RU2772821C1 - Method for quantitative determination of sum of flavonoids in spreading marigold flowers - Google Patents
Method for quantitative determination of sum of flavonoids in spreading marigold flowers Download PDFInfo
- Publication number
- RU2772821C1 RU2772821C1 RU2021111797A RU2021111797A RU2772821C1 RU 2772821 C1 RU2772821 C1 RU 2772821C1 RU 2021111797 A RU2021111797 A RU 2021111797A RU 2021111797 A RU2021111797 A RU 2021111797A RU 2772821 C1 RU2772821 C1 RU 2772821C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- quercetin
- flavonoids
- flowers
- optical density
- solution
- Prior art date
Links
- 150000002215 flavonoids Chemical class 0.000 title claims abstract description 41
- 229930003935 flavonoids Natural products 0.000 title claims abstract description 41
- 235000017173 flavonoids Nutrition 0.000 title claims abstract description 40
- 240000005285 Tagetes patula Species 0.000 title abstract description 11
- 229960001285 Quercetin Drugs 0.000 claims abstract description 58
- 229930002344 quercetin Natural products 0.000 claims abstract description 58
- 235000005875 quercetin Nutrition 0.000 claims abstract description 58
- REFJWTPEDVJJIY-UHFFFAOYSA-N Quercetin Chemical compound C=1C(O)=CC(O)=C(C(C=2O)=O)C=1OC=2C1=CC=C(O)C(O)=C1 REFJWTPEDVJJIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 57
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 42
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 37
- 241000736851 Tagetes Species 0.000 claims abstract description 35
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims abstract description 32
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 claims abstract description 29
- 230000003287 optical Effects 0.000 claims abstract description 26
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims abstract description 24
- 239000012085 test solution Substances 0.000 claims abstract description 16
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 claims abstract description 14
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims abstract description 10
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 claims abstract description 10
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 claims abstract description 6
- VSCWAEJMTAWNJL-UHFFFAOYSA-K Aluminium chloride Chemical compound Cl[Al](Cl)Cl VSCWAEJMTAWNJL-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 28
- 235000012308 Tagetes Nutrition 0.000 claims description 22
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 238000009835 boiling Methods 0.000 claims description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 7
- 238000010668 complexation reaction Methods 0.000 claims description 2
- 238000000227 grinding Methods 0.000 claims description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims 1
- 235000005881 Calendula officinalis Nutrition 0.000 abstract description 13
- 235000012311 Tagetes erecta Nutrition 0.000 abstract description 13
- 235000003595 Tagetes minuta Nutrition 0.000 abstract description 13
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 7
- 235000004452 Tagetes patula Nutrition 0.000 abstract description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 5
- 229940079593 drugs Drugs 0.000 abstract description 4
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 abstract description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 abstract description 3
- 238000005020 pharmaceutical industry Methods 0.000 abstract description 2
- 235000021285 flavonoid Nutrition 0.000 abstract 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 17
- 239000012088 reference solution Substances 0.000 description 6
- JMIFIYIEXODVTO-UHFFFAOYSA-N Patuletin Chemical compound OC=1C(=O)C2=C(O)C(OC)=C(O)C=C2OC=1C1=CC=C(O)C(O)=C1 JMIFIYIEXODVTO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 238000002211 ultraviolet spectrum Methods 0.000 description 3
- 241000208838 Asteraceae Species 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000538 analytical sample Substances 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 2
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000034 method Methods 0.000 description 2
- 150000002989 phenols Chemical class 0.000 description 2
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 2
- 230000003595 spectral Effects 0.000 description 2
- 206010012601 Diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 241000195955 Equisetum hyemale Species 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Natural products OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940029983 VITAMINS Drugs 0.000 description 1
- 240000006802 Vicia sativa Species 0.000 description 1
- 229940021016 Vitamin IV solution additives Drugs 0.000 description 1
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 1
- 230000001476 alcoholic Effects 0.000 description 1
- 150000001747 carotenoids Chemical class 0.000 description 1
- 238000005039 chemical industry Methods 0.000 description 1
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000002265 electronic spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000008079 hexane Substances 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 235000019529 tetraterpenoid Nutrition 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229930003231 vitamins Natural products 0.000 description 1
- 239000000341 volatile oil Substances 0.000 description 1
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 1
Images
Abstract
Description
Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и может быть использовано в центрах контроля качества лекарственных средств и контрольно-аналитических лабораториях при проведении количественного определения суммы флавоноидов в цветках бархатцев отклоненных (Tagetes patula L.).The invention relates to the chemical and pharmaceutical industry and can be used in quality control centers for medicines and control and analytical laboratories when carrying out a quantitative determination of the amount of flavonoids in the flowers of marigold rejected (Tagetes patula L.).
