RU99128056A

RU99128056A - Сосудистый белок-1 адгезии, обладающий аминоксидазной активностью

Info

Publication number: RU99128056A
Application number: RU99128056/13A
Authority: RU
Inventors: Сирпа ЯЛКАНЕН; Марко САЛМИ; Дэйвид Джон СМИТ; Петри БОНО
Original assignee: Байотай Терапис Лтд.
Priority date: 1997-05-23
Filing date: 1998-05-22
Publication date: 2001-12-20

Claims

1. Очищенная молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая трансмембранную форму сосудистого белка-1 адгезии, выбранная из:
(а) очищенной молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид, включающий аминокислотную последовательность, указанную на фигуре 1 (SEQ ID NO:2);
(б) очищенной молекулы нуклеиновой кислоты, включающей последовательность, кодирующую VAP-1, из нуклеотидной последовательности VAP-1, приведенной на фигуре 1 (SEQ ID NO:1);
(в) очищенной молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид VAP-1, включающий аминокислотную последовательность, кодируемую клоном кДНК VAP-1, хранящейся в депозитарии под No. DSM 11536;
(г) очищенной молекулы нуклеиновой кислоты, включающей кодирующую последовательность для VAP-1 из нуклеотидной последовательности, хранящейся в депозитарии под No. DSM 11536;
(д) очищенной молекулы нуклеиновой кислоты, включающей нуклеотидную последовательность, комплементарную нуклеотидным последовательностям для VAP-1, приведенным в (а), (б), (в), или (г);
(е) очищенной молекулы нуклеиновой кислоты, включающей нуклеотидную последовательность, которая отличается от кодирующей последовательности молекулы нуклеиновой кислоты (б) или (г), в связи с вырожденностью генетического кода; и
(ж) очищенной молекулы нуклеиновой кислоты, включающей нуклеотидную последовательность, которая гибридизуется с молекулой (д) и кодирует VAP-1, имеющий аминокислотную последовательность, обладающую, по меньшей мере, 80% идентичностью с последовательностью VAP-1, приведенной на фигуре 1 (SEQ ID NO:2).

2. Молекула нуклеиновой кислоты по п.1, отличающаяся тем, что кодируемый ею VAP-1 обладает аминоксидазной активностью.

3. Молекула нуклеиновой кислоты по п.1, которая имеет нуклеотидную последовательность для VAP-1, приведенную на фигуре 1 (SEQ ID NO:1).

4. Молекула нуклеиновой кислоты по п.1, которая имеет нуклеотидную последовательность для VAP-1, приведенную на фигуре 1 (SEQ ID NO:1), кодирующую полипептид VAP-1, имеющий аминокислотную последовательность, показанную на фигуре 1 (SEQ ID NO:2).

5. Молекула нуклеиновой кислоты по п.1, которая имеет нуклеотидную последовательность клона кДНК VAP-1, хранящейся в депозитарии под No. DSM 11536.

6. Молекула нуклеиновой кислоты по п.1, которая имеет нуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид VAP-1, который имеет аминокислотную последовательность, кодируемую клоном кДНК VAP-1, хранящейся в депозитарии под No. DSM 11536.

7. Молекула нуклеиновой кислоты по п.1, которая представляет собой молекулу кДНК.

8. Молекула нуклеиновой кислоты по п.1, которая представляет собой молекулу РНК.

9. Способ получения рекомбинантного вектора, включающий вставку очищенной молекулы нуклеиновой кислоты по п.1 в вектор.

10. Рекомбинантный вектор, получаемый в соответствии со способом по п.9.

11. Способ доставки VAP-1 в клетку-хозяина включающий введение молекулы очищенной нуклеиновой кислоты по п.1 в указанную клетку-хозяина.

12. Рекомбинантная клетка-хозяин, содержащая молекулу очищенной нуклеиновой кислоты по п.1.

