JPH07110230B2 - 新規な逆転写酵素活性を有する蛋白 - Google Patents
新規な逆転写酵素活性を有する蛋白Info
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- JPH07110230B2 JPH07110230B2 JP2042305A JP4230590A JPH07110230B2 JP H07110230 B2 JPH07110230 B2 JP H07110230B2 JP 2042305 A JP2042305 A JP 2042305A JP 4230590 A JP4230590 A JP 4230590A JP H07110230 B2 JPH07110230 B2 JP H07110230B2
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- Japan
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- msdna
- reverse transcriptase
- protein
- sequence
- orf
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/10—Transferases (2.)
- C12N9/12—Transferases (2.) transferring phosphorus containing groups, e.g. kinases (2.7)
- C12N9/1241—Nucleotidyltransferases (2.7.7)
- C12N9/1276—RNA-directed DNA polymerase (2.7.7.49), i.e. reverse transcriptase or telomerase
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- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
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Description
【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は新規な逆転写酵素活性を有する蛋白及びそれを
コードする塩基配列に関する。
コードする塩基配列に関する。
本発明者らは、グラム陰性土壌細菌であるミクソコッカ
ス・キサンサス（Myxococcus xanthus）にマルチコピー
１本鎖DNA（msDNA）と呼ばれる特殊な構造をとっている
サテライトDNAが存在することを初めて見いだした〔T.
イー、T.フルイチ、S.イノウエ、M.イノウエ（T.Yee,T.
Furuichi,S.Inouye,M.Inouye）：セル（Cell）．第38巻
第203頁（1984）〕。このmsDNA（msDNA−Mx162と称す）
は、77塩基のRNA（msdRNA）の20番目のグアノシン残基
の２′の位置に、162塩基の１本鎖DNAの５′末端が
２′,5′−ホスホジエステル結合で枝分かれした形につ
ながった構造をとっており〔A.ダーンデイル（A.Dhunda
le）ら：セル第51巻1105頁（1987）〕、これは細胞当り
700コピー存在している。msDNAは種々のミクソ細菌（my
xobacteria）に広く分布しており、近縁種であるスティ
グマテラ・オーランティアカ（Stigmatella aurantiac
a）にも、ミクソコッカス・キサンサス由来のmsDNA−Mx
162と高い相同性を有するmsDNA（msDNA−Sa163と称す）
が存在する〔T.フルイチら：セル第48巻第47頁（198
7）、T.フルイチら：セル第48巻第55頁（1987）〕。msD
NAは異なった場所から分離されたミクソコッカス・キサ
ンサスの数株にも存在し〔A.ダーンデイルら：ジャーナ
ル・オブ・バクテリオロジー（Journal of Bacteriolog
y）第164巻第914頁（1985）〕、さらにミクソコッカス
・キサンサスにはより小さい種類のmsDNAであるmsDNA−
Mx65（以前はMrDNAと呼ばれた）が存在する〔A.ダーン
デイルら：ザ・ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケ
ミストリー（The Journal of Biological Chemistry）
第263巻第9055頁（1988）〕。msDNA−Mx162とmsDNA−Sa
163とは高い相同性があるが、これらはmsDNA−Mx65とは
一次配列の上での相同性はない。しかしmsDNA−Mx65
は、さきの二つのものと共通の２次構造を有している。
すなわちmsDNA−Mx65もRNA鎖中のグアノシンにDNAの
５′末端がつながった分岐構造をとっており、msDNAとm
sdRNAの３′末端配列との間でハイブリッドが形成され
ており、またRNA,DNAともステム−ループ構造をとって
いる。本発明者らは、msdRNAが更に長い前駆体RNA（pre
−msdRNA）から形成され、このpre−msdRNAは非常に安
定なステム−ループ構造をとり得ることを示した〔A.ダ
ーンデイルら：セル．第51巻第1105頁（1987）〕。
ス・キサンサス（Myxococcus xanthus）にマルチコピー
１本鎖DNA（msDNA）と呼ばれる特殊な構造をとっている
サテライトDNAが存在することを初めて見いだした〔T.
