RU2772713C1 - Vaccine for early protection against foot-and-mouth disease from strain a 2205/g iv cultural inactivated emulsion - Google Patents
Vaccine for early protection against foot-and-mouth disease from strain a 2205/g iv cultural inactivated emulsion Download PDFInfo
- Publication number
- RU2772713C1 RU2772713C1 RU2021113565A RU2021113565A RU2772713C1 RU 2772713 C1 RU2772713 C1 RU 2772713C1 RU 2021113565 A RU2021113565 A RU 2021113565A RU 2021113565 A RU2021113565 A RU 2021113565A RU 2772713 C1 RU2772713 C1 RU 2772713C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- strain
- foot
- vaccine
- mouth disease
- virus
- Prior art date
Links
- 229960005486 vaccines Drugs 0.000 title claims abstract description 107
- 208000007212 Foot-and-Mouth Disease Diseases 0.000 title claims abstract description 81
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 title claims abstract description 27
- 241000710198 Foot-and-mouth disease virus Species 0.000 claims abstract description 127
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims abstract description 54
- 230000000890 antigenic Effects 0.000 claims abstract description 30
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 claims abstract description 28
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims abstract description 24
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 21
- 230000002458 infectious Effects 0.000 claims abstract description 19
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 9
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 8
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 78
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims description 20
- 230000000240 adjuvant Effects 0.000 claims description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 6
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 claims description 6
- 241000710189 Aphthovirus Species 0.000 claims description 2
- 241000709664 Picornaviridae Species 0.000 claims description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 17
- 210000003734 Kidney Anatomy 0.000 abstract description 9
- 241001184721 Great Island virus Species 0.000 abstract description 6
- 241000699673 Mesocricetus auratus Species 0.000 abstract description 6
- 238000011161 development Methods 0.000 abstract description 5
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 abstract description 5
- 210000004027 cells Anatomy 0.000 description 80
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 42
- 201000009910 diseases by infectious agent Diseases 0.000 description 29
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 27
- 230000002068 genetic Effects 0.000 description 27
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 25
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 24
- 108090001123 antibodies Proteins 0.000 description 19
- 102000004965 antibodies Human genes 0.000 description 19
- 239000002609 media Substances 0.000 description 17
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 17
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 17
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 16
- 102000038129 antigens Human genes 0.000 description 16
- 108091007172 antigens Proteins 0.000 description 16
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 16
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 15
- 210000004369 Blood Anatomy 0.000 description 14
- 229920001850 Nucleic acid sequence Polymers 0.000 description 14
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 14
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 14
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 11
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 10
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 9
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 9
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 9
- JCAIWDXKLCEQEO-LXOWHHAPSA-N Copalyl diphosphate Natural products [P@@](=O)(OP(=O)(O)O)(OC/C=C(\CC[C@H]1C(=C)CC[C@H]2C(C)(C)CCC[C@@]12C)/C)O JCAIWDXKLCEQEO-LXOWHHAPSA-N 0.000 description 8
- 210000002966 Serum Anatomy 0.000 description 8
- 208000001756 Virus Disease Diseases 0.000 description 8
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 8
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 8
- 210000002845 Virion Anatomy 0.000 description 7
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 7
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 7
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 7
- 229920000160 (ribonucleotides)n+m Polymers 0.000 description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 description 6
- 230000001717 pathogenic Effects 0.000 description 6
- 241000710202 Foot-and-mouth disease virus - type A Species 0.000 description 5
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 5
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 238000010835 comparative analysis Methods 0.000 description 5
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 5
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 5
- 244000052769 pathogens Species 0.000 description 5
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 241000272184 Falconiformes Species 0.000 description 4
- 210000003128 Head Anatomy 0.000 description 4
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 4
- 108010087924 alanylproline Proteins 0.000 description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 4
- 108010000434 glycyl-alanyl-leucine Proteins 0.000 description 4
- 238000004264 monolayer culture Methods 0.000 description 4
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 4
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 3
- 210000003414 Extremities Anatomy 0.000 description 3
- 230000000680 avirulence Effects 0.000 description 3
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 3
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 3
- 230000000295 complement Effects 0.000 description 3
- 230000037029 cross reaction Effects 0.000 description 3
- 229940079593 drugs Drugs 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- -1 polyhexamethylene guanidine hydrochloride Polymers 0.000 description 3
- 230000001681 protective Effects 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 3
- 230000017613 viral reproduction Effects 0.000 description 3
- 230000003612 virological Effects 0.000 description 3
- OOHIGOIEQKKEPK-UHFFFAOYSA-N 3-hydroxybutanamide Chemical compound CC(O)CC(N)=O OOHIGOIEQKKEPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WPWUFUBLGADILS-WDSKDSINSA-N Ala-Pro Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O WPWUFUBLGADILS-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- BUQICHWNXBIBOG-LMVFSUKVSA-N Ala-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)N BUQICHWNXBIBOG-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 2
- 229940064005 Antibiotic throat preparations Drugs 0.000 description 2
- 229940083879 Antibiotics FOR TREATMENT OF HEMORRHOIDS AND ANAL FISSURES FOR TOPICAL USE Drugs 0.000 description 2
- 229940042052 Antibiotics for systemic use Drugs 0.000 description 2
- 229940042786 Antitubercular Antibiotics Drugs 0.000 description 2
- 208000002399 Aphthous Stomatitis Diseases 0.000 description 2
- FYRVDDJMNISIKJ-UWVGGRQHSA-N Asn-Tyr Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 FYRVDDJMNISIKJ-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 2
- ARPVSMCNIDAQBO-UHFFFAOYSA-N Glutaminyl-Leucine Chemical compound CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(N)=O ARPVSMCNIDAQBO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940093922 Gynecological Antibiotics Drugs 0.000 description 2
- CTCFZNBRZBNKAX-UHFFFAOYSA-N Histidinyl-Glutamine Chemical compound NC(=O)CCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 CTCFZNBRZBNKAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VYZAGTDAHUIRQA-WHFBIAKZSA-N L-alanyl-L-glutamic acid Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O VYZAGTDAHUIRQA-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- SENJXOPIZNYLHU-IUCAKERBSA-N Leu-Arg Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N SENJXOPIZNYLHU-IUCAKERBSA-N 0.000 description 2
- 210000000214 Mouth Anatomy 0.000 description 2
- 210000004400 Mucous Membrane Anatomy 0.000 description 2
- 108010061543 Neutralizing Antibodies Proteins 0.000 description 2
- 241000283898 Ovis Species 0.000 description 2
- 239000007759 RPMI Media 1640 Substances 0.000 description 2
- SSJMZMUVNKEENT-IMJSIDKUSA-N Ser-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CO SSJMZMUVNKEENT-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 2
- LTFSLKWFMWZEBD-IMJSIDKUSA-N Ser-Asn Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O LTFSLKWFMWZEBD-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 2
- 241001493546 Suina Species 0.000 description 2
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 2
- VPZKQTYZIVOJDV-LMVFSUKVSA-N Thr-Ala Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O VPZKQTYZIVOJDV-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 2
- WXVIGTAUZBUDPZ-DTLFHODZSA-N Thr-His Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CN=CN1 WXVIGTAUZBUDPZ-DTLFHODZSA-N 0.000 description 2
- DSGIVWSDDRDJIO-ZXXMMSQZSA-N Thr-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O DSGIVWSDDRDJIO-ZXXMMSQZSA-N 0.000 description 2
- 229940024982 Topical Antifungal Antibiotics Drugs 0.000 description 2
- ZQOOYCZQENFIMC-STQMWFEESA-N Tyr-His Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1N=CNC=1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZQOOYCZQENFIMC-STQMWFEESA-N 0.000 description 2
- IBIDRSSEHFLGSD-YUMQZZPRSA-N Val-Arg Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N IBIDRSSEHFLGSD-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- UPJONISHZRADBH-XPUUQOCRSA-N Val-Glu Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O UPJONISHZRADBH-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 2
- STTYIMSDIYISRG-WDSKDSINSA-N Val-Ser Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O STTYIMSDIYISRG-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- 102000016350 Viral Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 2
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 108010077245 asparaginyl-proline Proteins 0.000 description 2
- 230000003115 biocidal Effects 0.000 description 2
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002856 computational phylogenetic analysis Methods 0.000 description 2
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing Effects 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004727 humoral immunity Effects 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 230000001965 increased Effects 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 2
- 229940079866 intestinal antibiotics Drugs 0.000 description 2
- 230000003902 lesions Effects 0.000 description 2
- 230000000877 morphologic Effects 0.000 description 2
- 229940005935 ophthalmologic Antibiotics Drugs 0.000 description 2
- 230000036961 partial Effects 0.000 description 2
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 2
- OZAIFHULBGXAKX-UHFFFAOYSA-N precursor Substances N#CC(C)(C)N=NC(C)(C)C#N OZAIFHULBGXAKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 2
- 210000000605 viral structures Anatomy 0.000 description 2
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 2
- LQJAALCCPOTJGB-YUMQZZPRSA-N (2S)-1-[(2S)-2-amino-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]pyrrolidine-2-carboxylic acid Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O LQJAALCCPOTJGB-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- UCXQIIIFOOGYEM-ULQDDVLXSA-N (2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-amino-4-methylpentanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoic acid Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 UCXQIIIFOOGYEM-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- RXGLHDWAZQECBI-SRVKXCTJSA-N (2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-amino-4-methylpentanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-hydroxypropanoic acid Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O RXGLHDWAZQECBI-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- NJEMRSFGDNECGF-GCJQMDKQSA-N (2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-amino-3-hydroxybutanoyl]amino]propanoyl]amino]butanedioic acid Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O NJEMRSFGDNECGF-GCJQMDKQSA-N 0.000 description 1
- QXRNAOYBCYVZCD-BQBZGAKWSA-N (2S)-6-amino-2-[[(2S)-2-aminopropanoyl]amino]hexanoic acid Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN QXRNAOYBCYVZCD-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- WNGVUZWBXZKQES-YUMQZZPRSA-N 2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-amino-4-methylpentanoyl]amino]propanoyl]amino]acetic acid Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(O)=O WNGVUZWBXZKQES-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- XUUXCWCKKCZEAW-YFKPBYRVSA-N 2-[[(2S)-2-amino-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]amino]acetic acid Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N XUUXCWCKKCZEAW-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- 229960000583 Acetic Acid Drugs 0.000 description 1
- IPWKGIFRRBGCJO-IMJSIDKUSA-N Ala-Ser Chemical compound C[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](CO)C([O-])=O IPWKGIFRRBGCJO-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- PQBHGSGQZSOLIR-RYUDHWBXSA-N Arg-Phe Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 PQBHGSGQZSOLIR-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- GADKFYNESXNRLC-WDSKDSINSA-N Asn-Pro Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O GADKFYNESXNRLC-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- PSZNHSNIGMJYOZ-WDSKDSINSA-N Asp-Arg Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N PSZNHSNIGMJYOZ-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- 210000000481 Breast Anatomy 0.000 description 1
- 241000282832 Camelidae Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 241001250090 Capra ibex Species 0.000 description 1
- 241000282994 Cervidae Species 0.000 description 1
- 241001573881 Corolla Species 0.000 description 1
- ZSRSLWKGWFFVCM-WDSKDSINSA-N Cys-Pro Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O ZSRSLWKGWFFVCM-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 210000003608 Feces Anatomy 0.000 description 1
- LSPKYLAFTPBWIL-BYPYZUCNSA-N Glu-Gly Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O LSPKYLAFTPBWIL-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- JZOYFBPIEHCDFV-UHFFFAOYSA-N Glutaminyl-Histidine Chemical compound NC(=O)CCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CN=CN1 JZOYFBPIEHCDFV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CLSDNFWKGFJIBZ-UHFFFAOYSA-N Glutaminyl-Lysine Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(N)=O CLSDNFWKGFJIBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FUESBOMYALLFNI-VKHMYHEASA-N Gly-Asn Chemical compound NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O FUESBOMYALLFNI-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- IEFJWDNGDZAYNZ-BYPYZUCNSA-N Gly-Glu Chemical compound NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O IEFJWDNGDZAYNZ-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- DKEXFJVMVGETOO-LURJTMIESA-N Gly-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CN DKEXFJVMVGETOO-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- VHOLZZKNEBBHTH-YUMQZZPRSA-N His-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CNC=N1 VHOLZZKNEBBHTH-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- CZVQSYNVUHAILZ-UWVGGRQHSA-N His-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 CZVQSYNVUHAILZ-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- BCVIOZZGJNOEQS-XKNYDFJKSA-N Ile-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)[C@@H](C)CC BCVIOZZGJNOEQS-XKNYDFJKSA-N 0.000 description 1
- QOOWRKBDDXQRHC-BQBZGAKWSA-N L-lysyl-L-alanine Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN QOOWRKBDDXQRHC-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- RNKSNIBMTUYWSH-YFKPBYRVSA-N L-prolylglycine Chemical compound [O-]C(=O)CNC(=O)[C@@H]1CCC[NH2+]1 RNKSNIBMTUYWSH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- MLTRLIITQPXHBJ-BQBZGAKWSA-N Leu-Asn Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O MLTRLIITQPXHBJ-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- NFNVDJGXRFEYTK-YUMQZZPRSA-N Leu-Glu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O NFNVDJGXRFEYTK-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- LESXFEZIFXFIQR-LURJTMIESA-N Leu-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O LESXFEZIFXFIQR-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- OTXBNHIUIHNGAO-UWVGGRQHSA-N Leu-Lys Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN OTXBNHIUIHNGAO-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- LRKCBIUDWAXNEG-CSMHCCOUSA-N Leu-Thr Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O LRKCBIUDWAXNEG-CSMHCCOUSA-N 0.000 description 1
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 1
- MYTOTTSMVMWVJN-STQMWFEESA-N Lys-Tyr Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 MYTOTTSMVMWVJN-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- 210000002264 Mammary Glands, Animal Anatomy 0.000 description 1
- 210000004293 Mammary Glands, Human Anatomy 0.000 description 1
- 210000004379 Membranes Anatomy 0.000 description 1
- QTZXSYBVOSXBEJ-WDSKDSINSA-N Met-Asp Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O QTZXSYBVOSXBEJ-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- MUMXFARPYQTTSL-BQBZGAKWSA-N Met-Gln Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O MUMXFARPYQTTSL-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- IMTUWVJPCQPJEE-IUCAKERBSA-N Met-Lys Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN IMTUWVJPCQPJEE-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- 210000004080 Milk Anatomy 0.000 description 1
- 238000010629 Molecular evolutionary genetics analysis Methods 0.000 description 1
- 210000003205 Muscles Anatomy 0.000 description 1
- HWMGTNOVUDIKRE-UWVGGRQHSA-N Phe-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 HWMGTNOVUDIKRE-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- JWBLQDDHSDGEGR-DRZSPHRISA-N Phe-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 JWBLQDDHSDGEGR-DRZSPHRISA-N 0.000 description 1
- ROHDXJUFQVRDAV-UWVGGRQHSA-N Phe-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 ROHDXJUFQVRDAV-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- HMNSRTLZAJHSIK-YUMQZZPRSA-N Pro-Arg Chemical compound NC(=N)NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 HMNSRTLZAJHSIK-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- JQOHKCDMINQZRV-WDSKDSINSA-N Pro-Asn Chemical compound NC(=O)C[C@@H](C([O-])=O)NC(=O)[C@@H]1CCC[NH2+]1 JQOHKCDMINQZRV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- IWIANZLCJVYEFX-RYUDHWBXSA-N Pro-Phe Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H]1NCCC1)C1=CC=CC=C1 IWIANZLCJVYEFX-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- AFWBWPCXSWUCLB-WDSKDSINSA-N Pro-Ser Chemical compound OC[C@@H](C([O-])=O)NC(=O)[C@@H]1CCC[NH2+]1 AFWBWPCXSWUCLB-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- BEPSGCXDIVACBU-UHFFFAOYSA-N Prolyl-Histidine Chemical compound C1CCNC1C(=O)NC(C(=O)O)CC1=CN=CN1 BEPSGCXDIVACBU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000014961 Protein Precursors Human genes 0.000 description 1
