SA109300384B1 - مشتقات 5-(4- ميثان سلفونيل-فينيل)- ثيازول لعلاج الأمراض الالتهابية الحادة والمزمنة - Google Patents

مشتقات 5-(4- ميثان سلفونيل-فينيل)- ثيازول لعلاج الأمراض الالتهابية الحادة والمزمنة Download PDF

Info

Publication number
SA109300384B1
SA109300384B1 SA109300384A SA109300384A SA109300384B1 SA 109300384 B1 SA109300384 B1 SA 109300384B1 SA 109300384 A SA109300384 A SA 109300384A SA 109300384 A SA109300384 A SA 109300384A SA 109300384 B1 SA109300384 B1 SA 109300384B1
Authority
SA
Saudi Arabia
Prior art keywords
compound
tnf
unsaturated
alpha
saturated
Prior art date
Application number
SA109300384A
Other languages
English (en)
Inventor
فيكتور روبي رويو
Victor Rubio Royo
انطونيو مارتنيز
Antonio De La Hera Martinez
ميلشور الفا سوتو
Melchor Alvarez De Mon Soto
انا مونوز
Ana Munoz
Original Assignee
فايس فارما اس اي&#x647
Faes Farma Sa
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from US12/139,661 external-priority patent/US7781594B2/en
Priority claimed from EP08380177A external-priority patent/EP2135864A1/en
Application filed by فايس فارما اس اي&#x647, Faes Farma Sa filed Critical فايس فارما اس اي&#x647
Publication of SA109300384B1 publication Critical patent/SA109300384B1/ar

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/425—Thiazoles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/425—Thiazoles
    • A61K31/426—1,3-Thiazoles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/02—Nasal agents, e.g. decongestants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/08—Drugs for disorders of the urinary system of the prostate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/10—Drugs for disorders of the urinary system of the bladder
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/04—Antipruritics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/04—Drugs for skeletal disorders for non-specific disorders of the connective tissue
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/02—Drugs for disorders of the nervous system for peripheral neuropathies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D277/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings
    • C07D277/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings not condensed with other rings
    • C07D277/20—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D277/22—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D277/24—Radicals substituted by oxygen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D277/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings
    • C07D277/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings not condensed with other rings
    • C07D277/20—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D277/32—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D277/34—Oxygen atoms

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Otolaryngology (AREA)

Abstract

يتعلق الاختراع الحالي باستخدام مركب له الصيغة (I):أو ملح، و/أو عقار أولي و/أو ذوابة منه مقبولة صيدلانياً، في تحضير دواء لعلاج مرض التهابي حاد أو مزمن، بتثبيط إنتاج cytokine واحد على الأقل مساعد على حدوث الالتهابات يتم انتقاؤه من TNF-alpha و IFN-gamma ، أو بالتعديل المناعي للـ chemokine IL-8 و/أو cytokine IL-10 المنظم، كما يتعلق بمركبات جديدة لها الصيغة (I'):أو ملح، و/أو عقار أولي و/أو ذوابة منها مقبولة صيدلانياً، وكذلك بتركيبة صيدلانية تشتمل على المركب المذكور.

