RU2800719C2 - Антитела к фактору xi - Google Patents

Abstract

Изобретение относится к области биохимии, в частности к выделенному антителу к фактору коагуляции, которое специфически связывается с человеческим FXI. Также раскрыта фармацевтическая композиция для ингибирования образования тромбов, с помощью указанного антитела. Раскрыты применения указанного антитела для ингибирования образования тромбов у субъекта, в изготовлении лекарственного средства для лечения или ингибирования возникновения сепсиса; способ ингибирования образования тромбов у субъекта; способ лечения или ингибирования возникновения тромбоза или осложнения, или состояния, способ лечения или ингибирования возникновения сепсиса; способ получения указанного антитела. Изобретение позволяет эффективно лечить состояния, связанные с коагуляцией. 12 н. и 6 з.п. ф-лы, 13 ил., 3 табл., 11 пр.

Description

Область техники, к которой относится настоящее изобретение

[001] Настоящее раскрытие относится к антителам, способным связываться с фактором коагуляции XI (FXI) и/или его активированной формой XIa (FXIa), а также с фрагментами FXI и/или FXIa, и их применениям, включая в себя применения в качестве антикоагулянтов для лечения тромбозов, которые не нарушают гемостаз.

Предшествующий уровень техники настоящего изобретения

[002] Тромбоз представляет собой состояние, которое предусматривает свертывание крови в кровеносном сосуде, блокируя тем самым или препятствуя кровотоку в пораженной области. Это состояние может привести к серьезным осложнениям, если сгустки крови перемещаются по кровеносной системе в важную часть тела, такую как сердце, головной мозг и легкие, вызывая сердечный приступ, инсульт, легочную эмболию и т.д. Тромбоз может лечиться или предотвращаться антикоагулянтами, такими как гепарин и варфарин. Наиболее распространенным побочным эффектом этих доступных в настоящее время способов лечения является кровотечение. Следовательно, эти способы лечения ограничены дозой и исполнительностью пациента, потому что пациенты должны подвергаться тщательному контролю после лечения.

[003] Существует необходимость в эффективной терапии или профилактике тромбоза с минимальными побочными эффектами. Настоящее раскрытие удовлетворяет потребность в настоящей области техники.

Краткое раскрытие настоящего изобретения

[004] Согласно определенным вариантам осуществления в настоящем документе представлены антитела, которые связываются с фактором XI коагуляции (FXI) и/или его активированной формой XIa (FXIa), а также с фрагментами FXI и/или FXIa. Согласно некоторым вариантам осуществления антитела представляют собой моноклональные антитела. Согласно некоторым вариантам осуществления антитела представляют собой рекомбинантные антитела. Согласно некоторым вариантам осуществления антитела представляют собой гуманизированные антитела. Согласно некоторым вариантам осуществления антитела представляют собой иммунологически активные части молекул иммуноглобулина, например, Fab, Fv или scFv. Согласно некоторым вариантам осуществления антитела связываются с доменом A3 FXI и/или FXIa. Согласно некоторым вариантам осуществления антитела включают в себя одну или несколько CDR, состоящих из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 11-16, 27-32, 43-48, 59-64, 75-80, 91-96, 107-112, 123-128, 139-144, 155-160, 171-176 и 187-192 или содержащих их.

[005] В настоящем документе представлена фармацевтическая композиция для лечения и/или профилактики тромбоза и/или связанных с тромбозом осложнений или состояний. Фармацевтическая композиция содержит одно или несколько антител к FXI и/или к FXIa, как описано в настоящем документе. Согласно некоторым вариантам осуществления фармацевтическая композиция дополнительно содержит один или несколько фармацевтически приемлемых адъювантов, носителей, вспомогательных веществ, консервантов или их комбинацию.

[006] В настоящем документе представлена нуклеиновая кислота, кодирующая антитело к FXI и/или к FXIa, как описано в настоящем документе, или функциональный фрагмент любого антитела, а также вектор, содержащий нуклеиновую кислоту, и клетка-хозяин, содержащая вектор. Согласно некоторым вариантам осуществления вектор представляет собой вектор экспрессии, который способен производить антитело или его функциональный фрагмент, кодируемый нуклеиновой кислотой в клетке-хозяине.

[007] В настоящем документе представлен набор, содержащий одно или несколько описанных в настоящем документе антител к FXI и/или к FXIa для применения при лечении и/или профилактике тромбоза и/или связанных с тромбозом осложнений или состояний. Альтернативно, набор содержит фармацевтическую композицию, содержащую одно или несколько описанных в настоящем документе антител к FXI и/или к FXIa для применения при лечении и/или профилактики тромбоза и/или связанных с тромбозом осложнений или состояний. Согласно определенным вариантам осуществления набор дополнительно содержит инструкции по применению.

[008] В настоящем документе представлен способ лечения и/или профилактики тромбоза и/или связанных с тромбозом осложнений или состояний. Способ предусматривает введение нуждающемуся в этом субъекту терапевтически эффективного количества одного или нескольких описанных в настоящем документе антител к FXI и/или к FXIa. Альтернативно, способ предусматривает введение нуждающемуся в этом субъекту терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции, содержащей антитело к FXI, антитело к FXIa или функциональный фрагмент любого антитела.

[009] В настоящем документе представлено применение описанного в настоящем документе антитела к FXI и/или к FXIa для составления лекарственного средства для лечения и/или профилактики тромбоза и/или связанных с тромбозом осложнений или состояний.

[0010] В настоящем документе представлен способ получения описанного в настоящем документе антитела к FXI и/или к FXIa. Способ предусматривает стадии трансформации клетки-хозяина вектором, содержащим нуклеиновую кислоту, кодирующую антитело, и экспрессию антитела в клетке-хозяине. Способ может дополнительно предусматривать очистку экспрессированного антитела из клетки-хозяина. Кроме того, очищенное антитело может подвергаться модификациям, так что модифицированное рекомбинантное антитело сохраняет активность соответствующего человеческого антитела. Альтернативно, раскрытое в настоящем документе антитело может быть получено путем культивирования гибридомы.

Краткое описание графических материалов

[0011] На фиг. 1 показаны эффекты пяти антител к FXI посредством анализа АРТТ в плазме человека. Человеческую плазму, дополненную пятью различными антителами в концентрации от 0 до 400 нМ, исследовали в анализе АРТТ, как описано в примере 2. Пять исследованных антител включали в себя 19F6 (A), 34F8 (В), 42А5 (С), 1А6 (D) и 14Е11 (Е). Антитела 1А6 и 14Е11 использовали в качестве положительных контролей в этом эксперименте.

[0012] На фиг. 2 показаны эффекты антител 19F6 (A), 34F8 (В) и 42А5 (С) в анализе АРТТ в плазме обезьян. Плазму обезьяны, дополненную тремя различными антителами в концентрации от 0 до 400 нМ, исследовали в анализе АРТТ, как описано в примере 3.

[0013] На фиг. 3 показаны сенсограммы SPR для связывания FXI с иммобилизованными h-19F6 (A), h-34F8 (В) и h-42A5 (С), а также сенсограммы SPR для связывания FXIa с иммобилизованными h-19F6 (D), h-34F8 (Е) и h-42A5 (F). Данные соответствовали модели связывания 1:1, и кривые, соответствующие исследованным концентрациям FXI (0,005-1 нг/мл), показаны наложенными на сенсограммах. Каждая кривая указывает на различную исследуемую концентрацию FXI или FXIa.

[0014] На фиг. 4 показаны кривые концентрация-ответ антител h-19F6 (A), h-34F8 (В) и h-42A5 (С), ингибирующих FXIa человека от гидролиза S-2366.

[0015] На фиг. 5 показано ингибирующее действие антител h-19F6 (А) и h-42A5 (В) на опосредованную FXIa активацию FIX в FIXa. Человеческий FrX (200 нМ) инкубировали с FXIa (5 нМ) в PBS с 5 мМ CaCl₂ при комнатной температуре с 1 мкМ контрольного IgG или h-19F6 или h-42A5. Через указанные интервалы образцы собирали и FIX, а также FIXa определяли вестерн-блоттингом с использованием козьего IgG к человеческому FIX (Affinity Biologicals).

[0016] На фиг. 6 показаны эффекты антител h-34F8, h-19F6 и h-42A5 на АРТТ у яванских макаков. Обезьянам вводили внутривенно указанные дозы h-34F8 (A), h-19F6 (В) и h-42A5 (С). Время свертывания АРТТ ex vivo определяли до введения дозы (время 0) и через 0,5, 1, 3, 6, 12 и 24 часа после введения дозы.

[0017] На фиг. 7 показаны эффекты антител h-34F8, h-19F6 и h-42A5 на РТ у яванских макаков. Обезьянам вводили внутривенно указанные дозы h-34F8 (A), h-19F6 (В) и h-42A5 (С). Время свертывания РТ ex vivo определяли до введения дозы (время 0) и через 0,5, 1, 3, 6, 12 и 24 часа после введения дозы.

[0018] На фиг. 8 показаны эффекты антител h-34F8, h-19F6 и h-42A5 на тромбоз шунта AV у яванских макаков. Повышающиеся уровни h-34F8 (A), h-19F6 (В) или h-42A5 (С) вводили обезьянам внутривенно (n=3 для h-34F8 и h-19F6; n=4 для h-42A5), изменения массы сгустка от состояния до введения дозы определяли на модели тромбоза шунта АВ обезьяны. *Р<0,05, **Р<0,01 и ***Р<0,001 по сравнению с наполнителем.

[0019] На фиг. 9 показаны эффекты антител h-34F8, h-19F6 и h-42A5 на время кровотечения у яванских макаков. Повышающиеся уровни h-34F8 (A), h-19F6 (В) или h-42А5 (С) вводили обезьянам внутривенно (n=3 для 34F8 и h-19F6; n=4 для h-42A5), время кровотечения оценивали до введения дозы и через 30 минут после каждой дозы.

[0020] На фиг. 10 показаны антитромботические эффекты антител h-34F8, h-19F6 и h-42A5. Четырем группам обезьян (n=5) вводили внутривенно наполнитель, h-34F8, h-19F6 или h-42A5 в дозе 0,3 мг/кг, в течение 2 часов, и FeCl₃ наносили на левую бедренную артерию каждого животного, чтобы индуцировать тромбоз. Время до 80% тромботической окклюзии (А) и до 100% тромботической окклюзии (В) определяли путем контроля скорости кровотока. *Р<0,05 и **Р<0,01 по сравнению с наполнителем.

[0021] На фиг. 11 показано, что воздействие антителами h-34F8, h-19F6 или h-42A5 не увеличивало время кровотечения у обезьян. Четырем группам обезьян (n=5) вводили внутривенно наполнитель, h-34F8, h-19F6 или h-42A5 в дозе 0,3 мг/кг, и точное время кровотечения измеряли до введения дозы и через 1 час после введения дозы. Индивидуальное время кровотечения в группе, получавшей h-34F8, h-19F6 и h-42A5, показано в (А), (В) и (С), соответственно. Изменение времени кровотечения при лечении наполнителем, h-34F8, h-19F6 или h-42A5 показано в (D).

[0022] На фиг. 12 показаны эффекты антител h-34F8, h-19F6 и h-42A5 на время свертывания плазмы обезьяны. Четырем группам обезьян (n=5) вводили внутривенно наполнитель, h-34F8, h-19F6 и h-42A5 в дозе 0,3 мг/кг, соответственно, и кровь собирали до введения дозы и приблизительно через 3 часа после введения дозы для получения плазмы и времени свертывания, определения АРТТ и РТ. Изменения АРТТ и РТ показаны в (А) и (В), соответственно. **Р<0,01 и ***Р<0,001 по сравнению с наполнителем.

[0023] На фиг. 13 показана аминокислотная последовательность человеческого FXI (SEQ ID NO: 203).

Подробное описание настоящего изобретения

[0024] Нижеследующее описание настоящего изобретения предназначено просто для иллюстрации различных вариантов осуществления настоящего изобретения. Как таковые, конкретные обсуждаемые модификации не должны рассматриваться как ограничения объема настоящего изобретения. Специалисту в настоящей области техники должно быть очевидно, что различные эквиваленты, изменения и модификации могут быть сделаны без отклонения от объема настоящего изобретения, и следует понимать, что такие эквивалентные варианты осуществления должны быть включены в настоящий документ.