- 108010078762 Protein Precursors Proteins 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 108010012057 RNA Replicase Proteins 0.000 description 1
- 210000003296 Saliva Anatomy 0.000 description 1
- PPQRSMGDOHLTBE-UWVGGRQHSA-N Ser-Phe Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 PPQRSMGDOHLTBE-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- XZKQVQKUZMAADP-IMJSIDKUSA-N Ser-Ser Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O XZKQVQKUZMAADP-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- 210000003491 Skin Anatomy 0.000 description 1
- HYLXOQURIOCKIH-VQVTYTSYSA-N Thr-Arg Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=N HYLXOQURIOCKIH-VQVTYTSYSA-N 0.000 description 1
- IOWJRKAVLALBQB-IWGUZYHVSA-N Thr-Asp Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O IOWJRKAVLALBQB-IWGUZYHVSA-N 0.000 description 1
- BWUHENPAEMNGQJ-ZDLURKLDSA-N Thr-Gln Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O BWUHENPAEMNGQJ-ZDLURKLDSA-N 0.000 description 1
- BECPPKYKPSRKCP-ZDLURKLDSA-N Thr-Glu Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O BECPPKYKPSRKCP-ZDLURKLDSA-N 0.000 description 1
- BIYXEUAFGLTAEM-WUJLRWPWSA-N Thr-Gly Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O BIYXEUAFGLTAEM-WUJLRWPWSA-N 0.000 description 1
- QOLYAJSZHIJCTO-VQVTYTSYSA-N Thr-Pro Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O QOLYAJSZHIJCTO-VQVTYTSYSA-N 0.000 description 1
- WCRFXRIWBFRZBR-GGVZMXCHSA-N Thr-Tyr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 WCRFXRIWBFRZBR-GGVZMXCHSA-N 0.000 description 1
- LUMXICQAOKVQOB-UHFFFAOYSA-N Threoninyl-Isoleucine Chemical compound CCC(C)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)C(C)O LUMXICQAOKVQOB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LWFWZRANSFAJDR-JSGCOSHPSA-N Trp-Val Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O)=CNC2=C1 LWFWZRANSFAJDR-JSGCOSHPSA-N 0.000 description 1
- ONWMQORSVZYVNH-UHFFFAOYSA-N Tyrosyl-Asparagine Chemical compound NC(=O)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 ONWMQORSVZYVNH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010068760 Ulcers Diseases 0.000 description 1
- PNVLWFYAPWAQMU-CIUDSAMLSA-N Val-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)C(C)C PNVLWFYAPWAQMU-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- JKHXYJKMNSSFFL-IUCAKERBSA-N Val-Lys Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN JKHXYJKMNSSFFL-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- 108020000999 Viral RNA Proteins 0.000 description 1
- 206010047461 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating Effects 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000001154 acute Effects 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 108010039538 alanyl-glycyl-aspartyl-valine Proteins 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral Effects 0.000 description 1
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 description 1
- 229940121357 antivirals Drugs 0.000 description 1
- 108010068380 arginylarginine Proteins 0.000 description 1
- 108010060035 arginylproline Proteins 0.000 description 1
- 229960000074 biopharmaceuticals Drugs 0.000 description 1
- 230000000903 blocking Effects 0.000 description 1
- 230000036760 body temperature Effects 0.000 description 1
- 230000022534 cell killing Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 1
- 230000000875 corresponding Effects 0.000 description 1
- 238000010192 crystallographic characterization Methods 0.000 description 1
- 108010060199 cysteinylproline Proteins 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic Effects 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000001605 fetal Effects 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 1
- 108010078144 glutaminyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 125000000267 glycino group Chemical group [H]N([*])C([H])([H])C(=O)O[H] 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 230000003067 hemagglutinative Effects 0.000 description 1
- 244000144980 herd Species 0.000 description 1
- 108010036413 histidylglycine Proteins 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 108010078274 isoleucylvaline Proteins 0.000 description 1
- 238000005304 joining Methods 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 108010034529 leucyl-lysine Proteins 0.000 description 1
- 108010000761 leucylarginine Proteins 0.000 description 1
- 108010057821 leucylproline Proteins 0.000 description 1
- 230000004301 light adaptation Effects 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 229940005943 ophthalmologic Antivirals Drugs 0.000 description 1
- 150000002894 organic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 230000001575 pathological Effects 0.000 description 1
- 108010051242 phenylalanylserine Proteins 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 210000004777 protein coat Anatomy 0.000 description 1
- 239000003531 protein hydrolysate Substances 0.000 description 1
- 230000000601 reactogenic Effects 0.000 description 1
- 230000002829 reduced Effects 0.000 description 1
- 230000003252 repetitive Effects 0.000 description 1
- 230000000405 serological Effects 0.000 description 1
- 108010026333 seryl-proline Proteins 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000003892 spreading Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 108010061238 threonyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 210000001519 tissues Anatomy 0.000 description 1
- 229940026754 topical Antivirals Drugs 0.000 description 1
- 108010017949 tyrosyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 108010003137 tyrosyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 description 1
- 108010073969 valyllysine Proteins 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Images
Abstract
Description
Ящур - это вирусное, остро протекающее заболевание домашних парнокопытных животных (КРС, свиньи, козы, олени, буйволы, верблюды), характеризующееся лихорадкой и афтозными поражениями слизистой оболочки в полости рта, кожи вымени (молочной железы) и конечностей. Болезни подвержены животные любого возраста. Молодняк легче заражается и тяжелее переносит заболевание (до 2-3 месяцев). Источником данного заболевания являются больные животные, переболевшие ящуром, а также содержавшиеся совместно с больными длительное время, находящиеся в инкубационном (скрытом) периоде болезни, выделяющие вирус во внешнюю среду с содержимым и стенками афт (изъязвления округлой формы) на языке по стенкам полости рта, с молоком, слюной и фекалиями [1, 2].Foot and mouth disease is a viral, acute disease of domestic artiodactyl animals (cattle, pigs, goats, deer, buffaloes, camels), characterized by fever and aphthous lesions of the mucous membrane in the oral cavity, udder skin (mammary gland) and limbs. Diseases affect animals of any age. Young growth is more easily infected and more difficult to tolerate the disease (up to 2-3 months). The source of this disease is sick animals that have been ill with foot and mouth disease, and also kept together with patients for a long time, which are in the incubation (latent) period of the disease, releasing the virus into the external environment with the contents and walls of aphthae (rounded ulcers) on the tongue along the walls of the oral cavity, with milk, saliva and faeces [1, 2].
По причине легкого и быстрого распространения возбудителя ящура данное заболевание может приобретать размах эпизоотий [3, 4]. С целью недопущения возникновения болезни в хозяйствах Российской Федерации применяется система мероприятий по борьбе и профилактике ящура, которая направлена на предупреждение заноса вируса в страну, систематическую иммунизацию крупного и мелкого рогатого скота в буферной зоне, а также проведение мониторинга иммунного статуса привитых животных. Рекомендуется обязательная вакцинация животных; всех вновь приобретенных животных регистрировать в учреждениях государственной ветеринарной службы и осуществлять карантинирование животных перед вводом в основное стадо; соблюдать требования зоогигиенических норм и правил содержания животных; приобретать корм из благополучной территории и др. [2].Due to the easy and rapid spread of the FMD pathogen, this disease can acquire the scope of epizootics [3, 4]. In order to prevent the occurrence of the disease in the farms of the Russian Federation, a system of measures is used to control and prevent foot and mouth disease, which is aimed at preventing the introduction of the virus into the country, systematic immunization of cattle and small cattle in the buffer zone, as well as monitoring the immune status of vaccinated animals. Compulsory vaccination of animals is recommended; to register all newly acquired animals in the institutions of the state veterinary service and to quarantine animals before entering the main herd; comply with the requirements of zoohygienic norms and rules for keeping animals; to acquire food from a prosperous territory, etc. [2].
Для иммунизации животных должна применяться вакцина, изготовленная из вируса, гомологичного полевым изолятам [5, 6].For immunization of animals, a vaccine made from a virus homologous to field isolates should be used [5, 6].
Возникающие в мире вспышки ящура демонстрируют, что данная крайне заразная вирусная инфекция продолжает оставаться значимой экономической проблемой во всем мире. Споры о наиболее эффективном способе реагирования на вспышки ящура в странах, свободных от болезней, по-прежнему сосредоточены на использовании вакцин [7]. Для проведения эффективной кампании по вакцинации нужно наличие эффективной, безопасной вакцины, содержащей в качестве иммуногенной части инактивированный антиген вируса, соответствующей эпизоотическому изоляту. Вакцина и схема ее применения должны достаточно быстро обеспечить иммунитет. Как правило, противоящурные вакцинные препараты создают напряженный иммунитет на 21 день после вакцинации. Уменьшение сроков по защите животных является актуальной задачей, чтобы остановить и замедлить передачу вируса другим животным. Достижение данной цели позволит эффективно применять вакцину в неблагополучном пункте и угрожаемой зоне для формирования раннего иммунитета.Emerging worldwide outbreaks of foot-and-mouth disease demonstrate that this highly contagious viral infection continues to be a significant economic problem throughout the world. The debate about the most effective way to respond to FMD outbreaks in disease-free countries continues to focus on the use of vaccines [7]. An effective vaccination campaign requires the availability of an effective, safe vaccine containing, as an immunogenic part, an inactivated virus antigen corresponding to an epizootic isolate. The vaccine and the scheme of its use should provide immunity quickly enough. As a rule, FMD vaccine preparations create a strong immunity for 21 days after vaccination. Reducing the deadlines for the protection of animals is an urgent task to stop and slow down the transmission of the virus to other animals. Achieving this goal will make it possible to effectively apply the vaccine in a disadvantaged area and a threatened zone for the formation of early immunity.
Одной из нескольких мер, которые могут быть применены для борьбы со вспышками ящура, является экстренная вакцинация. Критерии, определяющие успешное проведение экстренной вакцинации, включают в себя доступ к вакцине, которая отличается следующими характеристиками: 1) содержит штамм вируса ящура с достаточным антигенным родством по отношению к изолятам, циркулирующим в очаге; 2) относится к требуемому виду среди разработанных вакцин; 3) характеризуется приемлемой безвредностью и эффективностью; 4) имеет соответствующий доступ, в том числе объем партий и своевременность их поставок.One of several measures that can be taken to control FMD outbreaks is emergency vaccination. Criteria for successful emergency vaccination include access to a vaccine that has the following characteristics: 1) contains a FMDV strain with sufficient antigenic relationship to isolates circulating in the outbreak; 2) refers to the required species among the developed vaccines; 3) is characterized by acceptable safety and efficacy; 4) has appropriate access, including the volume of consignments and the timeliness of their deliveries.
Планирование на случай непредвиденных обстоятельств должно включать обеспечение экстренной вакцинации и учитывать возможность сложных решений не только в отношении того, когда, где и как применять вакцину, но и экономическую целесообразность ее использования [8].Contingency planning must include the provision of emergency vaccination and take into account the possibility of complex decisions not only about when, where and how to apply the vaccine, but also the economic feasibility of its use [8].
По опубликованным данным, экстренная вакцинация крупного рогатого скота, овец и свиней может быть эффективной для профилактики заболевания в течение первых 4-5 дней после иммунизации [8, 9, 10]. Сведения из литературных источников показывают, что риск распространения инфекции уменьшается по мере увеличения интервала между вакцинацией и заражением вирусом. Известно, вакцинация может уменьшить количество выделяемого в окружающую среду вируса по сравнению с неиммунизированными животными [9, 10].According to published data, emergency vaccination of cattle, sheep and pigs can be effective in preventing the disease during the first 4–5 days after immunization [8, 9, 10]. Information from the literature shows that the risk of spreading the infection decreases as the interval between vaccination and infection with the virus increases. It is known that vaccination can reduce the amount of virus released into the environment compared to non-immunized animals [9, 10].
При наличии высокого уровня генетической и антигенной вариабельности вируса ящура в пределах даже одной генетической линии происходит возникновение новых полевых изолятов, отличающихся по показателям вирулентности и иммуногенности от ранее выделенных и охарактеризованных штаммов [11-14].In the presence of a high level of genetic and antigenic variability of FMDV within even one genetic line, new field isolates appear that differ in terms of virulence and immunogenicity from previously isolated and characterized strains [11-14].
Для купирования вспышки ящура и предупреждения распространения вируса требуется быстрая типизация изолятов ящура и изучение их биологических свойств, что необходимо при выборе подходящего штамма для производства противоящурных вакцин [15, 16].To stop the FMD outbreak and prevent the spread of the virus, rapid typing of FMD isolates and the study of their biological properties is required, which is necessary when choosing a suitable strain for the production of FMD vaccines [15, 16].
Учитывая опасность возникновения ящура в РФ и высокую вероятность в этом случае больших экономических потерь, особое значение приобретает проблема экстренной профилактики данного заболевания для формирования раннего иммунитета у животных.Taking into account the danger of foot and mouth disease in the Russian Federation and the high probability of large economic losses in this case, the problem of emergency prevention of this disease for the formation of early immunity in animals is of particular importance.
Стратегия экстренной, вынужденной вакцинации при заносе возбудителя на территорию России приобретает особую важность, основанием для которой является необходимость создания ранней защиты всех восприимчивых животных. Сокращение времени для формирования иммунитета против ящура в организме восприимчивых животных является актуальной задачей.The strategy of emergency, forced vaccination when a pathogen is introduced into the territory of Russia is of particular importance, the basis for which is the need to create early protection for all susceptible animals. Reducing the time for the formation of immunity against foot-and-mouth disease in the body of susceptible animals is an urgent task.
По данным ряда авторов [17, 18], вакцинация может уменьшить количество выделяемого вируса по сравнению с неиммунизированными животными и снизить риск распространения инфекции по мере увеличения интервала между вакцинацией и заражением вирусом.According to a number of authors [17, 18], vaccination can reduce the amount of virus shed compared to non-immunized animals and reduce the risk of infection spread as the interval between vaccination and virus infection increases.
Для улучшения мер борьбы с заболеванием в эндемичных странах важно отслеживать текущие варианты распространения полевых изолятов вируса ящура для обеспечения того, чтобы в короткие сроки иметь возможность исследования биологических свойств интересующего изолята и разработать эффективную вакцину из вызвавшего вспышку штамма вируса [17-21].To improve control measures in endemic countries, it is important to monitor the current distribution of FMDV field isolates in order to ensure that the biological properties of the isolate of interest can be studied in a short time and an effective vaccine can be developed from the virus strain that caused the outbreak [17-21].
В 2017-2018 гг. в некоторых странах Северо-Восточной Африки отмечали вспышки ящура типа А. Страны указанного региона активно развивают индустрию туризма и имеют торгово-экономические связи с Россией, вследствие чего всегда существует риск заноса заболевания на территорию РФ [22].In 2017-2018 in some countries of Northeast Africa, outbreaks of foot and mouth disease type A were noted. The countries of this region are actively developing the tourism industry and have trade and economic ties with Russia, as a result of which there is always a risk of introducing the disease into the territory of the Russian Federation [22].
После проведения необходимых лабораторных исследований обнаруженных изолятов вируса ящура, особое внимание было обращено на один изолят, который выделен от крупного рогатого скота. По результатам ПЦР и нуклеотидного секвенирования с последующим филогенетическим анализом, проведенных специалистами Всемирной справочной лаборатории по ящуру (Пирбрайт, Великобритания) [22] и ФГБУ «ВНИИЗЖ», выявили, что изолят принадлежит топотипу AFRICA, генетической линии G IV.After carrying out the necessary laboratory studies of the detected FMDV isolates, special attention was paid to one isolate, which was isolated from cattle. According to the results of PCR and nucleotide sequencing followed by phylogenetic analysis, carried out by specialists from the World Reference Laboratory for FMD (Pirbright, UK) [22] and FGBI ARRIAH, it was revealed that the isolate belongs to the AFRICA topotype, genetic line G IV.
