RU2747417C1

RU2747417C1 - Method for quantitative determination of sum of flavonoids in black walnut bark

Info

Publication number: RU2747417C1
Application number: RU2020129429A
Authority: RU
Inventors: Владимир Александрович Куркин; Наталья Игоревна Зименкина
Priority date: 2020-09-04
Filing date: 2020-09-04
Publication date: 2021-05-04

Abstract

FIELD: pharmaceutical industry.SUBSTANCE: invention relates to the pharmaceutical industry and can be used in drug quality control centers and analytical laboratories for quantitative determination of the amount of flavonoids in the bark of black walnut (Juglans regia L.). According to the method, it’s necessary to preliminarily obtain aqueous-alcoholic extract from the bark of black walnut by extracting 1 g of an exact weighed portion of the bark of black walnut crushed to a particle size of 2 mm with ethyl alcohol in terms of a substance of flavonoid nature by the method of differential spectrophotometry. In this case, the extraction of raw materials is carried out once, ethyl alcohol is used as an extractant at a concentration of 80%. The ratio of raw materials to the extractant is 1:30. The quantitative determination of the sum of flavonoids in the bark of black walnut is carried out at a wavelength of 416 nm in terms of rutin and the content of the sum of flavonoids (X in percent) is calculated based on the specified ratios in terms of rutin and absolutely dry raw materials or in the absence of a standard sample of rutin using the calculated value of the specific absorbance at 416 nm, equal to 238.EFFECT: increased specificity and accuracy of analysis.1 cl, 3 dwg, 3 tbl, 2 ex

Description

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и может быть использовано в центрах контроля качества лекарственных средств и контрольно-аналитических лабораториях при проведении количественного определения суммы флавоноидов в коре ореха черного (Juglans nigra L.).The invention relates to the pharmaceutical industry and can be used in drug quality control centers and analytical laboratories for quantitative determination of the amount of flavonoids in the bark of black walnut (Juglans nigra L.).

В настоящее время, система контроля качества лекарственных препаратов требует постоянного усовершенствования подходов к стандартизации биологически активных соединений (БАС) с использованием современных методов анализа и актуальных данных об их физико-химических, спектральных и фармакологических свойствах. Полученные данные позволяют объективно и селективно определять содержание целевых соединений (1).Currently, the quality control system for drugs requires constant improvement of approaches to the standardization of biologically active compounds (BAS) using modern methods of analysis and up-to-date data on their physicochemical, spectral and pharmacological properties. The data obtained make it possible to objectively and selectively determine the content of target compounds (1).

Орех черный (Juglans nigra L.) - вид деревьев семейства Орех (Juglandaceae). Данный представитель рода Орех (Juglans L.) недостаточно изучен по сравнению с другими видами, но является перспективным видом официнального лекарственного растительного сырья, препараты которого оказывают противомикробное, общеукрепляющее действие (2).Black walnut (Juglans nigra L.) is a species of trees in the Walnut family (Juglandaceae). This representative of the genus Walnut (Juglans L.) has not been sufficiently studied in comparison with other species, but it is a promising type of officinal medicinal plant material, the preparations of which have an antimicrobial, restorative effect (2).

Обзор литературы показал возможность стандартизации листьев ореха черного при проведении количественного определения суммы нафтохинонов методом фотоколориметрии в пересчете на юглон. Извлечение получали методом двухкратной экстракции 20% этиловым спиртом с последующим упариванием, и трехкратной экстракцией диэтиловым эфиром. При этом определено, что содержание нафтохинонов в листьях ореха черного достигает 0,24%±0,01% в пересчете на юглон. Принимая во внимание достаточную трудоемкость в ходе проведения пробоподготовки (пятикратная экстракция сырья), сложность проведения анализа для нафтохинонов в качестве целевой группы БАС (большой объем вспомогательных операций, в том числе по экстракции, упариванию, фильтрованию), а также отсутствие литературных данных относительно стандартизации коры ореха черного (Juglans nigra L.) по содержанию флавоноидов, актуальным является продолжение исследований в этом направлении (3).A review of the literature showed the possibility of standardizing the leaves of black walnut when carrying out a quantitative determination of the amount of naphthoquinones by photocolorimetry in terms of juglone. The extract was obtained by the method of double extraction with 20% ethyl alcohol, followed by evaporation, and three times extraction with diethyl ether. It was determined that the content of naphthoquinones in the leaves of black walnut reaches 0.24% ± 0.01% in terms of juglone. Taking into account the sufficient labor intensity in the course of sample preparation (fivefold extraction of raw materials), the complexity of the analysis for naphthoquinones as the target group of BAS (a large volume of auxiliary operations, including extraction, evaporation, filtration), as well as the lack of literature data on the standardization of the bark black walnut (Juglans nigra L.) in terms of the content of flavonoids, it is urgent to continue research in this direction (3).