イー、T.フルイチ、S.イノウエ、M.イノウエ（T.Yee,T.
Furuichi,S.Inouye,M.Inouye）：セル（Cell）．第38巻
第203頁（1984）〕。このmsDNA（msDNA−Mx162と称す）
は、77塩基のRNA（msdRNA）の20番目のグアノシン残基
の２′の位置に、162塩基の１本鎖DNAの５′末端が
２′,5′−ホスホジエステル結合で枝分かれした形につ
ながった構造をとっており〔A.ダーンデイル（A.Dhunda
le）ら：セル第51巻1105頁（1987）〕、これは細胞当り
700コピー存在している。msDNAは種々のミクソ細菌（my
xobacteria）に広く分布しており、近縁種であるスティ
グマテラ・オーランティアカ（Stigmatella aurantiac
a）にも、ミクソコッカス・キサンサス由来のmsDNA−Mx
162と高い相同性を有するmsDNA（msDNA−Sa163と称す）
が存在する〔T.フルイチら：セル第48巻第47頁（198
7）、T.フルイチら：セル第48巻第55頁（1987）〕。msD
NAは異なった場所から分離されたミクソコッカス・キサ
ンサスの数株にも存在し〔A.ダーンデイルら：ジャーナ
ル・オブ・バクテリオロジー（Journal of Bacteriolog
y）第164巻第914頁（1985）〕、さらにミクソコッカス
・キサンサスにはより小さい種類のmsDNAであるmsDNA−
Mx65（以前はMrDNAと呼ばれた）が存在する〔A.ダーン
デイルら：ザ・ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケ
ミストリー（The Journal of Biological Chemistry）
第263巻第9055頁（1988）〕。msDNA−Mx162とmsDNA−Sa
163とは高い相同性があるが、これらはmsDNA−Mx65とは
一次配列の上での相同性はない。しかしmsDNA−Mx65
は、さきの二つのものと共通の２次構造を有している。
すなわちmsDNA−Mx65もRNA鎖中のグアノシンにDNAの
５′末端がつながった分岐構造をとっており、msDNAとm
sdRNAの３′末端配列との間でハイブリッドが形成され
ており、またRNA,DNAともステム−ループ構造をとって
いる。本発明者らは、msdRNAが更に長い前駆体RNA（pre
−msdRNA）から形成され、このpre−msdRNAは非常に安
定なステム−ループ構造をとり得ることを示した〔A.ダ
ーンデイルら：セル．第51巻第1105頁（1987）〕。
本発明者らは、上記の研究結果に基づきmsDNAの生成に
対して次のような機構を提唱した。pre−msdRNAのステ
ム−ループ構造がRNAに結合した分岐msDNA形成の鋳型と
なると同時に、msDNA合成を開始させるプライマーとな
るというものである。そしてこのような反応機構を考え
ることにより、本発明者らは逆転写酵素及びRNaseHの存
在を考えるようになった。本発明の目的は、このような
msDNAを有するミクソ細菌を分子生物学の手法を用いて
解析し、その細菌に存在する逆転者酵素及びそれをコー
ドする遺伝子を提供することにある。
対して次のような機構を提唱した。pre−msdRNAのステ
ム−ループ構造がRNAに結合した分岐msDNA形成の鋳型と
なると同時に、msDNA合成を開始させるプライマーとな
るというものである。そしてこのような反応機構を考え
ることにより、本発明者らは逆転写酵素及びRNaseHの存
在を考えるようになった。本発明の目的は、このような
msDNAを有するミクソ細菌を分子生物学の手法を用いて
解析し、その細菌に存在する逆転者酵素及びそれをコー
ドする遺伝子を提供することにある。
本発明を概説すれば、本発明の第１の発明は図面の第１