Description

— ا — مشتقات 0 -(؛- ميثان سلفونيل-فينيل )- ثيازول لعلاج الأمراض الالتهابية الحادة والمزمنة ‎5-(4-Methanesulfonyl-phenyl)-Thiazole Derivatives for the Treatment of Acute and‏ ‎Chronic Inflammatory Diseases‏ الوصف الكامل خلفية الاختراع يتعلق الاختراع الحالي باستخدام مركبات مشتقة من ‎5-(4-methanesulfonyl-phenyl)-thiazole‏ ‏في تحضير منتج دوائي لعلاج الأمراض أو الحالات الالتهابية الحادة والمزمنة؛ مثل ‎lel‏ ‏المفاصيل الروماتويدي ‎rheumatoid arthritis‏ . © يعرف علم المناعة بأنها الدراسة العلمية التي تميز بين الأمراض ذاتية وغير ذاتية ‎Land)‏ ‏ويرجع عدم القدرة على مقاومة الأمراض الذاتية إلى أمراض المناعة الذاتية ‎auto-immune‏ ‎z‏ 2 65 . علاوة_ ‎Je‏ ذلك؛ ‎edn‏ _الحالات الأخرى مثل الزرع؛ التصلب العصيدي ‎atherosclerosis‏ ¢ مسببات مرضية التهابية حادة سامة وغير سامة ‎septic and nonseptic acute‏ ‎and chronic inflammatory pathologies‏ وعدة أمراض أخرى؛ والتي لا تعتبر حتى الآن آليات ‎٠‏ > مناعية ذاتية + أو ممرضة تتوسط الخلايا ‎.immune cell-mediated pathogenic mechanisms‏ يعتقد معظم الباحثين أن تنشيط استجابات المرسل العصبي للالتهابات المناعية يقوم على إشارتين: - إشارة ‎١‏ تنطوي على حث مستقبل مولد الضد النسيلي (معقد مستقبل الخلية 1 الخاص ب ‎VO‏ النسيجي الرئيسي ‎Major Histocompatibility Complex (MHC)‏ في الخلايا 3 ترتبط مولدات
دس
الضد خارجية الخلايا الذوابة أو المرتبطة بالأغشية ارتباطاً تشابكيا بمعقد المستقبل النسيلي لل
جلوبيولين المناعي ‎(Ig/CD79) ©0079 Immunoglobulin‏ لإرسال الإشارة ‎١‏ إلى سلاسلة
الخلايا اللمفاوية المفرزة للجسم المضاد ‎antibody-secreting lymphocyte lineage‏ .
- إشارة ثانية؛ بالإضافة إلى إشارة مرسّلة عبر مولد الضد ‎o)‏ يتعين وجودها لتفادي الاحتمال
© نتيجة عدم التجاوب المناعي أو حذف النسائل ‎Jus . clonal deletion‏ الإشارة ؟ بمنبهات
مشتركة ‎CD86 Jie‏ معبر عنه على سطح خلايا متقدمة مكوّنة لمولد الضد ‎Jie (APC)‏ خلايا
أحادية بشرية ونتاج خلايا تمايزها.
في الاستجابات الطبيعية للاتهابات المناعية؛ يتم تعزيز إشارات الخطر بمولدات ضد أو خلايا
حاثة على الانقسام ميكروبية وذاتية التعديل تعمل على حث المستقبلات على التعرف على ‎٠‏ الأنماط ‎(PRR)‏ كما ترسل مسارات إشارات ‎TLRs Jie PRR‏ (مستقبل البولي سكاريد الدهني mal (Gram-negative ‏سالب الجرام‎ LPS ‏أو‎ wall bacteria lipo-polysaccharide ‏الجداري‎
مستويات مرتفعة من الجزيئات السطحية التي تقوم بالتنبيه المشترك (أي؛ 0080 أو 0086).
وبالتالي؛ تقوم المركبات الترابطية التي تقوم بالتنبيه المشترك ‎CD80‏ - 0086 بربط ‎CD28‏
‎Un‏ تشابكياً بسطح ‎WDA‏ 7 المساعدة. تؤدي الإشارتان ‎١‏ (أي؛ الارتباط التشابكي للجسم ‎٠5‏ المضاد ل ‎(CD3‏ و7 (أي؛ الارتباط التشابكي ل ‎CD28‏ بواسطة أجسام مضادة نوعية) تجريبياً
‏إلى محاكاة الحالات الطبيعية للاستجابة المناعية الفعالة لمرسل عصبي متلهب. وتجدر الإشارة
‏إلى أن العقاقير الكابتة للمناعة المرخص باستعمالها تنطوي على بعض مشكلات تثبيط تنشيط
‏شلالات ‎cytokine‏ المساعدة على حدوث الالتهابات نظراً لمستويات التنبيه المشترك المرتفعة.
‏وتحدث الأخيرة في أمراض المناعة الذاتية ‎auto-immune diseases‏ وعدة حالات التهابية ‎sala‏ ‎Yo‏ ومزمنة.
يو
ولا تعد ‎APCs‏ ضرورية لجهاز المناعة فحسب؛ وذلك لتحديد فئة الاستجابة المناعية نظراً لأنها تؤوثر تأثيراً ‎nS‏ | على مدى وجود المرميل العصبي (أي خلية ‎T‏ المساعدة؛ ‎(Th‏ تسمم الخلاياء ‎(Th‏ إنتاج الجسم المضاد؛ استجابات الخلية ‎(B)‏ أو استجابة متحملة (نظراً لعدم التجاوب المناعي أو موت الخلايا ‎apoptosis‏ ) نتيجة النسيلة المصابة ‎challenged clon‏ . كما يمكن ل ‎APCs‏ أن © ترسل بنفسها استجابات مناعية ‎immune responses‏ فورية خاصة بالمرميل العصبي؛ ويتمثل ذلك جلياً في إنتاج وإطلاق كميات كبيرة من ألفا لعامل نخو الورم ‎TNF-alpha)‏ ) بواسطة الخلايا الأحادية في مرضي السرطان. في هؤلاء مرضى» يؤدي ‎TNF-alpha‏ إلى تعزيز الاستجابة المتزايدة وتنشيط البطانة الوعائية؛ مصحوباً بإفراز ‎cytokine s Interleukin 8 (IL-8)‏ أخرى مساعدة على حدوث الالتهابات وكذلك الأنشطة المساعدة على التجلط. وبصفة عامة؛ ‎O°‏ يؤدي ‎TNFealpha‏ إلى تعزيز التخثر وفقر الدم مع نخر السرطان الذي أدى إلى التعريف الأصلي لعامل نخر الورم أو ‎TNF-alpha‏ . على الرغم من ذلك يعرف ‎ails TNF-alpha‏ ‎cytokine‏ متعدد الانتحاء يوجد في عدة حالات مرضية أخرى. هناك دليل قديم مفاده أنه بناء على الخلايا الأحادية يمكن ل ‎LPS‏ إفراز كميات هائلة من ‎TNF-alpha‏ التي تسهم بقوة في الإصابة بالصدمة التسممية ‎septic shock‏ . وفي الآونة الأخيرة؛ يعد إنتاج وإفراز كميات كبيرة؛ ‎Vo‏ لكنها غير كافية؛ من ‎TNFalpha‏ مستهدفاً ‎Ladle‏ في الأمراض الالتهابية المتعلقة بالمناعة الذاتية؛ مثل ‎lel‏ المَفاصيل الرأوماتويدي ‎«rheumatoid arthritis‏ وأمراض الاعتلال الفقاري 000110105 ومرض كرون ‎disease‏ 000:5 ؛ والتهاب العنبية ‎uveitis‏ والصدفية 5 . هكذاء يعد حالياً استخدام ‎TNF-alpha‏ مضاد إحدى الاستراتيجيات الرئيسية لعلاج تلك الأمراض التي يؤدي فيها خفض المستويات الممكنة ‎TNF-alpha‏ الفعال بيولوجياً إلى تخفيف
‎Ye‏ حالة المريض.
‎٠ ١
ده
في هذا الصددء يتزايد عدد الأمراض التي قد تستفيد من العلاج بمضادات ‎TNF-alpha‏ ¢
وتتضمن هذه الأمراض؛ من بين الأمراض ‎cs AY‏ التصلب العصيدي ‎atherosclerosis‏ «
متلازمة التمثيل الغذائي» التهاب الدماغ ‎«encephalitis‏ الالتهاب الكبدي ‎hepatitis‏ الفيروسي
‎viral hepatitis‏ ¢ التهاب كبيبات الكلى ‎glomerulonephritis‏ »؛ الاستجابة الالتهابية غير الكافية ‎e‏ للأورام والصدمة التسممية ‎septic shock‏ .
‏بالإضافة إلى تلك الناتجة عن بعض الخلايا ‎pad)‏ هناك مصدران رئيسيان لإنتاج ‎TNF-alpha‏
‏» الخلايا الأحادية وخلايا 7 اللمفاوية. أثناء حدوث الاستجابة المناعية المكتسبة؛ يؤدي التعرض
‏لإشارات الخطر ‎APCs‏ بالسيناريوهات الإرشادية المساعدة ‎adjuvant‏ على حدوث الالتهابات
‏إلى إفراز ‎p70‏ 11-12 (ديمر غير متجانسة ‎heterodimer‏ .من ‎p35‏ و40م)؛ حيث يكون الأخير ‎٠‏ جزيئاً تتبيهياً مشتركاً يستقطب السمات المفرزة لل ‎cytokine‏ الخاصة بخلايا ‎Th‏ المنشطة تجاه
‎IFN-) interferon gamma ‏إفراز‎ ld ‏يكون‎ cytokine ‏سمات‎ 11:1 WAN ‏تظهر‎ .Th-1 ‏النوع‎
‎. TNF-alpha ‏حقيقياً. كما تفرز هذه الخلايا كمياتٍ كبيرة من‎ ( GAMMA
‏يحدث ‎IFN-gamma‏ الذي تنتجه ‎sac Th‏ تأثيرات متعلقة بالتعرف على الأمراض الالتهابية.
‏فمن جانب؛ إنه ينشط الخلايا الأحادية ويزيد مستوى إفراز ‎TNF-alpha‏ بواسطة منبه معين؛ ‎VO‏ يعززء؛ من جانب آخرء مسار إشارة أقوى باتجاه مستقبلات ‎TNF- alpha‏ . وبصفة عامة؛ فإن
‎IFN-gamma‏ ؛ بالإضافة إلى تأثيراته المباشرة ‎Jie‏ النشاط المضاد للفيروسات؛ يزيد من التعبير
‏في 1110-11 ويسهم في الالتهاب والآفات؛ وذلك بزيادة تأثيرات ‎TNF- alpha‏ الفعالة.
‏يصبح الشلال المساعد على حدوث الالتهابات؛ وذلك بإنتاج ‎TNF- alpha‏ في الخلايا الأحادية أو
‎TNF-alpha IFN-gamma‏ في الخلايا 701 كبيراً من خلال مسارات ‎cytokine‏ المساعدة
‏ل
‎adjuvant‏ على حدوث الالتهابات_ ‎Jie‏ 8-]1. 11-8 رغم أن اسمها الأصلي تم وصفه ب ‎chemokine‏ تنتجه ‎WAN‏ الملتهمة ‎macrophages‏ وأنواع الخلايا الأخرى مثل الخلايا الظهارية؛ ‏ كما تخلقه الخلايا البطانية ‎endothelial cells‏ 13 يطلق ‎ade‏ أيضاً المصطلح ‎.CXCLS‏ على الرغم من أن الخلايا المحببة المتعادلة البيضاء ‎neutrophil granulocytes‏ هي © خلايا مستهدفة رئيسية ل 1-8 إلا هناك عدداً كبيراً من الخلايا (الخلايا البطانية ‎endothelial‏ ‎WAN cells‏ الملتهمة ‎٠» macrophages‏ الخلايا البدينة ‎mast cells‏ « الخلايا الكيراتينية ‎Keratinocytes‏ ) يستجيب لهذا ‎chemokine‏ أيضاً . تتمثل الوظيفة الأساسية ل 11-8 في حث التجاذب الكيميائي في خلاياها المستهدفة (على سبيل ‎JB‏ الخلايا المحببة المتعادلة البيضاء ‎(neutrophil granulocytes‏ في سلسلة_الخلايا المتعادلة البيضاء الخاصة بالاستجابات ‎٠‏ الفسيولوجية للخلايا اللازمة لانثقالها وعمل المستهدف الخاص بهاء يتم أيضاً الحث على الالتهام؛ مثل الزيادة داخل الخلايا ‎+Ca2‏ الطرد الخلوي ‎Je)‏ سبيل ‎(Jud!‏ إطلاق ‎histamine‏ )؛ الانفجار التنفسي ‎respiratory burst‏ . يمكن إفراز ‎IL-8‏ بأي خلايا مع ‎TLRs‏ الموجودة في الاستجابة المناعية الطبيعية. تتمثل الوظيفة الأساسية ل 11-8 في تزويد مولد ضد البلعمة بالخلايا المتعادلة البيضاء الذي يحث ‎TLRs‏ الخاصة بأنماط مولد الضد. بتحويل خلايا ‎IL-8‏ ‎٠‏ المستهدفة إلى أنسجة بطائية ‎endothelium‏ ومستهدفات ‎al‏ 5« يشترك 11-8 بالتالي في التضخيم والقيام بالعديد من أدوار مسببات ‎TNF-alpha‏ المرضية؛ بالإضافة إلى دورها في مقاومة الجسم. لا تؤدي ‎chemokine‏ ومستقبلاتها إلى تنظيم انتقال الخلايا البيضاء وتمركزها؛ لكن ذلك تؤديه عدة جزيئات متلصقة. من بينهاء؛ يُعرف 5616000 .01621 كمستهدف علاجي يحول دون انتقال الخلايا البيضاء إلى العقد اللمفاوية ‎lymph nodes‏ وهكذا يتم تقييمه كعامل مؤثر لتصنيف
د
التأثيرات المعملية للعقاقير غير الاسترويدية المضادة للالتهاب ‎non-steroid anti-inflammatory‏
.drugs (NSAIDs)
تؤثر العديد من الجزيئات الكابتة وجزيئات ‎TNF-alpha‏ المضادة على آليات الدفاع المناعي
الطبيعية لأنها تعزز من التأثيرات السامة على الخلايا المناعية أو تثبط آليات التكاثر التي تكمن © وراء ‎Jad sad‏ الذي يسبق الاستجابة المناعية الناجحة للمرسل العصبي ‎immune‏
1160565
في ضوء أهمية ‎TNF-alpha‏ المفرز في حيز خارج الخلايا (إما غشاء مدرج في السيتوبلازم أو
صور ذوابة ‎«(secreted soluble forms 5 jie‏ أجريت عدة محاولات لتصميم عوامل علاجية
تعيق التبادل بين ‎TNF-alpha‏ خارج الخلايا وبين مستقبل 1-7 و/أو مستقبل 1 ‎TNF‏ تمثلت ‎٠‏ معظم الأساليب ذات الصلة في استخدام مستقبل ‎TNF‏ خادع ذواب يحتجز ‎TNF-alpha‏ ونظراً
لطول فترة ذوابانه فإنه يحول دون تفاعل المركبات الترابطية المساعدة على حدوث الالتهابات
مع مستقبلات الخلايا.
تمثلت الاستراتيجية الثانية في إنتاج أجسام ‎TNF-alpha‏ بشرية مضادة متوافقة مع البشر تقليدية
أو مصنوعة كجزيئات ذات سلاسل مفردة ثنائية التخصص النوعي ومستهدفة كغيرها من ‎٠5‏ الجزيئات ذات الصلة بمرض معين (أي؛ ‎TNF-alpha/siae VEGE‏ مضاد في ‎lel‏ المفاصيل
الروماتويديّ ‎(rheumatoid arthritis‏ على الرغم من أن الجزيئات التي ورد وصفها أعلاه هي
مضادات ‎TNF-ALPHA‏ ؛ إلا أن نطاق عملها يقتصر على حصر ‎TNF-alpha‏ المفرزة خارج
الخلايا.
٠ ١١١
م
هناك قائمة شاملة إلى حد ما بالمستهدفات التي تندفع نحو إنتاج ‎TNF-alpha‏ وإفرازه؛ تضم: أ)
جزيئات تدفع تعبير انتساخ ‎TNF-alpha‏ ؛ ب) جزيئات تدفع نقل ‎TNF-alpha‏ حهالعا من النواة
إلى السيتوبلازم وضفائر ‎RNA‏ ؛ ج) جزيئات توجه ترجمة ‎TNF-alpha‏ ؛ د) جزيئات تتظم
تثبيت ‎mRNA- TNF-alpha‏ ؛ ف) جزيئات توجه حويصلات ‎Golgi‏ إلى الغشاء؛ حيث يتم © ثثبيت صورة سطح ‎TNF-alpha‏ المساعدة ؛ و) جزيئات ‎Jie‏ إنزيم يحول ‎(TACE) TNF-alpha‏
المتضمن في إفراز ‎TNF-alpha‏ ) جزيئات تنظم دمج صورة سطح ‎TNF‏ ألفا المساعد وإشاراته.
تشير كافة هذه المستهدفات إلى إنتاج مستهدفات ‎TNF-alpha‏ الخلوية وإفرازها.
على الرغم من اختلاف أساليب تصميم العوامل العلاجية التي تحول دون إنتاج ‎TNF-alpha‏ « إلا
أنه يحبذ بدرجة كبيرة إيجاد عقاقير جديدة لا تعيق إنتاج ‎TNF-alpha‏ فقط بصورة منتقاة؛ بل ‎Ye‏ وإنتاج ‎cytokine‏ الأخرى المساعدة على حدوث الالتهابات؛ ‎IFN-gamma Jia‏ .
الوصف العام للاختراع
وجد مقدموا الاختراع الحالي أن مركبات الصيغة ‎(I)‏ تتسم؛ على نحو مثير للدهشة؛ بعدة
تأثيرات ممتازة معدلة للمناعة يمكن أن تفيد في التحكم في الآليات المسببة للأمراض الالتهابية
الحادة والمزمنة؛ لذاء يمكن تطبيقها إكلينيكياً. على نحو خاص؛ يمكن للمركبات المستخدمة في ‎Ve‏ الاختراع تثبيط إنتاج ‎daddy; TNF-alpha‏ خلايا الدم الطرفي أحادية النواة ‎(PBMC)‏ في
المرضى الذين يعانون من مرض التهابي مزمن؛ مثل ‎ll‏ المفاصيل الرروماتويديّ ‎rheumatoid‏
‎arthritis‏ ¢ وكذلك تثبيط إفراز ‎IFN-gamma‏ بواسطة تلك ‎WAY‏ بعد تنبيه الخلايا 1. على نحو
‏تقليدي؛ تُستخدم مركبات الصيغة )1( لتعديل سمات الاستجابة البيولوجية لإفراز ‎cytokines‏ (أي
‎cytokines 5 (IL-8‏ التنظيمية (أي 11-10)؛ وتقوم بذلك بعدة طرق مختلفة حال الصحة والمرض.
‏فضي
لق لا ترتبط تأثيرات مركبات الصيغة ([) المعدّلة للمناعة بأي تأثيرات سامة على الخلايا أحادية النواة من الدم الطرفي. علاوة على ذلك؛ لا تؤودي هذه المركبات إلى تعديل النشاط أو تعديل الاستجابة التكاثرية ‎proliferative response‏ أو زيادته بعد المنبه المحدث للانقسام الفتيلي ‎.mitogenic stimuli‏ © يؤدي دمج التأيرات المثبطة؛ في جزيئ صغير واحد فقطء على عدة ‎cytokines‏ مساعدة على حدوث الالتهابات ‎IFN-gamma s TNF-alpha ie‏ ¢ وإمكانية تعديل ‎IL-8 chemokine‏ و/أو ‎cytokine‏ 11-10 المنظمين» رغم أن ‎lemma‏ ذات أهمية كبيرة في الفسيولوجيا المرضية لاضطرابات المناعة الذاتية الخاصة بالأجهزة والأعضاء؛ الزرع؛ الأمراض الالتهابية الحادة ‎dia al‏ بعض أمراض التمثيل الغذائي والضمور والتصلب العصيدي ‎atherosclerosis‏ « إلى ‎٠‏ تصنيف مركبات الصيغة )1( في فئة جديدة من فئات معدلات المناعة الخاصة باستهداف شلال ‎cytokines s cytokines‏ المساعدة/المثبطة لحدوث الالتهابات عند عدة مستويات يمكنها ‎sale)‏ ‏برمجة الاستخدامات الإكلينيكية و العلاجية ‎clinical and therapeutic‏ . تجدر الإشارة إلى أن الخلايا المناعية ليس لها سيقان؛ وتدخل الأعضاء لتجوب أنسجة الجسم التي تخترق الحالات الملتهبة حيث تتركز في الآفات الموزعة ‎ly‏ لنشاط المرض»؛ والأعضاء ‎٠‏ المستهدفة ونشر الإصابة. بما أنه من المتوقع أن تؤدي المركبات المستخدمة في الاختراع إلى تعديل بعض جوانب العملية الفسيولوجية المرضية؛ فإنه يمكن استخدام دراسات التصوير لوصف ‎Be‏ مستقبلات؛ كفاءة ‎SLY) dal‏ التي تشغلها المستقبلات وتركيز مسبار الدواء ‎.medicament probe concentration‏ في ضوء الخواص الموجهة لكريات الدم البيضاء ‎Given‏ ‎the homing properties of leukocytes‏ ؛ فإن الكشف عن المستهدف العلاجي يوفر معلومات ‎٠‏ حول موقع الخلايا المستهدفة ومواقع الآفات ‎lesion sites‏ . ‎٠ ١/1‏
ا لذاء يمكن استخدام مركبات الصيغة (1) كمرقمات تصوير بيولوجية لتطوير العقأقير؛ والتجارب الإكلينيكية والأدوية التي تستخدم على حدة يسمح بتوفير معلومات ليس فقط حول الحركيات الدوائية؛ والتوزيع وإعطاء الجرعات؛ بل بيانات ذات صلة حول أنماط الاستجابة الذاتية في التجارب الإكلينيكة وقبل الإكلينيكة. وتؤدي الأولى إلى تعريف مرقمات بيولوجية بديلة متميزة © متحقق منها وفعالة للنقاط الإكلينية لإعطاء مريض بحاجة إلى ‎Jie‏ هذا التقييم التوقعي والمتميز لكمية فعالة من مركب له الصيغة )1( أو تركيبة صيدلانية منه محسنة لإجراء تقنية تصوير بيولوجية متميزة من قبل ذوي المهارة في المجال. ض وفقاً لجانب أول؛ يتعلق الاختراع الحالي باستخدام مركب له الصيغة (1): ‎RON‏ ‏سل ‏اس اس ا ا سس 07 ‎No‏ 7 :1 ‎Ve‏ حيث:
يتم انتقاء ‎R;‏ من ‎alkyl 0. hydrogen‏ غير مشبعة؛ ‎cycloalkyl‏ مشبعة أو غير مشبعة.
‎aryl‏ مشبعة أو غير مشبعة وسيكليل غير متجانسة ‎heterocyclyl‏ مشبعة أو غير مشبعة ؛ يتم انتقاء ‎Rp‏ من م©.,0 ‎alkyl‏ غير مشبعة؛ ‎cycloalkyl‏ مشبعة أو غير مشبعة؛ 5 ‎(RR'N‏ ‎Cus‏ تكون ‎R'‏ و10 على حدة عبارة عن ‎hydrogen‏ أو م©.,0 ‎alkyl‏ غير مشبعة ؛ وتكون ‎Ry‏ ‎ie VO‏ عن شق ‎C1Cs‏ الله غير مشبعة؛ أو ملح؛ و/أو عقار أولي و/أو ذوابة منه مقبولة صيدلانياً؛ في تحضير دواء لعلاج مرض التهابي حاد أو مزمن. في نموذج خاص؛ يعمل الدواء
١
المذكور لعلاج مرض التهابي حاد أو مزمن بتثبيط إنتاج ‎cytokine‏ واحد على الأقل مساعد على حدوث الالتهابات يتم انتقاؤه من ‎١ IFN-GAMMA 5 TNF-alpha‏ أو بالتعديل المناعي لل
‎IL-8 chemokine‏ و/أو لل ‎IL-10 cytokine‏ المنظم. في نموذج خاص ‎Al‏ للاختراع؛ يتم تشبيط إنتاج ‎TNF-alpha cytokine‏ المساعد على حدوث
‏© الالتهابات جزئياً على مستوى تعبير ‎TNF-alpha mRNA‏ على الأقل. في جانب خاص بالاختراع؛ يتم انتقاء المرض الالتهابي الحاد والمزمن من ‎Jali) lel‏ القليلة الحاد والمزمن ‎acute and chronic seropositive‏ إيجابي أو سلبي المصل ‎seronegative‏ ‎olygoarthritis‏ والتّهاب المفاصيل المتعددة ‎«polyarthritis‏ أمراض الاعتلال الفقاري ‎spondiloarthropathies‏ » التهاب كبيبات الكلى ‎glomerulonephritis‏ + اعتلالات الكو ‎(lay‏ ‎Ye‏ التهاب الكلية الأنبوبي ‎tubulo-interstitial nephritis DUA‏ ؛ متلازمة التمثيل الغذائي؛ التصلب العصيدي ‎ill ¢ atherosclerosis‏ مفاصيل العظم ‎osteoarthritis‏ ؛ الربو ‎asthma‏ © مرض الانسداد الرثوي المزمن ‎chronic obstructive pulmonary disease‏ ¢ المرض الرئوي الخلالي ‎«interstitial lung disease‏ التصلب المتعدد ‎multiple sclerosis‏ + أمراض نزع النخاعين ‎demyelinating diseases‏ ¢ مرض الالتهاب السحائي ‎meningitis‏ ؛ التهاب الدماغ ‎encephalitis‏ ‎Yo‏ « التهاب ‎Lal‏ والأماغ ‎lg «meningoencephalitis‏ الجذور والأعصاب الطرفية ‎«inflammatory radiculopathies and peripheral neuropathies‏ مرض التهاب المثانة ‎inflammatory bowel disease inflammatory cystitis‏ ¢ التليف الكبدي ‎cirrhosis‏ ¢ الالتهاب الكبدي ‎hepatitis‏ ¢ فشل القلب ‎heart failure‏ ¢ مرض فقر الدم ‎ischemic disease‏ + الفشل الكلوي ‎renal failure‏ « التهاب المثانة ‎inflammatory cystitis‏ ¢ فرط أنسجة البروستاتة الحميد ‎benign prostatic hyperplasia ٠‏ ¢ التهاب البروستاتة ‎«prostatitis‏ التهاب عضلة القلب ‎myocarditis‏ ¢ التهاب التأمور 05 ‎Qld‏ العنبية ‎uveitis‏ © التهاب الجلد vy psoriasis ‏الصدفية‎ ¢ urticaria ‏الشرى‎ « eccema « atopic dermatitis bl dermatomyositis ‏الصدمة‎ ¢ sepsis pall ‏تسمم‎ ¢ allergic rhinitis ‏التهاب الأنف الأرجي‎ «rosacea ‏العد الوردي‎ ‏أمراض المناعة الذاتية‎ ¢ multiorganic failure ‏؛ الفشل متعدد الأعضاء‎ septic shock ‏التسممية‎ ‎systemic lupus ‏الحمَامِيَّة المجموعيَّة‎ A Jie systemic autoimmune diseases ‏الجهازية‎ ‏الداء‎ «dermatomyositis ‏؛ التهاب الجلد والعضل‎ vasculitis ‏ء الالتهاب الوعائي‎ erythematosus © auto-immune diseases ‏أمراض المناعة الذاتية‎ ¢ sarcoidosis ‏أو‎ amyloidosis ‏النشواني‎ ‏التهاب الغدد الدرقية‎ «myasthenia gravis ‏الوهن العضلي الوبيل‎ Jie ‏الخاصة بالأعضاء‎ ¢ organ transplantation ‏غرس الأعضاء‎ > insulinitis ‏أو التهاب الإنسولين‎ thyroiditis ‏التتكس‎ » infectious ant tumor induced inflammation ‏الالتهاب المستحث بالأورام والعدوى‎ ‏موت‎ ¢ necrosis ‏؛ النخر‎ TNF-alpha dependent cellular degeneration ‏الخلوي المعتمد على‎ ٠ ‏الهزال‎ « graft versus host disease ‏؛ مرض رفض الجسم للعضو المتنغرس‎ apoptosis LIA ‏ونمو خلايا النظير صماوي المسببة للمرض‎ autocrine ‏الذاتي‎ Jnl ‏م«عداءه» وعامل‎ ‏تنتج هذه الأسباب العلاجية عن استجابة مناعية شاذة على‎ paracrine pathological cell growth ‏الأقل؛ عدم التنظيم المناعي؛ الاضطراب المناعي؛ تولد الأمراض المناعية؛ العلاج المناعي؛‎ ‏الكبت المناعي أو تعديل الاستجابة المناعية البيولوجية.‎ Ve :)1( ‏يتعلق الاختراع الحالي بمركب له الصيغة‎ AT ‏في جانب‎
CL
CoN, pa we ‏بس‎ 7 il
‎١ Y —‏ _ حيث: يتم انتقاء ‎Rj‏ من ‎chydrogen‏ م©.:© ‎alkyl‏ غير مشبعة؛ ‎cycloalkyl‏ مشبعة أو غير مشبعة؛ ‎aryl‏ مشبعة أو غير مشبعة وسيكليل غير متجانسة ‎heterocyclyl‏ مشبعة أو غير مشبعة ؛ و تكون ‎Ry‏ عبارة عن شق ‎alkyl CC‏ غير مشبع؛ ‎e‏ أو ‎ole‏ و/أو عقار أولي و/أو ذوابة منه مقبولة صيدلانياً ‎٠‏
‏في جانب ثالث؛ يتعلق الاختراع بتركيبة صيدلانية تشتمل على مركب له الصيغة )1( وفقاً لما هو مبين أعلاه؛ أو ملح؛ و/أو ‎Jie‏ أولي و/أو ذوابة منه مقبولة ‎(LV ann‏ ومادة حاملة ‎carrier‏ ‏و/أو ناقلة و/أو مساعدة ‎adjuvant‏ واحدة على الأقل مقبولة صيدلانياً. يتعلق جانب آخر من جوانب الاختراع ‎Jal‏ بمركب له الصيغة ‎(I)‏ وفقاً لما هو مبين أعلاه؛
‎٠‏ الاستخدامه أولاً كدواء. أخيراً؛ يتعلق جانب آخر من جوانب الاختراع باستخدام مركب له الصيغة ‎oT)‏ على نحو خاص بمركب له الصيغة ‎oI)‏ وفقاً لما هو مبين أعلاه كمركب تصوير بيولوجي في تقنيات التصوير والتصوير العلاجي. يمكن استخدام هذه المرقمات البيولوجية للعثور على الآفات المناعية؛ الخلايا المستهدفة وجزيئات المستهدفات.
‎VO‏ شرح مختصر للرسومات الشكل ‎:١‏ ميزات فلورية مختلفة للجسيمات الدقيقة المنتقاة لعمل ‎Cytometric Bead Array‏ بفق).
‎٠ ١١١
وو الشكل ؟: تأثير على إنتاج ‎TNF-alpha‏ في ‎PBMC‏ المنبهة ب ‎LPS‏ من متطوعين أصحاء ‎(V+ =n)‏ بالمركب ‎VY‏ تمثل الأعمدة متوسط الخطأً والخطأً القياسي للمستنبتات المزدوجة التي تم عملها في كل عينة في مختلف حالات التجربة. تمثل العلامات النجمية اختلافات دلالية إحصائياً (م أقل من 100+( لبيانات كل مادة ناقلة لكل حالة من حالات التجربة. © الشكل ©: تأثير على إنتاج ‎TNF-alpha‏ في ‎—LPS‏ أر ‎stimulated PBMC—TCR/CD3+CD28‏
من متطوعين أصحاء ‎)١9-«(‏ بالمركب ‎NY‏ تمثل الأعمدة متوسط الخطأً والخطأً القياسي للمستنبتات المزدوجة التي تم عملها في العينات في مختلف حالات التجربة. تمثل العلامات النتجمية اختلافات دلالية إحصائياً (م أقل من 000( لبيانات كل مادة ناقلة لكافة حالات التجربة المختلفة.
‎Ve‏ الشكل ؛: تأثير على إنتاج ‎TNF-alpha‏ في ‎PBMC‏ من مرضى مصابين بالتهاب المفاصيل الروماتويدي ‎(Y=n) rheumatoid arthritis‏ بالمركب ‎.١١‏ تمثل الأعمدة متوسط الخطأً والخطأ القياسي للمستنبتات المزدوجة التي تم عملها في كل عينة في مختلف حالات التجربة. تمثل العلامات النجمية اختلافات دلالية إحصائياً (م أقل من 200+( لبيانات كل مادة ناقلة لكافة حالات التجربة المختلفة.
‎Ve‏ الشكل ‎io‏ نقاء ‎DA‏ أحادية تم فرزها ب 801084805 معزولة عن ‎PBMC‏ من متطوعين أصحاء ‎Ga,‏ لحساب ‎(FACSCalibur Analyzer‏ تبين اللوحة اليسرى مخططاً نقطياً ل ‎FSC‏ ‏(حجم الخلايا) ‎x‏ توزيع (التحبيب) ‎SSC‏ وتشير إلى النسبة المئوية (7298.5) لإجمالي الخلايا الحية التي بداخل البوابة المسحوبة حول مجموعة الخلايا الأحادية. تبين اللوحة اليمنى نمط تعبير ‎Ads‏ 7 اللمفاوية ومرقم الخلية الأحادية؛ الذين يبين أن 7499.7 من الخلايا في ببوابة الخلية
Che ‏ظاهري للخلايا الأحادية البشرية العادية. تم‎ CD14+CD3 ‏الأحادية في اللوحة اليسرى لها نمط‎ ‏إعداد مستويات أساسية (أرباع) باستخدام مجموعات مقارنة التحديد المطابقة للنمط الصنوي ؛‎ ‏توجد معظم الخلايا )799.4( ما لم يكن جميعهاء في "ربع الخلية الأحادية" في الجانب الأيسر‎ ‏لمتطوع‎ PBMC ‏العلوي. تمثل البيانات المعروضة النتيجة المتوسطة لتنقية الخلية الأحادية من‎ ‏_ممثل للتسع تجارب التي تم إجراء كل منها على حدة.‎ ©
الشكل +: تأثير بمركب ‎VY‏ على حركيات تعبير ‎TNF-alpha mRNA‏ في الخلايا الأحادية المنبهة ب ‎LPS‏ المنقاة من متطوعين أصحاء ‎(PBMC‏ يمثل المنحنى تغير حركيات في تعبير ‎TNF-ALPHA mRNA‏ في الفترات الزمنية المشار إليها بعد التلقيح ‎soley‏ ناقلة ذوابة فقط (+؛ معينات) أو المنبهة ب ‎LPS‏ في وجود ‎a)‏ مثلثات) أو غياب («؛ مربعات) ‎٠١‏ مولار من ‎٠‏ المركب ‎OY‏ مقارنة بمستويات عينة مقارنة جينات إدارة ‎mRNA‏ بيتا-أكتين داخلي وفقاً لحساب منتجات الجينات عند كل نقطة زمنية في ‎HT Fast Real Time Q-PCR System‏ 7900. يشار إلى ‎Lola)‏ الزمنية للحركيات )+ ‎del‏ 7.5 ساعة؛ © ساعات؛ ‎A‏ ساعات ‎YE‏ ساعة) في ‎Say)‏ ‏السيني. تم عرض ‎da‏ طي نسبة ‎mRNA beta-actin/ TNF-alpha aad‏ في الإحداثي الصادي. تمثل البيانات المعروضة متوسط ناتج دراسات حركيات تعبير ‎TNF-alpha mRNA‏
‎VO‏ من متطوع ممثل للتسع تجارب التي تم إجراء كل منها على حدة. الشكل 7: تأثير بمركب ‎VY‏ على حركيات بروتين ‎TNF-alpha‏ الذي أفرزته الخلايا الأحادية المنبهة ب ‎LPS‏ المنقاة من متطوعين أصحاء ‎PBMC‏ يمثل المنحنى تغير حركيات في بروتين ‎TNF-alpha‏ مفرزة في الفترات الزمنية المشار ‎Led)‏ بعد التلقيح بمادة ‎ABU‏ ذوابة فقط )# معينات) أو المنبهة ب ‎LPS‏ في وجود ‎ca)‏ مثلثات) أو غياب ‎cm)‏ مربعات) ‎Ve‏ مولار مركب ‎.١ Ye‏ يشار إلى النقاط الزمنية للحركيات )+ ساعة؛ ‎del Yoo‏ 0 ساعات؛ ‎A‏ ساعات ‎Vig‏
‎ل١‎
‎(dels‏ في الإحداتي السيني. تم عرض كميات بروتين ‎TNF-alpha‏ المقاس ‎sng‏ كمية ‎CBA cytokine‏ في ‎FACSarray Bioanalyzer‏ في الإحداثي الصادي لكل نقطة زمنية. تمثل البيانات المعروضة متوسط ناتج دراسات حركيات بروتين ‎TNF-alpha‏ من متطو 2 ممثل للتسع تجارب التي ثم إجراء كل منها على حدة. © الشكل 8: تأثير على ‎IFN-GAMMA‏ إنتاج في ‎PBMC‏ من متطوعين أصحاء ‎(OF =n)‏ بالمركب ‎NY‏ تمثل الأعمدة متوسط الخطأً والخطأ القياسي للمستنبتات المزدوجة التي تم عملها في كل عينة في مختلف حالات التجربة. تمثل العلامة النجمية الاختلافات الدلالية إحصائياً (م أقل من ‎)٠.٠©‏ لبيانات كل مادة ناقلة لكل حالة تجريبية مشار إليها. الشكل 4: تأثير على ‎IFN-gamma‏ إنتاج في ‎PBMC‏ من مرضى مصابين ‎lly‏ المفاصيل ‎٠‏ الرأوماتويدي ‎(A=n) rheumatoid arthritis‏ بالمركب ‎VY‏ تمثل الأعمدة متوسط ‎Wadd‏ والخطأ القياسي للمستنبتات المزدوجة التي تم عملها في كل عينة في مختلف حالات التجربة. تمثل العلامات النجمية اختلافات دلالية إحصائياً (م أقل من 0 +++( لبيانات كل مادة ناقلة لكافة حالات التجربة المختلفة. الشكل ‎:٠١‏ تأثير على إنتاج ‎IL-8‏ في ‎PBMC‏ من متطوعين أصحاء (ه-“١)‏ بالمركب ‎NY‏ ‎V0‏ تثل الأعمدة متوسط الخطأً والخطأ القياسي للمستنبتات المزدوجة التي تم عملها في كل عينة ‎under‏ مختلف حالات التجربة. تمثل العلامات النجمية اختلافات دلالية إحصائياً ‎Jp)‏ من 5...) لبيانات كل مادة ناقلة لكل ‎Alla‏ من حالات التجربة. الشكل ‎ih :١١‏ على إنتاج 11-8 في ‎PBMC‏ من مرضى مصابين ‎lly‏ المفاصيل ‎(A=n) rheumatoid arthritis (sa sila sl‏ بالمركب ‎VY‏ تمثل الأعمدة متوسط الخطأ والخطأ
ا - القياسي للمستنبتات المزدوجة في كل عينة في مختلف حالات التجربة. تمثل العلامات النجمية اختلافات دلالية إحصائياً (م أقل من 000+( لبيانات كل مادة ناقلة لكل حالة من حالات التجربة. الشكل ‎Lily‏ على إنتاج 11-10 في ‎PBMC‏ من متطوعين أصحاء ‎)١“<«(‏ بالمركب ‎AY‏ ‏تمثل الأعمدة متوسط الخطأ والخطأً القياسي للمستنبتات المزدوجة التي تم عملها في كل عينة في © مختلف حالات التجربة. لم يتم العثور على أي اختلافات دلالية. الشكل ‎ny‏ تأثير على إنتاج 11-10 في ‎PBMC‏ من مرضى_مصابين بالتهاب المفاميل الروماتويدي ‎(A=n) rheumatoid arthritis‏ بالمركب ‎.١‏ تمثل الأعمدة متوسط الخطاً والخطأ القياسي للمستنبتات المزدوجة التي تم عملها في كل عينة في مختلف حالات التجربة. تمثل العلامة النجمية الاختلافات الدلالية ‎Lilian)‏ (م أقل من 000+( لبيانات كل ‎ABUL‏ ‎٠‏ الشكل ‎oe‏ تأثير المركب ‎١١‏ () والمادة ‎vehicle AL‏ (ب) على ‎LAS Aa‏ ‎PBMC proliferative response‏ من متطوعين أصحاء ‎(A=n)‏ في وجود وفي غياب التنبيه ب ‎PHA PHA‏ مع 2( أو توليفة من الأجسام أحادية النسيلة المضادة ل ‎(T3) CD3~‏ و0028. الشكل ‎Lae‏ المركب ‎١7‏ على سكب .0621© في خلايا لمفاوية )1( وخلايا أحادية (ب) ل ‎PBMC‏ من متطوعين أصحاء. ‎ve‏ الشكل ‎:١١‏ تأثير المركب ‎VY‏ على مستويات مصل الدم ل ‎TNF-alpha‏ + الشكل ‎:١7‏ نشاط المركب ‎١١‏ المضاد لالتهاب المفاصل في نموذج ‎Jolie il‏ مستحث بكو لاجين فأري ‎mouse collagen‏ ثم تقييمه بمتوسط لمك المخالب ‎paws mean thickness‏ 0( والتسجيل الإكلينيكي ‎clinic score‏ (ب).
الوصف التفصيلر
في سياق الاختراع الحالي؛ تتضمن المصطلحات التالية المعاني التالية بالتفصيل:
يشير المصطلح ".© ‎"alkyl‏ إلى شق ذي سلسلة هيدروكربون ‎hydrocarbon chain‏ مستقيمة أو متفرعة تشتمل على ذرات كربون ‎hydrogens‏ لآ تحتوي على نقاط تشبع؛ بها ما يتراوح من
© ذرة كربون إلى ست ذرات؛ وترتبط ببقية الجزيئ عبر رابطة مفردة؛ ‎ethyl » methyl «Jia‏ « ‎i-propyl ¢ n-propyl‏ ؛ ‎n-pentyl « t-butyl » n-butyl‏ » إلخ يمكن إشباع شقوق م ‎alkyl‏ ‏اختيارياً بمجموعة استبدال أو أكثر مثل ‎aryl « cycloalkyl‏ ¢ سيكليل غير متجانسة ‎heterocyclyl‏ ‎nitro ¢ amino ¢ cyano « alkoxy ٠ hydroxy « halo‏ أو ‎٠. alkylthio‏ يشير المصطلح " ‎cycloalkyl‏ إلى شق حلقي ثابت به ما يتراوح من من * إلى 8 ذرات؛
‎٠‏ ويكون مشبعاً أو مشبعاً جزئياً؛ ويشتمل فقط على ذرات كربون 5 ‎cyclohexyl Jie chydrogen‏ أو ‎.cyclopentyl‏ ما لم يشر إلى غير ذلك على نحو محدد في ‎dial gall‏ يعني المصطلح ‎cycloalkyl"‏ " أنه يتضمن شقوق ‎cycloalkyl‏ مشبعة اختيارياً بمجموعات استبدال واحدة على الأقل يتم انتقاؤها على حدة من المجموعة التي تشتمل على ‎chydrogen‏ شق ‎halo « alkyl Cis‏ « ‎hydroxy‏ 1 (ب5)(ي))-»؛ حيث يتم انتقاء ي1 وبع على حدة من ‎hydrogen‏ وشق ‎alkyl Ci.‏
‎Vo‏ خطي أو متفرع. يشير المصطلح ‎any!‏ إلى شق حلقي عطري ثابت يتراوح من خمس إلى ثمان ذرات؛ ويشتمل ‎Lis‏ على ذرات كربون و ‎chydrogen‏ مثل ‎phenyl‏ أو ‎cyclooctatetraene‏ . يشتمل فقط على ما لم يشر إلى غير ذلك على نحو محدد في المواصفة؛ يشير المصطلح يعني ‎aryl”‏ "43 يتضمن شقوق ‎aryl‏ مشبعة اختيارياً بمجموعة استبدال واحدة على الأقل يتم انتقاؤها على حدة من
‎٠ ١
“vq
-N(R3)(R4) ‏ل‎ hydroxy ¢ halo « alkyl Ci ‏شق‎ <hydrogen ‏المجموعة التي تشتمل على‎
حيث يتم انتقاء ‎Ras Ry‏ على ‎sas‏ من ‎hydrogen‏ وشق ‎alkyl C14‏ خطي أو متفرع.
يشير 'سيكليل غير متجانسة ‎heterocyclyl‏ " إلى شق حلقي ثابت به ما يتراوح من ثلاث إلى
ثمان ذرات يشتمل على ذرات كربون وما يتراوح من ذرة غير متجانسة إلى خمس يتم انتقاؤها © .من المجموعة التي تشتمل على ‎٠ oxygen 6 nitrogen‏ وكبريت ‎sulphur‏ . ولأغراض هذا
الاختراع؛ يمكن إشباع الحلقة غير المتجانسة أو العطرية جزئياً أو كلياً. تتضمن أمثلة مثل هذه
الحلقات غير المتجانسة؛. على سبيل المثال لا الحصر ‎thiophene » pyridine « pyrrolidine‏ «
‎furan‏ + إلخ. ما لم يشر إلى غير ذلك على نحو محدد في المواصفة؛ يعني المصطلح "سيكليل
‏غير متجانسة ‎heterocyclyl‏ ' أنه يتضمن شقوق سيكليل غير متجانسة ‎heterocyclyl‏ مشبعة ‎٠‏ اختيارياً بمجموعة استبدال واحدة على الأقل يتم انتقاؤها على حدة من المجموعة التي تشتمل
‎Ris Ry ‏حيث يتم انتقاء‎ -N(R3)(Ry) «I hydroxy « halo « alkyl Cis ‏شق‎ <hydrogen ‏على‎