Кроме того, известен способ количественного определения суммы флавоноидов в пересчете на рутин в траве душицы обыкновенной с использованием дифференциальной спектрофотометрии (4). Данная методика включает такие стадии, как экстракцию сырья 60% этиловым спиртом, реакцию комплексообразования с хлоридом алюминия, измерение оптической плотности электронного спектра испытуемого раствора при аналитической длине волны 400 нм и расчет содержания суммы флавоноидов на основе значений оптической плотности комплекса государственного стандартного образца лютеолина с алюминием хлоридом. Данный метод взят нами в качестве прототипа. Для метода определения, описанного ниже, в качестве стандарта был выбран государственный стандартный образец рутина.In addition, there is a known method for quantitative determination of the amount of flavonoids in terms of rutin in oregano herb using differential spectrophotometry (4). This technique includes such stages as the extraction of raw materials with 60% ethyl alcohol, the reaction of complexation with aluminum chloride, measurement of the optical density of the electronic spectrum of the test solution at an analytical wavelength of 400 nm and the calculation of the content of the sum of flavonoids based on the values of the optical density of the complex of the state standard sample of luteolin with aluminum chloride. We have taken this method as a prototype. For the assay method described below, the government standard sample rutin was selected as the standard.

Таким образом, целью изобретения является разработка способа количественного определения суммы флавоноидов в коре ореха черного, обладающего более высокой специфичностью и точностью.Thus, the object of the invention is to provide a method for the quantitative determination of the amount of flavonoids in the bark of black walnut, having a higher specificity and accuracy.

Техническим результатом является создание способа количественного определения суммы флавоноидов в коре ореха черного в пересчете на рутин.The technical result is to create a method for quantitative determination of the amount of flavonoids in the bark of black walnut in terms of rutin.

Технический результат достигается тем, что экстракцию сырья осуществляют однократно, в качестве экстрагента используют этиловый спирт в концентрации 80% в соотношении «сырье - экстрагент» - 1:30, время экстракции - извлечение на кипящей водяной бане в течение 60 мин, степень измельчения сырья - 2 мм. Количественное определение суммы флавоноидов в коре ореха черного проводят при длине волны 416 нм в пересчете на рутин; содержание суммы флавоноидов (X в процентах) в пересчете на рутин и абсолютно сухое сырье вычисляют по формуле:The technical result is achieved by the fact that the extraction of raw materials is carried out once, ethyl alcohol is used as an extractant in a concentration of 80% in the ratio "raw material - extractant" - 1:30, the extraction time is extraction in a boiling water bath for 60 minutes, the degree of grinding of the raw material is 2 mm. Quantitative determination of the amount of flavonoids in the bark of black walnut is carried out at a wavelength of 416 nm in terms of rutin; the content of the sum of flavonoids (X in percent) in terms of rutin and absolutely dry raw materials is calculated by the formula:

где D - оптическая плотность испытуемого раствора;where D is the optical density of the test solution;

D_о - оптическая плотность раствора Государственного стандартного образца рутина;D _about - the optical density of the solution of the State standard sample rutin;

m - масса сырья, г;m is the mass of raw materials, g;

m_о - масса Государственного стандартного образца рутина, г;m _about - the mass of the State standard sample rutin, g;

W - потеря в массе при высушивании, %.W - loss in mass on drying,%.

В случае отсутствия стандартного образца рутина для расчета целесообразно использовать рассчитанное значение удельного показателя поглощения при 416 нм - 238:In the absence of a standard sample of rutin for the calculation, it is advisable to use the calculated value of the specific absorption index at 416 nm - 238:

m - масса сырья, г;m is the mass of raw materials, g;

m_о - масса ГСО рутина, г;m _about - mass of GSO rutin, g;

238 - удельный показатель поглощения

ГСО рутина при 416 нм;238 - specific absorption rate

GSO routine at 416 nm;

W - потеря в массе при высушивании в процентах.W is the percentage loss on drying.

