340 mg 또는 약 680 mg(예를 들어, 약 680 mg)이다.
본 명세서에서 개시된 치료방법, 용도 및 조성물의 다양한 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 본 명세서에 참조로 포함되는, 국제출원 제PCT/KR2015/004424호(공개번호 제WO 2015/167293 A1호)에 개시된 항체 또는 항원-결합 단편 중 하나이다.
본 명세서에서 개시된 치료 방법, 용도 및 조성물의 다양한 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은
서열번호: 21, 24, 27, 30, 33, 36, 39 및 42로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 아미노산 서열을 포함하는 CDR1;
서열번호: 22, 25, 28, 31, 34, 37, 40 및 43으로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 아미노산 서열을 포함하는 CDR2; 및
서열번호: 23, 26, 29, 32, 35, 38, 41 및 44로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 아미노산 서열을 포함하는 CDR3을 포함한다.
본 명세서에서 개시된 치료 방법, 용도 및 조성물의 다양한 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은
서열번호: 21, 24, 27, 30, 33, 36, 39 및 42로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR1;
서열번호: 22, 25, 28, 31, 34, 37, 40 및 43으로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR2; 및
서열번호: 23, 26, 29, 32, 35, 38, 41 및 44로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR3을 포함한다.
다양한 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 서열번호: 27의 아미노산 서열(HCDR1), 서열번호: 28의 아미노산 서열(HCDR2) 및 서열번호: 29의 아미노산 서열(HCDR3)을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호: 30의 아미노산 서열(LCDR1), 서열번호: 31의 아미노산 서열(LCDR2) 및 서열번호: 32의 아미노산 서열(LCDR3)을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 다양한 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 서열번호: 21의 아미노산 서열(HCDR1), 서열번호: 22의 아미노산 서열(HCDR2) 및 서열번호: 23의 아미노산 서열(HCDR3)을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호: 24의 아미노산 서열(LCDR1), 서열번호: 25의 아미노산 서열(LCDR2) 및 서열번호: 26의 아미노산 서열(LCDR3)을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
본 명세서에서 개시된 치료 방법, 용도 및 조성물의 다양한 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 하나 이상의 중쇄 가변 영역 및 하나 이상의 경쇄 가변 영역을 포함하며, 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역은 서열번호: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18 및 20의 아미노산 서열로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 아미노산 서열을 포함한다.
다양한 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 서열번호: 4 또는 서열번호: 6의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호: 14 또는 서열번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 다양한 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 서열번호: 6의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변영역을 포함한다. 다양한 구체예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 서열번호: 4의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호: 14의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변영역을 포함한다. 다양한 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 서열번호: 2의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변영역을 포함한다.
본 명세서에서 개시된 치료 방법, 용도 및 조성물의 다양한 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 하나 이상의 중쇄 가변 영역 및 하나 이상의 경쇄 가변 영역을 포함하며, 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역은 서열번호: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18 및 20의 아미노산 서열로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 다양한 구체예에서, 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역은 서열번호: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18 및 20의 아미노산 서열로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 아미노산 서열과 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
다양한 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 서열번호: 6과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호: 16과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 다양한 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 서열번호: 4와 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호: 14와 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 다양한 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 서열번호: 2와 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호: 12와 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
다양한 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 예를 들어, 표면 플라즈몬 공명(SPR)에 의해 측정된 바와 같이, pH 6.0 또는 7.4에서 약 0.01 내지 약 2 nM의 KD(해리상수)로 FcRn에 결합한다. 다양한 구체예에서, KD는 표면 플라즈몬 공명(예를 들어, 인간 FcRn-고정된 표면 플라즈몬 공명)에 의해 측정된다. 다양한 구체예에서, KD는 인간 FcRn-고정된 표면 플라즈몬 공명에 의해 측정된다.
다양한 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 본 명세서에서 개시되거나 또는 참조로 포함된 항체 또는 항원-결합 단편 중 임의의 하나이다.
본 명세서에서 개시된 치료 방법, 용도 및 조성물의 다양한 구체예에서, 환자 또는 환자의 시료(예를 들어, 온열 자가면역 용혈성 빈혈을 겪는 환자)는 검출 가능한 수준의 항-적혈구 IgG(항-RBC IgG)를 가지고 있다. 일부 구체예에서, 항-RBC IgG는 항-RBC IgG1이다. 일부 구체예에서, 항-RBC IgG는 항-RBC IgG2이다. 일부 구체예에서, 항-RBC IgG는 항-RBC IgG3이다. 일부 구체예에서, 항-RBC IgG는 항-RBC IgG4이다.
본 명세서에서 개시된 치료 방법, 용도 및 조성물의 다양한 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편 또는 약학적 조성물은 피하로 투여된다. 다양한 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편 또는 약학적 조성물은 1회 이상의 피하 주사로 투여된다. 다양한 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편, 또는 약학적 조성물은 1회 이상의 정맥내 주사로서 투여된다. 다양한 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편, 또는 약학적 조성물은 사전에 정맥내 투여(예를 들어, 정맥내 유도) 없이 1회 이상의 피하주사로 투여된다. 다양한 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편 또는 약학적 조성물은 투여 전 주사기에 포함된다. 다양한 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편 또는 약학적 조성물은 단회(즉, 1회) 피하 주사로 투여된다. 다양한 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편 또는 약학적 조성물은 2회 이상(예를 들어, 2회)의 연속 피하 주사로 투여된다. 다양한 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편 또는 약학적 조성물은 고정된 투여용량(dose)으로 투여된다.
일부 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편, 또는 약학적 조성물은 단일 투여용량으로서 1회 또는 매주 1회 환자에게 투여된다. 일부 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편, 또는 약학적 조성물은 단일 피하 주사로서 매주 1회 환자에게 투여된다. 일부 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편, 또는 약학적 조성물은 2회 이상의 연속적인 피하 주사로서 매주 1회 환자에게 투여된다. 일부 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편, 또는 약학적 조성물은 적어도 2주, 적어도 3주, 적어도 4주, 적어도 5주, 적어도 6주, 적어도 7주, 적어도 8주, 적어도 9주, 적어도 10주, 적어도 12주, 적어도 20주, 적어도 24주, 적어도 30주, 적어도 40주, 적어도 50주, 적어도 60주, 적어도 70주, 적어도 76주, 적어도 80주, 또는 그 이상 동안 매주 1회 환자에게 투여된다. 일부 구체예에서, 항체, 항원 결합 단편, 또는 약학적 조성물은 적어도 4주 동안 매주 1회 환자에게 투여된다. 일부 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편, 또는 약학적 조성물은 6 내지 76주 동안 또는 그 사이의 임의의 기간 동안 매주 1회 환자에게 투여된다. 일부 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편, 또는 약학적 조성물은 적어도 6주 동안 매주 1회 환자에게 투여된다. 일부 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편, 또는 약학적 조성물은 적어도 7주 동안 매주 1회 환자에게 투여된다. 일부 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편, 또는 약학적 조성물은 적어도 12주 동안 매주 1회 환자에게 투여된다. 일부 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편, 또는 약학적 조성물은 적어도 24주 동안 매주 1회 환자에게 투여된다. 일부 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편, 또는 약학적 조성물은 적어도 76주 동안 매주 1회 환자에게 투여된다. 다양한 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편 또는 약학적 조성물은 온열 자가 면역 용혈성 빈혈의 하나 이상의 증상을 치료, 예방, 중증도 감소, 발병 지연, 및/또는 발생 위험 감소에 충분할 때까지 매주 1회 환자에게 투여된다.
일부 구체예에서, 환자는 온열 자가면역 용혈성 빈혈을 갖는다. 일부 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편, 또는 약학적 조성물은 적어도 4주 동안 단일 피하 주사로서 매주 1회 환자에게 투여된다(예를 들어, 약 340 mg의 투여용량으로). 일부 구체예에서, 항체, 항원 결합 단편, 또는 약학적 조성물은 적어도 7주 동안 단일 피하 주사로서 매주 1회 환자에게 투여된다(예를 들어, 약 340 mg의 투여용량으로). 일부 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편, 또는 약학적 조성물은 적어도 12주 동안 단일 피하 주사로서 매주 1회 환자에게 투여된다(예를 들어, 약 340 mg의 투여용량으로). 일부 구체예에서, 항체, 항원 결합 단편, 또는 약학적 조성물은 적어도 4주 동안 2회 이상(예를 들어, 2회) 연속적인 피하 주사로서 매주 1회 환자에게 투여된다(예를 들어, 약 680 mg의 투여용량으로). 일부 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편, 또는 약학적 조성물은 적어도 7주 동안 2회 이상(예를 들어, 2회) 연속 피하 주사로서 매주 1회 환자에게 투여된다(예를 들어, 약 680 mg의 투여용량으로). 일부 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편, 또는 약학적 조성물은 적어도 12주 동안 2회 이상(예를 들어, 2회) 연속적인 피하 주사로서 매주 1회 환자에게 투여된다(예를 들어, 약 680 mg의 투여용량으로). 일부 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편, 또는 약학적 조성물은 환자의 온열 자가면역 용혈성 빈혈의 하나 이상의 증상을 치료, 예방, 중증도 감소, 발병 지연 및/또는 발생 위험 감소에 충분할 때까지 1회 이상의 피하 주사로서 매주 1회 환자에게 투여된다. 일부 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편, 또는 약학적 조성물은 약 340 mg 또는 약 680 mg의 투여용량으로 환자에게 투여된다.
일부 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편, 또는 약학적 조성물은 매 2주마다 1회(격주로) 환자에게 투여된다. 일부 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편, 또는 약학적 조성물은 단일 피하 주사로서 2주마다 1회 환자에게 투여된다. 일부 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편, 또는 약학적 조성물은 2회 이상의 연속적인 피하 주사로서 2주마다 1회 환자에게 투여된다. 일부 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편, 또는 약학적 조성물은 적어도 2주, 적어도 4주, 적어도 6주, 적어도 8주, 적어도 10주, 적어도 12주, 적어도 20주, 적어도 24주, 적어도 30주, 적어도 40주, 적어도 50주, 적어도 60주, 적어도 70주, 적어도 76주, 적어도 80주, 또는 그 이상 동안 2주마다 1회 환자에게 투여된다. 일부 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편, 또는 약학적 조성물은 6 내지 76주 동안 또는 그 사이의 임의의 기간 동안 2주마다 1회 환자에게 투여된다. 일부 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편, 또는 약학적 조성물은 적어도 6주 동안 2주마다 1회 환자에게 투여된다. 일부 실시양태에서, 항체, 항원-결합 단편, 또는 약학적 조성물은 적어도 12주 동안 2주마다 1회 환자에게 투여된다. 일부 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편, 또는 약학적 조성물은 적어도 24주 동안 2주마다 1회 환자에게 투여된다. 일부 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편, 또는 약학적 조성물은 적어도 76주 동안 2주마다 1회 환자에게 투여된다. 일부 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편 또는 약학적 조성물은 온열 자가면역 용혈성 빈혈의 하나 이상의 증상을 치료, 예방, 중증도 감소, 발병 지연 및/또는 발생 위험 감소에 충분할 때까지 2주마다 1회 환자에게 투여된다.
일부 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편, 또는 약학적 조성물은 매달 1회 환자에게 투여된다. 일부 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편, 또는 약학적 조성물은 단일 피하 주사로서 매달 1회 환자에게 투여된다. 일부 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편, 또는 약학적 조성물은 2회 이상의 연속 피하 주사로서 매달 1회 환자에게 투여된다. 일부 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편, 또는 약학적 조성물은 적어도 1개월, 적어도 2개월, 적어도 3개월, 적어도 4개월, 적어도 5개월, 적어도 6개월, 적어도 7개월, 적어도 8개월, 적어도 9개월, 적어도 10개월, 적어도 11개월, 적어도 12개월, 적어도 18개월, 적어도 24개월, 적어도 30개월, 적어도 36개월, 또는 그 이상 동안 매달 1회 환자에게 투여된다. 일부 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편 또는 약학적 조성물은 온열 자가면역 용혈성 빈혈의 하나 이상의 증상을 치료, 예방, 중증도 감소, 발병 지연 및/또는 발생 위험 감소에 충분할 때까지 매달 1회 환자에게 투여된다.
일부 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편, 또는 약학적 조성물은 약 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 14일, 1주, 2주, 3주, 4주, 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 6 개월, 7개월, 8개월, 9개월, 10개월, 11개월, 12개월, 18개월, 24개월, 30개월, 36개월, 또는 그 이상의 기간에 걸쳐 1회 또는 1회 초과로 환자에게 투여된다.
다양한 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편 또는 약학적 조성물은 환자에 의해 자가-투여된다. 다양한 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편 또는 약학적 조성물은 집에서 환자에게 자가-투여된다. 다양한 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편 또는 약학적 조성물은 치료 임상의에 의해 투여된다. 다양한 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편 또는 약학적 조성물은 예를 들어, 단일 약제로 단독 투여된다. 다양한 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편 또는 약학적 조성물은 적어도 하나의 추가 치료제와 함께 병용 투여된다.
본 명세서에서 개시된 치료 방법, 용도 및 조성물의 다양한 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 약 170 mg 내지 약 300 mg 이다. 다양한 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 약 300 mg 내지 약 500 mg 이다. 다양한 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 약 500 mg 내지 약 700 mg 이다. 다양한 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 약 700 mg 내지 약 900 mg 이다. 다양한 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 약 900 mg 내지 약 1100 mg 이다. 다양한 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 약 1100 mg 내지 약 1300 mg 이다. 다양한 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 약 1300 mg 내지 약 1500 mg 이다. 다양한 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 환자 및/또는 환자의 시료에서 적어도 하나의 자가항체 및/또는 병원성 항체(예를 들어, 적어도 하나의 IgG)의 수준을 적어도 약 25%, 약 35%, 약 45%, 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80%, 또는 그 이상 감소시키는 데 필요한 양이다. 다양한 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 환자 및/또는 환자의 시료에서 총 혈청 IgG의 수준을 적어도 약 25%, 약 35%, 약 45%, 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80%, 또는 그 이상 감소시키는 데 필요한 양이다. 다양한 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 환자 및/또는 환자의 시료에서 헤모글로빈의 수준을 약 5%, 약 10%, 약 15%, 약 20% 이상 증가시키는 데 필요한 양이다.
본 명세서에서 개시된 치료 방법, 용도 및 조성물의 다양한 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 약 300 mg 내지 약 900 mg 이다. 다양한 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 매주 1회 또는 2주마다 1회 투여되는 약 300 mg 내지 900 mg 이다. 다양한 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 약 300 mg 내지 약 400 mg, 약 400 mg 내지 약 500 mg, 약 500 mg 내지 약 600 mg, 약 600 mg 내지 약 700 mg, 700 mg 내지 약 800 mg, 또는 약 800 mg 내지 약 900 mg 이다. 다양한 구체예에서, 항체 또는 항원 결합 단편의 치료적 유효량은 매주 1회 또는 2주마다 1회 투여되는 약 300 mg 내지 약 400 mg, 약 400 mg 내지 약 500 mg, 약 500 mg 내지 약 600 mg, 약 600 mg 내지 약 700 mg, 약 700 mg 내지 800 mg, 또는 약 800 mg 내지 약 900 mg 이다.
다양한 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 약 300 mg 내지 약 400 mg 이다(예를 들어, 약 300 mg 내지 약 350 mg, 예를 들어, 약 340 mg). 다양한 구체예에서, 항체 또는 항원 결합 단편의 치료적 유효량은 약 340 mg이다. 다양한 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 매주 1회 투여되는 약 340 mg이다. 다양한 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 단일 피하 주사로서 매주 1회 투여되는 약 340 mg이다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 적어도 2주 동안(예를 들어, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 7주, 8주, 10주, 12주 또는 그 이상) 매주 1회 투여되는 약 340 mg이다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 적어도 4주 동안 매주 1회 투여되는 약 340 mg이다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 적어도 7주 동안 매주 1회 투여되는 약 340 mg이다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 적어도 12주 동안 매주 1회 투여되는 약 340 mg이다.
다양한 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 약 650 mg 내지 약 750 mg(예를 들어, 약 650 mg 내지 약 700 mg, 예를 들어, 약 680 mg)이다. 다양한 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 약 680 mg이다. 다양한 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 매주 1회 투여되는 약 680 mg이다. 다양한 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 2회 이상(예를 들어, 2회) 연속 피하 주사로서 매주 1회 투여되는 약 680 mg이다. 다양한 구체예에서, 각각의 피하 주사는 대략 동일한 양(예를 들어, 약 340mg)의 항체 또는 항원 결합 단편을 포함한다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 적어도 2주 동안(예를 들어, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 7주, 8주, 10주, 12주 또는 그 이상) 매주 1회 투여되는 약 680 mg이다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 적어도 4주 동안 매주 1회 투여되는 약 680 mg이다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 적어도 7주 동안 매주 1회 투여되는 약 680 mg이다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 적어도 12주 동안 매주 1회 투여되는 약 680 mg이다.
본 명세서에서 개시된 치료 방법, 용도 및 조성물의 다양한 구체예에서, 본 개시에 따른 항체, 항원-결합 단편 또는 약학적 조성물을 이용한 치료는 환자 및/또는 환자의 시료(예를 들어, 온열 자가면역 용혈성 빈혈을 겪는 환자)에서 적어도 하나의 자가항체 및/또는 병원성 항체(예를 들어, 적어도 하나의 IgG)의 수준을 감소시킨다. 일부 구체예에서, 치료는 환자 및/또는 환자의 시료에서 적어도 하나의 자가항체 및/또는 병원성 항체(예를 들어, 적어도 하나의 IgG)의 수준을, 즉, 치료 전 환자 및/또는 시료에서 적어도 하나의 자가항체 및/또는 병원성 항체의 수준에 비해 적어도 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 또는 약 90% 감소시킨다. 일부 구체예에서, 치료는 환자 및/또는 환자의 시료에서 적어도 하나의 자가항체 및/또는 병원성 항체(예를 들어, 적어도 하나의 IgG)의 수준을, 즉, 치료 전 환자 및/또는 시료에서 적어도 하나의 자가항체 및/또는 병원성 항체의 수준에 비해 적어도 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 또는 약 90% 감소시킨다. 일부 구체예에서, 적어도 하나 이상의 자가항체 및/또는 병원성 항체(예를 들어, 적어도 하나의 IgG)의 수준은 치료 시작 시 및/또는 치료 시작 후 약 1주, 약 2주, 약 3주, 약 4주, 약 5주, 약 6주, 약 7주, 및/또는 약 8주 후에 측정된다. 일부 구체예에서, 환자에서 적어도 하나의 자가항체 및/또는 병원성 항체 (예를 들어, 적어도 하나의 IgG)수준의 최대 감소는 항체, 항원 결합 단편, 또는 약학적 조성물의 투여 후 약 5일 내지 약 40일 또는 약 5일 내지 약 30일 후에 발생한다. 일부 구체예에서, 환자에서 적어도 하나의 자가항체 및/또는 병원성 항체(예를 들어, 적어도 하나의 IgG) 수준의 최대 감소는 항체, 항원-결합 단편, 또는 약학적 조성물의 투여 후 약 15일 내지 약 30일 후에 발생한다.
일부 구체예에서, 적어도 하나의 IgG는 병원성 IgG(예를 들어, 병원성 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4)를 포함한다. 일부 구체예에서, 적어도 하나의 IgG는 항-RBC IgG(예를 들어, 항-RBC IgG1, 항-RBC IgG2, 항-RBC IgG3, 및/또는 항-RBC IgG4)를 포함한다. 일부 구체예에서, 적어도 하나의 IgG는 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4를 포함한다. 일부 구체예에서, 적어도 하나의 IgG는 혈청 IgG1을 포함한다. 일부 구체예에서, 적어도 하나의 IgG는 혈청 IgG2를 포함한다. 일부 구체예에서, 적어도 하나의 IgG는 혈청 IgG3을 포함한다. 일부 구체예에서, 적어도 하나의 IgG는 혈청 IgG4를 포함한다.
본 명세서에서 개시된 치료 방법, 용도 및 조성물의 다양한 구체예에서, 항-FcRn 항체 또는 항원-결합 단편, 또는 약학적 조성물을 이용한 치료는 환자, 예를 들어, 온열 자가면역 용혈성 빈혈을 겪는 환자, 및/또는 환자의 시료에서 총 혈청 IgG의 수준을 감소시킨다. 일부 구체예에서, 치료는 환자 및/또는 환자의 시료에서 총 혈청 IgG의 수준을, 즉, 치료 전 환자 및/또는 시료의 총 혈청 IgG 수준에 비해 적어도 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85 % 또는 약 90% 감소시킨다. 일부 구체예에서, 치료는 환자 및/또는 환자의 시료에서 총 혈청 IgG의 수준을, 즉, 치료 전 환자 및/또는 시료의 총 혈청 IgG 수준에 비해 적어도 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 또는 약 90% 감소시킨다. 다양한 구체예에서, 치료는 매주 투여 약 1 또는 2주 후에 환자 및/또는 환자의 시료에서 총 혈청 IgG의 수준을, 즉, 치료 전 환자 및/또는 시료의 총 혈청 IgG 수준에 비해 적어도 약 40%(예를 들어, 약 40% 내지 약 50%) 감소시킨다. 다양한 구체예에서, 치료는 매주 투여 약 3주 후에 환자 및/또는 환자의 시료에서 총 혈청 IgG의 수준을, 즉, 환자의 총 혈청 IgG 수준에 비해 적어도 약 60%(예를 들어, 약 60% 내지 약 70%) 감소시킨다. 다양한 구체예에서, 치료는 매주 투여 약 5주 후에 환자 및/또는 환자의 시료에서 총 혈청 IgG의 수준을, 즉, 환자의 총 혈청 IgG 수준에 비해 적어도 약 70%(예를 들어, 약 70% 내지 약 80%) 감소시킨다. 일부 구체예에서, 총 혈청 IgG의 수준은 치료 시작 시 및/또는 치료 시작 후 약 1주, 약 2주, 약 3주, 약 4주, 약 5주, 약 6주, 약 7주, 및/또는 약 8주 후에 측정된다. 일부 구체예에서, 환자에서 총 혈청 IgG 수준의 최대 감소는 항체, 항원-결합 단편, 또는 약학적 조성물의 투여 후 약 5일 내지 약 40일 또는 약 5일 내지 약 30일 후에 발생한다. 일부 구체예에서, 환자의 총 혈청 IgG 수준의 최대 감소는 항체, 항원-결합 단편, 또는 약학적 조성물의 투여 후 약 15일 내지 약 30일 후에 발생한다. 일부 구체예에서, 총 혈청 IgG 수준의 최대 감소는 항체, 항원-결합 단편, 또는 약학적 조성물의 약 3 내지 5회 투여용량 후(예를 들어, 약 4회 투여용량 후) 발생한다.
본 명세서에서 개시된 치료 방법, 용도 및 조성물의 다양한 구체예에서, 항-FcRn 항체 또는 항원-결합 단편, 또는 약학적 조성물을 이용한 치료는 환자, 예를 들어, 온열 자가면역 용혈성 빈혈을 겪는 환자, 및/또는 환자의 시료에서 헤모글로빈의 수준을 증가시킨다. 다양한 구체예에서, 치료는 환자 및/또는 환자의 시료에서 헤모글로빈의 수준을, 즉, 치료 전 환자 및/또는 시료의 헤모글로빈 수준에 비해 적어도 약 5%, 약 10%, 약 15%, 또는 약 20%(예를 들어, 약 5% 내지 약 30%) 증가시킨다. 다양한 구체예에서, 치료는 매주 투여 약 1 또는 2주 후에 환자 및/또는 환자의 시료에서 헤모글로빈의 수준을, 즉, 치료 전 환자 및/또는 시료의 헤모글로빈 수준에 비해 적어도 약 10%(예를 들어, 약 5% 내지 약 30%) 증가시킨다. 다양한 구체예에서, 치료는 매주 투여의 약 1주 또는 2주 후 환자 및/또는 환자의 시료에서 헤모글로빈의 수준을, 즉, 치료 전 환자 및/또는 시료의 헤모글로빈 수준에 비해 적어도 약 20%(예를 들어, 약 20% 내지 약 25%) 증가시킨다. 일부 구체예에서, 환자 및/또는 환자의 시료(예를 들어, 약 10%, 약 20% 또는 그 이상의 증가)에서 헤모글로빈 수준의 증가는 전체 치료 기간 또는 그의 일부 동안 유지된다. 일부 구체예에서, 환자 및/또는 환자의 시료(예를 들어, 약 10%, 약 20% 또는 그 이상의 증가)에서 헤모글로빈 수준의 증가는 적어도 2, 3, 또는 4주(예를 들어, 4주 이상) 동안 유지된다. 일부 구체예에서, 환자 및/또는 환자의 시료(예를 들어, 약 10%, 약 20% 또는 그 이상의 증가)에서 헤모글로빈 수준의 증가는 약 2 내지 약 6주 동안 유지된다.
도 1은 CHO-S 세포를 이용한 항체 발현과, Protein A 정제를 통해 확보된 HL161A, HL161B, HL161C 및 HL161D 항체 단백질을 SDS-PAGE 젤 상에서 환원 또는 비-환원 상태로 분석한 결과를 나타내는 도면으로 각각의 HL161 항체들은 비-환원 상태에서 약 160 kDa의 완전한 형태의 인간 IgG1 구조를 가지며, 환원 상태에서, 중쇄는 약 55 kDa, 경쇄는 약 25 kDa으로 전형적인 항체 구조로 이루어졌음을 확인하였다. 도 1에서, Lane 1은 분자량(M.W.) 마커를 나타내고, Lane 2는 2 ㎍의 비-환원된(*NEM-처리된) 항체 및 Lane 3은 2 ㎍의 환원된 항체를 나타낸다.
도 2a 내지 도 2h는 FcRn에 결합하는 4종의 항체(HL161A, HL161B, HL161C 및 HL161D)의 키네틱 해리상수(Kinetic Dissociation, KD)를 측정하기 위해 표면 플라즈마 공명(SPR) 시스템을 이용하여 수행한 분석 결과를 나타낸 도면으로, Proteon GLC chip 및 Proteon XPR36(Bio-Rad) 장비를 이용하여 인간 FcRn 및 HL161A, HL161B, HL161C 또는 HL161D 항체 간의 상호작용을 pH 6.0 및 pH 7.4에서 각각 분석하여 얻은 결과이다.
도 2a는 pH 6.0에서 인간 FcRn 및 HL161A 간의 상호작용을 분석한 결과를 도시한다.
도 2b는 pH 7.4에서 인간 FcRn 및 HL161A 간의 상호작용을 분석한 결과를 도시한다.
도 2c는 pH 6.0에서 인간 FcRn 및 HL161B 간의 상호작용을 분석한 결과를 도시한다.
도 2d는 pH 7.4에서 인간 FcRn 및 HL161B 간의 상호작용을 분석한 결과를 도시한다.
도 2e는 pH 6.0에서 인간 FcRn 및 HL161C 간의 상호작용을 분석한 결과를 도시한다.
도 2f는 pH 7.4에서 인간 FcRn 및 HL161C 간의 상호작용을 분석한 결과를 도시한다.
도 2g는 pH 6.0에서 인간 FcRn 및 HL161D 간의 상호작용을 분석한 결과를 도시한다.
도 2h는 pH 7.4에서 인간 FcRn 및 HL161D 간의 상호작용을 분석한 결과를 도시한다.
도 3은 선별된 2종 항체의 세포 표면의 인간 FcRn(hFcRn)에 대한 결합능을 나타내는 도면으로, 세포 표면에 존재하는 인간 FcRn에 결합하는 선별된 HL161A 와 HL161B 항체를 인간 FcRn-과발현 HEK293 세포에 처리하여 pH 6.0 및 pH 7.4에서 세포 표면 FcRn에 결합하는 항체를 분석하여 얻은 결과이다. 각각의 HL161A 및 HL161B 항체의 인간 FcRn 결합은 각 항체를 다양한 pH에서 세포를 처리한 후 Alexa488-표지된 항-인간 염소 항체를 이용하여 FACS(fluorescent activated cell sorter)를 수행하여 얻은 MFI 값으로 표현되었다.
도 4는 pH 6.0에서 인간 IgG의 인간 FcRn-발현 세포와의 결합을 억제하는 능력을 분석한 결과를 도시하며, 세포 표면 인간 FcRn에 결합하는 선별된 2종의 항체들이 세포 수준에서 인간 FcRn에 대한 인간 IgG의 결합을 저해할 수 있는지를 관찰한 결과를 도시한다. 인간 FcRn-과발현 HEK293 세포에 결합하는 것이 확인된 HL161A 및 HL161B 항체 각각을 200 nM로부터 4배 순차적 희석을 통하여 Alexa488-표지된 인간 IgG의 인간 FCRn에 대한 결합 억제 능력에 대한 프로파일을 확보하였다.
도 5a 및 도 5b는 인간 FcRn-발현 형질전환 마우스 Tg32(hFcRn+/+, hβ2m+/+, mFcRn-/-, mβ2m-/-)에서 선별된 항체인 HL161A 및 HL161B 항체가 hIgG1의 이화작용에 미치는 영향을 확인한 결과를 도시한다. 0 시간에, 5 mg/kg의 비오틴-hIgG 및 495　mg/kg의 인간 IgG를 복강내로 투여하여 생체내에서 IgG를 포화시켰다. 약물의 투여와 관련하여, 비오틴-IgG의 투여 후 24, 48, 72 및 96시간 후에, IgG1, HL161A, HL161B 또는 PBS는 1일 1회 5, 10 및 20 mg/kg의 투여용량(dose)으로 복강 내로 주사되었다. 시료 채취는 비오틴-IgG 투여 후 24, 48, 72, 96, 120 및 168 시간 후에 진행하였으며, 24, 48, 72 및 96 시간에는 약물 투여 전 채혈을 하여, ELISA 방법으로 비오틴-IgG의 잔존량을 확인하였다. 결과는 24시간 채혈 시료의 잔존량을 100%로 하여 각 시기의 잔존량을 상대적인 비율로 나타내었다.
도 6a 내지 도 6c는 인간 FcRn과 96% 서열 상동성을 가진 시아노몰거스(cynomolgus) 원숭이를 이용하여 대한 2종의 항체(HL161A 및 HL161B)의 투여에 의해 유발되는 원숭이 IgG의 혈액내 수준 변화량을 분석한 결과를 도시한다. HL161A 및 HL161B 항체가 각각 1 일 1회 5 mg/kg 및 20 mg/kg의 투여용량으로 시아노몰거스 원숭이에게 정맥내로 투여되었다.
도 6a는 항체 농도별 HL161A 및 HL161B 항체의 혈청 IgG-감소 효과를 도시한다.
도 6b는 HL161A 및 HL161B 항체(농도: 원숭이 개체에서 (5 mg/kg))의 혈청 IgG-감소 효과를 도시한다.