‏على حدة من ‎hydrogen‏ وشق ‎alkyl Cig‏ خطي أو متفرع.
‎. fluoro ‏أو‎ iodo » chloro « bromo ‏إلى‎ "halo" ‏يشير المصطلح‎
‏يشير المصطلح ‎lel‏ المفاصيل القليلة الحاد والمزمن ‎acute and chronic seropositive‏ إيجابي ‎١٠‏ أو سلبي المصل ‎seronegative olygoarthritis‏ والتهاب المفاصيل المتعددة ‎polyarthritis‏ " إلى
‏أمراض التهاب الأغشية المصلية المفصلية ‎diseases with synovitis involving‏ التي تتضمن
‏مفصلاً زليلياً أو أكثرء مع عامل رأوماتويدي إيجابي أو سلبي ‎either positive or negative‏
‎rheumatoid arthritis sila) ‏المفاصيل‎ led ‏بما في ذلك‎ « rheumatoid factor
‎+ both primary and secondary Sjégren syndrome ‏والثانوية‎ a ‏ومتلازمة سوجورن‎
‎7 ١/1
Cy. ‏إلى الأمراض الالتهابية المرتبطة ب‎ spondiloarthropahies " ‏يشير المصطلح "اعتلالات الفقار‎ ‏و/أو الشوكي‎ sacro-ileal joints ‏المناعي باثولوجياً؛ والمفاصل العجزية الحرقفية‎ HLA-B27 ٠ uveitis ‏بما في ذلك أيضاً التهاب العنبية‎ ¢ peripheral joints ‏و/أو المفاصل الطرفية‎ spinal ‏إلى الآفات_الالتهابية للجسيمات‎ glomerulonephritis " ‏يشير المصطلح "التهاب كبيبات الكلى‎ ٠ inflammatory lesions of the renal glomerulus ‏الكروية‎ © ‏إلى الأمراض‎ " tubulo-interstitial nephritis ‏يشير المصطلح "التهاب الكلية الأنبوبي الخلالي‎ ‏الالتهابية التي تتضمن الأنابيب الصغيرة والأنسجة الكلوية الخلالية.‎ ‏إلى أمراض التهابية جهازية ذات‎ " colagenopathies ‏يشير المصطلح 'اعتلالات الكو لاجينات‎ systemic lupus ‏الحُمَامِيَّة المَجْموعيَّة‎ FRR ‏آلية مناعية مسببة للمرض بما في ذلك‎ -sclerodermia ‏وتصلب الجلد‎ dermatomyositis ‏التهاب الجلد والعضل‎ ٠ erythematosus | ٠ ‏إلى الأمراض الالتهابية‎ " inflammatory bowel disease ‏يشير المصطلح "مرض التهاب المثانة‎ ‏للجهاز المعوي المعدي التي ذات آلية مناعية مسببة للمرض؛ إما مع أو بدون ميزات جهازية؛‎ -ulcerative colitis ‏والتهاب القولون التقرحي‎ Crohn’s disease ‏في ذلك مرض كرون‎ Lay ‏إلى الأمراض‎ ' obstructive pulmonary disease Gol ‏الانسداد‎ La ‏يشير المصطلح‎ flow ‏الشعبية التي تتسم بانخفاض حجم الزفير المتدفق الذي يمكن تغييره أو لا يمكن تغييره‎ ٠ ‏ومرض الانسداد الرئوي المزمن‎ asthma ‏في ذلك الربو‎ Lu expiratory volume (FEV) ٠ chronic obstructive pulmonary disease ‏يشير إلى أمراض التهابية‎ " interstitial lung disease ‏يشير المصطلح "المرض الرئوي الخلالي‎ . ‏تتضمن خلال الأنسجة المتخللة للرئة‎ 7 ١/1
“vy ‏إلى الأمراض الالتهابية‎ ' demyelinating diseases ‏يشير المصطلح "أمراض نزع النخاعين‎ ‏للجهاز العصبي المركزي الذي له آلية مناعية مسببة للمرض تؤدي إلى تحلل النخاعين؛ بما في‎ -optical neuritis ‏والتهاب العصب البصري‎ multiple sclerosis ‏ذلك التصلب المتعدد‎ lll encephalitis ‏يشير المصطلح 'مرض الالتهاب السحائي 5 » التهاب الدماغ‎ ‏لالتهاب السحايا و/أو‎ alan ‏يشير إلى الأمراض‎ 'meningoencephalitis ‏النتّحايا والذماغ‎ © . central nervous system ‏البنيات الأخرى للجهاز العصبي المركزي‎ inflammatory radiculopathies and ‏يشير المصطلح "التهابات الجذور والأعصاب الطرفية‎ peripheral ‏إلى الأمراض الالتهابية للجهاز العصبي الطرفي‎ " peripheral neuropathies 1161701156 0 ‏إلى الأمراض. الالتهابية للمثانة‎ " inflammatory cystitis ‏يشير المصطلح "التهاب المثانة‎ ٠ -inflammatory diseases of the bladder ‏إلى تضخم و/أو‎ " benign prostatic hyperplasia ‏يشير المصطلح "فرط أنسجة البروستاتة الحميد‎ -hypeplasira of the prostate ‏فرط تنسج البروستاتة غير الخبيث‎ ‏إلى‎ " urticaria ‏والشرى‎ eccema « atopic dermatitis ‏يشير المصطلح "التهاب الجلد التأتبي‎ .188 ‏أمراض الجلد الأرجية التي ذات آلية ممرضة مناعية باشتراك أو بدون اشتراك‎ ve ‏وتفاعل الجلد الحمامي مع آلية جهاز‎ GE ‏إلى قراط‎ ” psoriasis ‏يشير المصطلح "الصدفية‎ ‏المناعة الممرضة.‎ ‏يشير المصطلح "العد الوردي 2058668 " إلى حالة التهابية جلدية عامة تتسم بالحمامى (التورد‎ ‏على الوجه والخدين؛ أو الأنف أو الجبين قد تؤثر أيضاً بصفة‎ (redness ‏والاحمرار‎ flushing ‏أكثر شيوعاً على الرقبة والصدر.‎ ٠
‎YY —‏ -— يشير المصطلح ‎Cll‏ الأنف الأرجي ‎allergic rhinitis‏ إلى أمراض مخاط الأنف الالتهابية المتقطعة (يطلق عليها أيضاً موسمية) أو دائمة (يطلق عليها مستمرة) لآلية فرط الحساسية المناعية الممرضة. يشير المصطلح 'تسمم الدم ‎٠ sepsis‏ الصدمة التسممية ‎septic shock‏ والفشل متعدد الأعضاء ‎multiorganic failure ©‏ " إلى الأمراض الالتهابية الجهازية المستحثة باستجابة مناعية غير عادية للعوامل الميكروبية والمرضية الأخرى. يشير المصطلح "الساركويد ‎sarcoidosis‏ والداء ‎amyloidosis pl‏ ” إلى الأمراض المناعية مجهولة السبب والمتعلقة بالأعضاء و/أو الأجهزة ولا يمكن ملاحظة سبب واضح جيداً للاستجابة المناعية غير العادية. ‎Ye‏ يشير المصطلح "أمراض المناعة الذاتية ‎auto-immune diseases‏ الخاصة بالأعضاء” إلى إصابة الأعضاء نتيجة الجهاز المناعي دون التعرف على الأسباب المؤدية للمرض؛ بما في ذلك الوهن العضلي الوبيل ‎٠ myastenia gravis‏ التهاب الغدد الدرقية ‎tyroiditis‏ + التهاب النخامية ‎hypophysitis‏ « التهاب الكظر ‎adrenalitis‏ وغير ذلك. يشير المصطلح "غرس الأعضاء ‎organ transplantation‏ " إلى ‎aie‏ وعلاج رفض الخلاياء ‎١‏ الأنسجة والأعضاء المغروسة. يشير المصطلح " التهاب مستحث بعدوى أو ورم ‎infection and tumour-induced‏ ‎"inflammation‏ استجابات مناعية غير عادية ثانوية ‎Jal gall‏ الميكروبية ‎microbial agents‏ أو المنبهات السرطانية ‎~cancer stimuli‏ فضي
ب سلا يشير المصطلح "التنكس الخلوي المعتمد على ‎٠ INF-alpha‏ موت الخلايا ‎apoptosis‏ أو النخر ‎J" necrosis‏ تنكس الأنسجة أو موتها المستحث ب ‎TNF-alpha‏ . يشير المصطلح ‎gn‏ رفض الجسم للعضو المتنغرس ‎graft versus host disease‏ " إلى الاستجابات المناعية الالتهابية المستحثة بالخلايا المطعمة ‎-graft cells‏ © يشير المصطلح "الهزال ‎caquexia‏ " إلى الهزال الجهازي أو سوء التغذية وفقد الوزن نتيجة أمراض التهابية أو تكون الأنسجة الجديدة. 3 . يشير المصطلح "التصلب العصيدي ‎atherosclerosis‏ إلى تصلد الشرايين الثانوية للعصيدة أو تراكمها في جدران الشرايين التي تكون الخلايا الالتهابية (معظم الخلايا الملتهمة ‎(macrophages‏ ‏وتحطم الخلايا 6 التي تحتوي على الشحوم ‎lipids‏ . ‎٠‏ يشير المصطلح "أمراض فقر الدم ‎ischemic diseases‏ " إلى إصابة الأعضاء الثانوية لنقل ‎oxygen‏ إلى الأنسجة و/أو التدفق الدموي بما في ذلك القلب وفقر الدم المخي الوعائي ‎-cerebrovascular ischaemia‏ يشير المصطلح "نمو خلايا عامل التنقل الذاتي وعامل التنقل الذاتي المجاور الممرضة ‎autocrine‏ ‎and paracrine pathological cell growth‏ " إلى أمراض خبيثة أو حميدة مع استخدام الخلايا ل ‎cytokine —S TNF-alpha | ٠‏ ينظم عامل تنشيط ‎WAY‏ وتكائرها ‎proliferation factor for the‏ ‎.cells‏ ‏ما لم يشر إلى غير ذلك يقصد بالمركبات المستخدمة في الاختراع أنها تتضمن مركبات فقط في وجود ذرات غنية صنوياً على نحو أكبر. على سبيل ‎«Jad‏ يتضمن نطاق الاختراع مركبات لها ‎٠ ١1‏
دهج هذه ‎forall‏ البنائية؛ باستثناء إعادة تركيب ‎hydrogen‏ مع ‎deuterium‏ أو ‎widum‏ © أو استبدال كربون ب ‎nitrogen J MC J‏ به ‎PN‏ بالكربون. يشير المصطلح "أملاح؛ و/أو ‎dle‏ أولية و/أو ذوابات منها مقبولة صيدلانيا” إلى أملاح؛ ذوابات أو عقاقير أولية؛ توفر عند إعطائها للمتلقي؛ (بصورة مباشرة أو غير مباشرة) مركبا ‎oo‏ مثل ذلك المركب الذي ورد وصفه في هذه الوثيقة. على الرغم من ذلك؛ سيكون من الملاحظ أن الاختراع يتضمن أيضاً الأملاح المقبولة صيدلانياً نظرا لأنها مفيدة لتحضير أملاح مقبولة صيدلانياً. يمكن تحضير الأملاح؛ والعقاقير الأولية والمشتقات بطرق معروفة في المجال. يفضل أن يشير المصطلح "مقبول صيدلانيا" إلى وحدات وتركيبات جزيئية يمكن تحملها فسيولوجياً ولا تحيث عادةٌ تفاعلات أرجية أو تفاعلات مشابهة غير مطلوبة؛ مثل اضطرابات المعدة؛ الدوخة ‎٠‏ وما شايه ذلك؛ عند إعطائها لإنسان أو حيوان. يعني المصطلح 'مقبول صيدلانيا" أنه مرخص من قبل جهة فيدرالية قانونية أو حكومة ولاية أو مدرج ضمن دستور الأدوية الأمريكي أو دستور أدوية آخر مسموح باستخدامه بصفة عامة ‎ell gall‏ وبالأخص الإنسان. على سبيل ‎Jad‏ يتم تخليق الأملاح المقبولة صيدلانياً للمركبات التي سبق وصفها في هذه الوثيقة من المركب السابق وصفه المحتوي على وحدة قاعدية أو حمضية بطرق كيميائية تقليدية. ويتم بصفة عامة تحضير مثل هذه الأملاح» على سبيل المثال؛ بتفاعل صور حمضية أو قاعدة حرة من هذه المركبات مع كمية مقاسة من القاعدة أو الحمض المناسب في ماء أو في مذيب عضوي أو في خليط منهما. كما تفضل الأوساط غير المائية بصفة ‎dale‏ مثل :606 ‎ethyl‏ ‎acetate‏ ء ‎isopropanol « ethanol‏ أو ‎acetonitrile‏ . تتضمن أمثلة أملاح الإضافة الحمضية أملاحاً مثل ‎hydrochloride, hydrobromide, hydroiodide, sulfate, nitrate, phosphate‏ ¢ على ‎Yo‏ سبيل المثال؛ وأملاح إضافة حمضية عضوية مثل ‎acetate, maleate, fumarate, citrate, oxalate,‏
‎Yo —‏ — ‎succinate, tartrate, malate, mandelate, methanesulfonate and p-toluenesulfonate‏ » على سبيل المثال. تتضمن أمثلة أملاح الإضافة القلوية أملاحا غير عضوية مثل ‎sodium, potassium,‏ ‎calcium, ammonium, magnesium, aluminium and lithium‏ على سبيل_المثال؛ والأملاح القلوية العضوية مثل : ‎ethylenediamine, ethanolamine, N,N-dialkylenethanolamine, glucamine 8‏ وأملاح أمينية حمضية قاعدية على سبيل المثال . يعرف المصطلح "عقار ‎J‏ في هذه الوثيقة على أنه مركب كيميائي خاضع لاشتقاق عضوي مثل استبدال أو إضافة مجموعة كيميائية إضافية لتغيير (للاستخدام الصيدلاني) بعض من خواصه الكيميائية؛ مثل القدرة على الذوبان أو الإتاحة البيولوجية؛ على سبيل المثال إستر أو ‎A) ٠‏ مشتق من مركب فعال يعطي مركباً فعالاً في حد ذاته بعد إعطاءه الحالة. يعرف ذو المهارة في المجال أمثلة الطرق المعروفة جيدا لإنتاج عقار أولي من مركب فعال معين ويمكن العثور على هذه الأمثلة في : ‎Krogsgaard-Larsen et al., Textbook of Drug Design and Discovery, Taylor & Francis‏ ‎(April 2002).‏ ‎See‏ سبيل المثال. وفقاً للاختراع؛ يفهّم من المصطلح “ذوابة' أنه يعني أي صورة لمركب الاختراع لها جزيئ آخر (والأرجح مذيب قطبي) مرتبط به عبر رابطة غير تساهمية. تتضمن أمثلة الذوابات ‎hydrate‏ وألكوكولات؛ على سبيل المثال؛ الميثانولات. والعقاقير الأولية المفضلة بصفة خاصة هي تلك التي تزيد من الإتاحة البيولوجية لمركبات هذا الاختراع عند إعطائها لمريض (مع السماح بامتصاص المركب المعطى عبر الفم على نحو ‎Yev)‏
Ce ‏أسرع في الدم؛ على سبيل المثال) أو تلك التي تزيد من توزيع المركب الأصلي إلى الجزء‎ ‏على سبيل المثال) فيما يتعلق‎ «lymphatic system ‏أو الجهاز اللمفاوي‎ brain ‏البيولوجي (المخ‎ ‏بالأنواع الأصلية.‎ ‏أي متعددة‎ + crystalline form ‏قد تكون المركبات المستخدمة في الاختراع في صورة بلورية‎ ‏على سبيل المثال) ومن المفهوم‎ ٠ hydrate) ‏حرة‎ solvates ‏الأشكال؛ إما كمركبات أو كذوابات‎ © ‏أن كلتا الصورتين تقعان ضمن نطاق الاختراع الحالي. وطرق الإذابة معروفة بصفة عامة في‎ ‏تكون‎ coals ‏عن ذوابات مقبولة صيدلانياً. في نموذج‎ Boke ‏المجال. والذوابات المناسبة تكون‎ ٠ hydrate ‏الذوابة عبارة عن‎ ‏يمكن تحضير الأملاح؛ والذوابات والعقاقير الأولية بطرق معروفة في المجال. من الملاحظ أن‎ ‏الأملاح؛ أو الذوابات أو العقاقير الأولية المقبولة صيدلانياً تقع أيضاً ضمن نطاق الاختراع؛ لأنها‎ ٠ ‏مفيدة في تحضير الأملاح؛ أو الذوابات أو العقاقير الأولية المقبولة صيدلانيا.‎ ‏يفضل أن تكون مركبات الصيغة )1( أو أملاحها أو ذواباتها في صورة مقبولة صيدلانياً أو في‎ ‏إلى حد كبير. يفهم أن الصورة المقبولة صيدلانياًء من بينهاء مستوى نقاء مقبول‎ A ‏صورة‎ ‎« excipients ‏والسواغات‎ diluents ‏صيدلانياًء يستثني مواد الإضافة الصيدلانية مثل المخففات‎ ‏بدون إدخال أي مادة تعتبر سامة بمستويات جرعات عادية. يفضل أن تتجاوز مستويات نقاء‎ 0 ‏ويفضل 7290. في نموذج مفضل؛ تتجاوز 795 من مركب الصيغة‎ JV ‏ويفضل‎ ,)٠ ‏العقار‎ ‏أو أملاحها؛ ذواباتها أو عقاقيرها أولية. يمكن أن تتضمن المركبات المستخدمة في الاختراع‎ ٠» (1) ‏كيرالية‎ isomers ‏الموصوف أعلاه متشاكلات بناء على وجود مراكز أو‎ (I) ‏المبين بالصيغة‎ ‏؛‎ isomers ‏أساسها روابط متعددة (على سبيل المثال» 7 2)؛ ويتضمن الاختراع الحالي نطاق‎ ‏وأخلاط منها.‎ diastereoisomers ‏؛ مزدوجات التجاسم‎ enantiomers ‏المتشاكلات‎ ٠٠ ٠ ١/١
الا في نموذج خاص»؛ ولاستخدامه في تقنيات التصوير والتصوير العلاجي؛ أو انتقالها كمرقمات بيولوجية في تطوير العقار؛ التجارب الإكلينيكية؛ والأدوية المتميزة؛ يمكن ترقيم المركب الصيغة )1( بعلامات فلورية أو متألقة ؛ إدخال المرقمات بأي طريقة يعرفها ذو المهارة في المجال. في نموذج خاص بالاختراع؛ ‎le R|‏ 5 عن .© ‎alkyl‏ غير مشبع. يفضل أن تكون ‎Ry‏ عبارة © عن ‎methyl‏ نموذج خاص ‎٠ Al‏ 8 عبارة عن م6.,© ‎alkyl‏ غير مشبعة؛ ‎cycloalkyl‏ ‏مشبعة أو غير مشبعة. على نحو ‎Ry «Jamie‏ عبارة عن ‎cycloalkyl‏ مشبعة أو غير مشبعة. الأفضل أن تكون ‎Ry‏ عبارة عن ‎cyclopentyl‏ . في نموذج مفضل آخرء ‎Ry‏ عبارة عن ‎CiCs‏ ‎alkyl‏ غير مشبعة. على نحو ‎Ry «Junin‏ عبارة عن م0.,© ‎alkyl‏ مشبعة بسيكليل غير متجانسة ‎٠ heterocyclyl‏ ‎Ye‏ الأفضل أن تكون ‎Ry‏ عبارة عن م0,.6 ‎alkyl‏ مشبعة ب ‎oxirane‏ . في نموذج خاص آخر ¢ تكون يخ عبارة عن ‎methyl‏ . في نموذج خاص آخر كذلك؛ يتم انتقاء المركب الصيغة (1) المستخدمة في الاختراع الحالي من المركبات التألية: ‎H3C~—(H,C)s—O.
N‏ 0 0-0 0-0“ 58 ‎Hig‏ 0و ‎OX No‏ )2 0 0 )1( ‎CL HyC~—(H,C);—0 N‏ دملا ‎N‏ 0 ‎t‏ 85 مير ‎or‏ ‎HC‏ ‎HC‏ ‏4 مخض يض )3
‎AY‏ الال 8 9 ‎H.C HC‏ وص يحض )6( )5( ‎CL‏ \ "> ) { 3 ° مر
‎Hi on‏ ‎ZN, "SK‏ 0 0 )7( )8( ‎o‏ 0 دمل ‎[>No‏ ‎oF oc‏ لير و 5 ‎HC‏ ‎eg‏ 5 يحض 0 0 )10( : د ( 0 < ) «موملا تح عملا تح 8 5 ‎HaC‏ 0و ‎No AX‏ °° )12 )13( ( ‎N 0‏ 0 مم امد ‎N=== 5 5‏ 5 مط ‎HC‏ ‏8 وص )15( )14( مل بلك ‎N 0‏ ‎a‏ \ ) ل ل 58 5 ‎Cg HoC_‏ ‎AS ZN‏ 07 )16( يل 5 0ط وض )18( ‎AERA‏
— 9 ا — أو ملح؛ و/أو عقار أولي و/أو ذوابة منها مقبولة صيدلانيا. يمكن الحصول على مركبات الصيغة )1( المستخدمة في الاختراع الحالي بإجراءات تخليقية متاحة. على سبيل المثال؛ يمكن تحضيرها بعملية سيتم تلخيصها في المخطط التالي: ‎Hal‏ ‏سم جر من زر زر ‎ee‏ زر رقي يب ‎R38 = R10,S‏ حيس دي ‎HO RO Nn‏ 0 ‎Joa a Joa -‏ — —_— 5 —— ‎R30,8‏ 85 © تشتمل العملية ‎Yi‏ على تفاعل أسترة المركب ‎4-R-thiophenylacetic acid‏ للحصول على إستر ‎methyl‏ مشتق . يمكن إجراء التفاعل المذكور باستخدام عامل إدخال ‎Mel Jie « methyl‏ وجود ملح؛ مثل 00011003 أو باستخدام ‎MeOH‏ كعامل إدخال لل ‎methyl‏ في وجود وسط في الخطوة التالية؛ تتم أكسدة ‎methyl ester‏ مشتقء اختيارياً دون ‎(dab‏ عند ذرة كبريت ‎sulphur‏ ‎٠‏ باستخدام ‎dale‏ مؤكسدء وليكن ‎oxone‏ ؛ وبالتالي الحصول على مركب ‎sulfone‏ من ‎de gana‏ ‎-thioether‏ ‎og‏ عملية إدخال الهالوجين ‎halogenation‏ التالية بعامل ‎(NBS Jie‏ إلى تكوين ‎halide‏ في ‎ester de sana aia ge‏ . وتؤدي إضافة هذا المركب على هيئة حلقية مع 15 مختلفة بالتسخين إلى الحصول على ‎—R,‏ مشبعة من ‎5-(4-Rs-sulfonyl-phenyl)-thiazol-4-0l‏ 42% ‎Ye‏ تقاء ‎Ade‏ ‏الا
ام يتم الحصول على ‎thioamides‏ المستخدمة لإضافة مجموعات حلقية من الإميدات المناظرة
J. Med. Chem (34) 2158-2165, 1991 and J. Org. ‏وفقاً لما ورد وصفه‎ Lawesson ‏لكاشف‎ ‎Chem. (65), 13, 3973. 2000‏ تتضمن ‎thicamides‏ المذكورة المركبات ‎Cus‏ يتم انتقاء ‎Ry‏ من ‎aryl ‏مشبعة أو غير مشبعة‎ cycloalkyl (daria ‏مشبعة أو غير‎ alkyl ‏مع‎ <hydrogen ‏مشبعة أو غير مشبعة وفقاً لما هو‎ heterocyclyl ‏مشبعة أو غير مشبعة وسيكليل غير متجانسة‎ © ‏مبين أعلاه. ‏يمكن لذي المهارة إدخال شق ‎Ry‏ من خلال مجموعة ‎hydroxyl‏ بأي طريقة معروفة للحصول ‏على مركب الصيغة (!) المستخدم في الاختراع الحالي. في نموذج ‎ald‏ تتفاعل مجموعة ‎hydroxyl‏ مع هاليد بالصيغة 12-1181 على نحو مفضل ‎(Ry-Br‏ للحصول على مركب الصيغة ‎I) ٠‏ ‏وكافة المواد المتفاعلة المستخدمة في التفاعلات المذكورة متوفرة تجاريا. ‏في جانب آخرء يوفر الاختراع الحالي مركباً له الصيغة : ‏مو ‎DE‏ ‎a‏ ‏0 0 ‎1s‏ ‏حيث: ‎Vo‏ يتم انتقاء ‎Ry‏ من ‎alkyl 0.2 «hydrogen‏ غير مشبعة؛ ‎cycloalkyl‏ مشبعة أو غير مشبعة؛ ‎aryl |‏ مشبعة أو غير مشبعة و ‎heterocyclil‏ مشبعة أو غير مشبعة ؛ وتكون ‎Ry‏ عبارة عن شق م ‎alkyl‏ غير مشبع؛
أو ملح؛ و/أو ‎lie‏ أولي و/أو ذوابة منه مقبولة صيدلانياً. في نموذج خاص؛ ‎Ry‏ عبارة عن ,© ‎alkyl‏ غير مشبع. على نحو مفضلء ,18 تكون عبارة عن ‎٠ methyl‏ في نموذج خاص أخر ¢ تكون مع عبارة عن ‎methyl‏ . © في نموذج خاص ‎a ‘ Al‏ انتقاء مركب الصيغة ‎(I)‏ الوارد بالاختراع مما يلي : ‎CI 0‏ ا | سب ٍ نس 0 وخ ‎oF‏ ‎I.‏ 0 ‎oe ol) an N‏ 4 يم 43 هس ‎I‏ ‎١ | RG. 1 | ;‏ ا ‎Helo‏ ‏الم ‎AT‏ ‎IF To‏ 0 )2 — ا - 0 5 | 08 1 وص 8 ا ا ّ ‎w aN HY‏ = هيه ‎١‏ ‏سيا ‎yey Tyg‏ ‎w A wo A]‏ الك ‎ANT‏ ‎iid‏ - ّ : 13 ِ_ 0 ل ل“ ري ‎TON‏ ار ليد ا رحا ‎oA‏ ‎i 0‏ تبي ل . 0 ‎Haile,‏ ‎PE‏ ال ‎Fn‏ يت كن 081 ب إ قا د 1 0 8 . | 8“ ال 8 اد ْ اي 8 ايد تسر ا ]ل ا أبس ب 1 ا أ . ‎I‏ تا ‎Hal | . Pp‏ و دص ‎PIE‏ 171 أو ملح؛ و/أو عقار أولي و/أو ذوابة منه مقبولة صيدلانياً. ‎٠ ١/١‏
اس كما يوفر الاختراع الحالي تركيبات صيدلانية تشتمل على مركب الصيغة الجديد )1( الوارد بالاختراع الحالي؛ أو أملاح؛ و/أو عقاقير أولية و/أو ذوابات منه مقبولة صيدلانياً ومادة حاملة ‎carrier‏ « و/أو ناقلة؛ و/أو مساعدة ‎adjuvant‏ واحدة على الأقل مقبولة صيدلانياً؛ لإعطائها لمريض. في نموذج خاص؛ لإعطائها لمنع و/أو علاج أمراض التهابية حادة أو مزمنة؛ يمكن صياغة مركبات الصيغة (()؛ وأملاحهاء عقاقيرها الأولية و/أو ذواباتها المقبولة صيدلائياً في تركيبة صيدلانية مناسبة؛ بالكمية المؤثرة ‎ladle‏ مع مادة حاملة ؛ و/أو مساعدة . و/أو ناقلة مقبولة صيدلانياً أو أكثر. يشير المصطلح 'مادة حاملة ؛ مساعدة و/أو ناقلة" إلى وحدات أو مواد جزيئية تعطى: معها ‎٠‏ المادةٍ الفعالة. يمكن أن تكون مثل هذه المواد الحاملة؛ المساعدة أو الناقلة سوائل معقمة؛ مثل الماء والزيت؛ بما في ذلك ذلك المواد التي من أصل بترولي ‎petroleum‏ أو حيواني؛ نباتي أو تخليقي ‎Jia ¢ synthetic origin‏ زيت الفول السوداني؛ زيت فول الصوياء الزيت المعدني؛ زيت السمسم وما شابه ذلك؛ السواغات ‎٠ excipients‏ عوامل التفتيت ‎٠ disintegrants‏ الترطيب ‎wetting agents‏ أو التخفيف 01108018. تم وصف مواد حاملة صيدلانية مناسبة في ‎"Remington's Pharmaceutical Sciences" ٠‏ ل ‎-E.W.
Martin‏ يمكن إعطاء التركيبات ‎AY all‏ بأي طريقة إعطاء مناسبة؛ على سبيل المثال؛ عبر الفم؛ حقنا (على سبيل المثال؛ تحت الجلد ‎Jala ¢ subcutaneous‏ الغشاء البروتوني ‎Jala ¢ intraperitoneal‏ الأوردة ‎intravenous‏ » داخل العضل ‎intramuscular‏ » إلخ)؛ عبر المستقيم ‏ إلخ؛ وعبر الفم عادةٌ نظراً للطبيعة المزمنة للمرض المراد علاجه. فضي
الهم
في نموذج ‎pals‏ يمكن أن تكون التركيبات الصيدلانية المذكورة في أي صورة صيدلانية لإعطائها عبر الفم؛ إما في صورة صلبة أو سائلة. تتضمن الأمثلة التوضيحية للصور الصيدلانية
التي يتم إعطاؤها عبر الفم ‎(yal EY)‏ الكبسولات؛ الحبيبات؛ المحاليل؛ المعلقات؛ إلخ؛ ويمكن أن تحتوي على سواغات تقليدية ‎Jie‏ مواد رابطة ‎binders‏ + مواد مخففة ‎diluents‏ + مفتتة
‎disintegrants ~~ ©‏ « مزلقة ‎lubricating agents‏ « مرطبة ‎wetting agents‏ ؛ إلخ؛ ويمكن تحضيرها بالطرق التقليدية. كما يمكن مواءمة التركيبات الصيدلانية لإعطائها ‎clin‏ في صورة؛ على سبيل ‎(JU‏ منتجات أو معلقات أو محاليل معقمة؛ مجفدة في صورة الجرعات المناسبة ؛ في هذه ‎(lal)‏ تتضمن ‎CLS A‏ الصيدلانية المذكورة سواغات مناسبة؛ مثل المحاليل المنظمة؛ مخفضات التوتر السطحيء إلخ ويتم اختيار السواغات ‎excipients‏ في أي حالة وفقاً لصورة
‎٠‏ الإعطاء الصيدلاني المنتقاة. يمكن الاطلاع على صور صيدلانية مختلفة لإعطاء_ العقاقير
‏وتحضيرها:
‎"Tratado de Farmacia Galenica", by C.
Fauli i Trillo, 10th Edition, 1993, Luzan 5, S.A.
‎de Ediciones.
‏لتطبيقه في العلاج؛ يفضل وجود مركب الصيغة (1) في صورة صيدلانية نقية أو نقية إلى حد
‎٠‏ كبير ومقبولة صيدلانياً؛ أي أن مركب الصيغة )1( يتمتع بمستوى نقاء مقبول صيدلانياًء باستثناء أن السواغات المقبولة صيدلانياً لا تتضمن أي مادة تعتبر سامة عند مستويات جرعات عادية. يفضل أن تتجاوز مستويات نقاء مركب الصيغة )1( ‎Jon‏ على نحو مفضل ‎Ve‏ على نحو
‏أكثر تفضيلاً ‎.79٠‏ في نموذج ‎dunia‏ إنها تتجاوز 755 تتوقف الكمية المؤثرة علاجياً من المركب الصيغة (1) بصفة عامة؛ من بين العوامل الأخرى. على ‎AY‏ المراد علاجهاء على ‎Yo‏ شدة المرض الذي تعاني ‎die‏ الحالة المذكورة؛ على طريقة الإعطاء المختارة؛ إلخ. لذاء يجب
دهم
اعتبار الجرعات المذكورة في هذا الاختراع فقط كقيم مرجعية للشخص ذي المهارة في المجال؛
الذي يتعين عليه ضبط الجرعات ‎hg‏ للمتغيرات سالفة الذكر. على الرغم من ذلك؛ يمكن إعطاء
مركب الصيغة ‎(I)‏ 5 أو أكثر يومياً؛ على سبيل المثالء ‎YO)‏ © أو ؛ مرات ‎logy‏ حيث
‎dale‏ ما تتراوح الكمية اليومية من ‎١0٠‏ إلى ‎٠٠٠١‏ مجم/كجم من ‎AS‏ الجسم/اليوم؛ على نحو © مفضل ‎٠١‏ مجم/كجم من ‎AES‏ الجسم//اليوم.
‏يمكن استخدام مركب الصيغة ‎(I)‏ وأملاحه؛ وعقاقيره الأولية و/أو ذواباته المقبولة صيدلانيا؛
‏وكذلك التركيبات الصيدلانية التي تحتوي عليها مع عقاقير إضافية أخرى مفيدة في علاج
‏الأمراض الالتهابية الحادة والمزمنة. يمكن أن تشكل العقاقير الإضافية المذكورة جزءًا من نفس
‏التركيبة الصيدلانية أو ‎Yay‏ من ذلك؛ يمكن توفيرها في صورة تركيبة متسقلة لإعطائها بصورة ‎Ve‏ متزامنة أو غير متزامنة مع التركيبة الصيدلانية التي تشتمل على مركب الصيغة ‎J (I)‏ ملح؛
‏و/أو عقار أولي و/أو ذوابة منه مقبولة صيدلانياً.
‏ضمن نطاق الاختراع الحالي؛ يشير التعبير "مرض التهابي حاد ومزمن" إلى أي مرض؛
‏اضطراب أو حالة ناتجة عن تنشيط وإمراض الخلايا الالتهابية/المناعية وشلال ‎cytokines‏
‏الالتهابية في ظروف يكون فيها التنبيه المشترك غير العادي عبارة عن آلية مسببة للمرض. ‎٠‏ تتمثل الخلايا السائدة المضمنة الخلايا التهابية/المناعية مثل الخلايا الأحادية؛ الخلايا الملتهمة
‎APC « macrophages‏ 7 5 والخلايا الفاتكة الطبيعية ‎¢(NK)‏ خلايا البلازماء الخلايا المحببة
‏والخلايا البدينة ‎«mast cells‏ أو توليفة من مجموعات الخلايا الفرعية السابقة المشتركة في
‏الأمراض المقترح لها العلاج.
‎Yay)
و يشير المصطلح ‎eytokine‏ إلى بروتين مفرز يؤثر على وظائف الخلايا الأخرى؛ خاصة وأنه يتعلق بتعديل التفاعلات بين خلايا جهاز المناعة أو الخلايا المضمنة في الاستجابة الالتهابية. تتمتل ‎cytokines‏ المذكورة ‏ في ‎TNF-ALPHA‏ (عامل نخر الرمحة) ‎IFN-GAMMA‏ ‎IL-10 cytokine 3 ¢ chemokine (interleukin-8) IL-8 «(interferon-y)‏ المنظم ‎interleukin-)‏ ‏© 10). يتم حث إنتاج 11-10 بمستويات مرتفعة من ‎TNF-alpha‏ ولتعزيز التغذية العكسية السالبة فور إنتاج ‎TNF-alpha‏ ؛ فور إعاقة انتساخ ‎cytokine‏ المساعد على حدوث الالتهابات. في جانب خاص بالاختراع؛ يتم انتقاء المرض الالتهابي الحاد والمزمن من ‎ald etl‏ القليلة الحاد والمزمن ‎acute and chronic seropositive‏ إيجابي أو ‎du‏ المصل ‎seronegative‏ ‎Julia edly olygoarthritis‏ المتعددة ‎polyarthritis‏ + أمراض_الاعتلال الفقاري ‎٠ spondiloarthropathies ٠‏ التهاب كبيبات الكلى ‎glomerulonephritis‏ » اعتلالات الكو لاجينات؛ التهاب الكلية الأنبوبي الخلالي ‎tubulo-interstitial nephritis‏ » متلازمة التمثيل الغذائي؛ التصلب العصيدي ‎lel « atherosclerosis‏ مفاصيل العظم ‎osteoarthritis‏ ¢ الربو ‎١ asthma‏ مرض الانسداد الرثوي المزمن ‎chronic obstructive pulmonary disease‏ + المرض الرئوي الخلالي ‎interstitial lung disease‏ ¢ التصلب المتعدد ‎٠ multiple sclerosis‏ أمراض نزع النخاعين ‎demyelinating diseases ٠5‏ + مرض الالتهاب السحائي ‎meningitis‏ « التهاب الدماغ ‎encephalitis‏ ‎el‏ السّحايا والذماغ ‎elle «meningoencephalitis‏ الجذور والأعصاب الطرفية ‎ae «inflammatory radiculopathies and peripheral neuropathies‏ التهاب_المثانة ‎inflammatory bowel disease inflammatory cystitis‏ « التليف الكبدي ‎cirrhosis‏ » الالتهاب الكبدي ‎hepatitis‏ فشل القلب ‎heart failure‏ © مرض فقر الدم ‎«ischemic disease‏ الفشل ‎Ye.‏ الكلوي ‎renal failure‏ » التهاب المثانة ‎٠ inflammatory cystitis‏ فرط أنسجة البروستاتة الحميد ‎prostatic hyperplasia‏ _«عاص»ط ‎١.‏ _التهاب_البروستاتة ‎«prostatitis‏ التهاب عضلة_القلب ‎٠ ١‏
وس
‎myocarditis‏ ¢ التهاب التأمور 55 التهاب_ العنبية ‎uveitis‏ التهاب الجلد
‎dermatomyositis‏ التأتبي ‎١ eccema ٠ atopic dermatitis‏ الشرى ‎urticaria‏ « الصدفية
‎sepsis ‏تسمم الدم‎ ¢ allergic rhinitis ‏؛ التهاب الأنف الأرجي‎ rosacea ‏العد الوردي‎ psoriasis
‏الصدمة التسممية ‎٠ septic shock‏ الفشل متعدد الأعضاء ‎multiorganic failure‏ ¢ أمراض المناعة © الذاتية الجهازية ‎a5) Jie systemic autoimmune diseases‏ الحْمَامِيَّة المَجْموعِيَّة ‎systemic‏
‎vasculitis Sed SN «lupus erythematosus‏ + -_التهاب الجلد والعضل
‎«dermatomyositis‏ الذاء النشوانِي ‎amyloidosis‏ أو الساركويد ‎sarcoidosis‏ « أمراض المناعة
‏الذاتية ‎auto-immune diseases‏ الخاصة بالأعضاء مثل الوهن العضلي الوبيل ‎myasthenia‏
‎٠ gravis‏ التهاب الغدد الدرقية ‎thyroiditis‏ أو التهاب الناتج عن الإتسولين ‎insulinitis‏ > غرس ‎٠‏ الأعضاء ‎organ transplantation‏ ؛ الالتهاب المستحث بالأورام والعدوى ‎infectious ant tumor‏
‎induced inflammation‏ » التنكس الخلوي المعتمد على ‎TNF-alpha‏ ؛ النخر ‎necrosis‏ ؛ موت
‏الخلايا ‎apoptosis‏ + مرض رفض الجسم للعضو المنغرس ‎graft versus host disease‏ ¢ الهزال
‎cachexia‏ وعامل التنقل الذاتي ونمو خلايا النطظير صماوي المسببة للمرض.
‏في نموذج مفضل؛ يكون المرض الالتهابي الحاد والمزمن عبارة عن مزمن ‎Jalil lal‏ ‎١٠‏ المتعددة ‎polyarthritis‏ إيجابي أو سلبي المصل ‎١ seronegative olygoarthritis‏ ويفضل على
‏نحو أكبر أن يكون عبارة عن التهاب المفاصيل الرُوماتويدي ‎rheumatoid arthritis‏ .
‎ay‏ جانب آخر من جوانب الاختراع الحالي في طريقة معالجة مرض التهابي حاد أو مزمن؛
‏وتشتمل على إعطاء مريض بحاجة إلى مثل هذا العلاج كمية مؤثرة علاجياً بمركب له الصيغة
‎ay (1)‏ لما هو مبين أعلاه أو تركيبة صيدلانية منه.
‎٠ ١ل١‎
ا
يعني المصطلح "علاج" أو 'يعالج” في سياق هذه المواصفة إعطاء مركب له الصيغة ‎ly‏
للاختراع لمنع؛ تخفيف أو القضاء على مرض أو عرض أو أكثر مرتبط بالمرض المذكور. كما
يتضمن المصطلح "علاج” منع؛ تخفيف أو القضاء على النتائج الفسيولوجية للمرض.
يُفهم من المصطلح 'تخفيف” في سياق هذا الاختراع أنه يعني أي تحسن في حالة المريض © المعالج؛ ‎LJ‏ ذاتياً (إحساس المريض أو بشأنه) وموضوعياً (العوامل المتغيرة المقاسة).
يتعلق جانب آخر من جوانب الاختراع باستخدام مركب له الصيغة )1( وفقاً لما هو مبين أعلاه
كمركب تصوير بيولوجي في تقنيات التصوير والتصوير العلاجي ؛ على نحو خاص بالعثور
على الآفات المناعية؛ الخلايا المستهدفة وجزيئات المستهدفات. في نموذج ‎ald‏ الاختراع يشير
باستخدام مركب له الصيغة )1( وفقاً لما هو مبين أعلاه كمركب تصوير بيولوجي في تقنيات ‎٠‏ التصوير والتصوير العلاجي ؛ على نحو مفضل العثور على الآفات المناعية؛ الخلايا المستهدفة
وجزيئات المستهدفات.
إن تقنية التصوير العلاجي أدت إلى توسيع نطاق المرقمات البيولوجية التي يتم الحصول عليها
بالاستخدام السريع لمجموعة تقنيات التصوير الحيوية ‎al‏ قبل الإكلينيكية (الجزيئية؛ الخلوية؛
العضوية وتعقب الحيوان بإكمله ودراسة تأكيد المفهوم ولآليات؛ كفاءة التقييم؛ إلخ) والإكلينيكة ‎١٠‏ (الطبيب البشري)؛ ليشمل تلك المعلومات والبيانات القيمة التي يتم التعرف عليها بالمركبات
الموصوفة في هذه الوثيقة والمستخدمة كعلاجات.
بالإضافة إلى ذلك؛ سيتم شرح الاختراع الحالي بالأمثلة. لا يجب أن تفسِّر هذه الأمثلة على أنها
مقيدة لنطاق الاختراع وفقاً لما هو مبين في عناصر الحماية.
١ 9/١
ارم أمثلة التخلية المثال رقم ‎١‏ - تخليق ‎(4-methylthiophenyl)-acetic acid methyl ester‏ وزوعمومج- ‏ > > ‎COOH Namco, FF‏ حص 2 ‎DME 03 |‏ | ل ‎I‏ ‏ص توووم ‎Hos ER‏ تمت إذابة ‎VAY‏ جم ‎٠١(‏ ملي ‎4-methylthiophenylacetic acid (Use‏ في ‎١‏ مل ‎«DMF‏ ثم © إضافة ‎٠.74‏ جم )11 ملي مول) :20110600 ؛ تم تقليب خليط الاستثارة لمدة ‎Ve‏ دقيقة تقريباً. بعد ذلك؛ تمت إضافة 4 مل ‎ICH;‏ مع الاحتفاظ بالتقليب عند درجة حرارة الغرفة ؛ ساعة. بمجرد انتهاء هذه الفترة الزمنية؛ ثم صب الخليط على ماء/تلج. نظراً لعدم حدوث أي ترسيبات؛ تمت إضافة إيثر واستخلاصه. تم غسل الطور العضوي بماء وبعد التجفيف على ‎sodium‏ ‎sulfate anhydride‏ + وتركيز الطور العضوي في مبخر دوار به ‎٠.57‏ جم (95.7 ملي مول؛ 0 2957 من الحصيلة) ‎Cu)‏ عديم اللون؛ حيث تؤكد بيانات منظار الطيف على الصيغة البنائية ‏المتوقعة. سيتم استخدام هذا المنتج في الخطوة التالية من عملية التخليق دون تنقية لأنه يوفر بقعة ‏فردية في ‎TLC‏ (مع التصفية التتابعية ل ‎.)١/5 dichloromethane/methanol‏ ‎RMN 'H (CDCI3): 7.2 (s, 4H) 3.7 (s, 3H) 3.5 (s, 2H) 2.4 (s, 3H CH3S) RMN ‏ا‎ ‎(CDCl): 171.5 136.9 130.4 129.4 126.4 51.6 40.2 15.5 (4-methylsulfonyl-phenyl)-acetic acid methyl ester ‏تخليق‎ —Y ‏المثال رقم‎ Ve ًَ T “coo Hy ‏مضه‎ © he COOCH,
AN EN
Hi Cs” ‏ص قيفو سم‎ ‏فضي‎
و تمت إضافة محلول ‎0١7 oxone‏ جم )04 ملي مول) قطرة قطرة في 80 مل ماء إلى محلول 4© جم ‎١7.©(‏ ملي مول) من المركب الذي تم الحصول عليه في المثال رقم ‎١‏ في ‎٠٠١‏ مل ميثانول؛ مع الاحتفاظ بالتفاعل في حمام ماء/ثلج. بمجرد إضافته؛ استمر التقليب لمدة © ساعات؛ مع السماح بوصول درجة الحرارة إلى مستوى درجة حرارة الغرفة. بعد ذلك؛ تم تركيز جزء © .من المذيب عند ضغط منخفض وترشيح المادة الصلبة المترسبة بغسلها بماء بصورة متكررة. بعد التجفيف؛ بلغ وزن هذه المادة الصلبة ¥ جرامات. تم استخلاص كميات مائية من الترشيح ‎dichloromethane‏ ¢ وغسل الطور العضوي ‎cela‏ وتجفيقه على ‎sodium sulfate anhydride‏ وتركيزه في مبخر دوارء للحصول على كمية منتج أكبر مما هو متوقع بمقدار ‎١‏ جم؛ بحصيلة ؛ جم ‎١7(‏ ملي ‎se‏ الحصيلة + + )7( تتم إذابة هذه المادة الصلبة بإذابتها عند ‎"2١‏ وبلغ نقاؤها ‏تؤكد بيانات منظار الطيف على الصيغة البنائية المتوقعة:‎ HPLC ‏بواسطة‎ 794 Vo
