RU2786440C1

RU2786440C1 - Method for quantitative determination of the amount of flavonoids in nigerus grass

Info

Publication number: RU2786440C1
Application number: RU2022105524A
Authority: RU
Inventors: Артур Рустемович Мубинов; Елена Владимировна Авдеева; Владимир Александрович Куркин
Filing date: 2022-03-01
Publication date: 2022-12-21

Abstract

FIELD: chemical and pharmaceutical industry.

SUBSTANCE: invention relates to the chemical and pharmaceutical industry and can be used in quality control centers for medicines and control and analytical laboratories in the quantitative determination of the amount of flavonoids in the (Nigella sativa L.) herb. Extraction is carried out with ethyl alcohol at a concentration of 70% of air-dry raw materials with an exact weight of 1 g, crushed to a particle size passing through a sieve with holes with a diameter of 2 mm, in the ratio "raw material-extractant" - 1:30 for 45 minutes. A water-alcohol extract is obtained from the herb Nigella sowing single extraction. Quantitative determination of the amount of flavonoids in the herb Nigella sativa is carried out at a wavelength of 412 nm in terms of rutin. The content of the sum of flavonoids in terms of rutin and absolutely dry raw materials is calculated by the formula

where X is the content of the sum of flavonoids in terms of rutin and absolutely dry raw materials,%; D is the optical density of the test solution; D_o is the optical density of a solution of a standard sample of rutin; m is the mass of raw materials, g; mo is the mass of the standard sample of rutin, g;

W - weight loss on drying, %; or according to the formula

where 231 is the specific absorbance (

) of a standard sample of rutin at 412 nm.

EFFECT: method allows to quantify the amount of flavonoids in the herb Nigella sativa in terms of rutin.

1 cl, 7 dwg, 2 ex

Description

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и может быть использовано в центрах контроля качества лекарственных средств и контрольно-аналитических лабораториях при проведении количественного определения суммы флавоноидов в траве чернушки посевной (Nigella sativa L.). The invention relates to the chemical and pharmaceutical industry and can be used in quality control centers for medicines and control and analytical laboratories in the quantitative determination of the amount of flavonoids in the herb Nigella sativa L..

В настоящее время, система контроля качества лекарственных препаратов требует постоянного усовершенствования подходов к стандартизации биологически активных соединений (БАС) с использованием современных методов анализа и актуальных данных об их физико-химических, спектральных и фармакологических свойствах. Полученные данные позволяют объективно и селективно определять содержание целевых соединений (1).Currently, the drug quality control system requires constant improvement of approaches to the standardization of biologically active compounds (BAS) using modern methods of analysis and up-to-date data on their physicochemical, spectral and pharmacological properties. The data obtained make it possible to objectively and selectively determine the content of target compounds (1).

Чернушка посевная (Nigella sativa L.) – травянистое растение семейства Чернушка (Nigella). Данный представитель рода Чернушка (Nigella L.) недостаточно изучен по сравнению с другими видами – подробно изучались только семена данного вида, исследований по фармакогностическому анализу травы отечественными исследователями ранее не проводилось. Чернушка посевная является перспективным видом официнального лекарственного растительного сырья, препараты которого оказывают ферментативное, гепатопротекторное и антиоксидантное действие (2).Nigella ( Nigella sativa L.) is a herbaceous plant of the Nigella family ( Nigella ). This representative of the genus Nigella ( Nigella L.) has not been sufficiently studied in comparison with other species - only the seeds of this species have been studied in detail, studies on the pharmacognostic analysis of the herb have not been previously conducted by domestic researchers. Nigella sativa is a promising type of officinal medicinal plant material, the preparations of which have enzymatic, hepatoprotective and antioxidant effects (2).