[0025] В каскадах свертывания крови in vivo участвуют как внутренний путь, так и внешний путь. Внутренний путь, также называемый путем активации контакта, инициируется контактом с границей поверхности и приводит к активации FXII. Внутренний путь также включает в себя FXI, FIX и FVIII. Внешний путь, также называемый путем тканевого фактора (TF), инициируется повреждением сосудов и приводит к образованию активированного комплекса TF-FVIIa. Эти два пути встречаются и активируют общий путь, что приводит к превращению протромбина в тромбин и в конечном итоге к образованию сшитого фибринового сгустка. Раскрытые в настоящем документе антитела связываются с FXI и/или FXIa и нацелены на внутренний путь свертывания крови. Структура участия FXI и FXI в свертывании крови описана в различных публикациях. Смотрите, например, публикацию Emsley et al., Blood 115(13): 2569-2577 (2010), содержание которой включено посредством ссылки.

Антитела к FXI или к FXIa

[0026] В настоящем изобретении представлены антитела, которые связываются с FXI, FXIa и/или фрагментом FXI или FXIa и ингибируют образование сгустка крови. Эти антитела способны связываться с FXI, FXIa и/или фрагментом FXI или FXIa (например, фрагментом, содержащим домен A3) и проявлять ингибирующий эффект при концентрации, которая намного ниже, чем максимальная безопасная доза. Например, согласно некоторым вариантам осуществления доза антитела, составляющая от 0,1 мг/кг внутривенно до 3 мг/кг внутривенно проявляет ингибирующий эффект на превращение FXI в FXIa у яванских макаков. Кроме того, раскрытые в настоящем документе антитела могут быть использованы в качестве антикоагулянтов с повышенной безопасностью благодаря минимальному риску возникновения кровотечений по сравнению с обычными антикоагулянтами, такими как гепарин.

[0027] Используемый в настоящем документе термин «содержащий» в отношении композиции или способа означает, что композиция или способ включает в себя по меньшей мере перечисленные элементы. Термин «состоящий по существу из» означает, что композиция или способ включает в себя перечисленные элементы и может дополнительно включать в себя один или несколько дополнительных элементов, которые не оказывают существенного влияния на новые и основные характеристики композиции или способа. Например, композиция, состоящая по существу из перечисленных элементов, может включать в себя эти перечисленные элементы плюс один или несколько микроэлементов из способа выделения и очистки, фармацевтически приемлемые носители, такие как забуференный фосфатом физиологический раствор, консерванты и т.п. Термин «состоящий из» означает, что композиция или способ включают в себя только перечисленные элементы. Варианты осуществления, определенные каждым из промежуточных терминов, находятся в пределах объема настоящего изобретения.

[0028] Используемый в настоящем документе термин «антитело» относится к молекуле иммуноглобулина или ее иммунологически активной части, которая специфически связывается или проявляет иммунологическую реактивность с конкретным антигеном, например, FXI, FXIa или конкретным доменом или фрагментом FXI или FXIa, например, доменом A3. Согласно некоторым вариантам осуществления антитело для применения в настоящих способах, композициях и наборах представляет собой полноразмерную молекулу иммуноглобулина, которая содержит две тяжелые цепи и две легкие цепи, причем каждая тяжелая и легкая цепь содержат три определяющих комплементарность области (CDR). Термин «антитело» в дополнение к природным антителам также включает в себя генетически сконструированные или иным образом модифицированные формы иммуноглобулинов, такие как синтетические антитела, интратела, химерные антитела, полностью человеческие антитела, гуманизированные антитела, пептидные антитела и гетероконъюгатные антитела (например, биспецифические антитела, мультиспецифические антитела, двойные специфические антитела, антиидиотипические антитела, диатела, триатела и тетратела). Раскрытые в настоящем документе антитела могут представлять собой моноклональные антитела или поликлональные антитела. Согласно тем вариантам осуществления, в которых антитело представляет собой иммунологически активную часть молекулы иммуноглобулина, антитело может представлять собой, например, Fab, Fab', Fv, Fab' F(ab')₂, дисульфид-связанное Fv, одноцепочечное антитело Fv (scFv), однодоменное антитело (dAb) или диатело. Раскрытые в настоящем документе антитела, включая в себя те, которые представляют собой иммунологически активную часть молекулы иммуноглобулина, сохраняют способность связывать специфический антиген, например, FXI или FXIa, или связывать специфический фрагмент FXI или FXIa, такой как домен A3.

[0029] Согласно некоторым вариантам осуществления раскрытые в настоящем документе антитела к FXI и/или к FXIa претерпели посттрансляционные модификации, такие как фосфорилирование, метилирование, ацетилирование, убиквитинирование, нитрозилирование, гликозилирование или липидирование, связанные с экспрессией в клеточной линии млекопитающих, включая в себя человеческую или отличную от человеческой клетку-хозяина. Способы получения рекомбинантных антител и модификации рекомбинантных антител in vitro и in vivo известны в настоящей области техники. Смотрите, например, публикацию Liu et al., mAbs 6(5): 1145-1154 (2014), содержание которой включено посредством ссылки.

[0030] Также раскрыты полинуклеотиды или нуклеиновые кислоты, кодирующие раскрытые в настоящем документе антитела к FXI и/или к FXIa. Согласно некоторым вариантам осуществления полинуклеотид или нуклеиновая кислота включает в себя ДНК, мРНК, кДНК, плазмидную ДНК. Нуклеиновая кислота, кодирующая антитело или его функциональный фрагмент, раскрытый в настоящем документе, может быть клонирована в вектор, такой как вектор экспрессии млекопитающего рТТ5, который может дополнительно включать в себя промотор и/или другие элементы контроля транскрипции или трансляции, так что нуклеиновая кислота может экспрессироваться для получения антитела или его функционального фрагмента.

[0031] Последовательности нуклеиновых кислот (ДНК) и/или аминокислот (PRT), включая в себя последовательности VH и VL и CDR, некоторых примеров раскрытых в настоящем документе антител перечислены в таблице 1 ниже.

[0032] Согласно определенным вариантам осуществления в настоящем документе представлены гуманизированные антитела к FXI и/или к FXIa. В настоящей области техники известны различные способы гуманизации антител отличных от человека видов, так что антитела модифицируют для увеличения их сходства с антителами, встречающимися в природе у людей. Шесть CDR присутствуют в каждом антигенсвязывающем домене природного антитела. Эти CDR представляют собой короткие несмежные последовательности аминокислот, которые специфически расположены для образования антигенсвязывающего домена, поскольку антитело приобретает трехмерную конфигурацию. Остальные аминокислоты в антигенсвязывающих доменах, называемые «каркасными» областями, демонстрируют меньшую межмолекулярную вариабельность и образуют каркас, позволяющий правильно располагать CDR.

[0033] Например, гуманизация раскрытых в настоящем документе антител может быть осуществлена путем прививки CDR моноклональных антител, полученных иммунизацией мышей или крыс. CDR мышиного моноклонального антитела могут быть привиты в человеческий каркас, который впоследствии присоединяется к константной области человека для получения гуманизированного антитела. Вкратце, можно выполнить поиск в базе данных последовательностей антител зародышевой линии человека, в базе данных белков (PDB), в базе данных INN (международные непатентованные имена) и в других подходящих базах данных, и с помощью поиска можно определить наиболее схожие структуры антител. Кроме того, некоторые обратные мутации донорных остатков осуществляются в человеческих акцепторных каркасах. Согласно некоторым вариантам осуществления вариабельные области связаны с константной областью человеческого IgG. Например, могут быть использованы Fc домены IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4 человека. В компетенцию специалиста в настоящей области техники входит гуманизация моноклонального антитела, производимого отличным от человека видом на основе существующей технологии.

[0034] Последовательности вариабельных областей нескольких примеров гуманизированных антител показаны в таблице 2 ниже.

[0035] Представленные в настоящем документе антитела включают в себя варианты раскрытых в настоящем документе последовательностей, которые содержат одну или несколько мутаций в своих аминокислотных последовательностях, сохраняя при этом аффинность связывания с FXI, FXIa и/или их фрагментом (например, фрагментом, содержащим домен A3). Согласно некоторым вариантам осуществления антитела включают в себя вариабельную область, характеризующуюся аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентична последовательности, выбранной из группы состоящей из SEQ IN NO: 9, 10, 25, 26, 41, 42, 57, 58, 73, 74, 89, 90, 105, 106, 121, 122, 137, 138, 153, 154, 169, 170, 185, 186 и 197-202, или их фрагмента, который сохраняет аффинность связывания с FXI, FXIa и/или их фрагментом.

[0036] В настоящее раскрытие также включены варианты нуклеиновых кислот, кодирующих антитела, которые связываются с FXI, FXIa и/или их фрагментом (например, фрагментом, содержащим домен A3). Согласно некоторым вариантам осуществления нуклеиновые кислоты, кодирующие антитела, включают в себя вариабельную область, характеризующуюся последовательностью нуклеиновой кислоты, которая по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентична последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, 2, 17, 18, 33, 34, 49, 50, 65, 66, 81, 82, 97, 98, 113, 114, 129, 130, 145, 146, 161, 162, 177 и 178 или их фрагмента, который кодирует полипептид с аффинностью связывания с FXI, FXIa и/или их фрагментом.

Фармацевтические композиции

[0037] Описанные в настоящем документе антитела могут быть включены в состав фармацевтических композиций. Фармацевтические композиции могут дополнительно содержать один или несколько фармацевтически приемлемых носителей, вспомогательных веществ, консервантов или их комбинацию. Фармацевтические композиции могут иметь различные составы, например, инъекционные составы, лиофилизированные составы, жидкие составы и т.д. В зависимости от состава и пути введения можно было бы выбрать подходящие добавки, такие как адъюванты, носители, вспомогательные вещества, консерванты. Смотрите, например, публикацию Wang et al., J. Pharm. Sciences 96(1): 1-26 (2007), содержание которой включено посредством ссылки. [0038] Фармацевтическая композиция может быть включена в набор с инструкцией по применению композиции.

Способы лечения

[0039] В настоящем документе представлен способ лечения и/или профилактики тромбоза у субъекта, страдающего от тромбоза и/или характеризующегося повышенным риском развития тромбоза. Также представлен способ ингибирования образования тромбов у субъекта. Эти способы предусматривают введение терапевтически эффективного количества представленного в настоящем документе антитела к FXI и/или к FXIa для вмешательства во внутренний путь. Согласно некоторым вариантам осуществления эти способы предусматривают введение субъекту фармацевтической композиции, содержащей представленное в настоящем документе антитело к FXI и/или к FXIa.

[0040] Раскрытые в настоящем документе способы могут быть использованы для профилактики и/или лечения связанных с тромбозом осложнений или состояний у нуждающегося в этом субъекта. Тромбоз вызывает ряд осложнений или состояний или связан с ними, включая в себя эмболический инсульт, венозный тромбоз, такой как венозная тромбоэмболия (VTE), тромбоз глубоких вен (DVT) и легочная эмболия (РЕ), артериальный тромбоз, такой как острый коронарный синдром (ACS), ишемическую болезнь сердца (CAD) и заболевание периферических артерий (PAD). Другие состояния, связанные с тромбозом, включают в себя, например, высокий риск VTE у подвергаемых хирургическому вмешательству пациентов, иммобилизованных пациентов, пациентов с раком, пациентов с сердечной недостаточностью, беременных пациентов или пациентов, имеющих другие медицинские состояния, которые могут вызывать тромбоз. Раскрываемые в настоящем документе способы относятся к профилактической антикоагулянтной терапии, т.е. тромбопрофилактике. Эти способы предусматривают введение субъекту, страдающему связанным с тромбозом осложнением, раскрытого выше терапевтически эффективного количества антитела к FXI и/или FXIa, как раскрыто в настоящем документе, или терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции, содержащей антитело к FXI и/или к FXIa. Антитело или фармацевтическую композицию можно вводить отдельно или в сочетании с любой другой терапией для лечения или профилактики связанных с тромбозом осложнений или состояний.

[0041] Также представлен способ лечения и/или профилактики сепсиса у нуждающегося в этом субъекта. Была предпринята попытка введения антикоагулянтов пациентам с сепсисом для улучшения смертности или заболеваемости. Однако попытка не увенчалась успехом из-за нежелательного кровотечения, вызванного антикоагулянтами. Описанные в настоящем документе антитела могут быть использованы в качестве вторичной терапии в сочетании с другими терапевтическими средствами для лечения сепсиса, такими как антибиотики.

[0042] Используемый в настоящем документе термин «субъект» относится к субъекту-млекопитающему, предпочтительно человеку. «Нуждающийся в этом субъект» относится к субъекту, у которого был диагностирован тромбоз или связанные с тромбозом осложнения или состояния или существует повышенный риск развития тромбоза или связанных с тромбозом осложнений или состояний. Фразы «субъект» и «пациент» используются в настоящем документе взаимозаменяемо.