RMN 'H (CDO3): 7.9 (d, 2H), 7.5 (d, 2H), 3.7 (s,s 3+2H), 3.1 (s, 3H)
RMN 3 (CDO3): 170.80 140.13 139 130.33 127.63 52.31 44.49 40.82 bromo-(4-methylsulfonyl-phenyl)-acetic acid methyl ester : ¥ ‏المثال رقم‎
Br
TE GOOCH, 0 Pa oA] A nen o IJ GOOCH,
He] + [po Bn, Lo - © ‏؛ 14 جم‎ carbon tetrachloride ‏مل‎ ٠ ‏في‎ 6516 (Js ‏ملي‎ AVY) ‏جم‎ ٠١ ‏تمت إذابة‎ Ve azobisisobutyronitrile ‏ملي مول)‎ ١7١٠8( ‏جم‎ 7 ¢ N-bromosuccinimide ‏ملي مول)‎ V0) ‏لمدة ؟‎ Ar ‏في صورة أجزاء. تم تسخين خليط التفاعل عند‎ bromine ‏وإضافة ).+ مل‎ ١ ‏الا‎
دلرو ساعات» ثم ‎coy yo‏ وترشيحه وغسله ‎dichloromethane‏ . تم ‎Jue‏ ناتج الترشيح بماء؛ ثم بمحلول ملحي مركز. تم تجفيف المحلول ‎over anhydrous sodium sulfate‏ غير مائية وتركيزه بالتفريغ للحصول على ‎YA‏ جم زيت تم انتثاؤه بكروماتوجراف ومضي باستخدام ‎heptane/ethyl‏ ‎acetate‏ (1/1) في صورة مادة تصفية تتابعية. أدى تركيز الأجزاء الأكثر نقاء إلى الحصول © .على ‎١9.37‏ جم (7977.54 من الحصيلة) مركب ‎bromo‏ مشتق. mp: 81.8 - 83.390
NMR 'H (CDCla), 8: 7.9 (d, 2H), 7.75 (d, 2H), 5.4 (s, 1H), 3.8 (s, 3H), 3.1 (s, 3H).
NMR BeCpCls), 8,: 168.0 (C); 141.6 (C); 141.1 (C); 129.8 (CH); 127.8 (CH); 53.7 (CH); 44.7 (CH3) and 44.2 (CH3) ppm. 2-methyl-5-(4-methylsulfonyl-phenyl)-thiazol-4-ol ‏المثال رقم 4: تخليق‎ ٠ or HO. NO
HaCO,5~ ‏اص‎ Nee ‏ليمي‎ ‏الذي تم الحصول عليه في المثال رقم ؟ في‎ ester ‏جم )06.7 مللي مول) من‎ VY ‏تمت إذابة‎ ‏جم (4.74© مللي‎ £0 Ay pyridine ‏مل من‎ ١9 ‏وتم بعد ذلك إضافة‎ toluene ‏مل من‎ £0 ‏مول) من ©1100 . تم تسخين خليط التفاعل حتى 60م (درجة حرارة الحمام) مع التقليب‎ ‏ساعتني . وبعد ذلك تم ترك الخليط لكي يبرد وتم ترشيح الراسب الصلب وغسله بالماء‎ sad 5 ‏مل). تم تجفيف الناتج تحت‎ Vo ‏(مرتين‎ ether ‏مل) وبعد ذلك تم غسله ب‎ O00 ‏(مرتين‎
التفريغ لكي يتم إنتاج ‎١‏ جم ‎TV)‏ مللي مول؛ حصيلة ‎VEAT‏ 7) من المادة الصلبة الكريمية التي ‎gaan‏ عند 171-716 م. أظهرت القياسات الطيفية هيكل المنتج المتوقع. ‎RMN 'H (d°DMSO) 5: 11.8 (s, 1H) 7.8 (m, 4H) 3.1 (s, 3H) 2.6 (s, 3H) ppm‏ ‎(d°DMSO): 162.9 (C); 159.4 (C): 146.2 (C); 143.0 (C); 128.0 (CH): 126.1 o‏ هذا ‎RMN‏ ‎(CH); 104.4 (C); 44.2 (CH3); 19.9 (CH3) ppm‏ المثال رقم 0: تخليق ‎4-cyclopentyloxy-5-(4-methylsulfonyl-phenyl)-2-methyl-thiazole‏ ‏0 : ‎N‏ كاوق م 99 ‎CHy - | —Br —« — CHa‏ ‎DMF I | 5‏ 5 كجنوا حينم ثم ‎oe Jas‏ لاجم ) 9 مللي مول) من ‎١‏ الذي ثم الحصول عليه من المثال رقم ‎A.
A g¢‏ جم ‎le FLV) ٠‏ مول) من ‎potassium carbonate‏ في ‎٠٠١‏ مل _من ‎DMF‏ . تمت إضافة ‎VE cyclopentylbromide‏ مل ‎VY)‏ مللي مول) عن طريق التنقيط. تم تسخين الخليط عند ‎٠‏ م لمدة ¥ ساعات وتم تبريده بعد ذلك وتم صبه على خليط من الثلج//الماء وتم استخلاصه باستخدام ‎ethyl acetate‏ . تم ‎Jue‏ الطور العضوي باستخدام ماء ‎(da ٠٠١ opal)‏ وتم تجفيفه باستخدام ‎dried over anhydrous sodium sulfate‏ وتم التركيز لكي يتم إعطاء ‎VY‏ جم من ‎Vo‏ المادة الخام التي يتم تبلرها من ‎.)١/ ١( heptane/ether‏ نتج عن تنقية المنتج باستخدام الفصل الكروماتوجرافي الومضي وباستخدام ‎)١/ Y) heptane/ethyl acetate]‏ كمادة ‎dn ddan‏ ل
الوصول إلى ‎TY‏ جم )13.40 ‎Ale‏ مولء؛ 736.79 7# كحصيلة) من المركب ‎NY‏ نقطة الانصهار: ‎EN‏ 78.7-1١م.‏ ‎NMR 'H (CDCI3), 8: 7.9 (dd, 4H), 5.4, (m, 1H), 3.0, (s, 3H), 2.6, (s, 3H), 1.7-2.0 (m,‏ ‎8H) ppm‏ ‎NMR BC(CDCI3), 8: 162.6 (C); 159.5 (C); 138.3 (C); 137.1 (C); 128.1 (CH); 126.8 °‏ ‎(CH); 109.1 (C); 83.7 (CH); 45.0 (CH3); 33.5 (CH2); 24.1 (CH2); 20.4 (CH3) ppm‏ الأمثلة الحيوية ‎-١‏ الموضوعات تم إجراء الدراسة على عينات من الدم الطرفي مأخوذ من ‎heparinized‏ يتم الحصول عليه عن ‎٠‏ طريق الأخذ من أوردة المتطوعين الأصحاء ومن المرضى المصابين بالتهاب المفاصل الروماتويدي ‎.theumatoid arthritis‏ يكون المتطوعين الأصحاء هم معطو الدم تحت ظروف عادية في المستشفى. يكون مرضى التهاب المفاصل الروماتويدي الذين تضمهم تلك الدراسة عبارة عن المرضى الذين يعانون من الأعراض التشخيصية وفقاً للمبادئ التي وضحتها ‎American College of‏ ‎Rheumatology | ٠‏ ويعرض هؤلاء المرضى مرضا نشطا من الناحية الإكلينيكية مع مرور الزمن منذ اكتشاف المرض لديهم والذين تم علاجهم لمدة 1 أشهر على الأقل باستخدام ١7مجم/الأسبوع‏ بأخذ ‎de ja‏ عن طريق الفم من ‎-Methrotexate‏
— ¢ Y -— تم تحديد درجة نشاط المرض كما يلي: أ) 24528 أكبر من أو يساوي 7.7 و/أو ب) ‎١‏ أو أكثر من المفاصل المتورمة و“ أو أكثر من المفاصل التي بها ألم. وكمعايير استثناء تم أخذ ما يلي في الاعتبار: أ) المعاناة من أمراض معدية نشطة في زيارة الإشتمال؛ ب) المعاناة من أمراض ورمية قبل عملية الإشتمال؛ “) المعاناة من أمراض مجموعية أخرى أو أمراض مناعة ذاتية © معينة والتي لا تدخل في فترة الهدوء الكاملة وهي فترة تصل إلى سنة على الأقل قبل الزيارة التي يتم فهيا اكتشاف المرض؛ د) المعاناة في ألم شديد في الكليتين أو القلب أو الكبد أو الحالات غير المتعلقة بالتغيرات في تلك المستويات والتي يتم حثها عن ‎lel Gosh‏ المفاصل الروماتويدي كمرض أساسي؛ ه) المعاناة من الانتهاك الشديد للحالة العامة نتيجة ظروف غير متعلقة بالمرض الأساسي؛ و) تلقي معالجة باستخدام مركبات كورتيكوستيرويد؛ والمواد الكابتة ‎٠‏ لاللمناعة أو عقاقير الثبات الخلوي أو أي عقاقير أخرى لها فعالية معروفة أثناء العام السابق لزيارة الاشتمال باستثناء الجرعات الموضحة من ‎(VY ¢ Methrotexate‏ يتم الأخذ في الاعتبار حالات الحمل والنفاس في زيارة الاشتمال. : ‏تم التصديق على الدراسة عن طريق‎
Investigational Committee of the Alcala University, Madrid, Spain ‏؟- المواد‎ | ٠
MultiGuard Barrier tips (Sorenson, Salt Lake Cyty, Utah, USA) -
MicroAmp® PCR reaction 0.2 ml tubes (Cat. No. N8010540, Applied Biosystems,~
Forster City, CA, USA) ‏أ‎ 1
_ ‏ع‎ $ — . barcode (Applied Biosystems) ‏مع‎ le 55 ‏بصرية سريعة بها‎ Jeli ‏أطباق‎ -
Disposable Cell Scraper (3010 Costar, Cambridge, MA, USA)— ‏أطباق مزرعة أنسجة بها > عيون مسطحة القاع بها غطاء خاص بالتبخير‎ - (3 53046 Falcon, Becton Dickinson Labware, Franklin Lakes, 07417-1886, NJ, USA) ‏مسطحة القاع بها غطاء خاص بالتبخير المنخفض‎ Lie 96 ‏أطباق مزرعة أنسجة بها‎ - © - 353073 Falcon, Becton Dickinson Labware, Franlklin Lakes, 07417-1886, NJ, USA)
Greiner, Soria Greiner, Madrid, ( V ‏أطباق غير معقمة بها 97 عينا لها قاع على شكل حرف‎ ‏ا‎ (Espana (Brand, Alemania) ‏أنابيب بأستير التي تستخدم لمرة واحدة‎ -
Adjustable volume Pipettes Pipetman © de 20, 200, 1000 and 5000 ul (Gilson, — ٠
Francia) .Eppendorf multipipette 4780 (Hamburg, Germany) - ..Sterile tips Eppendorf (Hamburg, Germany) — .Virgin propilen sterile tips (Daslab, Madrid, Spain) — .(Daslab, Madrid, Spain) Je ٠١و‎ © ‏أنابيب البلاسيتك‎ - ٠ .)8 Falcon, Franklin Lakes, USA) ‏أنابيب الطرد المركزي المعقمة 510 +0 مل‎ -
AAA
ان - أنابيب بوليستيرين لقياس الخلايا © مل ‎.(BD Falcon, Franklin Lakes, USA)‏ - أنابيب استخلاص الدم مع ‎٠١ heparin‏ مل ‎{Venojet, Terumo Europe, Belgium)‏ - - أنابيب استخلاص البلازما ‎٠١‏ مل ‎.(BD Vacutainer, Plymouth, UK)‏ ‎Pipet filler, Pipetboy plus (Flow Lab., Germany) -‏ ‎Sterile filtres 22 um Millex-GS (Millipore, Molshein, France)— | 8‏ .(Hirschman, Germany) ‏أغلفة انزلاق من الكريستال‎ - 0 . Count chamber Neubauer (Saaringia, Germany)— - Vertical laminar flux chamber Herasafe HS12 (Heraeus, Germany) — -Heracell 150 (Heraeus, Germany) CO2 ‏المواقد الخاصة بمزرعة الخلية مع تنظيم‎ - . Beckman. Multifuge 3SR (Heraeus, Germany) ‏الطرد المركزي الميرد‎ - ٠ -(Selecta, Tarrasa, Spain) ‏مبرد عند حل م‎ - . Mycroscope Olympus 0115-2 (Olympus, Tokyo, Japan) -
Flow Cytometer FACScalibur (Becton Dickinson, Mountain View USA), with — . software and analyser BD Cellquest Pro v. 5.5.1 . BD FACS Arrray Bioanalyser - ٠ قدي
٠ Enzyme-immunoanalysis reader (Titertek Multiscan Plus, Flow laboratories) - . Radioactivity beta counter Beckman - . AutoMACS Separator (Myltenyi Biotec, Bergisch-Gladbach, Germany)— . Nanodrop (Thermo Scientific, Whalthan, MA, USA) — . GeneAmp 9700 PCR System (Applied Biosystems)— © .7900 HT Fast Real-Time Q-PCR System (Applied Biosystems)— ‏مواد التفاعل المستخدمة في فصل وتحديد المجموعات الفرعية من الخلايا‎ —F .Apiroserum (Ibys, Madrid, Spain) (SSF) ‏محلول كلوريد ملحي بسيط‎ - ٠ Lymphoprep (Ficoll-Hypaque, Nyegaard Co, Oslo, Norway) - . Blue Trypan (Flucke AG., Buchs SG., Germany)— | ٠ . (Becton Dickinson) PBS FACS FLOW - -(Reactivos de Sigma y Panreac) HEPES ‏محلول منظم من‎ -
American ( ‏و -11يطاء1/1. النشاط النوعي 60 كالوري/مللي مول‎ tymydine C[H}-T) - . (Radiochemicals, ITISA, Madrid, Spain ‎Ve‏ الأجسام المضادة أحادية النسيلة المستخدمة في الاختبار المناعي الومضي ودراسات عد الخلايا عند الارتجاع
— 7 ¢ — الجدول رقم ‎:١‏ الأجسام المضادة أحادية النسيلة المستخدمة في الدراسة ‎ae CD*‏ المجموعة الفرعية من الخلية المجموعة | ‎Al‏ ‏0 - الفرعية ‎FE || is‏ ‎T+‏ تقبل الجسم المضاد للخلية ‎FITC [gGl,‏ اللمفاوية ‎TCR/CD3— T‏ —— : م ¥ الكريات البيضاء الأحادية ‎١ ETT TLR‏ فيكو إيرثيرين من المستقبل المشترك ‎(PE) LBP-LPS‏ * تم تعريفها في ‎7th Workshop on Human Leucocyte Differentiation Antigens’‏ ". ؛- مواد التفاعل التي يتم استخدامها في مزرعة الخلية © - يتم تحضير الوسط الكامل من ‎Cambrex BioSciences 34800 Verviers, ) RPMI-1640‏ ‎aus «(Belgium‏ تزويده ‎ZV‏ من ‎٠٠١ L-Glutamine‏ مل مولار من ‎YO‏ مل مولار من ‎(Flow Lab., Irvine, California, USA) Hepes‏ . - المصل البقري فوتيل ‎(Gibco, Grand Island, NY, USA) (FCS)‏ . - مزرعة الخلية: تم استخدام الوسط الكامل عن طريق إضافة ‎7057٠١‏ . يتم ‎sled‏ عملية ‎٠‏ الإكمال عن طريق تسخين ‎dead)‏ إلى ‎OY‏ م لمدة £0 دقيقة. ‎Sigma Ref 21-8902, Lot#115K4132, Sigma, Madrid, )Phytohaemaglutinin M (PHA) -‏ ‎(Spain‏ .
_ $ AN — . (E. coli 0111: 34 strain, InvivoGene, San Diego CA92121, USA) LPS —
Britapen, Beecham ( ‏مجم/مل‎ ٠١ Sodium Ampycilline ‏الخليط المضاد حيويا: خليط من‎ -
Tamadit Lab., Dr. Esteve ( ‏مجم/مل‎ ٠١١ Gentamycin sulphate ‏رج و‎ Toledo, Spain
Fungizona, ( Jafal a ‏ميكرو‎ «© Amphotherycine B ‏وتمت إضافة‎ (SA..Madrid, Spain ‏إلى وسط مزرعة الخلية.‎ (Squibb, Esplugues, Barcelona, Spain ©
Orthoclone OKT3, Orthopharmaceutical ( ‏الجسم المضاد ل | 13 أحادي النسيلة‎ - .(Corporation, Raritan, NJ, USA
Clon 15128. Menarini, ) CD28 ‏ل‎ monoclonal antibody ‏الجسم أحادي النسيلة المضاد‎ - -(Madrid, Spain ‏والعد في الزمن الفعلي ل‎ mRNA ‏مواد التفاعل المستخدمة في النسخ العكسي والعزل‎ -# Ve
PCR (Q-PCR)
Illustra RNAspin mRNA 44% ‏طقم‎ - . ( 25-0500-72, GE-Healthcare,Buckinghamshire, UK ‏(رقم كتالو ج‎ ‏عال الكفاءة‎ cDNA ‏طقم الانتساخ العكسي ل‎ - -(No. 4368814, Applied Biosystems ‏رقم كتالوج‎ ( ٠
TagMan® Gene Expression Master Mix (Cat. No. 4369016, Applied BioSystems)
TagMan® Gene Expression Assay for human TNF-alpha ID number
HS00174128 m1 [FAM] (Cat. No. 4331182, Applied Biosystems)
PP
4326315E, Applied ‏(رقم كتالوج‎ [VIC] (beta actin} ACTB ‏المقارنة الداخلية‎ dae - .(Biosystems 1 الحصول على العينة الحيوية أ) الدم الوريدي ‎Venous blood‏ : تم الحصول على الخلايا أحادية النواة من الدم الوريدي الذي 8 تم تجميعه عن طريق الوخذ أمام المرفق. تم استخلاص ‎٠٠‏ مل من الدم وتم تخزينها في أنابيب من ‎lithium heparin (Venojet)‏ وتم تخفيفها بشكل إضافي باستخدام محلول ملحي ‎١ /١‏ (حجم/ حجم) وتم كل ذلك في ظروف معقمة. ب) تجميع المجموعات الفرعية من الخلية البشرية. ولكي يتم عزل ‎PBMC‏ ؛ تم فصل مكونات الدم المتبقية عن طريق تدرج الكثافة على مقياس فيكول. تعتمد الطريقة على الاختلافات في ‎٠‏ الكثافة الخاصة بخلايا الدم. وفي أنبوب طرد مركزي سعة ‎5٠0‏ مل يشتمل على ‎Ane‏ دم هيباريني مخفف و تم بحرص وضع ‎٠‏ مل من ‎Ficoll-Hipaque‏ (كثافة ‎Y.eVY‏ جم/مل). وبعد £0 دقيقة من الطرد المركزي (500 مرة لكل جرام)؛ تم الحصول على ثلاثة أصناف (كريات دموية حمراء ‎Ficoll s‏ وبلازما )وتم عزلها باستخدام اثنين من الأسطح البينية: تم وضع ‎PBMC‏ في الموضع الموجود بين البلازما التي تم تخفيفها وبين ‎Ficoll‏ ويمكن أن يتم ‎V0‏ تجميعه عن طريق السحب باستخدام أنبوب باستير. يتم تعليق الخلايا التي تم الحصول عليها بهذه الطريقة في 557 ويتم تعريضها للطرد المركزي ‎Wer)‏ مرة لكل جرام في ‎٠١‏ دقائق)؛ يتم ألقاء المواد الطافية إلى الخارج (أثناء عملية الغسل) ويتم إعادة تعليق حبة الدواء الخلوية في
PBS ‏من‎ 7٠١ ‏باستخدام‎ RPMI 1640 ‏وسط‎
ج) تنقية الكرية البيضاء وحيدة الخلية ‎PBMC‏ : تم عزل الكريات البيضاء وحيدة الخلية من ‎PBMC‏ عن طريق تخزين الخلية المغناطيسي الآلي باستخدام خرزات مغناطيسية مغلفة بأجسام مضادة نوعية من ‎CD14‏ . تكون الأجسام المضادة الفرعية ‎CD14‏ عبارة عن معقد مستقبل ‎LPS‏ ‏على سطح الكريات البيضاء أحادية النواة ويتم التحكم في النمو الخاص بها عن طريق تقييد
© التعبير الخاص بالكريات البيضاء الأحادية ولكن في المجموعات الفرعية الأخرى من ‎PBMC‏ ‏يتم السماح للتنقية السريعة وذات الكفاءة العالية التي تتم في خطوة موجبة واحدة من الكريات البيضاء أحادية النواة ويتم تصنيفها من المجموعات الفرعية من ‎PBMC‏ المتبقية باستخدام وسيلة الفصل المتاحة تجارياً ‎Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Germany, ) AutoMACS‏ 02-29). 5 تنفيذه هذا الإجراء باتباع التعليمات المفصلة الخاصة بالمصنع. وعلى نحو
‎٠‏ مختصر؛ تم إعادة تعليق ‎٠١‏ * من ‎PBMC‏ في وسط كامل في أنابيب معقمة من البلاستيك سعة © مل وتم احتضائها عند ؛ م باستخدام الجسم المضاد 014© الذي تم تغليفه بخرزات مغناطيسية ‎CD14 Reagent, Miltenyi Biotec)‏ 05ه1انصنا©)_وذلك ‎٠١ sad‏ .دقيقة؛ ‎Aug‏ ‏تعريضه إلى وسيلة تصنيف خلوي من نوع ‎(Miltenyi Biotec) AutoMACS™‏ باستخدام برنامج تصنيف واختيار موجب مزدوج.
‏5 يتم أولاً احتجاز كريات الدم البيضاء الأحادية في اثنين من أعمدة ‎AUtOMACS‏ وتتم التصفية التتابعية لمجموعات الخلايا الأخرى ويتم فصلها عن الكريات البيضاء. تتم التصفية التتابعية للكريات البيضاء بعد إطلاق المجال المغناطيسي المستخدم في الأعمدة ويتم الاستخلاص في أنابيب بلاستيكية معقمة سعة © مل.
—-— ي١‎ —
7 دراسة الحساب والإتاحة الحيوية
يتم في كل معلقات الخلية تحديد تركيز الخلية والإتاحة الحيوية باستخدام 7001 من تخفيف
للتريبات الأزرق وعن طريق العد في حجيرة الميكروسكوب. يتم تحديد النسبة المئوية للخلايا
الحية عن طريق استبعاد الخلايا الميتة. تستمر التجربة عندما تكون قابلية الحياة أعلى من ‎J80‏
‎=A ©‏ عد ‎cytokines‏ الموجودة في المصل عن طريق إليسا
‏لكي يتم حساب تركيز ‎cytokines‏ المصل؛ يتم تخزين الدم الذي تم استخلاصه في أنابيب
‏باستخدام وبدون استخدام مضاد للتخثر (يتم جمعه عن طريق الوخز في الأوردة الموجودة قبل
‏المرفق ومن خلال قثطرة الشريان على الترتيب). تم السماح للدم بالتخثر عند درجة حرارة
‏الغرفة وفي المعمل؛ وبالإضافة إلى ذلك؛ يتم فصل فصل المصل عن طريق الطرد المركزي ‎Tee) Ye‏ مرة لكل جرام في مدة ‎٠١‏ دقيقة). تم تجميع ‎of gall‏ الطافية وتم ترشيحها وتنقيتها
‏وتقسيمها في أجزا ع متساوية وتخزينها عند -. ل : ‎٠‏ ثم ‎a)‏ 0 اختبارات التركيز الخاصة الست
‎.7 ‏مختلفة عن طريق استخدام الأطقم التجارية التي تم وصفها في الجدول رقم‎ cytokines
‏الجدول رقم 7: أطقم ‎La)‏ التجارية التي تم استخدامها في هذه الدراسة
‏حساسية المواد الطافية تقاس ‎alkyl)‏ و (بيكو جرام/مل) دالتون) 2 ألفا | ‎SAY‏ جرام/مل
‎Y —‏ م تم إزالة تجمد ‎J gall‏ الطافية عند درجة حرارة الغرفة وتم توجيهها لمضادة ‎cytokine‏ الخاص بها عن طريق تثبيتها في قاع طبق واحتضانها أثناء الزمن المتغير. تم إجراء الغسل؛ وتمت إضافة المواد التي توصي بها الشركات محل الاهتمام لكي يتم السماح بالتحليل عن طريق قياس اللون وذلك بالنسبة لكمية ‎cytokine‏ الموجودة في المادة الطافية. تم اختبار النتائج باستخدام © وسيلة قراءة الاختبار الإنزيمي المناعي: ‎Plus (Tiertek Multiscan Plus, Flow Laboratories)‏ عع01انالن]1._ تمت مقارنة النتائج مع المنحنى القياسي الذي تم الحصول عليه عن باستخدام تركيزات معروف من ‎cytokine JS‏ كما تم توفير ذلك من خلال الشركة. تم تحليل المنحنيات القياسية والاستنتاجات التالية باستخدام برنامج 4.1 ‎Delta Soft II version‏ ‎(Biometallics, Inc.) ٠‏ من شركة ‎Apple Macintosh‏ للكمبيوتر. تم تحويل تركيزات ‎cytokine‏ ‏إلى نسبة مولارية لكي يتم حساب النسب الجزيئية لكل ‎Alls‏ وعدد الجزيئات القابلة للذوبان. 4- اختبارات النمط الظاهري المناعي تم استخدام تقنيات التألق المغناطيسي المناعي المباشر التي تستخدم اثنين من الألوان مع الأجسام المضادة أحادية النسيلة أو ‎FITC‏ أو ‎phycoerythrin‏ المرقم ‎(PE)—‏ يكون ‎FITC‏ ‎VO‏ عبارة عن مادة من ‎ALY fluorescent‏ للحث باستخدام 44848 من الليزرء والذي يقوم ببعث ‎YOY‏ ‏نانو متر ويمكن كشفه وتميزه بسهولة عن الضوء الخطي من الليزر وطول الموجة الخاص ب ‎PE‏ .عن طريق ‎dae‏ تدفق الخلايا التجاري. يكون ‎PE‏ عبارة عن مادة من ‎fluorescent‏ قابلة للحث ب88؛ نانو متر ليزر؛ والتي تعمل على بعث ‎07٠0‏ نانو متر ويمكن كشفها وتمييزها er -
بسهول عن طريق عداد تدفق الخلايا. وباستخدام الأجسام المضادة التي تم وصفها في الجدول
رقم ‎١‏ يتم إجراء الترقيم المباشر: ‏ ؛
ترقيم 01140: تتكون العملية من الترقيم باستخدام أطباق بها 96 ‎lie‏ لها قاع على شكل حرف
‎LV‏ وفي كل خلية؛ يتم وضع 0 ‎٠١ X‏ خلية وبعد ذلك يتم الطرد المركزي عند 5060 ‎X‏ عجلة
‏© جاذبية وذلك لمدة © دقائق. وبعد انتهاء عملية الغسل؛ تم ‎sale)‏ تعليق الخلايا في © ميكرو لتر
‏من الجسم المضاد ‎gala]‏ الخلية الذي تمت إضافته. تم تعليق الخلايا مرة أخرى وتم احتضان
‏الأطباق في الظلام؛ وذلك لمدة ‎7١‏ دقيقة عند 4 م. وبعد ذلك؛ تمت إضافة ‎١5١‏ ميكرو لتر من
‏85 وتم الغسل مرتين أخريين. وفي النهاية؛ تم إعادة التعليق في ‎١5٠0‏ ميكرو لتر من ‎PBS‏
‏وتم إعادة التجميع في أنابيب وسيلة عد خلوي وتتم إضافة ‎PBS‏ حتى الوصول إلى حجم نهائي ‎٠‏ يصل إلى ‎١.‏ مل. ض
‏وبالنسبة للعد ؛ تم استخدام مقياس تدفق الخلايا ‎39a) FACSCalibur‏ بليزر ‎argon‏ والذي يبعث
‎$l EAA‏ متر لكي يتم حث ‎FITC‏ وتألق ‎fluorescence‏ يقوم الجهاز أيضاً بالإضافة إلى
‏قنوات التألق؛ بتوفير المعلومات حول ‎(FSC) ana‏ والتعقيد الخلوي ‎(SSC)‏
‏تم في الدراسة أيضاً استخدام عينات المقارنة السلبية وخلايا ليست مرقمة وعوامل أخرى غير ‎VO‏ مرتبطة بالترقيم مع الأجسام المضادة أحادية النسيلة والتي يكون لها نظائر متماثلة مع تلك
‎.) 8,70: 1gG2a FITC: 01510: IgG1-FITC) ‏المستخدمة في الدراسة‎
‏تم إجراء تحليل لبيانات قياس التدفق لكي يتم اختبار درجة النقاء الخاصة ‎AUtoMACS—‏
‏والذي تم فصله من ‎WA‏ الدم المفصولة أحادية النواة الطرفية باستخدام برنامج ‎Flow Jo‏
‎. Software V8.4 (Tree Star, Inc., Ashland 97520, OR, USA)
‎١ ١/١
Ceo ‏في الدقيقة). تم إجراء كل اختبار ثلاث مرات‎ sac) ‏بالعدة في الدقيقة‎ DNA ‏تم التعبير عن تخليق‎ ‏بالنسبة لمتوسط الدراسة الثلاثية التي‎ 7٠١0 ‏وتم استبعاد البيانات التي بها نسبة تغير أكبر من‎ ‏توضح الخطأً التقني أو توضح التلوث في الخلية. تم إجراء العمليات على الخلية باستخدام كمية‎ ‏ميكرو لتر. تم أولاً اختبار‎ 7٠0 ‏ثابتة من الخلية لكل عين وأيضاً باستخدام حجم ثابت يصل إلى‎ ‏عن طريق رسم منحنيات الاستجابة-الجرعة والاستجابة-الزمن.‎ cytokines y ‏محدثات التفتت‎ JS 8
LAY ‏الاختبارات الخاصة بالتحديد التحليلي عن طريق التدفق الكمي والمتغير المتعدد‎ -٠ ‏طبقاً لتعليمات المُصنع.‎ CBA ‏إجراء بروتوكول‎ 23 (BD™ Cytometric Bead Array ‏ه‎ CBA) ‏يتم في النهاية اختيار تلك التي‎ .١ ‏تم إجراء اختيار الجسيمات الدقيقة باتباع ملخص الشكل رقم‎ ‏تبين خطوة أقل بالنسبة للتراكب الطيفي.‎ ‏تم استخدامها أثينا تطور تلك التجربة‎ Jeli sale JS ‏تم توضيح العد المشابه من الدفعة الخاصة‎ ٠
BD FACS Array ‏الحصول على العينات باستخدام‎ 2 of ‏في الجدول رقم “ والجدول رقم‎ ‏وتم إجراء‎ Bioanalyser System (FACSArray, Becton Dickinson, San Jose, CA, USA) ‏كمبيوتر‎ Je FCAP Array (Becton Dickinson) ‏التحليل الخاص بالنتائج باستخدام برنامج‎ ‏شخصي. وعلى نحو مختصرء؛ يتكون البروتوكول من طبق للغسل المسبق يشتمل على محلول‎ ‏تعليق خليط من الجسيمات الصغيرة التي تم‎ sale] ‏منظم خاص بالغسل. وبعد التصفية؛ يتم‎ 0 ‏الحصول عليها من وسيلة التدوير. تتم إضافة كميات قياسية وعينات قياسية بتخفيف مناسب.‎ ‏ساعة؛ تمت إضافة مادة تفاعل‎ sad ‏وبعد التقليب المستمر أثناء عملية الاحتضان التي تستمر‎ ‏خاصة بالاكتشاف وتم احتضائها مرة أخرى لمدة ساعتين عند درجة حرارة الغرفة. وبعد الغسل‎ ‏تم إجراء عملية الرصد من خلال وسيلة عد الخلايا أثناء تدفقها.‎
Yo
‎-٠‏ دراسة مزارع الخلية والدراسات الوظيفية الظروف العامة للمزرعة: تم إجراء جميع عمليات المزرعة في ظروف معقمة وباستخدام غرفة ارتجاع صفائحية رأسية وأيضاً باستخدام مواد معقمة يتم استخدامها لمرة واحدة أو مواد يتم تعقيمها باستخدام ‎ethylene oxide‏ أو جهاز تثبيت. تم الاحتفاظ بالمزارع في فرن عند ‎TV‏ . © وتحت ‎To‏ 602 و 755 من الرطوبة النسبية. )= دراسة التكاثر باستخدام عصتة دو 7-[3]11 تعاني محدثات التفتل الخيطية المستثارة والخلايا اللمفاوية من تكوين الأرومة وعمليات التمايز الخلوي. تكون الطريقة التي تم استخدامها لحساب التكاثر الخلوي عبارة عن تضمين ‎[HI‏ ‎Thymidine‏ في 108_الجديد الذي تم ‎caidas‏ وتم اكتشاف انبعاث إشعاع بيثا من مستخلصات ‎Ve‏ مزارع الخلية التي تم تجفيفها (التي تمت إليها إضافة قاعدة ثلاثية) قبل انتهاء هذا الإشعاع وتم جمع الخلايا. وفي التجارب المختلفة الخاصة بدراسة التكاثرء يتم تضمين المستحضرات الخلوية النقية في أطباق ذات أرضية ملساء بها 96 ‎le‏ وعند تركيزات تصل إلى ‎٠١ xo‏ خلية/العين ‎Yeo)‏ ميكرو لتر من حجم كلي) وذلك في وجود تركيزات مختلفة للعديد من محدثات التفتل والتكرار الثلاتي على مدى ؛ أيام من المزرعة. ‎٠5‏ تمت دراسة الاستجابة المعتمدة على الكثافة ونوع الخلية وأيضاً زمن زراعة عامل التفتل وتركيزه. وقبل انتهاء الزراعة الخلوية بمدة من ‎7١‏ إلى ‎YE‏ ساعة؛ تمت إضافة ‎١‏ ميكرو جرام من عسنهن(7-[11] ‎Ci‏ لكل عين. تم جمع الخلايا عن طريق وضعها في مرشح زجاجي وباستخدام وسيلة تجميع مزرعة نوعية. ‎Yay)‏
—- 3 3 —
Jal Kit CBA ‏الخاص بالبروتين البشري‎ Multiplex Flex Set ‏الجدول رقم ؟: نظام‎ ‏للذوبان‎ ‏ل وج‎ 811 ...3455-801 ‏مخفف مادة التفاعل الخاصةا‎ ‏بالاختبار‎ ‎ore Lie Jom 9 ‏سوج‎ Instrument Setup Bead A9
ARLYN 400 VAS) O) Instrument Setup Bead F1 #1774 4000 FACED) Instrument Setup Bead F9 q¢49A PE Instrument Setup Bead F1
Tom [| oiewa ‏بيكو جرام‎ ٠١١ ١ 4 ‏لالم‎ IL-8 (A9) ‏/مل‎ ‏بيكو‎ 219 [avian 0/4 1-10 87( ‏جرام/مل‎ ‏بيكو‎ ٠.١ ‏لا عم‎ TNF-a (D9) ‏جرام/مل‎ ‏بيكو‎ ٠8 ‏حلم‎ 4 IFN-y (E7) ‏جرام/مل‎ ‏فضي‎
‎ov —‏ -— الجدول رقم 1€ دفعات مواد التفاعل الخاصة بتصميم طقم ‎CBA Flex Set‏ مادة التفاعل المقياس الجسيمات التي ‎١‏ التألق ‎١! (PE)‏ مادة التفاعل تم الحصول عليها ‎ers | wwe | were | LNGD‏ ‎vn [een |‏ ‎-V‏ تنقية ‎mRNA‏ ‏تم إجراء عزل ‎mRNA‏ باستخدام طقم تنقية ‎RNAspin‏ 1111 طبقاً لتعليمات ‎add‏ التي تم 2 توضيحها في ) رقم كتالوج 24-0500-72( . وعلى نحو مختصر 6 حتى الوصول إلى تجميع © ‎xX‏ ‎٠‏ ' خلية عن طريق الطرد المركزي والتحلل عن طريق إضافة محلول منظم ‎RAT‏ إلى ناتج التحلل وتم الخلط بشكل عنيف وتكوين دوامات. تمت إضافة حجم من 776 من ‎ethanol‏ ‏ناتج التحلل وتم خلطه بشكل عنيف وتحميله على عمود ربط ‎RNA‏ . تم الطرد المركزي لمدة ‎٠‏ ثانية عند 80060 عجلة جاذبية أرضية لكي يتم السماح ‎mRNA‏ بالارتباط بقالب العمود. ‎٠‏ تمت إزالة الملح من العمود عن طريق محلول منظم لإزالة الملح من الغشاء ‎(MDB)‏ وتم الطرد المركزي لمدة دقيقة واحدة عند ‎٠١١٠٠١‏ عجلة. تمت إزالة ملوثات ‎DNA‏ عن طريق إضافة 90 ميكرو لتر من ‎DNAase Jeli ada‏ على القالب وتم الاحتضان لمدة ‎V0‏ دقيقة عند درجة حرارة الغرفة. تم غسل قالب العمود مرة باستخدام محلول ‎RA2 alate‏ ومرتين باستخدام محلول منظم ‎RA3‏ . وفي النهاية تمت التصفية التتابعية ل ‎RNA‏ باستخدام ‎٠٠١‏ ميكرو لتر من ‎H20‏ ‎Yev)‏
‎A —‏ م وتم العد باستخدام . ‎Nanodrop‏ والمقياس الخاص بالانخفاض الطيفي الذي يستخم برنامج ‎Nanodrop's version 1.2‏ والذي يتم تخزينه عند درجة حرارة تصل إلى ‎Ae=‏ . . 4- الانتساخ العكسي من ‎cDNA J mRNA‏ تم إجراء الانتساخ العكسي لهاك إلى ‎cDNA‏ باستخدام طقم الانتساخ العكسي والذي © يستخدم طقم انتساخ عكسي عال الكفاءة ‎(Cat.
No. 4368814, Applied Biosystems) cDNA‏ وذلك باتباع تعليمات المُصنع التفصيلية. وعلى نحو مختصر؛ يتم الخلط باستخدام أنابيب ‎٠.7‏ ‏مل ‎PCR‏ 0.05 ميكرو جرام من ‎mRNA‏ من باستخدام ؟ ميكرو لتر من محلول منظم ‎RT‏ ؛ و8١‏ ميكرو لتر من خليط ‎٠٠١( 25x NTP‏ مل مولار) و7 ميكرو لتر من ‎1179٠١0‏ من البوادئ العشوائية؛ ‎١‏ ميكرو لتر من إنزيم النسخ العكسي ‎MultiScribe‏ و 5.7 ميكرو لتر من ‎Ve‏ الماء الخالي من ‎nuclease‏ في حجم نهائي يصل إلى ‎٠١‏ ميكرو لتر. تم إجراء تفاعل الانتساخ العكسي باستخدام ‎(sl GenAmp 9700 Thermal Cycler (Applied BioSystems)‏ يستخدم البرنامج التالي: تستغرق إحدى خطواته ‎٠١‏ دقائق عند ‎Yo‏ م وتستغرق خطوة أخرى ‎٠١‏ دقائق عند ‎Yo‏ مم وتستغرق خطوة أخرى ‎VV‏ >‘ تستغرق الخطوة النهائية © ثوان عند ‎Ao‏ م . - الاختبار في الزمن الفعلي ل ‎Q-PCR‏ ‎٠5‏ .تم إجراء ‎PCR‏ الكمي باستخدام ‎TNF‏ -ألفا وتعبير ‎MRNA‏ الذي تم إجراؤه باستخدام اختبار ‎(ID.No.
Hs00174128_m1, Applied Biossytems) TNF TagMan® Gene expression Assay‏ ‎TagMan® Gene Expression Master Mix (Cat.
No. 4369016, Applied Biosystems)‏ وذلك بإتباع تعليمات المُصنع. تم استخدام ‎due‏ المقارنة باطنية النمو من ‎Beta Actin‏ البشري ‎No. 4326315E)‏ 080)_وذلك لكي يتم حساب تعديل طيات ‎TNF‏ - ألفا عند تنشيطها باستخدام
وه
انتساخ جين ‎Ul TNF‏ على نحو مختصر؛ تمت التفاعلات في أطباق ذات 96 ‎le‏ من نوع
‎Fast Optical‏ بها كود على هيئة أعمدة ‎(Cat.
No. 4346906, Applied Biosystems)‏ في حجم
‏نهائي ‎٠١‏ ميكرو لتر/ عين. تم احتضان خليط التفاعل لكل عين: 0 ميكرو لتر من ‎«DNA‏
‏و١٠‏ ميكرو لتر من ضعفي الخليط الرئيسي للتعبير عن الجين ‎Tagman®‏ و7 ميكرو لتر من
‏© تجربة التعبير الجيني من نوع ‎Tagman®‏ ل ‎Yo‏ ضعف — ‎Wl - TNF‏ (و/ أو ‎(Beta Actin‏
‎Vy‏ ميكرو لتر من إنزيز نيوكيلاز الخالي من 11:0. تم تشغيل الأطباق الضوئية في.نظام 450ل
‎(Cat.
No. 4351405, Applied Biosystem) 7900 HT Fast Real-Time PCR Q-PCR‏ باستخدام
‏ظروف التحلق الحراري: الخطوة ‎١‏ درجة حرارة الاحتجاز )00 0 م) لدقيقتين؛ الخطوة 1:
‏درجة حرارة الاحتجاز )40 م) ل ‎٠١‏ دقائق؛ ‎TO‏ دورة: درجة الحرارة )40 »( لمدة ‎١١‏ ‎٠‏ ثانية؛ درجة الحرارة ‎(oT)‏ لمدة دقيقة. أجريت التكرارات في كل العينات كعينة مقارنة فنية
‏ولتجنب التعامل مع الأخطاء. تم تحليل كل الكميات النسبية للتضخيمات باستخدام برمجيات ‎RQ‏
‎-(Applied Biosytems) Q-PCR ‏المضمنة في أجهزة‎ Manager 2
‏التحليل الإحصائي
‏تم تقديم الاختبارات التجريبية على هيئة المتوسط والانحراف المعياري والأخطاء المقدرة ‎٠5‏ للمتوسط؛ وفقاً لنوعية التوزيع.
‏للمزيد من التحليلات الإحصائية؛ تم ‎Yl‏ تحليل طبيعة التوزيعات باستخدام المقارنة المعيارية
‎.Shapiro-Whilk‏ تم استخدام التضاد الذي ليس به متغيرات ل 11 ‎Mann-Whitney‏ _لعقد
‏المقارنات. في جميع الحالات؛ تم تقييم مستويات التميز الإحصائي الأقل من 75 (م < ‎(rere‏
و هس دم التحليل الإحصائي ببرمجيات : ‎SPSS Inc.
Headquarters, 233 5. Wacker Drive, 11th floor.
Chicago, Illinois SPSS 11.0‏ .60606 نتائج الدراسات الخاصة بتأثيرات معدل المناعة للمركبات ‎Veg dy ely 0 of‏ و7 ‎AAA NT Yo °‏ تأثيرات معدل المناعة الخاص بإنتاج ‎TNF‏ - ألفاء ‎TFN‏ جاما وغيرها من ‎cytokines‏ بخلايا الدم المحيطية أحادية النواة ‎(PBMC)‏ على المتبرعين الأصحاء والمرضى بالتهاب المفاصل الروماتويدي. المثال رقم )1( تأثيرات المركبات © و١١‏ على إنتاج ‎TNF‏ ألفا ‎Ve‏ تمت أولاً دراسة تأثيرات المركبات © و7١‏ على إنتاج ‎TNF‏ - ألفا بواسطة المتبرعين الأصحاء ‎PBMC‏ في وجود ‎LPS‏ أو عدم وجوده. تم استنبات ‎PBMC‏ من متبرعين أصحاء )0 ‎Yo x‏ ‎WDA‏ عين؛ ‎٠٠00‏ ميكرو لتر) على التوازي في ضعفين في أطباق مزرعة أنسجة؛ ذات 6 ‎clic‏ وذات قاع مسطح وبها غطاء لتقليل التبخير ) ‎Falcon, Becton Dickinson‏ 353072 ‎(labware, Franklin Lakes, USA, 07417-1886 NJ‏ في وسط مكمل ‎RPMI-1640)‏ مع جلوتامات ‎«(Belgium 34880 Verviers 5 «Cambrex Biosciences 5 « Cat BE-12-70F‏ مكمل ‎JY 3‏ مصل جينين بقري )26140-079 ‎(origin USA, 061560 ref.‏ ووصل تركيز المذيب إلى ‎Ne * ٠‏ بمفرده أو مكمل ب ‎٠١‏ ' مولارء أو ‎٠١‏ ” مولار أو ‎٠١‏ * مولار للمركب الموضح؛ وفي وجود وعدم وجود ‎V+) LPS‏ ميكرو جرام/ مل؛ سلالة ‎coli LPS 0111:B4‏ .كل ‎(San Diego CA92121 USA « InvivoGene‏ أثناء ‎Y¢‏ ساعة. ‎AERA‏