13. Способ получения полипептида сосудистого белка-1 адгезии (VAP-1), включающий культивирование рекомбинантной клетки-хозяина по п.12, так чтобы указанный полипептид VAP-1 экспрессировался, и выделение указанного полипептида VAP-1.

14. Способ придания аминоксидазной активности клетке-хозяину посредством введения нуклеиновой кислоты по п.2 в указанную в клетку-хозяина.

15. Способ изменения экспрессии трансмембранной формы сосудистого белка-1 адгезии (VAP-1), включающий: (а) введение в клетку-хозяина конструкции ДНК, включающей (i) целевую последовательность трансмембранной формы VAP-1; и (ii) регуляторную последовательность, связанную с указанной целевой последовательностью; и (б) помещение указанной клетки-хозяина в условия, подходящие для осуществления гомологичной рекомбинации между указанной конструкцией ДНК и эндогенной последовательность ДНК для VAP-1.

16. Способ по п.15, отличающийся тем, что указанная регуляторная последовательность предотвращает экспрессию VAP-1 в желательных условиях.

17. Способ по п.15, отличающийся тем, что указанная регуляторная последовательность повышает экспрессию указанного VAP-1 в желательных условиях.

18. Рекомбинантная клетка-хозяин, содержащая: (а) целевую последовательность трансмембранной формы VAP-1; и (б) регуляторную последовательность, связанную с указанной целевой последовательностью VAP-1.

19. Способ окисления амина, включающий взаимодействие указанного амина с трансмембранной формой полипептида сосудистого белка-1 адгезии (VAP-1), обладающего аминоксидазной активностью.

20. Способ по п.19, в соответствии с которым указанный полипептид VAP-1 имеет аминокислотную последовательность, по меньшей мере, на 95% идентичную последовательности, выбранной из группы, состоящей из: (а') очищенного полипептида, включающего аминокислотную последовательность VAP-1, приведенную на фигуре 1 (SEQ ID NO:2); (б') очищенного полипептида, включающего аминокислотную последовательность VAP-1, кодируемую нуклеотидной последовательностью для VAP-1, приведенной на фигуре 1 (SEQ ID NO:1); (в') очищенного полипептида, включающего аминокислотную последовательность, кодируемую клоном кДНК VAP-1, хранящейся в депозитарии под No. DSM 11536; (г') очищенного полипептида, включающего аминокислотную последовательность VAP-1, кодируемую нуклеотидной последовательностью, которая гибридизуется с комплементом ДНК, кодирующим полипептид любого из (а')-(в'), а также кодирует VAP-1, и имеет аминокислотную последовательность, которая обладает, по меньшей мере, 80% идентичностью, с последовательностью, приведенной на фигуре 1 (SEQ ID NO:2) и (д') очищенного полипептида, включающего аминокислотную последовательность эпитоп-содержащей части полипептида по пункту (а') или (б').

21. Способ по п. 19, отличающийся тем, что указанный амин выбирают из группы, состоящей из бензиламина и метиламина.

22. Способ ингибирования аминоксидазной активности, включающий внесение эффективного количества ингибитора в образец, обладающий указанной аминоксидазной активностью.

23. Способ по п.22, отличающийся тем, что указанный ингибитор выбирают из группы, состоящей из семикарбазида, гидроксиламина, пропаргиламина, изониазида, ниаламида, гидраллазина, прокарбазина, монометилгидразина, 3,5-этокси-4-аминометилпиридина или MDL72145 ((Е)-2-(3,4-диметоксифенил)-3-фтораллиламина).

24. Способ манипулирования процессом связывания эндотелиальных клеток с лимфоцитами, опосредованного сосудистым белком-1 адгезии (VAP-1), включающий ингибирование ферментной активности аминоксидазы в указанных эндотелиальных клетках.

25. Способ манипулирования процессом связывания эндотелиальных клеток с лимфоцитами, опосредованного сосудистым белком-1 адгезии (VAP-1), включающий потенцирование ферментной активности аминоксидазы в указанных эндотелиальных клетках.