[0043] Термины «лечить» и «лечение», используемые в настоящем документе в отношении состояния, относятся к частичному или полному облегчению состояния, предотвращению состояния, уменьшению вероятности возникновения или повторения состояния, замедлению прогрессирования или развития состояния или устранению, уменьшению или замедлению развития одного или нескольких симптомов, связанных с состоянием. Что касается тромбоза и/или осложнений или состояний, связанных с тромбозом, «лечение» может относиться к предотвращению или замедлению роста существующего сгустка крови и/или предотвращению или замедлению образования сгустка крови. Согласно некоторым вариантам осуществления термин «лечить» или «лечение» означает, что у субъекта уменьшенное количество или размер сгустков крови по сравнению с субъектом без введения антител или его функциональных фрагментов. Согласно некоторым вариантам осуществления термин «лечить» или «лечение» означает, что один или несколько симптомов тромбоза и/или связанных с тромбозом состояний или осложнений ослаблены у субъекта, получающего описанное в настоящем документе антитело или фармацевтическую композицию, в сравнении с субъектом, который не получает такого лечения.

[0044] Используемый в настоящем документе термин «терапевтически эффективное количество» антитела или фармацевтической композиции представляет собой количество антитела или фармацевтической композиции, которое оказывает желаемое терапевтическое воздействие на субъекта, такое как лечение и/или профилактика тромбоза. Согласно определенным вариантам осуществления терапевтически эффективное количество представляет собой количество антитела или фармацевтической композиции, которое дает максимальный терапевтический эффект. Согласно другим вариантам осуществления терапевтически эффективное количество дает терапевтический эффект, который меньше максимального терапевтического эффекта. Например, терапевтически эффективное количество может представлять собой количество, которое вызывает терапевтический эффект, избегая при этом одного или нескольких побочных эффектов, связанных с дозировкой, которая дает максимальный терапевтический эффект. Терапевтически эффективное количество для конкретной композиции будет варьировать в зависимости от множества факторов, включающих в себя, помимо прочего, характеристики терапевтической композиции (например, активность, фармакокинетика, фармакодинамика и биодоступность), физиологическое состояние субъекта (например, возраст, масса тела, пол, тип и стадия заболевания, анамнез, общее физическое состояние, чувствительность к данной дозировке и другим присутствующим лекарственным средствам), природу любых фармацевтически приемлемых носителей, вспомогательных веществ и консервантов в композиции, а также пути введения. Специалист в области медицины и фармакологии сможет определить терапевтически эффективное количество путем рутинных экспериментов, а именно путем контроля реакции субъекта на введение антитела или фармацевтической композиции и соответствующей корректировки дозы. Дополнительные рекомендации смотрите, например, в Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 22^nd Edition, Pharmaceutical Press, London, 2012 и Goodman & Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, 12^th Edition, McGraw-Hill, New York, NY, 2011, полное раскрытие которых включено в настоящий документ посредством ссылки.

[0045] Согласно некоторым вариантам осуществления терапевтически эффективное количество раскрытого в настоящем документе антитела находится в диапазоне от приблизительно 0,01 мг/кг до приблизительно 30 мг/кг, от приблизительно 0,1 мг/кг до приблизительно 10 мг/кг, от приблизительно 1 мг/кг до 5 мг/кг.

[0046] В компетенцию специалиста в настоящей области техники входит выбор подходящего пути введения, такого как подкожное введение, внутривенное введение, внутримышечное введение, внутрикожное введение, интратекальное введение или внутрибрюшинное введение. Для лечения нуждающегося в этом субъекта антитело или фармацевтическую композицию можно вводить непрерывно или периодически, для немедленного высвобождения, контролируемого высвобождения или замедленного высвобождения. Кроме того, антитело или фармацевтическую композицию можно вводить три раза в день, два раза в день или один раз в день в течение 3 дней, 5 дней, 7 дней, 10 дней, 2 недель, 3 недель или 4 недель. Антитело или фармацевтическую композицию можно вводить в течение заранее определенного периода времени. Альтернативно, антитело или фармацевтическую композицию можно вводить до достижения определенного терапевтического уровня. Согласно определенным вариантам осуществления представленные в настоящем документе способы предусматривают стадию оценки одного или нескольких терапевтических эталонов, чтобы определить, следует ли продолжать введение антитела или фармацевтической композиции.

Способ получения антител

[0047] В настоящем документе также представлены способы получения раскрытых в настоящем документе антител к FXI и/или к FXIa. Согласно некоторым вариантам осуществления этот способ предусматривает стадии клонирования в вектор нуклеиновой кислоты, кодирующей антитело к FXI и/или к FXIa, трансформации клетки-хозяина с вектором и культивирования клетки-хозяина для экспрессии антитела. Экспрессированное антитело может быть очищено из клетки-хозяина с использованием любого известного способа. Могут быть использованы различные векторы экспрессии, такие как вектор рТТ5 и вектор pcDNA3, а также различные линии клеток-хозяев, такие как клетки СНО (например, СНО-К1 и ExpiCHO) и клетки HEK193T.

[0048] Настоящее раскрытие также охватывает антитела, полученные раскрытым выше способом. Антитела могут быть подвергнуты одной или нескольким посттрансляционным модификациям.

[0049] Следующие примеры представлены для лучшей иллюстрации вариантов осуществления и не должны интерпретироваться как ограничение объема любого заявленного варианта осуществления. В той степени, в которой упоминаются конкретные материалы, они представлены просто для иллюстрации и не предназначены для ограничения настоящего изобретения. Специалист в настоящей области техники может разработать эквивалентные средства или реагенты без использования изобретательской способности и без отклонения от объема настоящего изобретения. Будет понятно, что в описанных в настоящем документе процедурах может быть сделано много изменений, при этом они все еще остаются в рамках настоящего изобретения. Авторы настоящего изобретения предполагают, что такие вариации включены в объем настоящего изобретения.

ПРИМЕРЫ

Пример 1: Производство и секвенирование антител к FXI

[0050] Мышей BALB/c и крыс Wistar иммунизировали человеческим FXI, и спленоциты от животных с хорошим иммунным ответом собирали для получения гибридом, которые подвергали субклонированию путем ограниченного разведения. Двенадцать моноклональных гибридомных клонов, экспрессирующих требуемые антитела к FXI, 3G12, 5В2, 7С9, 7F1, 13F4, 19F6, 21F12, 34F8, 38Е4, 42А5, 42F4 и 45Н1, получали с помощью ИФА с захватом и функционального скрининга.

[0051] Для определения аминокислотных и нуклеотидных последовательностей вариабельной области легкой (V_L) и тяжелой (V_H) цепей этих антител кДНК, кодирующие V_L и V_H, клонировали из соответствующих клеток гибридомы с помощью стандартных процедур ОТ-ПЦР. Последовательности V_L и V_H иллюстративных антител, включая в себя последовательности CDR, показаны в таблице 1.

Пример 2: Определение антикоагуляционной активности в плазме человека с использованием анализа активированного частичного тромбопластинового времени (АРТТ) и анализа протромбинового времени (РТ)

[0052] Анализ АРТТ измеряет активность внутренних и общих путей коагуляции, в то время как анализ РТ измеряет активность внешних и общих путей коагуляции. Антитела, исследованные в этом эксперименте, представляли собой 19F6, 34F8, 42А5, 1А6 и 14Е11. Последовательности вариабельных областей контрольных антител получали из патента США №8388959 и публикации заявки на патент США №2013/0171144 и переформатировали в IgG4. Эти антитела затем экспрессировали с использованием клеточной системы ExpiCHO. Стандартную человеческую плазму, приобретенную у Symens Inc., смешивали с равным объемом различных антител в различных концентрациях от 0 до 400 нМ в течение 5 минут перед исследованием на анализаторе СА600. В анализе АРТТ 50 мкл смеси плазма-антитело и 25 мкл реагента АРТТ (SMN 10445709, Symens Inc.) смешивали при температуре 37°С в течение 4 минут. Затем добавляли 25 мкл раствора CaCl₂ (25 мМ, SMN 10446232, Symens Inc.) и определяли время образования сгустка. В анализе РТ 50 мкл смеси плазма-антитело смешивали с равным объемом реагента РТ (SMN 10446442, Symens Inc.) при температуре 37°С и определяли время образования сгустка.

[0053] Как показано на фиг. 1, все исследуемые антитела увеличивали АРТТ зависимым от концентрации образом при относительно низкой концентрации, например, до 100 нМ (или до 200 нМ для 14Е11); тогда как ни одно из этих антител не оказывало значительного влияния на РТ (данные не показаны). Эти результаты показывают, что все исследованные антитела ингибировали внутренний путь коагуляции, но не внешний путь.

Пример 3: Определение антикоагуляционной активности в плазме отличных от человека видов с использованием анализа активированного частичного тромбопластинового времени (АРТТ)

[0054] Влияние различных антител, в том числе 19F6, 34F8 и 42А5, на коагуляцию оценивали в плазме мыши, крысы и обезьяны с использованием того же способа, который описан в примере 2. Ни одно из исследованных антител не оказывало какого-либо влияния на АРТТ в плазме мыши и крысы, но все они, в относительно низкой концентрации, в зависимости от концентрации, увеличивали АРТТ в плазме обезьяны, как показано на фиг. 2, что указывает на то, что исследуемые антитела имели перекрестную активность с FXI/FXIa обезьяны, но не с FXI/FXIa мыши или крысы.

Пример 4. Гуманизация антител к FXI.

[0055] Использование мышиных моноклональных антител непосредственно в качестве терапевтических средств затруднялось из-за короткого периода полужизни и человеческих ответов на мышиные антитела. Одним из решений этой проблемы является гуманизация мышиных антител. Некоторые антитела подвергали гуманизации с помощью прививки CDR. Идентифицировали подходящие человеческие акцепторные каркасы для V_L и V_H каждого мышиного антитела, и в выбранные человеческие каркасы вводили различные количества обратных мутаций для поддержания структуры и/или функции полученного антитела. Если аффинность и функция этих гуманизированных антител существенно не уступали соответствующим немодифицированным антителам, модифицированные антитела считались успешно гуманизированными. Три гуманизированные последовательности V_H и V_L 19F6, 34F8 и 42А5, описанные как h-19F6, h-34F8 и h-42A5, соответственно, показаны в таблице 2.

Пример 5: Определение аффинности антител к FXI в отношении FXI человека

[0056] Аффинность антител к FXI/FXIa в отношении FXI/FXIa определяли с использованием технологии поверхностного плазмонного резонанса (SPR), выполненной на приборе BIAcore Т200. Гуманизированные антитела конструировали путем связывания вариабельных областей раскрытых в настоящем документе антител с Fc-доменом человеческого IgG4, и рекомбинанты экспрессировали в клетках СНО. Эти антитела захватывали на сенсорном чипе Biacore СМ5, который предварительно иммобилизовали антителом к IgG человека.

[0057] Затем различные концентрации очищенного антигена FXI или FXIa (0,005-1 мкг/мл) пропускали через чип СМ5 в течение 180 с для ассоциации с антителом к FXI/FXIa с последующим временем 1800 с для диссоциации. Данные по связыванию собирали и анализировали аффинность между FXI/FXIa и исследуемыми антителами с использованием программного обеспечения Biacore Evaluation Software, предоставляемого GE Healthcare. Сенсограммы SPR связывания FXI/FXIa с иммобилизованным h-19F6, h-34F8 и h-42A5 показаны на фиг. 3. Как показано на фиг. 3, ответ (RU) для каждого антитела становился выше с повышением концентрации FXI или FXIa. Рассчитывали константы диссоциации (K_D) h-19F6, h-34F8 и h-42A5 к FXI и FXIa, и они детализированы в таблице 3. Аффинность каждого антитела к FXI и FXIa считается одинаковой, поскольку различие между ними меньше чем в 10 раз.

Пример 6: Определение сайта связывания антител к FXI на FXI

[0058] Сайты связывания 19F6 и 42А5 на FXI определяли с использованием технологии SPR. Вкратце, захватывающее IgG человека антитело предварительно иммобилизовали на сенсорном чипе Biacore СМ5, и рекомбинантный h-19F6 или h-42A5 улавливали, пропуская через чип. Равное количество (15 относительных единиц) h-19F6 и h-42A5 улавливали путем корректировки времени протекания антитела. Затем FXI дикого типа или химерный FXI, в котором отдельный домен apple заменяли соответствующим доменом из человеческого прекалликреина (химеры FXI/PK), пропускали через чип в течение 180 секунд для ассоциации с h-19F6 или h-42A5, затем в течение 1800 секунд для диссоциации. Данные по связыванию анализировали в кинетическом режиме высокой производительности, так как только одну концентрацию FXI, дикого типа или химерного, исследовали в анализе SPR. Результаты показали, что h-19F6 и h-42A5 связывали FXI, а также химеры FXI/PK, за исключением случаев, когда домен A3 FXI заменяли соответствующим доменом PK, указывая на то, что часть или полный эпитоп h-19F6 и h-42А5 на FXI находится в домене A3.