Обзор литературы показал недостаточную степень изученности и возможности стандартизации травы чернушки посевной. Отечественные исследователи ссылаются на работу зарубежных ученых, где описывается изучение травы чернушки посевной методом ВЭЖХ из абсолютных метанольных экстрактов, которым определены 14 фенольных соединений, таких как ванилиновая кислота, галловая, транс-коричная кислота, катехин, апигенин и другие. Преобладающим фенольным соединением установлена ванилиновая кислота со средней концентрацией 143,21 и 89,94 мг на 100 г сухого веса побегов и корней, соответственно. Также метанольные экстракты из побегов и корней тунисской Nigella sativa L. были проверены на их антиоксидантную и антимутагенную активности с помощью теста Эймса. Побеги и корни продемонстрировали значительный антимутагенный эффект. Принимая во внимание, что пробоподготовка для ВЭЖХ более трудоемка и метанольные экстракты весьма токсичны, кроме того валидация данной методики не проводилась, актуальным является продолжение исследований в этом направлении. Данный способ определения фенольных соединений был взят как прототип для предлагаемой методики (3, 4).A review of the literature showed an insufficient degree of knowledge and the possibility of standardizing the herb Nigella sativa. Domestic researchers refer to the work of foreign scientists, which describes the study of herb Nigella sativa by HPLC from absolute methanol extracts, which identified 14 phenolic compounds, such as vanillic acid, gallic, trans -cinnamic acid, catechin, apigenin and others. The predominant phenolic compound was vanillic acid with an average concentration of 143.21 and 89.94 mg per 100 g of shoots and roots dry weight, respectively. Also, methanolic extracts from the shoots and roots of the Tunisian Nigella sativa L. were tested for their antioxidant and antimutagenic activities using the Ames test. Shoots and roots showed a significant antimutagenic effect. Taking into account that sample preparation for HPLC is more laborious and methanol extracts are very toxic, in addition, this technique has not been validated, it is important to continue research in this direction. This method for the determination of phenolic compounds was taken as a prototype for the proposed method (3, 4).

Таким образом, целью изобретения является разработка способа количественного определения суммы флавоноидов в траве чернушки посевной, обладающего простой и безопасной пробоподготовкой, высокой специфичностью и точностью.Thus, the aim of the invention is to develop a method for the quantitative determination of the amount of flavonoids in the grass Nigella sativa, which has a simple and safe sample preparation, high specificity and accuracy.

Техническим результатом является создание способа количественного определения суммы флавоноидов в траве чернушки посевной в пересчете нарутин. The technical result is the creation of a method for quantitative determination of the amount of flavonoids in the herb Nigella sativa in terms of narutin.

Технический результат достигается тем, что экстракцию сырья осуществляют однократно, в качестве экстрагента используют этиловый спирт в концентрации 70% в соотношении «сырье-экстрагент» - 1:30, время экстракции – извлечение на кипящей водяной бане в течение 45 мин, степень измельчения сырья – 2 мм. Количественное определение суммы флавоноидов в траве чернушки посевной проводят при длине волны 412 нм в пересчете на рутин; содержание суммы флавоноидов (X в процентах) в пересчете на рутин и абсолютно сухое сырье вычисляют по формуле:The technical result is achieved by the fact that the extraction of raw materials is carried out once, ethyl alcohol is used as an extractant at a concentration of 70% in the ratio "raw material-extractant" - 1:30, the extraction time is extraction in a boiling water bath for 45 minutes, the degree of grinding of raw materials is 2 mm. Quantitative determination of the amount of flavonoids in the herb Nigella sativa is carried out at a wavelength of 412 nm in terms of rutin; the content of the sum of flavonoids (X in percent) in terms of rutin and absolutely dry raw materials is calculated by the formula:

где D – оптическая плотность испытуемого раствора;where D is the optical density of the test solution;

D _o – оптическая плотность раствора стандартного образца рутина; D _o is the optical density of a solution of a standard sample of rutin;

m – масса сырья, г; m is the mass of raw materials, g;

m _о – масса стандартного образца рутина, г; m _o is the mass of the standard sample of rutin, g;

W – потеря в массе при высушивании, %. W is the weight loss upon drying, %.