В настоящее время, система контроля качества лекарственных препаратов требует постоянного усовершенствования подходов к стандартизации биологически активных соединений (БАС) с использованием современных методов анализа и актуальных данных об их физико-химических, спектральных и фармакологических свойствах. Полученные данные позволяют объективно и селективно определять содержание целевых соединений (1).Currently, the drug quality control system requires constant improvement of approaches to the standardization of biologically active compounds (BAS) using modern methods of analysis and up-to-date data on their physicochemical, spectral and pharmacological properties. The data obtained make it possible to objectively and selectively determine the content of target compounds (1).
Бархатцы отклоненные (Tagetes patula L.) - представитель рода Бархатцы (Tagetes L.) семейства Астровые (Asteraceae), или Сложноцветные (Compositae). Цветки бархатцев отклоненных широко используются в различных сферах народного хозяйства (пищевой, парфюмерно-косметической, парафармацевтической промышленности), а также имеется существенный опыт применения в народной медицине. Известно, что растения рода Бархатцы являются перспективным источником таких биологически активных соединений, как: флавоноиды, простые фенолы, эфирное масло, витамины (каротиноиды) (2, 3). В этой связи, на наш взгляд, этот вид представляет интерес, как потенциальное лекарственное растение.Marigolds rejected (Tagetes patula L.) is a representative of the genus Tagetes (Tagetes L.) of the Asteraceae family, or Compositae. Flowers of marigolds rejected are widely used in various sectors of the national economy (food, perfumery and cosmetics, parapharmaceutical industry), and there is also significant experience in traditional medicine. It is known that plants of the genus Marigold are a promising source of such biologically active compounds as: flavonoids, simple phenols, essential oil, vitamins (carotenoids) (2, 3). In this regard, in our opinion, this species is of interest as a potential medicinal plant.
Обзор литературы показал возможность стандартизации цветков бархатцев отклоненных при проведении количественного определения суммы флавоноидов методом дифференциальной спектрофоометрии в пересчете на патулетин. Извлечение получали методом трехкратной экстракции 40% этиловым спиртом с последующим упариванием, и последовательной обработкой гексаном, ацетоном, хлороформом, диэтиловым эфиром и другими элюентами. При этом определено, что содержание флавоноидов в цветках бархатцев отклоненных достигает 2,98%±0,06% в пересчете на патулетин. Принимая во внимание достаточную трудоемкость в ходе проведения пробоподготовки (трехкратная экстракция сырья), большой объем вспомогательных операций, в том числе по экстракции, упариванию, фильтрованию, актуальным является продолжение исследований в направлении создания оптимальной методики определения содержания суммы флавоноидов в цветках бархатцев отклоненных (3).A review of the literature showed the possibility of standardizing marigold flowers rejected during the quantitative determination of the amount of flavonoids by differential spectrophotometry in terms of patuletin. Extraction was obtained by threefold extraction with 40% ethanol, followed by evaporation, and successive treatment with hexane, acetone, chloroform, diethyl ether, and other eluents. At the same time, it was determined that the content of flavonoids in the flowers of marigolds rejected reaches 2.98% ± 0.06% in terms of patuletin. Taking into account the sufficient labor intensity in the course of sample preparation (three-fold extraction of raw materials), a large amount of auxiliary operations, including extraction, evaporation, filtration, it is relevant to continue research in the direction of creating an optimal method for determining the content of the total flavonoids in the flowers of marigolds rejected (3) .
Кроме того, известен способ количественного определения суммы флавоноидов в пересчете на кверцетин в траве хвоща полевого с использованием дифференциальной спектрофотометрии (1). Данная методика включает такие стадии, как экстракцию сырья 70% этиловым спиртом, реакцию комплексообразования с хлоридом алюминия, измерение оптической плотности электронного спектра испытуемого раствора при аналитической длине волны 430 нм и расчет содержания суммы флавоноидов на основе значений оптической плотности комплекса государственного стандартного образца кверцетина с алюминием хлоридом. Данный метод взят нами в качестве прототипа для разработки метода количественного определения суммы флавоноидов в цветках бархатцев отклоненных.In addition, there is a method for quantitative determination of the amount of flavonoids in terms of quercetin in horsetail herb using differential spectrophotometry (1). This technique includes such stages as extraction of raw materials with 70% ethyl alcohol, complex formation reaction with aluminum chloride, measurement of the optical density of the electronic spectrum of the test solution at an analytical wavelength of 430 nm and calculation of the content of the total flavonoids based on the optical density values of the complex of the state standard sample of quercetin with aluminum chloride. We took this method as a prototype for the development of a method for the quantitative determination of the amount of flavonoids in the flowers of marigolds rejected.