도 6c는 HL161A 및 HL161B 항체(농도: 원숭이 개체에서 (20 mg/kg))의 혈청 IgG-감소 효과를 도시한다.
도 7a 및 도 7b는 시아노몰거스 원숭이를 이용한 실험에서 HL161A 및 HL161B의 약동학적 프로파일을 분석한 결과를 도시한다.
도 8a 내지 도 8c는 시아노몰거스 원숭이를 이용한 실험에서 HL161A 및 HL161B 항체의 투여에 의한 원숭이 IgM, IgA 및 알부민의 혈액 내 수준 변화량을 분석한 결과를 도시한다.
도 8a는 원숭이의 혈청 IgM 수준에서의 변화를 도시한다.
도 8b는 원숭이의 혈청 IgA 수준에서의 변화를 도시한다.
도 8c는 원숭이의 혈청 알부민 수준에서의 변화를 도시한다.
도 9는 피하(SC) 또는 정맥내(IV) 투여 후 건강한 대상체에서 RVT-1401(HL161BKN)의 단일 및 다중 투여용량을 도시한다(N = RVT-1401:위약).
도 10a 및 도 10b는 RVT-1401의 단일 투여용량 IV 및 SC 투여 후 건강한 대상체에서 평균 농도-시간 프로파일을 도시한다(도 10a: IV; 도 10b: SC).
도 11a 및 도 11b는 340mg 또는 680mg의 RVT-1401을 매주 SC 투여한 후 건강한 대상체에서 평균 농도-시간 프로파일을 도시한다(도 11a: 선형 플롯; 도 11b: 세미 로그 플롯).
도 12는 340 mg 또는 680 mg의 RVT-1401을 매주 SC 투여 후 건강한 대상체에서 혈청 IgG 농도-시간 프로파일을 도시한다.
도 13a는 RVT-1401(340mg, 765mg, 1530mg) 또는 위약의 단일 투여용량 IV 투여 후 건강한 대상체에서 기준선으로부터 혈청 IgG 감소 백분율(%)을 도시한다. 화살표는 RVT-1401 투여 시간을 도시한다. 도 13b는 RVT-1401(340mg, 765mg) 또는 위약의 단일 투여용량 SC 투여 후 건강한 대상체에서 기준선으로부터의 혈청 IgG 감소 백분율(%)을 도시한다. 화살표는 RVT-1401 투여 시간을 도시한다.
도 14a 내지 도 14e는 RVT-1401(340mg, 680mg) 또는 위약의 다중 투여용량 SC 투여 후 건강한 대상체에서 기준선으로부터 혈청 IgG(총 및 하위클래스) 감소 백분율(%)을 도시한다. 화살표는 RVT-1401 투여 시간(주 1회 x 4주)을 도시한다.
도 14a는 RVT-1401(340mg, 680mg) 또는 위약의 다중 투여용량 SC 투여 후 건강한 대상체에서 기준선으로부터의 혈청 IgG(총) 감소 백분율(%)을 도시한다.
도 14b는 RVT-1401(340mg, 680mg) 또는 위약의 다중 투여용량 SC 투여 후 건강한 대상체에서 기준선으로부터의 혈청 IgG1 감소 백분율(%)를 도시한다.
도 14c는 RVT-1401(340mg, 680mg) 또는 위약의 다중 투여용량 SC 투여 후 건강한 대상체에서 기준선으로부터의 혈청 IgG2 감소 백분율(%)을 도시한다.
도 14d는 RVT-1401(340mg, 680mg) 또는 위약의 다중 투여용량 SC 투여 후 건강한 대상체에서 기준선으로부터 혈청 IgG3 감소 백분율(%)을 도시한다.
도 14e는 RVT-1401(340mg, 680mg) 또는 위약의 다중 투여용량 SC 투여 후 건강한 대상체에서 기준선으로부터의 혈청 IgG4 감소 백분율(%)을 도시한다.
도 15는 온열 자가면역 용혈성 빈혈(WAIHA) 환자에서 RVT-1401(주 680mg 및 340mg)의 안전성, 내약성, PK, PD 및 효능을 평가하기 위한 비-무작위 공개 연구(non-randomized, open-label study)의 연구 설계를 도시한다. WAIHA로 진단된 환자는 RVT-1401: 투약 요법 A(12주 동안 매주 680mg(코호트 1)) 및 투약 요법 B(12주 동안 매주 340mg(코호트 2))의 주 1회 SC 주사로 치료한다. 투여 요법 A(주당 680mg)는 주당 2개의 SC 주사로 투여되고, 투여 요법 B(주당 340mg)는 주당 단일 SC 주사로 투여된다. 별표(**)는 코호트 1이 먼저 등록하고, 코호트 2가 뒤따르는 것을 도시한다.
본 개시는 보다 용이하게 이해될 수 있도록 특정 용어들이 상세한 설명 전반에 걸쳐 정의된다. 본 명세서에서 달리 정의되지 않는 한, 본 개시와 관련된 모든 과학적 및 기술적 용어는 당업자가 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 본 명세서에서 인용된 모든 참고문헌들은 또한 그 전체가 참조로 포함된다. 인용된 참고문헌이 본 명세서에서 본 개시와 상충되는 경우, 명세서가 우선한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 단어의 단수형은 문맥이 달리 명시하지 않는 한 복수형도 포함한다. 예를 들어, 용어 "하나의(a)", "하나의(an)" 및 "그(the)"는 단수 또는 복수로 이해된다. 예를 들어, "하나의 요소"는 하나 이상의 요소를 의미한다. 용어 "또는"은 특정 문맥이 달리 표시하지 않는 한 "및/또는"을 의미할 수 있다. 모든 범위에는 특정 문맥이 달리 표시하지 않는 끝점들과 그 사이의 모든 지점이 포함된다. "X 값과 Y 값 사이"의 형태로 언급된 것을 포함한 모든 범위는 특정 문맥이 달리 명시하지 않는 끝점들과 그 사이의 모든 지점이 포함된다.
일부 구체예에서, 본 개시는 치료를 필요로 하는 환자에게 항-FcRn 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 투여하거나, 또는 적어도 하나의 약제학적으로 허용 가능한 담체 및 항-FcRn 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약학적 조성물 투여하여 온열 자가면역 용혈성 빈혈을 치료 또는 예방하는 방법에 관한 것이다. 일부 구체예에서, 본 개시는 치료를 필요로 하는 환자에게 항-FcRn 항체 또는 항원-결합 단편을 투여하거나, 또는 항-FcRn 항체 또는 항원-결합 단편 및 적어도 하나의 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약학적 조성물을 투여하여 온열 자가면역 용혈성 빈혈을 치료 또는 예방하는 방법에서 항-FcRn 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 용도에 관한 것이다. 일부 구체예에서, 본 개시는 온열 자가면역 용혈성 빈혈을 치료 또는 예방하기 위한 의약의 제조에서의 항-FcRn 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 용도에 관한 것이다. 일부 구체예에서, 본 개시는 온열 자가면역 용혈성 빈혈을 치료 또는 예방하는 방법에 사용하기 위한 항-FcRn 항체 또는 그의 항원 결합 단편에 관한 것이다. 항-FcRn 항체 또는 이의 항원-결합 단편 및 적어도 하나의 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약학적 조성물이 또한 개시되며, 이는 본 명세서에서 기술된 치료 방법 및 용도에 유용하다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "치료하다" 및 이의 동원어(cognate)는 질환, 장애 또는 상태(예를 들어, 온열 자가면역 용혈성 빈혈) 또는 이의 적어도 하나의 식별 가능한 증상(예를 들어, 본 명세서에서 기술된 징후 및 증상의 임의의 하나 이상)의 개선을 지칭한다. 용어 "치료하다"는 온열 자가면역 용혈성 빈혈의 하나 이상의 증상의 완전한 치료 또는 완전한 개선을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 일부 구체예에서, "치료하다"는 환자가 반드시 식별할 수 있는 것은 아니지만 적어도 하나의 측정가능한 물리적 파라미터의 적어도 부분적인 개선, 예를 들어, 적어도 하나의 자가항체 및/또는 병원성 항체(예를 들어, 병원성 IgG)의 수준 및/또는 총 혈청 IgG의 수준에서의 감소 또는 헤모글로빈 수준에서의 증가를 지칭한다. 일부 구체예에서, "치료하다"는 온열 자가면역 용혈성 빈혈의 진행을 물리적으로(예를 들어, 식별가능한 증상의 안정화), 생리학적으로(예를 들어, 물리적 파라미터의 안정화) 또는 둘 다 억제하는 것을 지칭한다. 일부 구체예에서, "치료하다"는 온열 자가면역 용혈성 빈혈의 진행을 늦추거나 또는 진행을 역전시키는 것을 지칭한다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, "치료하다" 및 이의 동원어는 또한 온열 자가면역 용혈성 빈혈을 획득할 위험을 감소시키거나 발병을 지연시키는 것을 포함한다. 본 명세서에서 개시된 항체, 항원-결합 단편 및 약학적 조성물은 온열 자가면역 용혈성 빈혈의 예방(prevention) 또는 방지(prophylaxis)에 사용될 수 있다. 예를 들어, 방지 방법은 온열 자가면역 용혈성 빈혈의 위험이 있는 대상체에게 본 명세서에서 개시된 항체, 항원-결합 단편 또는 약학적 조성물을 투여하여 온열 자가면역 용혈성 빈혈 또는 이의 적어도 하나의 식별가능한 증상의 발생 확률을 예방 또는 감소시키는 것을 포함할 수 있다. 일부 구체예에서, 치료될 질환, 장애 또는 상태는 온열 자가면역 용혈성 빈혈이다.
용어 "대상체" 및 "환자"는 임의의 인간 또는 비-인간 동물을 지칭하기 위해 본 명세서에서 상호교환적으로 사용된다. 비-인간 동물은 임의의 동물과 같은 모든 척추동물(예를 들어, 포유동물 및 비-포유동물)을 포함한다. 포유동물의 비-제한적 예시는 인간, 마우스, 랫트, 토끼, 개, 원숭이 및 돼지를 포함한다. 다양한 구체예에서, 대상체는 인간이다. 다양한 구체예에서, 대상체는 온열 자가면역 용혈성 빈혈을 가지고 있거나 가질 것으로 의심되는 인간이다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "온열 자가면역 용혈성 빈혈(warm autoimmune hemolytic anemia)" 또는 "WAIHA"는 정상 체온보다 높거나 같은 온도에서 적혈구에 부착되어 적혈구(보체 활성화 유무에 관계없이)를 파괴하는 자가항체의 존재에 의해 정의되는 자가면역 상태를 지칭한다. 온열 자가면역 용혈성 빈혈은 온열 항체 용혈성 빈혈(warm antibody hemolytic anemia), 특발성 온열 항체 용혈성 빈혈(idiopathic warm antibody hemolytic anemia), 온열 항체 자가면역 용혈성 빈혈(warm antibody autoimmune hemolytic anemia) 및/또는 온열 반응 항체 질환(warm reacting antibody disease)으로도 지칭될 수 있다 일반적으로, 온열 자가면역 용혈성 빈혈의 항체는 섭씨 37도에서 최적으로 반응한다. 온열 자가면역 용혈성 빈혈과 관련된 가장 흔한 항체 이소타입은 IgG이며, IgG1 및 IgG3의 유병률이 더 높다(Kalfa, Hematology Am. Soc. Hematol. Educ. Program 2016(l):690-7, 2016). 보체 매개 기전을 통한 적혈구의 혈관내 파괴는 온열 자가면역 용혈성 빈혈 환자의 극히 일부에만 기여한다. 대부분의 환자에서 온열 반응을 하는 IgG로 코팅된 적혈구는 FcRn을 통해 비장 대식세포에 결합되고, 이는 그들을 식세포로 만들거나 비장에서 제거된 막의 일부를 가질 수 있다. 후자의 경우, 이러한 적혈구는 다음 비장을 통과하는 동안 추가 파괴의 대상이 되는 미세구를 형성할 수 있다(Kalfa, Hematology Am. Soc. Hematol. Educ. Program 2016(l):690-7, 2016). CD8+ T 세포, 및 자연 살해(NK 세포)도 항체 의존성 세포 매개 세포독성(ADCC)을 통해 RBC 용해에 기여할 수 있다.
WAIHA의 임상 증상은 일반적으로 피로, 운동성 호흡곤란, 창백 및 비장종대가 특징이다. 흔한 실험적 발견에는 다음이 포함되지만, 이에 국한되지 않는다: 감소된 헤모글로빈(Hb), 망상적혈구증가, 비접합 빌리루빈 및 젖산 탈수소효소 증가, 혈청 알라닌 아미노전이효소보다 불균형적으로 높은 혈청 아스파르테이트 아미노전이효소, 및 감소된 합토글로빈(Kalfa, Hematology Am. Soc. Hematol. Educ. Program 2016(l):690-7, 2016). 온열 자가면역 용혈성 빈혈의 징후 및 증상에는 피부의 비정상적인 창백함(창백(pallor)), 피로, 운동 시 호흡 곤란, 현기증, 심계항진, 피부 및/또는 눈 흰자위의 황변(황달(jaundice)), 비장의 비대(비장 비대증(splenomegaly)) 및 간의 비대(간비대(hepatomegaly))가 포함될 수 있지만, 이에 국한되지 않는다. 영향을 받는 개인, 특히 점차적으로 빈혈이 발병되는 사람들은 또한 무증상일 수 있으며 어떠한 징후나 증상도 나타내지 않을 수 있다. 온열 자가면역 용혈성 빈혈의 진단에는 철저한 임상 평가, 자세한 환자 병력, 특징적인 증상의 확인 및/또는 다양한 검사, 예를 들어, 헤모글로빈 및/또는 헤마토크릿을 측정하는 혈액 검사가 포함될 수 있다. 혈액 검사는 또한 혈액 내 빌리루빈 수치 상승 및/또는 미성숙 적혈구(망상적혈구) 수치 상승을 나타낼 수 있으며, 이는 신체가 조기에 파괴된 적혈구를 보충하기 위해 여분의 적혈구를 생성하도록 강요될 때 발생할 수 있다. 또한, Coombs 및/또는 디티오트레이톨(DTT) 검사와 같은 특수 테스트를 수행할 수 있다. Coombs 검사는 적혈구에 대해 작용하는 항체를 감지하는데 사용할 수 있다. Coombs 검사의 경우, 일부 구체예에서 혈액 샘플을 채취한 다음 Coombs 시약에 노출시킨다. Coombs 검사에서 양성은 적혈구가 시약이 있는 상태에서 뭉치거나 뭉쳐지면 나타날 수 있다. 예를 들어, DTT는 일반적으로 IgM과 반응하지만, IgG와는 반응하지 않기 때문에 IgG 자가항체에 의해 유발되는 보다 일반적인 형태로부터 IgM 자가항체로 인한 온열 자가면역 용혈성 빈혈을 구별하기 위해, DTT 검사도 수행할 수 있다.
일부 구체예에서, 온열 자가면역 용혈성 빈혈에 대한 치료가 필요하거나 치료를 받고 있는 환자는 평가 척도, 예를 들어, 여기에 설명된 모든 평가 척도를 사용하여 평가된다.
일부 구체예에서, 온열 자가면역 용혈성 빈혈에 대한 치료가 필요하거나 치료를 받고 있는 환자는 만성 질환 치료-피로의 기능적 평가(FACIT-F) 척도를 사용하여 평가된다. FACIT-F 척도는 온열 자가면역 용혈성 빈혈의 주요 임상 증상 중 하나인 피로의 신체적, 정서적, 사회적 영향을 측정하는 검증된 척도이다(Acaster et al., Health Qual. Life Outcomes 13(l):60-9, 2015; Webster et al., Health Qual. Life Outcomes 1(79): 1-7, 2003). 점수 범위는 0~52으로 점수가 높을수록 삶의 질이 높다는 것을 의미한다. 30 미만의 점수는 일반적으로 심한 피로를 나타낸다.
일부 구체예에서, 온열 자가면역 용혈성 빈혈에 대해 치료가 필요하거나 치료를 받고 있는 환자는 의학 연구 심의회(MRC) 호흡곤란 척도를 사용하여 평가된다. MRC 호흡곤란 척도는 지각된 호흡곤란에 대한 5가지 진술로 구성된 설문지이다. 척도의 초점은 호흡곤란의 중증도가 아니라 호흡곤란과 관련된 장애를 정량화하는 것이다(Stenton, Occupational Med. 58:226-7, 2008). 이 척도는 현재 Modified MRC Subject Version을 사용하여 0등급(장애 없음으로 제한됨)에서 4등급(중증 장애)까지 반복되었다. 이 척도는 만성 폐쇄성 폐질환(COPD) 환자에게 사용되었고, 빈혈성 COPD 환자가 유의하게 더 높은 MRC를 가질 수 있음을 입증하기 위해 낮은 헤모글로빈 수치를 가진 환자에 대해 추가로 계층화되었다(Ferrari et al., BMC Pulm. Med. 15:58, 2015). 척도는 환자에게 자신의 상태를 가장 잘 설명하는 문구를 선택하도록 요청하여 자가-관리를 할 수 있다. 점수는 환자의 활동 수준에 가장 잘 맞는 숫자이다.
일부 구체예에서, 온열 자가면역 용혈성 빈혈에 대한 치료가 필요하거나 치료를 받고 있는 환자는 EQ-5D-3L 척도를 사용하여 평가된다. EQ-5D-3L은 건강 관련 삶의 질에 대한 검증된 측정값이다(Devlin et al., Health Econ. 27(1):7- 22, 2018; Hernandez et al., EEPRU Report: "Quality review of a proposed EQ-5D-5L value set for England" [online]). 척도는 EQ-5D 기술 시스템과 EQ 비주얼 아날로그 척도의 두 가지 구성 요소로 구성된다. 기술 시스템은 이동성, 자기 관리, 일상 활동, 통증/불편, 및 불안/우울을 평가한다. 척도는 각 범주 내에서 가장 적절한 진술을 선택한 환자가 자가-관리를 할 수 있다. 낮은 점수는 더 나은 삶의 질에 해당한다. EQ VAS는 종점이 '상상할 수 있는 최상의 건강 상태'(100) 및 '상상할 수 있는 최악의 건강 상태'(0)로 표시된 수직 시각적 아날로그 척도에서 환자의 자체 평가 건강을 기록한다. 환자는 0에서 100까지의 숫자를 선택할 수 있다.
일부 구체예에서, 온열 자가면역 용혈성 빈혈의 치료를 필요로 하는 환자는 온열 자가면역 용혈성 빈혈의 하나 이상의 징후 및 증상을 나타내고(예를 들어, 창백, 피로, 황달 및/또는 비장 비대), 및/또는 치료 임상의에 의해 임의의 형태의 상태로 진단되었다. 일부 구체예에서, 온열 자가면역 용혈성 빈혈의 치료가 필요한 환자(또는 환자의 시료)는 검출가능한 수준의 항-적혈구 IgG(항-RBC IgG), 즉, 하나 이상의 적혈구에 결합할 수 있는 IgG를 갖는다. 일부 구체예에서, 항-RBC IgG는 보체 고정(CF)에 의한 질병 발병기전에 작용 및/또는 기여한다. 일부 구체예에서, 항-RBC IgG는 하나 이상의 Fc 수용체의 결합에 의해 질병 발병기전(예를 들어, 사이토카인 방출 및/또는 식균 작용을 포함한, 예를 들어, 환자의 타고난 면역 체계 활성화)에 작용 및/또는 기여한다. 일부 구체예에서, 항-RBC IgG는 다음을 포함하는 환자의 선천 면역계의 활성화에 의해 질병 발병기전, 예를 들어, 사이토카인 방출 및/또는 식균작용에 작용 및/또는 기여한다. 일부 구체예에서, 항-RBC IgG는 환자의 혈액에 존재한다. 일부 구체예에서, 항-RBC IgG는 항-RBC IgG1이다. 일부 구체예에서, 항-RBC IgG는 항-RBC IgG2이다. 일부 구체예에서, 항-RBC IgG는 항-RBC IgG3이다. 일부 구체예에서, 항-RBC IgG는 항-RBC IgG4이다.
일 구체예는 환자에게 (i) 치료적 유효량의 항-FcRn 항체 또는 이의 항원-결합 단편; 또는 (ii) 적어도 하나의 약학적으로 허용 가능한 담체 및 치료적 유효량의 항-FcRn 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약학적 조성물을 투여하는 것을 포함하는 이를 필요로 하는 환자에서 온열 자가면역 용혈성 빈혈을 치료 또는 예방하는 방법이다.
다른 구체예는 이를 필요로 하는 환자에서 온열 자가면역 용혈성 빈혈을 치료 또는 예방하는 방법에 사용하기 위한 항-FcRn 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로, 상기 방법은 환자에게 (i) 치료적 유효량의 항-FcRn 항체 또는 이의 항원-결합 단편; 또는 (ii) 적어도 하나의 약학적으로 허용 가능한 담체 및 치료적 유효량의 항-FcRn 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약학적 조성물을 투여하는 것을 포함한다.
다른 구체예는 환자에게 (i) 치료적 유효량의 항-FcRn 항체 또는 이의 항원-결합 단편; 또는 (ii) 적어도 하나의 약학적으로 허용 가능한 담체 및 치료적 유효량의 항-FcRn 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약학적 조성물을 투여하는 것을 포함하는 이를 필요로 하는 환자에서 온열 자가면역 용혈성 빈혈을 치료 또는 예방하는 방법에서 항-FcRn 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 용도이다.
다른 구체예는 이를 필요로 하는 환자에서 온열 자가면역 용혈성 빈혈을 치료 또는 예방하기 위한 약제의 제조에 있어서의 항-FcRn 항체 또는 그의 항원- 결합 단편의 용도이다.
본 명세서에서 개시된 치료 방법, 용도 및 조성물의 다양한 구체예에서, 항-FcRn 항체 또는 항원-결합 단편은 FcRn과의 결합에서 IgG의 비-경쟁적 저해제로서 작용한다. 다양한 구체예에서, FcRn에 대한 항체 또는 항원-결합 단편의 결합은 FcRn에 대한 적어도 하나의 자가항체 및/또는 병원성 항체의 결합을 저해한다. 다양한 구체예에서, 그러한 저해는 대상체의 신체로부터 적어도 하나의 자가항체 및/또는 병원성 항체의 청소(즉, 제거)를 촉진한다. 다양한 구체예에서, 그러한 저해는 대상체 및/또는 대상체의 시료에서 적어도 하나의 자가항체 및/또는 병원성 항체의 수준을 감소시킨다. 다양한 구체예에서, 적어도 하나의 자가항체 및/또는 병원성 항체의 수준에서의 감소는 온열 자가면역 용혈성 빈혈의 적어도 하나의 임상 파라미터에서의 개선을 초래하거나 및/또는 상관관계가 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "자가항체"는 생물체의 자체 단백질, 조직 및/또는 기관 중 하나 이상에 대해 생물체의 면역계에 의해 생산된 항체를 지칭한다. 예를 들어, 하나 이상의 자가항체는 인간 환자의 면역계가 "자가" 및 "비-자가"를 구별하지 못하는 경우 인간 환자의 면역계에 의해 생산될 수 있다. 일부 구체예에서, 자가항체는 병원성 항체이다(예를 들어, 병원성 IgG, 예를 들어, 병원성 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4). 본 명세서에서 사용된 바와 같은 용어 "병원성 항체"는 하나 이상의 질환, 장애 또는 상태(예를 들어, 온열 자가면역 용혈성 빈혈)의 발병에 기여하고 및/또는 유발하는 항체(예를 들어, 자가항체)를 지칭한다.
일부 구체예에서, 병원성 항체는 병원성 IgG(예를 들어, 병원성 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4)이다. 일부 구체예에서, 병원성 항체 및/또는 병원성 IgG는 항-적혈구 IgG(항-RBC IgG)이다.
일부 구체예에서, 자가항체 및/또는 병원성 항체는 적혈구(RBC)(즉, 하나 이상의 적혈구 항원)에 결합할 수 있는 자가항체이다. 일부 구체예에서, 자가항체 및/또는 병원성 항체는 항-적혈구 IgG(항-RBC IgG)이다. 일부 구체예에서, 자가항체 및/또는 병원성 항체는 항-적혈구 IgG1(항-RBC IgG1)이다. 일부 구체예에서, 자가항체 및/또는 병원성 항체는 항-적혈구 IgG2(항-RBC IgG2)이다. 일부 구체예에서, 자가항체 및/또는 병원성 항체는 항-적혈구 IgG3(항-RBC IgG3)이다. 일부 구체예에서, 자가항체 및/또는 병원성 항체는 항-적혈구 IgG4(항-RBC IgG4)이다. 일부 구체예에서, 본 명세서에 기재된 항체, 항원-결합 단편, 또는 제약 조성물을 사용한 환자의 치료는, 예를 들어, 본 명세서에 개시된 방법을 사용하여, 항-RBC IgG(예를 들어, 항-RBC IgG1, 항-RBC IgG2, 항-RBC IgG3, 및/또는 항-RBC IgG4)의 수준을 즉, 치료 전 항-RBC IgG의 수준에 비해 적어도 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45%, 약 50% 감소시킨다.
일부 구체예에서, 자가항체 및/또는 병원성 항체는 IgG, IgM, IgA, IgD 또는 IgE이다. 일부 구체예에서, 자가항체 및/또는 병원성 항체는 IgG(예를 들어, 병원성 IgG)이다. 일부 구체예에서, 자가항체 및/또는 병원성 항체는 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4이다. 일부 구체예에서, 자가항체 및/또는 병원성 항체는 IgG1(예를 들어, 병원성 IgG1, 예를 들어, 항-RBC IgG1)이다. 일부 구체예에서, 자가항체 및/또는 병원성 항체는 IgG2(예를 들어, 병원성 IgG2, 예를 들어, 항-RBC IgG2)이다. 일부 구체예에서, 자가항체 및/또는 병원성 항체는 IgG3(예를 들어, 병원성 IgG3, 예를 들어, 항-RBC IgG3)이다. 일부 구체예에서, 자가항체 및/또는 병원성 항체는 IgG4(예를 들어, 병원성 IgG4, 예를 들어, 항-RBC IgG4)이다. 일부 구체예에서, 자가항체는 병원성 항체이다.
본 명세서에서 개시된 치료 방법, 용도 및 조성물의 다양한 구체예에서, 항-FcRn 항체 또는 항원-결합 단편은 생리학적 pH(즉, pH 7.0-7.4)에서 FcRn에 대한 적어도 하나의 자가항체 및/또는 병원성 항체(예를 들어, 적어도 하나의 IgG)의 결합을 비-경쟁적으로 저해할 수 있다. 이론에 얽매이고 싶지는 않지만, FcRn은 이의 리간드(즉, IgG)와 결합하고, 산성 pH 보다는 오히려 생리학적 pH에서 IgG에 대한 친화성을 실질적으로 나타내지 않는 것으로 여겨진다. 따라서, 다양한 구체예에서, 생리학적 pH에서, 항-FcRn 항체 또는 항원-결합 단편은 FcRn에 대한 IgG의 결합의 비-경쟁적 저해제로서 작용할 수 있고, FcRn에 대한 항-FcRn 항체 또는 항원-결합 단편의 결합은 IgG의 존재에 의해 영향을 받지 않는다. 따라서, 다양한 구체예에서, pH-독립적인 방식으로 IgG와 비-경쟁적으로 FcRn에 특이적으로 결합하는 항-FcRn 항체 또는 항원-결합 단편은 기존의 경쟁적 저해제(즉, IgG와 경쟁적으로 FcRn에 결합하는 항체)에 비해 이점을 제공할 수 있으므로, IgG의 FcRn-매개 신호전달에 의해 유의적으로 낮은 농도에서조차 치료 또는 예방 효과를 제공할 수 있다. 또한, 다양한 구체예에서, FcRn에 결합된 상태에서 세포내 이동 절차에서, 항-FcRn 항체 또는 항원-결합 단편은 혈액에서 IgG보다 더 높은 친화성으로 FcRn과의 결합을 유지할 수 있다. 따라서, 다양한 구체예에서, 항-FcRn 항체 또는 항원-결합 단편은 IgG가 FcRn에 결합할 수 있는 산성 pH 환경에 있는 엔도좀에서조차 FcRn에 대한 IgG의 결합을 억제할 수 있어 IgG의 청소를 촉진할 수 있다. 다양한 구체예에서, 항-FcRn 항체 또는 항원-결합 단편은 RVT-1401이다(본 명세서에서 HL161BKN으로 지칭됨). 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 RVT-1401 또는 이의 항원-결합 단편이다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 서열번호: 27(HCDR1), 서열번호: 28(HCDR2), 서열번호: 29(HCDR3)의 3개의 중쇄 CDR 아미노산 서열; 및 서열번호: 30(LCDR1), 서열번호: 31(LCDR2), 서열번호: 32(LCDR3)의 3개의 경쇄 CDR 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 서열번호: 6의 중쇄 가변 영역 아미노산 서열; 및 서열번호: 16의 경쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 서열번호: 46의 중쇄 아미노산 서열; 및 서열번호: 48의 경쇄 아미노산 서열을 포함한다.
결합 "친화성"은 단일 항원 부위에서 항체 및 항원 간의 상호작용의 강도를 지칭한다. 각각의 항원 부위 내에, 항체의 "팔(arm)"의 가변 영역은 약한 비-공유 힘을 통해 수많은 부위에서 항원과 상호작용한다. 일반적으로, 상호작용이 많을수록 친화성이 강해진다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "특이(specific)", "특이적으로 결합하다(specifically binds)" 및 "특이적으로 결합하다(binds specifically)"는 단백질 및 기타 바이오의약품의 이종 집단에서 항체 또는 이의 항원-결합 단편(예를 들어, 항-FcRn 항체 또는 이의 항원-결합 단편) 및 타겟 항원(예를 들어, FcRn) 간의 결합 상호작용을 지칭한다. 항체는 주어진 조건 세트 하에서 대체항원 또는 항원 혼합물에 대한 결합을 적합한 항원과의 결합과 비교함으로써 결합의 특이성을 시험할 수 있다. 항체가 대체 항원 또는 항원 혼합물에 비해 적어도 2배, 적어도 5배 또는 적어도 10배(또는 그 이상) 더 많은 친화성으로 적합한 항원과 결합하면, 그것은 특이적이라고 간주된다.