تم تجميد المحاليل الطافية للمزارع ‎a Te - die‏ وتم تحديد كمية تركيز ‎TNF‏ بالأنواع المحددة ل ‎ELISA‏ (تجربة الامتصاص المترابط بالإنزيم للكشف الكمي عن عامل تنكرز الورم ألفا: بواسطة ‎TNF‏ ألفا البشري ب ‎ELISA BM S223/4TEUCE, Bender Med System Inc,‏ ‎-(Burlinghane CA 94010 ©‏ الجدول رقم 5 إنتاج ‎TNF‏ - ألفا في ‎PMBC‏ عن طريق متطوعين أصحاء في وجود المركب رقم 8. تم توضيح النتائج كالناتج المتوسط + قيم الخطأً القياسي من ‎cytokine‏ الذي تم إفرازه. تم توضيح النتائج الهامة إحصائياً بالخط الكبير مع القيم المناظرة لها م (القيم المتعلقة بالمادة ‎٠‏ الناقلة لكل الظروف التجريبية) والتي تم توضيحها في الأقواس. إنتاج- ‎TNF‏ ألفا في ‎PMBC‏ من متطوعين أصحاء ( بيكو جرام/مل) المتوسط | ‎١4٠.4‏ + 58 + 17 + الكل + ‎Yio‏ ‎AY) YE..¥Y (+-A4Y) ٠١١7 YYV.Y‏ أ( ‎2.7١‏ ض ‎٠5‏ | ...هه + 7 + 4 + 1791 + مجم/مل) ‎YY1.4‏ 7 14 779.1 ‎£v) (+-AaY)‏ +( ( ف(
وكما تم توضيحه في الجدول رقم #: فإن ‏ وجود المركب رقم © في المزارع؛ عند تركيز ‎٠‏ ” مولار يقلل بشكل كبير إنتاج ‎TNF‏ -ألفا عن طريق ‎PBMC‏ من متطوعين ‎clad‏ تم حثهم — ‎p) LPS‏ > 8 يبين الشكل رقم 7 أن وجود المركب ‎١١‏ في المزرعة؛ عند تركيز ‎٠١‏ * مولار و١٠‏ 7 © مولار_يقلل بشكل كبير إنتاج ‎TNF‏ - ألفا كما تم قياس ذلك عن طريق المادة الطافية في مزرعة ‎LPS‏ التي تم ‎LPS Wha‏ (م > #..). علاوة على ذلك؛ يقلل المركب ‎VY‏ عند تركيز ‎٠١‏ مولار من الإنتاج التلقائي ‎TNF‏ -ألفا عن طريق ‎PBMC‏ . الجدول رقم ‎:١‏ إنتاج ‎TNF‏ - ألفا في ‎PMBC‏ عن طريق متطوعين أصحاء في وجود المركب رقم ‎.١‏ تم توضيح النتائج كالناتج المتوسط + قيم الخطأً القياسي من ‎cytokine‏ الذي تم إفرازه. ‎Ve‏ تم توضيح النتائج الهامة إحصائياً بالخط الكبير مع القيم المناظرة لها م (القيم المتعلقة بالمادة الناقلة لكل الظروف التجريبية) والتي تم توضيحها في الأقواس. إنتاج- ‎TNF‏ ألفا في ‎PMBC‏ من متطوعين أصحاء ( بيكو جرام/مل) ‎ns‏ المادة الناقلة ‎1-٠‏ مولار ‎7-٠١‏ مولار المتوسط ‎VE) Yer EAE NYY | Feo | ENN AL‏ +( ‎Avoios‏ ا في ‎hd 1)‏ :( ‎EAV.VE + AFA. [£10064 ١ FOALAY ٠١5‏ (هت...) مجم/مل) م8 0.7 ‎Lv °)‏ ْ(
اسل تم أيضاً توضيح التأثيرات الخاصة بتعديل المناعة للمركب رقم ‎VY‏ على لوحة إنتاج ‎cytokine‏ ‏عن طريق ‎PBMC‏ أو بعد استثارة الخلايا وحيدة النواة باستخدام ‎LPS‏ بمفرده أو تنشيط الخلايا اللمفاوية باستخدام توليفة من الأجسام المضادة أحادية النسيلة من ‎CD3‏ و0028 . تم إجراء هذه الدراسية في وجود أو غياب جرعات تمت معايرتها من المركب رقم ‎١‏ في المزراع الخاصة ‎PBMC — 8‏ التي تم الحصول عليها من متطوعين أصحاء ومرضيى مصابين بالتهاب المفاصل الروماتويدي . تمت زراعة ‎٠١ X ©) PBMC‏ ') خلية/العين) من ‎١“‏ متطوعاً بصحة جيدة في وسط مكتمل ‎٠‏ ميكرو لتر تم تزويده بأعلى تركيز لمذيب ‎٠١(‏ * مولار) أو ‎٠١‏ ” مولار و ‎٠١‏ ' مولار _من المركب رقم ‎١١‏ في وجود أو في غياب ‎٠١( LPS‏ ميكرو جرام/مل) أثناء ‎Ye‏ ‎٠‏ ساعة. تم تجميد المادة الطافية من المزارع عند ‎a Yeo‏ وتم العد عن طريق مجموعة ‎BD‏ ‎Bioanayliser (BD Biosciences Cat No. 340128, San Diego CA 92121)‏ 205 باستخدام مواد تفاعل خاصة بالاختبار المتزامن لتركيز ‎cytokine‏ الموضع ) ‎CBA Flex Multiplex Set‏ ‎(BD™ Cytometric Bead Array, CBA: IL-8, 11-10, TNF-alpha and IFN-gamma Becton‏ ‎(Dickinson Biosciences Pharmingen, San Diego CA 92121‏ . ‎VO‏ يقلل وجود المركب ‎١١‏ في المزرعة؛ عند تركيز ‎٠١‏ * مولار و١٠‏ ” ‎SE Mee‏ كبير إنتاج ‎PBMC‏ من المتطوعين الأصحاء حيث يتم الحث ب178 بطريقة إحصائية إلى حد كبير ‎)0.٠5 > p)‏ (الشكل رقم 9). وعلى العكس من ذلك؛ لا يتم تعديل إفراز ‎TNF‏ -ألفا الذي يتم ‎dia‏ عن طريق ‎PBMC‏ ‏باستخدام الأجسام المضادة أحادية النسيلة المضادة ل03© و0028 ‎lly‏ تم حثها ‎PBMC—‏ ‎Fav)‏
— $ = — ولا يتم ‎Lad‏ تعديل الانتاج التلقائي (كما تم ملاحظة ذلك في وجود المثيرات الخارجية) عن طريق المركب رقم ‎AY‏ ‏الجدول رقم 7: : إنتاج ‎TNF‏ -ألفا في ‎PMBC‏ عن طريق متطوعين أصحاء في وجود المركب رقم ‎.١١‏ ‏© تم توضيح النتائج كالناتج المتوسط + قيم الخطأً القياسي من ‎cytokine‏ الذي تم إفرازه. تم توضيح النتائج الهامة إحصائيا بالخط الكبير مع القيم المناظرة لها م وتم توضيح (القيم المتعلقة بالمادة الناقلة لكل الظروف التجريبية) في الأقواس. إنتاج- ‎ll TNF‏ في ‎PMBC‏ من متطوعين أصحاء ( بيكو جرام/مل) المتوسط 64 + | سخا + ‎٠... + VITAE] £YAV.AY ١‏ 0 ج١١ ‎(+-€YY) Oa, vo‏ 0 م مج )10-+( ‎(+.v£9)‏ ‎٠١5‏ مجم/مل) 17 + ‎١7‏ + 64 + 177/781 + مم ‎٠8 ١ ٠» ٠*٠. ٠ ٠١١‏ هم ‎١ va,‏ ‎EEE‏ ‎7١ + (Yo.
A) Y CDs‏ .72+ 4.24.2 + لاحت مد + ...م ‎Yo)‏ نانو ‎(+.£YY) Woon VAY] Te‏ جرام/مل) + ‎voy)‏ +( مضاد 0028 ‎/١(‏ ‎o— ١١. xX VY‏ (
في تجربة أخرى؛ تمت زراعة ‎٠١ x 5( PBMC‏ أ) خلية/العين) من ‎١‏ مرضى مصابين بالتهاب المفاصل الروماتويدي بشكل مزدوج في وسط كامل ‎٠٠١0‏ ميكرو لتر تم تزويده بأعلى تركيز لمذيب ‎Ve)‏ مولار) أو ‎Ve‏ مولارو ‎٠١‏ ” مولار و ‎٠١‏ * مولار _من المركب رقم ‎١١‏ في وجود أو في غياب ‎٠١( LPS‏ ميكرو جرام/مل) أو مضاد ‎١.5( CD3‏ نانو + (Orthoclone 016-13, Ortho Pharmaceutical Corporation, Raritan NJ, USA) ‏جرام/مل)‎ © 74 sad ‏وذلك‎ (Clon 1588. Menarini, Madrid, Spain) (* ٠١ Xx ¥/ ١( CD28 ‏مضاد‎ ‏عن‎ Whe INF ‏حساب تركيز‎ iy» Vom ‏ساعة. تمت تجميد المواد الطافية من الخلية عند‎
CBA Flex Set (Becton Dickinson) ‏باستخدام‎ BD FACS Array Bioanalyser ‏طريق مجموعة‎ ‏وذلك بإتباع تعليمات المُصنع.‎ cytokine ‏الخاصة بتحديد تركيز‎ ‎٠‏ في ‎LPS‏ الذي تم حثه ب ‎PBMC‏ في المرضى المصابين بالتهاب المفاصل الروماتويدي؛ يقوم المركب ‎VY‏ بالتثبيط الكبير لإنتاج ‎TNF‏ -ألفا عند تركيز ‎٠١‏ 7 مولار (م <0.505) (الشكل رقم ؛). لا وجود المركب ‎١١‏ في المزرعة مثبطاً لإنتاج ‎TNF‏ -ألفا أو الإنتاج الذي تم الحصول عليه بعد الاستثارة باستخدام الأجسام المضادة أحادية النسيلة من ‎CD3‏ و 0028 في ‎PBMC‏ من مرضى مصابين بالتهاب المفاصل الروماتويدي. ‎Vo‏ الجدول رقم ‎cA‏ إنتاج ‎TNF‏ -ألفا في ‎PMBC‏ عن طريق مرضى مصابين بالتهاب المفاصل الروماتويدي في وجود المركب رقم ‎.١١‏ تم توضيح النتائج كالناتج المتوسط + ‎af‏ الخطأ القياسي من ‎cytokine‏ الذي تم إفرازه. تم توضيح النتائج الهامة إحصائياً بالخط الكبير مع القيم المناظرة لها م وتم توضيح (القيم المتعلقة بالمادة الناقلة لكل الظروف التجريبية) في الأقواس.
جدول رقم + و حلا إنتاج- ‎TNF‏ ألفا في ‎PMBC‏ من مرضى مصابين بالتهاب المفاصل الروماتويدي ( بيكو جرام/مل) +١٠3 ‏المتوسط 64 + /اخز + | “لحز + | ميى‎
AO,» 5 Ao, oe Q 40, q eo. 0 q (+-V¥e) (:.V¥e) (+.VVe) + ٠8 + ‏لم7‎ | + YAY.VO +7. 4 ‏مجم/مل)‎ ٠5 ١١ ‏مم مأ مم قلا مف هأ مم‎ ‏الك‎ (--YYV) («.00) + 190. A) ١ + 0TAEY | + ‏لخ لله‎ + TEALVY VY.0) ¥ ‏مضادط‎ ‎Ya Lee AY. 0 Ae ‏مم‎ 9. Joo + ‏نانو جرام/مل)‎ (+A) (+) (+.YY) CD28 ‏مضاد‎ (V+ °x¥NY) ‏-ألفا عن طريق‎ TNF ‏على إنتاج‎ ١١ ‏بالإضافة إلى ذلك؛ تم فيما بعد فحص تأثيرات المركب‎ ‏المأخوذ من 9 من المتطوعين الأصحاء في وجود‎ PBMC ‏أحاديات النواة التي تمت تنقيتها‎ ‏من المتطوعين الأصحاء وتم فحص الخلايا أحادية النواة‎ PBMC ‏تم عزل كل‎ . LPS ‏أو غياب‎ © * ٠١ ‏تم إعادة تعليق‎ (MACS) ‏التي تمت تنقتيها من تصنيف الخلية النشط المغناطيسي الآلي‎ ‏في وسط من أنابيب بلاستيكية معقمة سعة #مل؛ وتم الاحتضان عند ؛ أم في الجسم‎ PBMC ‏من‎ ‎CliniMACS 0014 Reagent, Miltenyi ( ‏الذي تم تغليفه بخرزات مغناطيسية‎ CD14 ‏المضاد‎ ‏تصنيف خلايا‎ Alig ‏تعريضه‎ SS (Biotec, Bergisch Gladbach, Germany, D-51429 ‏عن طريق المجموعة‎ CDI4+ PBMC ‏تنقية‎ oy SI (Miltenyi Biotec) AutoMACS™ ٠ ‏أ‎ 71
ع الفرعية من الخلايا الأحادية التقليدية. تم فحص الخلايا أحادية النواة التي تم عزلها لأغراض التنقية باستخدام التألق المناعي ومقياس التدفق الخلوي متعدد الألون؛ وذلك بعد عملية التلطيخ في أنابيب © مل باستخدام 003 الذي تم ترقيمه ب ‎FITC‏ و0014 الذي تم ترقيمه ب ‎PE‏ وذلك من أجل أجسام مضادة معينة في أتابيب © مل من ‎polystirene‏ والخاصة بمقياس تدفق الخلايا. © تم إجراء حساب التوزيع السطحي لخلايا ‎(CD3) T‏ والخلايا ومستقبلات سطح الخلايا وحيدة ‎٠‏ ‏النواة ‎(CD14)‏ في وسيلة تحليل ‎(Becton Dickinson) FACScalibur™‏ تم إجراء تحليلات النتائج باستخدام برنامج ‎(Tree Star, OR, USA) FlowJo FlowCytometer‏ كانت درجة نقاء الخلايا أحادية النواة التي تم عزلها 030014 ‎PBMC‏ أكبر من 7948 من الخلايا الحية؛ ويتم إدخال الخلايا أحادية النواة عن طريق خصائهاوعن طريق الزاوية الأمامية لمشتت الضوء ‎(FSC) ٠‏ وخصائص المشتت الجانبي ‎(SCC)‏ الذي يسمح بتحديد مجموعات معينة من الخلايا وحدية النواة والخلايا اللمفاوية المتبقية (الشكل رقم ©). تمت زراعة الخلايا أحادية النواة ‎1.Y0)‏ ‎٠١ x‏ ” خلية/العين؛ ‎(Jeo‏ في أطباق مزرعة أنسجة؛ وتم استخدام + أطباق مستوية القاع لها غطاء للتبخير المنخفض ‎Falcon, Becton Dickinson)‏ 353046) في وسط كامل ويتم تزويدها بمصل مأخوذ من العجول وذلك في مذيب بتركيز ‎٠١‏ * مولار بمفرده أو تم تزويد ب١٠‏ 7 ‎Wee VO‏ من المركب ‎٠7‏ في وجود أو غياب ‎٠١‏ ميكرو لتر/مل من ‎LPS‏ أثناء الفترات الموضحة في التجارب الحركية. تم الاحتفاظ بالمواد الخالية من الخلايا والخلايا بشكل مواز لحركيات التجربة التي تم توضيحها في الشكل رقم 6 والشكل رقم ‎١‏ لكي يتم قياس التعبير في منتج جين ألفا ‎TNF‏ عند مستوي ‎MRNA‏ في الخلايا وعند مستوي البروتين في المواد الطافية. تم الاحتفاظ بالمواد الطافية مجمدة عند ‎Yom‏ م وكان تركيز بروتين ‎TNF‏ ألفا قد تم قياسه عن ‎٠‏ طريق ‎BD FACS Array Bioanalyzer (Becton Dickinson)‏ الذي يستخدم مواد تفاعل ‎CBA‏ ‎BD TNF‏ -ألفا ‎(Becton Dickinson Biosciences-Pharmingen)‏ وذلك طبقاً لتعليمات المُصنع ‎AERA‏
- a ‏كما تم وصف ذلك أعلاه. تم استخلاص الخلايا أحادية النواة الملتصقة من الأطباق بمساعدة‎ ‏وتم‎ (3010 Costar, Cambridge MA 02139, USA) ‏وسيلة نزع الخلايا القابلة للإزالة‎ adjuvant
MRNA ‏وحساب كمية‎ Adal ‏الخاص‎ mRNA ‏تعريضه في الحال إلى برتوكولات عزل‎
Q-)polymerase ‏والنسخ العكسي وحساب الكمية في الوقت الفعلي لتجارب تفاعل سلسلة إنزيم‎ : ‏يتم قياس جين 1807 ألفا في‎ SI(PCR © 7900 HT Fast Real-Time Q-PCR System (Applied Biosystems, Forster City, CA, USA) ‏في التجربة التي تم إجراؤها‎ (7 00197 + AAT) ‏يبين الشكل رقم © استخدام الخلايا الأحادية‎ ‏على 4 من الأشخاص المتطوعين الأصحاء ويكون هدف هذه التجربة توضيح حركيات التعبير‎ ‏يوضح‎ add ‏على النحو‎ . PBMC ‏ألفا وفصل البروتين في المجموعة الفرعية‎ TNF ‏في‎ ‏عن ©1230 ألفا يتم حثه بقوة في الخلية الأحادية البشرية‎ mRNA ‏الشكل رقم (3) أن تعبير‎ Ve ‏مع عدم وجود بدرجة‎ (rere) PP ‏ضعف؛‎ ١7.576 + EAT) ‏في المعمل‎ LPS ‏المحفزة ب‎ bas ‏ساعة)؛ والتنشيط المبكر‎ ia) ‏كبيرة تعبير في ظروف خارج الكائن الحي لخط القاعدة‎ ‏ساعة؛ والترجمة العابرة مع التحلل‎ Yoo ‏لتعبير الجين بالسمات الحركية التي تصل إلى القمة عند‎ ‏ساعة‎ YE ‏ألفا يقترب من مستويات خط القاعدة عند‎ TNF ‏عن‎ mRNA ‏السريع لذا ينزوي تعبير‎ ‏ويبقى‎ TNF ‏لا يتم تنشيط التعبير الجيني‎ (LPS ‏محفز‎ le Alla ‏(الشكل + مربعات). في‎ ٠ ‏ألفا عند خط القاعدة خارج مستويات الكائن الحي في هذا النظام‎ TNF ‏ل‎ Le mRNA ‏بصورة ملحوظة حث قمة‎ ١١ ‏المركب‎ JB ‏المعملي (معينات الشكل رقم )7( على نحو ملحوظ‎ ‏في الخلية الأحادية المنقاة من المتبرعين الأصحاء على‎ LPS ‏ألفا المستحث ب‎ TNF ‏ل‎ mRNA ‏البشري في‎ TNF ‏النوعية ل‎ Taqman® ‏النحو الذي تم قياسه بواسطة تجربو التعبير الجيني‎
ف نظام ‎YY.VY) 7900 HT Fast Real-Time Q-PCR‏ + غم ‎١‏ ا © > ‎).١١‏ (مثلثات الشكل رقم (3)). علاوة على ذلك؛ فإن خفض ‎TNF‏ - ألفا في التعبير الجيني على مستوى ‎mRNA‏ كان ‎Lad‏ ‏مميزاً بعد © ‎Ag‏ ساعات من الحث ب 158 للخلية الأحادية المنقاة (797.14 + ‎ey‏ إن 0 < ‎١.١١ SP ١.8 + FILE re) 0‏ على التوالي). تم التوصل إلى أن المركب ‎١١‏ قلل بصورة ملحوظة حث ‎mRNA‏ ل ‎TNF‏ ألفا المحفز ب ‎LPS‏ في خلايا أحادية منقاة من ‎PBMC‏ ‏من متبرعين أصحاء وحدثت التغيرات في الحث دون تعديل حركيات القمة للتعديل لأعلى ولأسفل لتعبير منتج الجين ألفا ‎TNF‏ أثناء زمن الدراسة. بالتوافق مع ملاحظة أن المستوى المنخفض للتعبير الجيني ‎TNF‏ ألفا لدى الخلايا الأحادية البشرية المحفزة بغير ‎LPS‏ والحركيات ‎٠‏ السريعة لحث ‎amRNA‏ فإن إفراز البروتين ‎TNF‏ - ألفا يبدأ بسرعة؛ وبالتأخير في الزمن الضروري لتكملة العملية الحيوية لترجمة ‎mRNA‏ على هيئة بروتين؛ ومعالجته؛ والإفراز والتشظي لوسط المزرعة؛ ويؤدي إلى قمة الإنتاج المتوقعة بعد ‎A‏ ساعات من التحفيز ب ‎LPS‏ ‏للخلايا الأحادية المنقاة - ‎PBMC‏ في مزارع المقارنة في غياب المركب ‎VY‏ (مربعات الشكل رقم ‎L((VY)‏ لا تقوم مزارع الخلايا الأحادية في وجود ناقل المذيب بمفرده وفي وجود ‎LPS‏ ‎٠5‏ والمركب ‎VY‏ بتعزيز إفراز ‎TNF‏ ألفا (معينات الشكل رقم ‎(VY)‏ من الملاحظ أن المركب ‎VY‏ ‏يقلل بصورة ملحوظة البروتين المفرز ‎WH TNF‏ المحفز ب ‎LPS‏ عند قمة الإنتاج ‎A)‏ ساعات) في الخلايا المنقاة من متبرعين أصحاء على النحو الذي تم قياسه بطاقم المواد المتفاعلة ‎CBA‏ النوعية ل ‎TNF‏ ألفا البشري في وسيلة التحليل الحيرية ‎«V£.YA + Y).0Y) FACSArray‏ م ‎)...١ >‏ (المثلثات في الشكل رقم (7)). على النحو الذي تم توضيحه فيما سبق من حيث ‎Ye‏ الحدوث في حركيات حث ‎mRNA‏ ل ‎TNF‏ - ألفاء وكانت مستويات بروتين ‎TNF‏ ألفا المفرز
IV
أقل عند النقاط الزمنية لمتابعة حركيات الإنتاج بعد حث المزرعة عند الساعة صفر. بالفعل؛ أظهرت التحليلات الإحصائية أن المركب ‎VY‏ يعزز أيضاً التثبيط ‎ped‏ لبروتين ‎TNF‏ ألفا بالخلايا الأحادية ‎PBMC‏ المنقاة والمتحفزة ب ‎LPS‏ من المتبرعين الإصحاء عند ساعتين ونصف ‎YE‏ ساعة )£0.07 + 76ح 7 طح لب أ + ادال ‎SP‏ ل...؛ © و81.17 + 215.27 على التوالي). نظراً لأن البيانات المصاحبة أظهرت أن المركب ‎١١‏ يثبط بفاعلية تعبير منتج الجين ‎TNF‏ ألفا عند كل من ‎MRNA‏ ومستويات البروتين في الخلايا الأحادية المنقاة ‎PBMC‏ من 4 متبرعين أصحاء؛ وقمنا بعد ذلك بدراسة ما إذا كان هناك ارتباط مميز إحصائياً بين مستويات تثبيط حث ‎TNF - mRNA‏ -ألفا وإذا كان الخفض في مستويات البروتين ‎TNF‏ - ألفا المفرزة تم تعزيزها بالمركب ‎OF‏ وذلك على النحو الذي تم قياسه ‎٠‏ بتحليلات الانحسار عند قممهم المناظرة للتعبير. من الملحوظ أن هناك ارتباط مميز إحصائياً بين المركب ‎VY‏ والتأثيرات المعدلة للمناعة على مستويات الخلايا الأحادية المنقاة من تعبير منتج الجين ‎TNF‏ ألفا عند ‎mRNA‏ والبروتين الذي يتم إفرازه ‎.)٠.78257 =r)‏ عند أخذ هذه النتيجة مع سابقتهاء فإنها تشير إلى أن تثبيط المركب ‎VY‏ لحث مستويات ‎TNF mRNA‏ -ألفا في الخلايا الأحادية المنقاة المستحثة ب ‎LPS‏ هو عبارة عن آلية توضح الجزء الرئيسي لتأثيرات التعديل ‎Vo‏ المناعي للمركب ‎VY‏ عند تثبيط إفراز ‎TNF‏ - ألفا. المثال رقم (7): تأثيرات المركبات ‎of‏ و©؛ واء و9؛ و١٠‏ و17 و18 و1 و7١‏ على إنتاج ‎IFN‏ - جاما. تم عمل مزارع من ‎٠١ X 0) PBMC‏ ' لكل عين) من المتبرعين الأصحاء في ضعفين في ‎٠00‏ من الوسط المكمل بأعلى تركيز للمذيب ‎Ve)‏ مولار) بمفرده؛ وتمت تكملته ب ‎٠١‏ ' مولارء و ‎”٠١‏ و١٠‏ * من المركب الذي تم اختباره في وجود أو غياب؛ ‎٠‏ إما ‎Ve) LPS‏ ميكرو جرام/ مل) أو مضاد ل 003 ‎VY.)‏ نانو جرام/ ‎(Ja‏ + مضاد - ‏ال
VI
‏م وتم‎ Yo - ‏ساعة. تم تجميد المحاليل الطافية للمزرعة عند‎ YE ‏“)؛ أثناء‎ ٠١ x ¥/1)CD28 ‏من خلال‎ BD FACS Array ‏جاما بواسطة وسيلة التحليل الحيوي‎ IFN ‏حساب كمية تركيز‎ ‏باتباع‎ lala = IFN ‏نوعي لتحديد تركيز‎ (Becton Dickinson) CBA Flex ‏استخدام مجموعة‎ ‏تعليمات القائم على التصنيع.‎ ‏عن طريق متطوعين أصحاء في وجود المركب‎ PMBC ‏-جاما في‎ TNF ‏الجدول رقم 4: إنتاج‎ ©
NTA
‏الذي تم إفرازه. تم‎ cytokine ‏تم توضيح النتائج كالناتج المتوسط + قيم الخطأً القياسي من‎ ‏توضيح النتائج الهامة إحصائياً بالخط الكبير مع القيم المناظرة لها وتم توضيح (البيانات‎ ‏المتعلقة بالمادة الناقلة لكل الظروف التجريبية) في الأقواس.‎ ‏لخي | حيرا اكير‎ Ja ‏المتوسط 8 + 7 + 4.7 + ما ال + كما‎ )...47( )... ‏)ا و‎ EF) A] ‏م‎ ‎+ // £2 ‏الماح‎ + TATA + ١١١ | ‏مجم/مل)‎ ٠65 )...؛0٠.‎ ). ‏ا و‎ Yo.) (+-Y7A) + ٠١1 + 174) + ٠8 + ٠66 ١7.5 ( ¥(CDalas 1 ١177 7.4 YMAY | + ‏نانو جرام/مل)‎ )...8( )..17( (+047) CD28 ‏مضاد‎ ‎(V+ x¥N)
ال يثبط المركب ‎١١‏ عند تركيز ‎Ve‏ مولار و ‎Ve‏ مولار_بشكل كبير ‎TNF gl‏ -جاما عن طريق ‎PBMC‏ من متطوعين أصحاء .تم حثهم ب ‎LPS‏ (م > 000+( علاوة على ذلك؛ عند تركيز ‎Ve‏ مولار يتم تثبيط إنتاج ‎TNF‏ -جاما الذي تم حثه بالأجسام المضادة أحادية النسيلة المضادة ل 03© و0028 (م > 00+( ويقوم أيضاً بالتثبيط الكبير للإفراز التلقائي © ال ‎TNF‏ جاما عن طريق ‎PBMC‏ من متطوعين أصحاء عند تركيز ‎٠١‏ ' مولارو ‎The‏ ‏مولار و ‎٠١‏ *مولار (م < #...). الجدول رقم ‎:٠١‏ إنتاج ‎lls - TNF‏ في ‎PMBC‏ عن طريق متطوعين أصحاء في وجود المركب رقم 4. تم توضيح النتائج كالناتج المتوسط + قيم الخطاً القياسي من ‎cytokine‏ الذي تم ‎old‏ تم توضيح النتائج الهامة إحصائياً بالخط الكبير مع القيم المناظرة لها م (القيم المتعلقة ‎٠‏ بالمادة الناقلة لكل الظروف التجريبية) قد تم توضيحها في الأقواس. جرام/مل)
المتوسط 58 + 0.74 + .6لا + ‎|١٠٠5‏ هلاه + ‎٠.2‏ حت (بند...) ‎)..77١(‏ 4 (م...)
‎١ 15‏ مجم/مل) ‎١5‏ + اح + 64+ + ‎٠.١‏ 6.75 + ‎You‏ لعج كت ‎ )‏ تت لدع ...)
‎+ ‏فاق‎ + ١١ + ٠86 + ‏حي‎ ١١.6 ) ١ ‏مضادر0‎
‎YVo.AA YYAY. ‏لام‎ TVYLY YAYAY | + ‏نانو جرام/مل)‎
‎)..800( (+.7A%) (++ £7) x Y/Y) CD28 ‏مضاد‎
‎Ce
‎yy —‏ — يثبط المركب 4 عند تركيز ‎Ye‏ مولار و ‎٠١‏ ” مولار و ‎٠١‏ * مولار_بشكل كبير إنتاج ‎IFN‏ -جاما عن طريق ‎PBMC‏ من متطوعين أصحاء .تم حثهم ب ‎LPS‏ (م > 1.00( علاوة على ذلك؛ عند تركيز ‎Ve‏ مولار يتم تثبيط إنتاج ‎TNF‏ -جاما_ الذي تم حثه بالأجسام المضادة أحادية النسيلة المضادة ل 603 ‎CD28‏ (م > 0.00( ولا يقوم بالتعديل الكبير للإفراز © التلقائي ل ‎TNF‏ -جاما عن طريق ‎PBMC‏ من متطوعين أصحاء. الجدول رقم ‎VY‏ إنتاج ‎IFN‏ - جاما في ‎PMBC‏ عن طريق متطوعين أصحاء في وجود المركب رقم ©. تم توضيح النتائج كالناتج المتوسط + قيم الخطأ القياسي من ‎cytokine‏ الذي تم إفرازه. تم توضيح النتائج الهامة إحصائياً بالخط الكبير مع القيم المناظرة لها م (البيانات المتعلقة بالمادة ‎٠‏ الناقلة لكل الظروف التجريبية) تم توضيحها في الأقواس. ناج 176 جاما في ©1008 من متطوعين أصحاء ( بيكو ‎dn‏ ‏المتوسط 5 + ‎Teo ay + 3.7١ | Yd + YEA‏ م (7؛...) 8,47 )000+( )07+( ‎١ 15‏ مجم/مل) ‎Vo‏ + 7 + 7 + 84 + قل ‎٠7١ |)... 7 Yo.)‏ ال ‎EY)‏ 0+( مضادص ‎١77.9 + JOYA | + 1٠ + 4 + 7517 ١7.5 ( ٠‏ نانو جرام/مل) + | ‎(v.04) AdY.AY Vera ١ ١8١4.79‏ مضاد ‎SI x¥ /1) CD28‏ 0 ول
‎Ve —‏ — يثبط المركب © عند تركيز ‎Ve‏ مولار و ‎٠١‏ ” مولار_بشكل كبير إنتاج ‎IFN‏ -جاما عن طريق حث ‎LPS‏ عن طريق ‎PBMC‏ من متطوعين أصحاء (م > 0.00( علاوة على ذلك؛ عند تركيز ‎٠١‏ © مولار يتم تثبيط إنتاج ‎IFN‏ -جاما الذي تم حثه بالأجسام المضادة أحادية النسيلة المضادة ل 003 و6028 (م < 0.00( . وعند تركيز ‎Ve‏ مولار و ‎٠١‏ ” مولار © مولار يقوم أيضاً بالتثبيط للإفراز التلقائي ل 1708 -جاما عن طريق ‎PBMC‏ من متطوعين أصحاء ‎p)‏ > 8 الجدول رقم ‎VY‏ إنتاج ‎IFN‏ - جاما في ‎PMBC‏ عن طريق متطوعين أصحاء في وجود المركب رقم . تم توضيح النتائج كالناتج المتوسط + قيم الخطأ القياسي من ‎cytokine‏ الذي تم إفرازه. تم توضيح النتائج الهامة إحصائياً بالخط الكبير مع القيم المناظرة لها م (البيانات المتعلقة ‎٠‏ بالمادة الناقلة لكل الظروف التجريبية) تم توضيحها في الأقواس. ده إنتاج ‎Lala [FN-‏ في ‎PMBC‏ من متطوعين أصحاء ( بيكو جرام/مل) المتوسط 44.5 + 20+ ‎Ve AAI‏ + الفة + لما 7/7646 + إل > (47؛...) ‎٠8‏ (4...) ‎A ٠ )‏ 0“ ( ‎٠١ 5‏ مجم/مل) ‎١١١ ١‏ ج ‎YY + AYA + ٠١7 tA | 75١‏ ‎1.A4‏ 7.01 (نم...) ‎(+-eAY) )...47(‏ مضادن) ¥ ) ‎YYAY + ١691 + Ac. + You ١١.‏ + نانو جرام/مل) + ال 7 ‎YoAL.V Y.¥y.o‏ مضاد ‎CD28‏ ( ف( ‎(+-YYo) (+-AY)‏ ال ‎AERA‏
IV
LPS ‏-جاما عن طريق حث‎ IFN ‏مولار بشكل كبير إنتاج‎ Ve ‏عند تركيز‎ ToS al ‏يثبط‎ ‎IFN ‏من متطوعين أصحاء (م > 000«( ويقلل تثبيط الإفراز التلقائي ل‎ PBMC ‏عن طريق‎ >p) Nise Te ‏و‎ Nee" ٠١ ‏من متطوعين أصحاء عند‎ PBMC ‏-جاما عن طريق‎ .)...8 ‏عن طريق متطوعين أصحاء في وجود المركب‎ PMBC ‏-جاما في‎ IFN ‏إنتاج‎ :١“ ‏الجدول رقم‎ © ‏الذي تم إفرازه.‎ cytokine ‏رقم 49. تم توضيح النتائج كالناتج المتوسط + قيم الخطأ القياسي من‎ ‏تم توضيح النتائج الهامة إحصائياً بالخط الكبير مع القيم المناظرة لها م (البيانات المتعلقة بالمادة‎ ‏الناقلة لكل الظروف التجريبية) تم توضيحها في الأقواس.‎ (+-+£Y) (++ £7) ‏(بن...)‎ ‏(م...) (ن...)‎ (+ YYA) ‏مجم/مل)‎ ‎+ 723 + ‏ميملا + بألا‎ YAMA + ٠١ | YY ‏مضادط‎ ‎١مل ‏ولا‎ ١ YAVY.. ¢ ‏نانو‎ ١.5 ( ‏الس‎ (+004) (+-YYA) + ‏جرام/مل)‎ ‎CD28 ‏مضاد‎ ‎(7 xy) ٠ ١
‎YS —‏ _ يثبط المركب 3 عند تركيز ‎Ve‏ مولار و١٠‏ ” مولار_بشكل كبير الإنتاج التلقائي ل ‎IFN‏ ‏-جاما عن طريق ‎PBMC‏ من © متطوعين أصحاء (م < #..). الجدول رقم 5 ‎:١‏ إنتاج ‎IFN‏ — جاما في ‎PMBC‏ عن طريق متطوعين أصحاء في وجود المركب رقم ‎.٠١‏ ‏© تم توضيح النتائج كالناتج المتوسط + قيم الخطأ القياسي من ‎cytokine‏ الذي تم إفرازه. تم توضيح النتائج الهامة إحصائياً بالخط الك القيم المناظرة البيانات المتعلقة بالمادة توضيح ‎p a 4 ) gull‏ )= الناقلة لكل الظروف التجريبية) تم توضيحها في الأقواس. 0 -5 إنتاج ‎IFN-‏ جاما في ‎PMBC‏ من متطوعين أصحاء ( بيكو جرام/مل) المتوسط 5 + 6 + 7 + ‎٠‏ + ‎Yio‏ 7" .11 ميم ‎(+-1A%) (v.00) (+-7Ye)‏ ‎٠١ 5‏ مجمإ/مل) | ‎VY EAA +٠8 + ١١١‏ + 8 + ‎١.41 Yo.)‏ و 7/6 رن...) ‎(v0 AY)‏ )£7 :+( مضادو ؟ ) ‎١.6‏ حي + 5 + 1661 + ‎1١4‏ + ‎sil‏ جرام/مل) + | ‎١77426 1١964 177 YAVAY‏ مضاد ‎x Y/Y) CD28‏ (7:...) (847..) )72+( ‎١‏ ‎٠ ١/١‏
‎po.
VY —_—‏ يثبط المركب ‎٠١‏ عند تركيز ‎Vee * ٠١‏ بشكل كبير إنتاج ‎IFN‏ -جاما عن طريق حث ‎LPS‏ عن طريق ‎PBMC‏ من متطوعين أصحاء (م > ‎(v.00‏ علاوة على ذلك؛ عند تركيز ‎٠‏ © مولار يتم تثبيط إنتاج ‎IFN‏ -جاما الذي تم حثه بالأجسام المضادة أحادية النسيلة المضادة ل 603 و6028 (م < 00+( . وعند تركيز ‎Te‏ مولار و ‎٠١‏ ” مولار © مولار يقوم أيضاً بالتثبيط للإفراز التلقائي ل ‎TNF‏ -جاما عن طريق ‎PBMC‏ من متطوعين أصحاء والذي لم يتم تعديله عن طريق المركب ‎Ve‏ الجدول رقم ‎:١©‏ إنتاج ‎TFN‏ -جاما في ‎PMBC‏ عن طريق متطوعين أصحاء في وجود المركب رقم ‎AY‏ ‏تم توضيح النتائج كالناتج المتوسط + قيم الخطأ القياسي من ‎cytokine‏ الذي تم إفرازه. تم توضيح النتائج الهامة إحصائياً بالخط الكبير مع القيم المناظرة لها م (البيانات المتعلقة بالمادة ‎٠‏ الناقلة لكل الظروف التجريبية) تم توضيحها في الأقواس. الجدول ‎Yo‏ ‏اا إنتاج ‎[FN-‏ جاما في ‎PMBC‏ _من متطوعين أصحاء ) بيكو جرام/مل) المتوسط 4¢.0 + ‎٠8‏ + 5025 + 246 | .ا + نما ‎(+-YYA) (+-+£Y) (+ AY) YY.AS Y¢o‏ مجم/مل) | ‎YY. + ١١١‏ + 6 + 4ف | ‎dele‏ لحني ‎(vee A) ٠ Ye‏ )£7 +-+( )00+( مضاد ‎CD‏ ؟ ( ‎١/3. + 7 + 77١ + 4 + ٠١١١ | ١".‏ ‎sil‏ جرام/مل) + لها بلا بطع 175 (5:..) مضاد ‎(+MY) /١( CD28‏ )004+( ‎٠‏ )
‎YA _‏ — يثبط المركب ‎١١7‏ عند تركيز ‎Ne ” ٠١‏ بشكل كبير إنتاج ‎IN‏ -جاما عن طريق حث عن طريق ‎PBMC‏ من © متطوعين أصحاء (م > 0000( ‎kad‏ بشكل كبير الإفراز التلقائي ل ‎TNF‏ -جاما عن طريق ‎PBMC‏ من متطوعين أصحاء عند تركيز ‎٠١‏ ” مولار . الجدول رقم ‎:٠“‏ إنتاج ‎TFN‏ -جاما في ‎PMBC‏ عن طريق متطوعين أصحاء في وجود المركب © رقم ‎V0‏ تم توضيح النتائج كالناتج المتوسط + قيم الخطأً القياسي من ‎cytokine‏ الذي تم إفرازه. تم توضيح النتائج الهامة إحصائياً بالخط الكبير مع القيم المناظرة لها م (البيانات المتعلقة بالمادة الناقلة لكل الظروف التجريبية) تم توضيحها في الأقواس. الجدول ‎١١‏ ‎6=n‏ إنتاج ‎IFN-‏ جاما في ‎PMBC‏ من متطوعين أصحاء ( بيكو جرام/مل) المتوسط 58 + 6 + 7 + 8 + ‎(+-YYo) ٠ Y¢.o‏ لله ‎YALA (+MY)‏ (تحكي..) 5 مجم/مل) | ‎٠/٠ + 49 +76 + ١١١‏ + ‎+7١ (+. EF) VLA You!‏ ف (17 ا ‎(+.YY0)‏ ‎Y¥\1o + FAY) + 6 + 7566 | YVY.o CDalias‏ + نانو جرام/مل) + | 1814.7 ‎٠ YotV.oA ٠6‏ ا مضاد ‎(+.1A%) (+-1A1) (+.v¢0) /١ ( CD28‏ ل (
— قا — يثبط المركب ‎١5‏ عند تركيز ‎٠١‏ * مولار ‏ بشكل كبير إنتاج ‎IFN‏ -جاما عن طريق حث ‎LPS‏ عن طريق ‎PBMC‏ من © متطوعين أصحاء ‏ (م < 0.00{ ‎Jaa Vy‏ بشكل كبير الإفراز التلقائي أو الإفراز الذي تم حثه ب ‎CD3+CD28‏ للسيروتونين ل ‎TNF‏ -جاما عن طريق ‎PBMC‏ من متطوعين أصحاء. © الجدول رقم ‎VV‏ : إنتاج ‎IFN‏ -جاما في ‎PMBC‏ عن طريق متطوعين أصحاء في وجود المركب رقم ‎NY‏ ‏تم توضيح النتائج كالناتج المتوسط + قيم الخطأً القياسي من ‎cytokine‏ الذي تم إفرازه. تم توضيح النتائج الهامة إحصائياً بالخط الكبير مع القيم المناظرة لها م (البيانات المتعلقة بالمادة الناقلة لكل الظروف التجريبية) تم توضيحها في الأقواس . : ‎Ye‏ الجدول ‎VY‏ ‏إنتاج ‎IEN-‏ جاما في ‎PMBC‏ من متطوعين أصحاء ( بيكو جرام/مل) المتوسط ‎YAY.VA‏ + 7 + 15.7 + 11727 + ‎$e ne Q.,00‏ لني 0 ‎(AY) (Xv)‏ ‎٠١5‏ مجم/مل) ‎Y.69.A0| + 4147 + 164.7) + AML EY‏ + ‎١٠١8‏ م١١١١‏ ميم ‎١ ٠ ١‏ ‎(+.00Y) )...(‏ (87..) مضادس ‎VAYV.\Y + YYACY.YY (YY. 0 ١‏ + ل عمدلا + | ‎٠١.6 MN‏ نانو جرام/مل! ) ‎ee ٠١١١١‏ ا ‎١٠١١‏ مم ‎١.‏ ميق + ‎YO va, en‏ ‎(+.91Y) (+.+14) +‏ )41+( مضاد ‎CD28‏ \/¥ ‎("1x‏ ‏ا ‎٠١‏
CA. ‏-جاما عن طريق حث‎ TAN zl) ‏بشكل كبير‎ Nae * ٠١ ‏عند تركيز‎ ١١ ‏يثبط المركب‎ ‏من متطوعين أصحاء أو الحث باستخدام الأجسام المضادة أحادية‎ PBMC ‏عن طريق‎ LPS ‏بشكل كبير الإفراز التلقائي أو الإفراز الذي تم حثه ب‎ Jay ‏و028© . ولا‎ CD3 ‏النسيلة ل‎ > ‏من متطوعين أصحاء (م‎ PBMC ‏-جاما عن طريق‎ TNF ‏للسيروتونين ل‎ CD3+CD28 (A ‏(الشكل رقم‎ )...# 8 ‏من متطوعين أصحاء عن‎ PBMC ‏-جاما عن طريق‎ TNF ‏لم يتم تعديل الإفراز التلقائي ل‎
AY ‏طريق المركب‎ ‏مرضى مصابين بالتهاب المفاصل‎ A ‏أ) خلية/العين) من‎ ٠١ x ©) PBMC ‏تمت زراعة‎ ٠١( ‏ميكرو لتر تم تزويده بأعلى تركيز لمذيب‎ Yoo ‏الروماتويدي بشكل مزدوج في وسط كامل‎ ‏وجود‎ AVY ‏مولار من المركب رقم‎ Ve ‏و‎ Nae ” ٠١ ‏و‎ Nae ' ٠١و ‏مولار)‎ ” ٠ ‏ميكرو جرام/مل) أو مضاد 003 )17.0 نانو جرام/مل) و مضاد‎ ٠١( LPS ‏أو في غياب‎ ‏م‎ Yom ‏ساعة. تم تجميد المواد الطافية من الخلية عند‎ YE ‏وذلك لمدة‎ )" ٠١ x ©/ ١( 48 ‏باستخدام‎ BD FACS Array Bioanalyser ‏-جاما عن طريق مجموعة‎ IFN ‏وتم حساب تركيز‎ ‏-جاما وذلك بإتباع تعليمات المُصنع.‎ TNF ‏الخاصة بتحديد تركيز‎ CBA Flex Set ‏مولار‎ * ٠١ ‏مولارو‎ “ ٠١ورالوم‎ Ve ‏في المزرعة؛ عند تركيز‎ ١١ ‏يقلل وجود المركب‎ VO ‏من المصابين بمرض الالتهاب الروماتويدي‎ PBMC ‏-جاما عن طريق‎ IFN ‏بشكل كبير إنتاج‎ < ‏و6028 ؛ (م‎ CD3 ‏يتم الحث باستخدام الأجسام المضادة أحادية النسيلة المضادة‎ Cua ‏-جاما ولا يتم حثه عن طريق‎ TNF ‏(الشكل رقم 4). لم يتم تعديل الإفراز التلقائي ل‎ )..5 ‏من المتطوعين الأصحاء.‎ PBMC ‏وباستخدام‎ LPS ‏ل‎
‎AN _—‏ — الجدول رقم ‎:١8‏ إنتاج ‎IPN‏ -جاما في مرضى مصابين بالتهاب المفاصل الروماتويدي في وجود المركب رقم ‎.١‏ تم توضيح النتائج كالناتج المتوسط + قيم ‎Und)‏ القياسي من ‎cytokine‏ ‏الذي ثم إفرازه. تم توضيح النتائج الهامة إحصائيا بالخط الكبير مع القيم المناظرة لها م (البيانات المتعلقة بالمادة © الناقلة لكل الظروف التجريبية) تم توضيحها في الأقواس. الجدول ‎١8‏ ‎A=n‏ إنتاج ‎IFN‏ -جاما في مرضى مصابين بالتهاب المفاصل الروماتويدي بيكو جرام/مل المتوسط 4 + ا لمحتعغحد + | 3 + ‎٠8‏ + ميج £0.00 8 ‎(AVE) Teen Qua, ,o‏ العف ‎(+.Y 4A)‏ ‎٠ 5‏ مجم/مل)) ‎YEAVY +6 + ١7 + 1٠.4‏ + بم قم .8 ‎٠ ٠‏ 8 (كتخ..) ‎)..7١( (+.£A%)‏ مضادص ¥ ‎ALTA‏ £ | لمحل + | الا لحك + | ‎77.٠‏ الا + )0.¥\ نانو مب ‎٠١:‏ بأ بم :ةق برو ملا 8 (1...) جرام/مل) + )9+( )9+( مضاد ‎Y/Y) CD28‏ ‎(ex‏ ‏1ل
‎AY —‏ _ المثال رقم ‎iA‏ تأثيرات المركبات © و 6 و١١‏ و١١‏ على إنتاج إنترليوكين ‎(IL-8) A‏ تم أيضا فحص تأثيرات المركبات 0 و56 و7١‏ و5١‏ على إنتاج 11-8 عن طريق ‎PBMC‏ من متطوعين أصحاء؛ وذلك في وجود ‎cd fie‏ 175 والأجسام المضادة أحادية النسيلة من 003 ‎CD28‏ . © تمت زراعة ‎٠١ X ©) PBMC‏ أ) خلية/العين) من متطوعين أصحاء بشكل مزدوج في وسط كامل ‎Yeo‏ ميكرو لتر تم تزويده بأعلى تركيز لمذيب ‎٠١(‏ “ مولار) ‎Veg‏ مولارو ‎٠١‏ 7 مولار و ‎AR‏ مولار من المركبات التي ثم توضيحها في وجود أو في ‎Yo ) LPS wile‏ ميكرو جرام/مل) أو مضاد ‎Y.0) CD3‏ $51 جرام/مل) . و مضاد 6028 ‎٠١ x ©/ ١(‏ ") وذلك لمدة ‎YE‏ ساعة. تم تجميد ‎of gall‏ الطافية من الخلية عند ‎Vo‏ الملا : وتم حساب تركيز ‎IL-8‏ عن طريق مجموعة ‎BD FACS Array Bioanalyser‏ باستخدام ‎CBA Flex Set‏ الخاصة بتحديد تركيز 8-.]آوذلك بإتباع تعليمات المُصنع. الجدول رقم ‎V4‏ إنتاج 11-8 في متطوعين أصحاء في وجود المركب رقم ‎NN‏ تم توضيح النتائج كالناتج المتوسط + قيم الخطأً القياسي من ‎cytokine‏ الذي تم إفرازه. تم توضيح النتائج الهامة إحصائياً بالخط الكبير مع القيم المناظرة لها م (البيانات المتعلقة بالمادة ‎Ye‏ الناقلة لكل الظروف التجريبية) تم توضيحها في الأقواس.
‎AY -‏ - جدول ‎YA‏ ‏8 -ه إنتاج 11-8 في ‎PMBC‏ من متطوعين أصحاء ( بيكو جرام/مل) المتوسط ‎AAT)‏ + | 277 + | 0ه + 884 + ‎YacVvy YYoo‏ احت 3 ا (8...) ‎(TA)‏ | (0؛...) ‎١ 15‏ مجم/مل) 114850 جا مفححد + 1077 + 7/8 + ‎TYYYA Yav.y YYvoy‏ 6لا ‎)..77١(‏ ‎(+:Y7A) (+-Y¥A)‏ ‎[VY.e Y(CDalas‏ 7م + | 096471 + 0 + لت + نانو جرام/مل + | ‎YAY.