По результатам сравнительного анализа нуклеотидных последовательностей выделенный изолят принадлежит к топотипу ASIA, генетической линии G IV вируса ящура типа А, который значительно отличается от производственных штаммов вируса ящура типа А.According to the results of a comparative analysis of nucleotide sequences, the isolated isolate belongs to the ASIA topotype, the genetic line G IV of FMDV type A, which differs significantly from the production strains of FMDV type A.
Учитывая интенсивные торговые связи между Российской Федерацией и странами Северо-Восточной Африки, вероятность риска заноса ящура на территорию нашей страны остается очень высокой [23]. В связи с этим возникла необходимость разработать новую вакцину для ранней защиты из штамма (ранее эпизоотического изолята) вируса ящура серотипа А для обеспечения безопасности территории Российской Федерации и сопредельных государств.Given the intensive trade relations between the Russian Federation and the countries of North-East Africa, the risk of introducing FMD into the territory of our country remains very high [23]. In this regard, it became necessary to develop a new vaccine for early protection from a strain (formerly an epizootic isolate) of FMDV serotype A to ensure the safety of the territory of the Russian Federation and neighboring states.
Наиболее близкой предлагаемому изобретению по совокупности существенных признаков является вакцина инактивированная эмульсионная против ящура типа А, содержащая активное вещество в виде авирулентного и очищенного культурального антигенного материала из гомологичного возбудителю ящура штамма А22 Ирак 24/64, полученного в чувствительной биологической системе, и целевые добавки в виде масляного адъюванта в соотношении, мкг/см3:The closest proposed invention in terms of essential features is an inactivated emulsion vaccine against FMD type A, containing the active substance in the form of an avirulent and purified cultural antigenic material from a strain A22 Iraq 24/64 homologous to the FMD pathogen, obtained in a sensitive biological system, and target additives in the form oil adjuvant in the ratio, mcg/cm 3 :
В качестве чувствительной биологической системы для репродукции вируса ящура используют перевиваемую суспензионную клеточную линию из почки новорожденного сирийского хомячка ВНК-21/2-17, в качестве поддерживающей среды применяют раствор Эрла без внесения сыворотки, с добавлением ферментативного гидролизата мышц сухого (ФГМС), гидролизата белков крови сухого (ГБКС) и антибиотиков при рН среды 7,4-7,6.As a sensitive biological system for the reproduction of foot and mouth disease virus, a transplantable suspension cell line from the kidney of a newborn Syrian hamster VNK-21/2-17 is used, as a supporting medium, Earl's solution is used without adding serum, with the addition of dry enzymatic muscle hydrolyzate (FGMS), protein hydrolyzate dry blood (GBKS) and antibiotics at pH 7.4-7.6.
Для инактивации вируса используют аминоэтилэтиленимин (АЭЭИ). При изготовлении эмульсионной вакцины в качестве адъюванта служит Montanide ISA-206 VG. Очистку вируссодержащей суспензии от балластных примесей осуществляют с применением полигексаметиленгуанидин гидрохлорид (ПГМГ).Aminoethylethyleneimine (AEEI) is used to inactivate the virus. In the manufacture of an emulsion vaccine, Montanide ISA-206 VG serves as an adjuvant. Purification of the virus-containing suspension from ballast impurities is carried out using polyhexamethylene guanidine hydrochloride (PHMG).
Авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма типа А представляет собой суспензию, состоящую преимущественно из 146S и 75S иммуногенных компонентов вируса ящура.The avirulent and purified antigenic material from strain type A is a suspension consisting predominantly of the 146S and 75S immunogenic components of FMDV.
Существенный недостаток вакцины-прототипа состоит в их недостаточной иммуногенной активности, что объясняется невысокой степенью защиты восприимчивых животных от эпизоотических изолятов вируса ящура типа А, циркулирующего в странах Северо-Восточной Африки.A significant drawback of the prototype vaccine is their lack of immunogenic activity, which is explained by the low degree of protection of susceptible animals from epizootic isolates of FMDV type A, circulating in the countries of Northeast Africa.
Для решения этой проблемы было создано настоящее изобретение, в которое входила разработка противоящурной инактивированной культуральной эмульсионной вакцины, обеспечивающей эффективную раннюю защиту восприимчивых животных против полевых изолятов вируса ящура типа А топотипа AFRICA генетической линии G IV, распространенных на территории Северо-Восточной Африки.To solve this problem, the present invention was created, which included the development of an FMD inactivated culture emulsion vaccine that provides effective early protection of susceptible animals against field isolates of FMDV type A topotype AFRICA genetic line G IV, common in Northeast Africa.
Технический результат от использования предлагаемого изобретения заключается в расширении арсенала вакцин для ранней защиты против ящура типа А инактивированных культуральных эмульсионных.The technical result from the use of the invention is to expand the arsenal of vaccines for early protection against FMD type A inactivated culture emulsion.
Указанный технический результат достигнут созданием вакцины для ранней защиты против ящура типа А инактивированной культуральной эмульсионной, охарактеризованной следующей совокупностью признаков, отраженных ниже.The specified technical result is achieved by creating an inactivated culture emulsion vaccine for early protection against foot-and-mouth disease type A, characterized by the following set of features reflected below.
Разработанная вакцина в 1,0 см3 препарата содержит следующие компоненты: активное вещество в виде авирулентного и очищенного антигенного материала из гомологичного возбудителю инфекции штамма A 2205/G IV вируса ящура, репродуцированного предпочтительно в перевиваемой суспензионной клеточной линии ВНК-21/2-17, в количестве не менее 6,0 мкг и масляный адъювант Montanide ISA-206 предпочтительно в количестве 500000,0-575000,0 мкг, соответственно.The developed vaccine in 1.0 cm 3 of the preparation contains the following components: active substance in the form of avirulent and purified antigenic material from foot and mouth disease
Изолят, послуживший источником для получения штамма вируса ящура А 2205/G IV, был выделен в 2018 году от больных ящуром KPC на территории Северо-Восточной Африки (экспертиза №2205). Производственный штамм вируса ящура A 2205/G IV получен путем последовательных пассажей на чувствительных гетеро- и гомологичных клеточных линиях.The isolate, which served as a source for obtaining the
Штамм вируса ящура A 2205/G IV депонирован в Коллекцию штаммов микроорганизмов ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГБУ «ВНИИЗЖ»), под регистрационным номером: №339-деп / 20-127 - ГКШМ ФГБУ «ВНИИЗЖ».The foot-and-mouth disease
Штамм адаптирован к первично-трипсинизированным клеткам свиной почки (СП) и перевиваемым клеточным линиям из почки новорожденного сирийского хомячка (ВНК-21/2-17), почки свиньи (IB-RS-2) и почки сибирского горного козерога (ПСГК-30).The strain is adapted to primary trypsinized porcine kidney (SP) cells and transplantable cell lines from the kidney of a newborn Syrian hamster (VNK-21/2-17), the kidney of a pig (IB-RS-2) and the kidney of the Siberian mountain ibex (PSGK-30) .
Для изготовления вакцины в качестве чувствительной биологической системы используют предпочтительно перевиваемую суспензионную культуру клеток ВНК-21/2-17, а в качестве поддерживающей среды применяют раствор Эрла без внесения сыворотки с добавлением ФГМС, ГБКС и антибиотиков при рН среды 7,4-7,6. Инактивацию вируса проводят с использованием аминоэтилэтиленимина (АЭЭИ) с концентрацией 0,025-0,050% от объема вируссодержащей суспензии. Инактивированный антиген очищают от балластных примесей с помощью ПГМГ, который вносят в суспензию до концентрации 0,007% от общего объема.For the manufacture of a vaccine, a preferably transplantable suspension culture of VNK-21/2-17 cells is used as a sensitive biological system, and Earle's solution without serum addition with the addition of FGMS, GBCS and antibiotics is used as a supporting medium at a pH of 7.4-7.6 . Virus inactivation is carried out using aminoethylethyleneimine (AEEI) with a concentration of 0.025-0.050% of the volume of the virus-containing suspension. The inactivated antigen is purified from ballast impurities using PHMG, which is added to the suspension to a concentration of 0.007% of the total volume.
Авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма А 2205/G IV представляет собой суспензию, содержащую инактивирвоанный 146S иммуногенный компонент вируса ящура. Содержание компонента в продукте оценивают с помощью количественного варианта реакции связывания комплемента (РСК) [24]. Для приготовления вакцины используют вирусный материал, содержащий в 1,0 см3 не менее 1,5 мкг инактивированного 146S иммуногенного компонента вируса ящура. Необходимую концентрацию инактивированного 146S компонента в вакцинном препарате обеспечивают благодаря концентрированию антигена с использованием тангенциальной установки фильтрации.Avirulent and purified antigenic material from
Вакцину для ранней защиты против ящура типа А инактивированную культуральную эмульсионную получают путем диспергирования при помощи гомогенизатора концентрата антигена (инактивированный 146S иммуногенный компонент) и масляного адъюванта в соотношении 1:1 по массе, соответственно. Для усиления иммунного ответа используют масляный адъювант Montanide ISA-206 VG («Seppic», Франция). Полученная вакцина представляет собой молокоподобную суспензию, не растворимую в воде.An inactivated culture emulsion vaccine for early protection against foot-and-mouth disease type A is prepared by dispersing an antigen concentrate (inactivated 146S immunogenic component) and an oil adjuvant in a ratio of 1:1 by weight, respectively, with a homogenizer. The oil adjuvant Montanide ISA-206 VG (Seppic, France) is used to enhance the immune response. The resulting vaccine is a milky suspension, insoluble in water.
Предлагаемое изобретение включает следующую совокупность существенных признаков, обеспечивающих получение технического результата во всех случаях, на которые спрашивается правовая охрана:The proposed invention includes the following set of essential features that provide a technical result in all cases for which legal protection is requested:
1. Вакцина инактивированная культуральная эмульсионная для ранней защиты против ящура типа А.1. Inactivated culture emulsion vaccine for early protection against FMD type A.
2. Активное вещество в виде авирулентного и очищенного антигенного материала из гомологичного возбудителю заболевания штамма A 2205/G IV вируса ящура в эффективном количестве.2. Active substance in the form of an avirulent and purified antigenic material from foot-and-mouth disease virus homologous to the causative agent of the
3. Целевые добавки.3. Target additives.
Существенные отличительные признаки предлагаемой вакцины заключаются в том, что в качестве активного вещества она содержит авирулентный очищенный антигенный материал из штамма А 2205/G IV в эффективном количестве.The essential distinguishing features of the proposed vaccine are that it contains avirulent purified antigenic material from
Предлагаемое изобретение характеризуется также другими отличительными признаками, выражающими конкретные формы выполнения или особые условия его использования:The present invention is also characterized by other distinctive features that express specific forms of implementation or special conditions for its use:
• Авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма A 2205/G IV вируса ящура типа А, полученный предпочтительно в суспензионной перевиваемой клеточной линии ВНК-21/2-17 и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S иммуногенный компонент вируса ящура в эффективном количестве.• Avirulent and purified antigenic material from
• Авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма A 2205/G IV вируса ящура типа А, полученный предпочтительно в суспензионной перевиваемой культуре клеток ВНК-21/2-17 и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S иммуногенный компонент вируса ящура в количестве не менее 6,0 мкг в 1,0 см3 готового вакцинного препарата.• Avirulent and purified antigenic material from
• Из целевых добавок вакцина содержит масляный адъювант.• Of the targeted additives, the vaccine contains an oil adjuvant.
• Из целевых добавок вакцина содержит масляный адъювант Montanide ISA-206 VG.• Of the targeted additives, the vaccine contains the oil adjuvant Montanide ISA-206 VG.
• Вакцина содержит масляный адъювант Montanide ISA-206 в количестве 500000,0-575000,0 мкг в 1,0 см3 готового препарата.• The vaccine contains Montanide ISA-206 oil adjuvant in the amount of 500,000.0-575,000.0 µg per 1.0 cm 3 of the finished product.
• Авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма A 2205/G IV вируса ящура, полученного предпочтительно в суспензионной перевиваемой культуре клеток ВНК-21/2-17 и масляный адъювант Montanide ISA-206 VG в количестве, мкг/см3 готового препарата:• Avirulent and purified antigenic material from FMD
Предлагаемая вакцина обладает высокой иммуногенной активностью и обеспечивает надежную раннюю защиту против вируса ящура типа А, циркулирующего в странах Северо-Восточной Африки.The proposed vaccine has a high immunogenic activity and provides reliable early protection against FMDV type A, circulating in the countries of North-East Africa.
Достижение технического результата от использования изобретения обеспечивается тем, что в состав предлагаемой противоящурной вакцины в качестве активного вещества введен антигенный материал из штамма A 2205/G IV инактивированного вируса ящура, обладающий высокой иммуногенной активностью, создающий эффективную раннюю защиту восприимчивых животных против вируса ящура серотипа А, вызывающего в последние годы вспышки заболевания в странах Северо-Восточной Африки.The achievement of the technical result from the use of the invention is ensured by the fact that the antigenic material from
Сущность изобретения отражена на графических изображениях:The essence of the invention is reflected in the graphics:
Фиг. 1 - Выравнивание нуклеотидных последовательностей гена 1D вируса ящура вакцинного штамма А22 Ирак 24/64 и щтамма A 2205/G IV (позиции 1…639 и.о.).Fig. 1 - Alignment of the nucleotide sequences of the 1D gene of foot-and-mouth disease virus of the vaccine
Фиг. 2 - Степень идентичности нуклеотидных последовательностей гена 1D вируса ящура вакцинного штамма А22 Ирак 24/64 и штамма A 2205/G IV.Fig. 2 - The degree of identity of the nucleotide sequences of the 1D gene of foot-and-mouth disease virus vaccine
Фиг. 3 - Нуклеотидная последовательность гена 1D вируса ящура штамма А 2205/G IV.Fig. 3 - Nucleotide sequence of the 1D gene of foot-and-mouth disease
Фиг. 4 - Выравнивание аминокислотных последовательностей белка VP1 вируса ящура вакцинного штамма А22 Ирак 24/64 и штамма A 2205/G IV (213 аминокислот).Fig. 4 - Alignment of the amino acid sequences of the VP1 protein of the FMDV vaccine
Фиг. 5 - Аминокислотная последовательность белка VP1 вируса ящура штамма A 2205/G IV.Fig. 5 - Amino acid sequence of the VP1 protein of foot-and-mouth disease
Фиг. 6 - Положение штамма A 2205/G IV на филогенетическом древе вируса ящура типа А. Дендрограмма основана на сравнении полных нуклеотидных последовательностей гена 1D (белок VP1).Fig. 6 - Position of
Фиг. 7 - Положение штамма A 2205/G IV на филогенетическом древе вируса ящура типа А топотипа AFRICA. Дендрограмма основана на сравнении полных нуклеотидных последовательностей гена 1D (белок VP1).Fig. 7 - Position of
Фиг. 8 - Степень идентичности нуклеотидных последовательностей гена 1D вируса ящура референтного штамма А/21 Kenya_iso 77 и штамма A 2205/G IV.Fig. 8 - The degree of identity of the nucleotide sequences of the 1D gene of foot-and-mouth disease virus of the reference strain A/21
Фиг. 9 - Кинетика инактивации вируса ящура штамма A 2205/G IV.Fig. 9 - Kinetics of inactivation of foot-and-mouth disease
Сущность изобретения пояснена следующими перечнями последовательностей:The essence of the invention is illustrated by the following sequence listings:
SEQ ID NO: 1 представляет последовательность нуклеотидов гена белка VP1 штамма A 2205/G IV вируса ящура типа А;SEQ ID NO: 1 represents the nucleotide sequence of the VP1 protein gene of
SEQ ID NO: 2 представляет последовательность аминокислот гена белка VP1 штамма А 2205/GIV вируса ящура типа А.SEQ ID NO: 2 represents the amino acid sequence of the VP1 protein gene of
Штамм A 2205/G IV вируса ящура характеризуется следующими признаками и свойствами.A 2205/G IV strain of FMDV is characterized by the following features and properties.