"특이 항체" 또는 "타겟-특이 항체"는 타겟 항원(예를 들어, FcRn)에만 결합하고 다른 항원에는 결합하지 않는다(또는 최소 결합을 나타낸다). 일부 구체예에서, 타겟 항원(예를 들어, FcRn)과 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 pH 6.0 또는 pH 7.4에서 1x10-6 M 미만, 1x10-7 M 미만, 1x10-8 M 미만, 1x10-9　M 미만, 1x10-10 M 미만, 1x10-11 M 미만, 1x10-12 M 미만, 또는 1x10-13 M 미만의 KD를 갖는다. 일부 구체예에서, KD는 pH 6.0 또는 pH 7.4에서 약 0.01 nM 내지 약 2 nM이다. 일부 구체예에서, KD 는 pH 7.4에서 약 300 pM 이하 내지 약 2 nM 이하이다. 일부 구체예에서, KD는 pH 6.0에서 약 2 nM 이하 내지 900 pM 이하이다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "KD"는 항체-항원에 대한 평형 해리 상수를 지칭하며, kd 대 ka의 비율(즉, kd/ka)로 얻으며, 일반적으로 몰 농도(M)로 표현된다. 용어 "kassoc" 또는 "ka"는 특정 항체-항원 상호작용의 결합 속도를 지칭하는 반면, 용어 "kdis" 또는 "kd"는 특정 항체-항원 상호작용의 해리 속도를 지칭한다. kd 및/또는 ka의 측정은 25℃ 또는 37℃에서 수행될 수 있다. 항체 및 항원-결합 단편에 대한 KD 값은 당업계에 잘 확립된 방법을 사용하여 측정될 수 있다(예를 들어, Pollard, Mol. Biol. Cell 21(23):4061-7, 2010을 참조할 것). 일부 구체예에서, KD는 직접 결합 및/또는 경쟁 결합 분석에 의해 측정된다(예를 들어, 표면 플라즈몬 공명 및/또는 경쟁 ELISA). 일부 구체예에서, KD는 표면 플라즈몬 공명(예를 들어, 인간 FcRn-고정된 표면 플라즈몬 공명)에 의해 측정된다. 일부 구체예에서, 본 명세서에서 개시된 항-FcRn 항체 또는 항원-결합 단편의 KD는 인간 FcRn-고정된 표면 플라즈몬 공명에 의해 측정된다.
본 명세서에서 개시된 치료 방법, 용도 및 조성물의 일부 구체예에서, 항-FcRn 항체 또는 항원-결합 단편은 예를 들어, 표면 플라즈몬 공명에 의해 측정된 바와 같이, pH 6.0 및 pH 7.4에서 약 0.01 내지 2 nM의 KD (해리상수)를 갖는다. 일부 구체예에서, 항-FcRn 항체 또는 항원-결합 단편은 예를 들어, 표면 플라즈몬 공명에 의해 측정된 바와 같이 pH 7.4에서 약 300 pM 이하 내지 약 2 nM 이하로부터의 KD, 및/또는 pH 6.0에서 약 2 nM 이하 내지 약 900 pM 이하로부터의 KD를 갖는다. 일부 구체예에서, 항-FcRn 항체 또는 항원-결합 단편은 세포의 바깥쪽에 결합하고, 결합할 때 엔도좀에 대한 이의 결합을 유지한다. 일부 구체예에서, 항-FcRn 항체 또는 항원-결합 단편은 예를 들어, 인간 FcRn-발현 세포를 이용하여 수행된 블로킹 분석 및 FACS에 의해 측정된 바와 같이, FcRn(예를 들어, 인간 FcRn)에 대한 하나 이상의 자가항체의 결합을 효과적으로 차단한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "항-FcRn 항체" 또는 "FcRn 에 특이적으로 결합하는 항체"는 FcRn에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 임의의 형태, 예를 들어, 표면 플라즈몬 공명(예를 들어, 인간 FcRn-고정된 표면 플라즈몬 공명)에 의해 측정된, pH 6.0 또는 pH 7.4에서 2 nM 미만의 KD로 결합하는 것들을 지칭한다. 용어는 그들이 FcRn에 특이적으로 결합하는 한 단클론 항체(전장 단클론 항체 포함), 다클론 항체 및 생물학적으로 기능성이 있는 단편을 포함한다.
본 명세서에서 개시된 치료 방법, 용도 및 조성물의 일부 구체예에서, 항-FcRn 항체 또는 항원-결합 단편은
서열번호: 21, 24, 27, 30, 33, 36, 39 및 42로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR1;
서열번호: 22, 25, 28, 31, 34, 37, 40 및 43으로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR2; 및
서열번호: 23, 26, 29, 32, 35, 38, 41 및 44로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR3을 포함한다.
본 명세서에서 개시된 치료 방법, 용도 및 조성물의 일부 구체예에서, 항-FcRn 항체 또는 항원-결합 단편은
서열번호: 21, 24, 27, 30, 33, 36, 39 및 42로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 아미노산 서열과 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR1;
서열번호: 22, 25, 28, 31, 34, 37, 40 및 43으로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 아미노산 서열과 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR2; 및
서열번호: 23, 26, 29, 32, 35, 38, 41 및 44로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 아미노산 서열과 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CDR3을 포함한다.
본 명세서에서 개시된 치료 방법, 용도 및 조성물의 일부 구체예에서, 항-FcRn 항체 또는 항원-결합 단편은 본 명세서에서 기술된 아미노산 서열에서 하나 이상의 아미노산 결실, 부가 또는 치환을 포함할 수 있다.
본 명세서에서 개시된 치료 방법, 용도 및 조성물의 일부 구체예에서, 항-FcRn 항체 또는 항원-결합 단편은 본 명세서에서 기술된 아미노산 서열과 동일하거나 또는 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 용어 "동일성" 또는 "상동성"은 서열을 비교하여 측정된 바와 같이, 둘 이상의 폴리펩타이드의 서열 간의 관계를 지칭한다. 용어 "동일성"은 둘 이상의 아미노산 잔기의 스트링 사이의 매치 수에 의해 측정된 바와 같이, 폴리펩타이드 간의 서열 관련성의 정도를 의미한다. 두 서열 간의 "동일성" 백분율은 서열에 의해 공유되는 동일한 위치의 수의 함수로(즉, 동일성 백분율은 동일한 위치의 수/위치의 총 수 x 100과 같다), 두 서열의 최적 정렬을 위해 도입되는데 필요한 갭의 수 및 각 갭의 길이를 고려한다. 두 서열 간의 서열 비교 및 동일성 백분율의 측정은 수학적 알고리즘을 사용하여 수행될 수 있다. 서열 비교를 위해, 전형적으로 하나의 서열은 레퍼런스 서열로 작용하여 테스트 서열이 비교된다. 서열 비교 알고리즘을 이용하여 테스트 및 레퍼런스 서열을 컴퓨터에 입력하는 경우, 필요에 따라 하위서열 좌표가 지정되고 서열 알고리즘 파라미터가 지정된다. 기본 프로그램 파라미터가 사용되거나 또는 대체 파라미터가 지정될 수 있다. 그리고 나서 서열 비교 알고리즘을 프로그램 파라미터에 기초하여 레퍼런스 서열에 대한 테스트 서열의 서열 동일성 백분율을 계산한다. 추가로 또는 대안으로, 본 명세서에서 개시된 아미노산 서열은 추가로 "쿼리 서열"로 사용되어 예를 들어 연관된 서열을 확인하기 위한 공개 데이터베이스에 대한 검색을 수행할 수 있다. 예를 들어, 그러한 검색은 Altschul et al.(J. Mol. Biol. 215:403-10, 1990)의 BLAST 프로그램을 이용하여 수행될 수 있다.
비교창에서 최대 대응을 위해 비교 및 정렬되거나, 또는 다음의 서열 비교 알고리즘 중 하나를 사용하여 또는 수동 정렬 및 육안 검사에 의해 측정될 때 영역을 지정하는 경우, 두 서열이 동일한 아미노산 잔기의 특정의 백분율을 갖는 경우(즉, 60% 동일성, 선택적으로 지정된 영역 또는 특정되지 않는 경우 전체 서열에 걸쳐 걸쳐 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 99% 동일성), 두 서열은 "실질적으로 동일"하다. 선택적으로, 동일성은 적어도 약 10 아미노산 길이의 영역, 또는 약 20, 50, 200 또는 그 이상의 아미노산 길이의 영역에 걸쳐 존재한다. 일부 구체예에서, 본 명세서에서 기술된 항-FcRn 항체 및 항원-결합 단편은 서열번호: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18 및 20-48로 구성된 군에서 선택되는 서열과 적어도 90% 동일한 적어도 하나의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예에서, 본 명세서에서 기술된 항-FcRn 항체 및 항원-결합 단편은 서열번호: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18 및 20-48로 구성된 군에서 선택되는 서열과 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 적어도 하나의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은
서열번호: 21의 아미노산 서열을 포함하는 CDR1; 서열번호: 22의 아미노산 서열을 포함하는 CDR2; 및 서열번호: 23의 아미노산 서열을 포함하는 CDR3;
서열번호: 27의 아미노산 서열을 포함하는 CDR1; 서열번호: 28의 아미노산 서열을 포함하는 CDR2; 및 서열번호: 29의 아미노산 서열을 포함하는 CDR3;
서열번호: 33의 아미노산 서열을 포함하는 CDR1; 서열번호: 34의 아미노산 서열을 포함하는 CDR2; 및 서열번호: 35의 아미노산 서열을 포함하는 CDR3; 또는
서열번호: 39의 아미노산 서열을 포함하는 CDR1; 서열번호: 40의 아미노산 서열을 포함하는 CDR2; 및 서열번호: 41의 아미노산 서열을 포함하는 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은
서열번호: 24의 아미노산 서열을 포함하는 CDR1; 서열번호: 25의 아미노산 서열을 포함하는 CDR2; 및 서열번호: 26의 아미노산 서열을 포함하는 CDR3;
서열번호: 30의 아미노산 서열을 포함하는 CDR1; 서열번호: 31의 아미노산 서열을 포함하는 CDR2; 및 서열번호: 32의 아미노산 서열을 포함하는 CDR3;
서열번호: 36의 아미노산 서열을 포함하는 CDR1; 서열번호: 37의 아미노산 서열을 포함하는 CDR2; 및 서열번호: 38의 아미노산 서열을 포함하는 CDR3; 또는
서열번호: 42의 아미노산 서열을 포함하는 CDR1; 서열번호: 43의 아미노산 서열을 포함하는 CDR2; 및 서열번호: 44의 아미노산 서열을 포함하는 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 서열번호: 21의 아미노산 서열(HCDR1)을 포함하는 CDR1, 서열번호: 22의 아미노산 서열(HCDR2)을 포함하는 CDR2 및 서열번호: 23의 아미노산 서열(HCDR3)을 포함하는 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호: 24의 아미노산 서열(LCDR1)을 포함하는 CDR1, 서열번호: 25의 아미노산 서열(LCDR2)을 포함하는 CDR2 및 서열번호: 26의 아미노산 서열(LCDR3)을 포함하는 CDR3를 포함하는 경쇄 가변 영역; 서열번호: 27의 아미노산 서열(HCDR1)을 포함하는 CDR1, 서열번호: 28의 아미노산 서열(HCDR2)을 포함하는 CDR2 및 서열번호: 29의 아미노산 서열(HCDR3)을 포함하는 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호: 30의 아미노산 서열(LCDR1)을 포함하는 CDR1, 서열번호: 31의 아미노산 서열(LCDR2)을 포함하는 CDR2 및 서열번호: 32의 아미노산 서열(LCDR3)을 포함하는 CDR3를 포함하는 경쇄 가변 영역; 서열번호: 33의 아미노산 서열(HCDR1)을 포함하는 CDR1, 서열번호: 34의 아미노산 서열(HCDR2)을 포함하는 CDR2 및 서열번호: 35의 아미노산 서열(HCDR3)을 포함하는 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호: 36의 아미노산 서열(LCDR1)을 포함하는 CDR1, 서열번호: 37의 아미노산 서열(LCDR2)을 포함하는 CDR2 및 서열번호: 38의 아미노산 서열(LCDR3)을 포함하는 CDR3를 포함하는 경쇄 가변 영역; 및 서열번호: 39의 아미노산 서열(HCDR1)을 포함하는 CDR1, 서열번호: 40의 아미노산 서열(HCDR2)을 포함하는 CDR2 및 서열번호: 41의 아미노산 서열(HCDR3)을 포함하는 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호: 42의 아미노산 서열(LCDR1)을 포함하는 CDR1, 서열번호: 43의 아미노산 서열(LCDR2)을 포함하는 CDR2 및 서열번호: 44의 아미노산 서열(LCDR3)을 포함하는 CDR3를 포함하는 경쇄 가변 영역으로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 중쇄 가변 영역 및 하나 이상의 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 서열번호: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18 및 20의 아미노산 서열로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 아미노산 서열을 포함하는 하나 이상의 중쇄 가변 영역 및/또는 하나 이상의 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 서열번호: 2, 4, 6, 8 또는 10의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및/또는 서열번호: 12, 14, 16, 18 또는 20의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 서열번호: 2의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 서열번호: 4의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호: 14의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 서열번호: 6의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 서열번호: 8의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호: 18의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 및 서열번호: 10의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역으로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 중쇄 가변 영역 및 하나 이상의 경쇄 가변 영역을 포함한다.
항체와 관련하여 본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "단편", "항체 단편" 및 "항원-결합 단편"은 모두 타겟 항원(예를 들어, FcRn)에 특이적으로 결합하고 및/또는 전장 항체의 기능(예를 들어, FcRn에 대한 IgG의 결합의 비-경쟁적 간섭)을 제공하는 능력을 보유한 전장 항체의 하나 이상의 단편을 지칭한다. 항원-결합 단편은 또한 더 큰 거대분자, 예를 들어, 이중특이적, 삼중특이적 및 다중특이적 항체로 존재할 수 있다. 항원-결합 단편의 예시는 단일쇄 항체, 이중특이적, 삼중특이적 및 다중특이적 항체, 예컨대 디아바디, 트리아바디 및 테트라바디, Fab 단편, F(ab')2 단편, Fd, scFv, 도메인 항체, 이중-특이 항체, 미니바디, scap (sterol regulatory binding protein cleavage activating protein), 킬레이팅 재조합 항체, 삼중바디 또는 이중바디, 인트라바디, 나노바디, small modular immunopharmaceuticals (SMIP), 결합-도메인 면역글로불린 융합 단백질, 카멜라이즈드 항체, VHH 함유 항체, IgD 항체, IgE 항체, IgM 항체, IgG1 항체, IgG2 항체, IgG3 항체, IgG4 항체, 항체 불변 영역에서의 유도체 및 FcRn과 결합하는 능력을 가진 단백질 스캐폴드 기반의 합성 항체를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 일부 구체예에서, 항원-결합 단편은 전장 항체와 같거나 유사한 특징들을 보여준다. 제한 없이, 항원-결합 단편은 당업계에 공지된 임의의 적합한 방법에 의해 생산될 수 있다. 예를 들어, 본 명세서에서 기술된 다양한 항원-결합 단편은 전장 항체의 효소적 또는 화학적 변형에 의해 생산되고, 재조합 DNA 방법론을 이용하여 드 노보(de novo)에서 합성되거나(예를 들어, scFv), 또는 파지 디스플레이 라이브러리를 이용하여 확인될 수 있다(예를 들어, Pini and Bracci, Curr. Protein Pept. Sci. 1(2):155-69, 2000 참조). 항원-결합 단편은 전장 항체와 같은 방식으로 유용성에 대해 스크리닝될 수 있다(예를 들어, 특이성, 결합 친화성, 활성).
또한, 가변 및/또는 불변 영역에서 돌연변이를 갖는 항체 또는 항원-결합 단편이 본 명세서에서 기술된 치료 방법, 용도 및 조성물에서 사용될 수 있다. 그러한 항체 또는 항원-결합 단편의 예시는 가변 영역 및/또는 불변 영역에서 아미노산 잔기의 보존적 치환을 갖는 항체를 포함한다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "보존적 치환"은 원래의 아미노산 잔기와 유사한 특징을 가지는 다른 아미노산 잔기로의 치환을 지칭한다. 예를 들어, 리신, 아르기닌 및 히스티딘은 그들이 염기성 측쇄를 가진다는 점에서 유사하고, 아스파르트산 및 글루탐산은 그들이 산성 측쇄를 가진다는 점에서 유사하다. 또한, 글리신, 아스파라긴, 글루타민, 세린, 트레오닌, 티로신, 시스테인 및 트립토판은 그들이 하전되지 않은 극성 측쇄를 가진다는 점에서 유사한 특징을 가지며, 알라닌, 발린, 루신, 트레오닌, 이소루신, 프롤린, 페닐알라닌 및 메티오닌은 그들이 비-극성 측쇄를 가진다는 점에서 유사한 특징을 갖는다. 또한, 티로신, 페닐알라닌, 트립토판 및 히스티딘은 그들이 방향족 측쇄를 가진다는 점에서 유사한 특징을 갖는다. 따라서, 상기 기술된 바와 같이 유사한 특징들을 보여주는 그룹에서 아미노산 잔기의 치환이 일어나는 경우에서조차 항체 또는 항원-결합 단편의 특징에서의 유의한 변화를 보여주지 않을 것이라는 점이 당업자에게는 명백할 것이다.
또한, 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 다른 기질(예를 들어, 치료제 또는 검출가능한 표지)에 컨쥬게이트 될 수 있다. 항체 또는 항원-결합 단편에 컨쥬게이트 되거나 조합하여 투여될 수 있는 기질은 온열 자가면역 용혈성 빈혈에 일반적으로 사용되는 치료제(예를 들어, 표준 치료제(standard of care agent) 예를 들어, 본 명세서에 개시되거나 및/또는 참조로 포함된 표준 치료제 중 임의의 하나 이상); FcRn의 활성을 억제할 수 있는 기질; 및 예를 들어, 이의 안정화 및/또는 순환, 예를 들어, 혈액, 혈청, 림프 또는 다른 조직에서의 유지를 개선하기 위한 항체 또는 항원-결합 단편과 물리적으로 결합된 모이어티를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 예를 들어, 항체 또는 항원-결합 단편은 중합체, 예를 들어, 폴리알킬렌 옥사이드 또는 폴리에틸렌 옥사이드와 같은 비-항원 고분자와 결합될 수 있다. 적합한 고분자는 중량에 따라 실질적으로 다양할 것이다. 약 200 내지 약 35,000(또는 약 1,000 내지 약 15,000 및 2,000 내지 약 12,500) 범위의 분자 수 평균 분자량을 갖는 고분자가 사용될 수 있다. 예를 들어, 항체 또는 항원-결합 단편은 수용성 고분자, 예를 들어, 친수성 폴리비닐 고분자, 예를 들어, 폴리비닐알코올 및 폴리비닐피롤리돈에 컨쥬게이트 될 수 있다. 그러한 고분자의 비-제한적 예시는 폴리알킬렌 옥사이드 단일중합체, 예컨대 폴리에틸렌글리콜(PEG) 또는 폴리프로필렌 글리콜, 폴리옥시에틸렌화 폴리올, 이의 공중합체 및 블록 공중합체의 수용성이 유지된다면 이의 블록 공중합체를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
본 명세서에서 개시된 치료 방법, 용도 및 조성물의 다양한 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 서열번호: 27(HCDR1)의 아미노산 서열, 서열번호: 28(HCDR2)의 아미노산 서열 및 서열번호: 29(HCDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호: 30(LCDR1)의 아미노산 서열, 서열번호: 31(LCDR2)의 아미노산 서열 및 서열번호: 32(LCDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
다양한 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 서열번호: 6의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 다양한 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 서열번호: 6과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호: 16과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 다양한 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 서열번호: 4의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호: 14의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 다양한 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 서열번호: 4와 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호: 14와 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 다양한 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 예를 들어, 표면 플라즈몬 공명에 의해 측정된 바와 같이, pH 6.0 또는 pH 7.4에서 0.01 nM 내지 2 nM의 KD (해리상수)로 FcRn에 결합한다.
본 명세서에서 개시된 치료 방법, 용도 및 조성물의 다양한 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 서열번호: 21(HCDR1)의 아미노산 서열, 서열번호: 22(HCDR2)의 아미노산 서열 및 서열번호: 23(HCDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호: 24(LCDR1)의 아미노산 서열, 서열번호: 25(LCDR2)의 아미노산 서열 및 서열번호: 26(LCDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
다양한 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 서열번호: 2의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 다양한 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 서열번호: 2와 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호: 12과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 다양한 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 예를 들어, 표면 플라즈몬 공명에 의해 측정된 바와 같이, pH 6.0 또는 pH 7.4에서 0.01 nM 내지 2 nM의 KD로 FcRn에 결합한다.
다양한 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 서열번호: 46의 중쇄 아미노산 서열 또는 서열번호: 46과 적어도 90% 동일한 서열을 포함한다. 다양한 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 서열번호: 48의 경쇄 아미노산 서열 또는 서열번호: 48과 적어도 90% 동일한 서열을 포함한다. 다양한 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 서열번호: 46의 중쇄 아미노산 서열 및 서열번호: 48의 경쇄 아미노산 서열을 포함한다. 다양한 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 서열번호: 46과 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 중쇄 아미노산 서열 및 서열번호: 48과 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 경쇄 아미노산 서열을 포함한다.
RVT-1401(본 명세서에서 HL161BKN로도 언급됨)은 항-FcRn 항체의 예시이다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 RVT-1401 또는 이의 항원-결합 단편이다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 RVT-1401의 3개의 중쇄 CDR 아미노산 서열(HCDR1(서열번호: 27), HCDR2(서열번호: 28), HCDR3(서열번호: 29)); 및 RVT-1401의 3개의 경쇄 CDR 아미노산 서열(LCDR1(서열번호: 30), LCDR2(서열번호: 31), LCDR3(서열번호: 32))을 포함한다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 RVT-1401의 중쇄 가변 영역 아미노산 서열(서열번호: 6); 및 RVT-1401의 경쇄 가변 영역 아미노산 서열(서열번호: 16)을 포함한다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 RVT-1401의 중쇄 아미노산 서열(서열번호: 46); 및 RVT-1401의 경쇄 아미노산 서열(서열번호: 48)을 포함한다.
본 명세서에서 개시된 치료 방법 및 용도의 다양한 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 단독 투여된다. 다양한 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 적어도 하나의 추가 치료제와 병용 투여된다. 다양한 구체예에서, 적어도 하나의 추가 치료제는 온열 자가면역 용혈성 빈혈에 대한 표준 치료제를 포함하거나 이루어질 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같은 "병용 투여" 또는 "공동-투여"로 투여된다는 것은 2개 이상의 상이한 치료제가 온열 자가면역 용혈성 빈혈을 갖는 대상체가 고생하는 동안 대상체에게 전달된다는 의미이다. 예를 들어, 일부 구체예에서, 2개 이상의 치료제는 대상체가 질환이 있는 것으로 진단된 후 및 질환이 치료 또는 제거되기 전, 또는 대상체가 위험이 있는 것으로 확인되었으나 대상체가 질환의 증상을 나타내기 전에 전달된다. 일부 구체예에서, 1개의 치료제의 전달은 2차 치료의 전달이 시작될 때 여전히 발생하고 있으므로 중복이 있다. 일부 구체예에서, 1차 및 2차 치료제는 동시에 시작된다. 이들 유형의 전달은 때때로 본 명세서에서 "동시", "동시 발생", 또는 "동반" 전달로 지칭된다. 다른 구체예에서, 1개의 치료제의 전달은 2차 치료제의 전달이 시작되기 전에 종결한다. 이 유형의 전달은 때때로 본 명세서에서 "연속적" 또는 "순차적" 전달로 지칭된다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편 및 적어도 하나의 추가 치료제는 동시에 투여된다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편 및 적어도 하나의 추가 치료제는 순차적으로 투여된다.
일부 구체예에서, 2개의 치료제(예를 들어, 항-FcRn 항체 또는 항원-결합 단편 및 2차 치료제)는 같은 조성물에 포함된다. 그러한 조성물은 임의의 적절한 형태로 및 임의의 적합한 경로에 의해 투여될 수 있다. 다른 구체예에서, 2개의 치료제(예를 들어, 항-FcRn 항체 또는 항원-결합 단편 및 2차 치료제)는 개별 조성물로, 임의의 적절한 형태로 및 임의의 적합한 경로에 의해 투여된다. 예를 들어, 항-FcRn 항체 또는 항원-결합 단편을 포함하는 조성물 및 2차 치료제(예를 들어, 온열 자가면역 용혈성 빈혈에 대한 표준 치료제)를 포함하는 조성물은 동시에 또는 순차적으로, 상이한 시점에 임의의 순서로 투여될 수 있다; 어느 경우에나, 그들은 원하는 치료 또는 예방 효과를 제공할 수 있도록 충분히 가까운 시간에 투여되어야 한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "약제(agent)"는 화합물, 화합물의 혼합물, 생물학적 거대분자, 또는 생물학적 소재로부터 만들어진 추출물을 지칭한다. 용어 "치료제" 또는 "약물"은 생물학적 과정 및/또는 생물학적 활성을 조절할 수 있는 약제를 지칭한다. 본 명세서에서 기술된 항-FcRn 항체 및 항원-결합 단편은 치료제의 예시이다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "표준 치료제(standard-ofcare agent)"는 특정 유형의 질환(예를 들어, 온열 자가면역 용혈성 빈혈)에 대한 적절한 치료로 받아들여지는 임의의 치료제 또는 다른 형태의 요법을 지칭한다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "표준 투여량(standard dosage)" 또는 "표준 투여 요법(standard dosing regien)"은 예를 들어, 제조업체에 의해 제안되거나, 규제 당국에 의해 승인되거나, 또는 아니면 일반적 환자의 요구를 충족하기 위해 인간 대상체에서 시험된 치료제에 대한 임의의 통상적 또는 일상적인 투여 요법을 지칭한다.
온열 자가면역 용혈성 빈혈에 대한 표준 치료제의 한 예는 IVIG이다. 일부 구체예에서, IVIG에 대한 표준 투여 요법은 다음을 포함하거나 이로 구성된다: 2일 동안 IVIG 1g/kg/일. 온열 자가면역 용혈성 빈혈에 대한 표준 치료제의 또 다른 예는 하나 이상의 코르티코스테로이드(예: 프레드니손)이다. 일부 구체예에서, 하나 이상의 코르티코스테로이드(예를 들어, 프레드니손)에 대한 표준 투여 요법은 다음을 포함하거나 이로 구성된다: 10g/dL 이상의 헤모글로빈 수치에 도달할 때까지 1-3주 동안 프레드니손 1.0-1.5mg/kg/일; 및 프레드니손의 후속 투여용량은 매주 10-15mg로 20-30mg의 일일 투여용량으로 서서히 감소, 그런 다음 1-2주마다 5mg씩 15mg까지 감량한 다음 궁극적으로 약물 중단을 목표로 2주마다 2.5mg씩 감량한다. 온열 자가면역 용혈성 빈혈에 대한 추가 표준 치료제, 뿐만 아니라 이러한 제제에 대한 표준 투여 요법은 당업계에 공지되어 있으며, 예를 들어, Kalfa, Hematology Am. Soc. Hematol. Educ. Program 2016(l):690-7, 2016; and Zanella and Barcellini, Haematologica 99(10): 1547-54, 2014, 문헌에 개시되어 있고, 이러한 제제 및 투여 요법에 대해 둘 다 본 명세서에 참조로 포함된다.
본 명세서에 개시된 항-FcRn 항체 및 항원 결합 단편은 본 명세서에 개시 및/또는 참조로 포함된 예시적인 표준 치료제 중 임의의 것과 조합하여 투여될 수 있다.
또한, 적어도 하나의 약학적으로 허용 가능한 담체와 함께 제형화된 항-FcRn 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약학적 조성물이 본 명세서에서 제공된다. 조성물은 또한 예를 들어, 온열 자가면역 용혈성 빈혈(예를 들어, 온열 자가면역 용혈성 빈혈에 대한 표준 치료제)을 치료 또는 예방하는데 적합한 하나 이상의 추가 치료제를 포함할 수 있다. 약학적 조성물의 제형화 방법 및 적합한 제형은 당업계에 공지되어 있다(예를 들어, "Remington's Pharmaceutical Sciences," Mack Publishing Co., Easton, PA 참조). 적합한 제형은 투여 경로에 달려있을 수 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, "약학적 조성물"은 환자에게 투여하기에 적합한 다른 성분, 예를 들어, 약학적으로 허용 가능한 담체 및/또는 부형제에 더하여 항-FcRn 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 제제를 지칭한다. 본 명세서에서 제공된 약학적 조성물은 인 비트로(in vitro) 및/또는 인 비보(in vivo)에서 투여하기에 적당할 수 있다. 일부 구체예에서, 본 명세서에서 제공된 약학적 조성물은 투여를 허용하고, 이어서 활성 성분(들)의 의도된 생물학적 활성을 제공하고 및/또는 치료 효과를 달성하기 위한 형태이다. 본 명세서에서 제공된 약학적 조성물은 바람직하게는 제형이 투여될 대상체에게 허용되지 않을 정도로 독성이 있는 추가 성분들을 포함하지 않는다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "약학적으로 허용 가능한 담체" 및 "생리학적으로 허용 가능한 담체"는 상호교환적으로 사용될 수 있으며, 대상체에게 유의한 자극을 일으키지 않고 투여된 항체 또는 항원-결합 단편의 생물학적 활성 및 특징들을 파괴하지 않는 담체, 희석제 또는 부형제를 지칭한다. 따라서, 약학적으로 허용 가능한 담체는 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 같은 활성 성분과 양립되어야 하며, 생리식염수, 멸균수, 링거액, 완충된 식염수, 덱스트로스 용액, 말토덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올, 또는 이의 둘 이상의 혼합물을 포함할 수 있다. 약학적으로 허용 가능한 담체는 또한 조성물을 향상 또는 안정화시킬 수 있거나, 또는 조성물의 제조를 용이하게 하기 위해 사용될 수 있다. 약학적으로 허용 가능한 담체는 생리학적으로 양립할 수 있는 다른 기존의 첨가제, 예컨대 항산화제, 완충제, 용매, 정균제, 분산 매질, 코팅, 항균제 및 항진균제, 등장 및 흡수 지연제 등을 포함할 수 있다. 담체는 대상체에서 부작용을 최소화하고 및/또는 활성 성분(들)의 분해를 최소화하도록 선택될 수 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "부형제"는 활성 성분의 투여를 추가로 촉진하기 위해 약학적 조성물에 첨가되는 불활성 물질을 지칭한다. 비경구 투여용 제형은 예를 들어, 멸균수 또는 식염수, 폴리에틸렌글리콜과 같은 폴리알킬렌 글리콜, 식물성 오일 또는 수소화된 나프탈렌을 포함할 수 있다. 다른 부형제는 칼슘 바이카보네이트, 칼슘 포스페이트, 다양한 당 및 전분, 셀룰로스 유도체, 젤라틴, 에틸렌-비닐 아세테이트 공중합체 입자의 유형, 및 예를 들어, 폴리소르베이트 20을 포함하는 계면활성제를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
본 명세서에서 개시된 치료 방법, 용도 및 조성물의 다양한 구체예에서, 항-FcRn 항체, 항원-결합 단편 또는 약학적 조성물은 당엄계에 공지된 다양한 방법들로 투여될 수 있다. 투여의 경로 및/또는 방식은 원하는 결과에 따라 다양할 수 있다. 일부 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편 또는 약학적 조성물은 경구, 정맥내, 근육내, 동맥내, 골수내, 경막내, 심장내, 경피, 피하, 복강내, 위장, 설하 또는 국소 경로로 투여된다. 일부 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편 또는 약학적 조성물은 경구 또는 비경구로 투여된다. 일부 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편 또는 약학적 조성물은 비경구로, 예를 들어, 정맥내 또는 피하(예를 들어, 주사 또는 주입에 의해) 투여된다. 일부 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편 또는 약학적 조성물은 피하(예를 들어, 주사 또는 주입에 의해)투여된다. 일부 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편 또는 약학적 조성물은 1회 이상의 피하 주사로 투여된다. 일부 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편 또는 약학적 조성물은 단일(즉, 1회) 피하 주사로 투여된다. 일부 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편 또는 약학적 조성물은 2회 이상(예를 들어, 2회) 연속 피하주사로 투여된다. 일부 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편 또는 약학적 조성물은 주사기, 카테터, 펌프 전달 시스템, 또는 스텐트를 통해 전달된다. 일부 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편 또는 약학적 조성물은 주사기(예를 들어, 미리 충전된 주사기)를 통해 전달된다. 투여 경로에 따라서, 활성 화합물(들), 즉 항-FcRn 항체 또는 항원-결합 단편은 산의 작용 및 화합물(들)을 비활성화할 수 있는 다른 자연상태로부터 화합물(들)을 보호하기 위한 물질로 코팅될 수 있다.