Таким образом, целью изобретения является разработка способа количественного определения суммы флавоноидов в цветках бархатцев отклоненных, обладающего высокой специфичностью и точностью.Thus, the aim of the invention is to develop a method for the quantitative determination of the amount of flavonoids in the flowers of marigold deviated, with high specificity and accuracy.
Техническим результатом является создание способа количественного определения суммы флавоноидов в цветках бархатцев отклоненных в пересчете на кверцетин.EFFECT: creation of a method for quantitative determination of the amount of flavonoids in marigold flowers rejected in terms of quercetin.
Технический результат достигается тем, что экстракцию сырья осуществляют однократно, в качестве экстрагента используют этиловый спирт в концентрации 80% в соотношении «сырье-экстрагент» - 1:100, время экстракции - извлечение на кипящей водяной бане в течение 30 мин, степень измельчения сырья - 2 мм, реакция комплексообразования с хлоридом алюминия в течение 30 мин. Количественное определение суммы флавоноидов в цветках бархатцев отклоненных проводят при длине волны 434 нм в пересчете на кверцетин; содержание суммы флавоноидов (X в процентах) в пересчете на кверцетин и абсолютно сухое сырье вычисляют по формуле:The technical result is achieved by the fact that the extraction of raw materials is carried out once, as the extractant, ethyl alcohol is used at a concentration of 80% in the ratio "raw material-extractant" - 1:100, the extraction time is extraction in a boiling water bath for 30 minutes, the degree of grinding of raw materials - 2 mm, complexation reaction with aluminum chloride for 30 min. Quantitative determination of the amount of flavonoids in the flowers of marigolds rejected is carried out at a wavelength of 434 nm in terms of quercetin; the content of the sum of flavonoids (X in percent) in terms of quercetin and absolutely dry raw materials is calculated by the formula:
где D - оптическая плотность испытуемого раствора;where D is the optical density of the test solution;
Do - оптическая плотность раствора Государственного стандартного образца кверцетина;D o - optical density of the solution of the State standard sample of quercetin;
m - масса сырья, г;m is the mass of raw materials, g;
mo - масса Государственного стандартного образца кверцетина, г;m o - mass of the State standard sample of quercetin, g;
W - потеря в массе при высушивании, %.W - weight loss on drying, %.
В случае отсутствия стандартного образца кверцетина для расчета целесообразно использовать теоретическое значение удельного показателя поглощения при 434 нм - 789:In the absence of a standard sample of quercetin, it is advisable to use the theoretical value of the specific absorption index at 434 nm - 789 for calculation:
где D - оптическая плотность испытуемого раствора;where D is the optical density of the test solution;
m - масса сырья, г;m is the mass of raw materials, g;
mo - масса ГСО кверцетина, г;m o - mass of GSO quercetin, g;
789 - теоретическое значение удельного показателя поглощения при 434 нм;789 - theoretical value of the specific absorption index at 434 nm;
W - потеря в массе при высушивании в процентах.W is the weight loss on drying in percent.
При изучении спектральных характеристик было выявлено, что именно кверцетин определяет характер кривой поглощения водно-спиртового извлечения из цветков бархатцев отклоненных. Определено, что в УФ-спектре водно-спиртового извлечения бархатцев отклоненных наблюдается батохромный сдвиг длинноволновой полосы флавоноидов - Фигура 1, как и в случае кверцетина - Фигура 2, где кривая 1 на фигуре 1 и фигуре 2 демонстрирует исходный раствор водно-спиртового извлечения из цветков бархатцев отклоненных или исходный раствор кверцетина соответственно, а кривая 2 - раствор водно-спиртового извлечения из цветков бархатцев отклоненных в присутствии алюминия хлорида или раствор кверцетина в присутствии алюминия хлорида соответственно.When studying the spectral characteristics, it was revealed that it is quercetin that determines the nature of the absorption curve of the water-alcohol extract from the flowers of marigolds deviated. It was determined that in the UV spectrum of the aqueous-alcoholic extract of marigolds deviated, a bathochromic shift of the long-wavelength band of flavonoids is observed - Figure 1, as in the case of quercetin - Figure 2, where
Изучение УФ-спектров фигуры 2 (где кривая 1 - раствор кверцетина, а кривая 2 -раствор кверцетина с добавлением алюминия хлорида) показало, что раствор ГСО кверцетина в присутствии алюминия хлорида имеет максимум поглощения при длине волны 434 нм. В УФ-спектре водно-спиртового извлечения из цветков бархатцев отклоненных в дифференциальном варианте на фигуре 3 обнаруживается при длине волны 434 нм максимум поглощения, который соответствует максимуму поглощения спиртового раствора кверцетина.The study of the UV spectra of figure 2 (where
Данный факт позволяет проводить спектрофотометрическое определение суммы флавоноидов в цветках бархатцев отклоненных при аналитической длине волны 434 нм.This fact allows the spectrophotometric determination of the amount of flavonoids in marigold flowers rejected at an analytical wavelength of 434 nm.