Морфологические признакиMorphological features
Штамм вируса ящура A 2205/G IV типа А относится к семейству Picornaviridae, роду Aphthovirus, серотипу А и обладает морфологическими признаками, характерными для возбудителя ящура: форма вириона икосаэдрическая, размер 22-25 нм. Вирион вируса ящура имеет диаметр около 23-25 нм [25].The FMD
Антигенные свойстваAntigenic properties
По своим антигенным свойствам штамм вируса ящура A 2205/G IV вируса ящура относится к серотипу А. Вирус ящура стабильно нейтрализуется гомологичной антисывороткой. Вирус не проявляет гемагглютинирующей активности (ГА-активности). У переболевших животных в сыворотке крови образуются типоспецифические антитела, выявляемые в иммуноферментном анализе, реакции связывания комплемента и нейтрализации.According to its antigenic properties, the foot-and-mouth disease
Методом нуклеотидного секвенирования была определена первичная структура гена VP1 штамма вируса ящура A 2205/G IV. Сравнительный анализ нуклеотидных последовательностей показал, что штамм A 2205/G IV принадлежит к генетической линии GIV топотипа AFRICA.The primary structure of the VP1 gene of the
Антигенное родство штамма ВЯ A 2205/G IV с имеющимися производственными штаммами ВЯ серотипа А исследовано серологическим методом в перекрестной реакции микронейтрализации (РМН матчинг) в соответствии с «Методическими указаниями по определению антигенного соответствия между эпизоотическими изолятами и производственными штаммами вируса ящура в перекрестной реакции микронейтрализации» [25]. Штамм А 2205/G IV антигенно отличается от производственных штаммов А №550/Азербайджан/64 (генетическая линия A/ASIA/Iraq-64), А22 Ирак 24/64 (генетическая линия генетическая линия A/ASIA/Iraq-64), А/Иран/97 (генетическая линия A/ASIA/Iran-96), А/Турция/06 (генетическая линия A/ASIA/Iran-05), А №2155/Забайкальский/2013 (генетическая линия A/ASIA/Sea-97), А №2166/Краснодарский/2013 (генетическая линия A/ASIA/Iran-05), А №2269/ВНИИЗЖ/2015 (генетическая линия A/ASIA/G VII).The antigenic relationship of the
Результаты исследований в РМН представлены в таблице 1. Антигенное соответствие (r1) составило для А №550/Азербайджан/64 - 0,22; А22 Ирак 24/64 - 0,15; А/Иран/97 - 0,21; А/Турция/06 - 0,08; А №2155/Забайкальский/2013 - 0,06; А №2166/Краснодарский/2013 - 0,19; А №2269/ВНИИЗЖ/2015 - 0,25.The results of studies in the RMN are presented in table 1. Antigenic correspondence (r 1 ) was for A No. 550/Azerbaijan/64 - 0.22;
При значении r1>0,3 полевой изолят и производственный штамм являются близкородственными, и вакцина из производственного штамма будет защищать от эпизоотического вируса, при значении r1<0,3 полевой изолят отличается от производственного штамма, и вакцина из данного штамма не защищает от эпизоотического вируса.If r 1 >0.3, the field isolate and the production strain are closely related, and the vaccine from the production strain will protect against the epizootic virus, if r 1 <0.3, the field isolate differs from the production strain, and the vaccine from this strain does not protect against epizootic virus.
Биотехнологические характеристикиBiotechnological characteristics
Штамм вируса ящура A 2205/G IV репродуцируется в перевиваемой культуре клеток почки новорожденного сирийского хомячка (ВНК-21). В течение 17-20 часов культивирования титр инфекционной активности вируса достигает значений от 6,42 до 6,75 lg ТЦД50/0,1 см3 (таблица 6) и сохраняет исходные характеристики при пассировании в клеточных культурах на протяжении 15 пассажей (срок наблюдения).The foot-and-mouth disease
Гено- и хемотаксономическая характеристика.Geno- and chemotaxonomic characteristics.
Штамм A 2205/G IV вируса ящура является РНК-содержащим вирусом с молекулярной массой 7×106Д.The FMD
Нуклеиновая кислота представлена одноцепочечной линейной позитивной молекулой РНК с молекулярной массой 2,8×106Д и длиной 8500 н.о. Вирион имеет белковую оболочку, состоящую из четырех основных белков VP1, VP2, VP3 и VP4. Липопротеидная оболочка отсутствует.Nucleic acid is represented by a single-stranded linear positive RNA molecule with a molecular weight of 2.8×10 6 D and a length of 8500 n. The virion has a protein coat consisting of four major proteins VP 1 , VP 2 , VP 3 and VP 4 . The lipoprotein membrane is absent.
Основным антигенным белком является белок VP1. В вирионе содержится приблизительно 31,5% РНК и 68,5% белка. Вирионная РНК является инфекционной и участвует в образовании белков-предшественников в инфицированных клетках. Предшественники, в свою очередь, расщепляются с образованием более стабильных структурных и неструктурных полипептидов вируса. Из 8 неструктурных полипептидов, накапливающихся в инфицированных клетках, один (VP66a) является РНК-зависимой РНК-полимеразой, участвующей в репликации РНК новых вирионов.The main antigenic protein is the VP 1 protein. The virion contains approximately 31.5% RNA and 68.5% protein. Virion RNA is infectious and is involved in the formation of precursor proteins in infected cells. The precursors, in turn, are cleaved to form more stable structural and non-structural virus polypeptides. Of the 8 non-structural polypeptides that accumulate in infected cells, one (VP 66a ) is an RNA-dependent RNA polymerase involved in RNA replication of new virions.
При репродукции в биосистеме вирус ящура образует 4 варианта компонентов: 146S частицы (вирионы), состоящие из одной молекулы вирусной РНК и 60 копий полипептида, каждая из которых представлена комплексом белков VP1-VP2-VP3-VP4; 75S компонент, лишенный РНК и включающий в себя 60 копий полипептида VP1-VP3-VP0; 12S частицы, представленные белками VP1, VP2, VP3; 3,8S субъединицы, состоящие из неструктурного белка VPg. Белковая оболочка состоит из 32 капсомеров, расположенных в кубической симметрии.During reproduction in the biosystem, the FMD virus forms 4 variants of the components: 146S particles (virions) consisting of one viral RNA molecule and 60 copies of the polypeptide, each of which is represented by a complex of proteins VP 1 -VP 2 -VP 3 -VP 4 ; 75S component, devoid of RNA and including 60 copies of the polypeptide VP 1 -VP 3 -VP 0 ; 12S particles represented by proteins VP 1 , VP 2 , VP 3 ; 3,8S subunits, consisting of the non-structural protein VP g . The protein shell consists of 32 capsomeres arranged in cubic symmetry.
Физические свойства.physical properties.
Масса вириона составляет 8,4×10-18 г. Плавучая плотность 1,45 г/см3.The mass of the virion is 8.4×10 -18 g. The floating density is 1.45 g/cm 3 .
Устойчивость к внешним факторам.Resilience to external factors.
Штамм вируса ящура A 2205/G IV устойчив к эфиру, хлороформу, фреону, ацетону и другим органическим растворителям и детергентам. Наиболее стабилен при рН 7,5-7,8. Сдвиги рН как в кислую, так и в щелочную сторону ведут к инактивации вируса. Чувствителен к щелочам, кислотам, формальдегиду, УФ-облучению, γ-облучению, действию высоких температур.The foot-and-mouth disease
Дополнительные признаки и свойства.Additional signs and properties.
Реактогенность - реактогенными свойствами не обладает.Reactogenicity - does not possess reactogenic properties.
Патогенность - патогенен для парнокопытных животных.Pathogenicity - pathogenic for artiodactyl animals.
Вирулентность - вирулентен для естественно-восприимчивых животных при контактном, аэрозольном и парентеральном заражении.Virulence - virulent for naturally susceptible animals with contact, aerosol and parenteral infection.
Стабильность - сохраняет исходные биологические свойства при пассировании в чувствительных биологических системах в течение 15 пассажей на перевиваемой культуре клеток ВНК-21 (срок наблюдения).Stability - retains the original biological properties when passaged in sensitive biological systems for 15 passages on a continuous cell culture VNK-21 (observation period).
При испытании проведено 15 последовательных пассажей штамма A 2205/G IV вируса ящура в перевиваемой культуре клеток ВНК-21. Для определения биологической активности проводили титрование вируса каждого пассажа в перевиваемой культуре клеток IB-RS-2.When testing, 15 consecutive passages of the
Исходя из полученных данных, можно утверждать, что штамм A 2205/G IV вируса ящура по антигенному и иммунологическому спектрам является оригинальным, в таксономическом отношении новым, ранее неизвестным вариантом вируса ящура типа А, обладает более высокой протективной и иммуногенной активностью.Based on the data obtained, it can be argued that the
Для снижения эпизоотической опасности ящура типа А и предотвращения возникновения новых очагов болезни важна своевременная вакцинопрофилактика, что требует разработки высокоиммуногенной вакцины.To reduce the epizootic danger of FMD type A and prevent the emergence of new foci of the disease, timely vaccination is important, which requires the development of a highly immunogenic vaccine.
Получена высокоиммуногенная инактивированная культуральная эмульсионная вакцина для ранней защиты против ящура типа А из штамма A №2205/G IV.A highly immunogenic inactivated cultural emulsion vaccine for early protection against FMD type A from strain A No. 2205/G IV was obtained.
Сущность предлагаемого изобретения пояснена примерами его использования, которые не ограничивают объем изобретения.The essence of the invention is illustrated by examples of its use, which do not limit the scope of the invention.
Пример 1. Генетическая характеристика штамма A 2205/G IV вируса ящура по результатам ПНР и нуклеотидного секвенированияExample 1. Genetic characterization of
Проведенные исследования заключались в изучении первичной структуры гена 1D (белок VP1) (652 и.о.) штамма A 2205/G IV вируса ящура методом нуклеотидного секвенирования методом Сенгера и определении положения данного штамма на филогенетическом древе вируса ящура типа А. Метод основан на определении первичной структуры гена 1D испытуемого изолята с последующим анализом филогенетического родства с другими изолятами вируса ящура типа А.The studies carried out included studying the primary structure of the 1D gene (VP 1 protein) (652 b.i.) of the
Было необходимо провести сравнительный анализ нуклеотидных последовательностей гена 1D, кодирующего белок VP1 вируса ящура референтного вакцинного штамма А22 Ирак 24/64 и исследуемого штамма A 2205/G IV. В базе данных GeneBank была найдена последовательность полного генома вируса ящура штамма А22 Ирак 24/64 (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/KY825717.1), которая была взята в качестве матрицы для сравнения с полным сиквенсом гена 1D вируса ящура штамма A 2205/G IV. Полная последовательность всего генома вируса ящура штамма А22 Ирак 24/64 (первая последовательность) и последовательность гена 1D вируса ящура штамма A 2205/G IV (вторая последовательность) были внесены в программу BioEdit.It was necessary to conduct a comparative analysis of the nucleotide sequences of the 1D gene encoding the FMDV VP1 protein of the reference vaccine
Проведено выравнивание второй последовательности по первой. Лишние фрагменты удалены, поскольку вторая последовательность имеет длину 652 н.о. Далее по выравненным последовательностям проводили сравнительный анализ для оценки нуклеотидных замен. Полученные данные представлены на фиг. 1.The second sequence was aligned with the first one. Extra fragments are removed because the second sequence is 652 bp long. Next, a comparative analysis was performed on the aligned sequences to evaluate nucleotide substitutions. The data obtained is shown in Fig. one.
Определили степень родства между генами 1D штамма А22 Ирак 24/64 и штамма A 2205/G IV вируса ящура. По данным анализа степень идентичности составила 0,798 или 79,8% (фиг. 2). Степень различий по гену 1D - 20,2%.The degree of relationship between the genes of the 1D
Нуклеотидная последовательность гена 1D штамма A 2205/G IV вируса ящура представлена на фиг. 3.The nucleotide sequence of the 1D gene of the
Проводили сравнительный анализ аминокислотных последовательностей белка VP1 вакцинного штамма А22 Ирак 24/64 и штамма A 2205/G IV. Первая последовательность выбрана в качестве референтной, относительно нее выявлены аминокислотные замены, которые представлены на фиг. 4 и в таблице 2.A comparative analysis of the amino acid sequences of the VP1 protein of the
Из 213 аминокислот 32 заменены, т.е. процент идентичности белка VP1 вакцинного и исследуемого штаммов составляет 85%, степень различий - 15%.Of the 213 amino acids, 32 are replaced, i.e. the percentage of identity of the VP1 protein of the vaccine and the studied strains is 85%, the degree of difference is 15%.
Аминокислотная последовательность белка VP1 штамма A 2205/G IV представлена на фиг. 5.The amino acid sequence of the VP1 protein of
Проведен филогенетический анализ штамма A 2205/G IV. Филогенетическое дерево выведено с использованием программы MEGA6 и алгоритма Neighbor-Joining [26]. Процент повторяющихся ветвей, в которых связанные таксоны сгруппированы вместе в тесте начальной загрузки (100 повторов), показан рядом с ветвями [27]. Эволюционные расстояния были рассчитаны с использованием метода Maximum Composite Likelihood [28] и выражены в единицах количества замен оснований на сайт. Этот анализ включал 31 нуклеотидную последовательность. Все позиции, содержащие пробелы и отсутствующие данные, были удалены (вариант полного удаления). В окончательном наборе данных было всего 632 позиции. Эволюционный анализ проводился в MEGA 6 [29].A phylogenetic analysis of
В результате проведенной работы по сравнению полных нуклеотидных последовательностей гена 1D (белок VP1) штамма A 2205/G IV и других изолятов/штаммов вируса ящура типа А определено положение исследуемого изолята на филогенетическом древе (фиг. 6).As a result of the comparison of the complete nucleotide sequences of the 1D gene (VP 1 protein) of
Изучение первичной структуры участка генома методом нуклеотидного секвенирования показало, что штамм A 2205/G IV вируса ящура принадлежит к типу А, топотипу AFRICA и генетической линии G IV.The study of the primary structure of the genome region by nucleotide sequencing showed that the
Отдельно представлена дендрограмма для типа А топотипа AFRICA (фиг. 7). Филогенетическое древо построено в данном случае с помощью численного ресэмплинга («Boostrap»), с указание boostrap-критерия. Указанный практический компьютерный метод исследования позволяет проводить распределение статистик вероятностных распределений, основанный на многократной генерации выборок на базе имеющейся выборки. Численный ресэмплинг дает возможность просто и быстро оценивать статистики рассматриваемых последовательностей нуклеотидов для сложных моделей. Общее количество событий для анализа составило 100. В качестве референтной последовательности использовали последовательность изолята А/21 Kenia_iso 77 (номер последовательности в GeneBankAY593761.1) в соответствии с рекомендациями OIE/FAOReferenceLaboratoryNetworkibrFMD. FMDV prototype strains (https://www.foot-and-mouth.org/FMDV-nomenclature-working-group/prototype-strains).The dendrogram for type A of the AFRICA topotype is shown separately (Fig. 7). The phylogenetic tree was constructed in this case using numerical resampling ("Boostrap"), with the boostrap criterion specified. The specified practical computer method of research allows to carry out the distribution of statistics of probability distributions, based on multiple generation of samples based on the existing sample. Numerical resampling makes it possible to easily and quickly estimate the statistics of the considered nucleotide sequences for complex models. The total number of events for analysis was 100. The sequence of isolate A/21 Kenia_iso 77 (sequence number in GeneBank AY593761.1) was used as a reference sequence in accordance with the recommendations of OIE/FAOReferenceLaboratoryNetworkibrFMD. FMDV prototype strains (https://www.foot-and-mouth.org/FMDV-nomenclature-working-group/prototype-strains).