항체, 항원-결합 단편 또는 약학적 조성물은 분말, 정제, 캡슐, 액체, 주사, 연고 또는 시럽과 같은 다양한 형태로 제형화되고, 및/또는 밀봉된 앰플, 바이얼 또는 주사기와 같은 단회-투여형(single-dosage) 또는 다회-투여형(multi-dosage) 용기에 포함될 수 있다. 일부 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편 또는 약학적 조성물은 주사가능한 형태로 제형화된다. 일부 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편 또는 약학적 조성물은 하나 이상의 부형제, 희석제, 분산제, 계면활성제, 바인더 및/또는 윤활제와 함께 수용액, 현탁액 또는 에멀젼으로서 제형화된다. 일부 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편 또는 약학적 조성물은 주사기(예를 들어, 미리 충전된 주사기)에 포함된다. 일부 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편, 또는 약학적 조성물은 소형 게이지 바늘(예를 들어, 약 25 게이지 보다 큰, 약 26 게이지 보다 큰, 약 27 게이지 보다 큰, 약 28 게이지 보다 큰, 약 29 게이지 보다 큰 및/또는 약 30 게이지 보다 큰 바늘)을 갖는 및/또는 호환가능한 주사기에 포함된다.
일부 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편, 또는 약학적 조성물은 안정성 달성 및/또는 투여 전에 물리적 및/또는 화학적 분해를 방지하거나 최소화하도록 제제화된다. 물리적 불안정에는 변성 및 응집과 같은 과정이 포함할 수 있는 반면, 일반적인 화학적 분해 경로에는 이에 제한되는 것은 아니나, 가교, 탈아미드화, 이성질체화, 산화 및 단편화가 포함된다 (예를 들어, Wang et al., J. Pharm. Sci. 91(1): 1-26, 2007 참조). 본 명세서에 사용된 바와 같이, 용어 "안정한" 또는 "안정성"은 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 설명하는 데 사용될 때 항체 또는 항원-결합 단편이 활성(예를 들어, FcRn에 대한 결합)을 유지 및/또는 치료 효과를 달성하는 방식으로 온전한 상태로 유지됨을 의미한다. 일부 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편, 또는 약학적 조성물은 표준 저장 조건 하에 안정하도록 1종 이상의 제약상 허용되는 담체 (예를 들어, 1종 이상의 부형제)와 함께 제제화된다. 일부 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편, 또는 약학적 조성물은 고농도에서 안정하도록 1종 이상의 제약상 허용되는 담체 (예를 들어, 1종 이상의 부형제)와 함께 제제화된다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 약 170 mg/mL 이상까지 제제에서 안정하게 농축될 수 있다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 약 170 mg/mL 초과(예를 들어, 약 180 mg/mL, 약 200 mg/mL, 약 220 mg/mL 이상)의 제형에서 안정하게 농축될 수 있다. 일부 구체예에서, 안정하게 농축된 제제(예를 들어, 최대 약 170 mg/mL 이상의 항체 또는 항원 결합 단편을 포함하는 제제)는 소형 게이지 바늘을 통한 투여에 대해 허용되는 점도를 유지한다. 일부 구체예에서, 소형 게이지 바늘은 약 25 게이지 보다 큰, 약 26 게이지 보다 큰, 약 27 게이지 보다 큰, 약 28 게이지 보다 큰, 약 29 게이지 보다 큰 및/또는 약 30 게이지 보다 큰 것이다.
항-FcRn 항체 또는 항원-결합 단편에 대한 투여 요법은 단독 또는 하나 이상의 추가 치료제와 함께 병용으로 최적의 원하는 반응(예를 들어, 치료 반응)을 제공하기 위해 조정될 수 있다. 예를 들어, 항-FcRn 항체 또는 항원-결합 단편의 단회 볼루스가 한번에 투여될 수 있고, 여러 분할된 투여용량이 미리 결정된 시기에 걸쳐 투여될 수 있거나, 또는 항-FcRn 항체 또는 항원-결합 단편의 투여용량은 치료상황의 긴급성에 의해 나타난 바와 같이 비례적으로 감소 또는 증가될 수 있다. 임의의 특정 대상체의 경우, 특정 투여 요법은 개인의 필요 및 치료 임상의의 전문적인 판단에 따라 시간이 지남에 따라 조정될 수 있다. 예를 들어, 일부 구체예에서, 항-FcRn 항체 또는 항원-결합 단편의 투여용량은 환자의 중증도, 상태, 연령, 증례 이력 등을 고려하여 적절하게 결정될 수 있다.
항-FcRn 항체 또는 항원-결합 단편은 당업자에게 공지된 전통적인 방법에 의해 약학적으로 허용 가능한 투여 형태로 제형화될 수 있다. 예를 들어, 비경구 조성물은 투여의 용이성 및 투여량의 균일성을 위해 투여 단위 형태로 제형화될 수 있다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, "투여 단위 형태"는 치료될 대상체에 대한 단위 투여형으로 적합한 물리적으로 분리된 단위를 지칭하고, 각 단위는 약학적으로 허용된 담체와 관련하여 원하는 치료 효과를 생성하도록 계산된 미리 결정된 양의 활성 화합물을 포함한다. 일부 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편 또는 약학적 조성물은 투여 단위 형태로 제형화된다. 일부 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편 또는 약학적 조성물은 피하 투여를 위한 투여 단위 형태로 제형화된다. 일부 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편 또는 약학적 조성물은 1회 이상의 피하 주사(예를 들어, 1회 피하 주사 또는 2회 이상(예를 들어, 2회)연속 피하 주사)로 투여하기 위한 투여 단위 형태로 제형화된다. 일부 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편 또는 약학적 조성물은 환자에 의한 자기-투여 및/또는 치료 임상의에 의한 투여를 위한 투여 단위 형태(예를 들어, 하나 이상의 피하 주사)로 제형화된다.
항-FcRn 항체 또는 항원-결합 단편, 항-FcRn 항체 또는 항원-결합 단편 및/또는 임의의 추가 치료제(들)을 포함하는 조성물에 대한 투여 값은 활성 화합물(들)의 고유한 특성 및 달성될 특정 치료 효과에 기초하여 선택될 수 있다.
의사 또는 수의사는 원하는 치료 효과를 달성하는데 필요한 수준보다 낮은 수준에서 항체 또는 항원-결합 단편의 투여량을 시작하고, 원하는 효과가 달성될 때까지 투여량을 점차 늘릴 수 있다. 의사 또는 수의사는 또한 원하는 치료 효과를 달성하는데 필요한 수준보다 높은 수준에서 항체 또는 항원-결합 단편의 투여량을 시작하고, 원하는 효과가 달성될 때까지 투여량을 점차 줄일 수 있다. 일반적으로, 온열 자가면역 용혈성 빈혈의 치료를 위한 항체 또는 항원-결합 단편의 유효 투여량은 치료가 예방인지 또는 치료인지를 포함하여 많은 상이한 인자들에 따라 다양하다. 선택된 투여량 수준은 또한 사용된 특정 조성물 또는 이의 에스테르, 염 또는 아마이드의 활성, 투여 경로, 투여 시간, 사용된 특정 화합물의 배출 속도, 치료 기간, 사용된 특정 조성물과 함게 병용으로 사용된 다른 약물, 화합물 및/또는 소재, 연령, 성, 체중, 상태, 치료될 환자의 일반적인 건강 및 이전 병력, 및 유사 인자들 등을 포함하는 다양한 약동학 인자들에 달려있을 수 있다. 일부 구체예에서, 치료는 1회 또는 수회 투여될 수 있다. 특정 환자의 상태를 고려하여 간헐적 및/또는 만성(지속적) 투약 전량이 적용될 수 있다.
일부 구체예에서, 항-FcRn 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 본 개시의 방법, 용도 및 약학적 조성물에 적용된다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "치료적 유효량" 및 "치료적 유효 투여량"은 질병, 장애 또는 상태와 관련된 적어도 하나의 증상 또는 측정가능한 파라미터를 감소시키고; 특정 신체 기능의 손상을 초래하는 질병, 장애 또는 상태에서 신체 기능을 정상화하고; 및/또는 질병, 장애 또는 상태의 하나 이상의 임상적으로 측정된 파라미터의 개선을 제공하거나 진행을 늦추는데 충분한 양을 지칭하는데 상호교환적으로 사용된다. 치료적 유효량은 예를 들어 온열 자가면역 용혈성 빈혈의 하나 이상의 증상을 치료, 예방, 중증도 감소, 발병 지연 및/또는 발생 위험 감소에 충분할 수 있다. 치료적 유효량, 그리고 투여의 치료적 유효 빈도는 당업계에 공지된 방법들에 의해 측정되고, 본 명세서에서 토론될 수 있다. 본 명세서에서 기술된 방법, 용도 및 조성물의 일부 구체예에서, 항-FcRn 항체 또는 항원-결합 단편은 단일 약제로 투여되는 경우 치료적으로 유효한 양으로 투여된다. 일부 구체예에서, 항-FcRn 항체 또는 항원-결합 단편 및 적어도 하나의 추가 치료제는 약제가 병용으로 사용되는 경우 치료적으로 유효한 양으로 각각 투여된다. 일부 구체예에서, 항-FcRn 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 온열 자가면역 용혈성 빈혈을 앓거나 의심되는 환자에서 총 혈청 IgG의 수준 및/또는 적어도 하나의 자가항체(예를 들어, 적어도 하나의 IgG)의 수준을 감소시키는 데 필요한 양이다. 일부 구체예에서, 항-FcRn 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 온열 자가면역 용혈성 빈혈을 앓거나 의심되는 환자에서 헤모글로빈 수준을 증가시키는 데 필요한 양이다.
일부 구체예에서, 항-FcRn 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 온열 자가면역 용혈성 빈혈 환자 및/또는 환자의 시료에서 총 혈청 IgG의 수준 및/또는 적어도 하나의 자가항체 및/또는 병원성 항체(예를 들어, 적어도 하나의 IgG)의 수준을 항-FcRn 항체 또는 항원 결합 단편으로 치료하기 전 수준에 비해 적어도 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 또는 약 80% 감소시키는데 필요한 양이다. 일부 구체예에서, 항-FcRn 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 온열 자가면역 용혈성 빈혈 환자 및/또는 환자의 시료에서 총 혈청 IgG의 수준 및/또는 적어도 하나의 자가항체 및/또는 병원성 항체(예를 들어, 적어도 하나의 IgG)의 수준을 항-FcRn 항체 또는 항원 결합 단편으로 치료하기 전 수준에 비해 적어도 약 40%, 약 50%, 약 60%, 약 70%, 또는 약 80% 감소시키는데 필요한 양이다. 일부 구체예에서, 항-FcRn 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 온열 자가면역 용혈성 빈혈 환자 및/또는 환자의 시료에서 혈청 내인성 IgG 농도를 전처리 값의 약 40%, 약 50%, 약 60%, 약 70%, 또는 약 80% 미만 감소시키는 데 필요한 양이다.
본 명세서에서 사용된 바와 같은 어구 "총 IgG 수준" 또는 "총 혈청 IgG의 수준"은 예를 들어, 환자 또는 환자의 생물학적 시료(예를 들어, 혈액 시료)에서 혈청 내인성 IgG 농도를 지칭한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같은 어구 "적어도 하나의 자가항체의 수준"은 예를 들어, 환자 또는 환자의 생물학적 시료에서 적어도 하나의 자가항체의 혈청 내인성 농도를 지칭한다.
명세서에서 사용된 바와 같은 어구 "적어도 하나의 IgG의 수준"은 예를 들어, 환자 또는 환자의 생물학적 시료에서 적어도 하나의 IgG의 혈청 내인성 농도를 지칭한다. 일부 구체예에서, 적어도 하나의 IgG는 병원성 IgG를 포함한다. 일부 구체예에서, 적어도 하나의 IgG는 혈청 IgG1을 포함한다. 일부 구체예에서, 적어도 하나의 IgG는 혈청 IgG2를 포함한다. 일부 구체예에서, 적어도 하나의 IgG는 혈청 IgG3를 포함한다. 일부 구체예에서, 적어도 하나의 IgG는 혈청 IgG3를 포함한다. 일부 구체예에서, 적어도 하나의 IgG는 혈청 IgG4를 포함한다.
일부 구체예에서, 항-FcRn 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 온열 자가면역 용혈성 빈혈 환자 및/또는 환자의 시료에서 헤모글로빈의 수준을 항-FcRn 항체 또는 항원 결합 단편으로 치료하기 전 수준에 비해 적어도 약 5%, 약 10%, 약 15%, 약 20%(예를 들어, 약 5% 내지 약 30%) 증가시키는데 필요한 양이다.
일부 구체예에서, 항-FcRn 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 온열 자가면역 용혈성 빈혈 환자 및/또는 환자의 시료에서 헤모글로빈의 수준을 항-FcRn 항체 또는 항원 결합 단편으로 치료하기 전 수준에 비해 매주 약 1 또는 2주 투여 후 적어도 약 10%(예를 들어, 약 10% 내지 약 15%) 증가시키는데 필요한 양이다.
일부 구체예에서, 항-FcRn 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 온열 자가면역 용혈성 빈혈 환자 및/또는 환자의 시료에서 헤모글로빈의 수준을 항-FcRn 항체 또는 항원 결합 단편으로 치료하기 전 수준에 비해 매주 약 1 또는 2주 투여 후 적어도 약 20%(예를 들어, 약 20% 내지 약 25%) 증가시키는데 필요한 양이다.
일부 구체예에서, 환자 및/또는 환자의 시료에서 헤모글로빈 수준의 증가(예를 들어, 약 10%, 약 20% 또는 그 이상의 증가)는 전체 치료 기간 또는 그의 일부 동안 유지된다. 일부 구체예에서, 환자 및/또는 환자의 시료에서 헤모글로빈 수준의 증가(예를 들어, 약 10%, 약 20% 또는 그 이상의 증가)는 적어도 2, 3, 또는 4주(예를 들어, 4주 이상)동안 유지된다. 일부 구체예에서, 환자 및/또는 환자의 시료에서 헤모글로빈 수준의 증가(예를 들어, 약 10%, 약 20% 또는 그 이상의 증가)는 약 2 내지 약 6주 동안 유지된다.
수치 및 범위와 관련하여 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "약" 또는 "대략"은 본 명세서에서 포함된 교시로부터 당업자에게 명백한 바와 같이, 구체예가 의도한대로 수행될 수 있도록 인용된 수치 또는 범위에 근접하거나 가까운 수치 또는 범위를 지칭한다. 이들 용어는 체계적인 오류로 인한 값 이상을 포함한다. 일부 구체예에서, "약" 또는 "대략"은 수치적 양의 ±10%를 의미한다.
본 명세서에서 개시된 치료 방법 및 용도의 다양한 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 고정된 투여용량으로 환자에게 투여된다. 본 명세서에서 개시된 치료 방법 및 용도의 다양한 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 중량기반 투 여용량, 즉, 환자의 체중에 따른 투여용량으로 환자에게 투여된다. 본 명세서에서 개시된 치료 방법 및 용도의 다양한 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 신체 표면적 기반 투여용량, 즉, 환자의 신체 표면적(BSA)에 따른 투여용량으로 환자에게 투여된다. 다양한 구체예에서, 환자에게 투여되는 투여용량은 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량을 포함한다.
일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 약 170 mg 내지 약 1500 mg의 투여용량으로 환자에게 투여된다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 약 300 mg 내지 약 800 mg의 투여용량으로 환자에게 투여된다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 예를 들어, 매주 1회 또는 2주마다 1회, 약 170 mg, 약 200 mg, 약 250 mg, 약 300 mg, 약 350 mg, 약 400 mg, 약 450 mg, 약 500 mg, 약 550 mg, 약 600 mg, 약 650　mg, 약 700 mg, 약 750 mg, 약 800 mg, 약 850 mg, 약 900　mg, 약 950 mg, 약 1000 mg, 약 1050 mg, 약 1100 mg, 약 1150　mg, 약 1200 mg, 약 1250 mg, 약 1300 mg, 약 1350 mg, 약 1400　mg, 약 1450 mg, 또는 1500 mg의 투여용량으로 환자에게 투여된다.
일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 약 170 mg 내지 약 300 mg의 투여용량으로 환자에게 투여된다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 약 170 mg, 약 180 mg, 약 200 mg, 약 210 mg, 약 220 mg, 약 230 mg, 약 240 mg, 약 250 mg, 약 260 mg, 약 270 mg, 약 280 mg, 약 290　mg, 또는 약 300 mg의 투여용량으로 환자에게 투여된다.
일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 약 300 mg 내지 약 500 mg의 투여용량으로 환자에게 투여된다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 약 300 mg, 약 310 mg, 약 320mg, 약 330 mg, 약 340 mg, 약 350 mg, 약 360 mg, 약 370 mg, 약 380 mg, 약 390 mg, 약 400 mg, 약 410 mg, 약 420 mg, 약 430 mg, 약 440 mg, 약 450 mg, 약 460 mg, 약 470 mg, 약 480 mg, 약 490 mg, 또는 약 500 mg의 투여용량으로 환자에게 투여된다.
일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 약 300 mg 내지 약 400 mg의 투여용량으로 환자에게 투여된다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 약 300 mg, 약 310 mg, 약 320 mg, 약 330 mg, 약 340 mg, 약 350 mg, 약 360 mg, 약 370 mg, 약 380 mg, 약 390 mg, 또는 약 400 mg의 투여용량으로 환자에게 투여된다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 약 320 mg, 약 330 mg, 약 340 mg, 약 350 mg, 또는 약 360 mg의 투여용량으로 환자에게 투여된다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 약 340 mg의 투여용량으로 환자에게 투여된다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 매주 1회 또는 2주마다 1회 약 340 mg의 투여용량으로 환자에게 투여된다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 매주 1회 약 340 mg의 투여용량으로 환자에게 투여된다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 단일 피하 주사로서 매주 1회 약 340 mg의 투여용량으로 환자에게 투여된다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 적어도 2주(예를 들어, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 7주, 8주, 10주, 12주 이상) 동안 매주 1회 약 340 mg의 투여용량으로 환자에게 투여된다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 적어도 4주 동안 매주 1회 약 340 mg의 투여용량으로 환자에게 투여된다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 적어도 7주 동안 매주 1회 약 340 mg의 투여용량으로 환자에게 투여된다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 적어도 12주 동안 매주 1회 약 340 mg의 투여용량으로 환자에게 투여된다.
일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 약 500 mg 내지 약 700 mg의 투여용량으로 환자에게 투여된다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 약 500 mg, 약 510 mg, 약 520 mg, 약 530 mg, 약 540 mg, 약 550 mg, 약 560 mg, 약 570 mg, 약 580 mg, 약 590 mg, 약 600 mg, 약 610 mg, 약 620 mg, 약 630 mg, 약 640 mg, 약 650 mg, 약 660 mg, 약 670 mg, 약 680 mg, 약 690 mg, 또는 약 700 mg 의 투여용량으로 환자에게 투여된다.
일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 약 650 mg 내지 약 750 mg의 투여용량으로 환자에게 투여된다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 약 650 mg, 약 660 mg, 약 670 mg, 약 680 mg, 약 690 mg, 약 700 mg, 약 710 mg, 약 720 mg, 약 730 mg, 약 740 mg, 또는 약 750 mg의 투여용량으로 환자에게 투여된다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 약 660 mg, 약 670 mg, 약 680 mg, 약 690 mg, 또는 약 700 mg의 투여용량으로 환자에게 투여된다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 약 680 mg의 투여용량으로 환자에게 투여된다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 매주 1회 또는 2주마다 1회 약 680 mg의 투여용량으로 환자에게 투여된다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 매주 1회 약 680 mg의 투여용량으로 환자에게 투여된다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 2회 이상(예를 들어, 2회) 연속 피하 주사로 매주 1회 약 680 mg의 투여용량으로 환자에게 투여된다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 적어도 2주(예를 들어, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 7주, 8주, 10주, 12주, 또는 그 이상) 동안 매주 1회 약 680 mg의 투여용량으로 환자에게 투여된다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 적어도 4주 동안 매주 1회 약 680 mg의 투여용량으로 환자에게 투여된다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 적어도 7주 동안 매주 1회 약 680 mg의 투여용량으로 환자에게 투여된다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 적어도 12주 동안 매주 1회 약 680 mg의 투여용량으로 환자에게 투여된다.
일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 약 700 mg 내지 약 900 mg의 투여용량으로 환자에게 투여된다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 약 700 mg, 약 710 mg, 약 720 mg, 약 730 mg, 약 740 mg, 약 750 mg, 약 760 mg, 약 770 mg, 약 780 mg, 약 790 mg, 약 800 mg, 약 810 mg, 약 820 mg, 약 830 mg, 약 840 mg, 약 850 mg, 약 860 mg, 약 870 mg, 약 880 mg, 약 890 mg, 또는 약 900 mg의 투여용량으로 환자에게 투여된다.
일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 약 900 mg 내지 약 1100 mg의 투여용량으로 환자에게 투여된다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 약 900 mg, 약 910 mg, 약 920 mg, 약 930 mg, 약 940 mg, 약 950 mg, 약 960 mg, 약 970 mg, 약 980 mg, 약 990 mg, 약 1000 mg, 약 1010 mg, 약 1020 mg, 약 1030 mg, 약 1040 mg, 약 1050 mg, 약 1060 mg, 약 1070 mg, 약 1080 mg, 약 1090 mg, 또는 약 1100 mg의 투여용량으로 환자에게 투여된다.
일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 약 1100 mg 내지 약 1300 mg의 투여용량으로 환자에게 투여된다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 약 1100 mg, 약 1110 mg, 약 1120 mg, 약 1130 mg, 약 1140 mg, 약 1150 mg, 약 1160 mg, 약 1170 mg, 약 1180 mg, 약 1190 mg, 약 1200 mg, 약 1210 mg, 약 1220 mg, 약 1230 mg, 약 1240 mg, 약 1250 mg, 약 1260 mg, 약 1270 mg, 약 1280 mg, 약 1290 mg 또는 약 1300 mg의 투여용량으로 환자에게 투여된다.
일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 약 1300 mg 내지 약 1500 mg의 투여용량으로 환자에게 투여된다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 약 1300 mg, 약 1310 mg, 약 1320 mg, 약 1330 mg, 약 1340 mg, 약 1350 mg, 약 1360 mg, 약 1370 mg, 약 1380 mg, 약 1390 mg, 약 1400 mg, 약 1410 mg, 약 1420 mg, 약 1430 mg, 약 1440 mg, 약 1450 mg, 약 1460 mg, 약 1470 mg, 약 1480 mg, 약 1490 mg 또는 약 1500 mg의 투여용량으로 환자에게 투여된다.
일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 약 1 mg/kg 내지 약 2000 mg/kg 체중의 투여용량으로 환자에게 투여된다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 약 1 mg/kg 내지 약 200 mg/kg, 약 200 mg/kg 내지 약 400 mg/kg, 약 400 mg/kg 내지 약 600 mg/kg, 약 600 mg/kg 내지 약 800 mg/kg, 약 800 mg/kg 내지 약 1000 mg/kg, 약 1000 mg/kg 내지 약 1200 mg/kg, 약 1200 mg/kg 내지 약 1400 mg/kg, 약 1400 mg/kg 내지 약 1600 mg/kg, 약 1600 mg/kg 내지 1800 mg/kg 또는 약 1800 mg/kg 내지 약 2000 mg/kg의 투여용량으로 환자에게 투여된다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 약 1 mg/kg 내지 약 200 mg/kg의 투여용량으로 환자에게 투여된다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 약 1 mg/kg, 약 10 mg/kg, 약 20 mg/kg, 약 30 mg/kg, 약 40 mg/kg, 약 50　mg/kg, 약 60 mg/kg, 약 70 mg/kg, 약 80 mg/kg, 약 90 mg/kg, 약 100 mg/kg, 약 110 mg/kg, 약 120 mg/kg, 약 130 mg/kg, 약 140 mg/kg, 약 150 mg/kg, 약 160 mg/kg, 약 170　mg/kg, 약 180 mg/kg, 약 190 mg/kg 또는 약 200 mg/kg의 투여용량으로 환자에게 투여된다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 약 1 mg/kg 내지 약 40 mg/kg의 투여용량으로 환자에게 투여된다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 약 1　mg/kg, 약 5 mg/kg, 약 10 mg/kg, 약 15 mg/kg, 약 20　mg/kg, 약 25 mg/kg, 약 30 mg/kg, 약 35 mg/kg 또는 약 40 mg/kg의 투여용량으로 환자에게 투여된다.
항체 또는 항원-결합 단편이 단일 약제 또는 하나 이상의 추가 치료제와 병용으로 환자에게 투여되는 빈도는 1회 또는 1회 이상일 수 있다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 일회성으로 투여된다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 다회성으로 투여된다. 투여 간격은 예를 들어, 매일, 매주, 격주, 매달 또는 매년일 수 있다. 간격은 또한 예를 들어, 원하는 치료 또는 예방 효과를 제공하기 위해 항체 또는 항원-결합 단편의 상대적으로 일관된 혈장 농도를 유지하기 위해 환자에서 항체 또는 항원-결합 단편의 혈중 농도 측정에 기초하거나; 적어도 하나의 자가항체 및/또는 병원성 항체(예를 들어, 적어도 하나의 IgG)의 감소된 수준을 유지하기 위해 적어도 하나의 자가항체 및/또는 병원성 항체(예를 들어, 적어도 하나의 IgG)의 농도 측정에 기초하거나; 원하는 치료 또는 예방 효과를 제공하기 위해 감소된 수준의 총 혈청 IgG를 유지하기 위해 총 혈청 IgG의 수준 측정에 기초하거나; 및/또는 원하는 치료 또는 예방 효과를 제공하기 위해 증가된 수준의 헤모글로빈을 유지하기 위한 헤모글로빈 수준의 측정에 기초하여, 불규칙할 수 있다. 대안으로, 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 서방성 제형으로서 투여될 수 있으며, 이 경우 덜 빈번한 투여가 요구된다. 투여량(dosage) 및 간격은 환자에서 항체 또는 항원-결합 단편의 반감기에 따라 달라질 수 있다. 투여량 및 투여 빈도는 또한 처치가 예방인지 또는 치료인지에 따라 다양할 수 있다. 예방적 적용에서, 상대적으로 낮은 투여량은 장기간에 걸쳐 상대적으로 드문 간격으로 투여될 수 있다. 일부 환자들은 남은 평생 동안 처치를 계속 받는다. 치료적 적용에서, 상대적으로 더 짧은 간격으로 상대적으로 더 높은 투여량이 때때로 질환의 진행이 감소 또는 종결될 때까지 바람직하게는 환자가 질환의 하나 이상의 증상을 부분적 또는 완전한 개선을 보일때까지 필요하다. 그 후, 환자는 더 낮은, 예를 들어, 예방 요법이 투여될 수 있다.
일부 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편 또는 약학적 조성물은 약 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 14일, 1주, 2주, 3주, 4주, 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 6개월, 7개월, 8개월, 9개월, 10개월, 11개월, 12개월, 18개월, 24개월, 30개월, 36개월 또는 그 이상의 기간에 걸쳐 1회 또는 1회 이상 환자에게 투여된다.
일부 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편, 또는 약학적 조성물은 단일 투여용량으로 1회 환자에게 투여된다.
일부 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편 또는 약학적 조성물은 매주 1회 환자에게 투여된다. 일부 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편 또는 약학적 조성물은 적어도 1주, 적어도 2주, 적어도 3주, 적어도 4주, 적어도 5주, 적어도 6주, 적어도 7주, 적어도 8주, 적어도 9주, 적어도 10주, 적어도 12주, 적어도 20주, 적어도 24주, 적어도 30주, 적어도 40주, 적어도 50주, 적어도 60주, 적어도 70주, 적어도 76주, 적어도 80주 또는 그 이상 동안 매주 1회 환자에게 투여된다. 일부 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편 또는 약학적 조성물은 6 내지 76주 동안 또는 그 사이의 임의의 기간 동안 매주 1회 환자에게 투여된다. 일부 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편 또는 약학적 조성물은 적어도 2주, 적어도 3주, 적어도 4주, 또는 적어도 6주 동안 매주 1회 환자에게 투여된다. 일부 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편 또는 약학적 조성물은 적어도 4주 동안 매주 1회 환자에게 투여된다. 일부 구체예에서, 항체, 항원 결합 단편 또는 약학적 조성물은 적어도 7주 동안 매주 1회 환자에게 투여된다. 일부 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편 또는 약학적 조성물은 적어도 12주 동안 매주 1회 환자에게 투여된다. 일부 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편 또는 약학적 조성물은 온열 자가면역 용혈성 빈혈의 하나 이상의 증상(예를 들어, 창백, 피로, 황달, 비장 비대)의 치료, 예방, 중증도 감소, 발병 지연 및/또는 발생 위험 감소에 충분할 때까지 매주 1회 환자에게 투여된다.
일부 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편 또는 약학적 조성물은 단일(즉, 1회) 피하 주사로서 매주 1회 환자에게 투여된다. 일부 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편 또는 약학적 조성물은 2회 이상 연속 피하 주사(예를 들어, 2회의 연속 피하 주사)로 매주 1회 환자에게 투여된다. 피하 주사(또는 다른 투여 경로)의 맥락에서 본 명세서에서 사용된 바와 같이 용어 "연속"은 차례로 투여되지만 원하는 치료 또는 예방효과를 제공하기 위해 시간이 충분히 가까운 2회 이상의 피하 주사를 지칭한다. 일부 구체예에서, 연속 피하 주사는 서로 약 30초 이내, 약 1분 이내, 약 2분 이내, 약 5분 이내, 약 10분 이내, 약 30분 이내, 약 1시간 이내, 약 2시간 이내, 또는 서로 약 5시간 이내에 투여된다.