Пример 7: Функциональная нейтрализация FXIa антителами

[0059] Активность FXIa человека определяли путем измерения расщепления специфического хромогенного субстрата, S-2366 (Diapharma Inc.). Для исследования ингибирующей активности антител антитела h-19F6, h-34F8 и h-42A5 предварительно инкубировали в течение 5 минут при комнатной температуре с конечной концентрацией 5 нМ FXIa в PBS (физиологический раствор с фосфатным буфером). Затем добавляли равный объем S-2366 равного 1 мМ, чтобы инициировать реакцию расщепления FXIa, и изменения в абсорбции при 405 нм непрерывно контролировали с использованием планшет-ридера М5е (Molecular Devices Inc.). Данные анализировали с использованием программного обеспечения GraphPad Prism и они показаны на фиг. 4. Расчетные предполагаемые Ki для h-19F6, h-34F8 и h-42A5 составляют 0,67, 2,08 и 1,43 нМ, соответственно. Следовательно, все три исследованных антитела показали удовлетворительное ингибирующее действие на FXIa при относительно низкой концентрации.

Пример 8. Ингибирование опосредованной FXIa активации FIX антителами.

[0060] Человеческий FIX (200 нМ) инкубировали с FXIa (5 нМ) в PBS с 5 мМ CaCl₂ при комнатной температуре с 1 мкМ контрольного IgG или h-19F6 или h-42A5. С интервалами 0, 15, 30, 45 и 60 минут образцы объемом 50 мкл собирали в буфер для образцов с додецилсульфатом. Образцы фракционировали по размеру на 10% невосстанавливающих гелях и переносили на поливинилиденфторидные мембраны. Вестерн-блоттинг проводили для определения уровней FIX, а также уровней FIXa с использованием козьего IgG к FIX человека (Affinity Biologicals). Как показано на фиг. 5, как h-19F6, так и h-42A5 ингибируют образование FIXa, индуцированное FXI, по сравнению с контролем.

Пример 9. Оценка эффектов антител к FXI на время свертывания у яванских макаков.

[0061] Яванским макакам вводили внутривенно указанные дозы различных антител. Кровь из поверхностных вен верхней конечности собирали до введения дозы и через 0,5, 1, 3, 6, 12 и 24 часа после введения дозы, и готовили цитратную плазму для определения АРТТ и РТ. В исследовании АРТТ смешивали 50 мкл разведенного образца плазмы и 25 мкл реагента АРТТ (SMN 10445709, Symens Inc.) и инкубировали при температуре 37°С в течение 4 минут. Затем добавляли 25 мкл раствора CaCl₂ (25 мМ, SMN 10446232, Symens Inc.) и определяли время образования сгустка. В исследовании РТ 50 мкл разбавленной пробы плазмы смешивали с равным объемом реагента РТ (SMN 10446442, Symens Inc.) и инкубировали при температуре 37°С и определяли время до образования сгустка. Все три исследованных антитела продемонстрировали зависимое от дозы повышение АРТТ, как показано на фиг. 6, и ни одно из них не повлияло на РТ, как показано на фиг. 7.

Пример 10. Оценка эффектов антител к FXI на моделях тромбоза артериовенозного (AV) шунта и кровотечения из хвостовой вены у яванских макаков.

[0062] Как тромбоз, так и время кровотечения оценивали у одного и того же животного для множества доз каждого исследуемого антитела. Антитела, включенные в этот эксперимент, представляли собой h-34F8, h-19F6 и h42A5. Вкратце, время кровотечения и тромбоз последовательно оценивали перед введением дозы и через 30 минут после каждого введения антитела. Оценки кровотечения/тромбоза проводили четыре раза: до введения дозы и после введения дозы при трех возрастающих уровнях дозы (0,1, 0,3 и 1 мг/кг).

[0063] Для тромбоза AV-шунта шунтирующее устройство, содержащее предварительно взвешенную шелковую нить длиной 10 см, применяли для соединения бедренных артериальных и бедренных венозных канюль, и крови позволяли течь через шунт в течение 10 минут. Затем нить снимали с шунта и снова взвешивали. Массу сгустка на нити рассчитывали как разницу массы нити до и после кровотока.

[0064] Для оценки времени кровотечения в хвостовую вену животных вводили шприц объемом 2 мл. Когда объем крови в шприце прекращал увеличиваться, истекшее время записывали вручную как время кровотечения.

[0065] Все антитела в зависимости от дозы снижали массу тромба, как показано на фиг. 8, и ни одно из них не удлиняло время кровотечения в хвостовой вене, как показано на фиг. 9.

Пример 11: Оценка эффектов антител к FXI на индуцированный хлоридом железа артериальный тромбоз и время кровотечения у яванских макаков

[0066] Яванских макаков предварительно анестезировали золетилом в дозе 1,5 мг/кг, интубировали и вентилировали респиратором. Анестезию поддерживали изофлураном. Артериальное давление, частоту сердечных сокращений и температуру тела контролировали в течение всей процедуры. Исследуемые антитела, включая в себя h-34F8, h-19F6 и h-42A5, или контрольный наполнитель вводили через вену конечности путем инъекции за 2 часа до применения FeCl₃. Левую бедренную артерию обнажали и выделяли тупым расслоением. На артерии устанавливали доплеровский зонд, и кровоток непрерывно регистрировали. Перед применением FeCl₃ кровоток измеряли не менее 5 минут. Затем два куска фильтровальной бумаги, предварительно пропитанной FeCh, наносили на адвентициальную поверхность сосуда выше по течению от зонда в течение 10 минут. После того как удаляли фильтровальную бумагу, место нанесения промывали солевым раствором. Кровоток непрерывно измеряли до тех пор, пока он не уменьшался до 0. Записали время до 80% окклюзии (кровоток снизился до 20% от исходного кровотока) и время до 100% окклюзии (кровоток снизился до 0). У того же животного точное время кровотечения оценивали до введения дозы и через 1 час после введения дозы.

[0067] Исследовали влияние всех трех антител на индуцированный FeCl₃ артериальный тромбоз. Четырем группам обезьян вводили контрольный наполнитель, h-34F8, h-19F6 или h-42A5 в течение 2 часов, соответственно, и FeCl₃ наносили на левую бедренную артерию каждого животного, чтобы вызвать тромбоз. Контролировали скорость кровотока вниз по течению. Время до 80% и до 100% тромботической окклюзии в контрольной группе наполнителя составляло 14,66±1,30 мин и 18,50±1,76 мин, соответственно. Предварительное воздействие h-34F8 или h-42A5 в дозе 0,3 мг/кг значительно задержало время до 80% окклюзии до 59,53±16,95 мин и 40,80±7,94 мин, а время до 100% окклюзии до 70,40±20,76 мин и 50,61±9,48 мин, соответственно, как показано на фиг. 10. У обезьян, получавших h-19F6, также наблюдалось удлинение времени до 80% окклюзии (26,43±5,72 мин) и до 100% окклюзии (32,78±5,09 мин), хотя статистически не было значительная разница по сравнению с получавшей наполнитель контрольной группой, как показано на фиг. 10.

[0068] Влияние антител на гемостаз оценивали по точному времени кровотечения. Не было отмечено существенных различий между временем кровотечения до введения дозы и через 1 час после введения дозы для каждого исследуемого изделия (фиг. 11А, 11В и 11С). Изменение времени кровотечения после введения h-34F8, h-19F6 и h-42A5 не отличалось от изменения после контрольного воздействия наполнителя (фиг. 11D).

[0069] Также оценивали эффекты антител на время свертывания ex vivo плазмы обезьяны. Как и ожидалось, лечение с использованием h-34F8, h-19F6 и h-42A5 в дозе 0,3 мг/кг значительно продлило АРТТ в 3,29±0,20, 1,67±0,09 и 2,87±0,10 раза, соответственно, в то время как никакого увеличения АРТТ не наблюдалось после воздействия контрольным наполнителем, как показано на фиг. 12А. Кроме того, воздействие h-34F8, h-19F6 или h-42A5 не влияло на РТ, как показано на фиг. 12В.

[0070] Таким образом, было неожиданно обнаружено, что раскрытые в настоящем документе антитела не имели каких-либо побочных эффектов продолжительного кровотечения при эффективном ингибировании внутреннего пути коагуляции.

--->

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> ШАНХАЙ БЕНЕМАЕ ФАРМАСЬЮТИКАЛ КОРПОРЕЙШН

<120> АНТИТЕЛА К ФАКТОРУ XI

<130> 57783-8013.WO00

<140> PCT/CN2017/119856

<141> 2017-12-29

<150> CN201710073984.X

<151> 2017-02-10

<160> 203

<170> PatentIn версия 3.5

<210> 1

<211> 333

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 1

gacattgtgc tgacccaatc tccagcttct ttggctgtgt ctctagggca gagggccacc 60

atctcctgca gagccagcga aagtgttgat aattatgcca ttagttttat gaactggttc 120

caacagaaac caggacagcc acccaaactc ctcatctatg ctgcatccaa cctaggatcc 180

ggggtccctg ccaggtttag tggcagtggg tctgggacag acttcagcct caacatccat 240

cctatggagg aggatgatac tgcaatgtat ttctgtcagc aagataagga ggttccgtgg 300

acgttcggtg gaggcaccga gctggaaatc aaa 333

<210> 2

<211> 354

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 2

caggtcactc tgaaagagtc tggccctggg atattgcagc cctcccagac cctcagtctg 60

acttgttctt tctctgggtt ttcactgaac actcctggta tgggtgtgag ctggattcgt 120

cagccttcag gaaagggtct ggaatggctg gcacacattt actgggatga tgacaagcgc 180

tttaacccat ccctgaagag ccgactcaca atctccaagg atacctccag agatcaggta 240

ttcctcatga tcaccagtgt ggacactgca gattctgcca catacttctg tgctcgaaaa 300

ggccgcgggc cctttactta ctggggccaa gggactctgg tcactgtctc ttca 354

<210> 3

<211> 45

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 3

agagccagcg aaagtgttga taattatgcc attagtttta tgaac 45

<210> 4

<211> 21

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 4

gctgcatcca acctaggatc c 21

2

<210> 5

<211> 27

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 5

cagcaagata aggaggttcc gtggacg 27

<210> 6

<211> 21

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 6

actcctggta tgggtgtgag c 21

<210> 7

<211> 48

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 7

cacatttact gggatgatga caagcgcttt aacccatccc tgaagagc 48

<210> 8

<211> 24

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 8

aaaggccgcg ggccctttac ttac 24

<210> 9

<211> 111

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 9

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr

20 25 30

Ala Ile Ser Phe Met Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro

35 40 45

Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Gly Ser Gly Val Pro Ala

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Asn Ile His

65 70 75 80

Pro Met Glu Glu Asp Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys Gln Gln Asp Lys

85 90 95

Glu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Glu Leu Glu Ile Lys

100 105 110

3

<210> 10

<211> 118

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 10

Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Ile Leu Gln Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Asn Thr Pro

20 25 30

Gly Met Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Ser Gly Lys Gly Leu Glu

35 40 45

Trp Leu Ala His Ile Tyr Trp Asp Asp Asp Lys Arg Phe Asn Pro Ser

50 55 60

Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Arg Asp Gln Val

65 70 75 80

Phe Leu Met Ile Thr Ser Val Asp Thr Ala Asp Ser Ala Thr Tyr Phe

85 90 95

Cys Ala Arg Lys Gly Arg Gly Pro Phe Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 11

<211> 15

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 11

Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr Ala Ile Ser Phe Met Asn

1 5 10 15

<210> 12

<211> 7

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 12

Ala Ala Ser Asn Leu Gly Ser

1 5

<210> 13

<211> 9

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 13

Gln Gln Asp Lys Glu Val Pro Trp Thr

1 5

4

<210> 14

<211> 7

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 14

Thr Pro Gly Met Gly Val Ser

1 5

<210> 15

<211> 16

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 15

His Ile Tyr Trp Asp Asp Asp Lys Arg Phe Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 16