Определили степень родства между генами 1D референтного изолята А/21 Kenya_iso 77 и исследуемого штамма A 2205/G IV вируса ящура. По данным анализа степень идентичности составила 0,812 или 81,2% (фиг. 8). Степень различий по гену 1D - 18,8%.The degree of relationship between the 1D genes of the reference isolate A/21
По результатам всего анализа делаем вывод, что исследуемый изолят типа А относится к топотипу AFRICA генетической линии G IV, что подтверждают данные нуклеотидного, аминокислотного и общего филогенетического исследования.Based on the results of the entire analysis, we conclude that the type A isolate under study belongs to the AFRICA topotype of the G IV genetic line, which is confirmed by the data of the nucleotide, amino acid and general phylogenetic studies.
Пример 2. Адаптация штамма A 2205/G IV к перевиваемой суспензионной культуре клеток почки новорожденного сирийского хомячка ВНК-21Example 2. Adaptation of
Для заражения клеток почки новорожденного сирийского хомячка ВНК-21 использовали 10%-ную афтозную суспензию вируса ящура, полученную из афт КРС (2 пассаж), зараженного вирусом ящура штаммом A 2205/G IV. Посевная концентрация клеток составляла 0,15-0,20 млн кл./см3, доза заражения вирусом - 0,01 ТЦД50/кл. Результаты репродукции культурального вируса ящура штамма А 2205/G IV в монослойной клеточной линии ВНК-21 продемонстрированы в таблице 3.To infect kidney cells of a newborn Syrian hamster VNK-21, a 10% aphthous suspension of foot-and-mouth disease virus obtained from aft cattle (2nd passage) infected with foot-and-mouth disease
Из данных таблицы 3 следует, что репродукция вируса ящура штамма A 2205/G IV проходила при специфическом разрушении монослоя на 90-100% за 16-22 ч. В течение 6 последовательных пассажей отмечали рост значений титра инфекционной активности вируса от 5,08±0,30 до 6,75±0,14 lg ТЦД50/0,1 см3.From the data of Table 3 it follows that the reproduction of
Максимальное значение титра вируса было достигнуто на этапе 6 пассажа (6,75±0,14 lg ТЦД50/0,1 см3). Концентрация 146S частиц с 1 по 6 пассажи изменялась с 0,40±0,13 до 1,25±0,03 мкг/см3. При этом наибольшее количество 146S иммуногенного компонента отмечали на этапе 5-6 пассажей (1,25±0,03 мкг/см3). Степень достоверности (R2) результатов исследования в количественном варианте ОТ-ПЦР-РВ колебалась от 95,28 до 99,79%. Таким образом, на протяжении 6-ти последовательных пассажей была успешно проведена адаптация штамма A 2205/G IV вируса ящура к суспензионной перевиваемой клеточной линии ВНК-21.The maximum value of the virus titer was reached at the stage of passage 6 (6.75±0.14 lg TCD 50 /0.1 cm 3 ). The concentration of 146S particles from
Пример 3. Изучение условий монослойного культивирования вируса ящура штамма A 2205/G IV в промышленных масштабахExample 3. Study of conditions for monolayer cultivation of
В процессе промышленного культивирования вируса ящура штамма A 2205/G IV в монослойной перевиваемой культуре клеток ВНК-21 осуществляли подбор оптимальных условий культивирования вируса, анализируя разный состав поддерживающей среды, температурный фактор и дозу заражения клеток.In the process of industrial cultivation of foot-and-mouth disease
На первом этапе исследования оценивали влияние состава поддерживающей среды на репродукцию вируса ящура штамма А 2205/G IV в монослойной культуре клеток ВНК-21 в масштабах производства (на этапе с 5-ого на 6-ой пассажи). Для сравнения применяли три среды с добавлением 2% фетальной сыворотки крови телят: 1) среда Игла MEM; 2) среда RPMI-1640; 3) раствор Хенкса с 2,5% ГБК. Посевная концентрация клеток составляла 0,15-0,20 млн кл./см3, доза заражения вирусом - 0,1-0,0001 ТЦД50/кл. Культивирование вируса осуществляли при температурах 35-38±0,2°С до разрушения клеточного монослоя на 90-100% в течение 16-32 ч. Результаты репродукции штамма А 2205/G IV вируса ящура с поддерживающими средами разного состава отражены в таблице 4.At the first stage of the study, the influence of the composition of the supporting medium on the reproduction of foot-and-mouth disease
Из данных таблицы 4 видно, что при репродукции вируса ящура штамма A 2205/G IV в монослойной культуре клеток ВНК-21 с применением поддерживающих сред разного состава, оптимальной является среда Игла MEM, позволяющая за 16-18 ч достичь специфического разрушения клеточного монослоя на 95-100% с накоплением в полученной суспензии 146S компонента в количестве 1,12±0,04 мкг/см3 и титром инфекционной активности 6,42±0,22 lg ТЦД50/0,1 см3. При использовании среды RPMI-1640 и раствора Хенкса с добавлением 2,5% ГБК показатели репродукции вируса были ниже на 28,6 и 17%, соответственно.From the data of Table 4 it can be seen that during the reproduction of foot-and-mouth disease
На следующем этапе изучения условий монослойного культивирования штамма A 2205/G IV вируса ящура в культуре клеток ВНК-21 в условиях производства оценивали влияние на процесс репродукции вируса температурного фактора. Для этого культивирование вируса проводили на среде Игла MEM с 2% сыворотки КРС при следующих температурах: 35,0±0,2; 36,0±0,2; 37,0±0,2; 38,0±0,2°С. В качестве поддерживающей среды использовали среду Игла MEM с добавлением 2% сыворотки крови КРС. Доза заражения культуры клеток вирусом составляла 0,010-0,001 ТЦД50/кл. Культивирование вируса осуществляли до разрушения клеточного монослоя на 80-100% в течение 16-27 ч (таблица 4). По итогам исследования выявили, что для полной репродукции штамма A 2205/G IV вируса ящура в монослойной культуре клеток ВНК-21 оптимальной является температура среды 37,0±0,02°С, при которой за 16-20 ч развитие ЦПД достигало 95-100% с накоплением 146S частиц, равным 1,13±0,10 мкг/см3 и титром вируса 6,25±0,14 lg ТЦД50/0,1 см3.At the next stage of studying the conditions of monolayer cultivation of the
Оценивали также влияние дозы заражения монослоя клеток линии ВНК-21 штаммом А 2205/GIV при культивировании в масштабах производства. Для этого использовали разные дозы вируса: 0,10-0,01; 0,010-0,001; 0,0010-0,0001 ТЦД50/кл. В качестве поддерживающей среды применяли среду Игла MEM. Репродукцию вируса проводили при температуре 37,0±0,2°С в течение 18-32 ч до специфического разрушения клеток на 90-100%. По итогам культивирования определяли концентрацию 146S компонента и титр инфекционной активности вируса ящура. Как следует из данных таблицы 4, наибольшее накопление «полных» частиц вируса достигалось при дозе заражения 0,1-0,01 ТЦД50/кл. и составило 1,02±0,03 мкг/см3 с титром вируса, равным 6,75±0,14 lg ТЦД50/см3.The influence of the dose of infection of a monolayer of cells of the BHK-21 line with
Таким образом, проведено изучение условий монослойного культивирования штамма A 2205/G IV в культуре клеток ВНК-21 в промышленных масштабах. В результате исследования определены следующие оптимальные параметры репродукции штамма A 2205/G IV в монослойной клеточной линии ВНК-21: 1) поддерживающая среда - среда Игла MEM; 2) температурный режим культивирования - 37,0±0,02°С; 3) доза заражения вирусом -0,1-0,01 ТЦД50/кл.Thus, we studied the conditions of monolayer cultivation of the
Пример 4. Изучение условий суспензионного культивирования штамма A №2205/G IV вируса ящура в промышленных масштабахExample 4. Study of the conditions of suspension cultivation of strain A No. 2205/G IV of foot and mouth disease virus on an industrial scale
При промышленном культивировании штамма A 2205/G IV в суспензионной перевиваемой культуре клеток ВНК-21 проводили поиск оптимальных параметров для успешной репродукции возбудителя ящура, используя разные концентрации клеток, температуру и дозу заражения.During the industrial cultivation of the
На первом этапе работы определяли влияние посевной концентрации клеток линии ВНК-21 в суспензии на репродукцию штамма A 2205/G IV вируса ящура в промышленных масштабах. Для анализа подготовили суспензии со следующими концентрациями клеток: 2,5; 3,0; 3,5; 4,0 млн кл./см3. Водородный показатель рН поддерживали в диапазоне 7,45-7,60. Температура культивирования вируса составляла 37,0±0,02°С, доза заражения вирусом - 0,1-0,01 ТЦД50/кл. Репродукцию вируса проводили до специфической гибели клеток на 95-100%, которая осуществлялась в течение 16-20 ч. Результаты суспензионного культивирования штамма A 2205/G IV вируса ящура в суспензии с разными концентрациями клеток представлены в таблице 5.At the first stage of the work, the effect of the seed concentration of VNK-21 cells in suspension on the reproduction of the
Как следует из таблицы 5, при культивировании вируса ящура штамма А 2205/G IV в суспензионной клеточной линии ВНК-21 с разными концентрациями клеток, определили, что накопление 146S компонента в суспензии с концентрацией клеток 2,5 млн кл./см3 составило 1,08±0,03 мкг/см3 (в пересчете на 1,0 млн кл./см3 - 0,43±0,03 мкг/см3), с концентрацией 3,0 млн кл./см3 - 1,34±0,10 мкг/см3 (в пересчете на 1,0 млн кл./см3 - 0,45±0,10 мкг/см3), с концентрацией 3,5 млн кл./см3 - 1,96±0,02 мкг/см3 (в пересчете на 1,0 млн кл./см3 - 0,56±0,02 мкг/см3), и с концентрацией 4,0 млн кл./см3 - 1,97±0,19 мкг/см3 (в пересчете на 1,0 млн кл./см3 - 0,49±0,19 мкг/см3). Как следует из полученных данных в пересчете на концентрацию 1,0 млн кл./см3 для репродукции штамма A 2205/G IV вируса ящура оптимальной является концентрация клеток ВНК-21 в суспензии, равная 3,5 млн кл./см3. Значение титра инфекционной активности вируса при этом также было наибольшим и составило 6,92±0,17 lg ТЦД50/0,1 см3.As follows from table 5, when cultivating foot-and-mouth disease
На следующем этапе работы исследовали влияние фактора температуры на суспензионное культивирование штамма A 2205/G IV вируса ящура в культуре клеток ВНК-21 в промышленных масштабах. Для этого репродукцию вируса проводили при следующих температурных условиях: 35,0±0,2; 36,0±0,2; 37,0±0,2; 38,0±0,2°С. Доза заражения культуры клеток вирусом составляла 0,10-0,01 ТЦД50/кл. Водородный показатель рН вирусной суспензии поддерживали в диапазоне 7,45-7,60. Культивирование вируса проводили до ЦПД, равного 90-100%, в течение 16-28 ч. По результатам анализа определили, что для полной репродукции штамма A 2205/G IV вируса ящура в суспензионной культуре клеток ВНК-21 оптимальной является температура среды 37,0±0,02°С, при которой в течение 16-18 ч наблюдается специфическая гибель клеток на 95-100% с высоким накоплением 146S компонента (1,97±0,11 мкг/см3) и титром инфекционной активности вируса 6,75±0,29 lg ТЦД50/0,1 см3.At the next stage of the work, the influence of the temperature factor on the suspension cultivation of the
В ходе работы по изучению условий суспензионного культивирования штамма A 2205/G IV вируса ящура в промышленных масштабах с применением культуры клеток ВНК-21 оценивали влияние дозы заражения клеток. Для этого клеточные суспензии заражали вирусом в разных дозах: 0,10-0,01; 0,01-0,001; 0,001-0,0001 ТЦД50/кл. Репродукцию вируса осуществляли при температуре 37,0±0,2°С в течение 19-29 ч до ЦПД, равного 90-95%. По итогам культивирования определяли концентрацию 146S частиц и титр вируса ящура. Как видно из данных таблицы 5, наибольшее накопление 146S компонента отмечали при дозе заражения 0,10-0,01 ТЦД50/кл. (1,91±0,12 мкг/см3) с титром инфекционной активности вируса, равным 6,75±0,38 lg ТЦД50/см3.In the course of the work on the study of the conditions of suspension cultivation of the
Таким образом, проведено изучение параметров суспензионного культивирования штамма А 2205/GIV вируса ящура в клеточной линии ВНК-21 в промышленных масштабах. Выявлены оптимальные условия репродукции штамма A 2205/G IV в суспензионной культуре клеток ВНК-21: 1) концентрация клеток перед заражением - 3,5 млн кл./см3; 2) температурный режим культивирования - 37,0±0,02°С; 3) доза заражения вирусом - 0,10-0,01 ТЦД50/кл.Thus, we studied the parameters of suspension cultivation of the
Пример 5. Изучение стабильности репродукции штамма A 2205/G IV вируса ящура в течение 15 последовательных пассажейExample 5. Study of the reproduction stability of the FMD
После адаптации штамма A 2205/G IV вируса ящура к монослойной перевиваемой клеточной линии ВНК-21 провели изучение стабильности репродукции вируса данного штамма в суспензионной культуре клеток ВНК-21 в течение 15 последовательных пассажей.After adapting
Для заражения клеток ВНК-21 использовали вирус ящура, полученный в 6 пассаже с монослойной культуры клеток ВНК-21, где накопление 146S компонента составило 1,25±0,03 мкг/см3, а значение титра инфекционной активности вируса - 6,75±0,14 lg ТЦД50/см3. Концентрация клеток ВНК-21 до заражения была равна 3,5 млн кл./см3, доза заражения вирусом - 0,01 ТЦД50/кл. Культивирование вируса проводили при температуре 37,0±0,2°C с поддержанием водородного показателя рН в диапазоне 7,45-7,60. По итогам каждого пассажа проводили определение концентрации 146S частиц и титр инфекционной активности вируса ящура. Результаты исследования показаны в таблице 6.To infect BHK-21 cells, foot-and-mouth disease virus obtained in the 6th passage from a monolayer culture of BHK-21 cells was used, where the accumulation of the 146S component was 1.25±0.03 µg/cm 0.14 lg TCD 50 / cm 3 . The concentration of BHK-21 cells prior to infection was 3.5 million cells/cm 3 , the virus infection dose was 0.01 TCD 50 /cell. The cultivation of the virus was carried out at a temperature of 37.0±0.2°C while maintaining the pH in the range of 7.45-7.60. Based on the results of each passage, the concentration of 146S particles and the titer of FMDV infectivity were determined. The results of the study are shown in table 6.