일부 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편 또는 약학적 조성물은 2주 마다(격주) 1회 환자에게 투여된다. 일부 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편 또는 약학적 조성물은 적어도 2주, 적어도 4주, 적어도 6주, 적어도 8주, 적어도 10주, 적어도 12주, 적어도 20주, 적어도 24주, 적어도 30주, 적어도 40주, 적어도 50주, 적어도 60주, 적어도 70주, 적어도 76주, 적어도 80주 또는 그 이상 동안 2주마다 1회 환자에게 투여된다. 일부 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편 또는 약학적 조성물은 6 내지 76주 또는 그 사이의 임의의 시기 동안 2주마다 1회 환자에게 투여된다. 일부 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편 또는 약학적 조성물은 적어도 12주 동안 2주마다 1회 환자에게 투여된다. 일부 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편 또는 약학적 조성물은 온열 자가면역 용혈성 빈혈의 하나 이상의 증상의 치료, 예방, 중증도 감소, 발병 지연, 및/또는 발생 위험 감소에 충분할 때까지 2주마다 1회 환자에게 투여된다. 일부 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편 또는 약학적 조성물은 단일 피하 주사로 2주마다 1회 환자에게 투여된다. 일부 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편 또는 약학적 조성물은 2회 연속 피하 주사로 2주마다 1회 환자에게 투여된다.
일부 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편 또는 약학적 조성물은 매달 1회 환자에게 투여된다. 일부 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편 또는 약학적 조성물은 적어도 1개월, 적어도 2개월, 적어도 3개월, 적어도 4개월, 적어도 5개월, 적어도 6개월, 적어도 7개월, 적어도 8개월, 적어도 9개월, 적어도 10개월, 적어도 11개월, 적어도 12개월, 적어도 18개월, 적어도 24개월, 적어도 30개월, 적어도 36 개월, 또는 그 이상 동안 매달 1회 환자에게 투여된다. 일부 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편 또는 약학적 조성물은 온열 자가면역 용혈성 빈혈의 하나 이상의 증상의 치료, 예방, 중증도 감소, 발병 지연 및/또는 발생 위험을 감소시킬 때까지 매달 1회 환자에게 투여 된다. 일부 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편 또는 약학적 조성물은 단일 피하 주사로 매달 1회 환자에게 투여된다. 일부 구체예에서, 항체, 항원-결합 단편 또는 약학적 조성물은 2회 이상 연속 피하 주사로 매달 1회 환자에게 투여된다.
본 명세서에서 개시된 치료 방법, 용도 및 조성물의 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 단일 투여용량으로 1회 투여되는 약 170 내지 1500 mg이다. 보다 구체적으로, 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 단일 투여용량으로 1회 투여되는 약 170 mg 내지 약 300 mg이다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 단일 투여용량으로 1회 투여되는 약 300 mg 내지 약 500 mg이다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 단일 투여용량으로 1회 투여되는 약 500 mg 내지 약 700 mg이다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 단일 투여용량으로 1회 투여되는 약 700 mg 내지 약 900 mg이다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 단일 투여용량으로 1회 투여되는 약 900 mg 내지 약 1100 mg이다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 단일 투여용량으로 1회 투여되는 약 1100 mg 내지 약 1300 mg이다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 단일 투여용량으로 1회 투여되는 약 1300 mg 내지 약 1500 mg이다.
본 명세서에서 개시된 치료 방법, 용도 및 조성물의 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 단일 투여용량으로 1회 투여되는 약 300 mg 내지 약 800 mg이다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 단일 투여용량으로 1회 투여되는 약 300 mg 내지 약 400 mg이다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 단일 투여용량으로 1회 투여되는 약 340 mg이다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 단일 투여용량으로 1회 투여되는 약 450 mg 내지 약 550 mg이다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 단일 투여용량으로 1회 투여되는 약 500 mg이다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 단일 투여용량으로 1회 투여되는 약 700 mg 내지 약 800 mg이다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 단일 투여용량으로 1회 투여되는 약 765 mg이다. 일부 구체예에서, 치료는 환자에서 총 혈청 IgG의 수준을 적어도 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45%, 또는 약 50% 감소시킨다. 일부 구체예에서, 치료는 환자의 총 혈청 IgG의 수준을 적어도 약 25% 감소시킨다. 일부 구체예에서, 치료는 환자의 총 혈청 IgG의 수준을 적어도 약 35% 감소시킨다. 일부 구체예에서, 치료는 환자의 총 혈청 IgG의 수준을 적어도 약 45% 감소시킨다. 일부 구체예에서, 환자에서 총 혈청 IgG 수준의 최대 감소는 항체 또는 항원-결합 단편, 또는 항체 또는 항원-결합 단편을 포함하는 약학적 조성물의 투여 후 약 5일 내지 약 20일에 발생한다. 일부 구체예에서, 환자에서 총 혈청 IgG 수준의 최대 감소는 항체 또는 항원-결합 단편, 또는 항체 또는 항원-결합 단편을 포함하는 약학적 조성물의 투여 후 약 8일 내지 약 15일에 발생한다. 일부 구체예에서, 총 혈청 IgG 수준의 최대 감소는 항체 또는 항원-결합 단편, 또는 항체 또는 항원-결합 단편을 포함하는 약학적 조성물의 약 3 내지 5회 투여용량 후(예를 들어, 약 4회 투여용량 후) 발생한다. 일부 구체예에서, 치료는 환자의 헤모글로빈 수준을 적어도 약 5%, 약 10%, 약 15%, 또는 약 20%(예를 들어, 약 5% 내지 약 30%) 증가시킨다. 일부 구체예에서, 치료는 환자의 헤모글로빈 수준을 적어도 약 10%(예를 들어, 약 10% 내지 약 15%) 증가시킨다. 일부 구체예에서, 치료는 환자의 헤모글로빈 수준을 적어도 약 20%(예를 들어, 약 20% 내지 약 25%) 증가시킨다. 일부 구체예에서, 치료는 환자의 헤모글로빈 수준을 약 20% 이상(예를 들어, 약 25%, 약 30%, 또는 그 이상) 증가시킨다.
본 명세서에서 개시된 치료 방법, 용도 및 조성물의 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 매주 1회 투여되는 약 170 mg 내지 약 1500 mg이다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 매주 1회 투여되는 약 170 mg 내지 약 300 mg이다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 매주 1회 투여되는 약 300 mg 내지 약 500 mg이다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 매주 1회 투여되는 약 500 mg 내지 약 700 mg이다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 매주 1회 투여되는 약 700 mg 내지 약 900 mg이다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원 결합 단편의 치료적 유효량은 매주 1회 투여되는 약 900 mg 내지 약 1100 mg이다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 매주 1회 투여되는 약 1100 mg 내지 약 1300 mg이다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 매주 1회 투여되는 약 1300 mg 내지 약 1500 mg이다.
본 명세서에서 개시된 치료 방법, 용도 및 조성물의 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 매주 1회 투여되는 약 300 mg 내지 약 800 mg이다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 매주 1회 투여되는 약 300 mg 내지 약 400 mg이다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 매주 1회 투여되는 약 340 mg이다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 매주 1회 투여되는 약 650 mg 내지 약 750 mg이다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원 결합 단편의 치료적 유효량은 매주 1회 투여되는 약 680 mg이다. 일부 구체예에서, 치료는 환자의 총 혈청 IgG의 수준을 적어도 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 또는 약 80% 감소시킨다. 일부 구체예에서, 치료는 환자의 총 혈청 IgG의 수준을 적어도 약 60% 감소시킨다. 일부 구체예에서, 치료는 환자의 총 혈청 IgG의 수준을 적어도 약 70% 감소시킨다. 일부 구체예에서, 치료는 환자에서 총 혈청 IgG의 수준을 적어도 약 80% 감소시킨다. 일부 구체예에서, 환자에서 총 혈청 IgG 수준의 최대 감소는 항체 또는 항원-결합 단편, 또는 항체 또는 항원-결합 단편을 포함하는 약학적 조성물의 투여 후 약 20일 내지 약 30일에 발생한다. 일부 구체예에서, 환자에서 총 혈청 IgG 수준의 최대 감소는 항체 또는 항원-결합 단편, 또는 항체 또는 항원-결합 단편을 포함하는 약학적 조성물의 투여 후 약 24일에 발생한다. 일부 구체예에서, 총 혈청 IgG 수준의 최대 감소는 항체 또는 항원-결합 단편, 또는 항체 또는 항원-결합 단편을 포함하는 약학적 조성물의 약 3 내지 5회 투여용량 후(예를 들어, 약 4회 투여용량 후) 발생한다. 일부 구체예에서, 치료는 환자의 헤모글로빈 수준을 적어도 약 5%, 약 10%, 약 15%, 또는 약 20%(예를 들어, 약 5% 내지 약 30%) 증가시킨다. 일부 구체예에서, 치료는 환자의 헤모글로빈 수준을 약 20% 이상 증가시킨다. 일부 구체예에서, 치료는 약 1 또는 2주의 매주 투여(예를 들어, 매주 1회 680 mg 투여) 후 환자의 헤모글로빈 수준을 적어도 약 10%(예를 들어, 약 10% 내지 약 15%) 증가시킨다. 일부 구체예에서, 치료는 약 1 또는 2주의 매주 투여(예를 들어, 매주 1회 680 mg 투여) 후 환자의 헤모글로빈 수준을 적어도 약 20%(예를 들어, 약 20% 내지 약 25%) 증가시킨다. 일부 구체예에서, 환자의 헤모글로빈 수준의 증가(예를 들어, 약 10%, 약 20% 또는 그 이상의 증가)는 전체 치료 기간 또는 이의 일부 동안 유지된다. 일부 구체예에서, 환자의 헤모글로빈 수준의 증가(예를 들어, 약 10%, 약 20% 또는 그 이상의 증가)는 4주 이상(예를 들어, 4주, 6주, 8주, 10주, 12주 또는 그 이상) 동안 유지된다.
본 명세서에서 개시된 치료 방법, 용도 및 조성물의 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 2주마다 1회 투여되는 약 170 mg 내지 약 1500 mg이다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 2주마다 1회 투여되는 약 300 mg 내지 약 800 mg이다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 2주마다 1회 투여되는 약 170 mg 내지 약 300 mg이다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 2주마다 1회 투여되는 약 300 mg 내지 약 500 mg이다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 2주마다 1회 투여되는 약 500 mg 내지 약 700 mg이다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 2주마다 1회 투여되는 약 700 mg 내지 약 900 mg이다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 2주마다 1회 투여되는 약 900 mg 내지 약 1100 mg이다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 2주마다 1회 투여되는 약 1100 mg 내지 약 1300 mg이다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 2주마다 1회 투여되는 약 1300 mg 내지 약 1500 mg이다.
본 명세서에서 개시된 치료 방법, 용도 및 조성물의 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 매달 1회 투여되는 약 170 mg 내지 약 1500 mg이다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 매달 1회 투여되는 약 300 mg 내지 약 800 mg이다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 매달 1회 투여되는 약 170 mg 내지 약 300 mg이다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 매달 1회 투여되는 약 300 mg 내지 약 500 mg이다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 매달 1회 투여되는 약 500 mg 내지 약 700 mg이다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 매달 1회 투여되는 약 700 mg 내지 약 900 mg이다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 매달 1회 투여되는 약 900 mg 내지 약 1100 mg이다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 매달 1회 투여되는 약 1100 mg 내지 약 1300 mg이다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 매달 1회 투여되는 약 1300 mg 내지 약 1500 mg이다.
본 명세서에서 개시된 치료 방법, 용도 및 조성물의 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 매주 1회 투여되는 약 340 mg 또는 약 680 mg (예를 들어, 약 680 mg)이다.
일부 구체예에서, 매주 1회 투여되는 약 340 mg 또는 약 680 mg(예를 들어, 약 680 mg)의 투여용량에서 항체, 항원-결합 단편을 사용한 치료는 치료 전 환자 및/또는 시료의 총 혈청 IgG의 수준에 비해, 매주 투여의 약 1 또는 2주 후 환자 및/또는 환자의 시료에서 총 혈청 IgG의 수준을 적어도 약 40%(예를 들어, 약 40% 내지 약 50%) 감소시킨다. 일부 구체예에서, 매주 1회 투여되는 약 340 mg 또는 약 680 mg(예를 들어, 약 680 mg)의 투여용량에서 항체, 항원-결합 단편을 사용한 치료는 치료 전 환자 및/또는 시료의 총 혈청 IgG의 수준에 비해, 매주 투여의 약 3주 후 환자 및/또는 환자의 시료에서 총 혈청 IgG의 수준을 적어도 약 60%(예를 들어, 약 60% 내지 약 70%) 감소시킨다. 일부 구체예에서, 매주 1회 투여되는 약 340 mg 또는 약 680 mg(예를 들어, 약 680 mg)의 투여용량에서 항체, 항원-결합 단편을 사용한 치료는 치료 전 환자 및/또는 시료의 총 혈청 IgG의 수준에 비해, 매주 투여의 약 5주 후 환자 및/또는 환자의 시료에서 총 혈청 IgG의 수준을 적어도 약 70%(예를 들어, 약 70% 내지 약 80%) 감소시킨다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 매주 1회 투여되는 약 680 mg이다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 약 680 mg으로 적어도 2주(예를 들어, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 7주, 8주, 10주, 12주 또는 그 이상, 예를 들어, 4주, 7주, 12주 또는 그 이상) 동안 매주 1회 투여된다.
일부 구체예에서, 매주 1회 투여되는 약 340 mg 또는 약 680 mg (예를 들어, 약 680 mg)의 투여용량에서 항체 또는 항원-결합 단편을 사용한 치료는 치료 전 환자 및/또는 시료의 헤모글로빈 수준에 비해, 매주 투여의 약 1 또는 2주 후 환자 및/또는 환자의 시료에서 헤모글로빈의 수준을 약 10% (예를 들어, 약 10% 내지 약 15%) 증가시킨다. 일부 구체예에서, 매주 1회 투여되는 약 340 mg 또는 약 680 mg (예를 들어, 약 680 mg)의 투여용량에서 항체 또는 항원-결합 단편을 사용한 치료는 치료 전 환자 및/또는 시료의 헤모글로빈 수준에 비해, 매주 투여의 약 1 또는 2주 후 환자 및/또는 환자의 시료에서 헤모글로빈의 수준을 약 20%(예를 들어, 약 20% 내지 약 25%) 증가시킨다. 일부 구체예에서, 환자 및/또는 환자의 시료에서 헤모글로빈 수준의 증가(예를 들어, 약 10%, 약 20% 또는 그 이상의 증가)는 전체 치료 기간 또는 그의 일부 동안 유지된다. 일부 구체예에서, 환자 및/또는 환자의 시료에서 헤모글로빈 수준의 증가(예를 들어, 약 10%, 약 20% 또는 그 이상의 증가)는 적어도 2, 3, 또는 4주(예를 들어, 4주 또는 그 이상) 동안 유지된다. 일부 구체예에서, 환자 및/또는 환자의 시료에서 헤모글로빈 수준의 증가(예를 들어, 약 10%, 약 20% 또는 그 이상의 증가)는 약 2 내지 약 6주 동안 유지된다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 약 680 mg으로 적어도 2주(예를 들어, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 7주, 8주, 10주, 12주 또는 그 이상, 예를 들어, 4주, 7주, 12주 또는 그 이상) 동안 매주 1회 투여된다.
다양한 구체예에서, 본 개시는 본 명세서에서 기술된 치료적 적용에서의 사용을 위한 키트를 제공한다. 다양한 구체예에서, 본 개시는 온열 자가면역 용혈성 빈혈의 치료 또는 예방에서의 사용을 위한 항-FcRn 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 키트를 제공한다. 다양한 구체예에서, 키트는 다음을 포함하는 하나 이상의 구성을 추가로 포함하나 이에 제한되는 것은 아니다: 사용을 위한 설명서; 다른 약제, 예를 들어, 하나 이상의 추가 치료제(예를 들어, 하나 이상의 표준 치료제); 치료적 투여를 위한 항체 또는 항원-결합 단편을 제조하기 위한 장치, 용기, 또는 다른 소재; 약학적으로 허용 가능한 담체(예를 들어, 부형제); 및 환자에게 항체 또는 항원-결합 단편을 투여하기 위한 장치, 용기 또는 다른 소재. 사용을 위한 설명서는 예를 들어, 온열 자가면역 용혈성 빈혈을 갖거나 또는 의심되는 환자에서 제안된 투여형(dosage) 및/또는 투여 방식을 포함하는 치료적 적용을 위한 안내서를 포함할 수 있다. 다양한 구체예에서, 키트는 항-FcRn항체 또는 이의 항원-결합 단편 및 치료적 사용, 예를 들어, 환자에서 온열 자가면역 용혈성 빈혈을 치료 또는 예방하기 위한 항체 또는 항원-결합 단편의 사용을 위한 설명서를 포함한다. 다양한 구체예에서, 키트는 적어도 하나의 추가 치료제(예를 들어, 항체 또는 항원-결합 단편과 병용으로 투여하기 위한)를 더 포함한다. 다양한 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 약학적 조성물로서 제형화된다.
일부 구체예에서, 항-FcRn 항체 또는 항원-결합 단편은 유전자 재조합 방법을 이용한 발현 및 정제에 의해 생산된다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편의 가변 영역을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열은 개별 숙주 세포에서 또는 단일 숙주 세포에서 동시에 발현에 의해 생산된다.
본 명세서에서 사용된 바와 같은, 용어 "재조합 벡터"는 적합한 숙주 세포에서 목적 단백질을 발현할 수 있는 발현 벡터를 지칭한다. 용어는 핵산 인서트를 발현하기 위해 작동가능하게 연결된 필수 조절 요소들을 포함하는 DNA 구조물을 포함한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같은, 용어 "작동가능하게 연결된"은 일반적인 기능을 수행하기 위해 목적 단백질을 인코딩하는 핵산 서열에 기능적으로 연결된 핵산 발현 조절 서열을 지칭한다. 재조합 벡터와의 작동가능한 연결은 당업계에 잘 알려진 유전자 재조합 기술을 이용하여 수행될 수 있고, 부위-특이적 DNA절단 및 라이게이션은 당업계에 일반적으로 공지된 효소를 사용하여 쉽게 수행될 수 있다.
적합한 발현 벡터는 프로모터, 오퍼레이터, 개시 코돈, 종결 코돈, 폴리아데닐화 시그널 및 인핸서와 같은 발현 조절 요소들, 그리고, 막 타겟팅 또는 분비를 위한 신호 서열을 포함할 수 있다. 개시 및 종결 코돈은 일반적으로 면역원성 타겟 단백질을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열의 일부로 간주되며, 유전자 구조물이 투여되는 개체에서 기능적이어야 하며, 코딩 서열을 갖는 프레임 내에 있어야 한다. 프로모터는 일반적으로 구성적 또는 유도적일 수 있다. 원핵성 프로모터는 lac, tac, T3 및 T7 프로모터를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 진핵성 프로모터는 시미안 바이러스 40(simian virus 40(SV40)) 프로모터, 마우스 유선암 바이러스(mmouse mammary tumor virus(MMTV)) 프로모터, HIV Long Terminal Repeat(LTR)프로모터와 같은 인간 면역결핍 바이러스(human immunodeficiency virus(HIV)) 프로모터, 멀로니 바이러스(moloney virus) 프로모터, 사이토메갈로바이러스(cytomegalovirus(CMV))프로모터, 엡스타인 바 바이러스(epstein barr virus(EBV))프로모터, 라우스 사코마 바이러스(rous sarcoma virus(RSV)) 프로모터, 그리고, 인간 β-액틴, 인간 헤모글로빈, 인간 근육 크레아틴 및 인간 메탈로티오네인과 같은 인간 유전자 유래의 프로모터를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 발현 벡터는 벡터를 포함하는 숙주 세포를 선택할 수 있게 하는 선택 마커를 포함할 수 있다. 약물에 대한 내성, 영양 요구, 또는 세포독성제에 대한 내성 또는 표면 단백질의 발현과 같은 선택 가능한 표현형을 부여하는 산물에 대해 코딩하는 유전자를 일반 선택 마커로 사용할 수 있다. 선택 마커를 발현하는 세포만 선택제가 처리된 환경에서 생존하기 때문에 형질전환된 세포가 선택될 수 있다. 또한, 복제가능한 발현 벡터는 복제를 개시하는 특정 핵산 서열인 복제 기원을 포함할 수 있다. 사용될 수 있는 재조합 발현 벡터는 플라스미드, 바이러스 및 코스미드와 같은 다양한 벡터를 포함한다. 재조합 벡터의 종류는 제한되는 것은 아니며, 재조합 벡터는 원핵 및 진핵 세포와 같은 다양한 숙주 세포에서 원하는 유전자를 발현하고 원하는 단백질을 생산하는 기능을 할 수 있다. 일부 구체예에서, 강한 활성을 보여주는 프로모터와 강한 발현능을 가지면서 천연 단백질과 유사한 대량의 외래 단백질을 생산할 수 있는 벡터가 사용된다.
다양한 발현 숙주/벡터 조합이 항-FcRn 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 발현하는데 사용될 수 있다. 예를 들어, 진핵 숙주에 적합한 발현 벡터는 SV40, 보바인 파필로마바이러스, 아데노바이러스, 아데노-관련 바이러스, 사이토메갈로바이러스 및 리트로바이러스를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 세균성 숙주에 사용될 수 있는 발현 벡터는 pET, pRSET, pBluescript, pGEX2T, pUC, col E1, pCR1, pBR322, pMB9 및 이들의 유도체와 같은 세균성 플라스미드, 더 넓은 숙주 범위를 갖는 RP4와 같은 플라스미드, gt10, gt11 및 NM989과 같은 다양한 파지 람다 유도체로 대표되는 파지 DNA, 및 M13 및 사상 단일-가닥 DNA 파지와 같은 다른 DNA 파지를 포함한다. 효모 세포에 유용한 발현 벡터는 2㎛ 플라스미드 및 이들의 유도체를 포함한다. 곤충 세포에 유용한 벡터는 pVL941이다.
일부 구체예에서, 재조합 베터는 숙주 세포에 도입되어 형질전환체를 형성한다. 사용에 적합한 숙주 세포는 대장균(E. coli), 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis), 스트렙토마이세스속(Streptomyces sp.), 슈도모나스속(Pseudomonas sp.), 프로테우스 미라빌리스(Proteus mirabilis) 및 스타필로코커스속(Staphylococcus sp.)과 같은 원핵세포, 아스퍼질러스속(Aspergillus sp.)과 같은 진균, 피치아 파스토리스(Pichia pastoris), 사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces cerevisiae), 쉬조사카로마이세스속(Schizosaccharomyces sp.) 및 뉴로스포라 크라사(Neurospora crassa)와 같은 효모, 및 더 하등한 진핵세포 및 곤충세포와 같은 더 고등한 다른 진핵세포를 포함한다.
일부 구체예에서, 숙주 세포는 식물 또는 동물(예를 들어, 포유동물)에서 유래되며, 이의 예시는 원숭이 신장 세포(COS7), NSO 세포, SP2/0, 차이니즈 햄스터 오바리(CHO) 세포, W138, 새끼 햄스터 신장(BHK) 세포, MDCK, 골수종 세포, HuT 78 세포 및 HEK293 세포를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 일부 구체예에서, CHO 세포가 사용된다.
숙주 세포로의 형질감염 또는 형질전환은 핵산이 생물체, 세포, 조직 또는 기관으로 도입될 수 있는 임의의 방법을 포함할 수 있으며, 당업계에 공지된 바와 같이, 숙주 세포의 종류에 따라 선택된 적합한 표준 기술을 이용하여 수행될 수 있다. 방법은 전기천공, 원형질체 융합, 칼슘 포스페이트(CaPO4) 침전, 칼슘클로라이드(CaCl2) 침전, 실리콘 카바이드 섬유와의 교반, 및 아가로박테리움-, PEG-, 덱스트란 설페이트-, 리포펙타민- 및 건조/억제-매개 형질전환을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
항-FcRn 항체 또는 항원-결합 단편은 재조합 벡터를 포함하는 형질 전환체를 영양 배지에서 배양하여 다량으로 생산될 수 있으며, 사용되는 배지 및 배양 조건은 숙주 세포의 종류에 따라 선택될 수 있다. 배양 동안, 온도, 배지 pH 및 배양 시간을 포함하는 조건들은 세포의 성장 및 단백질의 대량 생산에 적합하게 조절될 수 있다. 본 명세서에서 기술된 바와 같은 재조합 방법에 의해 생산된 항체 또는 항원-결합 단편은 배지 또는 세포 용해물로부터 수집될 수 있고, 전통적인 생화학 분리 기술에 의해 분리 및 정제될 수 있다(Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd Ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press(1989); Deuscher, Guide to Protein Purification Methods Enzymology, Vol.182. Academic Press. Inc., San Diego, CA(1990)). 이들 기술은 전기영동, 원심분리, 젤 여과, 침전, 투석, 크로마토그래피(예를 들어, 이온 교환 크로마토그래피, 친화성 크로마토그래피, 면역흡착 크로마토그래피, 크기 배제 크로마토그래피 등), 등전점 집중 및 다양한 변형 및 이의 조합을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 일부 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 단백질 A를 이용하여 분리 및 정제된다.
실시예
이하, 실시예를 들어 본 발명을 더욱 상세하게 설명한다. 이러한 실시예는 단지 예시적인 목적이며 본 개시 내용의 범위를 제한하는 것으로 해석되어서는 안된다는 것은 당업자에게 명백할 것이다.
실시예 1: 형질전환 랫트를 이용한 항-FcRn 항체 발현 라이브러리 제작
총 6마리의 형질전환 랫트(OmniRat, OMT)를 이용하여 면역화(immunization)를 수행하였다. 면역원(immunogen)으로는 인간 FcRn을 사용하였다. 랫트의 양 발바닥에 24일 동안 3일 간격으로 보강제와 함께 0.0075 mg의 인간 FcRn(각 회)으로 8회 면역하였다. 28일째 랫트를 PBS 완충액에 희석된 5 ~ 10 ㎍의 면역원으로 면역화시켰다. 28일째 랫트 혈청을 수집하여 항체 역가를 측정하였다. 31일째 랫트를 안락사 시키고 오금의 림프 노드(popliteal lymph node)와 서혜의 림프 노드(inguinal lymph node)를 P3X63/AG8.653 골수종 세포와 융합하기 위하여 회수하였다.
랫트 혈청에서 항체 역가를 측정하기 위해 ELISA 분석을 수행하였다. 구체적으로, 인간 FcRn을 PBS(pH 6.0 또는 pH 7.4) 완충액에 희석하여 2 ㎍/mL의 용액을 만들고, 96-웰 플레이트의 각 웰에 100 μL의 용액을 코팅한 후, 4 ℃에서 적어도 18시간 동안 방치하였다. 각 웰을 300 μL의 세척(washing) 용액(PBS 중의 0.05% 트윈 20)으로 3회 세척하여 결합되지 않은 인간 FcRn을 제거한 다음 200 μL의 블록킹(blocking) 완충액을 넣고 실온에서 2시간 동안 방치하였다. 시험 혈청 시료를 1/100로 희석한 다음, 용액을 2배 연속 희석하여 희석배율이 1/100에서 1/256,000인 총 10개의 시험 시료를 만들었다. 블록킹 후, 각 웰을 300 μL의 세척 용액으로 세척한 다음, 각 시험 시료를 각 세포에 첨가하고 실온에서 2시간 동안 방치하였다. 3회 세척 후, 2차 측정 항체를 PBS 완충액에 1:50,000이 되도록 희석하여 각 웰에 100 μL씩 넣고 상온에서 2시간 동안 방치하였다. 다시 3회 세척한 후, TMB 용액을 각 웰에 100 μL씩 넣고 상온에서 10분간 반응시킨 다음, 각 웰에 1M 황산-함유 반응 종료 용액(sulfuric acid-containing stop solution) 50 μL를 넣어 반응을 종료시킨 후, 마이크로플레이트 리더(microplate reader)로 450 nm에서 OD값을 측정하였다. 면역화로 인한 항-인간 FcRn(hFcRn) IgG 역가는 랫트의 면역화이전-혈청에서 보다 높았다.
폴리에틸렌글리콜을 사용하여 융합된 총 3개의 하이브리도마 라이브러리 A, B 및 C를 만들었다. 구체적으로 형질전환 랫트 1과 5를 사용하여 하이브리도마 라이브러리 A를 만들고, 랫트 2와 6을 사용하여 하이브리도마 라이브러리 B를 만들고, 랫트 3과 4를 사용하여 하이브리도마 라이브러리 C를 만들었다. 각 하이브리도마 라이브러리 제작을 위한 융합 혼합액은 7일 동안 HAT가 포함된 배지에서 배양하여, HAT에 의해 융합된 세포만 선별되도록 하였다. HAT 배지에서 살아남은 하이브리도마 세포들을 모아서 HT 배지에서 약 6일 동안 배양한 다음, 상층액을 취하여 랫트 IgG ELISA 키트(RD-biotech)를 사용하여 랫트 IgG의 양을 측정하였다. 구체적으로, 각 시료는 1:100으로 희석하여, ELISA 플레이트 웰에 100 μL씩 넣고 페록시다아제(peroxidase)가 표지(conjugation)된 항-랫트 IgG와 혼합한 후 상온에서 15분간 반응시켰다. 100 μL 의 TMB 용액을 각 웰에 넣고 상온에서 10분간 반응시킨후, 50 μL의 1M 황산-함유 반응종료 용액을 각 웰에 넣어 반응을 종료시켰다. 다음, 마이크로플레이트 리더로 450 nm에서 OD 값을 측정하였다.
실시예 2: 하이브리도마 라이브러리의 항-hFcRn 항체들의 항원 결합력 및 IgG 결합 차단 능력 평가
hFcRn에 대한 항체의 결합력을 분석하기 위해, 위에서 언급한 것과 동일한 ELISA 분석(pH 6.0 및 pH 7.4)을 수행하였다.
3개의 하이브리도마 라이브러리의 배양 상층액을 사용하여 5 ng/mL 및 25 ng/mL에서 FACS에 의한 hFcRn 결합력 평가를 pH 6.0 및 pH 7.4에서 수행하였다. 인간 FcRn을 안정적으로 발현하는 HEK293 세포를 플라스크에서 분리한 후, 반응 버퍼(0.05% BSA를 포함한 PBS, pH 6.0 또는 pH 7.4)에 현탁시켰다. 현탁액을 2 x 106 세포/mL의 세포밀도가 되도록 희석하고, 50 μL의 희석액을 96-웰 플레이트의 각 웰에 넣었다. 그런 다음, 각각 10 ng/mL 및 50 ng/mL로 희석한 50 μL의 하이브리도마 라이브러리 배양 상층액을 각 웰에 첨가하고 현탁하여 항체를 결합시켰다. A488 래빗 항-IgG 염소 항체를 1:200으로 반응용액에 희석하고 100 μL의 희석액을 각 웰에 첨가하고 세포 펠렛과 혼합하여 결합 반응을 수행한 다음, 150 μL의 반응 버퍼를 각 웰에 첨가하였다. 측정은 FACS(BD)로 수행하였다.