Также нами было изучено влияние экстрагента на процесс экстракции. В таблице 1 представлена зависимость выхода флавоноидов цветков бархатцев отклоненных от концентрации экстрагента. В результате эксперимента в качестве оптимального экстрагента нами был выбран 80% этиловый спирт, так как выход действующих веществ из сырья при его использовании максимален.We also studied the effect of the extractant on the extraction process. Table 1 shows the dependence of the yield of flavonoids of marigold flowers deviated from the concentration of the extractant. As a result of the experiment, we chose 80% ethyl alcohol as the optimal extractant, since the yield of active substances from the raw material when it is used is maximum.
Далее нами был изучен вопрос относительно продолжительности экстракции на кипящей водяной бане, в таблице 2 представлена зависимость выхода флавоноидов цветков бархатцев отклоненных от времени экстракции на кипящей водяной бане, при этом было выбрано время экстракции 30 минут.Next, we studied the issue of the duration of extraction in a boiling water bath, Table 2 shows the dependence of the yield of flavonoids of marigold flowers deviated from the time of extraction in a boiling water bath, while the extraction time was 30 minutes.
В таблице 3 представлена зависимость выхода флавоноидов цветков бархатцев отклоненных от соотношения «сырье-экстрагент». Из таблицы видно, что максимальный выход действующих веществ наблюдается при соотношении «сырье-экстрагент» 1:100, по этой причине данное соотношение было выбрано нами в качестве оптимального.Table 3 shows the dependence of the yield of flavonoids of marigold flowers deviated from the "raw material-extractant" ratio. The table shows that the maximum yield of active substances is observed at a ratio of "raw material-extractant" 1:100, for this reason, this ratio was chosen by us as optimal.
Учитывая, что увеличение числа операций на стадии пробоподготовки ведет к возрастанию ошибки, выбор сделан в пользу одностадийного процесса экстракции с подтверждением требуемой точности количественного определения.Considering that an increase in the number of operations at the stage of sample preparation leads to an increase in the error, the choice was made in favor of a single-stage extraction process with confirmation of the required accuracy of quantitative determination.
Таким образом, было определено, что оптимальными параметрами экстракции являются: однократное извлечение 80% этиловым спиртом на кипящей водяной бане в течение 30 минут в соотношении «сырье-экстрагент» - 1:100.Thus, it was determined that the optimal extraction parameters are: a single extraction with 80% ethanol in a boiling water bath for 30 minutes in the ratio of "raw material-extractant" - 1:100.
Принимая по внимание тот факт, что специфическим для цветков бархатцев отклоненных является кверцетин, а максимумы поглощения раствора кверцетина и водно-спиртового извлечения цветков бархатцев отклоненных находятся в области 434 нм, целесообразным является определение содержания суммы флавоноидов в пересчете на кверцетин при длине волны 434 нм, причем с использованием стандартного образца кверцетина, позволяющего повысить объективность методики анализа.Taking into account the fact that quercetin is specific for flowers of marigolds deviated, and the absorption maxima of a solution of quercetin and water-alcohol extract of flowers of marigolds deviated are in the region of 434 nm, it is advisable to determine the content of the sum of flavonoids in terms of quercetin at a wavelength of 434 nm, moreover, using a standard sample of quercetin, which makes it possible to increase the objectivity of the analysis technique.
Способ реализуется следующим образом.The method is implemented as follows.
Аналитическую пробу сырья измельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 2 мм. Около 1 г измельченного сырья (точная навеска) помещают в колбу со шлифом вместимостью 100 мл, прибавляют 100 мл 80% этилового спирта. Колбу закрывают пробкой и взвешивают на тарированных весах с точностью до ±0,01. Колбу присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане (умеренное кипение) в течение 30 мин. Затем ее охлаждают в течение 30 мин, закрывают той же пробкой, снова взвешивают и восполняют недостающий экстрагент до первоначальной массы. Извлечение фильтруют через бумажный фильтр (красная полоса).An analytical sample of raw materials is crushed to the size of particles passing through a sieve with holes with a diameter of 2 mm. About 1 g of crushed raw material (accurately weighed) is placed in a flask with a 100 ml section, 100 ml of 80% ethyl alcohol is added. The flask is stoppered and weighed on a tared balance to the nearest ±0.01. The flask is connected to a reflux condenser and heated in a boiling water bath (moderate reflux) for 30 minutes. Then it is cooled for 30 min, closed with the same stopper, weighed again and replenish the missing extractant to the original weight. The extract is filtered through a paper filter (red band).