図で表されるアミノ酸配列を有していることを特徴とす
る逆転写酵素活性を有する蛋白に関するものであり、本
発明の第２の発明は第１の発明の蛋白をコードする塩基
配列に関する。
図で表されるアミノ酸配列を有していることを特徴とす
る逆転写酵素活性を有する蛋白に関するものであり、本
発明の第２の発明は第１の発明の蛋白をコードする塩基
配列に関する。
本発明に用いられる細菌は第１図に表されるアミノ酸を
コードする遺伝子を有しているものであれば何でもよ
く、その例としてミクソコッカス・キサンサスFB（ATCC
25232）あるいはFB株の変異株でありラトガース・ロバ
ートウッド・ジョンソン医科大学生化学部より供与可能
なミクソコッカス・キサンサスDZF−１があげられる。
コードする遺伝子を有しているものであれば何でもよ
く、その例としてミクソコッカス・キサンサスFB（ATCC
25232）あるいはFB株の変異株でありラトガース・ロバ
ートウッド・ジョンソン医科大学生化学部より供与可能
なミクソコッカス・キサンサスDZF−１があげられる。
本発明者らは、ミクソコッカス・キサンサスのmsDNAコ
ード領域（msd）の100塩基上流に欠失変異を導入する
か、または500塩基上流に挿入変異を導入すると、msDNA
の生成が著しく低下することを見いだした〔A.ダーンデ
イルら：ジャーナル・オブ・バクテリオロジー第170巻
第5620頁（1988）〕。このことは、この領域にmsDNAを
生成するのにシスまたはトランスにポジティブに作用す
る因子があることを示唆していた。そこで本発明者らは
この因子を明らかにするために、まずmsdの上流の領域
の塩基配列を決定した。
ード領域（msd）の100塩基上流に欠失変異を導入する
か、または500塩基上流に挿入変異を導入すると、msDNA
の生成が著しく低下することを見いだした〔A.ダーンデ
イルら：ジャーナル・オブ・バクテリオロジー第170巻
第5620頁（1988）〕。このことは、この領域にmsDNAを
生成するのにシスまたはトランスにポジティブに作用す
る因子があることを示唆していた。そこで本発明者らは
この因子を明らかにするために、まずmsdの上流の領域
の塩基配列を決定した。
その結果第３図及び第４図に示したように、4.85アミノ
酸残基よりなる蛋白をコードするオープン・リーディン
グ・フレーム（ORF）が、msdの77塩基上流に存在するこ
とが明らかになった。また、ORFの開始コドンの７塩基
上流にリボソーム結合配列AGG（630−632）があること
も明らかになった。このORFを見いだすきっかけとなっ
たmsDNAの合成を阻害する挿入変異または欠失変異を導
入するのに用いられたAlu I（Ｂ）及びSma Iサイトはそ
れぞれ第４図の塩基配列の672−675、1061−1066に位置
し、これらはORFの中に含まれていた。また第４図から
明らかなように、msdとmsdRNAコード領域（msr）はそれ
ぞれmsDNAとmsdRNAを反対の向きにコードしており、
３′側が８塩基オーバーラップしていた。また逆向き繰
り返し配列（34塩基対）が分岐構造をとるＧ塩基のすぐ
上流（317−350）と、それより214塩基下流（597−56
4）に存在していた。
酸残基よりなる蛋白をコードするオープン・リーディン
グ・フレーム（ORF）が、msdの77塩基上流に存在するこ
とが明らかになった。また、ORFの開始コドンの７塩基
上流にリボソーム結合配列AGG（630−632）があること
も明らかになった。このORFを見いだすきっかけとなっ
たmsDNAの合成を阻害する挿入変異または欠失変異を導
入するのに用いられたAlu I（Ｂ）及びSma Iサイトはそ
れぞれ第４図の塩基配列の672−675、1061−1066に位置
し、これらはORFの中に含まれていた。また第４図から