FACS에 의한 하이브리도마 라이브러리의 인간 FcRn 억제능의 평가는 pH 6.0에서 수행되었다. 구체적으로 나이브(naive) HEK293 세포 및 인간 FcRn-과발현 HEK293 세포를 반응 버퍼(0.05% BSA를 포함한 PBS, pH 6.0)에 현탁시켰다. 1 x 105 세포를 96-웰 플레이트에 넣은 뒤, 각각의 4 nM 하이브리도마 라이브러리 배양 상층액 및 이를 10배 희석한 0.4 nM의 상층액을 처리하였다. hIgG 결합 억제능을 확인하기 위해, 100 nM A488-hIgGl을 각 웰에 첨가한 다음, 얼음에서 90분 동안 인큐베이션하였다. 반응 완료 후, 세포 펠렛을 100 μL의 반응 버퍼로 세척하고 U-자형 둥근 바닥 튜브에 옮겨 FACS에서 측정하였다. 인간 FcRn-과발현 안정화 세포에 남아있는 100 nM A488-hIgG1의 양을 측정한 다음, 결합 억제능(%)을 계산하였다. 아이소타입 대조군(Isotype control)으로 hIgGl을 사용하였고, 양성 대조군으로는 기존에 개발된 HL161-1 Ag 항체를 사용하여 항체 결합 억제능을 비교 평가하였다. 각 대조군을 1 μM 및 2 μM의 농도에서 분석하였으며 하이브리도마 라이브러리 시료는 0.4 nM 및 4 nM의 두 농도에서 측정하였다.
실시예 3: FACS에 의한 하이브리도마 클론의 분리 및 인간 항체의 확보
인간 FcRn 결합력과 억제능이 가장 높은 하이브리도마 라이브러리 A를 사용하여 FACS(유세포 분석법)로 클론을 분리하여 총 442개의 단일 클론을 얻었다. 단리된 단일 클론을 HT 배지에서 배양하고, 상층액을 얻었다. FACS로 hFcRn에 결합하는 항체-발현 하이브리도마 클론을 선별하였다.
FACS 분석에 의해 선별된 100개의 단일 클론으로부터 RNA를 단리하고 단리된 RNA를 시퀀싱하였다. 1차 시퀀싱에서, 100개의 단일 클론 중 88개의 시퀀스가 분석되었고, 이를 아미노산 서열에 따라 총 35개의 그룹(G1 ~ G38)으로 나누었다. 배양액을 확보하지 못한 2개 클론(G33 및 G35)을 제외한 33개 그룹의 대표 클론의 배양 상층액을 100 ng/mL의 농도로 희석하고, hFcRn에 대한 결합력을 ELISA로 평가하였다.
상기와 동일한 방법으로 FACS를 이용한 hFcRn 결합력 평가를 pH 6.0 및 7.4에서 수행하였다. 클론 간 결합력 정도에 따른 순위는 pH별로 유사했으며, 결합 강도는 다양한 수준에서 나타났다.
또한, 상기 33개 클론의 hFcRn 억제능에 대한 평가는 pH 6.0에서 FACS를 이용하여 분석하였다. 측정된 MFI 값을 기준으로 억제능(%)을 산출하였다. 1667 pM의 농도에서 억제능(%) 분석 결과를 바탕으로 클론을 총 다음 4개의 그룹으로 나눴다 (그룹 A : 70-100%; 그룹 B : 30-70%; 그룹 C : 10-30%; 및 그룹 D : 10% 이하).
표면 플라즈몬 공명에 의한 하이브리도마 클론의 키네틱 분석을 위해 인간 FcRn을 고정화한 후 하이브리도마 배양액을 분석물로 사용하여 진행하였다.
5종의 하이브리도마 클론 중 hFcRn 억제능 분석 결과에 따라 나눈 그룹 A 및 B의 항체 서열 중 CDR 시퀀스 부위에 N-글리코실화(glycosylation) 부위가 없는 또는 프리 시스테인(free cysteine)이 없는 18종 클론들의 유전자를 완전한 형태의 인간 IgG 서열로 전환하였다.
구체적으로, NCBI 웹 페이지의 Ig BLAST 프로그램을 사용하여 18종의 선별된 항체와 인간 항체 점 라인(germ line) 항체 그룹의 VH 및 VL 사이의 아미노산 서열 상동성을 조사하였다.
18개의 인간 항체 유전자를 클로닝하기 위해, 제한효소 인식 부위를 다음과 같은 방식으로 유전자 양쪽 끝에 삽입하였다: 중쇄 가변 도메인(VH)에는 EcoRI/Apal, 경쇄 람다 가변 도메인(VL(λ))에는 EcoRI/Xhol을, 경쇄 카파 가변 도메인(VL(κ))에는 EcoRI/Nhel 제한효소 인식 부위가 삽입되었다. 경쇄 가변 도메인의 경우, 유전자 클로닝 시 경쇄 람다 가변(VL(λ)) 유전자 서열은 인간 경쇄 불변(LC(λ)) 영역 유전자에 연결되고, 경쇄 카파 가변(VL(κ)) 유전자 서열은 인간 경쇄 불변(LC(κ)) 영역 유전자에 연결하였다.
동물 세포에서 항체의 발현을 위해 pCHOl.O 발현 벡터로 클로닝할 때 경쇄 및 중쇄 유전자를 EcoRV, Pad, AvrII 및 BstZl7I 제한효소로 절단한 후 삽입하였다. 선별된 18종의 인간 항체 유전자 포함 pCHOl.O 발현 벡터들이 합성된 유전자 서열과 일치하는지 확인하기 위해 DNA 시퀀싱을 수행하였다.
모든 항체 경쇄 및 중쇄 유전자를 포함하는 동물 세포 발현 시스템인 pCHO1.O 발현 벡터를 사용하여 완전한 형태의 인간 IgG를 발현시켰다. 인간 항체는 상기 각 항체의 플라스미드 DNA를 CHO-S 세포에 일시적으로 형질감염시켜, 배지로 분비된 항체를 protein A 컬럼으로 정제하여 수득하였다.
hFcRn-발현되는 Tg32(hFcRn+/+, hβ2m+/+, mFcRn-/-, mβ2m-/-) 마우스(Jackson Laboratory)에 인간 IgG를 주입한 다음, 상기 인간 IgG 서열로 전환한 18종의 인간 항체를 투여하여 상기 항체들이 인간 IgG의 이화 작용에 영향을 미치는지 여부를 조사하였다.
항원에 대한 결합력(KD)과 FACS를 이용한 인간 FcRn 결합력 및 억제능 분석 등의 인 비트로(in vitro) 분석 결과 및 인간 IgG의 이화 작용의 인 비보(in vivo) 분석을 바탕으로, 4종의 인간 항-FcRn 항체 단백질(HL161A, HL161B, HL161C 및 HL161D)을 확보하였다(도 1). 또한, HL161B 항체의 중쇄 가변 도메인 영역 83번째 아스파라긴(N)을 라이신(K)으로 치환하여 N-글리코실화(glycosylation) 부위가 없는 HL161BK 항체를 제작하였다. 또한, HL161BKN 항체(RVT-1401)는 HL161BK 항체의 중쇄(즉, IgG1 중쇄 불변 영역 내)의 238번째 및 239번째에 있는 라이신(K)을 알라닌(A)으로 치환하여 제조하였다. 선별된 인간 FcRn항체의 뉴클레오티드 서열, 아미노산 서열 및 CDR 서열은 표 1-5에 나타내었다.
선별된 인간 FcRn 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인의 폴리뉴클레오티드 서열
항체명 중쇄 가변 도메인 서열 경쇄 가변 도메인 서열
서열번호. 폴리뉴클레오티드 서열 서열번호. 폴리뉴클레오티드 서열
HL161A 1 GAAGTGCAGC TGCTGGAATC CGGCGGAGGC CTGGTGCAGC CTGGCGGCTC TCTGAGACTG TCCTGCGCCG CCTCCGAGTT CACCTTCGGC AGCTGCGTGA TGACCTGGGT CCGACAGGCT CCCGGCAAGG GCCTGGAATG GGTGTCCGTG ATCTCCGGCT CCGGCGGCTC CACCTACTAC GCCGACTCTG TGAAGGGCCG GTTCACCATC TCCCGGGACA ACTCCAAGAA CACCCTGTAC CTGCAGATGA ACTCCCTGCG GGCCGAGGAC ACCGCCGTGT ACTACTGCGC CAAGACCCCC TGGTGGCTGC GGTCCCCCTT CTTCGATTAC TGGGGCCAGG GCACCCTGGT GACAGTGTCC
TCC		 11 TCTTACGTGC TGACCCAGCC CCCCTCCGTG TCTGTGGCTC CTGGCCAGAC CGCCAGAATC ACCTGTGGCG GCAACAACAT CGGCTCCACC TCCGTGCACT GGTATCAGCA GAAGCCCGGC CAGGCCCCCG TGCTGGTGGT GCACGACGAC TCCGACCGGC CTTCTGGCAT CCCTGAGCGG TTCTCCGGCT CCAACTCCGG CAACACCGCC ACCCTGACCA TCTCCAGAGT GGAAGCCGGC GACGAGGCCG ACTACTACTG CCAAGTGCGA GACTCCTCCT CCGACCACGT GATCTTCGGC GGAGGCACCA AGCTGACCGT GCTGGGCCAG CCTAAGGCCG CTCCCTCCGT GACCCTG
HL161B 3 CAACTGTTGC TCCAGGAATC CGGTCCTGGT CTTGTAAAGC CATCTGAGAC TCTCTCCCTT ACCTGTACCG TTAGCGGAGG AAGTCTTTCC TCAAGCTTCT CCTACTGGGT GTGGATCAGA CAGCCTCCCG GAAAAGGGTT GGAGTGGATT GGCACAATAT ACTACTCCGG CAACACTTAC TATAACCCCA GCCTGAAGAG CAGGCTGACT ATCTCTGTCG ACACCAGTAA AAATCACTTT TCTCTGAATC TGTCTTCAGT GACCGCAGCC GACACCGCCG TGTATTATTG CGCTCGGCGC GCCGGGATTC TGACAGGCTA TCTGGATTCA TGGGGCCAGG GGACATTGGT TACAGTGTCT
AGT		 13 TCTTACGTGC TGACCCAGTC CCCCTCCGTG TCCGTGGCTC CTGGCCAGAC CGCCAGAATC ACCTGTGGCG GCAACAACAT CGGCTCCAAG TCCGTGCACT GGTATCAGCA GAAGCCCGGC CAGGCCCCCG TGCTGGTGGT GTACGACGAC TCCGACCGGC CCTCTGGCAT CCCTGAGCGG TTCTCCGCCT CCAACTCCGG CAACACCGCC ACCCTGACCA TCTCCAGAGT GGAAGCCGGC GACGAGGCCG ACTACTACTG CCAAGTGTGG GACTCCTCCT CCGACCACGT GGTGTTCGGC GGAGGCACCA AGCTGACCGT GCTGGGCCAG CCTAAGGCCG CTCCCTCCGT GACCCTG
HL161BK
(HL161BKN)		 5 CAGCTGCTGC TGCAAGAATC CGGCCCTGGC CTGGTGAAAC CCTCCGAGAC ACTGTCCCTG ACCTGCACCG TGTCCGGCGG CTCCCTGTCC TCCAGCTTCT CCTACTGGGT CTGGATCCGG CAGCCCCCTG GCAAGGGCCT GGAATGGATC GGCACCATCT ACTACTCCGG CAACACCTAC TACAACCCCA GCCTGAAGTC CCGGCTGACC ATCTCCGTGG ACACCTCCAA GAACCACTTC AGCCTGAAGC TGTCCTCCGT GACCGCCGCT GACACCGCCG TGTACTACTG TGCCAGAAGG GCCGGCATCC TGACCGGCTA CCTGGACTCT TGGGGCCAGG GCACCCTGGT GACAGTGTCC
TCC		 15 TCTTACGTGC TGACCCAGTC CCCCTCCGTG TCCGTGGCTC CTGGCCAGAC CGCCAGAATC ACCTGTGGCG GCAACAACAT CGGCTCCAAG TCCGTGCACT GGTATCAGCA GAAGCCCGGC CAGGCCCCCG TGCTGGTGGT GTACGACGAC TCCGACCGGC CCTCTGGCAT CCCTGAGCGG TTCTCCGCCT CCAACTCCGG CAACACCGCC ACCCTGACCA TCTCCAGAGT GGAAGCCGGC GACGAGGCCG ACTACTACTG CCAAGTGTGG GACTCCTCCT CCGACCACGT GGTGTTCGGC GGAGGCACCA AGCTGACCGT GCTGGGCCAG CCTAAGGCCG CTCCCTCCGT GACCCTG
HL161C 7 CAGGTGCAGC TCGTGCAGTC CGGCGCAGAG GTCAAAAAGC CTGGTGCATC TGTGAAAGTG AGTTGCAAGG CTAGCGGCTA CACCTTTACC GGATGTTATA TGCATTGGGT ACGCCAAGCC CCCGGACAAG GCTTGGAATG GATGGGGCGT ATCAACCCAA ACTCTGGCGG GACTAATTAC GCCCAGAAGT TTCAGGGAAG GGTGACTATG ACAAGGGACA CATCCATATC CACCGCTTAT ATGGACCTGT CTCGACTGCG GTCTGATGAT ACAGCCGTTT ATTACTGCGC CAGAGACTAC AGCGGATGGA GCTTCGATTA TTGGGGGCAG GGTACTTTGG TCACAGTTTC AAGT 17 GACATCCAGA TGACCCAGTC ACCATCATCC CTTTCCGCAT CTGTCGGAGA TAGAGTGACT ATCACCTGCA GGGCTTCTCA AGGTATTTCC AACTACCTCG CCTGGTTCCA GCAAAAGCCA GGTAAAGCCC CAAAGAGCTT GATCTACGCC GCTTCTAGTC TGCAGAGTGG AGTTCCTAGT AAGTTCTCCG GCTCTGGCAG TGGCACAGAT TTTACCTTGA CCATTTCCAG CCTGCAGTCT GAGGATTTCG CTACCTACTA TTGTCAGCAG TATGACAGCT ATCCCCCCAC ATTTGGGGGG GGCACTAAGG TGGAGATAAA ACGGACAGTG GCTGCCCCTT CTGTCTTTAT T
HL161D 9 CAGCTGCAGT TGCAGGAGTC AGGCCCCGGT TTGGTTAAGC CTTCTGAAAC CCTTTCTCTC ACATGCACAG TATCCGGTGG CTCCATCTCC AGTTCAAGTT ACTACTGGGG ATGGATCCGG CAACCCCCAG GAAAAGGGCT GGAGTGGATT GGCAATATAT ATTACTCTGG GTCCACCTAT TACAACCCTT CCCTGATGAG TAGAGTGACC ATCAGCGTGG ACACAAGCAA AAACCAATTC AGCCTGAAGC TTTCTAGCGT GACCGCTGCC GACACAGCTG TCTATTACTG TGCCCGCCAG CTTAGTTATA ACTGGAATGA TAGGCTGTTT GATTACTGGG GCCAGGGGAC TCTCGTTACA GTCAGCAGC
 19 AGCTATGAGC TGACCCAGCC TCTGAGCGTA TCTGTCGCTC TCGGCCAGAC AGCCAGAATT ACCTGTGGCG GCAATAACAT AGGATCCAAA AATGTTCACT GGTATCAGCA AAAACCTGGC CAAGCTCCCG TGCTCGTGAT CTACCGGGAC TCTAACCGAC CCAGTGGAAT CCCCGAACGC TTTAGCGGTT CCAACTCTGG AAATACAGCT ACTCTGACTA TCTCCAGGGC TCAGGCCGGG GATGAGGCCG ATTACTACTG CCAGGTGTGG GACTCAAGCA CAGTGGTCTT CGGCGGAGGT ACCAAGTTGA CTGTTCTTGG GCAGCCAAAG GCCGCACCTT CAGTGACCCT G
선별된 인간 FcRn 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인의 아미노산 서열
항체명 중쇄 가변 도메인 서열 경쇄 가변 도메인 서열
서열번호. 아미노산 서열 서열번호. 아미노산 서열
HL161A 2 EVQLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASEFTFG SCVMTWVRQA PGKGLEWVSV ISGSGGSTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAKTP WWLRSPFFDY GQGTLVTVSS 12 SYVLTQPPSV SVAPGQTARI TCGGNNIGST SVHWYQQKPG QAPVLVVHDD SDRPSGIPER FSGSNSGNTA TLTISRVEAG DEADYYCQVR DSSSDHVIFG GGTKLTVLGQ PKAAPSVTL
HL161B 4 QLLLQESGPG LVKPSETLSL TCTVSGGSLS SSFSYWVWIR QPPGKGLEWI GTIYYSGNTY YNPSLKSRLT ISVDTSKNHF SLNLSSVTAA DTAVYYCARR AGILTGYLDS GQGTLVTVSS 14 SYVLTQSPSV SVAPGQTARI TCGGNNIGSK SVHWYQQKPG QAPVLVVYDD SDRPSGIPER FSASNSGNTA TLTISRVEAG DEADYYCQVW DSSSDHVVFG GGTKLTVLGQ PKAAPSVTL
HL161BK
(HL161BKN)		 6 QLLLQESGPG LVKPSETLSL TCTVSGGSLS SSFSYWVWIR QPPGKGLEWI GTIYYSGNTY YNPSLKSRLT ISVDTSKNHF SLKLSSVTAA DTAVYYCARR AGILTGYLDS WGQGTLVTVSS 16 SYVLTQSPSV SVAPGQTARI TCGGNNIGSK SVHWYQQKPG QAPVLVVYDD SDRPSGIPER FSASNSGNTA TLTISRVEAG DEADYYCQVW DSSSDHVVFG GGTKLTVLGQ PKAAPSVTL
HL161C 8 QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT GCYMHWVRQA PGQGLEWMGR INPNSGGTNY AQKFQGRVTM TRDTSISTAY MDLSRLRSDD TAVYYCARDY SGWSFDYWGQ GTLVTVSS 18 DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRASQGIS NYLAWFQQKP GKAPKSLIYA ASSLQSGVPS KFSGSGSGTD FTLTISSLQS EDFATYYCQQ YDSYPPTFGG GTKVEIKRTV AAPSVFI
HL161D 10 QLQLQESGPG LVKPSETLSL TCTVSGGSIS SSSYYWGWIR QPPGKGLEWI GNIYYSGSTY YNPSLMSRVT ISVDTSKNQF SLKLSSVTAA DTAVYYCARQ LSYNWNDRLF DYWGQGTLVT
VSS		 20 SYELTQPLSV SVALGQTARI TCGGNNIGSK NVHWYQQKPG QAPVLVIYRD SNRPSGIPER FSGSNSGNTA TLTISRAQAG DEADYYCQVW DSSTVVFGGG TKLTVLGQPK AAPSVTL
Figure pct00001
Figure pct00002
Figure pct00003
Figure pct00004
선별된 인간 FcRn 항체의 전장 중쇄 및 경쇄의 아미노산 서열
항체명 중쇄 서열 경쇄 서열
서열번호. 아미노산 서열 서열번호. 아미노산 서열
HL161BKN 46 QLLLQESGPG LVKPSETLSL TCTVSGGSLS SSFSYWVWIR QPPGKGLEWI GTIYYSGNTY YNPSLKSRLT ISVDTSKNHF SLKLSSVTAA DTAVYYCARR AGILTGYLDS WGQGTLVTVS SASTKGPSVF PLAPSSKSTS GGTAALGCLV KDYFPEPVTV SWNSGALTSG VHTFPAVLQS SGLYSLSSVV TVPSSSLGTQ TYICNVNHKP SNTKVDKRVE PKSCDKTHTC PPCPAPEAAG GPSVFLFPPK PKDTLMISRT PEVTCVVVDV SHEDPEVKFN WYVDGVEVHN AKTKPREEQY NSTYRVVSVL TVLHQDWLNG KEYKCKVSNK ALPAPIEKTI SKAKGQPREP QVYTLPPSRE EMTKNQVSLT CLVKGFYPSD IAVEWESNGQ PENNYKTTPP VLDSDGSFFL YSKLTVDKSR WQQGNVFSCS VMHEALHNHY TQKSLSLSPG 48 SYVLTQSPSV SVAPGQTARI TCGGNNIGSK SVHWYQQKPG QAPVLVVYDD SDRPSGIPER FSASNSGNTA TLTISRVEAG DEADYYCQVW DSSSDHVVFG GGTKLTVLGQ PKAAPSVTLF PPSSEELQAN KATLVCLISD FYPGAVTVAW KADSSPVKAG VETTTPSKQS NNKYAASSYL SLTPEQWKSH RSYSCQVTHE GSTVEKTVAP TECS
선별된 인간 FcRn 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인의 CDR 서열
항체명 중쇄 가변 도메인 CDR 경쇄 가변 도메인 CDR
CDR1 CDR2 CDR3 CDR1 CDR2 CDR3
서열번호. 21 22 23 24 25 26
HL161A scvmt visgsggstyyadsvkg tpwwlrspffdy ggnnigstsvh ddsdrps vrdsssdhvi
서열번호. 27 28 29 30 31 32
HL161B
(HL161BK)
(HL161BKN)		 fsywv tiyysgntyynpslks ragiltgylds ggnnigsksvh ddsdrps qvwdsssdhvv
서열번호. 33 34 35 36 37 38
HL161C GCYMH RINPNSGGTNYAQKFQG DYSGWSFDY RASQGISNYLA AASSLQS QQYDSYPPTF
서열번호. 39 40 41 42 43 44
HL161D SYYWG NIYYSGSTYYNPSLMS QLSYNWNDRLFDY GGNNIGSKNVH RDSNRPS QVWDSSTVV
실시예 4: 표면 플라즈몬 공명(SPR)에 의한 HL161A, HL161B, HL161C 및 HL161D 항체의 항원 결합력 측정
표면 플라즈몬 공명에 의한 HL161A, HL161B, HL161C 및 HL161D 항체의 결합력은 수용성 hFcRn을 리간드로 Proteon GLC 칩(Bio-Rad)에 고정화하여 친화도를 측정하는 방법으로 진행하였다. 키네틱 분석은 Proteon XPR36 시스템을 사용하였다. 수용성 인간 FcRn(shFcRn)을 GLC 칩에 고정화시키고, 항체 시료를 5 농도로 반응시켜 센소그램 결과를 얻었다. 키네틱 분석은 1:1 랭뮤어 바인딩 모델(Langmuir binding model)을 적용하였고, pH 6.0과 pH 7.4 각각에서 6회 반복 분석하여 평균 KD 값을 구하였다. 고정화 단계 후, 칩(chip)은 EDAC/NHS 0.5X, 30 μL/분 및 300 초의 조건 하에서 활성화되었다. 고정화를 위해 shFcRn을 아세테이트 완충액(pH 5.5)에서 2 ㎍/mL 및 250 μL의 농도로 희석하고, 희석액을 30 μL/분의 속도로 칩 상에 흐르게 하였다. 고정화 수준이 200-300 RU에 도달하면 반응을 중단시켰다. 이후 비활성화는 에탄올아민(ethanolamine)을 사용하여 30 μL/분의 속도로 300초 동안 진행하였다. 각각의 HL161 항체는 10 nM 농도부터 5 nM, 2.5 nM, 1.25 nM, 0.625 nM, 0.312 nM 등의 농도로 연속적으로 2배 희석하여 시료를 준비하였다. 시료 희석은 각 pH에서 1X PBST(pH 7.4) 또는 IX PBST(pH 6.0)를 사용하여 수행되었다. 시료 분석을 위해 200초 동안 50 μL/분으로 결합을 수행하고, 600초 동안 50 μL/분으로 해리 단계를 수행한 후, 18초 동안 100 μL/분에서 글리신 완충액(pH 2.5)을 사용하여 재생을 수행하였다. 각 시료당 6회 키네틱 분석 후, 평균 항원 결합력(KD)을 측정하였다. 표면 플라즈몬 공명 분석 결과 항체의 키네틱 파라미터(kinetic parameter)를 표 6에 나타내었다(도 2a 내지 도 2h).
인간 FcRn 고정화 표면 플라즈몬 공명에 의한 항체 키네틱 분석 결과
항체 pH 6.0 pH 7.4
kon(M-1s-1) koff(s-1) KD(M) kon(M-1s-1) koff(s-1) KD(M)
HL161A 1.81×106 3.26×10-4 1.80×10-10 1.32×106 3.27×10-4 2.47×10-10
HL161B 9.12×105 7.35×10-4 8.07×10-10 7.10×105 1.25×10-3 1.76×10-9
HL161C 1.74×106 3.32×10-4 1.91×10-10 1.36×106 3.16×10-4 2.32×10-10
HL161D 9.70×105 1.38×10-3 1.43×10-9 6.99×105 1.24×10-3 1.78×10-9
hIgG1 3.2×105 4.6×10-4 1.4×10-9 결합 없음 결합 없음 결합 없음
실시예 5: FACS에 의한 HL161A 및 HL161B 항체의 인간 FcRn결합 분석
인간 FcRn을 안정적으로 발현하는 HEK293 세포를 대상으로 FACS 시스템을 사용하여 각 pH에서 FcRn에 대한 결합 정도를 분석하였다. FACS를 이용한 FcRn 결합 시험은 pH 6.0 및 pH 7.4의 반응 버퍼에서 수행되었다. 구체적으로, 100,000개의 인간 FcRn-발현 안정화 HEK293 세포를 PBS 완충액으로 세척하고 탁상용 마이크로 원 심분리기에서 4500 rpm으로 5분 동안 원심분리하여 세포 펠릿을 얻었다. 항체를 100 μL의 pH 6.0 또는 pH 7.4 PBS/10 mM EDTA에 첨가하였다. 남은 세포 펠렛에 반응 버퍼를 넣어 혼합하고 세포 계수(cell counting)를 수행하였다. 10 μL의 세포 현탁액을 슬라이드에 넣어 TC10 시스템에서 세포수를 계수한 후, 2 x 106 cell/mL이 되도록 반응 버퍼로 희석하였다. 각 항체 시료는 500 nM로 희석하였다. pH 6.0에서의 분석을 위해, 희석액을 96-웰 v-바닥 플레이트에서 20 nM으로 희석하고, 50 μL의 희석액을 취하여 각 웰에 가하였다. pH 7.4에서의 분석을 위해, 500 nM 항체 시료를 3배 연속 희석법으로 희석하여 250 nM ~ 0.11 nM 범위의 농도에서 분석하였다. 2 x 106 cell/mL로 희석된 50 μL의 세포를 각 웰에 가하고 현탁하였다. 플레이트를 4 ℃에서 회전체(rotator)에 장착하고 15°각도 및 10 rpm으로 90분 동안 회전시켰다. 반응이 완료된 후, 플레이트를 꺼내어 2000 rpm에서 10분간 원심분리하여 상층액을 제거하였다. A488 항-hIgG 염소 항체를 1:200으로 반응 버퍼에 희석하고, 100 μL의 항체 희석액을 각 웰에 가하고 현탁하였다. 다시, 플레이트를 4 ℃에서 회전체에 다시 장착하고 15° 각도 및 10 rpm으로 90분 동안 회전시켰다. 반응이 완료된 후, 플레이트를 회전체에서 꺼내어 2000 rpm에서 10분간 원심분리하여 상층액을 제거하였다. 이 세척 과정을 한 번 더 진행한 뒤, 100 μL의 반응 버퍼를 각 웰에 가하여 세포 펠릿을 풀고, 플레이트를 블루 테스트 튜브(blue test tube)로 옮겼다. 다음으로, 여기에 반응 버퍼 200 μL를 가한 다음 FACS에서 측정을 수행하였다. FACS 측정 조건은 FS 108 volts, SS 426 volts, FL1 324 volts, FL2 300 volts이다. 이러한 세포들은 BD FACSDiva™ v6.l.3 소프트웨어(BD Bioscience)를 사용하여 FACS로 분석되었다. 그 결과는 평균 형광 강도(MFI)로 나타내었다(도 3). HL161A 및 HL161B 항체는 10 nM의 농도 및 pH 6.0에서 각각 10.59 및 8.34의 MFI 값을 나타내었다. pH 7.4 및 0.11-250 nM의 농도에서 상기 항체들은 MFI 값을 이용한 4인자 로지스틱 회귀 분석(4 parameter logistic regression)을 통하여 EC50(Effective Concentration 50%) 값을 분석한 결과 각각 2.46 nM 및 1.20 nM의 값을 나타내었다.
실시예 6: FACS에 의한 HL161A 및 HL161B 항체의 억제능 분석
(세포 표면 인간 FcRn에 대한 결합력 분석을 이전에 진행한) HL161A 및 HL161B 항체를 세포 표면에 hFcRn이 발현되는 HEK293 세포에 처리하고, Alexa-Fluo-488-형광표지된 hIgGl의 결합 감소에 기초하여 항체의 억제능 효과를 조사하였다. 분석 절차는 다음과 같은 방식으로 수행되었다:
나이브(naive) HEK293 세포와 인간 FcRn-과발현 안정화 HEK293 세포들에 각각 2 mL의 1 x TE를 넣어 37 ℃, 5% CO2 배양기에서 1분간 인큐베이션하였다. 플라스크에서 세포를 회수하고 반응 버퍼(pH 6.0) 8 mL를 가한 후, 50 mL 코니컬 튜브(cornical tube)로 옮겼다. 2000 rpm으로 5분 동안 원심분리하여 상층액을 제거하고, 각각의 세포 펠릿에 1 mL의 반응 버퍼(pH 6.0)를 가하였다. 그런 다음, 세포 현탁액을 새로운 1.5 mL 에펜도르프 튜브(Eppendorf tube)로 옮겼다. 다시 4000 rpm에서 5분 동안 원심분리하여 상층액을 제거하였다. 그런 다음, 남은 세포 펠릿에 반응 버퍼(pH 6.0)를 가하여 세포 현탁액의 세포 수를 계측하였다. 마지막으로, 세포 현탁액을 2.5 x 106 cell/mL이 되도록 반응 버퍼로 희석하였다.