В случае отсутствия стандартного образца рутина для расчета целесообразно использовать рассчитанное значение удельного показателя поглощения при 412 нм – 231:In the absence of a standard sample of rutin, it is advisable to use the calculated value of the specific absorption index at 412 nm - 231 for calculation:

m – масса сырья, г; m is the mass of raw materials, g;

231 – удельный показатель поглощения (E

) СО рутина при 412 нм; 231 - specific absorption rate (E

) CO of rutin at 412 nm;

W – потеря в массе при высушивании в процентах. W is the weight loss on drying in percent.

При изучении спектральных характеристик было выявлено, что именно рутин определяет характер кривой поглощения водно-спиртового извлечения из травы чернушки посевной. Определено, что в УФ-спектре водно-спиртового извлечения травы чернушки посевной наблюдается батохромный сдвиг длинноволновой полосы флавоноидов (Фиг. 1), как и в случае рутина (Фиг. 2), где кривая 1 на Фиг. 1 и Фиг. 2 демонстрирует исходный раствор водно-спиртового извлечения из травы чернушки посевной или исходный раствор рутина соответственно, а кривая 2 – раствор водно-спиртового извлечения из травы чернушки посевной в присутствии алюминия хлорида или раствор рутина в присутствии алюминия хлорида соответственно.When studying the spectral characteristics, it was found that it is rutin that determines the nature of the absorption curve of the water-alcohol extract from the herb Nigella sativa. It was determined that in the UV spectrum of the water-alcohol extract of Nigella sativa grass, a bathochromic shift of the long-wave band of flavonoids (Fig. 1) is observed, as in the case of rutin (Fig. 2), where curve 1 in Fig. 1 and FIG. 2 shows the initial solution of water-alcohol extract from black nigella herb or initial solution of rutin, respectively, and curve 2 shows the solution of water-alcohol extract from nigella sowing herb in the presence of aluminum chloride or the solution of rutin in the presence of aluminum chloride, respectively.

Изучение УФ-спектров Фиг. 2 (где кривая 1 – раствор рутина, а кривая 2 - раствор рутина с добавлением алюминия хлорида) показало, что раствор СО рутина в присутствии алюминия хлорида имеет максимум поглощения при длине волны 406 нм, а при дифференциальном варианте (Фиг. 3) – 414 нм. В УФ-спектре водно-спиртового извлечения из травы чернушки посевной в дифференциальном варианте (Фиг. 4) также обнаруживается при длине волны 412 нм максимум поглощения, который практически соответствует максимуму поглощения спиртового раствора рутина.UV Spectra Study FIG. 2 (where curve 1 is a solution of rutin, and curve 2 is a solution of rutin with the addition of aluminum chloride) showed that the SO solution of rutin in the presence of aluminum chloride has an absorption maximum at a wavelength of 406 nm, and in the differential variant (Fig. 3) - 414 nm. In the UV spectrum of the water-alcohol extract from Nigella sativa herb in the differential version (Fig. 4), an absorption maximum is also detected at a wavelength of 412 nm, which practically corresponds to the absorption maximum of the alcohol solution of rutin.

Данный факт позволяет проводить спектрофотометрическое определение суммы флавоноидов в траве чернушки посевной при аналитической длине волны 412 нм. This fact allows the spectrophotometric determination of the amount of flavonoids in Nigella sativa herb at an analytical wavelength of 412 nm.

Также нами было изучено влияние экстрагента на процесс экстракции. В таблице 1 (Фиг. 5) представлена зависимость выхода флавоноидов травы чернушки посевной от концентрации экстрагента. В результате эксперимента в качестве оптимального экстрагента нами был выбран 70% этиловый спирт, так как выход действующих веществ из сырья при его использовании максимален. We also studied the effect of the extractant on the extraction process. Table 1 (Fig. 5) shows the dependence of the yield of flavonoids of the herb Nigella sativa on the concentration of the extractant. As a result of the experiment, we chose 70% ethyl alcohol as the optimal extractant, since the yield of active substances from the raw material when it is used is maximum.