Испытуемый раствор для анализа суммы флавоноидов готовят следующим образом: 1 мл полученного извлечения помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, прибавляют 2 мл 3% спиртового раствора алюминия хлорида и доводят объем раствора до метки спиртом этиловым 96% (испытуемый раствор).The test solution for the analysis of the amount of flavonoids is prepared as follows: 1 ml of the obtained extract is placed in a volumetric flask with a capacity of 50 ml, 2 ml of a 3% alcohol solution of aluminum chloride is added and the volume of the solution is adjusted to the mark with ethyl alcohol 96% (test solution).
Раствор сравнения готовят следующим образом: 1 мл полученного извлечения помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводят объем раствора до метки 96% этиловым спиртом (раствор сравнения).The reference solution is prepared as follows: 1 ml of the obtained extract is placed in a volumetric flask with a capacity of 50 ml, the volume of the solution is adjusted to the mark with 96% ethanol (reference solution).
Для расчета содержания суммы флавоноидов готовят раствор стандартного образца кверцетина, добавляют к нему 1 мл 3% спиртового раствора алюминия хлорида, измеряют оптическую плотность окрашенного комплекса при аналитической длине волны 434 нм и определенное значение оптической плотности используют в формуле расчета.To calculate the content of the sum of flavonoids, a solution of a standard sample of quercetin is prepared, 1 ml of a 3% alcohol solution of aluminum chloride is added to it, the optical density of the colored complex is measured at an analytical wavelength of 434 nm, and a certain value of optical density is used in the calculation formula.
Приготовление раствора стандартного образца кверцетинаPreparation of quercetin standard sample solution
Около 0,02 г (точная навеска) кверцетина помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяют в 20 мл 96% этилового спирта при нагревании на водяной бане. После охлаждения содержимого колбы до комнатной температуры доводят объем раствора 96% этиловым спиртом до метки (раствор А кверцетина). 1 мл раствора А кверцетина помещают в мерную колбу на 25 мл, прибавляют 2 мл 3% спиртового раствора алюминия хлорида и доводят объем раствора до метки спиртом этиловым 96% (испытуемый раствор Б кверцетина).About 0.02 g (accurately weighed) of quercetin is placed in a 50 ml volumetric flask, dissolved in 20 ml of 96% ethanol while heated in a water bath. After cooling the contents of the flask to room temperature, bring the volume of the solution with 96% ethanol to the mark (solution A of quercetin). 1 ml of solution A of quercetin is placed in a 25 ml volumetric flask, 2 ml of a 3% alcohol solution of aluminum chloride are added and the volume of the solution is adjusted to the mark with ethyl alcohol 96% (test solution B of quercetin).
Раствор сравнения готовят следующим образом: 1 мл полученного раствора помещают в мерную колбу на 25 мл, доводят объем раствора до метки спиртом этиловым 96%.The reference solution is prepared as follows: 1 ml of the resulting solution is placed in a 25 ml volumetric flask, the volume of the solution is adjusted to the mark with ethyl alcohol 96%.
Измерение оптической плотности проводят при длине волны 434 нм через 30 минут после приготовления всех растворов.Measurement of optical density is carried out at a wavelength of 434 nm 30 minutes after preparation of all solutions.
Содержание суммы флавоноидов (X в процентах) в пересчете на кверцетин и абсолютно сухое сырье вычисляют по формуле:The content of the sum of flavonoids (X in percent) in terms of quercetin and absolutely dry raw materials is calculated by the formula:
где D - оптическая плотность испытуемого раствора;where D is the optical density of the test solution;
Do - оптическая плотность раствора Государственного стандартного образца кверцетина;D o - optical density of the solution of the State standard sample of quercetin;
m - масса сырья, г;m is the mass of raw materials, g;
mo - масса Государственного стандартного образца кверцетина, г;m o - mass of the State standard sample of quercetin, g;
W - потеря в массе при высушивании, %.W - weight loss on drying, %.
В случае отсутствия стандартного образца кверцетина для расчета целесообразно использовать теоретическое значение удельного показателя поглощения при 434 нм - 789:In the absence of a standard sample of quercetin, it is advisable to use the theoretical value of the specific absorption index at 434 nm - 789 for calculation:
где D - оптическая плотность испытуемого раствора;where D is the optical density of the test solution;
m - масса сырья, г;m is the mass of raw materials, g;
mo - масса ГСО кверцетина, г;m o - mass of GSO quercetin, g;
789 - удельный показатель поглощения 
W - потеря в массе при высушивании в процентах.W is the weight loss on drying in percent.
Предлагаемый способ поясняется следующими примерами.The proposed method is illustrated by the following examples.