각 항체 시료를 400 nM로 희석한 다음, 96-웰 v-바닥 플레이트에서 4배 연속 희석법으로 희석하였다. 최종 분석 농도가 200 nM 내지 0.01 nM이 되도록 희석한 시료를 각 웰에 50 μL씩 분주하였다. 그런 다음, 1 μM 반응 버퍼(pH 6.0)로 희석된 Alex488-hIgGl 10 μL씩을 각 웰에 가하였다. 마지막으로, 2.5 x 106 cell/mL로 희석된 세포를 40 μL씩 각 웰에 가하고 현탁하였다. 플레이트는 4 ℃에서 로테이터(rotator)에 장착하고 15°각도 및 10 rpm으로 90분 동안 회전시켰다. 반응이 완료된 후 플레이트를 꺼내어 2000 rpm에서 10분간 원심분리하여 상층액을 제거하였다. 100 μL 의 반응 버퍼를 가하여 세포 펠릿을 풀고, 블루 테스트 튜브로 옮겼다. 그 후, 200 μL의 반응 버퍼를 가하여 FACS에서 측정을 수행하였다. FACS 측정 조건은 FS 108 volts, SS 426 volts, FL1 324 volts, FL2 300 volts이다. 이러한 세포들은 BD FACSDiva™ v6.l.3 소프트웨어(BD Bioscience)를 이용한 FACS로 분석되었다. 그 결과는 평균 형광 강도(MFI)로 나타내었다. 시험군의 MFI는 세포만을 통해 측정된 MFI 값(백그라운드 신호)을 뺀 후 처리하였다. 대조군 튜브(Alexa Fluor 488 단독, 및 경쟁자 없음)의 MFI를 100%로 환산하여 경쟁자 포함 튜브의 MFI 백분율을 환산하였다.
Figure pct00005
MFI가 인간 IgG1 경쟁자 포함 튜브의 MFI 보다 낮을 때, 경쟁자 항체의 경쟁률이 높은 것으로 판단하였으며, pH 6.0 및 0.01-200 nM의 농도 조건 하에서 HL161A 및 HL161B 항체의 억제능 측정값(%)을 기반으로 4인자 로지스틱 회귀 분석을 수행하였다. 그 결과, HL161A 및 HL161B 항체는 각각 0.92 nM 및 2.24 nM의 IC50(Inhibitory Concentration 50%) 값을 나타냄을 확인하였다(도 4).
실시예 7: mFcRn -/- hFCRN 형질전환 32(Tg32) 마우스에서 HL161A 및 HL161B의 효력 시험
인간 FcRn-발현 Tg32(hFcRn+/+, hβ2m+/+, mFcRn-/-, mβ2m-/-) 마우스(Jackson Laboratory)에 인간 IgG를 주입한 후 인간 IgG와 함께 HL161A 및 HL161B를 마우스에 투여하여 인간 IgG의 이화작용에 영향을 주는지 알아보았다.
HL161A 및 HL161B 항체와 인간 IgG(Greencross, IVglobulinS)를 4일 투여를 위해 5, 10 및 20 mg/kg의 투여용량으로 조제하여 보관하였고, 비히클로서 PBS(phosphate buffered saline) 완충액(pH 7.4)을 그리고 20 mg/kg IgG1 대조물질을 사용하였다. 인간 FcRn Tg32 마우스를 약 7일 동안 적응시키고 물과 사료를 자유롭게 제공하였다. 온도(23 ± 2 ℃), 습도(55 ± 5 %) 및 명암주기(12시간)는 자동으로 조절되도록 하였다. 각 동물군은 4마리의 마우스로 구성되었다. 인간 IgG를 추적물질로 사용하기 위해, 키트(Pierce, Cat #. 21327)를 사용하여 비오틴(Biotin)이 접합된 hIgG를 준비하였다. 0시간에, 5 mg/kg의 비오틴-hIgG 및 495 mg/kg의 인간 IgG를 복강 내 투여하여 체내의 IgG를 포화시켰다. 약물의 투여는 비오틴-IgG 투여 후 24, 48, 72 및 96 시간 후에 5, 10 및 20 mg/kg의 투여용량으로 1일 1회 복강 내 주사하였다. 채혈은 마우스를 포란액(Isoflurane, JW Pharmaceutical)을 이용하여 가볍게 마취한 다음, 헤파린 처리된 마이크로-헤마토크리트 캐필러리 튜브(Heparinized Micro-hematocrit capillary tube, Fisher)를 사용하여, 안와정맥총에서 진행하였다, 비오틴-IgG 투여 후 24, 48, 72, 96, 120 및 168 시간 후에 진행하였으며 24, 48, 72 및 96 시간에는 채혈 후 약물을 투여하였다. 0.1 mL의 전혈을 Eppendorf tube에 받은 후 바로 혈장을 원심분리로 분리하여 분석할 때까지 -70 ℃의 냉동고(Thermo)에 보관하였다.
채취한 혈액에서 비오틴-hIgG1의 양은 ELISA로 다음과 같이 분석되었다. 96-웰 플레이트(Costar, Cat. No:2592)에 100 μL의 뉴트라비딘(Pierce, 31000)을 1.0 ㎍/mL의 농도로 주입한 후, 4 ℃에서 16시간 동안 고정화하였다. 완충액 A(0.05 % Tween-20, 10 mM PBS, pH 7.4)로 3회 플레이트를 세척한 다음, 1% BSA 함유 PBS(pH 7.4) 용액으로 상온에서 2시간 반응시켰다. 다음으로, 플레이트를 완충액 A로 3회 세척한 후, 0.5% BSA-함유 PBS(pH 7.4) 용액으로 1 ㎍/mL에 해당하도록 뉴트라비딘 플레이트를 제조하였다. 각 웰에 완충액 B(100 mM MES, 150 mM NaCl, 0.5% BSA IgG-free, 0.05% 트윈-20, pH 6.0)를 이용하여 혈액 시료를 500-1000배 연속 희석하고, 150 μL씩 플레이트에 주입하였다. 주입된 시료는 상온에서 1시간 반응시켰다. 플레이트를 완충액 A로 3회 세척한 다음, 200 μL 의 1 nM HRP-접합된 항-인간 IgG 염소 항체를 주입하여 37 ℃에서 2시간 반응시켰다. 얼음을 이용하여 냉각된 완충액 B로 3회 세척한 후, 기질 용액 테트라메틸벤지딘(RnD, Cat. No:DY999)을 100 μL 주입한 후 상온에서 15분 반응시켰다. 1.0 M 황산 용액(Samchun, Cat. No: S2129) 50 μL를 주입하여 반응을 중지한 후, 450 nm에서 흡광도를 측정하였다. 24시간(마우스에서 비오틴-IgG의 대략 Tmax; 비오틴-IgG의 이화 작용 발생 전 시간) 경과 후의 비오틴-IgG의 농도를 100%로 고정하고, 24시간에서의 농도에 대한 다른 시점에서의 농도 백분율을 분석하였다. 비히클 및 20 mg/kg IgG1 대조물질의 반감기는 각각 103시간 및 118시간이었다. HL161A 항체의 IgG 반감기는 투여용량별로 30, 23 및 18시간이었다. 또한, HL161B 항체도 투여용량별 41, 22 및 21시간의 IgG 반감기를 보여주었다(도 5a 및 도 5b).
실시예 8: 원숭이에서 HL161A 및 HL161B의 효력시험
인간 FcRn과 96% 상동성을 가진 시아노몰거스 원숭이를 이용하여, HL161A 및 HL161B 항체의 투여에 의한 원숭이 IgG, IgA, IgM 및 알부민 수준을 분석하고, 항체의 약동학적(pharmacokinetics, PK) 프로파일을 분석하였다.
1) 원숭이 혈액내 IgG 항체 변화량 분석 결과
먼저, 원숭이 IgG의 변화를 ELISA 분석으로 측정하였다. 96-웰 플레이트(Costar, Cat. No: 2592)에 4.0 ㎍/mL의 농도가 되도록 100 μL의 항-인간 IgG Fc 항체(BethylLab, A80-104A)를 로딩한 후, 4 ℃에서 16시간 고정화하였다. 플레이트를 세척 용액(0.05% Tween-20, 10 mM PBS, pH 7.4)으로 3회 세척한 다음, 1% BSA-함유 PBS(pH 7.4) 용액으로 상온에서 2시간 반응시켰다. 표준품인 원숭이 IgG는 3.9-500 ng/mL의 농도로 사용하였고, 혈액 시료는 1% BSA-함유된 PBS(pH 7.4) 용액을 사용하여 80,000배 희석한 후 플레이트에 로딩하여, 실온에서 2시간 반응시켰다. 세척 용액으로 3회 세척한 다음, 100 μL의 항-hIgG 항체(Biorad, 201005)의 20,000배 희석액을 플레이트에 로딩하고, 실온에서 1시간 반응시켰다. 각 플레이트를 세척한 후, 100 μL의 기질 용액 3,3',5,5'-테트라메틸벤지딘(Rnd, Cat. No: DY999)를 플레이트에 주입하여, 실온에서 7분 반응시키고, 50 μL의 1.0 M 황산 용액(Samchun, Cat. No: S2129)을 주입하여 반응을 중지하였다. 분석 결과는 450 nm 및 540 nm 흡광도 판독기(MD, 모델: VersaMax)를 이용하여 흡광도(OD)를 측정하였다. HL161A 및 HL161B 항체의 투여에 의한 원숭이 IgG 수준의 변화(%)는 표 7 및 도 6a 내지 도 6c에 나타내었다.
HL161A 및 HL161B의 투여에 의한 원숭이 IgG 수준의 변화(%)
일(Day) 비히클 HL161A HL161B
5 mg/kg 20 mg/kg 5 mg/kg 20 mg/kg
0 일 100.0±0.0 100.0±0.0 100.0±0.0 100.0±0.0 100.0±0.0
0.5 일 99.0±4.8 81.5±1.8 101.5±9.0 94.3±5.4 96.2±3.0
1 일 97.6±15.9 67.2±2.0 86.2±11.9 83.9±24.7 94.1±7.0
2 일 97.8±6.2 63.0±3.3 74.2±14 73.7±11.3 71.7±5.4
3 일 104.5±13.1 61.8±8.0 59.2±11.0 68.3±9.3 61.3±6.0
4 일 100.9±16.7 55.3±4.1 45.1±4.6 65.5±12.2 44.3±5.6
5 일 103.4±12.5 60.8±8.3 38.8±4.9 65.0±11.9 38.4±3.7
6 일 113.3±8.5 64.9±11.7 39.7±6.4 66.4±11.3 39.0±5.4
7 일 116.9±23.3 58.7±4.7 39.6±5.4 61.4±8.0 37.5±3.2
7.5 일 92.4±10.4 51.2±7.2 38.7±7.8 62.8±8.3 39.3±0.4
8 일 94.6±8.7 48.0±9.3 36.1±5.3 60.7±7.5 39.6±5.9
9 일 117.6±14.3 47.1±4.4 33.8±5.0 54.3±6.9 31.0±3.1
10 일 115.1±16.7 49.7±8.9 29.6±5.8 53.6±4.9 32.8±4.3
11 일 114.6±18.9 47.7±4.2 30.4±6.5 54.7±4.2 39.9±9.1
12 일 109.5±13.1 51.7±3.1 32.9±5.7 56.5±4.7 46.7±9.1
13 일 111.1±21.2 52.9±6.4 35.7±9.2 58.7±3.8 45.4±7.6
14 일 128.9±17.7 54.7±4.2 37.8±9.6 60.6±4.2 53.8±11.3
17 일 95.6±6.6 59.5±10.3 40.2±7.4 56.7±4.4 48.4±10.0
20 일 92.5±8.4 62.4±6.7 47.6±8.9 61.8±6.0 54.0±9.5
23 일 107.1±15.2 71.9±6.5 61.8±13.3 64.9±4.4 56.8±6.0
26 일 104.0±5.6 77.7±6.8 72.2±22.4 70.8±7.4 62.4±5.8
29 일 102.4±8.3 81.4±6.7 77.9±20.5 74.8±5.1 65.4±10.8
2) 원숭이 혈액에서 HL161A 및 HL161B의 약동학적 프로파일 분석 결과
HL161A 및 HL161B의 정맥 투여 후 시간에 따른 혈중 약동학적 프로파일(PK)을 경쟁적 ELISA로 분석하였다. 구체적으로, 2　㎍/mL의 뉴트라비딘 용액을 준비하고, 100 μL의 용액을 96-웰 플레이트의 각 웰에 코팅한 다음, 4 ℃에서 18시간 인큐베이션하였다. 플레이트를 300 μL의 세척 완충액(10 mM PBS를 함유하는 0.05%의 Tween 20, pH 7.4)으로 3회 세척한 다음, 각 웰을 1%의 BSA-함유 PBS(pH 7.4) 용액으로 25 ℃에서 2시간 상온에서 인큐베이션시켰다. 비오틴 결합 hFcRn을 PBS로 1　㎍/mL까지 희석한 다음, 100 μL의 희석액을 96-웰 플레이트의 각 웰에 가한 다음, 25 ℃에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 다음으로, 플레이트를 300 μL의 세척 완충액으로 3회 세척하여 결합하지 않은 hFcRn을 제거한 다음, 표준 시료(0.156-20 ng/mL)를 각 웰에 가하고 25℃에서 2시간 동안 인큐베이션하였다. 다시, 플레이트를 세척 완충액으로 3회 세척하고, PBS 내 검출 항체의 1:10,000 희석액 100 μL를 각 웰에 가하고 25℃에서 1.5시간 동안 인큐베이션하였다. 마지막으로, 플레이트를 3회 세척하고, 100 μL의 TMB 용액을 넣고 상온에서 5분간 반응시킨 후, 1M 황산 반응 종료 용액 50 μL를 넣고 반응을 종료시켰다. 다음으로, 흡광도 판독기로 450 nm에서 흡광도를 측정하였다. 다양한 투여용량별 HL161A 및 HL161B의 약동학적 프로파일에 대한 분석 결과를 표 8, 및 도 7a 및 도 7b에 나타내었다.
HL161A 및 HL161B의 투여용량별 약동학적 프로파일 분석 결과
Ab (투여용량) 일(Day) Cmax
(mg/ml) 		AUC
(mg/ml.hr) 		T 1/2
(hr)
HL161A
(5 mg/kg)		 0-7 157 ± 31 1,601 ± 501 6.9 ± 0.9
7-14 157 ± 25 1,388 ± 334 10.3 ± 2.8
HL161A
(20 mg/kg)		 0-7 692 ± 138 13,947 ± 2,459 9.0 ± 0.6
7-14 724 ± 125 12,699 ± 2,114 7.6 ± 1.6
HL161B
(5 mg/kg)		 0-7 178 ± 56 2,551 ± 1,356 7.9 ± 1.3
7-14 187 ± 9 2,772 ± 466 9.4 ± 0.5
HL161B
(20 mg/kg)		 0-7 823 ± 38 21,867 ± 1,088 11.7 ± 1.0
7-14 868 ± 66 16,116 ± 1,501 6.8 ± 0.9
3) 원숭이 혈액내 IgM 및 IgA 항체 수준의 변화량 분석 결과
원숭이 혈액에서 IgG 및 IgA 수준을 측정하기 위한 ELISA 분석은 IgG 수준을 측정하기 위한 ELISA 방법과 유사한 방법으로 수행하였다. 구체적으로, 96-웰 프레이트의 각 웰에 2.0 ㎍/mL의 농도가 되도록 100 μL의 항-원숭이 IgM 항체(Alpha Diagnostic, 70033) 또는 IgA 항체(Alpha Diagnostic, 70043)를 분주한 다음, 4℃ 에서 16시간 고정화하였다. 플레이트를 세척 완충액(10 mM의 PBS가 함유된 0.05%의 Tween-20, pH 7.4)으로 3회 세척한 다음, 1% BSA-함유된 PBS(pH 7.4) 용액으로 2시간 실온에서 인큐베이션하였다. 표준품인 원숭이 IgM은 7.8-1,000 ng/mL의 농도, 그리고 IgA은 15.6-2,000 ng/mL에서 분석하였다. 혈액 시료는 1% BSA-함유 PBS(pH 7.4) 용액으로 10,000- 또는 20,000-배 희석하였고, 희석액을 각 웰에 첨가하여 실온에서 2시간 인큐베이션하였다. 다음으로, 플레이트를 세척 용액으로 3회 세척한 다음, 항-원숭이 IgM 2차 항체(Alpha Diagnostic, 70031) 및 항-원숭이 IgA 2차 항체(KPL, 074-11-011) 각각의 5,000-배 희석액 100 μL을 각 웰에 가하고, 실온에서 1시간 반응시켰다. 마지막으로 플레이트를 3회 세척하고, 100　μL의 기질 용액인 3,3',5,5'-테트라메틸벤지딘(RnD, Cat. No: DY999)을 주입하여 실온에서 7분 반응시켰다. 다음으로, 1.0 M 황산 용액(Samchun, Cat. No: S2129) 50 μL를 각 웰에 주입하여 반응을 중지시켰다. 각 웰의 흡광도를 450 및 540 nm 흡광도 판독기(MD, 모델: VersaMax)로 측정하였다.
4) 원숭이 혈액내 알부민 수준의 변화량 분석 결과
혈액내 원숭이 알부민 수준의 변화량 분석을 상용화된 ELISA 키트(Assaypro, Cat. No: EKA2201-1)를 사용하여 수행하였다. 간략하게, 분석 시료인 원숭이 혈청을 4,000배 희석한 다음, 25 μL의 희석액을 원숭이 알부민에 결합 가능한 항체가 고정화된 96-웰 플레이트의 각 웰에 분주하였다. 비오틴이 결합된 원숭이 알부민 용액 25 μL 를 각 웰에 가하고 25 ℃에서 2시간 동안 인큐베이션하였다. 플레이트를 200 μL의 세척 완충액으로 3회 세척한 다음, 스트렙타비딘-페록시다아제(streptavidinperoxidase)가 컨쥬게이션된 항체를 1:100 희석한 용액 50 μL을 각 웰에 넣고 25 ℃에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 마지막으로, 플레이트를 3회 세척한 후, 50 μL의 기질을 넣고 상온에서 10분 동안 인큐베이션하였다. 그런 다음, 반응 종료 용액 50 μL을 각 웰에 가하고, 450 nm에서 흡광도를 측정하였다. HL161A 및 HL161B의 투여에 의한 원숭이 IgM, IgA 및 알부민 수준의 변화(%)는 도 8a 내지 도 8c에 나타내었다.
5) 혈액 생화학적 수치 및 뇨 성분 분석 결과
마지막으로, 항체 투여에 의한 혈액 생화학적 분석 및 뇨 분석을 시험 14일째의 시료를 이용하여 수행하였다. 혈액 생화학적 표지 인자는 Aspartate aminotransferase(AST), Alanine aminotransferase(ALT), Alkaline phosphatase(ALP), Creatine phosphokinase(CPK), Total bilirubin(TBIL), Glucose(GLU), Total cholesterol(TCHO), Triglyceride(TG), Total protein(TP), Alumine(Alb), Albumine/globulin(A/G), Blood urea nitrogen(BUN), Creatinine(CRE), Inorganic phosphorus(IP), Calcium(Ca), Natrium(Na), Kalium(K), Chloride(Cl)를 Hitachi 7180 기기를 이용하여 분석하였으며, 뇨 분석을 위한 표지 인자는 Leukocyte(LEU), Nitrate(NIT), Urobilinogen(URO), Protein(PRO), pH, Occult blood(BLO), Specific gravity(SG), Ketone body(KET), Bilirubin(BIL), Glucose(GLU), Ascorbic acid(ASC)를 Mission U120 기기를 사용하여 분석하였다. 측정된 수치는 일반적으로 시아노몰거스 원숭이의 정상 수치 범위 내 포함되는 수치로 특정되었다.
실시예 9: 피하(SC) 또는 정맥내(IV) 투여 후 건강한 대상체에서 RVT-1401(HL161BKN) 평가
단일(IV 및 SC) 및 다중(SC) 투여용량 후 RVT-1401(HL161BKN)의 안전성, 내약성, 약동학(PK), 약력학(PD) 및 면역원성을 평가하기 위해 RVT-1401 또는 위약을 건강한 대상에게 다음 투여용량으로 투여하였다. (N = RVT-1401:위약): 0.5 mg/kg SC(N = 3:0); 1.5 mg/kg SC(N = 6:2); 5.0 mg/kg SC(N = 6:2); 340 mg SC(N = 6:2); 500 mg SC(N = 6:2); 765 mg SC(N = 6:2); 0.1 mg/kg IV(N = 4:0); 100mg IV(N = 6:2); 340mg IV(N = 6:2); 765mg IV(N = 6:2); 1530mg IV(N = 6:2); 340 mg 매주 x 4(N = 8:2); 및 680 mg 매주 x 4(N=8:2)(도 9). 대상체 인구 통계는 표 9에 나와 있다.
대상체 인구 통계
대상체 인구 통계 SAD MAD
RVT-1401
(N=61)		 Placebo
(N=18)		 RVT-1401
(N=16)		 위약
(N=4)
평균 나이 (yrs)
[Range]		 36
(19-55)		 36
(18-55)		 37
(21-48)		 36
(32-40)
평균 무게 (kg)
[Range]		 79
(52-102)		 71
(54-94)		 76
(59-90)		 82
(74-103)
성별 - 남자 (N%) 57 (93%) 13 (72%) 16 (100%) 4 (100%)
성별 - 여자 (N%) 4 (7%) 5 (28%) 0 (0%) 0 (0%)
인종 - 백인 (N%) 54 (89%) 15 (83%) 14 (88%) 4 (100%)
인종 - 흑인 또는 아프리카계 미국인 (N%) 5 (8%) 2 (11%) 1 (6%) 0 (0%)
인종 - 아시아인 (N%) 0 (0%) 1 (6%) 1 (6%) 0 (0%)
인종 - 기타 (N%) 2 (3%) 0 (0%) 0 (0%) 0 (0%)
결과 -
약동학 (PK): SC 투여 후 단일 투여용량 PK(Cmax 및 AUC)는 1.5mg/kg(등가 평균: 127mg)에서 765mg(고정 투여용량)의 투여용량 범위에 걸쳐 투여용량 비례 방식보다 더 크게 증가했다. 100mg에서 340mg의 투여용량 범위에 걸쳐 1시간 IV 인퓨전(infusion) 후에도 유사한 경향이 관찰되었다. 340 mg 및 그 이상의 투여용량을 SC 투여한 후 1.5 - 4일 사이 피크 농도가 관찰되었다. IV 인퓨전 후, RVT-1401의 혈청 말기 반감기(t1/2)는 투여용량에 따라 증가했다. AUC의 투여용량 의존적 반감기와 비례 이상 증가는 표적 매개 약물 배치와 일치했다. 340mg 이상의 투여용량을 SC 투여한 후 투여용량에 따른 반감기의 변화가 관찰되었으며, t1/2는 모든 투여용량에 걸쳐 10~38시간 사이에서 다양했다. 피하 투여된 RVT-1401의 생체이용률은 340mg 및 765mg 투여 후 각각 11% 및 23.5%였다. RVT-1401의 단일 투여용량 IV 및 SC 투여 후 건강한 대상에서 평균 농도-시간 프로파일이 도 10a 및 도 10b 에 도시되어 있다. RVT-1401의 단일 투여용량 투여 후 혈장 PK 파라미터의 요약이 표 10 및 11에 도시되어 있다.
RVT-1401은 다중 투여용량 코호트에서 4주 동안 340mg 또는 680mg의 SC 매주 주사로 투여되었다. 매주 340mg의 SC 투여 후, RVT-1401의 첫 번째 투여 후 Cmax 및 AUC(0-168)의 변동성은 단일 투여용량 데이터와 일치했다. Cmax 및 AUC(0-168) 주변의 이러한 피험자 간 변동성은 후속 투여 후에 감소했다. 340mg의 주간 투여 후 약물 축적은 또한, 첫 번째 투여 후 변동성으로 인한 피험자 간 변동성이 큰 것으로 나타났다. 680 mg의 반복 SC 투여는 노출에 있어 피험자 간 변동성이 더 적었고 투여 4주 후에 축적이 적었다. 노출(Cmax 및 AUC(0-168))은 340 mg 및 680 mg SC 투여용량의 4주차를 비교할 때 투여용량 비례 방식 이상으로 증가했다. 증가하는 반감기와 투여용량 증가에 따른 AUC 및 Cmax의 비례적 증가는 표적 매개 약물 소인과 일치했다. 340 mg 또는 680 mg의 RVT-1401을 매주 SC 투여한 후 건강한 대상체에서 평균 농도-시간 프로파일이 도 11a 및 도 11b 에 도시되어 있다.
RVT-1401의 체중 기반 단일 SC 투여 후 PK 파라미터[기하 평균(%CV)] 요약
투여용량
(mg/kg) 		투여경로 N 무게 1
(kg) 		AUC (0-168)
(h*ug/mL) 		C max
(ug/mL) 		T max 1
(일) 		반감기
(시간)
1.5 SC 52 84
(71,102)		 5.20
(69)		 0.08
(170)		 0.75
(0.33,2.00)		 46.4
(111)
5.0 SC 6 75
(59,97)		 833
(60)		 12.8
(54)		 2.5
(2,3)		 12.0
(21.7)
1 중앙값(최소, 최대)
2 1명의 대상체는 1.5 mg/kg 투여 후 측정 가능한 농도를 갖지 않아 PK 파라미터 요약에 포함되지 않았다.
RVT-1401의 고정 투여용량 단일 SC SC/IV 투여 후 PK 파라미터[기하학적 평균(%CV)] 요약
투여용량(mg) 투여경로 N 무게 1
(kg) 		AUC(0-168)
(h*ug/mL) 		C max
(ug/mL) 		T max 1
(일) 		반감기 2
(시간)
100 IV 6 92
(70,101)		 211
(51)		 19.9
(25)		 0.04
(0.04,0.06)		 5.30
(23)
340 IV 6 71
(69,102)		 3940
(12)		 121
(16)		 0.06
(0.04,0.08)		 11.2
(29)
765 IV 6 76
(58,102)		 15500
(26)		 273
(22)		 1.75
(1.5,8)		 ND
1530 IV 6 77
(54,89)		 35100
(28)		 530
(25)		 1.5
(1,6)		 ND
340 SC 6 83
(66,97)		 453
(333)		 7.58
(275)		 1.5
(1.5,3)		 14.6 (n=5)
(35)
500 SC 6 74
(70,91)		 323
(626)		 4.26
(661)		 2.5
(1.5,4)		 21.6 (n=5)
(56)
765 SC 6 75
(52,98)		 4110
(77)		 42.5
(57)		 3
(2,4)		 16.1 (n=5)
(14.5)
1 중앙값(최소, 최대)
2 340, 500 및 765 mg SC 코호트에는 각각 말기 단계의 포인트 수가 부족하여 최종 반감기를 계산할 수 없는 대상이 한 명 있었다.
ND = 데이터 컷-오프 시 결정되지 않음
1차 약력학(PD): 기준선과 비교하여 IgG의 투여용량 의존적 감소는 RVT-1401의 단일 투여용량 SC 및 IV 투여 후에 관찰되었다. IgG의 최저 농도까지의 시간은 RVT-1401 투여 후 7일에서 14일 사이였다. 기준선으로의 회복은 일반적으로 마지막 투여 후 56일 이내에 달성되었다. 단일 SC 투여용량 후 가장 높은 백분율 IgG 감소는 765 mg 투여 후 48%였다. RVT-1401을 반복적으로 투여한 후 340mg 및 680mg 코호트 모두에서 IgG 및 알부민 농도의 누적 감소가 있었다. 매주 680mg의 SC 투여 후, 대부분의 대상체에서 마지막 투여 전에 IgG 및 알부민 모두에 대한 최저 농도가 발생하여 4주차까지 최대 감소가 달성되었음을 나타낸다. 63%의 IgG의 최대 감소는 4주 동안 340mg의 매주 SC 투여 후 관찰되었고 4주 동안 680mg의 매주 SC 투여 후 78%가 관찰되었다. 마지막 투여 5주 후 평균(SD) IgG 농도는 기준값의 30% 이내에서 340mg 및 680mg 코호트에 대해 각각 8.6(2.5)g/L 및 9.0(2.0)g/L였다. 지속적인 IgG 감소(> 35%)는 마지막 투여 후 1개월 후에 유지되었으며, IgM 또는 IgA에서 임상적으로 관련된 변화가 관찰되지 않았다. 340 mg 또는 680 mg으로 RVT-1401을 매주 SC 투여한 후 건강한 대상체에서 혈청 IgG 농도-시간 프로파일을 도 12에 나타내었다. RVT-1401의 단일 투여용량 투여 후 총 IgG PD 파라미터의 요약이 표 12에 개시되어 있다. RVT-1401의 다중 투여용량 투여 후 총 IgG PD 파라미터의 요약이 표 13에 개시되어 있다.
RVT-1401의 단일 투여용량 투여 후 총 IgG PD 파라미터[평균(SD)] 요약
투여용량 투여경로 N 기준선 (g/L) 최저 농도 (g/L) 기준선으로부터 최대 감소(%) 최저 농도까지의 시간 1 (일)
1.5
mg/kg		 SC 6 10.8 (1.2) 9.3 (1.5) 14.0 (5.25) 14(10,28)
5.0
mg/kg		 SC 6 10.3 (1.8) 7.1 (1.4) 31.3 (5.07) 10 (7.0,10)
340 mg SC 6 11.4 (1.6) 8.2 (2.6) 29.0 (18.3) 10.5 (4,21)
500 mg SC 6 12.0 (1.8) 7.6 (1.1) 36.3 (9.0) 10 (7.0,14)
765 mg SC 6 11.7 (2.1) 6.1 (0.9) 47.8 (5.60) 8.5 (7.0,14)
위약 SC 10 9.9 (1.3) 9.3 (1.1) 6.07 (4.38) 12 (0.0,84)
100 mg IV 6 9.6 (1.1) 8.4 (1.1) 12.8 (4.18) 3.5 (2.0,10)
340 mg IV 6 12.3 (2.5) 7.7 (1.8) 37.3 (3.29) 10 (7.0,10)
765 mg IV 6 14.4 (1.7) 6.2 (0.9)2 57.3 (0.87)2 10 (10,10)2
1530 mg IV 6 11.4 (2.5) 3.8 (1.2) 66.8 (4.48) 10 (10,14)
위약 IV 8 11.9 (3.0) 10.8 (2.4) 8.97 (6.67) 14 (7.0,84)
1 최하점까지의 시간은 첫 번째 투여용량 투여와 관련이 있다; 중앙값(최소, 최대)
2 N=4
RVT-1401의 다중 투여용량 투여 후 총 IgG PD 파라미터[평균(SD)] 요약
투여용량
(mg) 		N 몸무게2 (kg) 기준선 (g,/L) 최저 농도 (g/L) 기준선으로부터 최대 감소 (%) 최저 농도까지의 시간 2,3 (일)
340 8 80.8
(66.8, 84.4)		 11.8
(2.7)		 4.41
(2.2)		 62.61
(10.7)		 241
(21,28)
680 8 70.9
(59.2, 90.3)		 12.6
(2.8)		 2.8
(0.9)		 78.4
(2.36)		 21
(21,24)
위약4 4 76.1
(75.4, 107)		 10.5
(2.3)		 9.3
(1.9)		 11.2
(1.70)		 33
(21,42)
1 개인적인 이유로 인해 4차 및 최종 퉁여용량 이전에 중단한 1명의 피험자로 인해 PD의 N=7
2 중앙값(최소, 최대)
3 최저까지의 시간은 첫 번째 투여용량 투여에 상대적임
4 위약 그룹은 두 치료 그룹 모두에서 위약을 받은 피험자에서 통합
2차 약력학(PD): 340 mg 또는 680 mg에서 RVT-1401의 반복 투여용량 투여 후 알부민 농도의 투여용량 의존적 감소가 관찰되었다. 관찰된 알부민 감소와 관련된 이상 반응(AE)은 없었다. 모든 대상에서 평균 혈청 알부민 수준은 340mg을 매주 투여한 후 정상 한계(>3.5g/dL) 내로 유지되었다. 680mg에서 알부민은 모든 피험자에서 정상 한계 아래로 떨어졌지만, 한 피험자를 제외하고 투여 기간 동안 3.0g/dL 이상으로 유지되었다(그 피험자의 알부민은 22일과 25일에 2.6g/dL의 최하점에 도달했지만 임상 징후, 증상 또는 부작용을 일으키지 않았다). 모든 피험자에서 알부민 수치는 680mg 코호트에 대한 마지막 투여 후 4주 이내에 정상 한계 내에 있었다. 두 코호트에 걸쳐 평균적으로 피험자 알부민 수준은 마지막 투여 5주 후 기준선 값의 90% 이내였으며, 이는 알부민에 대한 RVT-1401 효과의 가역성을 나타낸다.