Далее нами был изучен вопрос относительно продолжительности экстракции на кипящей водяной бане, в таблице 2 (Фиг. 6) представлена зависимость выхода флавоноидов травы чернушки посевной от времени экстракции на кипящей водяной бане, при этом было выбрано время экстракции 45 минут. Next, we studied the issue of the duration of extraction in a boiling water bath, in table 2 (Fig. 6) shows the dependence of the yield of flavonoids of the herb Nigella sativa on the extraction time in a boiling water bath, while the extraction time was chosen 45 minutes.

В таблице 3 (Фиг. 7) представлена зависимость выхода флавоноидов травы чернушки посевной от соотношения «сырье-экстрагент». Из таблицы видно, что оптимальный выход действующих веществ наблюдается при соотношении «сырье-экстрагент» - 1:30, далее значения выходят на плато, по этой причине данное соотношение было выбрано нами в качестве оптимального. Table 3 (Fig. 7) shows the dependence of the yield of flavonoids of the herb Nigella sativa on the ratio of "raw material-extractant". The table shows that the optimal yield of active substances is observed at a ratio of "raw material-extractant" - 1:30, then the values reach a plateau, for this reason, this ratio was chosen by us as optimal.

Также стоит отметить, что степень измельчения сырья в 2 мм является оптимальной, так как при тонком измельчении (меньше 2 мм) сырьё распределяется неравномерно – удельный вес цветков в аналитической пробе значительно возрастает, что может дать завышенный результат. Кроме того, более тонкое измельчение затрудняет очистку извлечений и увеличивает количество различных балластных компонентов в составе извлечения. It is also worth noting that the degree of grinding of raw materials of 2 mm is optimal, since with fine grinding (less than 2 mm) the raw materials are distributed unevenly - the proportion of flowers in the analytical sample increases significantly, which can give an overestimated result. In addition, finer grinding makes it difficult to clean the extracts and increases the amount of various ballast components in the extract.

Учитывая, что увеличение числа операций на стадии пробоподготовки ведет к возрастанию ошибки, выбор сделан в пользу одностадийного процесса экстракции с подтверждением требуемой точности количественного определения. Taking into account that an increase in the number of operations at the stage of sample preparation leads to an increase in the error, the choice was made in favor of a single-stage extraction process with confirmation of the required accuracy of quantitative determination.

Таким образом, было определено, что оптимальными параметрами экстракции являются: однократное извлечение 70% этиловым спиртом на кипящей водяной бане в течение 45 минут в соотношении «сырье-экстрагент» - 1:30. Thus, it was determined that the optimal extraction parameters are: a single extraction with 70% ethanol in a boiling water bath for 45 minutes in the ratio of "raw material-extractant" - 1:30.

Принимая по внимание тот факт, что рутин имеет схожие специфические спектральные характеристики с извлечением травы чернушки посевной, а максимумы поглощения раствора рутина и водно-спиртового извлечения травы чернушки посевной находятся в области 412 нм, целесообразным является определение содержания суммы флавоноидов в пересчете на рутин при длине волны 412 нм.Taking into account the fact that rutin has similar specific spectral characteristics with the extract of black nigella, and the absorption maxima of the solution of rutin and water-alcohol extract of nigella are in the region of 412 nm, it is advisable to determine the content of the total flavonoids in terms of rutin at length waves 412 nm.

Способ реализуется следующим образом.The method is implemented as follows.

Методика количественного определения суммы флавоноидов в траве чернушки посевной. Аналитическую пробу сырья измельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 2 мм. Около 1 г измельченного сырья (точная навеска) помещают в колбу со шлифом вместимостью 100 мл, прибавляют 30 мл 70 % этилового спирта. Колбу закрывают пробкой и взвешивают на тарированных весах с точностью до ±0,01. Колбу присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане (умеренное кипение) в течение 45 мин. Затем ее охлаждают в течение 30 мин, закрывают той же пробкой, снова взвешивают и восполняют недостающий экстрагент до первоначальной массы. Извлечение фильтруют через бумажный фильтр (красная полоса). Method for quantitative determination of the amount of flavonoids in the herb Nigella sativa. An analytical sample of raw materials is crushed to the size of particles passing through a sieve with holes with a diameter of 2 mm. About 1 g of crushed raw material (accurately weighed) is placed in a 100 ml flask with a thin section, 30 ml of 70% ethanol are added. The flask is stoppered and weighed on a tared balance to the nearest ±0.01. The flask is attached to a reflux condenser and heated in a boiling water bath (moderate reflux) for 45 minutes. Then it is cooled for 30 min, closed with the same stopper, weighed again and replenish the missing extractant to the original weight. The extract is filtered through a paper filter (red band).