Из данных таблицы 6 следует, что репродукция штамма A №2205/G IV вируса ящура проходила при специфическом разрушении клеток в суспензии на 90-100% за 18-21 ч. В течение 1-15 последовательных пассажей значения титра инфекционной активности вируса незначительно колебались от 6,42±0,17 до 6,92±0,17 lg ТЦД50/0,1 см3. Среднее значение титра вируса составило 6,64±0,04 lg ТЦД50/0,1 см3. Максимальное значение титра вируса было достигнуто на этапе 6 пассажа (6,92 lg ТЦД50/0,1 см3). Концентрация 146S компонента в течение 15 пассажей изменялась с 1,40±0,10 до 1,84±0,13 мкг/см3. Среднее значение количества 146S частиц составляло 1,59±0,03 мкг/см3 (р<0,005). При этом наибольшее количество 146S иммуногенного компонента регистрировали на этапе 5 пассажа (1,84±0,13 мкг/см3).From the data of Table 6 it follows that the reproduction of strain A No. 2205/G IV of foot-and-mouth disease virus took place with specific destruction of cells in suspension by 90-100% for 18-21 hours. During 1-15 consecutive passages, the values of the titer of infectious activity of the virus slightly varied from 6.42±0.17 to 6.92±0.17 lg TCD 50 /0.1 cm3. The average value of the virus titer was 6.64±0.04 lg TCD 50 /0.1 cm 3 . The maximum value of the virus titer was reached at the stage of passage 6 (6.92 lg TCD 50 /0.1 cm 3 ). The concentration of the 146S component during 15 passages changed from 1.40±0.10 to 1.84±0.13 µg/cm 3 . The average value of the number of 146S particles was 1.59±0.03 µg/cm 3 (p<0.005). The largest amount of the 146S immunogenic component was recorded at the 5th passage (1.84±0.13 μg/cm 3 ).
Степень достоверности (R2) результатов исследования в количественном варианте ОТ-ПЦР-РВ была высокой и составляла 95,28-99,79%. Таким образом, на протяжении 15 последовательных пассажей отмечали стабильность репродукции штамма A 2205/G IV вируса ящура в суспензионной перевиваемой клеточной линии ВНК-21.The degree of reliability (R 2 ) of the results of the study in the quantitative version of RT-PCR-RT was high and amounted to 95.28-99.79%. Thus, over 15 successive passages, the stability of the reproduction of the
Пример 6. Изучение времени накопления штамма A 2205/G IV вируса ящура при суспензионном культивировании в клеточной линии ВНК-21Example 6. Study of the accumulation time of the
В процессе изучения биологических свойств штамма A 2205/G IV вируса ящура оценивали время его накопления при культивировании в суспензионной перевиваемой клеточной линии ВНК-21. Для заражения клеток использовали вирус ящура, полученный в 6 пассаже с монослойной культуры клеток ВНК-21. В данной суспензии концентрация 146S компонента составляла 1,25±0,03 мкг/см3, а титр вируса - 6,75±0,14 lg ТЦД50/см3. Для репродукции вируса ящура указанного штамма использовали суспензии с концентрациями клеток линии ВНК-21 до заражения - 3,5±0,1 млн кл./см3. Доза заражения вирусом составляла 0,01 ТЦД50/кл. Процесс репродукции вируса осуществляли при температуре 37,0±0,2°С с поддержанием значения рН в пределах от 7,45 до 7,60. Спустя 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 19, 20, 21, 22 ч после заражения клеток проводили отбор проб для определения концентрации 146S компонента и титра инфекционной активности вируса. Результаты анализа представлены в таблице 7.In the process of studying the biological properties of the
Из таблицы 7 следует, что через 6 часов после заражения суспензионной культуры клеток ВНК-21 штаммом A 2205/G IV отмечается специфическое разрушение клеток на 12-14%. При этом количество 146S компонента составляло 0,15±0,03 мкг/см3 при титре инфекционности 3,42±0,22 lg ТЦД50/0,1 см3. При исследовании материала, полученного после 8-20 ч репродукции, отмечали рост содержания 146S частиц в суспензиях с 0,24±0,04 до 1,55±0,10 мкг/см3 и увеличение титра инфекционной активности с 4,00±0,14 до 6,83±0,10 lg ТЦД50/0,1 см3. При этом ЦПД соответствовало значениям 95-100%. Спустя 21-23 ч после инфицирования количество разрушенных клеток составляло 98-100%, однако концентрация 146S компонента снизилась с 1,55±0,10 до 1,21±0,12 мкг/см3, а величина титра вируса уменьшилась с 6,83±0,10 до 6,50±0,14 lg ТЦД50/см3. Иными словами, наибольшее содержание 146S иммуногенного компонента и титра вируса определяли через 19-20 ч после заражения клеток. Степень достоверности (R2) результатов исследования в количественном варианте ОТ-ПЦР-РВ высокая и соответствовала 95,89-99,21%.From table 7 it follows that 6 hours after infection of the suspension culture of BHK-21 cells with
Таким образом, по результатам исследования определено оптимальное время репродукции штамма A 2205/G IV вируса ящура в суспензионной перевиваемой клеточной линии ВНК-21 для накопления достаточного для производства вакцины количества 146S компонента и достижения высокого значения титра инфекционной активности вируса.Thus, according to the results of the study, the optimal reproduction time of the
Пример 7. Инактивация вируса ящура штамма A 2205/G IVExample 7. Inactivation of foot-and-mouth disease
По окончании цикла репродукции вируса ящура, не прекращая процесс термостатирования, в вируссодержащую суспензию добавляли 15%-ный раствор аминоэтилэтиленимина (АЭЭИ), подкисленный ледяной уксусной кислотой, корректируя рН до 8,2-8,6. Конечная концентрация АЭЭИ в вируссодержащей суспензии должна быть равной 0,05%. Инактивацию инфекционности вируса ящура штамма A 2205/G IV проводили в течение 12 часов при температуре 36-37°С и рН 7,2-7,6 с перемешиванием.At the end of the FMDV reproduction cycle, without stopping the thermostating process, a 15% solution of aminoethylethyleneimine (AEEI) acidified with glacial acetic acid was added to the virus-containing suspension, adjusting the pH to 8.2-8.6. The final concentration of AEEI in the virus-containing suspension should be 0.05%. Inactivation of the infectivity of
Для определения времени полной инактивации после добавления АЭЭИ каждый час производили отбор проб. Полученные образцы проверяли на наличие инфекционной активности вируса ящура в культуре клеток почки свиньи СП. Результаты представлены в таблице 8 и на рисунке 9.To determine the time of complete inactivation after the addition of AEEI, samples were taken every hour. The obtained samples were tested for the presence of infectious activity of FMDV in the cell culture of the pig kidney SP. The results are presented in Table 8 and Figure 9.
Как видно из таблицы 8, полная инактивация инфекционной активности культурального вируса ящура штамма А 2205/G IV, репродуцированного в культиваторах, произошла через 4 часа после внесения инактиванта.As can be seen from table 8, the complete inactivation of the infectious activity of the cultural foot-and-mouth disease
Готовые вирусные инактивированные суспензии исследовали в РСК для оценки содержания в них компонентов вируса. При исследовании полученной суспензий вируса концентрация 146S компонента составила 1,93±0,10 мкг/см3, а 146S+75S компонента - 2,65±0,13 мкг/см3.Ready-made virus inactivated suspensions were examined in the RSK to assess the content of virus components in them. In the study of the obtained virus suspensions, the concentration of the 146S component was 1.93±0.10 µg/cm 3 , and the 146S+75S component was 2.65±0.13 µg/cm 3 .
Пример 8. Подбор условий очистки штамма A 2205/G IV вируса ящураExample 8. Selection of conditions for purification of
Суспензию штамма A 2205/G IV, полученную при репродукции вируса ящура в суспензионной клеточной линии ВНК-21, подвергают инактивации и очистке. Для получения очищенного антигена вируса ящура использовали полигексаметиленгуанидин (ПГМГ) с концентрациями 0,010 и 0,007%. До и после процесса очистки антигена вируса ящура штамма A 2205/G IV в количественном варианте РСК определяли концентрацию общего вирусного белка и иммуногенных компонентов. Результаты исследований отражены в таблице 9.Suspension of
Как следует из данных таблицы 9, в результате очистки антигена вируса ящура штамма A 2205/G IV с помощью ПГМГ в концентрации 0,010% отмечали уменьшение содержания 146S компонента вируса по сравнению с исходными значениями (до очистки) на 9,3% в готовом продукте. При этом используя то же органическое соединение, но в концентрации 0,007%, получали очищенный конечный продукт с потерей 146S компонента только на 17%. Содержание балластного белка в очищенном антигене при использовании ПГМГ 0,010 и 0,007% снижается на 51 и 46%, соответственно. Таким образом, исследуя условия очистки штамма A 2205/G IV, пришли к выводу о том, что для получения очищенного антигена вируса ящура достаточно использовать ПГМГ с концентрацией 0,007%.As follows from the data in Table 9, as a result of the purification of the FMDV antigen of
Пример 9. Подбор условий концентрирования штамма A №2205/G IV вируса ящурExample 9. Selection of conditions for concentrating strain A No. 2205/G IV foot-and-mouth disease virus
Культуральную инактивированную суспензию штамма A 2205/G IV, полученную с применением суспензионной клеточной линии ВНК-21, подвергали концентрированию в 20 раз по объему. Для увеличения концентрации иммуногенных компонентов антигена вируса ящура использовали следующие приемы: 1) добавление полиэтиленгликоля (ПЭГ-6000) с концентрацией 50% к антигену в соотношении 1:4, с экспозицией 4 ч; 2) добавление полиэтиленгликоля (ПЭГ-6000) с концентрацией 50% к антигену в соотношении 1:4, с экспозицией 12 ч; 3) концентрирование при помощи системы тангенциальной фильтрации Centramate™ 500S CM500SE. Инактивированную очищенную культуральную суспензию вируса ящура пропускали через кассету тангенциальной фильтрации серии Omega CentrasetteTR=70 кД S=0,1 кв.м.Culture inactivated suspension of
До и после процесса концентрирования антигена вируса ящура штамма A 2205/G IV определяли концентрацию общего вирусного белка и иммуногенных компонентов в количественном варианте РСК. Результаты исследований представлены в таблице 10.Before and after the process of concentrating the antigen of foot-and-mouth disease
Как следует из данных таблицы 10, при концентрировании антигена вируса ящура штамма A 2205/G IV с помощью ПЭГ-6000 в течение 4 ч отмечали увеличение содержания компонентов по сравнению с исходными значениями (до концентрирования) в 10 раз. Используя тот же полимер, но повышая время воздействия до 12 ч, увеличили концентрацию компонентов вируса в 13 раз. Применяя метод ультрафильтрации, удалось увеличить количество иммуногенных компонентов антигена вируса ящура штамма A 2205/G IV в суспензии в 18 раз. Таким образом, исследуя условия концентрирования штамма A 2205/G IV, пришли к выводу о том, что оптимальным способом увеличения концентрации компонентов вируса ящура является метод ультрафильтрации.As follows from the data in table 10, when concentrating the antigen of foot-and-mouth disease
Пример 10. Подбор адъюванта и соотношения антиген-адъювантExample 10 Adjuvant Selection and Antigen-Adjuvant Ratio
Для изготовления противоящурной моновалентной эмульсионной вакцины из штамма A 2205/G IV в качестве адъюванта был выбран Montanide ISA-206 VG, так как по литературным данным [30] этот адъювант способствует выработки антител на 3-5 сутки после иммунизации.Montanide ISA-206 VG was chosen as an adjuvant for the production of an FMD monovalent emulsion vaccine from
При изготовлении моновалентной эмульсионной вакцины против вируса ящура использовали соотношение 50:50 по массе в соответствии с рекомендациями изготовителя масляного адъюванта Montanide ISA-206 VG.A ratio of 50:50 by weight was used in the manufacture of the FMDV monovalent emulsion vaccine as recommended by the manufacturer of the oil adjuvant Montanide ISA-206 VG.
Пример 11. Компоновка инактивированной эмульсионной вакцины против ящура для ранней защиты из штамма А 2205/GIV.Example 11 Formulation of an inactivated emulsion FMD vaccine for early protection from
Из полученного концентрата вируса ящура штамма A 2205/G IV изготовили противоящурную моновалентную эмульсионную инактивированную вакцину для ранней защиты с применением адъюванта Montanide ISA-206 VG. Количество 146S иммуногенного компонента в 1,0 см3 готового антигена составило 32,58±0,12 мкг (таблица 10).From the resulting concentrate of
Пример 12. Иммунизация животных противоящурной эмульсионной инактивированной вакциной из штамма A 2205/G IV.Example 12. Immunization of animals with FMD emulsion inactivated vaccine from
Из полученной противоящурной эмульсионной инактивированной вакцины был приготовлен ряд разведений для КРС с 4-х кратным шагом и для свиней с 5-ти кратным шагом. 15 голов КРС разделили на 3 группы по 5 голов в каждой. Иммунизирующая доза составляла 2,0 см3. Первую группу КРС (№№1-5) иммунизировали вакциной без разведения, вторую группу КРС (№№6-10) привили вакциной, разведенной 1/4, третья группа КРС (№№11-15) - вакциной, разведенной 1/16. Препарат вводили внутримышечно в среднюю треть шеи. 2 головы без вакцинации оставили в качестве контроля вируса.From the resulting FMD emulsion inactivated vaccine, a series of dilutions was prepared for cattle with a 4-fold step and for pigs with a 5-fold step. 15 heads of cattle were divided into 3 groups of 5 heads each. The immunizing dose was 2.0 cm 3 . The first group of cattle (No. 1-5) was immunized with the vaccine without dilution, the second group of cattle (No. 6-10) was vaccinated with the vaccine diluted 1/4, the third group of cattle (No. 11-15) was vaccinated with the vaccine diluted 1/16 . The drug was administered intramuscularly in the middle third of the neck. 2 unvaccinated heads were left as virus controls.
15 голов свиней разделили на 3 группы по 5 голов в каждой. Первую группу свиней (№№1-5) привили вакциной без разведения, второй группе свиней (№№6-10) инокулировали вакцину, разведенной 1/5, третья группа свиней (№№11-15) - иммунизирована вакциной, разведенной 1/25. Препарат вводили внутримышечно в шею за ухом. 2 головы без вакцинации оставили в качестве контроля. Схема вакцинации представлена в таблице 11.15 pigs were divided into 3 groups of 5 pigs each. The first group of pigs (Nos. 1-5) were vaccinated with the vaccine without dilution, the second group of pigs (Nos. 6-10) were inoculated with the vaccine diluted 1/5, the third group of pigs (Nos. 11-15) were immunized with the vaccine diluted 1/5 25. The drug was administered intramuscularly in the neck behind the ear. 2 unvaccinated heads were left as controls. The vaccination scheme is presented in table 11.
Пример 13. Исследование сывороток крови вакцинированных животных на наличие антител к неструктурным белкам вируса ящураExample 13. Examination of the blood sera of vaccinated animals for the presence of antibodies to non-structural proteins of the foot-and-mouth disease virus
Сыворотки крови от КРС и свиней, полученные до иммунизации животных, через 14 суток после начала тестирования вакцины на авирулентность и безвредность и на 14 сутки после последней иммунизации, исследовали на наличие антител к неструктурным белкам вируса ящура с помощью блокирующего варианта иммуноферментного анализа (ИФА) в соответствии с рекомендациями OIE (МЭБ) [3]. Тестирование полученных сывороток проводили с использованием тест-системы ИФА «PrioCHECK®FMDVNSELISAfor in vitro detection of antibodies against Foot and Mouth Disease Virus in serum of cattle, sheep and pigs» (Prionics Lelystad B.V., Нидерланды). Полученные результаты исследований отражены в таблицах 12, 13, из которых видно, что сыворотки крови животных не содержали антител к неструктурным белкам вируса ящура (значения PI для сывороток крови КРС и свиней <50%).Blood sera from cattle and pigs, obtained before the immunization of animals, 14 days after the start of testing the vaccine for avirulence and safety, and 14 days after the last immunization, were examined for the presence of antibodies to non-structural proteins of the foot-and-mouth disease virus using a blocking enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) in in accordance with the recommendations of the OIE (OIE) [3]. The obtained sera were tested using the PrioCHECK ® FMDVNSELISA for in vitro detection of antibodies against Foot and Mouth Disease Virus in serum of cattle, sheep and pigs ELISA test system (Prionics Lelystad BV, the Netherlands). The results of the studies are shown in tables 12, 13, from which it is clear that the blood sera of animals did not contain antibodies to non-structural proteins of the foot-and-mouth disease virus (PI values for blood sera of cattle and pigs <50%).
