RU95112753A

RU95112753A - Способ обнаружения антитела в пробе с использованием хемилюминесцентного соединения и способ измерения концентрации и/или относительного содержания специфического антитела в пробе

Info

Publication number: RU95112753A
Application number: RU95112753/14A
Authority: RU
Inventors: Йохансен Нильс; Ипсен Ханс-Генрик
Original assignee: Алк Лабораторирне А/С
Priority date: 1992-11-13
Filing date: 1993-11-15
Publication date: 1997-08-27

Claims

1. Способ обнаружения антитела в пробе с использованием хемилюминесцентного соединения, предусматривающий:
а) смешивание лигандного антигена, антитела или гаптена, связанных с биотипом или его функциональным производным; антитела, направленного против детектируемого антитела, связанного с парамагнитными частицами; хемилюминесцентного акридинового соединения, связанного с авидином, стрептавидином или его функциональным производным, с пробой для образования твердофазного связанного комплекса,
b) магнитное отделение твердой фазы от жидкой фазы,
с) инициирование хемилюминесцентной реакции и анализ отделенной твердой фазы на присутствие хемилюминесцентного комплекса, причем присутствие хемилюминесценции является указанием на присутствие упомянутого антитела в пробе.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что он предусматривает:
i) смешивание лигандного антигена, антитела или гаптена, связанных с биотипом или его функциональным производным, с пробой и антителом, направленным против детектируемого антитела, связанным с парамагнитными частицами, для образования первого твердофазного комплекса,
ii) добавление хемилюминесцентного акридинового соединения, ковалентно связанного с авидином, стрептавидином или его функциональным производным, для образования второго твердофазного комплекса,
iii) магнитное отделение твердой фазы от жидкой фазы; iv) инициирование хемилюминесцентной реакции и анализ отделенной твердой фазы на присутствие хемилюминесцентного комплекса.

3. Способ по п. 1 или 2, отличающийся тем, что антитело в пробе представляет собой специфический иммуноглобулин, выбранный из группы, состоящей из специфического IgA, IgD, IgE, IgG, IgM и их изотипов, а лигандный антиген, антитело или гаптен представляет собой специфический аллерген.

4. Способ по п. 3, отличающийся тем, что специфический иммуноглобулин представляет собой IgE.

5. Способ по п. 1 или 2, отличающийся тем, что антитело в пробе относится к классу иммуноглобулинов, выбранных из группы, состоящей из общего IgA, общего IgD, общего IgE, общего IgG, общего IgM и их изотипов, а лигандный антиген, антитело или гаптен представляет собой антитело, нацеленное против этого класса иммуноглобулинов.

6. Способ по п. 5, отличающийся тем, что класс иммуноглобулинов представляет собой общий IgE.

7. Способ по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что антитело, направленное против детектируемого антитела, связанное с парамагнитными частицами, выбрано из группы, состоящей из поликлональных антител, моноклональных антител, в том числе рекомбинантных антител, фрагментированных антител, предпочтительно является моноклональным мышиным анти-иммуноглобулином.

8. Способ по любому из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что хемилюминесцентное акридиновое соединение представляет собой N-гидроксисукцинимиддиметилакридиновый эфир, ковалентно связанный с авидином, стрептавидином или его функциональным производным.

9. Способ измерения концентрации и/или относительного содержания специфического антитела в пробе, отличающийся тем, что измеренную эмиссию света отделенной твердой фазы, содержащей захваченное специфическое антитело, связанное с хемилюминесцентной меткой, сравнивают с измеренной эмиссией света, полученной в параллельном стандартном иммуноанализе, в котором измеряют общее содержание того класса антител в пробе, к которому принадлежит специфическое антитело, предусматривающий следующие стадии:
а) смешивание лигандного антигена или гаптена, против которого направлено измеряемое антитело, связанного с биотином или его функциональным производным; антитела, направленного против константной части измеряемого антитела, связанного с парамагнитными частицами; и хемилюминесцентного акридинового соединения, связанного с авидином, стрептавидином или его производным, с пробой для образования первого твердофазного комплекса,
b) магнитное отделение первой твердой фазы от жидкой фазы,
с) инициирование хемилюминесцентной реакции и измерение эмиссии света отделенной первой твердой фазы,
d) смешивание лигандного антитела, направленного против класса измеряемых антител, связанного с биотином или его функциональным производным; антитела, направленного против константной части класса измеряемых антител, связанного с парамагнитными частицами; и хемилюминесцентного акридинового соединения, связанного с авидином, стрептавидином или его функциональным производным, с пробой для образования второго твердофазного комплекса,
е) магнитное отделение второй твердой фазы от жидкой фазы,
f) инициирование хемилюминесцентной реакции и измерение эмиссии света отделенной второй твердой фазы, и
g) сравнение эмиссии света первой твердой фазы с эмиссией света второй твердой фазы.

10. Способ по п. 9, отличающийся тем, что стадию а) выполняют путем
(i) смешивания лигандного антигена или гаптена, связанного с биотином или его функциональным производным, с пробой и антителом, связанным с парамагнитными частицами, для образования твердофазного комплекса, и
(ii) добавления хемилюминесцентного акридинового соединения, связанного с авидином, стрептавидином или его функциональным производным, для образования первого твердофазного комплекса, причем стадию d) выполняют путем
(i) смешивания лигандного антитела, связанного с биотином или его функциональным производным, с пробой и антителом, связанным с парамагнитными частицами, с образованием твердофазного комплекса, и
(ii) добавления хемилюминесцентного акридинового соединения, ковалентно связанного с авидином, стрептавидином или его функциональным производным, для образования второго твердофазного комплекса.

11. Способ по п. 9 или 10, отличающийся тем, что специфическое антитело, которое должно быть измерено в пробе, является специфическим иммуноглобулином, выбранным из группы, состоящей из IgA, IgD, IgE, IgG, IgM и их изотипов, а лигандный антиген, антитело или гаптен, направленные против вариабельной области данного антитела, представляют собой аллерген, и класс антител представляет собой класс иммуноглобулинов, выбранных из группы, состоящей из общего IgA, общего IgD, общего IgE, общего IgG, общего IgM и их изотипов, а лигандный антиген, антитело или гаптен представляют собой антитело, направленное против этого класса иммуноглобулинов.

12. Способ по п. 11, отличающийся тем, что специфический иммуноглобулин представляет собой специфический IgE, а класс антител представляет собой общий IgE
13. Способ по п. 9 или 10, отличающийся тем, что антитело, направленное против измеряемого антитела, связанное с парамагнитными частицами, выбрано из группы, состоящей из поликлональных антител, в том числе рекомбинантных антител, фрагментированных антител, предпочтительно представляет собой моноклональный мышиный анти-иммуноглобулин.

14. Способ по одному из предыдущих пунктов, отличающийся тем, что хемилюминесцентное акридиновое соединение представляет собой N-гидроксисукцинимид-диметилакридиновый эфир, ковалентно связанный с авидином, стрептавидином или его функциональным производным.