Испытуемый раствор для анализа суммы флавоноидов готовят следующим образом: 1 мл полученного извлечения помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, прибавляют 2 мл 3% спиртового раствора алюминия хлорида и доводят объем раствора до метки спиртом этиловым 96 % (испытуемый раствор). The test solution for the analysis of the amount of flavonoids is prepared as follows: 1 ml of the obtained extract is placed in a volumetric flask with a capacity of 25 ml, 2 ml of a 3% alcohol solution of aluminum chloride is added and the volume of the solution is adjusted to the mark with ethyl alcohol 96% (test solution).

Раствор сравнения готовят следующим образом: 1 мл полученного извлечения помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводят объем раствора до метки 96% этиловым спиртом (раствор сравнения).The reference solution is prepared as follows: 1 ml of the obtained extract is placed in a volumetric flask with a capacity of 25 ml, the volume of the solution is adjusted to the mark with 96% ethanol (reference solution).

Для расчета содержания суммы флавоноидов готовят раствор стандартного образца рутина, добавляют к нему 3% спиртовой раствор алюминия хлорида, измеряют оптическую плотность окрашенного комплекса при аналитической длине волны 412 нм и определенное значение оптической плотности используют в формуле расчета.To calculate the content of the sum of flavonoids, a solution of a standard sample of rutin is prepared, a 3% alcohol solution of aluminum chloride is added to it, the optical density of the colored complex is measured at an analytical wavelength of 412 nm, and a certain value of optical density is used in the calculation formula.

Приготовление раствора стандартного образца рутина. Preparation of a solution of a standard sample of rutin.

Около 0,02 г (точная навеска) рутина помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяют в 30 мл 70% этилового спирта при нагревании на водяной бане. После охлаждения содержимого колбы до комнатной температуры доводят объем раствора 70% этиловым спиртом до метки (раствор А рутина). 2 мл раствора А рутина помещают в мерную колбу на 25 мл, прибавляют 2 мл 3% спиртового раствора алюминия хлорида и доводят объем раствора до метки спиртом этиловым 96 % (испытуемый раствор Б рутина). About 0.02 g (accurately weighed) of rutin is placed in a 50 ml volumetric flask, dissolved in 30 ml of 70% ethanol while heated in a water bath. After cooling the contents of the flask to room temperature, bring the volume of the solution with 70% ethanol to the mark (solution A of rutin). 2 ml of solution A of rutin is placed in a 25 ml volumetric flask, 2 ml of a 3% alcohol solution of aluminum chloride is added and the volume of the solution is adjusted to the mark with ethyl alcohol 96% (test solution B of rutin).

Раствор сравнения готовят следующим образом: 2 мл полученного раствора помещают в мерную колбу на 25 мл, доводят объем раствора до метки спиртом этиловым 96%.The reference solution is prepared as follows: 2 ml of the resulting solution is placed in a 25 ml volumetric flask, the volume of the solution is adjusted to the mark with ethyl alcohol 96%.

Измерение оптической плотности проводят при длине волны 412 нм через 40 минут после приготовления всех растворов.Measurement of optical density is carried out at a wavelength of 412 nm 40 minutes after preparation of all solutions.

Содержание суммы флавоноидов (X в процентах) в пересчете на рутин и абсолютно сухое сырье вычисляют по формуле:The content of the sum of flavonoids (X in percent) in terms of rutin and absolutely dry raw materials is calculated by the formula:

m – масса сырья, г; m is the mass of raw materials, g;

231 – удельный показатель поглощения (E

) СО рутина при 412 нм; 231 - specific absorption rate (E

) CO of rutin at 412 nm;

Предлагаемый способ поясняется следующими примерами.The proposed method is illustrated by the following examples.