Пример 14. Оценка авирулентности и безвредности инактивированной эмульсионной вакцины для ранней защиты против ящура из штамма A 2205/G IV.Example 14 Evaluation of the avirulence and safety of an inactivated emulsion vaccine for early protection against FMD from
Для определения авирулентности вакцины на свиньях отобранную пробу вакцинного препарата вводили внутрикожно по 0,1 см3 в две точки венчика на каждой конечности. В исследовании использовали свиней массой 35-40 кг. В течение 10 суток наблюдения животные остались клинически здоровыми, и при патологоанатомическом исследовании не было обнаружено изменений, характерных для ящура. Это свидетельствовало об отсутствии вирулентных свойств разработанной вакцины.To determine the avirulence of the vaccine in pigs, a selected sample of the vaccine preparation was injected intradermally at 0.1 cm 3 into two points of the corolla on each limb. The study used pigs weighing 35-40 kg. During 10 days of observation, the animals remained clinically healthy, and pathological anatomical examination did not reveal changes characteristic of foot and mouth disease. This indicated the absence of virulent properties of the developed vaccine.
Контроль безвредности продукта на свиньях проводили путем внутримышечного введения вакцины в область верхней трети шеи в дозе 6,0 см3. Срок наблюдения также составлял 10 суток. Следует отметить, что после инокуляции температура тела животного может повышаться до 41°С, и удерживаться на этом уровне в течение 1-3 суток.Control of the safety of the product in pigs was carried out by intramuscular injection of the vaccine into the region of the upper third of the neck at a dose of 6.0 cm 3 . The observation period was also 10 days. It should be noted that after inoculation, the animal's body temperature can rise to 41°C, and be maintained at this level for 1-3 days.
По результатам исследований вакцина была признана безвредной, все животные в период наблюдения оставались клинически здоровыми, при патологоанатомическом анализе некроза тканей на месте введения вакцины не обнаружено.According to the results of the studies, the vaccine was found to be harmless, all animals remained clinically healthy during the observation period, and no tissue necrosis at the site of vaccine administration was detected during the pathoanatomical analysis.
Пример 15. Изучение иммуногенных свойств вакцины противоящурной инактивированной эмульсионной из штамма A 2205/G IV по способности индуцирования вируснейтрализующих антител у естественно восприимчивых животныхExample 15. Study of the immunogenic properties of the FMD inactivated emulsion vaccine from
Спустя 4 суток после иммунизации от КРС и свиней отбирали кровь, и полученные сыворотки анализировали в реакции нейтрализации (РН) с целью определения количества вируснейтрализующих антител (ВНА). Титры антител от иммунизированных естественно восприимчивых животных указаны в таблицах 14, 15.Four days after immunization, blood was taken from cattle and pigs, and the resulting sera were analyzed in a neutralization reaction (PH) to determine the amount of virus neutralizing antibodies (VNA). Antibody titers from immunized naturally susceptible animals are shown in Tables 14, 15.
В таблице 14 показано, что у КРС, иммунизированных против ящура штамма A 2205/G IV вакциной без разведения, титры антител на 4 сутки после иммунизации против гомологичного штамма A 2205/G IV и гетерологичных штаммов А №550/Азербайджан/64 (генетическая линия A/ASIA/Iraq-64), А22 Ирак 24/64 (генетическая линия генетическая линия A/ASIA/Iraq-64), А/Египет/18/12 (генетическая линия A/AFRICA/G IV), А/Турция/06 (генетическая линия A/ASIA/Iran-05), А №2269/ВНИИЗЖ/2015 (генетическая линия A/ASIA/G VII), А №2155/Забайкальский/2013 (генетическая линия A/ASIA/Sea-97) составили 4,25±0,71; 2,00±0,11; 2,00±0,18; 1,45±0,15; 1,35±0,17; 1,15±0,15; 1,10±0,10 log2, соответственно. В данном исследовании отобрали сыворотки крови от КРС, иммунизированных вакциной в разведении 1/4. Титры антител по данным реакции нейтрализации с гомологичной сывороткой 3,15±0,22 log2, с гетерологичными штаммами А №550/Азербайджан/64 и А22 Ирак 24/64 составляли 1,80±0,10 и 1,65±0,13 log2, соответственно. Содержание вируснейтрализующих антител в сыворотках крови КРС, привитых вакциной в разведении 1/16, соответствовало значению 2,50±0,41 log2 против гомологичного штамма A 2205/G IV. В сыворотках крови двух контрольных животных антитела против указанных штаммов вируса ящура не выявлены.Table 14 shows that in cattle immunized against
Таким образом, уже на 4 сутки после вакцинации КРС средние значения титров вируснейтрализующих антител составляли 3,45±0,44 log2.Thus, already on the 4th day after vaccination of cattle, the average values of virus-neutralizing antibody titers were 3.45±0.44 log 2 .
Из таблицы 15 следует, что у свиней, иммунизированных против ящура штамма A 2205/G IV вакциной без разведения, титры антител на 4 сутки после вакцинации против штаммов А №550/Азербайджан/64 (генетическая линия A/ASIA/Iraq-64), А22 Ирак 24/64 (генетическая линия генетическая линия A/ASIA/Iraq-64), А/Египет/18/12 (генетическая линия A/AFRICA/G IV), А/Турция/06 (генетическая линия A/ASIA/Iran-05), А №2269/ВИИИЗЖ/2015 (генетическая линия A/ASIA/G VII), А №2155/Забайкальский/2013 (генетическая линия A/ASIA/Sea-97) составили 3,30±0,27; 2,40±0,20; 2,30±0,10; 1,50±0,18; 1,75±0,11; 1,20±0,17; 1,60±0,10 log2, соответственно.From table 15 it follows that in pigs immunized against
В данном исследовании также были отобраны сыворотки крови от свиней, иммунизированных вакциной в разведении 1/5. Титры антител по результатам реакции с гомологичным штаммом составили 2,50±0,24 log2, гетерологичными штаммами А №550/Азербайджан/64 и А22 Ирак 24/64 составили 1,95±0,22 и штаммами А №550/Азербайджан/64 и А22 Ирак 24/64 составили 1,95±0,22 и 1,85±0,12 log2, соответственно. Содержание вируснейтрализующих антител в сыворотках крови свиней, привитых вакциной в разведении 1/25, соответствовало значению 2,00±0,14 log2 при анализе с гомологичным штаммом A 2205/G IV. В сыворотках крови контрольных животных антитела против указанных штаммов вируса ящура не выявлены.In this study, blood sera were also collected from pigs immunized with the vaccine at a 1/5 dilution. Antibody titers according to the results of the reaction with a homologous strain amounted to 2.50±0.24 log 2 , with heterologous strains A No. 550/Azerbaijan/64 and
Таким образом, уже на 4 сутки после вакцинации КРС средние значения титров вируснейтрализующих антител составляли 3,30±0,27 log2.Thus, already on the 4th day after cattle vaccination, the average values of virus-neutralizing antibody titers were 3.30±0.27 log 2 .
Пример 16. Контрольное заражение естественно восприимчивых животных. Изучение защитной способности инактивированной эмульсионной вакцины против ящура из штамма A 2205/G IV на естественно восприимчивых видах животныхExample 16 Challenge of naturally susceptible animals. Study of the protective ability of an inactivated emulsion vaccine against foot-and-mouth disease from
КРС и свиней, иммунизированных в количестве по 15 голов, заражали контрольным штаммом A 2205/G IV вируса ящура, адаптированного к этим животным в слизистую оболочку языка в дозе 104,0 ИД50/0,20 см3 (в две точки по 0,10±0,05 см3). Спустя 7 суток после заражения всех животных подвергли эвтаназии и провели патологоанатомический осмотр. Защищенными от ящура считали животных, у которых на конечностях отсутствовали поражения. Первичные афты не учитывали.Cattle and pigs, immunized in an amount of 15 animals, were infected with the
Результаты контрольного заражения представлены в таблице 16, из которой следует, что вакцина противоящурная инактивированная эмульсионная из штамма A 2205/G IV, введенная в однократной дозе (2,0 см3) и в разведении 1/4 защищает КРС от заражения гомологичным штаммом все пять животных.The results of the control infection are presented in table 16, from which it follows that the FMD vaccine inactivated emulsion from
Препарат, введенный в разведении 1/16, защитил 3 из 5 животных. По результатам контрольного заражения было установлено, что в прививном объеме данной вакцины содержится 18,18 ПД50 для КРС.The drug, administered at a dilution of 1/16, protected 3 out of 5 animals. According to the results of the control infection, it was found that the grafting volume of this vaccine contains 18.18 PD 50 for cattle.
Из данных таблицы 17 видно, что вакцина противоящурная инактивированная эмульсионная из штамма A 2205/G IV, введенная однократной дозе (2,0 см3) защищает свиней от заражения гомологичным штаммом все пять животных. Введенная вакцина, в разведении 1/5 и 1/25 защитила 4 из 5 и 3 из 5 животных, соответственно, от заражения гомологичным штаммом вируса ящура.From the data of table 17 it can be seen that the FMD vaccine inactivated emulsion from
По результатам контрольного заражения было установлено, что в прививном объеме данной вакцины содержится 22,22 ПД50 для свиней.According to the results of the control infection, it was found that the inoculation volume of this vaccine contains 22.22 PD 50 for pigs.
Пример 17. Оценка гуморального иммунитета естественно восприимчивых животных на 28 сутки после введения эмульсионной инактивированной вакцины для ранней защиты против ящура из штамма A 2205/G IV.Example 17 Assessment of humoral immunity in naturally susceptible animals on the 28th day after administration of an emulsion inactivated vaccine for early protection against FMD from
На 28 сутки после введения эмульсионной инактивированной вакцины для ранней защиты против ящура из штамма A 2205/G IV у КРС и свиней отбирали кровь и проводили исследование полученных сывороток крови в реакции нейтрализации [3]. Выявлено, что у КРС, иммунизированных вакциной в цельной дозе, средние значения титра антител составили 6,00±0,14 log2, с разведением 1/4 - 4,55±0,10 log2, с разведением 1/16 - 2,85±0,12 log2. У свиней, иммунизированных вакциной в цельной дозе, средние значения титра антител составили 5,95±0,13 log2, с разведением 1/5- 4,75±0,10 log2, с разведением 1/25 - 2,55±0,14 log2. Полученные данные реакции нейтрализации после введения цельной дозы вакцины позволяют обеспечить формирование гуморального иммунитета с защитными титрами (5,5 и более log2) в соответствии с требованиями международных стандартов [3].On the 28th day after the introduction of the emulsion inactivated vaccine for early protection against foot-and-mouth disease from
Таким образом, приведенная выше информация свидетельствует о том, что вакцина для ранней защиты против ящура из штамма А 2205/G IV культуральная инактивированная эмульсионная, воплощающая предлагаемое изобретение, предназначена как экспериментальная резервная для использования в сельском хозяйстве, а именно в ветеринарной вирусологии и биотехнологии; подтверждена возможность осуществления представленного; вакцина, изготовленная из штамма A 2205/G IV в соответствии с предлагаемым изобретением, обладает высокой иммуногенной активностью и способна обеспечить раннюю эффективную защиту восприимчивых животных против эпизоотического штамма вируса ящура типа А, циркулирующего в странах Северо-Восточной Африки.Thus, the above information indicates that the vaccine for early protection against foot-and-mouth disease from
Источники информации, принятые во внимание при составлении описания изобретения к заявке на выдачу патента РФ на изобретение «Вакцина для ранней защиты против ящура из штамма А 2205/G IV культуральная инактивированная эмульсионная»:Sources of information taken into account when compiling the description of the invention to the application for a patent of the Russian Federation for the invention "Vaccine for early protection against foot-and-mouth disease from
1. Ящур. Меры профилактики. URL: http://89.rospotrebnadzor.ru/directions/epid_nadzor/146902 (Дата обращения: 21 января 2021 г.).1. Foot and mouth disease. Prevention measures. URL: http://89.rospotrebnadzor.ru/directions/epid_nadzor/146902 (Date of access: January 21, 2021).
2. Опасность болезни ящура. URL: https://vet.astrobl.ru/press-release/opasnost-bolezni-yashchura (Дата обращения: 15 декабря 2020 г.).2. Danger of foot-and-mouth disease. URL: https://vet.astrobl.ru/press-release/opasnost-bolezni-yashchura (Date of access: December 15, 2020).
3. OIE. Manual of diagnostic tests and vaccines for terrestrial animals - 24th Ed. - Paris, 2015 - Vol. 1, Chapter 2.1.5. - P. 166-169.3. OIE. Manual of diagnostic tests and vaccines for terrestrial animals - 24th Ed. - Paris, 2015 - Vol. 1, Chapter 2.1.5. - P. 166-169.
4. Бурдов A.H., Дудников А.И., Малярец П.В. и др. Ящур. - М.: Агропромиздат, 1990. - 320 с.4. Burdov A.N., Dudnikov A.I., Malyarets P.V. and others. FMD. - M.: Agropromizdat, 1990. - 320 p.
5. Пономарев А.П., Узюмов В.Л., Груздев К.Н. Вирус ящура: структура, биологические и физико-химические свойства. - Владимир: Фолиант, 2006. - 250 с.5. Ponomarev A.P., Uzyumov V.L., Gruzdev K.N. FMD virus: structure, biological and physico-chemical properties. - Vladimir: Folio, 2006. - 250 p.
6. Aspects of emergency vaccination against foot-and-mouth disease / P. Bamett, J.M/ Garland, R.P. Kitching [et.al.] // Comparative Immunology, Microbiology and Infectious Diseases. - October 2002. - V. 25. - P. 345-364.6. Aspects of emergency vaccination against foot-and-mouth disease / P. Bamett, J.M/ Garland, R.P. Kitching [et.al.] // Comparative Immunology, Microbiology and Infectious Diseases. - October 2002. - V. 25. - P. 345-364.
7. Brown F. A brief history of FMD and its casual agent. FMD: Control Strateies: Proc. Jnt. Symp. 2-5. June 2002, Lyons, France. - Paris, 2003. - p. 13-21.7. Brown F. A brief history of FMD and its casual agent. FMD: Control Strateies: Proc. Jnt. Symp. 2-5. June 2002, Lyons, France. - Paris, 2003. - p. 13-21.
8. Vaccination against foot-and-mouth disease virus confers complete clinical protection in 7 days and partial protection in 4 days: Use in emergency outbreak response / T.G. William, J.M. Pachecoa, T. Doel [et al.] // Vaccine. - December 2005. - V. 23. - P. 5775-5782.8. Vaccination against foot-and-mouth disease virus confers complete clinical protection in 7 days and partial protection in 4 days: Use in emergency outbreak response / T.G. William, J.M. Pachecoa, T. Doel [et al.] // Vaccine. - December 2005. - V. 23. - P. 5775-5782.
9. Aspects of emergency vaccination against foot-and-mouth disease / P. Barnett, J.M/ Garland, R.P. Kitching [et.al.] // Comparative Immunology, Microbiology and Infectious Diseases. - October 2002. - V. 25. - P. 345-364.9. Aspects of emergency vaccination against foot-and-mouth disease / P. Barnett, J.M/ Garland, R.P. Kitching [et.al.] // Comparative Immunology, Microbiology and Infectious Diseases. - October 2002. - V. 25. - P. 345-364.