При изучении спектральных характеристик было выявлено, что именно рутин определяет характер кривой поглощения водно-спиртового извлечения из коры ореха черного. Определено, что в УФ-спектре водно-спиртового извлечения ореха черного наблюдается батохромный сдвиг длинноволновой полосы флавоноидов - Фигура 1, как и в случае рутина - Фигура 2, где кривая 1 на фигуре 1 и фигуре 2 демонстрирует исходный раствор водно-спиртового извлечения из коры ореха черного или исходный раствор рутина соответственно, а кривая 2 - раствор водно-спиртового извлечения из коры ореха черного в присутствии алюминия хлорида или раствор рутина в присутствии алюминия хлорида соответственно.When studying the spectral characteristics, it was revealed that it is rutin that determines the character of the absorption curve of aqueous-alcoholic extract from the bark of black walnut. It was determined that in the UV spectrum of the aqueous-alcoholic extract of black walnut, a bathochromic shift of the long-wavelength band of flavonoids is observed - Figure 1, as in the case of rutin - Figure 2, where curve 1 in Figure 1 and Figure 2 demonstrates the initial solution of the aqueous alcoholic extract from the bark black walnut or the initial solution of rutin, respectively, and curve 2 is a solution of aqueous-alcoholic extraction from the bark of black walnut in the presence of aluminum chloride or a solution of rutin in the presence of aluminum chloride, respectively.

Изучение УФ-спектров фигуры 2 (где кривая 1 - раствор рутина, а кривая 2 -раствор рутина с добавлением алюминия хлорида) показало, что раствор ГСО рутина в присутствии алюминия хлорида имеет максимум поглощения при длине волны 412 нм. В УФ-спектре водно-спиртового извлечения из коры ореха черного (Juglans nigra L.) в дифференциальном варианте на фигуре 3 обнаруживается при длине волны 416 нм максимум поглощения, который практически соответствует максимуму поглощения спиртового раствора рутина.The study of the UV spectra of figure 2 (where curve 1 is a solution of rutin, and curve 2 is a solution of rutin with the addition of aluminum chloride) showed that the GSO solution of rutin in the presence of aluminum chloride has an absorption maximum at a wavelength of 412 nm. In the UV spectrum of aqueous-alcoholic extract from the bark of black walnut (Juglans nigra L.) in the differential version in figure 3, an absorption maximum is found at a wavelength of 416 nm, which practically corresponds to the absorption maximum of an alcoholic solution of rutin.

Данный факт позволяет проводить спектрофотометрическое определение суммы флавоноидов в коре ореха черного при аналитической длине волны 416 нм.This fact allows the spectrophotometric determination of the amount of flavonoids in the bark of black walnut at an analytical wavelength of 416 nm.

Также нами было изучено влияние экстрагента на процесс экстракции. В таблице 1 представлена зависимость выхода флавоноидов коры ореха черного от концентрации экстрагента. В результате эксперимента в качестве оптимального экстрагента нами был выбран 80% этиловый спирт, так как выход действующих веществ из сырья при его использовании максимален.We also studied the effect of the extractant on the extraction process. Table 1 shows the dependence of the yield of flavonoids in the bark of black walnut on the concentration of the extractant. As a result of the experiment, we chose 80% ethyl alcohol as the optimal extractant, since the yield of active substances from raw materials is maximum when it is used.

Далее нами был изучен вопрос относительно продолжительности экстракции на кипящей водяной бане, в таблице 2 представлена зависимость выхода флавоноидов коры ореха черного от времени экстракции на кипящей водяной бане, при этом было выбрано время экстракции 60 минут.Next, we studied the issue of the duration of extraction in a boiling water bath, Table 2 shows the dependence of the yield of flavonoids in the black walnut bark on the extraction time in a boiling water bath, while the extraction time was selected as 60 minutes.

В таблице 3 представлена зависимость выхода флавоноидов коры ореха черного от соотношения «сырье - экстрагент». Из таблицы видно, что максимальный выход действующих веществ наблюдается при соотношении «сырье - экстрагент» - 1:30, по этой причине данное соотношение было выбрано нами в качестве оптимального.Table 3 shows the dependence of the yield of flavonoids in the bark of black walnut on the ratio "raw material - extractant". It can be seen from the table that the maximum yield of active substances is observed when the ratio "raw material - extractant" is 1:30, for this reason this ratio was chosen by us as the optimal one.

