RU94045873A

RU94045873A - Композиция альфа-интерферона и способ ее получения из лейкоцитов крови человека

Info

Publication number: RU94045873A
Application number: RU94045873/14A
Authority: RU
Inventors: Дуглас Теста; Мэй-Джун Лиао; Каталин Ференц-Биро; Аббас Рашидбайджи; Марио Дипаоло; Маниша Падхи
Original assignee: Интерферон Сайнс Инк.
Priority date: 1992-02-10
Filing date: 1994-08-25
Publication date: 1998-05-10

Claims

1. Композиция альфа-интерферона, получаемая из лейкоцитов периферической крови человека, в основном состоящая из смеси интерферона типов α₂ и α₈ и соответственно их аллелей, и по крайней мере из одного типа интерферона, который выбирают из группы, включающей α₄,α₇,α₁₀,α₁₆,α₁₇ и α₂ и соответственно их аллели, а также состоящая из факультативного фармакологически приемлемого носителя, причем указанная композиция характеризуется уровнем токсичности по отношению к больным людям, который существенно снижен по сравнению с другими композициями, содержащими индивидуальные типы интерферона или смеси других типов интерферона.

2. Композиция по п.1, имеющая содержание углеводов в диапазоне 1 - 6 молей сахара на 1 моль интерферонового белка, по крайней мере чистоту интерфероновых белков человека, соответствующую 95%, приблизительную мол.м. 16000 - 27000 Дальтон и по крайней мере одну N-терминальную последовательность и по крайней мере одну С-терминальную последовательность.

3. Композиция по п.1, характеризующаяся гидрофобностью, которую измеряют путем элюирования в 0,1%-ной ТГА из обратнофазовой HPLC (С4)-колонки в линейном градиенте 40 - 60%-ной концентрации ацетонитрилового растворителя с получением профиля элюции при ОП₂ ₈ ₀ и относительного процентного содержания семи HPLC-пиков от общего профиля элюции, причем указанная композиция имеет содержание углеводов в диапазоне 1 - 6 молей сахара на 1 моль интерферонового белка, специфическую активность около 1 - 10 • 10⁸ МЕд/мг, определяемую в антивирусном исследовании in virto с помощью клеток человека и быка, N-терминальные последовательности и С-терминальные последовательности.

4. Природная альфа-интерфероновая композиция, получаемая из лейкоцитов периферической крови человека, в основном состоящая из альфа-интерферонового белка, который выбирают из группы, включающей типы интерферона α₈,α₄,α₇,α₁₀,α₁₆,α₁₇ и α₂₁ и соответствующие аллели, а также их комбинации, а также состоящая из фармакологически приемлемого носителя, причем указанная композиция по существу не содержит α₂- типов интерферона и характеризуется антивирусной активностью in virto, превосходящей таковую α₂- интерферона и/или его аллелей.

5. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что указанный альфа-интерфероновый белок выбирают из α₈- интерферона и его аллелей.

6. Способ увеличения силы действия антивирусного агента, заключающийся в добавлении к указанному антивирусному агенту эффективного количества композиции по п.4 или 5.

7. Применение композиции по п.4 или 5 для приготовления фармакологической композиции для лечения вирусной инфекции человека.

8. Применение по п.7, отличающееся тем, что указанная вирусная инфекция представляет собой ВИЧ-инфекцию или гепатит.

9. Способ получения композиции альфа-интерферона, включающий следующие стадии: (а) получение лейкоцитов периферической крови человека путем сбора лейкоцитарной пленки после лизиса эритроцитов, (б) суспендирование лейкоцитов до плотности 1 - 10 • 10⁶ клеток в подходящей индукционной среде при рН около 7,4, обогащенной L-глутамином, не необходимыми аминокислотами, бикарбонатом натрия, 0,1 - 1,5 мг/мл сыворотки крови человека, не содержащей гамма-глобулинов, факультативными витаминами В₃ и/или С и факультативными подходящими агентами, способными ингибировать рост микроорганизмов, (в) добавление сырого или очищенного интерферона в качестве праймера к лейкоцитам, суспендированным в индукционной среде, (г) инкубирование суспензии достаточное время при температуре около 36^oС при перемешивании, (д) добавление к суспензии 50 - 500 ГА Ед/мл вируса Сендай, (е) инкубирование достаточное время при температуре около 36^oС при перемешивании, (ж) центрифугирование для удаления клеток и дебриса и (з) сбор сырого альфа-интерферона в качестве продукта без разделения одних типов альфа-интерферона от других, присутствующих в альфа-интерфероновой смеси.

10. Способ по п.9, включающий дальнейшую стадию разведения лейкоцитарной суспензии после стадии (е) до конечной концентрации около 1 - 5 • 10⁶ клеток/мл в индукционной среде.

11. Способ очистки сырого альфа-интерферона, получаемого по п.9 или 10, включающий следующие стадии: (а) концентрирование смеси сырого интерферона в 10 - 100 раз, (б) удаление примесей, содержащихся в сыром интерфероне путем осуществления антительной иммуноаффинной хроматографии сконцентрированной смеси, (в) инкубирование аффинно-очищенного интерферона в кислоте по крайней мере 2 дня при 4^oС и (г) дальнейшую очистку аффинно-очищенного интерферона гельфильтрационной хроматографией.