Y14v4 ١١769‏ 1( ..) مضاد ‎(+-1A1) (-.v¢0) ٠/١ CD28‏ . \ ° يقلل المركب رقم ‎١6‏ بشكل كبير ‎zl)‏ 11-8 عن طريق ‎PBMC‏ من © مانحين تحت كل ظروف الحث والتركيزات الخاصة بالمركبات التي تم اختبارها. علاوة على ذلك؛ وعند تركيز ‎"٠١ ©‏ مولار يقلل بشكل كبير الإفراز التلقائي ل 11-8 عن طريق ‎PBMC‏ من متطوعين أصحاء )م > م( . الجدول رقم ‎:٠١‏ إنتاج 11-8 في ‎PMBC‏ من متطوعين أصحاء في وجود المركب رقم ©. تم توضيح النتائج كالناتج المتوسط + قيم ‎Und‏ القياسي من ‎cytokine‏ الذي تم إفرازه. تم توضيح النتائج الهامة إحصائيا بالخط الكبير مع القيم المناظرة لها م (البيانات المتعلقة بالمادة الناقلة لكل ‎٠‏ الظروف التجريبية) تم توضيحها في الأقواس.
- م - جدول ‎Ye‏ : اا في 1096 من متطوعين أصحاء ‎(Chin fa)‏ > ل" المتوسط 51 + 66م + 174 + | #الاده + ‎YAVAA YAYO 17 YYoo‏ ‎YA) (YA) (+0 £7)‏ )+( ‎١ 15‏ مجم/مل) ‎oAVYYo + 3 + 13 + ١١‏ + مأ لم ‎Fryov‏ متم ‎١). (+017)‏ (8"..) مضادو ؟ 66 + 7 + ‎١ + TYT4A‏ لالد + ‎YVooA 17 sve)‏ ملالا ‎YVe.v‏ ‏جرام/مل) + )004+( ‎(+-1A%)‏ (تخة..) ‎/١( CD28 alias‏ ‎7٠‏ ‏يقلل المركب رقم 0 بشكل كبير إنتاج 11-8 عن طريق ‎PBMC‏ من © مانحين تحت كل ظروف الحث والتركيزات الخاصة بالمركبات التي تم اختبارها. علاوة على ذلك؛ وعند تركيز ‎7٠١‏ ‏© مولار يقلل بشكل كبير الإفراز التلقائي ل 11-8 عن طريق ‎PBMC‏ من متطوعين أصحاء ‎p)‏ ‏- +( فضي
‎AS —_‏ ب_ الجدول رقم ‎:Y‏ ‎ld‏ 11-8 في ‎PMBC‏ من متطوعين أصحاء في وجود المركب رقم ‎LV‏ تم توضيح النتائج كالناتج المتوسط + قيم الخطأً القياسي من ‎cytokine‏ الذي تم إفرازه. تم توضيح النتائج الهامة إحصائياً بالخط الكبير مع القيم المناظرة لها م (البيانات المتعلقة بالمادة © الناقلة لكل الظروف التجريبية) تم توضيحها في الأقواس. ‎o=n‏ إنتاج 11-8 في ‎PMBC‏ من متطوعين أصحاء ( بيكو جرام/مل) المتوسط ‎١14 + 1 + 8107 + A471)‏ + ‎٠١ YY.
AA ٠١كم YYoo‏ ‎٠( (+.YVo) (+ £Y)‏ ا( ‎٠١5‏ مجما/مل) | ححا +ا| ‎+١7 EY AAT‏ | م١٠‏ + بع بال يي ا ‎١١778‏ ‎(+-YYo) (+.¥éo) (+.veo)‏ ‎9.%0Y | VY. ) Y CDolias‏ + ور + 7 + 16 + ‎si‏ جرام/مل) + | ‎YAY) 17 ١١4971 ٠١767‏ مضاد ‎٠( )..817( Y/ 1) CD28‏ ف( ‎٠(‏ ف( ‎(x‏ ‏يقلل المركب رقم © بشكل كبير إنتاج 11-8 عن طريق ‎PBMC‏ من © مانحين تحت ظروف الحث بالجسم المضاد ‎CD3‏ +0028 وعند كل تركيزات الحث الخاصة بالمركب الذي تم اختباره وأيضاً عند ظروف الإطلاق التلقائي. علاوة على ذلك؛ وفي الظروف ‎vey Adal‏
- 5م - تركيز ‎”٠١‏ مولار يقلل بشكل كبير الإفراز التلقائي ل 11-8 عن طريق ‎PBMC‏ من متطوعين أصحاء ‎p)‏ > 8 الجدول رقم 7؟: إنتاج 11-8 من متطوعين أصحاء في وجود المركب رقم ‎NY‏ تم توضيح النتائج كالناتج المتوسط + قيم ‎Ladd)‏ القياسي من ‎cytokine‏ الذي تم إفرازه. تم توضيح النتائج © الهامة إحصائياً بالخط الكبير مع القيم المناظرة لها م (البيانات المتعلقة بالمادة الناقلة لكل الظروف التجريبية) تم توضيحها في الأقواس. نتاج 11-5 في ©7043 من متطوعين أصحاء ( بيكو ‎(Arm‏ ‎517429١ | + VYAYENY‏ + لم + ‎١‏ لالالاه 17 21676 (ت ...)| ++ المتوسط (03...) ا ‎AV)‏ م٠‏ ( لاحملا ذا ‎YTAETIV.VO‏ + | قمعلا تخد .114004 ‎٠١5‏ 4م 73 ‎+١١ |)..:( YoA EY‏ مجم/مل) ‎AR (+A)‏ ‎(+.ATY)‏ ‏مضادض ؟ ‎A017]‏ لا ‎١١‏ ا الا لالح + ‎AYAALY| + AVATATY‏ ‎sili Yo)‏ دمعي | ‎(+N) Yee eo‏ نات )000.+([ ‎+١‏ ‏جرام/مل!) + ‎AETY.
EY‏ مضاد ‎CD28‏ (7...) ‎٠١» YN)‏ ) ‎A‏
انم
‎die‏ التركيزات ‎٠١‏ * مولار و١٠‏ ” مولار و ‎٠١‏ ” مولار يقلل المركب ‎١"‏ بشكل كبير
‏الإنتاج التلقائي ل 11-8 (م < ‎)٠.٠5‏ (الشكل رقم ‎.)٠١‏ تمت ملاحظة تثبيط كبير لإنتاج ‎IL-8‏
‏الذي تم حثه عن طريق الأجسام المضادة أحادية النسيلة ‎CD28 5 CD3‏ باستخدام المركب ‎١١‏
‏عند تركيزات ‎٠١‏ ” مولار و ‎٠١‏ * مولار. وبالرغم من ذلك لم تتم ملاحظة أية تغييرات في © إنتاج 11-8 تحت تأثير الحث ‎LPS—‏ في ‎PBMC‏
‏تمت دراسة ‎Lib‏ 11-8 على ‎PBMC zl)‏ من المرضى المصابين بالتهاب المفاصل
‏الروماتويدي. ‏ تمت زراعة ‎٠١ X ©) PBMC‏ أ) خلية/العين) من ‎A‏ مرضى مصابين بالتهاب
‏المفاصل الروماتويدي بشكل مزدوج في وسط كامل ‎٠٠١‏ ميكرو لتر تم تزويده بأعلى تركيز
‏لمذيب ‎٠١(‏ ” مولار) و١٠‏ " مولارو ‎٠١‏ ” مولار و ‎٠١‏ * مولار _من المركب رقم ‎VY‏ ‎Vo‏ في وجود أو في غياب ‎٠١( LPS‏ ميكرو جرام/مل) أو ‎slime‏ 603 )5117.2 جرام/مل) و
‏مضاد 6028 ‎٠١ x ©/ ١(‏ ") وذلك لمدة ‎YE‏ ساعة. تم تجميد المواد الطافية من الخلية عند -
‎Y.‏ 1 وتم حساب تركيز 11-8 عن طريق مجموعة ‎BD FACS Array Bioanalyser‏ باستخدام
‎CBA Flex Set‏ الخاصة بتحديد تركيز 11-8 وذلك بإتباع تعليمات المُصنع.
‏يعدل وجود المركب ‎١١‏ في المزرعة؛ عند تركيز ‎٠١‏ * مولار و١٠‏ ” مولار و ‎٠١‏ 7 ‎V0‏ مولار_بشكل كبير إنتاج ‎LPS‏ من 11-8 عن طريق ‎PBMC‏ من المصابين بمرض الالتهاب
‏الروماتويدي حيث لا يتم تعديل إنتاج 17-8 أو إنتاج الأجسام المضادة أحادية النسيلة عند ‎CD3‏
‏و 0028[ الشكل رقم ‎.)١١‏ وعلى الرغم من ذلك؛ أوضحت النتائج أن تعديل 11-8 عن طريق
‏المركب ‎١١‏ يمكن أن توضح أنماط التعديل المنفرد تحت الظروف المتميزة للصحة والأمراض
‏التي تم تحديدها.
امم - الجدول رقم ؟7: إنتاج. 11-8 في مرضى مصابين بالتهاب المفاصل الروماتويدي. تم توضيح النتائج كالناتج المتوسط + قيم الخطأ القياسي من ‎cytokine‏ الذي تم إفرازه. تم توضيح النتائج الهامة إحصائياً بالخط الكبير مع القيم المناظرة لها م (البيانات المتعلقة بالمادة الناقلة لكل الظروف التجريبية) تم توضيحها في الأقواس. © الجدول ‎VV‏ ‎A=n‏ إنتاج 11-8 في ‎PMBC‏ من مرضى مصابين بالتهاب المفاصل الروماتويدي ( بيكو جرام/مل) ‎ET 0-000‏ لخي لخي لخي ‎AA IY. A +‏ + 5254 اح الاح 1 م111 1 ف كم > ++ المتوسط ‎1٠١7 (+A)‏ 6/6 7 ‎(+-VYY) (+ YY)‏ ‎١٠.١746‏ +[ للاخ ممما + | ‎٠4١57‏ .ا مما ‎١1‏ ...كا ‎vv + Y‏ + ‎٠5‏ مجم/مل) (17...) 3 باتعلا ‎)...١7(١ )0.7٠١(‏
VYYOAVL IN a%a Vee | + 7 ‏ا 4 /ا6‎ 1)AIV.AY] ‏نائر‎ VY.0) ‏مضادص ؟‎ + AA + VET oY 7٠ + ‏جرام/مل!)‎ ‏دل لأغل | يلألا‎ )..76( ٠ /١ CD28 ‏مضاد‎ ‎Vex‏ (كخد. .)أ (كلاء..)
- قم -
المثال رقم 4: تأثيرات المركبات © و7١‏ و6١‏ على إنتاج إنترليوكين ‎(IL-10) ٠١‏
تم ‎Lind‏ فحص تأثيرات المركبات 0 و5 و7١‏ و١١‏ على إنتاج 11-10 عن طريق ‎PBMC‏ من
مرضى مصابون بالالتهاب المفاصل الروماتويدي (المركب ‎(VY‏ ؛ وذلك في وجود أو غياب
والأجسام المضادة أحادية النسيلة من ‎CD3‏ و028© . تمت زراعة ‎٠١ x ©) PBMC‏ ) 5 خلية/العين) من متطوعين أصحاء بشكل مزدوج في وسط كامل ‎Yoo‏ ميكرو لتر تم تزويده
بأعلى تركيز لمذيب ‎TV)‏ مولار) بمفرده و١٠‏ ” مولارو ‎٠١‏ “مولار و ‎٠١‏ * مولار
من المركب الذي تم توضيحه في وجود أو في غياب ‎٠١( LPS‏ ميكرو جرام/مل) أو مضاد
‎VY.0) CD3‏ نانو جرام/مل) و مضاد 6028 ‎(TV XY) ١(‏ وذلك لمدة 4 ساعة.
‏تم تجميد المواد الطافية من المزرعة عن طريق ‎CBA Flex Set (Becton Dickinson)‏ والخاصة ‎٠‏ بتحديد تركيزات 11-10 وذلك بإتباع تعليمات المُصنع.
‏الجدول رقم ‎YE‏ إنت إنتاج 0 في ‎PMBC‏ من متطوعين أصحاء .
‏تم توضيح النتائج كالناتج المتوسط + قيم ‎Tail‏ القياسي من ‎cytokine‏ الذي تم إفرازه. تم
‏توضيح النتائج الهامة إحصائياً ‎Lally‏ الكبير مع القيم المناظرة لها م (البيانات المتعلقة بالمادة
‏الناقلة لكل الظروف التجريبية) تم توضيحها في الأقواس.
جدول ‎VE‏ ‏إنتاج 1110 في ‎oe PBC‏ متطوعين أصحاء ( بيكو جرام/مل) : المادة الناقلة ‎٠‏ أمولار ‎”٠‏ مولار م مولار المتوسط ‎YeV “+ 6 | YI + YYA YAA + TV‏ + ‎YY (+ VTA) («.YY0)‏ اكد أ ( ‎٠١5‏ مجم ‎EVO (Jaf‏ + 4 £4¢ + ا ا ‎Yel + EAT‏ | )£6 + تخت .) (775..) افص (7..)
مضخادص ؟ ( 17.5 حك + جد | خدج ‎YVA| Yoo x £¥Y| YAY‏ + نانو جرام/مل) + ‎VTA)‏ +( (7؛...) بحب مضاد ‎x 3/١( CD28‏ (7...)
٠
لم تعدل إضافة المركب ‎١١“‏ إلى المزارع من الإنتاج التلقائي الذي تم حثه عن طريق ل ‎IL-10‏ ‏الذي تم حثه ب ‎LPS‏ وذلك من إنتاج ‎PBMC‏ من مائحين ذوي صحة جيدة. وطبقاً ‎oli‏ وعند © التركيزات ‎٠١‏ ” مولار و ‎٠١‏ * مولار فإن هذا المركب يُعدل الزيادة المتحكم فيها عن طريق إفراز 11-10 عن طريق ‎PBMC‏ من المتطوعين الأصحاء و 0028 + 003 الذي تم ‎dis‏ (م > ‎)..٠5‏ والذي يضاد التثبيط القوي لإنتاج ‎INF‏ -جاما الذي تمت ملاحظته في نفس الظروف في
تحليلات متعددة عند ‎Nee ٠١‏ (م < #...).
‎81١ -‏ - الجدول ‎sve‏ إنتاج 0 في ‎PMBC‏ _من متطوعين أصحاء . تم توضيح النتائج كالناتج المتوسط + قيم الخطأ القياسي من ‎cytokine‏ الذي تم إفرازه. تم توضيح النتائج الهامة إحصائيا بالخط الكبير مع القيم المناظرة لها م (البيانات المتعلقة بالمادة الناقلة لكل الظروف التجريبية) تم توضيحها في الأقواس. © الجدول ‎Yo‏ ‎©=n‏ إنتاج 11-10في ©0143 من متطوعين أصحاء ( بيكو جرام/مل) ‎or‏ ‏المتوسط حك + | ‎Y44.1.‏ + ف + | ‎+P¥AN‏ ‏ملام 74 ‎TILT)‏ (تي .)| ‎7.١‏ ‎(+.A4Y) (+.A4Y)‏ ١مجم/مل)‏ | 7.4؛ + ‎٠8 + 7.5 + £YV.Y.‏ + 4ص 4 ‎8٠‏ ات .اي ‎(+A)‏ 8 ‎IAT) (vo (‏ 6 مضاد0© ‎٠8 + 5 + ٠393 + 9.9.117. ( ٠‏ + نانو جرام/مل) + بحل ‎Vaden‏ 171 .)| نلف مضاد ‎(+-vee) )..447( ¥/1) CD28‏ ‎(10x‏ ‏إضافة المركب © إلى المزارع يوفر أقل معدل من التغييرات في مستويات إنتاج 11-10 عن طريق ‎PBMC‏ في © من المانحين ويظهر أيضا زيادة متوسطة مع انخفاض قليل في مستويات ‎cytokine‏ الذي ثم إفرازه عند تركيزات المركب الذي ثم اختباره؛ سواء ‎LPS—‏ الذي ثم حثه 1ل ؟
‎ay —‏ _ أو بالجسم المضاد ‎CD3 + CD28‏ الذي تم إنتاجه. وعلى مدى لتك السطور كان التركيز الخاص بإفراز 11-10 عن طريق ‎“Ve ga PBMC‏ مولار من المتطوعين الأصحاء ‎CD3 + CD28‏ الذي تم حثه بتلك الزيادة (م < 5...). الجدول 76: إنتاج 1110 في ‎PMBC‏ _من متطوعين أصحاء في وجود المركب ‎١١‏ . تم © توضيح النتائج كالناتج المتوسط + قيم ‎Tas‏ القياسي من ‎cytokine‏ الذي تم إفرازه. .تم توضيح النتائج الهامة إحصائياً بالخط الكبير مع القيم المناظرة لها م (البيانات المتعلقة بالمادة الناقلة لكل الظروف التجريبية) تم توضيحها في الأقواس. ‎Yd gaa‏ ‎\Y¥=n‏ إنتاج 11-0 عن طريق ‎(WPMBC‏ متطوعين أصحاء ( بيكو جرام/مل) المتوسط 14 + | £004.07 | .ىق + | تكجلاه + لم ‎Voll. ٠١4 1٠‏ ‎(+A) ١ (sve) (+.vor)‏ ‎٠ ١5‏ مجم/مل) ب + | ‎٠174 | £ YEY LTA‏ جا تك + انعا .$00.0 ‎YL) EYV.AT‏ ‎(+-2V) (+-00V)‏ (700..) مضادت 9“ ‎Y.0)‏ 1 نانو | ‎١76 ١١7 ١١.41 + ٠١47.64‏ جرام/مل[1) + ‎ty ٠.‏ 4 + )+ مضاد ‎٠١«*7/١( CD28‏ ") 11.4 7 - ل|.الا ‎(YAY) (ony)‏ او..) ‎ses ٠‏ الجانب الآخرء تمت زراعة ‎٠١ Xx 0) PBMC‏ خلية/العين) من ‎A‏ مرضى مصابين بالتهاب المفاصل الروماتويدي على نحو مزدوج في وسط مكتمل ‎Yoo‏ ميكرو لتر تم تزويده
‎ay —‏ — بأعلى تركيز لمذيب ‎Ve)‏ مولار) أو ‎Ve‏ مولارو ‎Ga Vee ” ٠١‏ المركب رقم ‎١١‏ في وجود أو في غياب ‎٠١( LPS‏ ميكرو جرام/مل) أو مضاد 03© أو مضاد ‎xX) ( CD28‏ ©“ " ‎٠‏ *) أثناء ‎YE‏ ساعة. تم تجميد المادة الطافية من المزارع عند ‎Vem‏ م وتم العد عن طريق مجموعة ‎BD FACS Bioanayliser (BD Biosciences Cat No. 340128, San Diego CA‏ © (92121 باستخدام مواد تفاعل خاصة بالاختبار المتزامن ‎IL-10 38 A‏ وذلك بإتباع تعليمات الجدول ‎zl YY‏ 11.10 في ‎PMBC‏ _من مرضى مضابين بالتهاب ‎asl‏ الروماتويدي في وجود المركب ‎VY‏ . تم توضيح النتائج كالناتج المتوسط + قيم الخطأً القياسي من ‎cytokine‏ ‏الذي تم إفرازه. تم توضيح النتائج الهامة إحصائياً بالخط الكبير مع القيم المناظرة لها م (البيانات ‎٠‏ المتعلقة بالمادة الناقلة لكل الظروف التجريبية) تم توضيحها في الأقواس. جدول ‎YV‏ ‏( بيكو جرام/مل) المتوسط 4م + | ‎١ + VAAQY | + TAY.e.‏ نالمتء + ا م١١ ‎١17‏ 6“ ‎(v.24) (+.1v¢)‏ )77.+( ‎YYAATE| )لم/مجم‎ ٠١ 5‏ | لاما + | فلاو + | ‎+٠٠٠٠.٠١‏ ‏ماما 11.31 1.4 ‎Evans‏ ‏3ت ...) ‎)...7٠( )..77١(‏ ‎1Y.0) ¥ CDalias‏ نانو 77 + | ‎Aol)‏ | خالا + 4 + جرام/مل1) + مضاد ‎Yo.
LAY VEY, YY YAY.44‏ ‎١‏ ‎٠.٠٠٠١ (+. EAE) ("Ye xY)CD28‏ (0.1974) 0/1 أ
لم يظهر المركب ‎١١‏ أي تأثير على ‎PBMC pl‏ من المتطوعين الأصحاء في وجود أو
غياب الاستثارة (المركب ‎VY‏ ( . وعلى الرغم م ذلك فإن وجود المركب ال في المزرعة عند
تركيز ‎٠١‏ * يعدل بشكل كبير إنتاج 11-10 بعد استثارة ‎PBMC‏ من مرضى مصابين بالتهاب
الكبد الروماتويدي مع ‎LPS‏ (م > 400( لا يوجد المركب ‎١١‏ أي تأثيرات على الإنتاج التلقائي © ل 11-10 أو بعد الاستثارة باستخدام الأجسام المضادة أحادية النسيلة ‎CD3—‏ و ‎CD28‏ عن
طريق ‎PBMC‏ من مرضى مصابين بالتهاب المفاصل الروماتويدي (الشكل رقم ‎١١‏ (
التأثيرات الأخرى على خلايا النظام المناعي
المثال ‎٠١‏ تأثير المركبات 15058 58 ‎VY‏ على استجابة التكاثر ‎PBMC‏ .
تم فحص تأثير المركبات ؛ 045 و6“ و١و7١‏ و١١‏ على استجابة التكاثر الخاصة ‎PBMC—‏ ‎Ve‏ من متطوعين أصحاء في وجود أو غياب الاستثارة باستخدام ‎٠١ (PHA) phytohaemaglutinin‏
ميكرو جرام/مل 5 2 ‎PHA‏ ميكروجرام/مل مع ‎Ala)‏ 11-2 خارجي ‎Vo) Lisl‏ وحدة
دولية/مل) وتوليفة من الأجسام المضادة أحادية النسيلة التي بها ‎١١5( CD3—‏ نانو جرام/مل)
.)؟٠٠٠٠٠١‎ :١ ( ‏ومضاد0028‎
تمت زراعة ‎PBMC‏ أثناء ؛ أيام (<<0-©© خلية لكل عين) عند 7م و 78 من جو 602 ‎Cell incubator HERA Cell 150, Thermoscientific, Thermoelectron, 63505 ) Vo‏
‎(Lagenselbold, GE‏ في وسط زراعة مكتمل. كانت ظروف استثارة المزرعة في وجود أو
‎٠١ (PHA Sigma Ref #L-8902, Madrid, Spain) ‏كما يلي‎ phytohaemaglutinin ‏غياب‎
‏ميكرو جرام/مل؛118م " ميكرو جرام/مل مع إضافة 11-2 خارجي ‎Yo Lindl‏ وحدة دولية
‏على :
- و48 - ‎Human recombinant IL-2, Macrolin, Chiron Iberica, batch #SA753228/4, Madrid,‏ ‎(Spain‏ والأجسام المضادة أحادية النسيلة ‎VY.0) CD3‏ نانو جرام/مل) + ‎:١( CD28abiae‏ )تمت إضافة ‎methyl‏ -311 - ثيميدين : ‎(American Radiochemical 60 Ci/mmol methyl-’H-Thymidine, ITISA, Madrid, Spain)‏ © أثناء ال ‎A‏ ساعات الأخيرة من الزراعة. تم تجميع الخلايا في أغشية من الألياف الزجاجية وتم وضعها في وسط تألق )1450-441 ‎Meltilex A, de Wallac Oy, Ref#‏ 1450-441). تم حساب ‎DNA‏ الذي تم دمجه في الجزء الإشعاعي النشط عن طريق استخدام ‎dae‏ جسيمات ‎Wallac Oy Gy‏ . وتم استخدام التغير الخلوي كمعيار مقارنة في المزارع. تمت الملاحظة من خلال ميكروسكوب : ‎(Zeiss Axiovert 40CFL, Karl Zeiss Microimagen GmbH, Gottingen, Germany) Ye‏ وفيما يخص الكثافة والشكل الخارجي لمزرعة الخلية في الوسط لم تتم ملاحظة إشارات أخرى لكي يتم اكتشاف وحساب التاثيرات المباشرة الخاصة بالتفتل الحيوي على ‎PBMC‏ وتم اختبار الإتاحة الخلوية بعد عملية الاحتضان. الجدول رقم 8: استجابات التكاثر الخاصة ‎Ge PMBC—‏ + من المتطوعين ذوي الصحة ‎٠‏ الجيدة والتي تم توضيحها عن طريق الحث في وجود أو غياب كمية معايرة من المركب ‎٠١‏ ‏(تمت الإشارة ‎add)‏ في هذا السياق بالعقار) . تم توضيح النتائج كالناتج المتوسط + قيم الخطأ القياسي من امتصاص ‎H’-Methyl-Thymidine‏ في ‎cpm‏ : عدة /الدقيقة). تم توضيح النتائج الهامة إحصائياً بالخط الكبير (لم توجد أي منها في هذا الجدول) مع القيم المناظرة لها م (البيانات المتعلقة بالمادة الناقلة لكل الظروف التجريبية) تم توضيحها في الأقواس.
- ‏1ق‎ ‎YA ‏جدول‎ ‎ll I ‏ع‎ ‎RR ‎١30 + 71 VAY + VAR + ١٠ه‎ + 304 + 41١77 | ‏المتوسط المادة‎ 524 7 Yo. ‏الناقلة‎ ‏5ه + للا‎ YAY + ١ ‏م‎ + 7 + YY. + ‏ده ؟؟‎ )..:5( (+.veo) 71 ‏ا‎ TIA ‏العقار‎ ‎(+77) (+-9YV) (+.Y24) + ١ £16119. ‏ا‎ VE4AAT| ‏لما ايد حا اد‎ | PHA-P 2 ‏ا‎ 0 0" o ‏ض ض‎ ْ ‏جرام/مل)‎ + ١٠١١١7 + ١777 + YEAYEY] + ١اه.ماانا‎ + ١٠١١875 ‏70اا(....) ا‎ 9| ١7 Yoo ٠718 ١ ‏العقار‎ ‎)...975( )..51( )..437( (Yer,+) + YYoeVe [4TA9 + AVEAT| + ‏قمعل + | مكلو + | تمعم‎ | ssl | PHA-P
YYVY 47. YY £60 vive ‏(؟ميكدد | الناقلة‎ ) ‏جرام/مل‎ ‎12 ‏(7©7ميكرو‎ ‏جرام/مل)‎ ‎+ 117 ‏مدي + |5039 + اكحكخم‎ 5 + q0¢VYY | + 7١1١5 ‏(قاء..)‎ avAY (+.vor) 17 ‏م‎ AAs ‏العقار‎ ‎(+-ver) (v.67) (+-£1Y7) + ١1648 + االمالا.١‎ | + WEAN | + IVEY | + ‏المادة .اخ‎ TCE
YotYA 77 7". 14 ١3١77 | ‏نسبة الناقلة‎ ‏الخرزات:‎ ‏الخلايا ؟‎ (: + 84 + ١7ءامعت‎ | + ‏.رداذا + | اتمكذا‎ | + ١مل‎ ‏اك‎ (+-2YY)144¢0| 70 ‏و‎ ١7858 ١ ‏العقار‎ ‎)..17( (+-€7Y) (+-VV7) (+-2YY) 7 ١1
بق
لا يعدل وجود المركب ‎٠١‏ في الخلايا بشكل كبير استجابة التكاثر الخاصة ‎PBMCs‏ من +
من المتطوعين الأصحاء في غياب وفي وجود العديد من عوامل الاستثارة الخاصة بالتفتل
(الجدول رقم ‎(YA‏ كان من المعروف أن الجرعة العالية من 11-10 لا تؤثر على تثبيط الأجسام
المضادة ل ‎CD3 + CD28‏ التي تعمل على حث نقاط التكاثر التي تعدل مستويات ‎IL-l‏ ولا © تكون هذه المستويات ذات ‎AT‏ عالية للتشغيل تحت ظروف التجربة المتميزة والتي تم تحليلها في
هذه الوثيقة. ولا تكون تلك المركبات عبارة عن مركبات كابتة للمناعة تؤثر بالسلب على ‎AS‏
الخلية 7 مثل العديد من المواد الكابتة للمناعة الأخرى.
الجدول رقم 79: استجابات التكاثر الخاصة ب71036 _من > من المتطوعين ذوي الصحة
الجيدة والتي تم توضيحها عن طريق الحث في وجود أو غياب كمية معايرة من المركب ؛ ‎٠‏ (تمت الإشارة إليه في هذا السياق بالعقار) ‎٠‏
تم توضيح النتائج كالناتج المتوسط + قيم الخطأً القياسي من امتصاص 117 - ‎methyl‏ -
ثيميدين في ‎cpm‏ : عدة /الدقيقة). تم توضيح النتائج الهامة إحصائياً بالخط الكبير (لم توجد أي
منها في هذا ‎(saad‏ مع القيم المناظرة لها م (البيانات المتعلقة بالمادة الناقلة لكل ‎oa ll‏
التجريبية) تم توضيحها في الأقواس:
٠ ٠/١
PE
V4 ‏الجدول رقم‎ 10-41 10-41 10-4 10-41 10-41 en e [eee eT Te 47١ + VAT VAY | ٠ءال#‎ + | ©١“؛+‎ | 4١779 + | sold | ‏المتوسط‎ ‎YOYA + ‏“ما‎ £3.30] YovY + | ‏عي | + ؟مح‎ + . ٠. 45( (+. NV) | )..ك١(‎ |)... ‏نكتحكام | انح .متا‎ + | YEAAAT |. ‏المادة | م ال‎ |PHA-P ١ ‏ا‎ YVONNE ‏ا‎ ١7١المإ‎ ABU | ٠١( ‏ميكرو‎ ‏جرام/مل)‎ ‎VIAAYA + | ١774: + | YIYATS ‏“لافيو ا متخجحدا‎ +
AEA ‏ا‎ + ١5| ١9.48 | ١١م8‎ | ‏العقار‎ ‏ب‎ ١ v v Le a v
VYoVo + AVEAT + AOEAY + 47165 + 1758544 +١ ‏المادة‎ |PHA-P? ‏4م41 رحيلا‎ MT. 1 VEYA | ‏ميكرو | الناقلة‎ ‏جرام/مل‎ ‎Yo) 2 ‏وحدة/مل)‎ ‏لاما + 4ه كحلا + ح4ح الا + متم + 6 الا‎ +
EY “Yio ‏ا‎ EY ‏+ءااخلاد £1 معت‎ [IVEATY IVYYVETY + ٠١7.١ | ‏لمادة‎ | TCE 77 174 ‏|؛7.7+‎ 75٠45 |+17177 | ‏نسبة | الناقلة‎ ‏الخرزات:‎ ‏الخلايا‎ " :()
YAYAYY + ١ ‏لامعل | + لمتحم‎ [VATYAY +] ‏ماعب رد‎
LEER Yva.. +7١١"7| 77١97 ‏+ا‎ ١85797١ ‏العقار‎ ‎Clee EASY Voy Ce ‏ملا‎ ‏.أ‎
— q 8 — لا يعدل وجود المركب ؛ في الخلايا بشكل كبير استجابة التكاتر الخاصة ‎PBMC‏ من + من المتطوعين الأصحاء في غياب وفي وجود العديد من عوامل الاستثارة الخاصة بالتفتل (الجدول رقم 79). وبالتالي فمن المفترض أن هذا المركب عبارة عن مركب كابت للمناعة والذي يؤثر بالسلب على © تكاثر الخلية 7 مثل العديد من المواد الكابتة للمناعة الأخرى. الجدول رقم ‎Fe‏ استجابات التكاثر الخاصة ‎PMBC—‏ _من + من المتطوعين ذوي الصحة الجيدة والتي تم توضيحها عن طريق الحث في وجود أو غياب كمية معايرة من المركب © (تمت الإشارة إليه في هذا السياق بالعقار). تم توضيح النتائج كالناتج المتوسط + قيم ‎hall‏ القياسي من امتصاص ‎methyl = H‏ - ‎Ve‏ ثيميدين في ‎sac : cpm‏ /الدقيقة). تم توضيح النتائج الهامة إحصائيا بالخط الكبير مع القيم المناظرة لها م (البيانات المتعلقة بالمادة الناقلة لكل الظروف التجريبية) تم توضيحها في الأقواس:
Yay
Cv
Ve ‏جدول‎ ‏ا ا‎ ll al I
RS
IFA LEY) | + VAT | + ‏علاءا‎ | ATE | + 21977 | ‏المتوسط | لمادة‎ ‏رلا‎ ood VY Vo. ‏الناقلة‎
VEY + ‏حخحم ليت ؟ + امكل‎ | + YEVE | + YAYA (+ Feo) 57 ‏العقار 5 81 ملأ‎ )..4( | (cove) | (ever) | (+1) + ١7٠١3 ‏ا نخدملا‎ ١ ‏ما | يرج اتح‎ | sald) | PHAP ‏ل‎ YINYE ‏ا ماخلا‎ ‏جرام/مل)‎ +١76 7 ئاندخ‎ [+ Yo) VT + ‏حملا‎ + VATYY ٠م7ميك‎ | VY41Y ‏اج‎ Voted VIAYY | 177448 | ‏العقار‎ ‎(+-2Ve) (Veo) (+.Veor) (+-Vor) CARRY + YYoVo | + AVEAT| + ‏مدال + | لمعم‎ | + Voods| sald | PHA-P2 ميكدد | زول | ‎VY EER veva‏ .4% 4م12 يديل جرام/مل
Yo) IL2 ‏وحدة/مل)‎ + ‏نعي + | مارم‎ + VAIVA| + YAYA. | + ‏امع‎ ‎£1. V soo 1 117 6600 | ‏العقار‎ ‎).ا7١(‎ ) ‏رمك ) رمك‎ ١ (+ VE) ١) + YT0£AA | ‏ا .الهلا‎ ١7 ‏صاخ اللخعلالر ا لحخ‎ | sal | TCE نسبة ‏ | ‎amu‏ أي؟اسدا| وينم | ‎YFYVA | Ye.ve‏ | يه الخرزات: الخلايا ؟ 0 4ه + ‎YoVAVe|‏ + اي كما +[ ملاع يمالا + العقار | ‎Verda‏ | اا | ‎YVAAT‏ | ممت | لآ.توا ‎(+-Y€9) (+.vor) (+e) (+. YA)‏ (99..) ¥ovy
‎Nay =‏ - تم فقد اختبار المركب © في المزارع؛ وذلك عند ‎٠١‏ © مولار 0 وقد أظهرت أنها تثبط بشكل كبير تثبيط الاستجابة الخاصة ب ‎PBMC‏ من ‎١‏ من المتطوعين ذوي الصحية الجيدة والاستثارة عن طريق الأجسام المضادة ‎CD28‏ + 03 (م > 0005 الجدول ‎{Fe‏ ‏تقوم هذه الصورة بتمييز المركبات المتعلقة بها ‎US‏ والتي لا تشترك معها في السمات © الوظيفية. الجدول رقم ‎:©١‏ استجابات التكاثر الخاصة ‎PMB Cy‏ من + من المتطوعين ذوي الصحة الجيدة والتي تم توضيحها عن طريق الحث في وجود أو غياب كمية معايرة من المركب 1 (تمت الإشارة إليه في هذا السياق بالعقار). تم توضيح النتائج كالناتج المتوسط + قيم الخطأً القياسي من امتصاص ‎:H’-Methyl-thymidine‏ ‎٠‏ عدة /الدقيقة). تم توضيح النتائج الهامة إحصائياً بالخط الكبير مع القيم المناظرة لها م (البيانات المتعلقة بالمادة الناقلة لكل الظروف التجريبية) تم توضيحها في الأقواس: ‎٠ ١/١‏
جل الجدول رقم ‎TY‏ ‎i I‏ ‎RS‏ ‏المتوسط | لمادة | ؟17؛ + | ‎١١ + VAT | havo | Ive‏ م٠‏ الناقلة ‎ee YAS 004 VY Vo.‏ ‎YYOY | + YFAA | + Very‏ + |6ال + ‎YEVA|‏ جم العقار )£1 ‎TAA‏ وف 4 ‎(+.Véo)‏ ‎(+AVF) | ). 437 )..77(‏ | (0؛..) طخحلاط | ‎sald‏ ا ماد ليع احبيف دجا ‎YY Te | Yo).‏ + ل ‎os‏ ‏جرام/مل) 117 لجعي +[ ‎YYFAVY‏ الما ‎١7١7/2١‏ + العقار أل 1777| ك١‏ الجميتا اج ‎٠7860 ١7‏ ‎(v-ver) (:.Y¢o) (+.Vio) (+-Ver) (+-Ver)‏ ‎Voods| sa | PHA-P2‏ + | مدو + ‎YYoVe | + AVEAT| + AcsAY|‏ +
جرام/مل ‎Agar. | + voy,‏ + اس ور + ‎VEAVA|‏ + | .الملا + عار العقار | ‎oor‏ ل 8/7 م1 ا وحدة/مل) معت ) | رفكت ) | ومع) | وح )| (3..) ‎TCE‏ ا لمادة أ. اا١‏ 1 | لخعللا حا ‎IVERTY‏ حا .لاهلا | ‎YT0EAA‏ + نسب ‎Yoved |avyvye|amw|‏ | عي اجو الخرزات: ‎٠١١‏ تففخ + أ اكد عرد | ‎YTT0Y‏ + الخلايا ؟ العقار ]3 156776 | لاا | ‎YAEYO |ا١ومااج| ٠...‏ 0( ريت ) | )2.0( رع رم )ا وت..) لا يعدل وجود المركب + في المزرعة بشكل كبير استجابة التكاثر الخاصة ‎PBMC‏ من + من المتطوعين الأصحاء في غياب وفي وجود أي استثارة تم توضيحها (م > 00005؛ الجدول ‎(YY ©‏ يفترض أن هذا المركب عبارة عن مركب غير كابت للمناعة والذي يؤثر بالسلب على تكاثر الخلية 7 مثلما هو الحال مع العديد من عوامل كبت المناعة العامة.
hy ‏المتطوعين ذوي الصحة الجيدة‎ Go PMBC— ‏الجدول رقم ؟©: استجابات انتكاثر الخاصة‎ ‏والتي تم توضيحها عن طريق الحث في وجود أو غياب كمية معايرة من المركب 9 (تمت‎ ‏الإشارة إليه في هذا السياق بالعقار). تم توضيح النتائج كالناتج المتوسط + قيم الخطأً القياسي من‎ ‏عدة /الدقيقة). تم توضيح النتائج الهامة إحصائياً‎ : cpm SH-Methyl-thymidine ‏امتصاص‎ ‏التجريبية) تم‎ Cag all ‏بالخط الكبير مع القيم المنتاظرة لها م (البيانات المتعلقة بالمادة الناقلة لكل‎ © ‏توضيحها في الأقواس.‎ [06M | 4022-8
Y¥40 + 71 ‏كما‎ + VAT] + Y.vo + 32٠3 | + avy | ‏المتوسط المادة‎ ‏حللا‎ + YEVY + ‏د‎ + ١ + 15 + 37 ‏ديد‎ YEA YY (+-YE3) YAY 1 ‏العقار‎ ‎(+.v¢0) (+.Y¢e4) (+-AE7) + VYo Te | EVeViq. | + VEAAAT] + ‏ايد + | .”د‎ sa | PHA-P ‏جرام/مل)‎ ‎+ ‏ا لاما‎ + ١:11: 7[ + ١3737 + ١771| + 4 (+.¥£0) ٠7م‎ YATY ٠١6 ‏ملعل‎ ١7710 | ‏العقار‎ ‎(+00) («.veo) (+-VVY) (+-vee)
YYVY + ‏ملام لل‎ | + AVEAT| + ‏جمد + | ددحا + | لمعم‎ | sald | PHA-P2 ‏4م121‎ 41. YY £6 ‏ميكرو الناقلة 74 عل‎ ‏جرام/مل‎ ‎Yo) IL2 ‏وحدة/مل)‎ ‏دلامم + اتححيم + اح + لض‎ ١ ‏محقة + | تمصلا‎ (+1) SEA ‏لام‎ Viva ١٠١ ‏العقار‎ ‎)..497( (+2) (+2VY) (+-2'Y) £9T069A | EIVAYYL | + VERT | 2 ‏ا دح ع لال‎ ١١7. ‏المادة‎ TCE 0 ‏ض‎ : 7 7 )١:7 ‏الخلايا‎ ‎+ 14 + VTEVYOA[ + ‏ا اتنا + النت>لاكا‎ + Yu. q0A )..10( 7 ‏اها‎ Y.Yay ‏محلو‎ ١97197 | ‏العقار‎ ‎)..245( )0.757( ‏اعد‎ )..997(
— $ \ _ لا يثبط وجود المركب 9 استجابة التكاثر الخاصة ب ‎PBMC‏ من المرضى الأصحاء عند أي معدلات استثارة ثم توضيحها ‎p)‏ > 50...؛ الجدول ‎٠ ( Y‏ يفترض أن هذا المركب عبارة عن مركب غير كابت للمناعة والذي يؤثر بالسلب على تكاثر الخلية 7 مثلما هو الحال مع العديد من عوامل كبت المناعة العامة. © لا يؤثر وجود المركب ‎١١‏ في المزرعة بشكل كبير على تعديل استجابة التكاثر الخاصة ب ‎PBMC‏ في المتطوعين الأصحاء وفي غياب العديد من العوامل الخاصة باستثارة التفتل (الشكل رقم ‎٠4‏ أ و4 اب). المثال رقم ‎VY‏ تأثير المركب ‎١١‏ على استنزاف ‎CD62L‏ عن طريق ‎PBMC‏ ‏تم فحص تأثير المركب ‎VY‏ على استنزاف .0621© في الخلايا اللمفاوية والخلايا وحدية النواة ‎Ve‏ من ‎PBMC‏ من متطوعين أصحاء. وفي وجود المركب ‎VY‏ وعند تركيز يساوي ‎Ve‏ مولارء؛ تمت دراسة استنزاف .00621 ‎(CD62L -Phycoerithryn (PE), clon BD 51611 Cat No. 341012, BD Biosciences)‏ والتي كانت متزايدة بشكل فعال ‎(v.00 > p)‏ وقد تمت ملاحظة نقص في كثافة التألق الهندسي المتوسط ‎(MFI)‏ .من 0621-08© الذي تم ترقيمه واكتشافه بعد عملية الاستنزاف من ‎Ve‏ 0621 بشكل اختياري والذي يحدث للخلايا اللمفاوية ولكن لم تتم ملاحظة أي اختلافات كبيرة في ‎LAY‏ وحيدات النواة (الشكل رقم ‎(vest ١١‏ ‎Fav‏
‎Vea —‏ — الجدول ‎(FF‏ متوسط الكثافة الخاص بالتألق على التعبير السطحي _ل-0621© .في ‎Wall‏ ‏اللمفاوية ؛ وتكون قيم م مناظرة لتلك الخاصة بالمادة الناقلة لكل حالة تجريبية. ‎‘=n‏ الخلايا اللمفاوية (المتوسط. + الخطأً القياسي ) / الأهمية الإحصائية 0 ‎MEI‏ تجح | بقح | £0080 عند ت..) ‎(p)‏ لاما 4 (97؛..) الجدول رقم 4 “: © متوسط الكثافة الخاص بالتألق على التعبير السطحي ل0621© في الخلايا وحدية النواة؛ وتكون ‎ad‏ م مناظرة لتلك الخاصة بالمادة الناقلة لكل حالة تجريبية. الخلايا وحيدة النواة (المتوسط. + الخطأً القياسي ) / الأهمية الإحصائية ‎MFI‏ 4 + 16 + بالل + ‎AVA) ٠١١١١‏ -+( ‎(p)‏ م فم ‎(+.vYY)‏ ‎YeV)‏
Cyn
المثال رقم ‎(VY)‏ التسسم الدالي للدم لدى الفأر: النشاط عن طريق الفم للمركب ‎NY‏ على
مستويات المصل في الدم ل ‎TNF-q‏
تم استخدام فئران 0101 ذكور تزن بين ‎You Fe‏ جرام وتم تبيتها عند ظروف قياسية ‎Ala‏ من
الأسباب الممرضة المحددة. تم حرمان تلك الحيوانات من الطعام (لمدة من ‎VE‏ إلى ‎١١‏ ساعة؛ © كل مجموعة تشتمل على ‎OY‏ و في كل قفص< ‎5٠١‏ سمأ)؛ ‎aids‏ محلول التغذية من
‎o£+.Y) NaCls (ZA) saccharose‏ وتتغذى كما بحرية. تم إعطاء العلاجات الخاصة
‏بالاختبارات التي تُعطى عن طريق الفم في معلقات ‎(ABU sald)‏ م801 ).+ 7 ‎NaCl‏
‏4. ) بنسبة حجمية ‎٠١‏ مل/ كجم. بعد ساعة تم حث تسسم الدم الداخلي لدى القارض وذلك
‏من خلال الحقن في الغشاء البريتوني بعديدات السكاريد الدهنية من النمط المصلي من البكتيريا ‎Escherichia coli 055:35 ٠‏ (سيجما ‎((L-2880‏ وذلك بجرعة ‎١‏ مجم/ كجم وبنسبة ‎٠١‏ مل/
‏كجم؛ وتمت الإذابة في المحلول الملحي المعقم.
‏تم بعد 90 دقيقة من ‎LPS (fa‏ في (الغشاء البريتوني) تحت تأثر مخدر ‎Isoflurane‏ ¢ تم
‏استخلاص ‎١8 - ١.0‏ مل من الدم بواسطة ثقب القلب؛ وتم طرد عينة الدم مركزياً ‎0٠(‏ لفة
‏في الدقيقة؛ ‎٠١‏ دقائق؛ ‎(o£‏ وتم أخذ عينتي مصل وتم الحتفاظ بهما مجمدتين عند - 70م ‎Ve‏ إلى أن تم قياس تركيزات المصل ‎Mouse TNF/TNFSF1A Quantikine from :EIA) TNF-q‏
‎.)١3( ‏والشكل رقم‎ (Yo) ‏تم تلخيص النتائج في الجدول رقم‎ .)280 Systems
NV
(Fe) ‏الجدول رقم‎ ene |] on ‏بوم | ا‎ [mew | ‏ف‎ ‏مل/ كجم‎ ٠٠١١| ‏مل/كجم‎ ٠٠١ | ‏مل/كجم‎ * | [aS [de Ve] | ‏الجرعة (طريقة‎ ‏الإعطاء) (عن طريق الفم) |(عن طزيق الفم)! (عن طريق الفم) | (عن طريق‎ ‏الفم)‎ ‏م ا‎ VA.¥. ‏(النسبة المئوية‎ ‏للتثبيط)‎ ‎Cer] ‏حو‎ Lover] roms ‏مجم/ كجم مل نشاط‎ Yoo 5 ٠٠١ ‏الذي يُعطى عن طريق الفم بمقدار جرعات‎ ١١ ‏يظهر المركب‎ ‏في هذا النموذج التجريبي ل 175 (عن طريق الغشاء البريتوني) من السم الدموي الداخلي‎ ‏مستويات مصل الدم‎ Liban) ‏يقلل من الناحية المميزة‎ Escherichia coli ‏الفأري المستحث ب‎ © ‏النشاط المضاد لالتهاب المفاصل‎ (VF) ‏فيما يتعلق بالمجموعة الناقلة. المثال رقم‎ TNF-q ‏ل‎ ‏تم استخدام ذكور‎ Collagen ‏في النموذج الفأري لالتهاب المفاصل المستحث ب‎ ١١ ‏للمركب‎ ‏تم الاحتفاظ بها في ظروف مناسبة. في اليوم صفر؛ تم تحصين الحيوانات‎ DBA ‏فئران من‎ /١( ‏الكامل‎ Freund's ‏البقري من النوع ]1 المستحلب في مساعد‎ Collagen ‏ميكرو من‎ ٠٠١ ‏ب‎ ‏بعد التحصين الأولي؛ تم إنعاش‎ ٠١ ‏الذي تمن حقنه تحت الجلد عند قاعدة الذيل. في اليوم‎ )١ ٠ ‏غير‎ Freund's ‏هذه المرة بمساعد‎ Collagen ‏باتباع نفس الجدول الموضح قبل استحلاب‎ of yl
‎A . A —‏ _ كامل ) ‎١‏ / \ { . في اليوم اداه 64و 53 ‎a‏ إعطاء الحيوانات عن طريق الغضاءِ البريتوني ‎ge‏ ميكرو جرام من ‎{0111:B4 Escherichia coli} LPS‏ بدأت المعالجات الدوائية في اليوم ‎Yeo‏ وتم إجراؤها يمويماً لمدة شهر واحد على الأكثر. تم تقييم مؤشر التهاب المفاصل ثلاث مرات كل أسبوع باستخدام نظام مزدوج من القياس : وثم توضيح سلمك كل قدم (معايرة رقمية) وثم تسجيل 0 كل قيمة إكلينيكية خاصة بالطرف ‎all)‏ المرئي لكل درجة من صفر حتى 4) .وفي النهاية تم الحصول على عينات المصل لكي يتم تحديد مستويات ‎(EIA of BD Biosciences) IL-6‏ م تلخيص النتائج في الجدول رقم 7 وفي الشكل رقم ‎١١7‏ ‏الجدول رقم 5 جرعة المعالجة عينة لم عينة | ‎dexam ethasone‏ المركب ‎CY‏ ‏مجم/كجم تتم المقارنة 7(الحقن في ‎٠١‏ (الحقن في البريتون) معالجتها البريتون) ‎٠٠‏ ( الإعطاء عن طريق الفم ) متوسط السمك (مم) | ‎YoY x Yoox ** q¢ oq Y ٠١١‏ * ‎dal)‏ المنوية للشفاء 1777 21 ‎IA EA‏ الدرجة الإكلينية النسبة | ‎٠.٠.١‏ اا عا المنوية للشفاء 7 ال اا ‎١11.6‏ بيكو 4 | ‎*١٠3 XT) EA FEAT) ٠34١‏ جرام/مل) ‎**p (sv. 0 > *p Ye‏ < واحدة من ‎ANOVA‏ في مقابل عينة المقارنة من >00.+« ‎Kruskal-Wallis ٠.١٠ > ttp‏ في مقابل عينة المقارنة. عندما يتم إعطاء المركب ‎١١‏ عند ١٠٠مجم/كجم‏ عن طريق الحقن في البريتون وعندما يتم إعطاء ‎Yoo‏ مجم/كجم عن طريق الفم فإن ذلك يوضح فعالية في مضادة النوذج الفأري الذي تم حقنه ب ‎Collagen‏ من التهاب المفاصل.