Пример 1.Example 1

Аналитическую пробу сырья травы чернушки посевной измельчают до размера частиц 2 мм (заготовлено в рп. Чердаклы, Ульяновская обл., июль 2021 г.). 1,0052 г измельченного сырья помещают в колбу со шлифом вместимостью 100 мл, прибавляют 30 мл 70% этилового спирта. Колбу закрывают пробкой и взвешивают на тарирных весах с точностью до +0,01. Колбу присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане (умеренное кипение) в течение 45 минут. Затем колбу охлаждают в течение 30 мин, закрывают той же пробкой, снова взвешивают и восполняют недостающий экстрагент до первоначальной массы. Извлечение фильтруют через бумажный фильтр (красная полоса).An analytical sample of the raw material of Nigella sowing grass is crushed to a particle size of 2 mm (harvested in the village of Cherdakly, Ulyanovsk region, July 2021). 1.0052 g of crushed raw materials are placed in a flask with a thin section with a capacity of 100 ml, 30 ml of 70% ethanol are added. The flask is stoppered and weighed on a tare balance to the nearest + 0.01. The flask is attached to a reflux condenser and heated in a boiling water bath (moderate reflux) for 45 minutes. Then the flask is cooled for 30 min, closed with the same stopper, weighed again, and the missing extractant is replenished to the original mass. The extract is filtered through a paper filter (red band).

Испытуемый раствор для анализа суммы флавоноидов готовят следующим образом: 1 мл полученного извлечения помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, прибавляют 2 мл 3% спиртового раствора алюминия хлорида и доводят объем раствора до метки спиртом этиловым 96% (испытуемый раствор). The test solution for the analysis of the amount of flavonoids is prepared as follows: 1 ml of the obtained extract is placed in a volumetric flask with a capacity of 25 ml, 2 ml of a 3% alcoholic solution of aluminum chloride is added and the volume of the solution is adjusted to the mark with ethyl alcohol 96% (test solution).

Раствор сравнения готовят следующим образом: 1 мл полученного извлечения помещают в мерную колбу на 25 мл, доводят объем раствора до метки спиртом этиловым 96% (раствор сравнения).The reference solution is prepared as follows: 1 ml of the obtained extract is placed in a 25 ml volumetric flask, the volume of the solution is adjusted to the mark with ethyl alcohol 96% (reference solution).

Для расчета содержания суммы флавоноидов готовят раствор стандартного образца рутина, добавляют к нему 3% спиртовой раствор хлорида алюминия, измеряют оптическую плотность окрашенного комплекса при длине волны 412 нм и определенное значение оптической плотности используют в формуле расчета.To calculate the content of the sum of flavonoids, a solution of a standard sample of rutin is prepared, a 3% alcohol solution of aluminum chloride is added to it, the optical density of the colored complex is measured at a wavelength of 412 nm, and a certain value of the optical density is used in the calculation formula.

0,0208 г рутина помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяют в 30 мл 70% этилового спирта при нагревании на водяной бане. После охлаждения содержимого колбы до комнатной температуры доводят объем раствора 70% этиловым спиртом до метки (раствор А рутина). После чего 2 мл раствора А рутина помещают в мерную колбу на 25 мл, добавляют 2 мл 3% спиртового раствора алюминия хлорида, затем доводят объем раствора до метки спиртом этиловым 96 %. Раствор сравнения готовят следующим образом: 2 мл полученного раствора помещают в мерную колбу на 25 мл, доводят объем раствора до метки спиртом этиловым 96 %.0.0208 g of rutin is placed in a volumetric flask with a capacity of 50 ml, dissolved in 30 ml of 70% ethanol while heated in a water bath. After cooling the contents of the flask to room temperature, bring the volume of the solution with 70% ethanol to the mark (solution A of rutin). After that, 2 ml of solution A of rutin is placed in a 25 ml volumetric flask, 2 ml of a 3% alcohol solution of aluminum chloride are added, then the volume of the solution is brought to the mark with 96% ethyl alcohol. The reference solution is prepared as follows: 2 ml of the resulting solution is placed in a 25 ml volumetric flask, the volume of the solution is adjusted to the mark with 96% ethyl alcohol.

