RU96121788A - Способ получения рекомбинантной стрептокиназы - Google Patents
Способ получения рекомбинантной стрептокиназыInfo
- Publication number
- RU96121788A RU96121788A RU96121788/13A RU96121788A RU96121788A RU 96121788 A RU96121788 A RU 96121788A RU 96121788/13 A RU96121788/13 A RU 96121788/13A RU 96121788 A RU96121788 A RU 96121788A RU 96121788 A RU96121788 A RU 96121788A
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- gene
- expression
- bacteria
- transformed
- primers
- Prior art date
Links
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims 7
- XRZWVSXEDRYQGC-UHFFFAOYSA-N 4-cyclohexylpyrrolidin-1-ium-2-carboxylate Chemical compound C1NC(C(=O)O)CC1C1CCCCC1 XRZWVSXEDRYQGC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 210000003000 Inclusion Bodies Anatomy 0.000 claims 2
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 claims 2
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims 2
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims 2
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 claims 2
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 claims 2
- 229920000160 (ribonucleotides)n+m Polymers 0.000 claims 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N D-Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims 1
- 229960000789 Guanidine Hydrochloride Drugs 0.000 claims 1
- PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N Guanidinium chloride Chemical compound [Cl-].NC(N)=[NH2+] PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 claims 1
- 108091006822 Human Serum Albumin Proteins 0.000 claims 1
- 210000000214 Mouth Anatomy 0.000 claims 1
- 229920001850 Nucleic acid sequence Polymers 0.000 claims 1
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 claims 1
- 229960005202 Streptokinase Drugs 0.000 claims 1
- 108010023197 Streptokinase Proteins 0.000 claims 1
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 1
- 229920003013 deoxyribonucleic acid Polymers 0.000 claims 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 claims 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims 1
- 230000002949 hemolytic Effects 0.000 claims 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 claims 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 claims 1
- MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N oxygen Chemical compound O=O MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 claims 1
- 230000001105 regulatory Effects 0.000 claims 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims 1
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 claims 1
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 claims 1
Claims (1)
1. Способ получения рекомбинантной стрептокиназы (r-sk), отличающийся тем, что (1) конструируют праймеры, соответствующие нуклеотидным последовательностям sk в гемолитическом Streptococcus aureus амплифицируют ген sk с помощью полимеразной цепной реакции (PCR), при этом макромолекулярную ДНК стрептококка, содержащую ген sk, используют в качестве матрицы; (2) ген sk лигируют с прокариотическими экспрессирующими векторами с образованием рекомбинантного экспрессирующего вектора; (3) бактерии-хозяева трансформируют рекомбинантным экспрессирующим вектором; отбирают трансформированные бактерии-хозяева; (4) трансформированные бактерии-хозяева культивируют в подходящих условиях, и индуцируют экспрессию гена sk; (5) выделяют и очищают экспрессированную r - sk
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что праймеры конструируют в соответствии с аминокислотными последовательностями у N- и C-концов sk.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что праймеры конструируют в соответствии с аминокислотными последовательностями у N- и C-концов sk.
3. Способ по п.2, отличающийся тем, что праймеры представляют собой
и
4. Способ по п.1, отличающийся тем, что Streptococcus aureus выделяют из ротовой полости человека.
и
4. Способ по п.1, отличающийся тем, что Streptococcus aureus выделяют из ротовой полости человека.
5. Способ по п.1, отличающийся тем, что ген sk рекомбинируют с прокариотическим экспрессирующим вектором - плазмидой PLY-4, которая содержит промоторы PL, PR, ген Clt 857, сигнал терминации РНК 5s и другие регуляторные элементы.
6. Способ по п.1, отличающийся тем, что трансформированной бактерией-хозяином является E.col. Экспрессию гена sk индуцируют с помощью температуры, и продукты экспрессии присутствуют в бактериях-хозяевах в форме телец включений.
7. Способ по п.1, отличающийся тем, что трансформированные полученные бактерии с экспрессирующей плазмидой ферментируют в крупном масштабе, и LB, глюкозу, микроэлементы восполняют несколько раз до и после индукции, и устанавливают следующие параметры ферментации: температура 30 - 42oC, растворенный кислород - 50 - 80%, и pH 6 - 8.
8. Способ по п.1, отличающийся тем, что бактерии после ферментации разрушают. Собирают тельца включения, промывают их буфером и растворяют гаунидингидрохлоридом. Извлекают r - sk и очищают ионным обменом и гель-фильтрацией.