Учитывая, что увеличение числа операций на стадии пробоподготовки ведет к возрастанию ошибки, выбор сделан в пользу одностадийного процесса экстракции с подтверждением требуемой точности количественного определения.Taking into account that an increase in the number of operations at the stage of sample preparation leads to an increase in the error, the choice was made in favor of a one-stage extraction process with confirmation of the required accuracy of quantitative determination.

Таким образом, было определено, что оптимальными параметрами экстракции являются: однократное извлечение 80% этиловым спиртом на кипящей водяной бане в течение 60 минут в соотношении «сырье - экстрагент» - 1:30.Thus, it was determined that the optimal extraction parameters are: a single extraction with 80% ethyl alcohol in a boiling water bath for 60 minutes in the ratio "raw material - extractant" - 1:30.

Принимая по внимание тот факт, что специфическим для коры ореха черного является рутин, а максимумы поглощения раствора рутина и водно-спиртового извлечения коры ореха черного находятся в области 416 нм, целесообразным является определение содержания суммы флавоноидов в пересчете на рутин при длине волны 416 нм.Taking into account the fact that rutin is specific for the bark of black walnut, and the absorption maxima of rutin solution and aqueous-alcoholic extract of black walnut bark are in the region of 416 nm, it is expedient to determine the content of the sum of flavonoids in terms of rutin at a wavelength of 416 nm.

Способ реализуется следующим образом.The method is implemented as follows.

Аналитическую пробу сырья измельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 2 мм. Около 1 г измельченного сырья (точная навеска) помещают в колбу со шлифом вместимостью 100 мл, прибавляют 30 мл 80% этилового спирта. Колбу закрывают пробкой и взвешивают на тарированных весах с точностью до ±0,01. Колбу присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане (умеренное кипение) в течение 60 мин. Затем ее охлаждают в течение 30 мин, закрывают той же пробкой, снова взвешивают и восполняют недостающий экстрагент до первоначальной массы. Извлечение фильтруют через бумажный фильтр (красная полоса).An analytical sample of raw materials is crushed to a particle size passing through a sieve with holes 2 mm in diameter. About 1 g of crushed raw materials (accurately weighed) is placed in a flask with a thin section with a capacity of 100 ml, add 30 ml of 80% ethyl alcohol. Close the flask with a stopper and weigh on a tared balance to the nearest ± 0.01. The flask is connected to a reflux condenser and heated in a boiling water bath (moderate boiling) for 60 minutes. Then it is cooled for 30 minutes, closed with the same stopper, weighed again and the missing extractant is replenished to the original weight. The extract is filtered through a filter paper (red stripe).

Испытуемый раствор для анализа суммы флавоноидов готовят следующим образом: 1 мл полученного извлечения помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, прибавляют 2 мл 3% спиртового раствора алюминия хлорида и доводят объем раствора до метки спиртом этиловым 96% (испытуемый раствор).The test solution for the analysis of the sum of flavonoids is prepared as follows: 1 ml of the obtained extract is placed in a volumetric flask with a capacity of 50 ml, 2 ml of a 3% alcohol solution of aluminum chloride are added and the volume of the solution is adjusted to the mark with 96% ethyl alcohol (test solution).

Раствор сравнения готовят следующим образом: 1 мл полученного извлечения помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводят объем раствора до метки 96% этиловым спиртом (раствор сравнения).The reference solution is prepared as follows: 1 ml of the obtained extract is placed in a volumetric flask with a capacity of 50 ml, the volume of the solution is brought to the mark with 96% ethyl alcohol (reference solution).

Для расчета содержания суммы флавоноидов готовят раствор стандартного образца рутина, добавляют к нему 3% спиртовой раствор алюминия хлорида, измеряют оптическую плотность окрашенного комплекса при аналитической длине волны 416 нм и определенное значение оптической плотности используют в формуле расчета.To calculate the content of the sum of flavonoids, a solution of a standard sample of rutin is prepared, a 3% alcohol solution of aluminum chloride is added to it, the optical density of the colored complex is measured at an analytical wavelength of 416 nm, and the determined value of the optical density is used in the calculation formula.

Приготовление раствора стандартного образца рутина.Preparation of a solution of a standard sample of rutin.