<211> 8

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 16

Lys Gly Arg Gly Pro Phe Thr Tyr

1 5

<210> 17

<211> 333

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 17

gacattgtgc tgacccaatc tccagcctct ttggctgtgt ctctagggca gagggccacc 60

atctcctgca gagccagcga aagtgttgat aattatggca ttagttttct gaactggttc 120

caacagaaac caggacagcc acccaaactc ctcatctatg ctgcatccaa tctaggatcc 180

ggggtccctg ccaggtttag tggcagtggg tctgggacag acttcagcct caacatccat 240

cctatggagg aggatgatac tgcaatgtat ttctgtcagc aagataaggg ggttccgtgg 300

acgttcggtg gaggcaccaa gctggaaatg aaa 333

<210> 18

<211> 354

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 18

caggttactc tgaaagagtc tggccctggg atattgcagc cctcccagac cctcagtctg 60

acttgttctt tctctgggtt ttcactgaac acttctggta tgggtgtgag ctggattcgt 120

cagccttcag gaaagggtct ggagtggctg gcacacattt actgggatga tgacaagcgc 180

tataaaccat ccctgaagag ccggctcaca atctccaagg atacctccag aaaccaggta 240

ttcctcatga tcaccagtgt ggacactgca gatactgcca catactactg tgttcgaaaa 300

ggccgcgggc cctttgctaa ctggggccaa gggactctgg tcactgtctc tgca 354

5

<210> 19

<211> 45

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 19

agagccagcg aaagtgttga taattatggc attagttttc tgaac 45

<210> 20

<211> 21

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 20

gctgcatcca atctaggatc c 21

<210> 21

<211> 27

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 21

cagcaagata agggggttcc gtggacg 27

<210> 22

<211> 21

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 22

acttctggta tgggtgtgag c 21

<210> 23

<211> 48

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 23

cacatttact gggatgatga caagcgctat aaaccatccc tgaagagc 48

<210> 24

<211> 24

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 24

aaaggccgcg ggccctttgc taac 24

<210> 25

<211> 111

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 25

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr

20 25 30

Gly Ile Ser Phe Leu Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro

35 40 45

6

Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Gly Ser Gly Val Pro Ala

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Asn Ile His

65 70 75 80

Pro Met Glu Glu Asp Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys Gln Gln Asp Lys

85 90 95

Gly Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Met Lys

100 105 110

<210> 26

<211> 118

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 26

Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Ile Leu Gln Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Asn Thr Ser

20 25 30

Gly Met Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Ser Gly Lys Gly Leu Glu

35 40 45

Trp Leu Ala His Ile Tyr Trp Asp Asp Asp Lys Arg Tyr Lys Pro Ser

50 55 60

Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Arg Asn Gln Val

65 70 75 80

Phe Leu Met Ile Thr Ser Val Asp Thr Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr

85 90 95

Cys Val Arg Lys Gly Arg Gly Pro Phe Ala Asn Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ala

115

<210> 27

<211> 15

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 27

Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr Gly Ile Ser Phe Leu Asn

1 5 10 15

<210> 28

<211> 7

<212> PRT

<213> Mus musculus

7

<400> 28

Ala Ala Ser Asn Leu Gly Ser

1 5

<210> 29

<211> 9

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 29

Gln Gln Asp Lys Gly Val Pro Trp Thr

1 5

<210> 30

<211> 7

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 30

Thr Ser Gly Met Gly Val Ser

1 5

<210> 31

<211> 16

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 31

His Ile Tyr Trp Asp Asp Asp Lys Arg Tyr Lys Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 32

<211> 8

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 32

Lys Gly Arg Gly Pro Phe Ala Asn

1 5

<210> 33

<211> 321

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 33

gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ttatctgcct ctctgggaga aagagtcagt 60

ctcacttgtc gggcaagtca ggacattgat attcgcttaa actggcttcg acaggaacca 120

gatggaacta ttaaacgcct gatctacgcc acatccagtt tagattctgg tgtccccaaa 180

aggttcagtg gcagtaggtc tgggtcagat tattctctca ccatcagcag ccttgagtct 240

gaagattttg ttgactatta ctgtctacaa tatgctagtt ctccattcac gttcggctcg 300

gggacaaagt tggaaataaa a 321

<210> 34

<211> 354

<212> ДНК

8

<213> Mus musculus

<400> 34

cagatccagt tggtgcagtc tggacctgaa ctgaagaagc ctggagagac cgtcaagatc 60

tcctgcaagg cttctgggta tattttcaca gactatggaa tgaactgggt gaagcaggct 120

ccaggaaagg gtttaaagtg gatgggctgg ataaacacct acactggaga gccaacatat 180

gctgatgact tcaagggacg gtttgtcttc tctttggaaa cctctgccag cactgcctat 240

ttacagatca acaacctcaa aaatgaggac acggctacat ttttctgtgc aagaaggagg 300

atgggttatg ctgtggacta ctggggtcaa ggaacctcag tcaccgtctc ctca 354

<210> 35

<211> 33

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 35

cgggcaagtc aggacattga tattcgctta aac 33

<210> 36

<211> 21

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 36

gccacatcca gtttagattc t 21

<210> 37

<211> 27

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 37

ctacaatatg ctagttctcc attcacg 27

<210> 38

<211> 15

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 38

gactatggaa tgaac 15

<210> 39

<211> 51

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 39

tggataaaca cctacactgg agagccaaca tatgctgatg acttcaaggg a 51

<210> 40

<211> 27

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 40

aggaggatgg gttatgctgt ggactac 27

<210> 41

<211> 107

9

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 41

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Val Ser Leu Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Asp Ile Arg

20 25 30

Leu Asn Trp Leu Arg Gln Glu Pro Asp Gly Thr Ile Lys Arg Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Thr Ser Ser Leu Asp Ser Gly Val Pro Lys Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Arg Ser Gly Ser Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ser

65 70 75 80

Glu Asp Phe Val Asp Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Ala Ser Ser Pro Phe

85 90 95

Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 42

<211> 118

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 42

Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Thr Phe Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Arg Arg Met Gly Tyr Ala Val Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Ser Val Thr Val Ser Ser

115

10

<210> 43

<211> 11

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 43

Arg Ala Ser Gln Asp Ile Asp Ile Arg Leu Asn

1 5 10

<210> 44

<211> 7

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 44

Ala Thr Ser Ser Leu Asp Ser

1 5

<210> 45

<211> 9

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 45

Leu Gln Tyr Ala Ser Ser Pro Phe Thr

1 5

<210> 46

<211> 5

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 46

Asp Tyr Gly Met Asn

1 5

<210> 47

<211> 17

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 47

Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 48

<211> 9

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 48

Arg Arg Met Gly Tyr Ala Val Asp Tyr

1 5

<210> 49

<211> 333

11

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 49

gacattgtgc tgacccaatc tccagcttct ttggctgtgt ctctagggca gagggccacc 60

atctcctgca gagccagcga aagtgttgat aattatgcca ttagttttat gaattggttc 120

caacagaaac caggacagcc acccaaactc ctcatctatg ctgcatccaa cctaggatcc 180

ggggtccctg ccaggtttag tggcagtggg tctgggacag acttcagcct caacatccat 240

cctatggagg aggatgatac tgcaatgtat ttctgtcagc aagataagga ggttccgtgg 300

acgttcggtg gaggcaccaa gctggagctg aaa 333

<210> 50

<211> 354

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 50

caggttactc tgaaagagtc tggccctggg atagtgcagc cctcccagac cctcaatctg 60

acttgttctt tctctggatt ttcactgagc acttctggta tgggtgtgag ctggattcgt 120

cagccttcag gaaagggtct ggattggctg gcacacattt actgggatga tgacaagcgc 180

tataacccat ccctgatgag ccggctcaca atctccaagg atacctccag aaaccaggta 240

ttcctcatga tcaccagtgt ggacactgca gatactgcca catactactg tgctcgaaaa 300

ggccgcgggc cctttgctta ctggggccaa gggactctgg tcactgtctc ttca 354

<210> 51

<211> 45

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 51

agagccagcg aaagtgttga taattatgcc attagtttta tgaat 45

<210> 52

<211> 21

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 52

gctgcatcca acctaggatc c 21

<210> 53

<211> 27

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 53

cagcaagata aggaggttcc gtggacg 27

<210> 54

<211> 21

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 54

acttctggta tgggtgtgag c 21

12

<210> 55

<211> 48

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 55

cacatttact gggatgatga caagcgctat aacccatccc tgatgagc 48

<210> 56

<211> 24

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 56

aaaggccgcg ggccctttgc ttac 24

<210> 57

<211> 111

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 57

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr

20 25 30

Ala Ile Ser Phe Met Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro

35 40 45

Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Gly Ser Gly Val Pro Ala

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Asn Ile His

65 70 75 80

Pro Met Glu Glu Asp Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys Gln Gln Asp Lys

85 90 95

Glu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys

100 105 110

<210> 58

<211> 118

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 58

Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Ile Val Gln Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Asn Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser

20 25 30

Gly Met Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Ser Gly Lys Gly Leu Asp

35 40 45

13

Trp Leu Ala His Ile Tyr Trp Asp Asp Asp Lys Arg Tyr Asn Pro Ser

50 55 60

Leu Met Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Arg Asn Gln Val

65 70 75 80

Phe Leu Met Ile Thr Ser Val Asp Thr Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr

85 90 95

Cys Ala Arg Lys Gly Arg Gly Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 59

<211> 15

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 59

Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr Ala Ile Ser Phe Met Asn

1 5 10 15

<210> 60

<211> 7

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 60

Ala Ala Ser Asn Leu Gly Ser

1 5

<210> 61

<211> 9

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 61

Gln Gln Asp Lys Glu Val Pro Trp Thr

1 5

<210> 62

<211> 7

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 62

Thr Ser Gly Met Gly Val Ser

1 5

<210> 63

<211> 16

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 63

His Ile Tyr Trp Asp Asp Asp Lys Arg Tyr Asn Pro Ser Leu Met Ser

14

1 5 10 15

<210> 64

<211> 8

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 64

Lys Gly Arg Gly Pro Phe Ala Tyr

1 5

<210> 65

<211> 333

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 65

cagttcacgc tgactcaacc aaagtccgtg tcaggatctt taagaagcac tatcaccatt 60

ccctgtgagc gcagcagtgg tgacattgga gatagctatg tgagctggta ccaacaacac 120

ttgggaagac cccccatcaa tgtgatctat gctgatgatc aaagaccatc tgaagtgtct 180

gctcggttct cgggctccat cgacagctcc tctaactcag cctcactgac catcactaat 240

ctacagatgg atgatgaggc cgactacttc tgtcagtctt acgatactta tatggatgtt 300

gtgttcggtg gtggaaccaa gctcaatgtc cta 333

<210> 66

<211> 360

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 66

gaggtgcagc tgaaggaatc aggacctggt ctggtgcagc cctcacagac cctgtccctc 60

acctgcactg tctctggatt ctcattaacg gactacagtg tacactgggt tcgccagcct 120

ccaggaaaag gtctggagtg gatgggagta atgtggagtg gtggaagcac agcatataat 180

ccagctctca catcccgact gaccattagc agggacacct ccaagagcca agttttctta 240

aaaatgaaca gtctgcaaac tgaagataca gccatttact actgtaccag agcacctttt 300

aacaactggg gcaattggct tccttactgg ggccaaggca ctctggtcac tgtctcttca 360

<210> 67

<211> 39

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 67

gagcgcagca gtggtgacat tggagatagc tatgtgagc 39

<210> 68

<211> 21

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 68

gctgatgatc aaagaccatc t 21

<210> 69

<211> 30

15

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 69

cagtcttacg atacttatat ggatgttgtg 30

<210> 70

<211> 15

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 70

gactacagtg tacac 15

<210> 71

<211> 48

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 71

gtaatgtgga gtggtggaag cacagcatat aatccagctc tcacatcc 48

<210> 72

<211> 36

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 72

gcacctttta acaactgggg caattggctt ccttac 36

<210> 73

<211> 111

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 73

Gln Phe Thr Leu Thr Gln Pro Lys Ser Val Ser Gly Ser Leu Arg Ser

1 5 10 15

Thr Ile Thr Ile Pro Cys Glu Arg Ser Ser Gly Asp Ile Gly Asp Ser

20 25 30

Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Leu Gly Arg Pro Pro Ile Asn Val

35 40 45

Ile Tyr Ala Asp Asp Gln Arg Pro Ser Glu Val Ser Ala Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Ile Asp Ser Ser Ser Asn Ser Ala Ser Leu Thr Ile Thr Asn

65 70 75 80

Leu Gln Met Asp Asp Glu Ala Asp Tyr Phe Cys Gln Ser Tyr Asp Thr

85 90 95

Tyr Met Asp Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Asn Val Leu

100 105 110

<210> 74

<211> 120

<212> PRT

16

<213> Mus musculus

<400> 74

Glu Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Gln Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Asp Tyr

20 25 30

Ser Val His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Val Met Trp Ser Gly Gly Ser Thr Ala Tyr Asn Pro Ala Leu Thr

50 55 60

Ser Arg Leu Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu

65 70 75 80

Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Thr

85 90 95

Arg Ala Pro Phe Asn Asn Trp Gly Asn Trp Leu Pro Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 75