Измерение оптической плотности проводят при длине волны 412 нм через 40 минут после приготовления всех растворов. Measurement of optical density is carried out at a wavelength of 412 nm 40 minutes after preparation of all solutions.

где: where:

0,3310 – оптическая плотность испытуемого раствора;0.3310 is the optical density of the test solution;

0,7704 – оптическая плотность раствора стандартного образца рутина;0.7704 is the optical density of a solution of a standard sample of rutin;

1,0052 – масса сырья, г;1.0052 – mass of raw material, g;

0,0208 – масса стандартного образца рутина, г. 0.0208 is the mass of a standard sample of rutin, g.

8,71 – потеря в массе при высушивании, %. 8.71 - loss in mass on drying, %.

Содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин = 1,17 %.The content of the sum of flavonoids in terms of rutin = 1.17%.

Пример 2.Example 2

При необходимости определения суммы флавоноидов в траве чернушки посевной в отсутствии стандартного образца рутина, необходимо провести все действия из примера 1 до приготовления раствора стандартного образца рутина. If it is necessary to determine the amount of flavonoids in Nigella sativa herb in the absence of a standard sample of rutin, it is necessary to carry out all the steps from example 1 before preparing a solution of a standard sample of rutin.

После измерения оптической плотности извлечения из травы чернушки посевной при длине волны 412 нм, содержание суммы флавоноидов (X в процентах) в пересчете на рутин и абсолютно сухое сырье вычисляют по формуле, используя рассчитанное значение удельного показателя поглощения при 412 нм – 231.After measuring the optical density of the extract from Nigella sativa grass at a wavelength of 412 nm, the content of the total flavonoids (X in percent) in terms of rutin and absolutely dry raw material is calculated by the formula using the calculated value of the specific absorption index at 412 nm - 231.

где:where:

1,0052– масса сырья, г;1.0052 - mass of raw materials, g;

231 – удельный показатель поглощения (E

- оптическая плотность раствора вещества с концентрацией 1 г/100 мл в кювете с толщиной слоя 1 см) стандартного образца рутина при 412 нм;231- specific absorption rate (E

- optical density of a solution of a substance with a concentration of 1 g/100 ml in a cuvette with a layer thickness of 1 cm) of a standard sample of rutin at 412 nm;

Содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин = 1,17 %, что совпадает со значением, полученном в примере 1.The content of the sum of flavonoids in terms of rutin = 1.17%, which coincides with the value obtained in example 1.

Все результаты были статистически обработаны. Ошибка единичного количественного определения составила ±4,17%.All results were statistically processed. The error of a single quantitative determination was ±4.17%.

Таким образом, предлагаемый способ количественного определения суммы флавоноидов в пересчете на рутин в траве чернушки посевной с использованием дифференциальной спектрофотометрии разработан впервые для данного вида сырья и обладает следующими преимуществами:Thus, the proposed method for the quantitative determination of the amount of flavonoids in terms of rutin in the herb Nigella sativa using differential spectrophotometry was developed for the first time for this type of raw material and has the following advantages:

1. Разработанный метод является специфичным и селективным, а также позволяет проводить экстракцию сырья однократно, поскольку в качестве экстрагента используется 70% этиловый спирт, позволяющий исчерпывающе извлекать целевые вещества (флавоноиды).1. The developed method is specific and selective, and also allows for the extraction of raw materials once, since 70% ethyl alcohol is used as an extractant, which allows exhaustive extraction of target substances (flavonoids).

2. Пересчет суммы флавоноидов идет на специфическое для травы чернушки посевной вещество – рутин. 2. The recalculation of the amount of flavonoids goes to the inoculum, specific for the herb, rutin.