Около 0,02 г (точная навеска) рутина помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяют в 20 мл 70% этилового спирта при нагревании на водяной бане. После охлаждения содержимого колбы до комнатной температуры доводят объем раствора 70% этиловым спиртом до метки (раствор А рутина). 2 мл раствора А рутина помещают в мерную колбу на 25 мл, прибавляют 2 мл 3% спиртового раствора алюминия хлорида и доводят объем раствора до метки спиртом этиловым 96% (испытуемый раствор Б рутина).About 0.02 g (accurately weighed) of rutin is placed in a volumetric flask with a capacity of 50 ml, dissolved in 20 ml of 70% ethyl alcohol when heated in a water bath. After cooling the contents of the flask to room temperature, bring the volume of the solution to the mark with 70% ethyl alcohol (rutin solution A). Place 2 ml of rutin solution A in a 25 ml volumetric flask, add 2 ml of 3% alcoholic solution of aluminum chloride and bring the volume of the solution to the mark with 96% ethyl alcohol (test solution B of rutin).

Раствор сравнения готовят следующим образом: 2 мл полученного раствора помещают в мерную колбу на 25 мл, доводят объем раствора до метки спиртом этиловым 96%.The reference solution is prepared as follows: 2 ml of the resulting solution is placed in a 25 ml volumetric flask, the volume of the solution is adjusted to the mark with ethyl alcohol 96%.

Измерение оптической плотности проводят при длине волны 416 нм через 40 минут после приготовления всех растворов.Measurement of optical density is carried out at a wavelength of 416 nm 40 minutes after the preparation of all solutions.

Содержание суммы флавоноидов (X в процентах) в пересчете на рутин и абсолютно сухое сырье вычисляют по формуле:The content of the sum of flavonoids (X in percent) in terms of rutin and absolutely dry raw materials is calculated by the formula:

m - масса сырья, г;m is the mass of raw materials, g;

m_о - масса ГСО рутина, г;m _about - mass of GSO rutin, g;

238 - удельный показатель поглощения

ГСО рутина при 416 нм;238 - specific absorption rate

GSO routine at 416 nm;

Предлагаемый способ поясняется следующими примерами.The proposed method is illustrated by the following examples.

Пример 1.Example 1.

Аналитическую пробу сырья ореха черного измельчают до размера частиц 2 мм (заготовлено в г. Самаре, Ботанический сад, апрель 2018 г. ). 1,0018 г измельченного сырья помещают в колбу со шлифом вместимостью 100 мл, прибавляют 30 мл 80% этилового спирта. Колбу закрывают пробкой и взвешивают на тарирных весах с точностью до ±0,01. Колбу присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане (умеренное кипение) в течение 60 минут. Затем колбу охлаждают в течение 30 мин, закрывают той же пробкой, снова взвешивают и восполняют недостающий экстрагент до первоначальной массы. Извлечение фильтруют через бумажный фильтр (красная полоса).An analytical sample of black walnut raw materials is ground to a particle size of 2 mm (prepared in Samara, Botanical Garden, April 2018). 1.0018 g of crushed raw materials are placed in a flask with a thin section with a capacity of 100 ml, add 30 ml of 80% ethyl alcohol. Close the flask with a stopper and weigh on a tare balance with an accuracy of ± 0.01. The flask is connected to a reflux condenser and heated in a boiling water bath (moderate boil) for 60 minutes. Then the flask is cooled for 30 minutes, closed with the same stopper, weighed again, and the missing extractant is replenished to the original weight. The extract is filtered through a filter paper (red stripe).

Раствор сравнения готовят следующим образом: 1 мл полученного извлечения помещают в мерную колбу на 50 мл, доводят объем раствора до метки спиртом этиловым 96% (раствор сравнения).The reference solution is prepared as follows: 1 ml of the obtained extract is placed in a 50 ml volumetric flask, the volume of the solution is adjusted to the mark with ethyl alcohol 96% (reference solution).

Для расчета содержания суммы флавоноидов готовят раствор стандартного образца рутина, добавляют к нему 3% спиртовой раствор хлорида алюминия, измеряют оптическую плотность окрашенного комплекса при длине волны 416 нм и определенное значение оптической плотности используют в формуле расчета.To calculate the content of the sum of flavonoids, a solution of a standard sample of rutin is prepared, a 3% alcoholic solution of aluminum chloride is added to it, the optical density of the colored complex is measured at a wavelength of 416 nm, and the determined value of the optical density is used in the calculation formula.