도 13a는 RVT-1401(340mg, 765mg, 1530mg) 또는 위약의 단일 투여용량 IV 투여 후 건강한 대상체에서 기준선으로부터의 혈청 IgG 감소 백분율(%)을 도시한다. 도 13b는 RVT-1401(340mg, 765mg) 또는 위약의 단일 투여용량 SC 투여 후 건강한 대상체에서 기준선으로부터의 혈청 IgG 감소 백분율(%)을 도시한다. 도 14a는 RVT-1401(340mg, 680mg) 또는 위약의 다중 투여용량 SC 투여 후 건강한 대상체에서 기준선으로부터 백분율(%) 혈청 IgG(총) 감소를 도시한다. 도 14b는 RVT-1401(340mg, 680mg) 또는 위약의 다중 투여용량 SC 투여 후 건강한 대상체에서 기준선으로부터의 혈청 IgG1 감소 백분율(%)을 도시한다. 도 14c는 RVT-1401(340mg, 680mg) 또는 위약의 다중 투여용량 SC 투여 후 건강한 대상체에서 기준선으로부터의 혈청 IgG2 감소 백분율(%)을 도시한다. 도 14d는 RVT-1401(340mg, 680mg) 또는 위약의 다중 투여용량 SC 투여 후 건강한 대상체에서 기준선으로부터의 혈청 IgG3 감소 백분율(%)을 도시한다. 도 14e는 RVT-1401(340mg, 680mg) 또는 위약의 다중 투여용량 SC 투여 후 건강한 대상체에서 기준선으로부터의 혈청 IgG4 감소 백분율(%)을 도시한다. IgG 하위클래스(IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4)에 대한 기준선으로부터의 최대 혈청 IgG 감소 백분율(%)이 표 14에 도시되어 있다.
IgG 하위클래스에 대한 최대 혈청 IgG 감소 백분율(%)
기준선으로부터의 최대 백분율(%) 감소 *
처치 체중으로 정규화된 투여용량 ** (mg/kg) IgG1 IgG2 IgG3 IgG4
위약 0 6.8 (6.8) 6.9 (0.8) 6.8 (2.2) 12.1 (3.1)
340 mg 4.4
(4.0, 5.1)		 67.4 (8.2) 50.7 (9.6) 72 (9.0) 58.1 (6.9)
680 mg 9.2
(7.5, 11.5)		 80.4 (2.9) 70.6 (3.7) 85.3 (2.3) 78.7 (5.6)
* 평균(SD); ** 평균(최소, 최대)
안전성: RVT-1401은 일반적으로 내약성이 우수했으며, 이상 반응(AE)으로 인한 사망이나 중단이 없었고, 모든 비중증 치료관련 이상반응(treatment emergent adverse event, TEAE)은 경증 또는 중등도였다. 주사 부위 반응(홍반 및/또는 부종)은 SC 투여(단일 및 다중 투여용량) 후 RVT-1401 및 위약 모두에서 가장 빈번한 TEAE였다. 주사 부위 반응은 강도가 모두 경미했으며, 일반적으로 투여 후 1-4시간 이내에 해결되었다. 주사 부위 반응의 빈도는 투여용량과 관련이 없었고, RVT-1401 및 위약에서 유사했다. >340 mg/kg SC의 단일 또는 다중 투여용량으로 처치된 3명 이상의 대상체에서 관찰된 기타 TEAE에는 두통 및 불면증이 포함되었다. IV 투여 후 3명 이상의 피험자에서 보고된 유일한 TEAE는 구인두 통증 및 두통이었다. IV 투여용량 코호트의 모든 심각하지 않은 TEAE는 중증도가 경증에서 중등도였다. 전반적으로, 활력 징후, 실험실 검사(간 기능 검사 포함) 또는 RVT-1401 SC 또는 IV 투여 후 ECG에서 기준선으로부터 임상적으로 관련된 변화가 없었다. SC 또는 IV 코호트에서 IgG 또는 알부민의 감소와 함께 보고된 임상 징후 또는 증상은 없었다. 680mg 투여용량으로 RVT-1401을 반복 SC 주사한 후 두통이 관찰되지 않았다. 두 가지 심각한 AE가 보고되었으나, 둘 중 어느 것도 RVT-1401과 관련이 없었다.
면역원성: RVT-1401에 대한 항-약물 항체(ADA)의 발달은 RVT-1401의 단일(IV 및 SC 제형) 및 다중(SC 제형) 투여 후 모든 투여용량 코호트에 걸쳐 평가되었다. 예비 데이터는 단일 상승 투여용량 코호트에 걸쳐 RVT-1401 치료 대상에서 10.3%, 위약 치료 대상에서 6.7%의 치료-관련(treatment-emergent) ADA 발생률을 보여주었으며, 이는 ADA 분석의 높은 민감도와 일치한다. 적정농도는 낮은 것으로 간주되었으며(< 1:16) PK 또는 PD에 영향을 미치지 않았다. 모니터링 기간이 끝날 때까지 모든 ADA가 사라졌다. 340mg 또는 680mg 다중 상승 투여용량(MAD) 코호트에서 치료-관련 ADA가 없었다.
실시예 10: 온열 자가면역 용혈성 빈혈(WAIHA) 환자의 치료를 위한 RVT-1401의 비무작위, 공개 라벨 연구
온열 자가면역 용혈성 빈혈(WAIHA) 환자에서 RVT-1401(주 680mg 및 주 340mg)의 안전성, 내약성, PK, PD 및 효능을 평가하기 위해, RVT-1401의 2가지 투여 요법은 비무작위, 순차적, 공개 라벨 연구에서 평가된다. 두 투여 요법 모두 매주 1회 피하(SC) 주사를 포함한다: 투여 요법 A(12주 동안 매주 680mg) 및 투여 요법 B(12주 동안 매주 340mg). 투여 요법 A(12주 동안 매주 680mg) 및 투여 요법 B(12주 동안 매주 340mg). 투여 요법 A(주당 680mg)는 주당 2회의 SC 주사로 투여되고, 투여 요법 B(주당 340mg)는 주당 단일 SC 주사로 투여된다. 연구 설계는 도 15에 도시되어 있고, 아래에 설명되어 있다.
연구 설계:
스크리닝-
환자는 주요 선정/제외 기준에 대해 진단되고 선별되었다(표15). 선정/제외 기준의 추가 예는 NCT03226678, NCT04119050 및 NCT03764618 (ClinicalTrials.gov)에 개시되어 있으며, 이들 각각은 이러한 기준의 개시를 위해 참조로 여기에 포함된다.
주요 선정/제외 기준
선정 기준
1 18세 이상의 남성 또는 여성.
2 항-IgG 단독 또는 항-IgG + C3d에 특이적인 양성 직접 항글로불린 검사(DAT)에 의해 문서화된 1차 또는 2차 WAIHA 진단.
3 별도의 치료가 지시되지 않았거나, 연구 기간 동안 적극적인 관리가 필요할 것으로 예상되지 않는 경우 2차 WAIHA에는 0기 만성 림프구성 백혈병(CLL)만 포함될 수 있음.
4 지역 표준(예를 들어, 스테로이드, 리툭시맙, 아자티오프린, 시클로포스파미드, 시클로스포린, 미코페놀레이트 모페틸(MMF), 다나졸 또는 빈크리스틴)에 따라 적어도 한 가지 이전 WAIHA 치료 요법에 실패했거나 허용되지 않음.
5 1일차부터 3개월 이상 비장절제술을 받은 피험자는 최신 백신 접종을 받은 상태(나이 및 현지 지침에 따름)가 허용됨.
6 합토글로빈 < 정상 하한(LLN) 및 젖산 탈수소효소(LDH) > 정상 상한(ULN).
7 스크리닝 및 기준선에서 대상체의 헤모글로빈 수치는 <10g/dL이어야 하고 대상체는 빈혈과 관련된 문서화된 증상이 있어야 함(예, 쇠약, 현기증, 피로, 숨가쁨, 흉통).
8 카노브스키 수행 상태(Karnofsky Performance status) ≥60.
9 WAIHA에 대한 대상체의 동시 치료는 스테로이드(1일 이전 최소 2주 동안 안정적인 투여용량), 제1일 이전 최소 4주 동안 안정적인 투여용량을 유지한 면역억제제 요법(아자티오프린, MMF 또는 사이클로스포린) 또는 에리트로포이에틴(1일차 이전 최소 6주 동안 안정적인 투여용량)으로만 구성될 수 있음. [참고: WAIHA 요법의 시작 투여용량은 안전에 대한 지역 표준에 따른 구조 약물의 경우를 제외하고 연구 전반에 걸쳐 유지되어야 함. 최소 2주 동안 반응을 보이는 피험자의 경우 1일 10mg까지 스테로이드 테이퍼가 허용됨.]
제외 기준
1 다른 유형의 AIHA(예, 한랭항체 AIHA, 한랭응집소 증후군, 혼합형 AIHA 또는 발작성 한랭혈색소뇨증)가 있는 피험자.
2 스크리닝 및 기준선 이전 2주 동안 매주 2단위 이상의 RBC가 필요한 피험자.
3 스크리닝 전 3개월 이내에 면역조절을 위한 리툭시맙, 임의의 단일클론 항체 또는 프로테아좀 억제제의 사용.
4 스크리닝 전 60일 이내에 SC, IV(IVIG) 또는 근육내 경로투여 또는 혈장사혈/혈장 교환(PE)에 의한 면역글로불린.
5 총 IgG 수준 < 6 g/L(스크리닝 시).
6 스크리닝시 절대적 호중구 수 <1000 cells/mm3 (스크리닝 시)
7 스크리닝에서 알부민 수준 <3.5g/dL.
8 모든 단계의 간경변 진단을 포함하여 알려진 진행성 간 질환. 비-알코올성 지방간염 (NASH)를 포함한 비-알코올성 지방간 질환(NAFLD)은 최근(6개월 이내) 정상적인 초음파, CT 또는 MRI가 있는 경우 허용됨. 초음파, CT 또는 MRI만으로 지방변화가 나타나는 경우, 피험자는 간 섬유증에 대해 정상 범위의 간섬유화스캔(fibroscan)을 가지고 있는 경우 등록할 수 있음.
9 스크리닝 시 AST 또는 ALT ≥1.5x ULN. 피험자는 최근(6개월 이내) 초음파, CT 또는 MRI를 받은 경우에만 등록할 수 있음. 초음파, CT 또는 MRI만으로 지방 변화가 나타나는 경우, 피험자는 간 섬유증에 대해 정상 범위의 간섬유화스캔 (fibroscan)을 가지고 있는 경우 등록할 수 있음.
10 임상적으로 중요하고, 기준선에서 해결되지 않았으며, 연구에 참여하는 피험자의 능력을 위태롭게 하거나 손상시킬 수 있는 임의의 검사소견 이상(스크리닝 시)을갖는 피험자.
11 공통 가변성 면역결핍증을 포함한 원발성 면역결핍, T-세포 또는 체액성 병력.
12 스크리닝 전 8주 이내에 활성 감염, 최근 심각한 감염(즉, 주사가능한 항균 요법 또는 입원 필요)이 있음.
13 인간 면역 결핍 바이러스(HIV), B형 간염 바이러스(HBV) 또는 결핵균에 감염된 이력 또는 알려진 감염:
- 피험자는 스크리닝시 HBV 표면 항원, HBV 코어 항체, HIV 1 및 2 항체, 및 음성QuantiFERON-TB Gold 테스트에 대한 음성 테스트 결과가 있어야 함.
- 불확실한 QuantiFERON-TB Gold 테스트를 갖는 피험자는 한 번의 재검사가 허용될 수 있음; 재검사에서 음성이 아닌 경우, 피험자는 제외될 수 있음.
14 C형 간염 바이러스(HCV) 감염:- 피험자는 HCV 항체에 대한 음성 테스트 결과가 음성이어야 함.
- 알려진 HCV 병력이 있는 피험자는 C형 간염 감염의 치료와 일치하는 지속적인 바이러스 반응의 증거를 문서화해야 함. 이는 HCV 치료를 중단한 후 적어도 12주 동안 검출할 수 없거나 정량화할 수 없는 HCV RNA로 정의됨(HCV 지침: C형 간염 검사, 관리 및 치료를 위한 권장사항, 2014-2018, AASLD 및 IDSA). 이는 스크리닝시 음성 HCV RNA 테스트로 확인되어야 함.
15 스크리닝 전 3년 동안 활성 악성 또는 악성 종양의 병력(비흑색종 피부암 및 제자리 자궁경부암 제외).
16 연구에 참여할 수 있는 피험자의 능력을 위태롭게 하거나 손상시킬 수 있는 임의의 의학적 상태(급성 또는 만성 질환) 또는 정신과적 상태가 있는 피험자.
17 스크리닝 시 체질량지수(BMI) ≥40kg/m2.
18 스크리닝 전 약물의 60일 또는 5 반감기(둘 중 더 긴 쪽) 이내에 시험용 약물 사용.
19 피험자가 기준선 방문 전 2주 이내에 생백신 접종을 받았거나; 연구 과정 동안 또는 연구 치료제의 최종 투여 후 7주 이내에 생백신을 받을 계획이 있음.
20 임의의 연구 치료제, 또는 그의 성분에 대한 민감성 이력 또는 참여를 금하는 아나필락시스의 이력(즉, 생명을 위협하는 심각한 알레르기 반응).
21 스크리닝 또는 기준선에서 양성 혈청 또는 뇨 인간 융모막 성선 자극 호르몬 테스트에 의해 결정된 임신 또는 수유 중인 여성.
22 스크리닝시 남성에 대해 QTcF 간격이 >450 밀리세컨드 (milliseconds)이고, 여성에 대해 >470 밀리세컨드임 (적격성 결정을 위해 단일 반복이 허용됨). 각블록 (Bundle Branch Block) 피험자에서 QTcF >480 msec.
23 혈소판 수가 <100,000인 경우 동반되는 특발성 혈소판 감소 자반병(ITP)/에반스 증후군의 진단.
치료 -
2개 코호트의 환자들은 비무작위 순차적 방식으로 등록된다. 환자들은 먼저 코호트 1(주당 680mg)에 등록된 후 코호트 2(주당 340mg)에 등록된다. 기준선 방문(1주차, 1일차)에서의 초기 투여용량 후, 연구 방문은 치료 기간 동안 매주 발생한다. 환자는 12주 동안 RVT-1401을 받는다(매주 680mg 또는 매주 340mg). 투여 요법은 요법 A 및 요법 B에 대해 각각 약 75-80% 및 65-70%의 지속적인 총 IgG 감소를 제공할 것으로 예상하였다. 또한 최저 IgG 감소는 3~5차 투여용량(연구 투여용량에 따라 다름)에 의해 달성되고 치료 중단 후 다음 6~8주에 걸쳐 기준선으로 다시 상승하기 전에 나머지 투여용량에 따라 유지될 것으로 예상하였다.
12주차 최종 투여 후, 방문은 14주차까지 매주 발생하고 그 다음 16주차 및 20주차에 발생한다. 안전성, PK, PD 및 임상 평가는 연구 전반에 걸쳐 수집된다. 각 환자는 최대 약 24주 동안 연구에 참여한다: 최대 4주 선별 기간, 12주 치료 기간 및 8주 추적 기간. 치료 중 및 치료 후, 1차, 2차 및 탐색적 평가점수를 최대 20주까지 평가하였다(표 16).
1차, 2차, 및 탐색적 평가변수
1차
1 13주차 응답자 비율 (지난 2주 동안 구조 요법이나 수혈 없이 기준선으로부터 적어도 ≥2g/dL 증가와 함께 Hb 수준 ≥10g/dL로 정의됨)
2 이상 반응(AE) 데이터의 분석에 의한 안전성 및 내약성 평가 및 활력 징후, ECG 및 임상적 검사치의 기준선 변화
2차
1 Hb 수준에서 기준선 변화
2 응답 시간
3 헤마토크릿 수준에서 기준선 변화
4 13주차에 Hb 수치가 정상 범위인 환자의 비율
5 정상 범위에서 Hb 수준에 도달하는 데 걸리는 시간
6 FACIT-F 점수에서 기준선 변화(피로)
7 MRC(Medical Research Council) 호흡 곤란 척도(호흡곤란)에서 기준선 변화
8 EQ-5D-3L 점수의 기준선 변화(건강 관련 삶의 질)
9 총 IgG 및 IgG 하위클래스(I-IV)의 수준에서 기준선 변화
10 RVT-1401 투여 전 농도(Ctrough)
11 LDH, 빌리루빈 및 합토글로빈의 기준선 변화
12 중화 가능성을 확인하기 위해 항-RVT-1401 항체의 투여 전 변화 및 항-RVT-1401 항체의 특성화에 의해 결정된 면역원성
탐색
1 응답별 직접항글로불린검사(DAT) 현황
2 구조 치료가 필요한 피험자의 비율(예: 프레드니손, 덱사메타손 및/또는 수혈)
3 B 세포 표현형에서 기준선 변화
4 항-D, 항-밴드 3 및/또는 항-글리코포린 항체에서 기준선 변화
연구 평가 및 과정:
신체검사: 완전한 신체 검사에는 최소한 심혈관, 호흡기, 위장 및 신경계와 피부에 대한 평가가 포함된다. 키 또한 선별에서만 측정되고 몸무게는 선별 및 기준선에서만 측정 및 기록된다. 간단한 신체 검사에는 최소한 피부, 호흡기 및 심혈관계, 복부(간 및 비장)에 대한 평가가 포함된다.
활력 징후: 활력 징후는 바로 누운 자세에서 측정되며 온도, 수축기 및 이완기 혈압, 맥박 산소 측정기를 포함한다.
심전도: 심전도(ECG)는 바로 누운 자세에서 측정된다. 심박수를 자동으로 계산하고 PR, QRS, QT 및 QTcF 간격을 측정하는 ECG 기계를 사용하여 연구 중에 12개의 리드 ECG를 얻었다.
임상 안전성 실험실 평가: 혈액학, 임상 화학, 소변 검사 및 중앙 검사실에서 테스트할 추가 파라미터는 아래 표 17에 나열되었다.
Figure pct00006
약동학 (PK): RVT-1401의 PK 분석을 위한 혈액 샘플을 지정된 시점에 수집한다. 각 혈액 샘플 수집의 실제 날짜와 시간이 기록된다.
항 약물 항체(ADA) 및 중화 항체(NAb): ADA 및 NAb 분석을 위한 혈액 샘플은 지정된 시점에 수집된다. 각 혈액 샘플 수집의 실제 날짜와 시간이 기록된다. 20주차에 항-RVT-1401 항체에 대해 양성(기준선에서 변경)인 환자는 추가 샘플을 위해 투여 후 약 6, 9 및 12개월 또는 결과가 더 이상 양성이 아닐 때까지 다시 방문해야 한다. 그러나 안전 후속 조치 및 데이터베이스 잠금을 위한 목적의 참여는 20주차 방문에서 종료된다.
약력학 (PD): RVT-1401의 PD 분석을 위한 혈액 샘플은 지정된 시점에 수집된다. 각 혈액 샘플 수집의 실제 날짜와 시간이 기록된다. 약력학적 마커에는 총 IgG 및 클래스별 분화가 포함된다(즉, IgG 하위클래스(IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4)).
탐색적 바이오마커: 탐색적 바이오마커 분석을 위한 혈액 샘플은 지정된 시점에 수집된다. 각 혈액 샘플 수집의 실제 날짜와 시간이 기록된다. 샘플의 타이밍은 변경될 수 있고/또는 샘플은 철저한 바이오마커 평가를 보장하기 위해 추가 시점에서 얻을 수 있다. 탐색적 바이오마커에는 B 세포 표현형, DAT, 항-D 항체, 항-밴드 3 항체 및/또는 항-글리코포린 항체가 포함된다.
중간 평가:
매주 680mg의 투여용량으로 RVT-1401(투여 요법 A)로 치료받은 2명의 WAIHA 환자로부터의 중간 임상 안전성 실험실 평가(헤모글로빈 및 면역글로불린 G(IgG))가 표 18에 개시되어 있다.
중간 임상 안전성 실험실 평가 - 헤모글로빈 및 IgG
기준선/
1주		 2주 3주 4주 5주 7주 9주 11주 13주
환자 1
헤모글로빈 (g/dL) 9.5 11.6 11.4 11.7 12.3 10.8 10.4 9.8 9.5
IgG (g/L) 8.2 4.35 2.95 2.07 2.02 1.88 2.12 2.46
환자 2
헤모글로빈 (g/dL) 6.4 7.1 7.1 7.4 7.8 7.7
IgG (g/L) 12.7 7.5 4.4 3.7 3.4 해당없음
두 환자 모두 진행성 WAIHA의 병력이 있고 WAIHA에 대해 적어도 4회 이전 치료법에 실패했다. RVT-1401로 공개 치료를 시작할 당시 두 환자 모두 모든 프로토콜 적격성 기준을 충족했다(표 15).
중간 평가 시점에서 환자 1은 12주의 치료를 완료했으며 환자 2는 7주의 치료를 완료했다. 두 환자 모두 주사 부위 반응이 보고되지 않았다.
환자 1의 강력하고 빠른 헤모글로빈 개선 개시(즉, 2주차까지 관찰되고 4주차(2주차에서 5주차)까지 유지된 2g/dL 이상의 증가)에 기초하여, 프레드니손의 투여용량 및 해당 환자에 대한 두 번째 배경 WAIHA 요법의 투여용량은 모두 5주차에 감소했다. 이론에 얽매이지 않고, 배경 약물 투여량의 이러한 변화는 7주에 시작하여 다음 주에 환자 1에서 관찰된 헤모글로빈 수준의 감소와 관련될 수 있다(표 18).
본 개시는 특정 특징을 참조하여 상세하게 설명되었지만, 이 설명은 단지 예시를 위한 목적이며, 본 개시의 범위를 제한하지 않는다는 것은 당업자에게 자명할 것이다. 따라서, 본 개시의 실질적인 범위는 첨부된 청구범위 및 그 등가물에 의해 정의될 것이다.
SEQUENCE LISTING <110> IMMUNOVANT SCIENCES GMBH <120> METHODS OF TREATING WARM AUTOIMMUNE HEMOLYTIC ANEMIA USING ANTI-FCRN ANTIBODIES <130> 15193.0005-00304 <140> <141> <150> 62/937,395 <151> 2019-11-19 <160> 48 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 363 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 1 gaagtgcagc tgctggaatc cggcggaggc ctggtgcagc ctggcggctc tctgagactg 60 tcctgcgccg cctccgagtt caccttcggc agctgcgtga tgacctgggt ccgacaggct 120 cccggcaagg gcctggaatg ggtgtccgtg atctccggct ccggcggctc cacctactac 180 gccgactctg tgaagggccg gttcaccatc tcccgggaca actccaagaa caccctgtac 240 ctgcagatga actccctgcg ggccgaggac accgccgtgt actactgcgc caagaccccc 300 tggtggctgc ggtccccctt cttcgattac tggggccagg gcaccctggt gacagtgtcc 360 tcc 363 <210> 2 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 2 Glu Val Gln Leu Leu Glu 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Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 47 tcttacgtgc tgacccagtc cccctccgtg tccgtggctc ctggccagac cgccagaatc 60 acctgtggcg gcaacaacat cggctccaag tccgtgcact ggtatcagca gaagcccggc 120 caggcccccg tgctggtggt gtacgacgac tccgaccggc cctctggcat ccctgagcgg 180 ttctccgcct ccaactccgg caacaccgcc accctgacca tctccagagt ggaagccggc 240 gacgaggccg actactactg ccaagtgtgg gactcctcct ccgaccacgt ggtgttcggc 300 ggaggcacca agctgaccgt gctgggccag cctaaggccg ctccctccgt gaccctgttc 360 cccccatcct ccgaggaact gcaggccaac aaggccaccc tggtctgcct gatctccgac 420 ttctaccctg gcgccgtgac cgtggcctgg aaggccgaca gctctcctgt gaaggccggc 480 gtggaaacca ccaccccctc caagcagtcc aacaacaaat acgccgcctc ctcctacctg 540 tccctgaccc ccgagcagtg gaagtcccac cggtcctaca gctgccaagt gacacacgag 600 ggctccaccg tggaaaagac cgtggcccct accgagtgct cc 642 <210> 48 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 48 Ser Tyr Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln 1 5 10 15 Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Ser Val 20 25 30 His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Val Tyr 35 40 45 Asp Asp Ser Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Ala Ser 50 55 60 Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Gly 65 70 75 80 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Ser Ser Ser Asp His 85 90 95 Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro Lys 100 105 110 Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gln 115 120 125 Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Gly 130 135 140 Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly 145 150 155 160 Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala 165 170 175 Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg Ser 180 185 190 Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val 195 200 205 Ala Pro Thr Glu Cys Ser 210

Claims (19)

  1. (i) 치료적 유효량의 항-FcRn 항체 또는 그의 항원-결합 단편; 또는
    (ii) 적어도 하나의 약제학적으로 허용 가능한 담체 및 치료학적 유효량의 항-FcRn 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 약학적 조성물을 환자에게 투여하는 것을 포함하는 이를 필요로 하는 환자에서 온열 자가면역 용혈성 빈혈의 치료 또는 예방 방법:
    여기에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 서열번호: 27의 아미노산 서열(HCDR1), 서열번호: 28의 아미노산 서열(HCDR2) 및 서열번호: 29의 아미노산 서열(HCDR3)을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호:　30의 아미노산 서열(LCDR1), 서열번호: 31의 아미노산 서열(LCDR2) 및 서열번호: 32의 아미노산 서열(LCDR3)을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하거나; 또는
    항체 또는 항원-결합 단편은 서열번호: 21의 아미노산 서열(HCDR1), 서열번호: 22의 아미노산 서열(HCDR2) 및 서열번호: 23의 아미노산 서열(HCDR3)을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호:　24의 아미노산 서열(LCDR1), 서열번호: 25의 아미노산 서열(LCDR2) 및 서열번호: 26의 아미노산 서열(LCDR3)을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하고;
    항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 약 170mg 내지 약 1500mg이다.
  2. 제1항에 있어서,
    항체 또는 항원-결합 단편은 서열번호: 27의 아미노산 서열(HCDR1), 서열번호: 28의 아미노산 서열(HCDR2) 및 서열번호: 29의 아미노산 서열(HCDR3)을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호:　30의 아미노산 서열(LCDR1), 서열번호: 31의 아미노산 서열(LCDR2) 및 서열번호: 32의 아미노산 서열(LCDR3)을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 방법.
  3. 제1항에 있어서,
    항체 또는 항원-결합 단편은 서열번호: 21의 아미노산 서열(HCDR1), 서열번호: 22의 아미노산 서열(HCDR2) 및 서열번호: 23의 아미노산 서열(HCDR3)을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호:　24의 아미노산 서열(LCDR1), 서열번호: 25의 아미노산 서열(LCDR2) 및 서열번호: 26의 아미노산 서열(LCDR3)을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 방법.
  4. 제1항에 있어서,
    항체 또는 항원-결합 단편은 서열번호: 4 또는 서열번호: 6의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호:　14 또는 서열번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 방법.
  5. 제1항에 있어서,
    항체 또는 항원-결합 단편은 서열번호: 2의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호:　12의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 방법.
  6. 제1항에 있어서,
    항체 또는 항원-결합 단편은 pH 6.0 또는 pH 7.4에서 0.01 nM 내지 2 nM의 KD (해리 상수)로 FcRn와 결합하는, 방법.
  7. 제6항에 있어서,
    상기 KD는 표면 플라즈몬 공명(SPR)에 의해 측정되는, 방법.
  8. 제1항에 있어서,
    항체, 항원-결합 단편 또는 약학적 조성물은 피하로 투여되는, 방법.
  9. 제1항에 있어서,
    항체, 항원-결합 단편 또는 약학적 조성물은 1회 이상의 피하 주사로 투여되는, 방법.
  10. 제9항에 있어서,
    항체, 항원-결합 단편 또는 약학적 조성물은 상기 1회 이상의 피하 주사 전에 정맥내 투여 없이 투여되는, 방법.
  11. 제1항에 있어서,
    항체, 항원-결합 단편 또는 약학적 조성물은 단일 투여용량(dose)으로 1회 또는 매주 1회 투여되는, 방법.
  12. 제1항에 있어서,
    항체, 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 170 mg 내지 300 mg인, 방법.
  13. 제1항에 있어서,
    항체, 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 300 mg 내지 500 mg인, 방법.
  14. 제1항에 있어서,
    항체, 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 500 mg 내지 700 mg인, 방법.
  15. 제1항에 있어서,
    항체, 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 700 mg 내지 900 mg인, 방법.
  16. 제1항에 있어서,
    항체, 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 900 mg 내지 1100 mg인, 방법.
  17. 제1항에 있어서,
    항체, 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 1100 mg 내지 1300 mg인, 방법.
  18. 제1항에 있어서,
    항체, 항원-결합 단편의 치료적 유효량은 1300 mg 내지 1500 mg인, 방법.
  19. 제1항에 있어서,
    항체, 항원-결합 단편 또는 약학적 조성물은 적어도 하나의 추가 치료제와 함께 병용으로 투여되는, 방법.
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