3. Ошибка единичного определения предлагаемого способа составляет ±4,17%, что свидетельствует об объективности разработанного способа.3. The error of a single determination of the proposed method is ± 4.17%, which indicates the objectivity of the developed method.

Этот способ можно применять в центрах контроля качества лекарственных средств, на фармацевтических предприятиях и контрольно-аналитических лабораториях при проведении количественного анализа травы чернушки посевной (Nigella sativa L.).This method can be used in drug quality control centers, pharmaceutical enterprises and control and analytical laboratories when carrying out a quantitative analysis of Nigella sativa L. herb.

ИСТОЧНИКИ ИНФОРМАЦИИ:SOURCES OF INFORMATION:

1. Куркин В.А. Фармакогнозия. Учебник для студентов фармацевтических вузов (факультетов). – 3-е изд., перераб. и доп. – Самара: ООО «Офорт»; ФГБОУ ВО СамГМУ Минздрава России, 2016. – 1279 с.1. Kurkin V.A. Pharmacognosy. Textbook for students of pharmaceutical universities (faculties). - 3rd ed., revised. and additional - Samara: LLC "Etching"; FSBEI HE Samara State Medical University of the Ministry of Health of Russia, 2016. - 1279 p.

2. Рудь Н.К. Разработка технологии лекарственных средств из семян чернушки посевной и нормирование их качества : специальность 14.04.01 "Технология получения лекарств" : автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук / Рудь Наталья Каремовна. – Пятигорск, 2017. – 22 с.2. Rud N.K. Development of the technology of medicines from the seeds of Nigella sowing and standardization of their quality: specialty 14.04.01 "Technology for obtaining drugs": abstract of the dissertation for the degree of Candidate of Pharmaceutical Sciences / Rud Natalya Karemovna. - Pyatigorsk, 2017. - 22 p.

3. Рудь, Н. К. Основные результаты фитохимического и фармакологического исследования чернушки посевной / Н. К. Рудь, А. М. Сампиев, Н. А. Давитавян // Научные ведомости Белгородского государственного университета. Серия: Медицина. Фармация. – 2013. – № 25(168). – С. 207-212.3. Rud, N.K., Sampiev, A.M., Davitavyan, N.A., The main results of phytochemical and pharmacological studies of Nigella sativus, Scientific Bulletin of the Belgorod State University. Series: Medicine. Pharmacy. - 2013. - No. 25 (168). - S. 207-212.

4. Phenolic composition and biological activities of Tunisian Nigella sativa L. shoots and roots / Soumaya Bourgou, Riadh Ksouri, Amor Bellila et al. // C. R. Biologies. – 2008. – № 331. – Р.48-55.4. Phenolic composition and biological activities of Tunisian Nigella sativa L. shoots and roots / Soumaya Bourgou, Riadh Ksouri, Amor Bellila et al. // C. R. Biologies. - 2008. - No. 331. - R.48-55.

Claims

A method for quantitative determination of the amount of flavonoids in Nigella sativa L. herb by extraction of raw materials with organic solvents, followed by sample preparation and determination of optical density by differential spectrophotometry, characterized in that a water-alcohol extract from Nigella sativa herb is obtained by a single extraction with ethyl alcohol at a concentration 70% of air-dry raw materials with an accurate weight of 1 g, crushed to a particle size passing through a sieve with holes with a diameter of 2 mm, in the ratio of "raw material-extractant" - 1:30 for 45 minutes, quantitative determination of the amount of flavonoids in the herb of Nigella sativa carried out at a wavelength of 412 nm in terms of rutin and the content of the total flavonoids in terms of rutin and absolutely dry raw material is calculated by the formula

where X is the content of the sum of flavonoids in terms of rutin and absolutely dry raw materials,%;

D is the optical density of the test solution;

D _about - optical density of a solution of a standard sample of routine;

m is the mass of raw materials, g;

m _about - mass of a standard sample of routine, g;

W - weight loss on drying, %;

or according to the formula

where 231 is the specific absorption rate (

) standard sample of rutin at 412 nm.