9. Способ по п.1, отличающийся тем, что в очищенную sk добавляют человеческий альбумин и другой стабилизатор, стерилизуют фильтрацией, разделяют на аликвоты и лиофилизуют, и получают конечные продукты.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN94112106.2 | 1994-04-04 | ||
| CN 94112106 CN1035193C (zh) | 1994-04-04 | 1994-04-04 | 一种制备重组链激酶的方法 |
| PCT/CN1995/000024 WO1995027050A1 (fr) | 1994-04-04 | 1995-04-03 | Procede de preparation de streptokinase recombinee |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU96121788A true RU96121788A (ru) | 1998-12-27 |
| RU2127758C1 RU2127758C1 (ru) | 1999-03-20 |
Family
ID=5035911
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU96121788/13A RU2127758C1 (ru) | 1994-04-04 | 1995-04-03 | Способ получения рекомбинантной стрептокиназы |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN1035193C (ru) |
| CH (1) | CH688653A5 (ru) |
| RU (1) | RU2127758C1 (ru) |
| WO (1) | WO1995027050A1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2542392C2 (ru) * | 2008-03-31 | 2015-02-20 | Каунсел Оф Сайнтифик Энд Индастриал Рисерч | Мутанты стрептокиназы и их ковалентно модифицированные формы |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1064406C (zh) * | 1998-05-11 | 2001-04-11 | 中国人民解放军军事医学科学院微生物流行病研究所 | 利用基因工程技术生产葡激酶的方法 |
| CN102936603A (zh) * | 2012-10-31 | 2013-02-20 | 上海昊海生物科技股份有限公司 | 尿苷二磷酸-葡萄糖脱氢酶的表达及酶活测定 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU561372B2 (en) * | 1983-10-10 | 1987-05-07 | Board Of Regents Of The University Of Oklahoma, The | Streptokinase-coding recombinant vectors |
| US5066589A (en) * | 1984-03-02 | 1991-11-19 | Board Of Regents Of The University Of Okla. | Streptokinase-coding recombinant vectors |
| US5240845A (en) * | 1989-07-11 | 1993-08-31 | Otsuka Pharmaceutical Factory, Ltd. | Mutated streptokinase proteins |
| CU22277A1 (es) * | 1990-05-23 | 1995-01-31 | Cigb | Procedimiento para el aislamiento y expresion de un gen codificante para estreptoquinasa,secuencia nucleotidica obtenida,adn recombinantes y microorganismos transformados |
-
1994
- 1994-04-04 CN CN 94112106 patent/CN1035193C/zh not_active Expired - Fee Related
-
1995
- 1995-04-03 RU RU96121788/13A patent/RU2127758C1/ru not_active IP Right Cessation
- 1995-04-03 WO PCT/CN1995/000024 patent/WO1995027050A1/zh active Search and Examination
- 1995-04-03 CH CH03481/95A patent/CH688653A5/de not_active IP Right Cessation
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2542392C2 (ru) * | 2008-03-31 | 2015-02-20 | Каунсел Оф Сайнтифик Энд Индастриал Рисерч | Мутанты стрептокиназы и их ковалентно модифицированные формы |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Ferretti et al. | Total synthesis of a gene for bovine rhodopsin. | |
| ES2134198T3 (es) | Mutaciones en la 5' a 3' exonucleasa de las adn polimerasas. | |
| US4520016A (en) | Bacteriolytic proteins | |
| DK1032674T3 (da) | Chlamydia pneumoniae genomisk sekvens og polypeptider, fragmenter deraf og anvendelser deraf, især til diagnosen, forebyggelsen og behandlingen af infektion | |
| ATE480625T1 (de) | Äusseres membranpolypeptid von chlamydia pneumoniae sowie fragmente davon und deren verwendung, insbesondere zur diagnose, prävention und behandlung einer infektion | |
| ES2313793T3 (es) | Identificacion de microorganismos que causan las infecciones agudas del tracto respiratorio. | |
| JPS60233100A (ja) | ヒトγ―インターフェロン活性を有するポリペプチドおよびその製造法 | |
| Myler et al. | Structural organization of the maxicircle variable region of Trypanosoma brucei: identification of potential replication origins and topoisomerase II binding sites | |
| ATE338113T1 (de) | Transferrin-rezeptor gene von haemophilus | |
| ES2302329T3 (es) | Secuencias nucleicas procedentes del genoma de salmonella typhi y usos de las mismas, especialmente para el diagnostico in vitro de la presencia de bacterias del genero salmonella en los productos alimenticios. | |
| BRPI0006915B8 (pt) | processo para preparação de l-aminoácidos | |
| RU96121788A (ru) | Способ получения рекомбинантной стрептокиназы | |
| Schupp et al. | Internal and flanking sequence from AFLP fragments using ligation-mediated suppression PCR | |
| EP2172214A3 (en) | Chlamydia antigens and corresponding DNA fragments and uses thereof | |
| ES2229492T3 (es) | Plasmidos bacterianos. | |
| Oswald et al. | A sporulation gene in Coxiella burnetii? | |
| US5183748A (en) | Process for the preparation of oligo- and polydeoxyribonucleotides | |
| KR100356044B1 (ko) | 개질된 수정미세섬유막 및 그 이용 | |
| Gorshkov et al. | Genetic Polymorphism of Mycoplasmas: Variability of Cytoadhesin Genes in Clinical Isolates of Mycoplasma hominis | |
| FI74732C (fi) | Dna-oeverfoeringsvektor, vilken innehaoller en nukleotidsekvens som kodar foer tillvaexthormon. | |
| HAGIYA et al. | The S layer composed of two different protein subunits from Clostridium difficile GAI 1152: a simple purification method and characterization | |
| Mesnard et al. | Characterization of different electrophoretic forms of cauliflower mosaic virus virions (strain Cabb-S) | |
| Ass | Patent Report | |
| IMANAKA et al. | Thermostable Enzymes of Hyperthermophilic Archaea | |
| JP2004057058A (ja) | プレボテラ・インターメディアの検出方法 |