<211> 13

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 75

Glu Arg Ser Ser Gly Asp Ile Gly Asp Ser Tyr Val Ser

1 5 10

<210> 76

<211> 7

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 76

Ala Asp Asp Gln Arg Pro Ser

1 5

<210> 77

<211> 10

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 77

Gln Ser Tyr Asp Thr Tyr Met Asp Val Val

1 5 10

<210> 78

<211> 5

<212> PRT

17

<213> Mus musculus

<400> 78

Asp Tyr Ser Val His

1 5

<210> 79

<211> 16

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 79

Val Met Trp Ser Gly Gly Ser Thr Ala Tyr Asn Pro Ala Leu Thr Ser

1 5 10 15

<210> 80

<211> 12

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 80

Ala Pro Phe Asn Asn Trp Gly Asn Trp Leu Pro Tyr

1 5 10

<210> 81

<211> 339

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 81

caattcacgc tgactcaacc aaagtccgtg tcaggctctt taagaagcac tatcaccatt 60

ccctgtgagc gcagcagtgg tgacattgga gatagctatg tgagctggta ccagcaacac 120

ttgggaagac cccccatcaa tgtgatctat gctgatgatc aaagaccatc tgaagtgtct 180

gatcggttct cgggctccat cgacacctcc tctaactcag cctcactgac catcactaat 240

ctgcagatgg atgatgcggc cgactacttc tgtcagtctt acgatagtaa tattgatttt 300

aaccctgttt tcggtggtgg aaccaagctc actgtccta 339

<210> 82

<211> 363

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 82

gaggtgcagc tggtggagtc tggtggaggc ttagtgcagc ctggaaggtc tctgagactc 60

tcctgtacag cctcaggatt cactttcagt aaatatgtca tggcctgggt ccgccaggct 120

ccaacgaagg ggctggagtg ggtcgcatcc attaattatg atggtagtac cacttactat 180

cgagactccg tgcagggccg gttcactctc tccagagata atgcaaaaac caccctatac 240

ctgcaaatgg acagtctgag gtctgaggac acggccactt attactgtgc aaggcaccct 300

tttaacaact tcgggatttg gtttgcttac tggggccaag gcactctggt cactgtctct 360

tca 363

<210> 83

<211> 39

18

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 83

gagcgcagca gtggtgacat tggagatagc tatgtgagc 39

<210> 84

<211> 21

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 84

gctgatgatc aaagaccatc t 21

<210> 85

<211> 36

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 85

cagtcttacg atagtaatat tgattttaac cctgtt 36

<210> 86

<211> 15

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 86

aaatatgtca tggcc 15

<210> 87

<211> 51

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 87

tccattaatt atgatggtag taccacttac tatcgagact ccgtgcaggg c 51

<210> 88

<211> 36

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 88

caccctttta acaacttcgg gatttggttt gcttac 36

<210> 89

<211> 113

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 89

Gln Phe Thr Leu Thr Gln Pro Lys Ser Val Ser Gly Ser Leu Arg Ser

1 5 10 15

Thr Ile Thr Ile Pro Cys Glu Arg Ser Ser Gly Asp Ile Gly Asp Ser

20 25 30

Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Leu Gly Arg Pro Pro Ile Asn Val

35 40 45

Ile Tyr Ala Asp Asp Gln Arg Pro Ser Glu Val Ser Asp Arg Phe Ser

19

50 55 60

Gly Ser Ile Asp Thr Ser Ser Asn Ser Ala Ser Leu Thr Ile Thr Asn

65 70 75 80

Leu Gln Met Asp Asp Ala Ala Asp Tyr Phe Cys Gln Ser Tyr Asp Ser

85 90 95

Asn Ile Asp Phe Asn Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val

100 105 110

Leu

<210> 90

<211> 121

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 90

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Lys Tyr

20 25 30

Val Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Thr Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Ser Ile Asn Tyr Asp Gly Ser Thr Thr Tyr Tyr Arg Asp Ser Val

50 55 60

Gln Gly Arg Phe Thr Leu Ser Arg Asp Asn Ala Lys Thr Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg His Pro Phe Asn Asn Phe Gly Ile Trp Phe Ala Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 91

<211> 13

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 91

Glu Arg Ser Ser Gly Asp Ile Gly Asp Ser Tyr Val Ser

1 5 10

<210> 92

<211> 7

<212> PRT

20

<213> Mus musculus

<400> 92

Ala Asp Asp Gln Arg Pro Ser

1 5

<210> 93

<211> 12

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 93

Gln Ser Tyr Asp Ser Asn Ile Asp Phe Asn Pro Val

1 5 10

<210> 94

<211> 5

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 94

Lys Tyr Val Met Ala

1 5

<210> 95

<211> 17

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 95

Ser Ile Asn Tyr Asp Gly Ser Thr Thr Tyr Tyr Arg Asp Ser Val Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 96

<211> 12

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 96

His Pro Phe Asn Asn Phe Gly Ile Trp Phe Ala Tyr

1 5 10

<210> 97

<211> 321

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 97

gatgtccgga tgacacagtc tccagcttcc ctgtctgcat ctctgggaga aactgtcaac 60

atcgaatgtc tagcaagtga ggacatttac agtgatttag catggtatca gcagaagcca 120

gggaaatctc ctcagctcct gatctataat gcaaatagtc tacaaaatgg ggtcccttca 180

cggtttagtg gcagtggttc tggcacgcag tattctctaa aaatatccac cctgcaatct 240

gaagatgtcg cgacttattt ctgtcaacaa tatagcaatt atcgtcggac gttcggtgga 300

21

ggcaccaagc tggaaatcaa t 321

<210> 98

<211> 381

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 98

gaggtgcaac tggtggagtc tgggggaggc ctagtgcagc ctggaaggtc tctgaaacta 60

tcctgtgtag cctctggatt cacattcaac aaccactgga tgacctggat ccgccaggct 120

ccagggaagg ggctggagtg ggttgcatcc attactgata atggtggtag cacttactat 180

ccagactctg tgaagggccg attcactatc tccagagata atgcaaaaag caccctatac 240

ctgcacatga acagtctgag gtctgaggac acggccactt attactgtac aagagatcgg 300

tatgactctg atggttatta ttacgtgagg tactatgttg tggacgcctg gggtcaagga 360

gcttcagtca ctgtctcctc a 381

<210> 99

<211> 33

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 99

ctagcaagtg aggacattta cagtgattta gca 33

<210> 100

<211> 21

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 100

aatgcaaata gtctacaaaa t 21

<210> 101

<211> 27

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 101

caacaatata gcaattatcg tcggacg 27

<210> 102

<211> 15

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 102

aaccactgga tgacc 15

<210> 103

<211> 51

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 103

tccattactg ataatggtgg tagcacttac tatccagact ctgtgaaggg c 51

<210> 104

<211> 54

<212> ДНК

22

<213> Mus musculus

<400> 104

gatcggtatg actctgatgg ttattattac gtgaggtact atgttgtgga cgcc 54

<210> 105

<211> 107

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 105

Asp Val Arg Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Thr Val Asn Ile Glu Cys Leu Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Asp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asn Ala Asn Ser Leu Gln Asn Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Gln Tyr Ser Leu Lys Ile Ser Thr Leu Gln Ser

65 70 75 80

Glu Asp Val Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Ser Asn Tyr Arg Arg

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Asn

100 105

<210> 106

<211> 127

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 106

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Asn His

20 25 30

Trp Met Thr Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Ser Ile Thr Asp Asn Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu His Met Asn Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys

85 90 95

23

Thr Arg Asp Arg Tyr Asp Ser Asp Gly Tyr Tyr Tyr Val Arg Tyr Tyr

100 105 110

Val Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Ala Ser Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 107

<211> 11

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 107

Leu Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Asp Leu Ala

1 5 10

<210> 108

<211> 7

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 108

Asn Ala Asn Ser Leu Gln Asn

1 5

<210> 109

<211> 9

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 109

Gln Gln Tyr Ser Asn Tyr Arg Arg Thr

1 5

<210> 110

<211> 5

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 110

Asn His Trp Met Thr

1 5

<210> 111

<211> 17

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 111

Ser Ile Thr Asp Asn Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 112

<211> 18

<212> PRT

<213> Mus musculus

24

<400> 112

Asp Arg Tyr Asp Ser Asp Gly Tyr Tyr Tyr Val Arg Tyr Tyr Val Val

1 5 10 15

Asp Ala

<210> 113

<211> 336

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 113

gatgttgtgt tgacacagac tccaggttcc ctgtctgtca cacttggaca gcaagtttct 60

atatcctgta ggtctagtca gagcctggaa agtcgtgatg ggaacactta tttggaatgg 120

tacctacaga agccaggcca gtctccacag gtcctcctct atggagtttc caaccgattg 180

tctggggtcc cagacaggtt ccttggcaga gggtcagggg cagatttcac cctcaagatc 240

agcagagtag agcctgagga cttgggagtt tattactgct tccaagctac acatggtcca 300

ttcacgttcg gctcagggac gaagttggaa atgaaa 336

<210> 114

<211> 354

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 114

caggtgcagc tgaaggagtc aggacctggc ctggtgcagc cctcacagac cctgtctctc 60

acctgcactg tctctgggtt ctcattaacc acctatcatg tgcactgggt tcgacagcct 120

ccaggaaaag gtctggagtg gatgggaata atgtggagag atggagacac atcatataat 180

tcagttctca aatctcgact gagcatcagc agggacatct ccaagagcca agttttctta 240

aaaatgagca gtctgcaaac tgaagacaca gccacttact tctgtgccag aggggggact 300

cttacaactc cctttactta ctggggccaa ggcactctgg tcactgtctc ttca 354

<210> 115

<211> 48

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 115

aggtctagtc agagcctgga aagtcgtgat gggaacactt atttggaa 48

<210> 116

<211> 21

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 116

ggagtttcca accgattgtc t 21

<210> 117

<211> 27

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 117

25

ttccaagcta cacatggtcc attcacg 27

<210> 118

<211> 15

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 118

acctatcatg tgcac 15

<210> 119

<211> 48

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 119

ataatgtgga gagatggaga cacatcatat aattcagttc tcaaatct 48

<210> 120

<211> 30

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 120

ggggggactc ttacaactcc ctttacttac 30

<210> 121

<211> 112

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 121

Asp Val Val Leu Thr Gln Thr Pro Gly Ser Leu Ser Val Thr Leu Gly

1 5 10 15

Gln Gln Val Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Glu Ser Arg

20 25 30

Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Val Leu Leu Tyr Gly Val Ser Asn Arg Leu Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Leu Gly Arg Gly Ser Gly Ala Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Pro Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Ala

85 90 95

Thr His Gly Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Met Lys

100 105 110

<210> 122

<211> 118

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 122

26

Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Gln Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Thr Tyr

20 25 30

His Val His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ile Met Trp Arg Asp Gly Asp Thr Ser Tyr Asn Ser Val Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Leu Ser Ile Ser Arg Asp Ile Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu

65 70 75 80

Lys Met Ser Ser Leu Gln Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala

85 90 95

Arg Gly Gly Thr Leu Thr Thr Pro Phe Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 123

<211> 16

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 123

Arg Ser Ser Gln Ser Leu Glu Ser Arg Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Glu

1 5 10 15

<210> 124

<211> 7

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 124

Gly Val Ser Asn Arg Leu Ser

1 5

<210> 125

<211> 9

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 125

Phe Gln Ala Thr His Gly Pro Phe Thr

1 5

<210> 126

<211> 5

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 126

27

Thr Tyr His Val His

1 5

<210> 127

<211> 16

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 127

Ile Met Trp Arg Asp Gly Asp Thr Ser Tyr Asn Ser Val Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 128

<211> 10

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 128

Gly Gly Thr Leu Thr Thr Pro Phe Thr Tyr

1 5 10

<210> 129

<211> 321

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 129

gatatccgga tgacacagtc tccagcttcc ctgtctgcat ctctgggaga aactgtcaac 60

atcgaatgtc tagcaagtga ggacatttac agtgatttag catggtatca gcagaagcca 120

gggaaatctc cacaactcct gatctataat gcaaatagcg tgcaaaatgg ggtcccttca 180

cggtttagtg gcagtggatc tggcacacag tattctctaa aaataaacag cctgcaatct 240

gaagatgtcg cgacttattt ctgtcaacag tttaacagtt atccgaacac gtttggagct 300

gggaccaagc tggaaatcaa a 321

<210> 130

<211> 363

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 130

gaggtgcaac ttcaggagtc aggacctggc cttgtgaaac cctcacagtc actctccctc 60

acctgttctg tctctggttt ctccatcact aataattact ggggctggat ccggaagttc 120

ccaagaaata aaatggagtg gattggacac ataagctaca gtggtagcac taactacaac 180

ccatctctca aaagtcgcat ctccattact agagactcat cgaagagtca gttcttcctg 240

cagttgaact ctttaactac tgaggacaca gccacatatt actgtgcaag aggatcttat 300

tactatagcg catcgggcta ctttgattat tggggccaag gaatcacggt cacagtctcc 360

tca 363

<210> 131

<211> 33

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 131

28

ctagcaagtg aggacattta cagtgattta gca 33

<210> 132

<211> 21

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 132

aatgcaaata gcgtgcaaaa t 21

<210> 133

<211> 27

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 133

caacagttta acagttatcc gaacacg 27

<210> 134

<211> 15

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 134

aataattact ggggc 15

<210> 135

<211> 48

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 135

cacataagct acagtggtag cactaactac aacccatctc tcaaaagt 48

<210> 136

<211> 39

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 136

ggatcttatt actatagcgc atcgggctac tttgattat 39

<210> 137

<211> 107

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 137

Asp Ile Arg Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Thr Val Asn Ile Glu Cys Leu Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Asp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asn Ala Asn Ser Val Gln Asn Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Gln Tyr Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Ser