明らかなように、msdとmsdRNAコード領域（msr）はそれ
ぞれmsDNAとmsdRNAを反対の向きにコードしており、
３′側が８塩基オーバーラップしていた。また逆向き繰
り返し配列（34塩基対）が分岐構造をとるＧ塩基のすぐ
上流（317−350）と、それより214塩基下流（597−56
4）に存在していた。
配列が既知の蛋白からこのORFのアミノ酸配列とホモロ
ジーを示すものを検索することにより、このORFの配列
は、レトロウイルスの逆点写酵素の配列と高いホモロジ
ーを示すことが明らかになった。ORFのアミノ酸配列を
レトロウイルス〔ヒトエイズウイルス（HIV）及びヒト
Ｔ細胞白血病ウイルスＩ（HTLV Ｉ）〕の逆転写酵素の
アミノ酸配列とサイボーグ・プログラム（Cyborg progr
am、インターナショナル・バイオテクノロジーズ社製）
を用いて比較した。その結果第５図に示したように、OR
FのLeu308からSer351の配列と特に高いホモロジーを示
す配列が、HIV及びHTLV Ｉとは12残基一致する）。特
にこの領域には逆転写酵素のポリメラーゼドメインに共
通な配列Tyr−Ｘ−Asp−Asp（344−347）が存在してお
り、ORFもその条件を満たしていた。したがってORFにコ
ードされている逆転写酵素によってpre−msdRNAよりmsD
NAの合成されることが推定され、ORFがコードしている
蛋白は逆転写酵素であることが明らかにされた。
ジーを示すものを検索することにより、このORFの配列
は、レトロウイルスの逆点写酵素の配列と高いホモロジ
ーを示すことが明らかになった。ORFのアミノ酸配列を
レトロウイルス〔ヒトエイズウイルス（HIV）及びヒト
Ｔ細胞白血病ウイルスＩ（HTLV Ｉ）〕の逆転写酵素の
アミノ酸配列とサイボーグ・プログラム（Cyborg progr
am、インターナショナル・バイオテクノロジーズ社製）
を用いて比較した。その結果第５図に示したように、OR
FのLeu308からSer351の配列と特に高いホモロジーを示
す配列が、HIV及びHTLV Ｉとは12残基一致する）。特
にこの領域には逆転写酵素のポリメラーゼドメインに共
通な配列Tyr−Ｘ−Asp−Asp（344−347）が存在してお
り、ORFもその条件を満たしていた。したがってORFにコ
ードされている逆転写酵素によってpre−msdRNAよりmsD
NAの合成されることが推定され、ORFがコードしている
蛋白は逆転写酵素であることが明らかにされた。
〔実施例〕 以下本発明を実施例により更に具体的に説明するが、本
発明はこれら実施例に限定されない。
発明はこれら実施例に限定されない。
msd近傍の制限酵素地図（第３図）に示した領域の塩基
配列は、以下のようにして決定した。まずミクソコッカ
ス・キサンサスDZF−１株の第３図に示した領域を含む5
KdのSal I−BamH I断片が、pUC9のSal I−BamH I部分に
挿入されたpmsSB7〔A.ダーンデイルら：ジャーナル・オ
ブ・バクテリオロジー第170巻第5620頁（1988）〕のプ
ラスミドDNAを調整した。これからSal I−Sma I断片を
切りだし、この断片がpUC9のSal I−Sma I部分に挿入さ
れたプラスミドを作製した。このプラスミドより調整し
たSal I−Sma I断片をRsa Iで切断し、得られた断片を
さらにpUC9のSal I−Sma Iの部分（Sal I−Rsa I断片）
またはpUC9のSma Iサイト（その他のRsa I切断断片）に
サブクローニングし、それぞれのクローンの挿入断片の
塩基配列を決定した。塩基配列の決定はチェーン・ター
ミネーション法〔F.サンガー（F.Sanger）ら：プロシー
ディングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ
・サイエンシーズ・USA（Proceedings of the National
Academy of Sciences,U.S.A.）第74巻第5463頁（197
7）〕により、１本鎖DNAまたは２本鎖DNAを用い、必要
なプライマーを合成して行った。これにより第３図に示
されている2.2kbのSal I−Sma I領域の塩基配列が決定
された。
配列は、以下のようにして決定した。まずミクソコッカ
ス・キサンサスDZF−１株の第３図に示した領域を含む5
KdのSal I−BamH I断片が、pUC9のSal I−BamH I部分に
挿入されたpmsSB7〔A.ダーンデイルら：ジャーナル・オ
ブ・バクテリオロジー第170巻第5620頁（1988）〕のプ
ラスミドDNAを調整した。これからSal I−Sma I断片を
切りだし、この断片がpUC9のSal I−Sma I部分に挿入さ
れたプラスミドを作製した。このプラスミドより調整し
たSal I−Sma I断片をRsa Iで切断し、得られた断片を
さらにpUC9のSal I−Sma Iの部分（Sal I−Rsa I断片）
またはpUC9のSma Iサイト（その他のRsa I切断断片）に
サブクローニングし、それぞれのクローンの挿入断片の
塩基配列を決定した。塩基配列の決定はチェーン・ター
ミネーション法〔F.サンガー（F.Sanger）ら：プロシー
ディングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ
・サイエンシーズ・USA（Proceedings of the National
Academy of Sciences,U.S.A.）第74巻第5463頁（197
7）〕により、１本鎖DNAまたは２本鎖DNAを用い、必要
なプライマーを合成して行った。これにより第３図に示
されている2.2kbのSal I−Sma I領域の塩基配列が決定
された。
次にpmsSB7をSal IとBamH Iで切断してORFを含む断片を
調製し、さらにこれをAlu IとSma Iで切断し、Alu I
（Ｂ）−Sma I断片を電気泳動することによって他の断
片と分離した後、この断片を切り出し電気泳動でDNAを
抽出した。この断片をpUC9のSma Iサイトに挿入したプ
ラスミドを調節し、これを用いてAlu I（Ｂ）−Sma I領
域の塩基配列をチェーン・ターミネーション法により決
定した。
調製し、さらにこれをAlu IとSma Iで切断し、Alu I
（Ｂ）−Sma I断片を電気泳動することによって他の断
片と分離した後、この断片を切り出し電気泳動でDNAを
抽出した。この断片をpUC9のSma Iサイトに挿入したプ
ラスミドを調節し、これを用いてAlu I（Ｂ）−Sma I領
域の塩基配列をチェーン・ターミネーション法により決
定した。
Alu I（Ａ）−Alu I（Ｂ）領域は、pmsSB7より調節した
ORFを含むSal I−BamH I断片をAlu Iで切断し、第３図
に示したAlu I（Ａ）−Alu I（Ｂ）断片を電気泳動によ
って分離した後、DNAを抽出した。このDNA断片の５′末
端を［γ−32P］ATPとポリヌクレオキナーゼを用いて標
識し、Xho Iで切断した後５％のポリアクリルアミドゲ
ル電気泳動にかけて二つの標識断片を分離し、DNAをマ
ニアスティスらの方法〔T.マニアティス（T.Maniatis）
ら：モルキュラー・クローニング：ア・ラボラトリー・
アニュアル（Molecular Cloning:A Laboratory Manua
l）、コールド・スプリング・ハーバー・ラボラトリー
（Cold Spring Harbor Laboratory）、（1982）〕にし
たがって抽出した。これを用いてマキサム−ギルバート
法〔メソッズ・イン・エンザイモロジー第65巻第499頁
（1980）〕によりAlu断片の塩基配列を決定した。