Пример 1.Example 1
Аналитическую пробу сырья бархатцев отклоненных измельчают до размера частиц 2 мм (заготовлено в г. Самаре, Ботанический сад, сентябрь 2018 г.). 1,0006 г измельченного сырья помещают в колбу со шлифом вместимостью 100 мл, прибавляют 100 мл 80% этилового спирта. Колбу закрывают пробкой и взвешивают на тарирных весах с точностью до ±0,01. Колбу присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане (умеренное кипение) в течение 30 минут. Затем колбу охлаждают в течение 30 мин, закрывают той же пробкой, снова взвешивают и восполняют недостающий экстрагент до первоначальной массы. Извлечение фильтруют через бумажный фильтр (красная полоса).An analytical sample of rejected marigold raw materials is crushed to a particle size of 2 mm (harvested in Samara, Botanical Garden, September 2018). 1.0006 g of crushed raw materials are placed in a flask with a thin section with a capacity of 100 ml, 100 ml of 80% ethanol are added. Stopper the flask and weigh on a tare balance to the nearest ±0.01. The flask is attached to a reflux condenser and heated in a boiling water bath (moderate reflux) for 30 minutes. Then the flask is cooled for 30 min, closed with the same stopper, weighed again, and the missing extractant is replenished to the original weight. The extract is filtered through a paper filter (red band).
Испытуемый раствор для анализа суммы флавоноидов готовят следующим образом: 1 мл полученного извлечения помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, прибавляют 2 мл 3% спиртового раствора алюминия хлорида и доводят объем раствора до метки спиртом этиловым 96% (испытуемый раствор).The test solution for the analysis of the amount of flavonoids is prepared as follows: 1 ml of the obtained extract is placed in a volumetric flask with a capacity of 50 ml, 2 ml of a 3% alcohol solution of aluminum chloride is added and the volume of the solution is adjusted to the mark with ethyl alcohol 96% (test solution).
Раствор сравнения готовят следующим образом: 1 мл полученного извлечения помещают в мерную колбу на 50 мл, доводят объем раствора до метки спиртом этиловым 96% (раствор сравнения).The reference solution is prepared as follows: 1 ml of the obtained extract is placed in a 50 ml volumetric flask, the volume of the solution is adjusted to the mark with 96% ethyl alcohol (reference solution).
Для расчета содержания суммы флавоноидов готовят раствор стандартного образца кверцетина, добавляют к нему 3% спиртовой раствор хлорида алюминия, измеряют оптическую плотность окрашенного комплекса при длине волны 434 нм и определенное значение оптической плотности используют в формуле расчета.To calculate the content of the sum of flavonoids, a solution of a standard sample of quercetin is prepared, a 3% alcohol solution of aluminum chloride is added to it, the optical density of the colored complex is measured at a wavelength of 434 nm, and a certain value of optical density is used in the calculation formula.
Приготовление раствора стандартного образца кверцетинаPreparation of quercetin standard sample solution
0,0205 г кверцетина помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяют в 20 мл 96% этилового спирта при нагревании на водяной бане. После охлаждения содержимого колбы до комнатной температуры доводят объем раствора 96% этиловым спиртом до метки (раствор А кверцетина). После чего 1 мл раствора А кверцетина помещают в мерную колбу на 25 мл, добавляют 2 мл 3% спиртового раствора алюминия хлорида, затем доводят объем раствора до метки спиртом этиловым 96%. Раствор сравнения готовят следующим образом: 1 мл полученного раствора помещают в мерную колбу на 25 мл, доводят объем раствора до метки спиртом этиловым 96%.0.0205 g of quercetin is placed in a volumetric flask with a capacity of 50 ml, dissolved in 20 ml of 96% ethanol while heated in a water bath. After cooling the contents of the flask to room temperature, bring the volume of the solution with 96% ethanol to the mark (solution A of quercetin). After that, 1 ml of quercetin solution A is placed in a 25 ml volumetric flask, 2 ml of a 3% alcohol solution of aluminum chloride are added, then the volume of the solution is brought to the mark with 96% ethyl alcohol. The reference solution is prepared as follows: 1 ml of the resulting solution is placed in a 25 ml volumetric flask, the volume of the solution is adjusted to the mark with ethyl alcohol 96%.
Измерение оптической плотности проводят при длине волны 434 нм через 30 минут после приготовления всех растворов.Measurement of optical density is carried out at a wavelength of 434 nm 30 minutes after preparation of all solutions.
Содержание суммы флавоноидов (X в процентах) в пересчете на кверцетин и абсолютно сухое сырье вычисляют по формуле:The content of the sum of flavonoids (X in percent) in terms of quercetin and absolutely dry raw materials is calculated by the formula:
где 0,5413 - оптическая плотность испытуемого раствора;where 0.5413 is the optical density of the test solution;
1,2947 - оптическая плотность раствора стандартного образца кверцетина;1.2947 - optical density of a solution of a standard sample of quercetin;
1,0006 - масса сырья, г;1.0006 - mass of raw materials, g;
0,0205 - масса стандартного образца кверцетина, г.0.0205 - mass of a standard sample of quercetin, g.