10. Barnett P.V. A review of emergency foot-and-mouth disease (FMD) vaccines / Vaccine. - February 2002. - V. 20. - P. 1505-1514.10 Barnett P.V. A review of emergency foot-and-mouth disease (FMD) vaccines / Vaccine. - February 2002. - V. 20. - P. 1505-1514.
11. Salt I.S. Emergency vaccination of pigs against foot-and-mouth disease: protection against disease and reduction in contact transmission / Vaccine. - April 1998. - V. 16. - P. 746-754.11. Salt I.S. Emergency vaccination of pigs against foot-and-mouth disease: protection against disease and reduction in contact transmission / Vaccine. - April 1998. - V. 16. - P. 746-754.
12. Рахманов A.M. Современная эпизоотическая ситуация в мире по ящуру и меры ее контроля.//Ветеринарная медицина мiжвiд. тем. наук. Харкiв, 2013. - С. 37-38.12. Rakhmanov A.M. The current epizootic situation in the world of foot-and-mouth disease and measures for its control.//Veterinary medicine mizhvid. topics. Sciences. Kharkiv, 2013. - S. 37-38.
13. Jamal S.M., Ferrari G, Ahmed S., Normann P. Graham J. Belsham G.J. Genetic diversity of foot-and-mouth disease virus serotype О in Pakistan and Afghanistan, 1997-2009 S.M. Jamal et al. / Infection, Genetics and Evolution №11 (2011). - P. 1229-1238.13. Jamal S.M., Ferrari G, Ahmed S., Normann P. Graham J. Belsham G.J. Genetic diversity of foot-and-mouth disease virus serotype O in Pakistan and Afghanistan, 1997-2009 S.M. Jamal et al. / Infection, Genetics and Evolution No. 11 (2011). - P. 1229-1238.
14. Longjam N., Tayo T. Antigenic variation of Foot and Mouth Disease Virus // Vet. World. - 2011. - Vol. 4(10). - P. 475-479.14. Longjam N., Tayo T. Antigenic variation of Foot and Mouth Disease Virus // Vet. World. - 2011. - Vol. 4(10). - P. 475-479.
15. Мельник P.H., Хаустова H.B., Мельник H.B., Самуйленко А.Я., Гринь С.А., Святенко М.С., Литенкова И.Ю. Антигенная вариабельность вируса ящура серотипа А и обоснование необходимости получения новых актуальных производственных штаммов/ Ветеринария и кормление. - 2019. - №3. - С. 29-31.15. Melnik R.H., Khaustova H.V., Melnik H.V., Samuylenko A.Ya., Grin S.A., Svyatenko M.S., Litenkova I.Yu. Antigenic variability of foot-and-mouth disease virus serotype A and justification for the need to obtain new relevant industrial strains / Veterinary medicine and feeding. - 2019. - No. 3. - S. 29-31.
16. Paton D.J., Sumption К.J., Charleston В. Options for control of foot-and-mouth disease: knowledge, capability and policy/ Phil. Trans. R. Soc. В (2009) 364. - P. 2657-2667.16. Paton D.J., Sumption K.J., Charleston B. Options for control of foot-and-mouth disease: knowledge, capability and policy/ Phil. Trans. R. Soc. In (2009) 364. - P. 2657-2667.
17. Bamett P.V. A review of emergency foot-and-mouth disease (FMD) vaccines / Vaccine. - February 2002. - V. 20. - P. 1505-1514.17. Bamet P.V. A review of emergency foot-and-mouth disease (FMD) vaccines / Vaccine. - February 2002. - V. 20. - P. 1505-1514.
18. Salt I.S. Emergency vaccination of pigs against foot-and-mouth disease: protection against disease and reduction in contact transmission / Vaccine. - April 1998. - V. 16. - P. 746-754.18. Salt I.S. Emergency vaccination of pigs against foot-and-mouth disease: protection against disease and reduction in contact transmission / Vaccine. - April 1998. - V. 16. - P. 746-754.
19. Brown F.A brief history of FMD and its casual agent. FMD: Control Strateries: Proc. Jnt. Symp. 2-5. June 2002, Lyons, France. - Paris, 2003. - P. 13-21.19. Brown F. A brief history of FMD and its casual agent. FMD: Control Strategies: Proc. Jnt. Symp. 2-5. June 2002, Lyons, France. - Paris, 2003. - P. 13-21.
20. Grubman M.J. Development of novel trategies to control FMD: marker vaccines and antivirals Biologicals. - 2005. - Vol. 33. №4. - P. 227-234.20. Grubman M.J. Development of novel trategies to control FMD: marker vaccines and antivirals Biologicals. - 2005. - Vol. 33. No. 4. - P. 227-234.
21. William T.G. Vaccination against foot-and-mouth disease virus confers complete clinical protection in 7 days and partial protection in 4 days: Use in emergency outbreak response / T.G. William, J.M. Pachecoa, T. Doel [et al.] // Vaccine. - December 2005. - V. 23. - P. 5775-5782.21. William T.G. Vaccination against foot-and-mouth disease virus confers complete clinical protection in 7 days and partial protection in 4 days: Use in emergency outbreak response / T.G. William, J.M. Pachecoa, T. Doel [et al.] // Vaccine. - December 2005. - V. 23. - P. 5775-5782.
22. Официальный сайт The FAO World Reference Laboratory for Foot-and-Mouth Disease - URL: http://www.wrlfmd.org/ref labs/fmd ref lab reports.htm (дата обращения 15 октября 2020 г.).22. Official website of The FAO World Reference Laboratory for Foot-and-Mouth Disease - URL: http://www.wrlfmd.org/ref labs/fmd ref lab reports.htm (Accessed October 15, 2020).
23. Россия и страны Африки. URL: https://export67.com/files/304/rossiya-i-strany-afriki d.pdfs (Дата обращения: 11 сентября 2020 г.).23. Russia and African countries. URL: https://export67.com/files/304/rossiya-i-strany-afriki d.pdfs (Accessed 11 September 2020).
24. Методические рекомендации по определению концентрации 146S, 75S, 12S компонентов вакцинных штаммов культурального вируса ящура в реакции связывания комплемента (РСК) / ФГБУ «ВНИИЗЖ». - Утв. 21.09.17.24. Guidelines for determining the concentration of 146S, 75S, 12S components of vaccine strains of the cultured foot-and-mouth disease virus in the complement fixation test (RCT) / FGBU "ARRIAH". - Approved. 09/21/17.
25. Методические указания по определению антигенного соответствия между эпизоотическими изолятами и производственными штаммами вируса ящура в перекрестной реакции микронейтрализации: утв. Россельхознадзором 13.09.2017 / ФГБУ «ВНИИЗЖ». - Владимир: 2017. - 24 с.25. Guidelines for determining the antigenic correspondence between epizootic isolates and industrial strains of foot-and-mouth disease virus in a cross-reaction of microneutralization: approved. Rosselkhoznadzor 13.09.2017 / FGBU "ARRIAH". - Vladimir: 2017. - 24 p.
26. Saitou N. and Nei М. (1987). The neighbor-joining method: A new method for reconstructing phylogenetic trees. Molecular Biology and Evolution 4:406-42.26. Saitou N. and Nei M. (1987). The neighbor-joining method: A new method for reconstructing phylogenetic trees. Molecular Biology and Evolution 4:406-42.
27. Felsenstein J. (1985). Confidence limits on phylogenies: An approach using the bootstrap. Evolution 39:783-791.27. Felsenstein J. (1985). Confidence limits on phylogenies: An approach using the bootstrap. Evolution 39:783-791.
28. Tamura K., Nei M., and Kumar S. (2004). Prospects for inferring very large phylogenies by using the neighbor-joining method. Proceedings of the National Academy of Sciences (USA) 101:11030-11035.28. Tamura K., Nei M., and Kumar S. (2004). Prospects for inferring very large phylogenies by using the neighbor-joining method. Proceedings of the National Academy of Sciences (USA) 101:11030-11035.
29. Kumar S., Stecher G., Li M., Knyaz C, and Tamura K. (2018). MEGA 6: Molecular Evolutionary Genetics Analysis across computing platforms. Molecular Biology and Evolution 35:1547-1549.29. Kumar S., Stecher G., Li M., Knyaz C, and Tamura K. (2018). MEGA 6: Molecular Evolutionary Genetics Analysis across computing platforms. Molecular Biology and Evolution 35:1547-1549.
30. Barnett P. Aspects of emergency vaccination against foot-and-mouth disease / P. Barnett, J.M/ Garland, R.P. Kitching [et al.] // Comparative Immunology, Microbiology and Infectious Diseases. - October 2002. - V. 25. - P. 345-364.30. Barnett P. Aspects of emergency vaccination against foot-and-mouth disease / P. Barnett, J.M/ Garland, R.P. Kitching [et al.] // Comparative Immunology, Microbiology and Infectious Diseases. - October 2002. - V. 25. - P. 345-364.
--->--->
Перечень последовательностейSequence listing
<110> Федеральное государственное бюджетное учреждение<110> Federal state budget institution
«Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГБУ "Federal Center for Animal Health" (FGBU
«ВНИИЗЖ») Federal Governmental Budgetary Institution "ARRIAH") Federal Governmental Budgetary Institution
«Federal Centre for Animal Health» (FGBI «ARRIAH») Federal Center for Animal Health (FGBI ARRIAH)
<120> Вакцина для ранней защиты против ящура из штамма<120> Early protection vaccine against FMD strain
А 2205/G IV культуральная инактивированная эмульсионная A 2205/G IV culture inactivated emulsion
<160> 2<160> 2
<210> 1<210> 1
<211> 639<211> 639
<212> РНК<212> RNA
<213> вирус ящура<213> foot-and-mouth disease virus
<400> 1<400> 1
<210> 2<210> 2
<211> 217<211> 217
<212> ПРТ<212> PRT
<213> вирус ящура<213> foot-and-mouth disease virus
<400> 2<400> 2
<---<---
Claims (8)
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2772713C1 true RU2772713C1 (en) | 2022-05-24 |
Family
ID=
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2804803C1 (en) * | 2023-05-11 | 2023-10-05 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | Culture inactivated emulsion vaccine against fmd of o/sea/mya-98 genotype from o n2383/primorsky/2019 strain |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2294779C1 (en) * | 2005-07-15 | 2007-03-10 | Государственное образовательное учреждение дополнительного профессионального образования Санкт-Петербургская медицинская академия последипломного образования Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию | Method for treating autoimmune male infertility cases |
| RU2665850C1 (en) * | 2017-12-25 | 2018-09-04 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | Inactivated emulsion vaccine against foot-and-mouth disease type a |
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2294779C1 (en) * | 2005-07-15 | 2007-03-10 | Государственное образовательное учреждение дополнительного профессионального образования Санкт-Петербургская медицинская академия последипломного образования Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию | Method for treating autoimmune male infertility cases |
| RU2665850C1 (en) * | 2017-12-25 | 2018-09-04 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | Inactivated emulsion vaccine against foot-and-mouth disease type a |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| WILLIAM T.G., et al., Vaccination against foot-and-mouth disease virus confers complete clinical protection in 7 days and partial protection in 4 days: Use in emergency outbreak response, Vaccine. - December 2005. - V. 23. - P. 5775-5782. * |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2815534C1 (en) * | 2023-03-21 | 2024-03-18 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | Culture inactivated adsorbed vaccine against fmd of sat-1/i genotype from sat-1/tanzania/2012 strain |
| RU2815536C1 (en) * | 2023-03-27 | 2024-03-18 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | Culture inactivated sorbed vaccine against foot and mouth disease from a/tanzania/2013 strain of a/africa/g-i genotype |
| RU2804803C1 (en) * | 2023-05-11 | 2023-10-05 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | Culture inactivated emulsion vaccine against fmd of o/sea/mya-98 genotype from o n2383/primorsky/2019 strain |
| RU2816264C1 (en) * | 2023-07-31 | 2024-03-28 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | Cultural inactivated emulsion vaccine against o/ea-3 genotype foot-and-mouth disease of o n2241/ethiopia/2011 strain |
| RU2817381C1 (en) * | 2023-08-29 | 2024-04-15 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | Cultural inactivated sorbed vaccine against foot-and-mouth disease from the strain "a/egypt/euro-sa/2022" |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN108103078A (en) | Sai Nika paddy viral vaccines and its preparation method and application | |
| CN110872578B (en) | Variant infectious bursal disease virus, subunit vaccine, preparation method and application thereof | |
| CN105073130A (en) | Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, compositions, vaccine and methods of use | |
| RU2593718C1 (en) | Inactivated emulsion vaccine against foot-and-mouth disease types a, o, asia-1 | |
| AU2017201526C1 (en) | Equine Rhinitis vaccine | |
| RU2603003C1 (en) | Inactivated sorptive vaccine to fmd types a, o, asia-1 | |
| RU2699671C1 (en) | Vaccine for early protection against foot-and-mouth disease of type o inactivated emulsion | |
| RU2665849C1 (en) | Inactivated emulsion vaccine against foot-and-mouth disease type o | |
| RU2772713C1 (en) | Vaccine for early protection against foot-and-mouth disease from strain a 2205/g iv cultural inactivated emulsion | |
| RU2810131C1 (en) | CULTURE INACTIVATED SORBED VACCINE AGAINST FOOT AND MOUTH DISEASE OF O/ME-SA/PanAsia2ANT-10 GENOTYPE FROM O N2356/PAKISTAN/2018 STRAIN | |
| CN114350618A (en) | Porcine epidemic diarrhea virus and application thereof | |
| RU2798293C1 (en) | Fmd culture inactivated sorbed vaccine from a/afghanistan/2017 strain of a/asia/iran-05far-11 new genotype | |
| RU2804803C1 (en) | Culture inactivated emulsion vaccine against fmd of o/sea/mya-98 genotype from o n2383/primorsky/2019 strain | |
| RU2815537C1 (en) | Cultural inactivated emulsion vaccine against foot and mouth disease from o no. 2620/orenburgsky/2021 strain of o/me-sa/ind-2001e genotype | |
| RU2799605C1 (en) | FMD CULTURE INACTIVATED SORBED VACCINE FROM A/Iran/2018 STRAIN OF A/ASIA/Iran-05SIS-13 NEW GENOTYPE | |
| RU2816264C1 (en) | Cultural inactivated emulsion vaccine against o/ea-3 genotype foot-and-mouth disease of o n2241/ethiopia/2011 strain | |
| RU2817381C1 (en) | Cultural inactivated sorbed vaccine against foot-and-mouth disease from the strain "a/egypt/euro-sa/2022" | |
| RU2682876C1 (en) | Inactivated emulsion vaccine for o-type aphthous fever | |
| RU2802192C1 (en) | Inactivated sorbed vaccine against fmd of o/ea-2 genotype from o/kenya/2017 strain culture | |
| RU2815534C1 (en) | Culture inactivated adsorbed vaccine against fmd of sat-1/i genotype from sat-1/tanzania/2012 strain | |
| RU2804875C1 (en) | Culture inactivated adsorbed vaccine against fmd of sat-2/vii genotype from sat-2/eritrea/1998 strain | |
| RU2816944C1 (en) | Cultural inactivated emulsion vaccine against foot-and-mouth disease serotype o from strain "o/arriah/mya-98" | |
| CN104328090B (en) | A kind of porcine pseudorabies virus strain, vaccine composition and its preparation method and application | |
| RU2809219C1 (en) | Culturally inactivated sorbed vaccine against foot and mouth disease of sat-1/nwz genotype | |
| RU2810132C1 (en) | Culture inactivated adsorbed vaccine against fmd of sat-1/x genotype from sat-1/nigeria/2015 strain |