ORFを含むSal I−BamH I断片をAlu Iで切断し、第３図
に示したAlu I（Ａ）−Alu I（Ｂ）断片を電気泳動によ
って分離した後、DNAを抽出した。このDNA断片の５′末
端を［γ−32P］ATPとポリヌクレオキナーゼを用いて標
識し、Xho Iで切断した後５％のポリアクリルアミドゲ
ル電気泳動にかけて二つの標識断片を分離し、DNAをマ
ニアスティスらの方法〔T.マニアティス（T.Maniatis）
ら：モルキュラー・クローニング：ア・ラボラトリー・
アニュアル（Molecular Cloning:A Laboratory Manua
l）、コールド・スプリング・ハーバー・ラボラトリー
（Cold Spring Harbor Laboratory）、（1982）〕にし
たがって抽出した。これを用いてマキサム−ギルバート
法〔メソッズ・イン・エンザイモロジー第65巻第499頁
（1980）〕によりAlu断片の塩基配列を決定した。
以上のようにして決定されたAlu I（Ａ）サイトからそ
の下流2.2Kbの塩基配列及びアミノ酸配列を第４図に示
した。
の下流2.2Kbの塩基配列及びアミノ酸配列を第４図に示
した。
本発明により、msDNAを合成できる新規な逆転写酵素活
性を有する蛋白及びそれをコードする塩基配列が提供さ
れた。
性を有する蛋白及びそれをコードする塩基配列が提供さ
れた。
第１図は本発明の逆転写酵素活性を有する蛋白のアミノ
酸配列を示す図、第２図は本発明の逆転写酵素活性を有
する蛋白をコードする塩基配列の一例を示す図である。
また第３図はmsd、msr及びORFコーディング領域の制限
酵素領域を示す図であり、小さな矢印はmsDNAを、中抜
きの矢印はmsdRNAを、そして太い矢印はORFを表してい
る。Aluサイトは２カ所だけ示されている。第４図はms
d、msr及びORFコーティング領域の塩基配列並びにORFの
アミノ酸配列を示す図であり、Alu I（Ａ）サイトから
下流のORFの終止領域を越えたところまでの塩基配列が
示してある。301−600番の塩基については対応する相補
鎖をその下に示しており、上列及び下列の四角で囲った
領域はそれぞれmsdRNA及びmsDNAに対応し、矢印は５′
→３′の方向を示している。丸で囲んである351番目の
Ｇ残基はmsdRNAの分岐Ｇ残基を示している。a1及びa2の
矢印は34塩基よりなる逆向き繰り返し配列を示してい
る。４角で囲んであるYADDは、逆転写酵素の保存配列を
示している。第５図はORF（ここではMx−162RTと記載し
てある）のアミノ酸配列の170番目から435番目までとHI
V及びHTLV Ｉの逆転写酵素（RT）の部分配列との比較
を示す図であり、●は３者とも共通のアミノ酸である場
合を示し、○はMx−162RTがHIV RTまたはHTLV I RTの
いずれか一方とだけ共通のアミノ酸である場合を示して
いる。４角で囲んであるYXDDは、逆転写酵素の保存配列
を示している。 なお第1,4,5図におけるアミノ酸は以下に示す１文字記
号で示されている。A:アラニン、C:システイン、D:アス
パラギン酸、E:グルタミン酸、F:フェニルアラニン、G:
グリシン、H:ヒスチジン、I:イソロイシン、K:リジン、
L:ロイシン、M:メチオニオン、N:アスパラギン、P:プロ
リン、Q:グルタミン、R:アルギニン、S:セリン、T:トレ
オニン、V:バリン、W:トリプトファン、Y:チロシン。
酸配列を示す図、第２図は本発明の逆転写酵素活性を有
する蛋白をコードする塩基配列の一例を示す図である。
また第３図はmsd、msr及びORFコーディング領域の制限
酵素領域を示す図であり、小さな矢印はmsDNAを、中抜
きの矢印はmsdRNAを、そして太い矢印はORFを表してい
る。Aluサイトは２カ所だけ示されている。第４図はms