10 - потеря в массе при высушивании, %.10 - weight loss on drying, %.
Содержание суммы флавоноидов в пересчете на кверцетин = 3,81%.The content of the sum of flavonoids in terms of quercetin = 3.81%.
Пример 2.Example 2
При необходимости определения суммы флавоноидов в цветках бархатцев отклоненных в отсутствии стандартного образца кверцетина, необходимо провести все действия из примера 1 до приготовления раствора стандартного образца кверцетина.If it is necessary to determine the amount of flavonoids in the flowers of marigolds rejected in the absence of a standard sample of quercetin, it is necessary to carry out all the steps from example 1 before preparing a solution of a standard sample of quercetin.
После измерения оптической плотности извлечения из цветков бархатцев отклоненных при длине волны 434 нм, содержание суммы флавоноидов (X в процентах) в пересчете на кверцетин и абсолютно сухое сырье вычисляют по формуле, используя теоретическое значение удельного показателя поглощения при 434 нм - 789.After measuring the optical density of the extraction from marigold flowers rejected at a wavelength of 434 nm, the content of the total flavonoids (X in percent) in terms of quercetin and absolutely dry raw material is calculated by the formula using the theoretical value of the specific absorption index at 434 nm - 789.
где 0,5060 - оптическая плотность испытуемого раствора;where 0.5060 is the optical density of the test solution;
0,9973 - масса сырья, г;0.9973 - mass of raw materials, g;
789 - удельный показатель поглощения 
10 - потеря в массе при высушивании, %.10 - weight loss on drying, %.
Содержание суммы флавоноидов в пересчете на кверцетин = 3,57%, что сравнимо со значением, полученном в примере 1.The content of the sum of flavonoids in terms of quercetin = 3.57%, which is comparable to the value obtained in example 1.
Все результаты были статистически обработаны. Ошибка единичного количественного определения составила ±3,49%.All results were statistically processed. The error of a single quantification was ±3.49%.
Таким образом, предлагаемый способ количественного определения суммы флавоноидов в пересчете на кверцетин в цветках бархатцев отклоненных с использованием дифференциальной спектрофотометрии разработан впервые для данного вида сырья и обладает следующими преимуществами:Thus, the proposed method for the quantitative determination of the amount of flavonoids in terms of quercetin in the flowers of marigolds rejected using differential spectrophotometry was developed for the first time for this type of raw material and has the following advantages:
1. Разработанный метод является более специфичным и селективным, а также позволяет проводить экстракцию сырья однократно, поскольку в качестве экстрагента используется 80% этиловый спирт, позволяющий исчерпывающе извлекать целевые вещества (флавоноиды).1. The developed method is more specific and selective, and also allows for the extraction of raw materials once, since 80% ethyl alcohol is used as an extractant, which allows exhaustive extraction of target substances (flavonoids).
2. Пересчет суммы флавоноидов идет на специфическое для цветков бархатцев отклоненных вещество - кверцетин.2. The recalculation of the amount of flavonoids goes to a substance specific to the flowers of marigolds rejected - quercetin.
3. Ошибка единичного определения предлагаемого способа составляет ±3,49%.3. The error of a single definition of the proposed method is ± 3.49%.
Этот способ можно применять в центрах контроля качества лекарственных средств, на фармацевтических предприятиях и контрольно-аналитических лабораториях при проведении количественного анализа цветков бархатцев отклоненных {Tagetes patula L.).This method can be used in drug quality control centers, pharmaceutical enterprises and control and analytical laboratories when conducting a quantitative analysis of flowers of marigolds rejected {Tagetes patula L.).
ИСТОЧНИКИ ИНФОРМАЦИИSOURCES OF INFORMATION
1. Государственная фармакопея Российской Федерации / МЗ РФ. XIV изд. Т. I-IV. М., 2018. [Электронный ресурс] URL: http:// http://femb.ru/femb/pharmacopea.php (дата обращения: 05.02.2020).1. State Pharmacopoeia of the Russian Federation / Ministry of Health of the Russian Federation. XIV ed. T. I-IV. M., 2018. [Electronic resource] URL: http:// http://femb.ru/femb/pharmacopea.php (date of access: 05.02.2020).
2. Ломкина Е.М., Червонная Н.М., Оганесян Э.Т. Влияние экстракта бархатцев на заживление ран при сахарном диабете // Фармация. 2016. Т. 65, №3. С. 37-39.2. Lomkina E.M., Chervonnaya N.M., Oganesyan E.T. Influence of marigold extract on wound healing in diabetes mellitus // Pharmacy. 2016. V. 65, No. 3. pp. 37-39.