Приготовление раствора стандартного образца рутинаPreparation of a solution of a standard sample of rutin

0,0220 г рутина помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяют в 20 мл 70% этилового спирта при нагревании на водяной бане. После охлаждения содержимого колбы до комнатной температуры доводят объем раствора 70% этиловым спиртом до метки (раствор А рутина). После чего 2 мл раствора А рутина помещают в мерную колбу на 25 мл, добавляют 2 мл 3% спиртового раствора алюминия хлорида, затем доводят объем раствора до метки спиртом этиловым 96%. Раствор сравнения готовят следующим образом: 2 мл полученного раствора помещают в мерную колбу на 25 мл, доводят объем раствора до метки спиртом этиловым 96%.0.0220 g of rutin is placed in a volumetric flask with a capacity of 50 ml, dissolved in 20 ml of 70% ethyl alcohol when heated in a water bath. After cooling the contents of the flask to room temperature, bring the volume of the solution to the mark with 70% ethyl alcohol (rutin solution A). Then 2 ml of rutin solution A is placed in a 25 ml volumetric flask, 2 ml of a 3% alcohol solution of aluminum chloride is added, then the volume of the solution is brought to the mark with ethyl alcohol 96%. The reference solution is prepared as follows: 2 ml of the resulting solution is placed in a 25 ml volumetric flask, the volume of the solution is adjusted to the mark with ethyl alcohol 96%.

где:Where:

0,734 - оптическая плотность испытуемого раствора;0.734 is the optical density of the test solution;

0,8379 - оптическая плотность раствора стандартного образца рутина;0.8379 is the optical density of a solution of a standard sample of rutin;

1,0018 - масса сырья, г;1.0018 - weight of raw materials, g;

0,0220 - масса стандартного образца рутина, г.0.0220 is the mass of a standard sample of rutin, g.

10 - потеря в массе при высушивании, %.10 - loss in mass on drying,%.

Содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин = 5,13%.The content of the sum of flavonoids in terms of rutin = 5.13%.

Пример 2.Example 2.

При необходимости определения суммы флавоноидов в коре ореха черного в отсутствии стандартного образца рутина, необходимо провести все действия из примера 1 до приготовления раствора стандартного образца рутина.If it is necessary to determine the amount of flavonoids in the bark of black walnut in the absence of a standard sample of rutin, it is necessary to carry out all the steps from example 1 before preparing a solution of a standard sample of rutin.

После измерения оптической плотности извлечения из коры ореха черного при длине волны 416 нм, содержание суммы флавоноидов (X в процентах) в пересчете на рутин и абсолютно сухое сырье вычисляют по формуле, используя рассчитанное значение удельного показателя поглощения при 416 нм - 238.After measuring the optical density of the extract from the bark of black walnut at a wavelength of 416 nm, the content of the sum of flavonoids (X in percent) in terms of rutin and absolutely dry raw materials is calculated using the formula using the calculated value of the specific absorbance at 416 nm - 238.

где:Where:

0,729 - оптическая плотность испытуемого раствора;0.729 is the optical density of the test solution;

1,0012 - масса сырья, г;1.0012 - weight of raw materials, g;

238 - удельный показатель поглощения (

- оптическая плотность раствора вещества с концентрацией 1 г/100 мл в кювете с толщиной слоя 1 см) Государственного стандартного образца рутина при 416 нм;238 - specific absorption rate (

- the optical density of a solution of a substance with a concentration of 1 g / 100 ml in a cuvette with a layer thickness of 1 cm) of the State standard sample rutin at 416 nm;

Содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин = 5,10%, что сравнимо со значением, полученном в примере 1.The content of the sum of flavonoids in terms of rutin = 5.10%, which is comparable to the value obtained in example 1.

Все результаты были статистически обработаны. Ошибка единичного количественного определения составила ±1,20%.All results were statistically processed. The error of a single quantification was ± 1.20%.

Таким образом, предлагаемый способ количественного определения суммы флавоноидов в пересчете на рутин в коре ореха черного с использованием дифференциальной спектрофотометрии разработан впервые для данного вида сырья и обладает следующими преимуществами:Thus, the proposed method for the quantitative determination of the amount of flavonoids in terms of rutin in the bark of black walnut using differential spectrophotometry was developed for the first time for this type of raw material and has the following advantages:

1. Разработанный метод является более специфичным и селективным, а также позволяет проводить экстракцию сырья однократно, поскольку в качестве экстрагента используется 80% этиловый спирт, позволяющий исчерпывающе извлекать целевые вещества (флавоноиды).1. The developed method is more specific and selective, and also allows the extraction of raw materials once, since 80% ethyl alcohol is used as the extractant, which allows the exhaustive extraction of the target substances (flavonoids).