29

65 70 75 80

Glu Asp Val Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Phe Asn Ser Tyr Pro Asn

85 90 95

Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 138

<211> 121

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 138

Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Ser Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Ser Gly Phe Ser Ile Thr Asn Asn

20 25 30

Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Lys Phe Pro Arg Asn Lys Met Glu Trp Ile

35 40 45

Gly His Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Ser Ser Lys Ser Gln Phe Phe Leu

65 70 75 80

Gln Leu Asn Ser Leu Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Gly Ser Tyr Tyr Tyr Ser Ala Ser Gly Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Ile Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 139

<211> 11

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 139

Leu Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Asp Leu Ala

1 5 10

<210> 140

<211> 7

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 140

Asn Ala Asn Ser Val Gln Asn

1 5

30

<210> 141

<211> 9

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 141

Gln Gln Phe Asn Ser Tyr Pro Asn Thr

1 5

<210> 142

<211> 5

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 142

Asn Asn Tyr Trp Gly

1 5

<210> 143

<211> 16

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 143

His Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 144

<211> 13

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 144

Gly Ser Tyr Tyr Tyr Ser Ala Ser Gly Tyr Phe Asp Tyr

1 5 10

<210> 145

<211> 336

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 145

gacgtggtct tgacccaaac ccctggatca cttagcgtga cactgggcga tccagcatca 60

atgtcctgca gaagctccca gtccttggag agtagcgacg gcaacacata cctcgagtgg 120

tatctgcaga aatccgggca gtccccacag ctgctgatct acggcgtgag taacaggttc 180

agcggggtgc ctgataggtt cgccggcagc gggtccggga cagattttac tctcaagatt 240

agccgcgtcg aacccgagga cctgggcgtg tactactgtt ttcaggccac tcgggacccc 300

tttactttcg ggagcgggac aaagctggag attaat 336

<210> 146

<211> 354

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 146

caggtccagc ttaaagagtc cggacctgga cttgtgcagc catcccagac cttgtccttg 60

acctgcaccg tgtcagggtt ctctctcacc agttaccacc tgcattggat caggcagcct 120

31

cccggcaagg ggctggaatg gatggggctg atgtggagag atggggatac atcttacaac 180

agcaggctga agagccggct gagcattaca cgggacacca gcaagtccca ggtgttcctc 240

aagatgagcg ggctccaaac tgaggacaca gctacatact actgtgcacg cggcatgaca 300

ctcgccactc cctttctgta ttggggccag ggcactctgg tcactgtgtc ctca 354

<210> 147

<211> 48

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 147

agaagctccc agtccttgga gagtagcgac ggcaacacat acctcgag 48

<210> 148

<211> 21

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 148

ggcgtgagta acaggttcag c 21

<210> 149

<211> 27

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 149

tttcaggcca ctcgggaccc ctttact 27

<210> 150

<211> 15

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 150

agttaccacc tgcat 15

<210> 151

<211> 48

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 151

ctgatgtgga gagatgggga tacatcttac aacagcaggc tgaagagc 48

<210> 152

<211> 30

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 152

ggcatgacac tcgccactcc ctttctgtat 30

<210> 153

<211> 112

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 153

Asp Val Val Leu Thr Gln Thr Pro Gly Ser Leu Ser Val Thr Leu Gly

32

1 5 10 15

Asp Pro Ala Ser Met Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Glu Ser Ser

20 25 30

Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Ser Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gly Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ala Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Pro Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Ala

85 90 95

Thr Arg Asp Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Asn

100 105 110

<210> 154

<211> 118

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 154

Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Gln Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Tyr

20 25 30

His Leu His Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Leu Met Trp Arg Asp Gly Asp Thr Ser Tyr Asn Ser Arg Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Leu Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu

65 70 75 80

Lys Met Ser Gly Leu Gln Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Gly Met Thr Leu Ala Thr Pro Phe Leu Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 155

<211> 16

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 155

33

Arg Ser Ser Gln Ser Leu Glu Ser Ser Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Glu

1 5 10 15

<210> 156

<211> 7

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 156

Gly Val Ser Asn Arg Phe Ser

1 5

<210> 157

<211> 9

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 157

Phe Gln Ala Thr Arg Asp Pro Phe Thr

1 5

<210> 158

<211> 5

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 158

Ser Tyr His Leu His

1 5

<210> 159

<211> 16

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 159

Leu Met Trp Arg Asp Gly Asp Thr Ser Tyr Asn Ser Arg Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 160

<211> 10

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 160

Gly Met Thr Leu Ala Thr Pro Phe Leu Tyr

1 5 10

<210> 161

<211> 321

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 161

gatatccgga tgacacagtc gccagcttcc ctgtctgcat ctctgggaga aactgtcaac 60

atcgaatgtc tagcaagtga ggacattcac agtgatttag catggtatca gcagaagcca 120

gggaaatctc ctcagctcct gatctataat gcaaatagct tgcaaaatgg ggtcccttca 180

34

cggttcagtg gcagtggatc tggcacacag tattctctaa aaataaccag cctgcaatct 240

gaagatgtcg cgacttattt ctgtcaacaa tataccaact atccgaacac gtttggagcg 300

gggaccaagc tggaaatcaa t 321

<210> 162

<211> 363

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 162

gaggtgcagc ttcaggagtc aggacctggc cttgtgaaac cctcacagtc actctccctc 60

acctgttctg tcactggtta ctccatcact aatcattact ggggctggat ccggaaattc 120

ccaggaaata aaatggagtg gattggacac ataagcaaca gtggtggcac taactacaac 180

ccatcactca aaagtcgaat ctccattact agagacacat cgaagaatca gttcttcctg 240

cagttgaagt ctgtaactac tgaggacaca gccacatatt actgtacaag aggatcttat 300

tactatagcg catcgggcta ctttgattac tggggccaag gagtcctggt cacagtctcc 360

tcc 363

<210> 163

<211> 33

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 163

ctagcaagtg aggacattca cagtgattta gca 33

<210> 164

<211> 21

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 164

aatgcaaata gcttgcaaaa t 21

<210> 165

<211> 27

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 165

caacaatata ccaactatcc gaacacg 27

<210> 166

<211> 15

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 166

aatcattact ggggc 15

<210> 167

<211> 48

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 167

cacataagca acagtggtgg cactaactac aacccatcac tcaaaagt 48

35

<210> 168

<211> 39

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 168

ggatcttatt actatagcgc atcgggctac tttgattac 39

<210> 169

<211> 107

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 169

Asp Ile Arg Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Thr Val Asn Ile Glu Cys Leu Ala Ser Glu Asp Ile His Ser Asp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asn Ala Asn Ser Leu Gln Asn Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Gln Tyr Ser Leu Lys Ile Thr Ser Leu Gln Ser

65 70 75 80

Glu Asp Val Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Thr Asn Tyr Pro Asn

85 90 95

Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Ile Asn

100 105

<210> 170

<211> 121

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 170

Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Ser Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Asn His

20 25 30

Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Lys Phe Pro Gly Asn Lys Met Glu Trp Ile

35 40 45

Gly His Ile Ser Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe Leu

65 70 75 80

36

Gln Leu Lys Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Thr

85 90 95

Arg Gly Ser Tyr Tyr Tyr Ser Ala Ser Gly Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Val Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 171

<211> 11

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 171

Leu Ala Ser Glu Asp Ile His Ser Asp Leu Ala

1 5 10

<210> 172

<211> 7

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 172

Asn Ala Asn Ser Leu Gln Asn

1 5

<210> 173

<211> 9

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 173

Gln Gln Tyr Thr Asn Tyr Pro Asn Thr

1 5

<210> 174

<211> 5

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 174

Asn His Tyr Trp Gly

1 5

<210> 175

<211> 16

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 175

His Ile Ser Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 176

<211> 13

<212> PRT

<213> Mus musculus

37

<400> 176

Gly Ser Tyr Tyr Tyr Ser Ala Ser Gly Tyr Phe Asp Tyr

1 5 10

<210> 177

<211> 321

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 177

gatatccgga tgacacagtc tccagcttcc ctgtctgcat ctctgggaga aactgtcaac 60

atcggatgtc tagcaagtga ggacatttac agtgatttag catggtatca gcagaagcca 120

gggaagtctc ctcagctcct gatctataat gcaaataact tgcaaaatgg ggtcccttca 180

cggtttagtg gcagtggatc tggcacacaa tattctctaa aaataaacag cctgcaatct 240

gaagatgtcg cgacttattt ctgtcaacaa tataacagtt atccgaacac gtttggagct 300

gggaccaagc tggaaataaa a 321

<210> 178

<211> 363

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 178

gaggtgcagc ttcaggagtc aggacctggc cttgtgaaac cctcacagtc actctccctc 60

atttgttctg tcactggtta ctccatcact acaacttact ggggctggat ccggaagttc 120

ccaggaaata aaatggagtg gattggacac ataagtaaca gtggtagtac taattacaac 180

ccatctctca aaagtcgaat ctccgttact agagacacat cgacgaatca gttcttcctg 240

cagttgaact ctgtaactac tgaggacaca gccacatatt actgtgcaag aggatcttat 300

tactatagcg cgtcgggcta ctttgattac tggggccacg gagtcatggt cacagtctcc 360

tca 363

<210> 179

<211> 33

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 179

ctagcaagtg aggacattta cagtgattta gca 33

<210> 180

<211> 21

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 180

aatgcaaata acttgcaaaa t 21

<210> 181

<211> 27

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 181

caacaatata acagttatcc gaacacg 27

38

<210> 182

<211> 15

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 182

acaacttact ggggc 15

<210> 183

<211> 48

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 183

cacataagta acagtggtag tactaattac aacccatctc tcaaaagt 48

<210> 184

<211> 39

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 184

ggatcttatt actatagcgc gtcgggctac tttgattac 39

<210> 185

<211> 107

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 185

Asp Ile Arg Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Thr Val Asn Ile Gly Cys Leu Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Asp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asn Ala Asn Asn Leu Gln Asn Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Gln Tyr Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Ser

65 70 75 80

Glu Asp Val Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Asn

85 90 95

Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 186

<211> 121

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 186

Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

39

Ser Leu Ser Leu Ile Cys Ser Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Thr Thr

20 25 30

Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Lys Phe Pro Gly Asn Lys Met Glu Trp Ile

35 40 45

Gly His Ile Ser Asn Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Ile Ser Val Thr Arg Asp Thr Ser Thr Asn Gln Phe Phe Leu

65 70 75 80

Gln Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Gly Ser Tyr Tyr Tyr Ser Ala Ser Gly Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

His Gly Val Met Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 187

<211> 11

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 187

Leu Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Asp Leu Ala

1 5 10

<210> 188

<211> 7

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 188

Asn Ala Asn Asn Leu Gln Asn

1 5

<210> 189

<211> 9

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 189

Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Asn Thr

1 5

<210> 190

<211> 5

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 190

Thr Thr Tyr Trp Gly

1 5

40

<210> 191

<211> 16

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 191

His Ile Ser Asn Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 192

<211> 13

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 192

Gly Ser Tyr Tyr Tyr Ser Ala Ser Gly Tyr Phe Asp Tyr

1 5 10

<210> 193

<211> 108

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 193

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala

20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Leu Thr Ser Tyr Arg Asn Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala

65 70 75 80

Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Lys Thr Pro Tyr

85 90 95

Ser Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Arg Leu Arg

100 105

<210> 194

<211> 115

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 194

Gln Val Gln Leu Glu Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln

1 5 10 15

Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Gly Tyr

20 25 30

41

Gly Ile Tyr Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu

35 40 45

Gly Met Ile Trp Gly Asp Gly Arg Thr Asp Tyr Asn Ser Ala Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu

65 70 75 80

Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Asp Tyr Tyr Gly Ser Lys Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu

100 105 110

Thr Val Ser

115

<210> 195

<211> 111

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 195

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp

20 25 30

Gly Asp Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro

35 40 45

Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His

65 70 75 80

Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn

85 90 95

Gly Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 196

<211> 123

<212> PRT

<213> Mus musculus

<400> 196

Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Ile Leu Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

42

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser

20 25 30

Gly Met Gly Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Ser Gly Lys Gly Leu Glu

35 40 45

Trp Leu Ala His Ile Trp Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr Asn Pro Ser

50 55 60

Leu Lys Ser Gln Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Arg Asn Gln Val

65 70 75 80

Phe Leu Lys Ile Thr Ser Val Asp Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr

85 90 95

Cys Ala Arg Lys Arg Ser Ser Val Val Ala His Tyr Tyr Ala Met Asp

100 105 110

Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser

115 120

<210> 197

<211> 113

<212> PRT

<213> Искусственное

<220>

<223> гуманизированное антитело

<400> 197

Gln Phe Gln Leu Thr Gln Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly Asp

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Thr Cys Glu Arg Ser Ser Gly Asp Ile Gly Asp Ser

20 25 30

Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Asn Val

35 40 45

Ile Tyr Ala Asp Asp Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Ile Asp Gly Ser Gly Asn Ser Ala Ser Leu Thr Ile Ser Ser

65 70 75 80

Leu Gln Ala Glu Asp Ala Ala Asp Tyr Phe Cys Gln Ser Tyr Asp Ser

85 90 95

Asn Ile Asp Phe Asn Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Val

100 105 110

Lys

<210> 198

<211> 120

43

<212> PRT

<213> Искусственное

<220>

<223> гуманизированное антитело

<400> 198

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Lys Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Asn Tyr Asp Gly Ser Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Leu Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg His Pro Phe Asn Asn Phe Gly Ile Trp Phe Ala Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser

115 120

<210> 199

<211> 114

<212> PRT

<213> Искусственное

<220>

<223> гуманизированное антитело

<400> 199

Asp Val Val Leu Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Glu Ser Arg

20 25 30

Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Val Leu Leu Tyr Gly Val Ser Asn Arg Leu Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Ala

85 90 95

44

Thr His Gly Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

Arg Thr

<210> 200

<211> 118

<212> PRT

<213> Искусственное

<220>

<223> гуманизированное антитело

<400> 200

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Thr Tyr

20 25 30

His Val His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Ile Met Trp Arg Asp Gly Asp Thr Tyr Tyr Asn Ser Ser Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu

65 70 75 80

Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala

85 90 95

Arg Gly Gly Thr Leu Thr Thr Pro Phe Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 201

<211> 114

<212> PRT

<213> Искусственное

<220>

<223> гуманизированное антитело

<400> 201

Asp Val Val Leu Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Glu Ser Ser

20 25 30

Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gly Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Ala

85 90 95

Thr Arg Asp Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

Arg Thr

<210> 202

<211> 118

<212> PRT

<213> Искусственное

<220>

<223> гуманизированное антитело

<400> 202

Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Thr Glu

1 5 10 15

Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Tyr

20 25 30

His Leu His Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Leu Met Trp Arg Asp Gly Asp Thr Ser Tyr Asn Ser Arg Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Leu Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Ser Gln Val Val Leu

65 70 75 80

Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Gly Met Thr Leu Ala Thr Pro Phe Leu Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 203

<211> 625

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 203

Met Ile Phe Leu Tyr Gln Val Val His Phe Ile Leu Phe Thr Ser Val

46

1 5 10 15

Ser Gly Glu Cys Val Thr Gln Leu Leu Lys Asp Thr Cys Phe Glu Gly

20 25 30

Gly Asp Ile Thr Thr Val Phe Thr Pro Ser Ala Lys Tyr Cys Gln Val

35 40 45

Val Cys Thr Tyr His Pro Arg Cys Leu Leu Phe Thr Phe Thr Ala Glu

50 55 60

Ser Pro Ser Glu Asp Pro Thr Arg Trp Phe Thr Cys Val Leu Lys Asp

65 70 75 80

Ser Val Thr Glu Thr Leu Pro Arg Val Asn Arg Thr Ala Ala Ile Ser

85 90 95

Gly Tyr Ser Phe Lys Gln Cys Ser His Gln Ile Ser Ala Cys Asn Lys

100 105 110

Asp Ile Tyr Val Asp Leu Asp Met Lys Gly Ile Asn Tyr Asn Ser Ser

115 120 125

Val Ala Lys Ser Ala Gln Glu Cys Gln Glu Arg Cys Thr Asp Asp Val

130 135 140

His Cys His Phe Phe Thr Tyr Ala Thr Arg Gln Phe Pro Ser Leu Glu

145 150 155 160

His Arg Asn Ile Cys Leu Leu Lys His Thr Gln Thr Gly Thr Pro Thr

165 170 175

Arg Ile Thr Lys Leu Asp Lys Val Val Ser Gly Phe Ser Leu Lys Ser

180 185 190

Cys Ala Leu Ser Asn Leu Ala Cys Ile Arg Asp Ile Phe Pro Asn Thr

195 200 205

Val Phe Ala Asp Ser Asn Ile Asp Ser Val Met Ala Pro Asp Ala Phe

210 215 220

Val Cys Gly Arg Ile Cys Thr His His Pro Gly Cys Leu Phe Phe Thr

225 230 235 240

Phe Phe Ser Gln Glu Trp Pro Lys Glu Ser Gln Arg Asn Leu Cys Leu

245 250 255

Leu Lys Thr Ser Glu Ser Gly Leu Pro Ser Thr Arg Ile Lys Lys Ser

260 265 270

Lys Ala Leu Ser Gly Phe Ser Leu Gln Ser Cys Arg His Ser Ile Pro

275 280 285

Val Phe Cys His Ser Ser Phe Tyr His Asp Thr Asp Phe Leu Gly Glu

47

290 295 300

Glu Leu Asp Ile Val Ala Ala Lys Ser His Glu Ala Cys Gln Lys Leu

305 310 315 320

Cys Thr Asn Ala Val Arg Cys Gln Phe Phe Thr Tyr Thr Pro Ala Gln

325 330 335

Ala Ser Cys Asn Glu Gly Lys Gly Lys Cys Tyr Leu Lys Leu Ser Ser

340 345 350

Asn Gly Ser Pro Thr Lys Ile Leu His Gly Arg Gly Gly Ile Ser Gly

355 360 365

Tyr Thr Leu Arg Leu Cys Lys Met Asp Asn Glu Cys Thr Thr Lys Ile

370 375 380

Lys Pro Arg Ile Val Gly Gly Thr Ala Ser Val Arg Gly Glu Trp Pro

385 390 395 400

Trp Gln Val Thr Leu His Thr Thr Ser Pro Thr Gln Arg His Leu Cys

405 410 415

Gly Gly Ser Ile Ile Gly Asn Gln Trp Ile Leu Thr Ala Ala His Cys

420 425 430

Phe Tyr Gly Val Glu Ser Pro Lys Ile Leu Arg Val Tyr Ser Gly Ile

435 440 445

Leu Asn Gln Ser Glu Ile Lys Glu Asp Thr Ser Phe Phe Gly Val Gln

450 455 460

Glu Ile Ile Ile His Asp Gln Tyr Lys Met Ala Glu Ser Gly Tyr Asp

465 470 475 480

Ile Ala Leu Leu Lys Leu Glu Thr Thr Val Asn Tyr Thr Asp Ser Gln

485 490 495

Arg Pro Ile Cys Leu Pro Ser Lys Gly Asp Arg Asn Val Ile Tyr Thr

500 505 510

Asp Cys Trp Val Thr Gly Trp Gly Tyr Arg Lys Leu Arg Asp Lys Ile

515 520 525

Gln Asn Thr Leu Gln Lys Ala Lys Ile Pro Leu Val Thr Asn Glu Glu

530 535 540

Cys Gln Lys Arg Tyr Arg Gly His Lys Ile Thr His Lys Met Ile Cys

545 550 555 560

Ala Gly Tyr Arg Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Lys Gly Asp Ser Gly

565 570 575

Gly Pro Leu Ser Cys Lys His Asn Glu Val Trp His Leu Val Gly Ile

48

580 585 590

Thr Ser Trp Gly Glu Gly Cys Ala Gln Arg Glu Arg Pro Gly Val Tyr

595 600 605

Thr Asn Val Val Glu Tyr Val Asp Trp Ile Leu Glu Lys Thr Gln Ala

610 615 620

Val

<---

Claims (30)

1. Выделенное антитело к фактору коагуляции, которое специфически связывается с человеческим FXI или его активированной формой FXIa, содержащее комбинацию CDR, выбранную из группы, состоящей из комбинаций a)-l), или его антигенсвязывающий домен:

комбинацию a) CDR последовательностей SEQ ID NO: 11-16;

комбинацию b) CDR последовательностей SEQ ID NO: 27-32;

комбинацию c) CDR последовательностей SEQ ID NO: 43-48;

комбинацию d) CDR последовательностей SEQ ID NO: 59-64;

комбинацию e) CDR последовательностей SEQ ID NO: 75-80;

комбинацию f) CDR последовательностей SEQ ID NO: 91-96;

комбинацию g) CDR последовательностей SEQ ID NO: 107-112;

комбинацию h) CDR последовательностей SEQ ID NO: 123-128;

комбинацию i) CDR последовательностей SEQ ID NO: 139-144;

комбинацию j) CDR последовательностей SEQ ID NO: 155-160;

комбинацию k) CDR последовательностей SEQ ID NO: 171-176; и

комбинацию l) CDR последовательностей SEQ ID NO: 187-192.

2. Антитело по п. 1, причем антитело специфически связывается с доменом A3 FXI или FXIa человека.

3. Антитело по п. 1, причем антитело содержит пару последовательностей, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 9-10, SEQ ID NO: 25-26, SEQ ID NO 41-42, SEQ ID NO: 57-58, SEQ ID NO: 73-74, SEQ ID NO: 89-90, SEQ ID NO: 105-106, SEQ ID NO: 121-122, SEQ ID NO: 137-138, SEQ ID NO: 153-154, SEQ ID NO: 169-170, SEQ ID NO: 185-186, SEQ ID NO; 197-198, SEQ ID NO: 199-200, SEQ ID NO: 201-202, SEQ ID NO: 204-205, SEQ ID NO: 206-207 и SEQ ID NO: 208-209, и последовательностей, имеющих по меньшей мере 90% идентичность с ними.

4. Фармацевтическая композиция для ингибирования образования тромбов, содержащая терапевтически эффективное количество антитела по любому из пп. 1-3.

5. Применение антитела по любому из пп. 1-3 в изготовлении лекарственного средства для ингибирования образования тромбов у субъекта.

6. Применение антитела по любому из пп. 1-3 в изготовлении лекарственного средства для лечения или ингибирования возникновения сепсиса.

7. Способ ингибирования образования тромбов у субъекта, включающий введение субъекту терапевтически эффективного количества антитела по любому из пп. 1-3.

8. Способ ингибирования образования тромбов у субъекта, включающий введение субъекту терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции по п. 4.

9. Способ лечения или ингибирования возникновения тромбоза или осложнения или состояния, связанного с тромбозом, включающий введение субъекту терапевтически эффективного количества антитела по любому из пп. 1-3, причем указанное введение не нарушает гемостаз субъекта.

10. Способ лечения или ингибирования возникновения тромбоза или осложнения или состояния, связанного с тромбозом, включающий введение субъекту терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции по п. 4, причем указанное введение не нарушает гемостаз субъекта.

11. Способ лечения или ингибирования возникновения сепсиса, включающий введение субъекту терапевтически эффективного количества антитела по любому из пп. 1-3, причем указанное введение не нарушает гемостаз субъекта.

12. Способ лечения или ингибирования возникновения сепсиса, включающий введение субъекту терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции по п. 4, причем указанное введение не нарушает гемостаз субъекта.

13. Способ получения антитела по любому из пп. 1-3, включающий экспрессию нуклеиновой кислоты, кодирующей антитело по любому из пп. 1-3, клонированной в векторе экспрессии в клетке-хозяине.

14. Способ по п. 13, дополнительно включающий очистку экспрессированного антитела из клетки-хозяина.

15. Способ по п. 13, в котором вектор экспрессии представляет собой вектор pTT5 или вектор pcDNA3.

16. Способ по п. 13, в котором клетка-хозяин представляет собой клетку CHO или клетку HEK193T.

17. Антитело к фактору коагуляции, которое специфически связывается с человеческим FXI или его активированной формой FXIa, или его антигенсвязывающий фрагмент, полученные способом по любому из пп. 13-16, или его антигенсвязывающий домен.

18. Антитело по п. 17, причем антитело является посттрансляционно модифицированным.

Images