Claims (1)

  1. ‎١.8 —‏ - عناصر_ الحماية ‎-١ ١‏ مركب له الصيغة (1): ‎Te, as A‏ 0 م" 2 8 ‎mo NS‏ ‎JT 4‏ حب اسم ‎lo‏ ‎R Se - AF‏ ‎SN‏ ‏0 0 ‎ih‏ ‎FF‏ حيث: ‎ang‏ انتقاء ,8 من © ‎alkyl‏ غير مشبعة؛ ‎cycloalkyl‏ مشبعة أو غير مشبعة؛ ‎aryl‏ مشبعة أو ‎pe 0‏ مشبعة وسيكليل غير متجانسة ‎heterocyclyl‏ مشبعة أو غير مشبعة ¢ 1 يتم انتقاء ‎Rp‏ من 6:0 ‎alkyl‏ غير مشبعة؛ ‎cycloalkyl‏ مشبعة أو غير مشبعة؛ 5 ‎(RR')N‏ ‎V‏ حيث تكون 8 و8 على حدة عبارة عن ‎hydrogen‏ أو م©.© ‎alkyl‏ غير مشبعة ؛ و ‎A‏ تكون ‎Ry‏ عبارة عن شق مر ‎alkyl‏ غير مشبع؛ أو ملح و/أو ذوابة منه مقبولة صيد لانياء في 4 تحضير دواء للأستخدام في ‎Ze‏ مرض التهابي حاد أو مزمن ‎acute or chronic‏ ‎٠‏ 5866ل ‎inflammatory‏ ‎١‏ ”- مركب وفقا لعنصر الحماية ‎١‏ ؛ حيث تكون ‎Ry‏ عبارة عن م6,.6 ‎alkyl‏ مشبع . ‎١‏ *- مركب وفقاً لعنصر الحماية ¥ حيث تكون ‎Ry‏ عبارة عن ‎methyl‏ . ‎١‏ ؛- مركب وفقاً لأي من عناصر الحماية من ‎١‏ إلى ‎oF‏ حيث تكون ‎Ry‏ عبارة عن ‎cycloalkyl‏ ‎Y‏ مشبعة أو غير مشبعة. ١ل ‎٠‏
    — . \ \ ب ‎١‏ #- مركب وفقا لعنصر الحماية ‎of‏ حيث تكون ‎Ry‏ عبارة عن ‎cyclopentyl‏ ‎١‏ +- مركب وفقا لأي من عناصر الحماية من ‎١‏ إلى © حيث تكون ‎Ry‏ عبارة عن ‎methyl‏ . ‎-١ ١‏ مركب لعنصر الحماية ‎١‏ ؛ حيث يتم انتقاء المركب المذكور من المركبات التالية: ‎H3C—(HC)3—O N‏ ‎N‏ مر ( 8 8 ¥ ‎oe‏ ‎HC Ng‏ ‎No‏ ص 2 )2 0 0 00 ‎CL HaC—(H3C)s—O0 N‏ وجلا | ‎N‏ 0 علا 7 8 ونا يحض ‎HO‏ ‎No 4)‏ 7 )3 َ 3 ‎N‏ ‎IO‏ © 1258 58 8 ¢ 0و ‎HC Ss‏ ‎aN 2 Yo‏ ‎do So 6)‏
    د 4 ل م حل ‎CH, N‏ 8 ‎HC‏ ‏6و >> 4 ‎od Yo 5‏ ‎No‏ 2 )7( ® ‎o \ :‏ ( جملا > ‎N _CHs‏ ‎Daa‏ ا 9 410 1 ا مض ‎Yo‏ & )© )10(
    - ١1١ = Ty ‏مس مص‎ N ; Non, Le 7 oo Cg 7 7 ‏ض‎ ‎0 (13) = | J 8 N== HC q Za i (14) +
    4 a. } 0 N Dad) ~/ 5 َ HsC 2 AX a 080 © ‏ل‎ ‎0 (17) ou ‏ع‎ ٍ 59 ~ 5 2 > (18) ‏أو ملح؛ و/أو ذوابة منها مقبولة صيدلانيا.‎ ‏مركب له الصيغة (1) حيث:‎ =A) ‏بك‎ ‏ااا‎ N FS FA he 11 ‏ل أ‎
    ‎1١ -‏ - ”يتم انتقاء ‎Ry‏ من ‎se alkyl C1.Cp‏ مشبعة؛ ‎cycloalkyl‏ مشبعة أو غير مشبعة؛ ‎aryl‏ مشبعة ؛ ‏ أو غير مشبعة ‎cyclil s‏ مشبعة أو غير مشبعة ؛ © تكون ‎Ry‏ عبارة عن شق ‎alkyl CC‏ غير مشبع ؛ 3 أو ملح؛ و/أو ذوابة منه مقبولة صيد لانياً . ‎١‏ 4- المركب وفقا لعنصر الحماية ‎A‏ حيث تكون ‎Ry‏ عبارة عن م©.0 ‎alkyl‏ غير مشبع. ‎-٠١ ١‏ المركب وفقا لعنصر الحماية 9 حيث تكون ‎Ry‏ عبارة عن 008171 . ‎-١١ ١‏ المركب وفقا لعنصر الحماية ‎A‏ والذي يتم انتقاؤه مما يلي: ‎N 0 N‏ 0 ‎١‏ ل \ تح علا مح 5 06 ‎S‏ ‏رض كه )8( )© ‎N cH 0 N‏ 0 ‎NC \‏ ‎Doe | Jo‏ 5 16 106 5 ‎No AN,‏ 2 )12( )10( ‎N 0 N‏ 0 ( )ملا | امون لا ‎AN 5 N= $‏ | 5 ‎HC q Cg SF‏ ‎No‏ 4 > )14( )13( ‎Yo)‏
    ‎١١ -‏ مو امد ‎IAN 5 5‏ | 5 5 عر 1:0 10 ‎ZN ZN‏ )16( )15( ‎CL‏ ايل“ ‎N 0 N‏ 0 8 3 مص يد ص وآ
    ‎a7) (18)‏ ل أو ملح؛ و/أو ذوابة منه مقبولة صيدلانياً ‎o‏ ‎-١١ ١‏ تركيبة صيدلانية تشتمل على مركب له الصيغة )1( وفقاً لما هو مبين في أي من عناصر " الحماية من + إلى ‎OV‏ أو ملح؛ و/أو ذوابة منه مقبولة صيدلانياً؛ ومادة حاملة ‎carrier‏ و/أو " مساعدة ‎sal sadjuvant‏ على الأقل مقبولة صيدلانياً. ‎YY‏ مركب له الصيغة ‎(I)‏ وفقاً لما هو مبين في العناصر الحماية من + إلى ١١؛‏ لاستخدامه ‎Y‏ كدواء ‎.medicament‏ ‎SVE)‏ المركب له الصيغة ‎(I)‏ وفقاً لما هو مبين في عنصر الحماية ‎٠‏ كمركب تصوير " بيولوجي ‎imaging biomarker‏ في تقنيات التصوير والتصوير العلاجي ‎٠‏ للعثور على الآأفات ‎ ¥‏ المناعية ‎immunological lesions‏ ¢ الخلايا المستهدفة ‎target cells‏ وجزيئات المستهدفات
    ‎target molecules ¢ ٠ ١١
SA109300384A 2008-06-16 2009-06-15 مشتقات 5-(4- ميثان سلفونيل-فينيل)- ثيازول لعلاج الأمراض الالتهابية الحادة والمزمنة SA109300384B1 (ar)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US12/139,661 US7781594B2 (en) 2008-06-16 2008-06-16 5-(4-methanesulfonyl-phenyl)-thiazole derivatives for the treatment of acute and chronic inflammatory diseases
EP08380177A EP2135864A1 (en) 2008-06-16 2008-06-16 5-(4-methanesulfonyl-phenyl)-thiazole derivatives for the treatment of acute and chronic inflammatory diseases