2. Пересчет суммы флавоноидов идет на специфическое для коры ореха черного вещество - рутин.2. The sum of flavonoids is recalculated for a substance specific to the black walnut bark - rutin.

3. Ошибка единичного определения предлагаемого способа составляет ±1,20%. Это свидетельствует о высокой воспроизводимости методики.3. The error of a single definition of the proposed method is ± 1.20%. This indicates a high reproducibility of the technique.

Этот способ можно применять в центрах контроля качества лекарственных средств, на фармацевтических предприятиях и контрольно-аналитических лабораториях при проведении количественного анализа коры ореха черного (Juglans nigra L.).This method can be used in drug quality control centers, pharmaceutical companies and analytical laboratories for quantitative analysis of the bark of black walnut (Juglans nigra L.).

ИСТОЧНИКИ ИНФОРМАЦИИ:INFORMATION SOURCES:

1. Куркин В.А. Фармакогнозия. Учебник для студентов фармацевтических вузов (факультетов). - 3-е изд., перераб. и доп. - Самара: ООО «Офорт»; ФГБОУ ВО СамГМУ Минздрава России, 2016. - 1279 с.1. Kurkin V.A. Pharmacognosy. Textbook for students of pharmaceutical universities (faculties). - 3rd ed., Rev. and add. - Samara: OOO "Etching"; FSBEI HE SamSMU of the Ministry of Health of Russia, 2016 .-- 1279 p.

2. Куркин В.А. Основы фитотерапии: учебное пособие. - Самара: ООО «Офорт»; ГОУ ВПО «СамГМУ Росздрава», 2009. - 963 с.2. Kurkin V.A. Fundamentals of herbal medicine: a tutorial. - Samara: OOO "Etching"; GOU VPO "SamSMU Roszdrav", 2009. - 963 p.

3. Дайронас Ж.В. Определение нафтохинонов в сырье и фитопрепарате ореха черного - Juglans nigra L. Фармация. 2013. - №4. - С. 12-14.3. Dayronas Zh.V. Determination of naphthoquinones in raw materials and phytopreparations of black walnut - Juglans nigra L. Pharmacy. 2013. - No. 4. - S. 12-14.

4. Государственная Фармакопея Российской Федерации. XIV издание [Электронный ресурс] // МЗ РФ. Москва, 2018. [Т. 2]. С. 2327-2348. URL: http://resource.rucml.ru/feml/pharmacopia/14_2/HTML/513/index.html (Дата обращения 14.08.2020 г.).4. State Pharmacopoeia of the Russian Federation. XIV edition [Electronic resource] // Ministry of Health of the Russian Federation. Moscow, 2018. [T. 2]. S. 2327-2348. URL: http://resource.rucml.ru/feml/pharmacopia/14_2/HTML/513/index.html (Date of treatment 08/14/2020).

Claims

A method for the quantitative determination of the amount of flavonoids in the bark of black walnut by extraction of raw materials with organic solvents followed by sample preparation and determination of optical density by differential spectrophotometry, characterized in that the extraction of raw materials is carried out once, ethyl alcohol is used as an extractant in a concentration of 80% in the ratio of raw materials: extractant 1 : 30, extraction time - extraction on a boiling water bath for 60 min, the degree of grinding of raw materials - 2 mm, the reaction of complexation with aluminum chloride for 40 min, the quantitative determination of the sum of flavonoids in the bark of black walnut is carried out at a wavelength of 416 nm in terms of rutin, the content of the sum of flavonoids (X in percent) in terms of rutin and absolutely dry raw materials are calculated by the formula

where D is the optical density of the test solution;

D _about - the optical density of the solution of the State standard sample rutin;

m is the mass of raw materials, g;

m _about - the mass of the State standard sample rutin, g;

W is the loss in mass on drying,%;

in the absence of a standard sample of rutin, it is advisable to use the calculated value of the specific absorption index at 416 nm 238:

where D is the optical density of the test solution;

m is the mass of raw materials, g;

238 - specific absorption rate

State standard sample rutin at 416 nm;

W - loss in mass on drying,%.