3. Червонная Н.М., Андреева О.А., Аджиахметова С.Л., Оганесян Э.Т. О содержании фенольных соединений в соцветиях бархатцев распростертых {Tagetes patula L.) // Химия растительного сырья. 2018. №3. С. 91-98.3. Chervonnaya N.M., Andreeva O.A., Adzhiakhmetova S.L., Oganesyan E.T. On the content of phenolic compounds in inflorescences of prostrate marigolds (Tagetes patula L.) // Chemistry of vegetable raw materials. 2018. No. 3. pp. 91-98.
Claims (13)
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2772821C1 true RU2772821C1 (en) | 2022-05-26 |
Family
ID=
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN116172201A (en) * | 2023-03-17 | 2023-05-30 | 浙江大学 | Tagetes extract and preparation method and application thereof |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2076727C1 (en) * | 1993-06-02 | 1997-04-10 | Бурятский институт биологии СО РАН | Method of preparing extractive substance sum showing adaptogenic activity |
| CN109212094A (en) * | 2018-10-30 | 2019-01-15 | 晨光生物科技集团股份有限公司 | The detection method of quercetagetin in marigold residue |
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2076727C1 (en) * | 1993-06-02 | 1997-04-10 | Бурятский институт биологии СО РАН | Method of preparing extractive substance sum showing adaptogenic activity |
| CN109212094A (en) * | 2018-10-30 | 2019-01-15 | 晨光生物科技集团股份有限公司 | The detection method of quercetagetin in marigold residue |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| ЛОБАНОВ А.А., БУДАЕВА В.В., САКОВИЧ Г.В. "Исследование биологически активных флавоноидов в экстрактах из растительного сырья", ж-л "Химия растительного сырья", 2004, N1, стр. 47-52. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN116172201A (en) * | 2023-03-17 | 2023-05-30 | 浙江大学 | Tagetes extract and preparation method and application thereof |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2696770C1 (en) | Method for quantitative determination of sum of flavonoids in wild bergamot herb | |
| RU2701726C1 (en) | Method for quantitative determination of the sum of flavonoids in poplar leaves in black | |
| RU2669162C1 (en) | Method for quantifying the amount of flavonoids in siberian hawthorn leaves | |
| CN109765322B (en) | Method for constructing characteristic spectrum of schizonepeta and quality detection method | |
| RU2772821C1 (en) | Method for quantitative determination of sum of flavonoids in spreading marigold flowers | |
| RU2747483C1 (en) | Method for quantitative determination of amount of phenylpropanoids in lilac flowers | |
| CN107029038B (en) | Response surface method optimized extraction process of longan leaf total flavonoids | |
| Kurkina et al. | Development of quantitative determination methods for total flavonoids in Tagetes patula L. herbs | |
| CN109632781A (en) | The measuring method of anticoccidial feedstuff additive product Content of Chlorogenic Acid and coffee acid content | |
| RU2806047C1 (en) | Licorice herb flavonoids assay method | |
| RU2747482C1 (en) | Method for quantifying amount of flavonoids in walnut leaves | |
| Pitz et al. | Assessment of in vitro biological activities of anthocyanins-rich plant species based on Plinia cauliflora study model | |
| RU2806035C1 (en) | Yarrow herb flavonoids assay method | |
| RU2752316C1 (en) | Method for quantifying amount of flavonoids in leaves of ordinary lilac | |
| RU2807831C1 (en) | Method of quantitative determination of total flavonoids in leaves of the three-leaf watch | |
| RU2747417C1 (en) | Method for quantitative determination of sum of flavonoids in black walnut bark | |
| RU2786440C1 (en) | Method for quantitative determination of the amount of flavonoids in nigerus grass | |
| RU2763264C1 (en) | Method for quantitative determination of the amount of phenylpropanoids in moringa oil leaves | |
| Taufiq et al. | Antioxidant Activity of Ethanol and n-hexane Extracts of Javanese Bark (Lannea coromandelica) Using the DPPH Method | |
| RU2814635C1 (en) | Method for quantitative determination of total flavonoids in white poplar leaves | |
| RU2614200C1 (en) | Method for determination of authenticity and quality of perforate st john's-wort (hypericum perforatum l.) | |
| RU2695760C1 (en) | Method for quantitative determination of sum of flavonoids in quebec hawthorn berries | |
| RU2266544C2 (en) | Unified assay of flavonoids in eyebright grass and extractive preparations | |
| RU2811264C1 (en) | Method for quantitative determination of amount of flavonoids in meadowsweet herb | |
| RU2812737C1 (en) | Method of quantitative determination of hydroxycinman acids in shoots of hawtown |