d、msr及びORFコーティング領域の塩基配列並びにORFの
アミノ酸配列を示す図であり、Alu I（Ａ）サイトから
下流のORFの終止領域を越えたところまでの塩基配列が
示してある。301−600番の塩基については対応する相補
鎖をその下に示しており、上列及び下列の四角で囲った
領域はそれぞれmsdRNA及びmsDNAに対応し、矢印は５′
→３′の方向を示している。丸で囲んである351番目の
Ｇ残基はmsdRNAの分岐Ｇ残基を示している。a1及びa2の
矢印は34塩基よりなる逆向き繰り返し配列を示してい
る。４角で囲んであるYADDは、逆転写酵素の保存配列を
示している。第５図はORF（ここではMx−162RTと記載し
てある）のアミノ酸配列の170番目から435番目までとHI
V及びHTLV Ｉの逆転写酵素（RT）の部分配列との比較
を示す図であり、●は３者とも共通のアミノ酸である場
合を示し、○はMx−162RTがHIV RTまたはHTLV I RTの
いずれか一方とだけ共通のアミノ酸である場合を示して
いる。４角で囲んであるYXDDは、逆転写酵素の保存配列
を示している。 なお第1,4,5図におけるアミノ酸は以下に示す１文字記
号で示されている。A:アラニン、C:システイン、D:アス
パラギン酸、E:グルタミン酸、F:フェニルアラニン、G:
グリシン、H:ヒスチジン、I:イソロイシン、K:リジン、
L:ロイシン、M:メチオニオン、N:アスパラギン、P:プロ
リン、Q:グルタミン、R:アルギニン、S:セリン、T:トレ
オニン、V:バリン、W:トリプトファン、Y:チロシン。
フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｎ 15/09 //(Ｃ１２Ｎ 15/09 Ｃ１２Ｒ 1:01） Ｃ１２Ｒ 1:01） (72)発明者 メイ‐イン・ス アメリカ合衆国ニユージヤージー州07060、 ノース、プレインフイールド、ウエスト、 26 エー 401 ルート 22 (72)発明者 スーザン・イーグル アメリカ合衆国ニユージヤージー州08879、 サウス、アムボーイ、エルム、ストリート 242 (72)発明者 井上 正順 アメリカ合衆国ニユージヤージー州08807、 ブリツジウオーター、リンベイル、レーン ３
Claims (3)
- 【請求項１】下記のアミノ酸配列 MTARLDRFVPAASPQAVPTPELTAPSSDAAAKREARRLAHEALLVRAKAI
DEAGGADDWVQAQLVSKGLAVEDLDFSSASEKDKKAWKEKKKAEATERRA
LKRQAHEAWKATHVGHLGAGVHWAEDRLADAFDVPHREERARANGLTELD
SAEALAKALGLSVSKLRWFAFHREVDTATHYVSWTIPKRDGSKRTITSPK
PELKAAQRWVLSNVVERLPVHGAAHGFVAGRSILTNALAHQGADVVVKVD
LKDFFPSVTWRRVKGLLRKGGLREGTSTLLSLLSTEAPREAVQFRGKLLH
VAKGPRALPQGAPTSPGITNALCLKLDKRLSALAKRLGFTYTRYADDLTF
SWTKAKQPKPRRTQRPPVALLSRVQEVVEAEGFRVHPDKTRVARKGTRQR
VTGLVVNAAGKDAPAARVPRDVVRQLRAAIHNRKKGKPGREGESLEQLKG
MAAFIHMTDPAKGRAFLAQLTELESTASAAPQAE で示されることを特徴とする逆転写酵素活性を有する蛋
白。 - 【請求項２】請求項１記載の蛋白をコードするDNA。
- 【請求項３】請求項２記載のDNAが、下記DNA配列 で示されるものであるDNA。
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