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SA109300384B1 true SA109300384B1 (ar) 2013-04-20

Family

ID=43414178

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SA109300384A SA109300384B1 (ar) 2008-06-16 2009-06-15 مشتقات 5-(4- ميثان سلفونيل-فينيل)- ثيازول لعلاج الأمراض الالتهابية الحادة والمزمنة

Country Status (19)

Country Link
EP (1) EP2313382A1 (ar)
JP (1) JP2011524352A (ar)
KR (1) KR20110022679A (ar)
CN (1) CN102083806A (ar)
AR (1) AR072113A1 (ar)
AU (1) AU2009259451B2 (ar)
BR (1) BRPI0915325A2 (ar)
CA (1) CA2728139A1 (ar)
CO (1) CO6331429A2 (ar)
IL (1) IL209801A0 (ar)
MA (1) MA32473B1 (ar)
MX (1) MX2010013978A (ar)
NZ (1) NZ589894A (ar)
RU (1) RU2495031C2 (ar)
SA (1) SA109300384B1 (ar)
TW (1) TWI403506B (ar)
UY (1) UY31896A (ar)
WO (1) WO2009153226A1 (ar)
ZA (1) ZA201008877B (ar)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2961695B1 (fr) * 2010-06-29 2012-07-06 Galderma Res & Dev Utilisation de composes dans le traitement ou la prevention de troubles cutanes
RU2502513C2 (ru) * 2012-01-11 2013-12-27 Государственное бюджетное учреждение здравоохранения Свердловской области "Свердловский областной клинический психоневрологический госпиталь для ветеранов войн" (ГБУЗ СО "СОКП Госпиталь для ветеранов войн") Способ лечения больных с полиорганной патологией озонотерапией
MX2020005360A (es) * 2017-11-23 2020-08-13 Immunic Ag Compuestos y regimen de dosificacion para usarse en la prevencion o tratamiento de enfermedades inflamatorias cronicas y/o autoinmunes.
KR102076936B1 (ko) * 2019-08-12 2020-02-13 연세대학교 산학협력단 티아졸 또는 이의 염을 유효성분으로 포함하는 알러지성 질환 또는 아토피 피부염 예방 또는 치료용 조성물

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IE900394L (en) * 1989-02-08 1990-08-08 Abbott Lab Thiazole derivatives
EP0772606A1 (en) * 1994-07-27 1997-05-14 G.D. SEARLE &amp; CO. Substituted thiazoles for the treatment of inflammation
EP0833622B8 (en) * 1995-06-12 2005-10-12 G.D. Searle &amp; Co. Compositions comprising a cyclooxygenase-2 inhibitor and a 5-lipoxygenase inhibitor
WO2001027094A1 (fr) * 1999-10-12 2001-04-19 Japan Tobacco Inc. Remede anti-hypertriglyceridemie et anti-obesite
CA2451981C (en) * 2001-08-13 2012-02-21 Janssen Pharmaceutica N.V. 2,4,5-trisubstituted thiazolyl derivatives and their antiinflammatory activity
US20050026902A1 (en) * 2003-01-31 2005-02-03 Timothy Maziasz Methods and compositions for the treatment or prevention of human immunodeficiency virus and related conditions using cyclooxygenase-2 selective inhibitors and antiviral agents

Also Published As

Publication number Publication date
EP2313382A1 (en) 2011-04-27
WO2009153226A1 (en) 2009-12-23
AU2009259451B2 (en) 2013-03-14
TW201010988A (en) 2010-03-16
JP2011524352A (ja) 2011-09-01
RU2011101439A (ru) 2012-07-27
TWI403506B (zh) 2013-08-01
CN102083806A (zh) 2011-06-01
BRPI0915325A2 (pt) 2015-10-27
CO6331429A2 (es) 2011-10-20
IL209801A0 (en) 2011-02-28
UY31896A (es) 2010-01-29
AR072113A1 (es) 2010-08-04
CA2728139A1 (en) 2009-12-23
RU2495031C2 (ru) 2013-10-10
MX2010013978A (es) 2011-03-29
AU2009259451A1 (en) 2009-12-23
ZA201008877B (en) 2012-02-29
KR20110022679A (ko) 2011-03-07
MA32473B1 (ar) 2011-07-03
NZ589894A (en) 2011-08-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Lorentz et al. Regulation of human intestinal mast cells by stem cell factor and IL‐4
CN102844023B (zh) Cdc7激酶抑制剂以及其用途
CN106535884A (zh) 免疫调节剂
JPH1180026A (ja) 新規免疫抑制剤、その使用方法およびその同定方法
MX2011006244A (es) Nuevos peptidos de 4-amino-4-oxobutanoilo como inhibidores de replica viral.
CN108938642A (zh) 免疫相关和炎性疾病的治疗
CN1329601A (zh) 作为离子通道调节剂的新的苯并咪唑啉酮一、苯并噁唑酮一或苯并噻唑啉酮衍生物
WO2007037544A1 (ja) 制御性ｔ細胞の製造を向上させる薬剤のスクリーニング方法の開発、及び免疫抑制性のマクロライド系抗生剤を用いる制御性ｔ細胞の製造方法
SA109300384B1 (ar) مشتقات 5-(4- ميثان سلفونيل-فينيل)- ثيازول لعلاج الأمراض الالتهابية الحادة والمزمنة
Abel et al. IQ domain-containing GTPase-activating protein 1 regulates cytoskeletal reorganization and facilitates NKG2D-mediated mechanistic target of rapamycin complex 1 activation and cytokine gene translation in natural killer cells
KR102547762B1 (ko) 신규 화합물 및 이의 자가면역질환 치료 용도
KR20210043433A (ko) 엑소좀 pd-l1의 발현에 대한 억제제를 유효성분으로 포함하는 항암 효과 증진용 조성물
US20220073880A1 (en) Natural killer cells
Sun et al. Prevention of alloimmune rejection using XBP1-deleted bone marrow-derived dendritic cells in heart transplantation
US8492411B2 (en) 5-(4-methanesulfonyl-phenyl)-thiazole derivatives for the treatment of acute and chronic inflammatory diseases
JP3718890B2 (ja) Ｎ−ベンゾイルプロリンエステル誘導体
CN115444841B (zh) 二苯乙烯类化合物在制备抗肿瘤药物中的用途
JP7062010B2 (ja) ３－（１－オキソ－４－（（４－（（３－オキソモルホリノ）メチル）ベンジル）オキシ）イソインドリン－２－イル）ピペリジン－２，６－ジオン及びそのアイソトポログ
JPH0656835A (ja) 免疫抑制剤として有用な新規なトランスシクロペンタニルプリン類似体
CN107501105B (zh) 一类用于治疗神经系统疾病的新化合物
AU2018329881B2 (en) Antitumor agent and antitumor effect potentiator
KR20220150631A (ko) 면역 조절 분자가 풍부한 성숙 수지상 세포의 분화 방법
WO2021247845A1 (en) Quinazoline-derived hck inhibitors for use in the treatment of myd88 mutated diseases
JP2011505393A (ja) ４−オキソブタン酸誘導体の、免疫障害に関連する病状の処置における使用
KR20210026634A (ko) 세포독성 cd4 t 세포의 제조방법 및 이의 용도