RU2699671C1 - Vaccine for early protection against foot-and-mouth disease of type o inactivated emulsion - Google Patents

Vaccine for early protection against foot-and-mouth disease of type o inactivated emulsion Download PDF

Info

Publication number
RU2699671C1
RU2699671C1 RU2019116926A RU2019116926A RU2699671C1 RU 2699671 C1 RU2699671 C1 RU 2699671C1 RU 2019116926 A RU2019116926 A RU 2019116926A RU 2019116926 A RU2019116926 A RU 2019116926A RU 2699671 C1 RU2699671 C1 RU 2699671C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
strain
mongolia
foot
mouth disease
vaccine
Prior art date
Application number
RU2019116926A
Other languages
Russian (ru)
Inventor
Вячеслав Алексеевич Стариков
Дмитрий Анатольевич Лозовой
Дмитрий Валерьевич Михалишин
Максим Игоревич Доронин
Алексей Валерьевич Борисов
Алексей Владимирович Константинов
Original Assignee
Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ")
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") filed Critical Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ")
Priority to RU2019116926A priority Critical patent/RU2699671C1/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2699671C1 publication Critical patent/RU2699671C1/en

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/125—Picornaviridae, e.g. calicivirus
    • A61K39/135—Foot- and mouth-disease virus

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

FIELD: veterinary science.
SUBSTANCE: invention relates to veterinary virology and biotechnology and represents a vaccine for early protection against foot-and-mouth disease of type O inactivated emulsion, containing an active substance and adjuvants, characterized by that as an active substance, it contains avirulent and purified antigenic material from Aphtae epizooticae virus strain "O No.2344/Mongolia/2017", family Picornaviridae, genus Aphtovirus, type O, deposited in a collection of strains of microorganisms FGBU "Federal Center for Animal Health" (FGBU "VNIIZZH"), under registration number: N116 – dep/19-6 – KSHM FGBU "VNIIZZH", in effective amount.
EFFECT: invention provides high immunogenicity and ability to provide early effective protection against a homologous agent of infection circulating in Central and South-East Asian countries.
7 cl, 1 dwg, 13 tbl, 13 ex

Description

Ящур занимает первоочередное место в системе мер борьбы и профилактики вирусных болезней крупного рогатого скота во многих государствах. Данное заболевание представляет собой мировую проблему, которой особое внимание уделяют ветеринарные службы многих стран и международные организации (ФАО/МЭБ). По итогам 81-ой Генеральной сессии ФАО/МЭБ (2013 г.) была принята резолюция, согласно которой ящур, принадлежащий группе «трансграничных инфекций», признается глобальной проблемой, наносящей значительный ущерб для торговли и продовольственной безопасности всех стран [1, 2]. Вирус ящура легко распространяется, по этой причине данное заболевание может приобретать размах эпизоотий [3, 4]. В Российской Федерации применяется система мероприятий по борьбе и профилактике ящура, которая направлена на предупреждение заноса вируса в страну, систематическую иммунизацию крупного и мелкого рогатого скота в буферной зоне, а также проведение мониторинга иммунного статуса привитых животных. Для иммунизации животных должна применяться вакцина, изготовленная из вируса, гомологичного полевым изолятам [5, 6].Foot and mouth disease is a priority in the system of measures for the control and prevention of viral diseases of cattle in many states. This disease is a global problem, which is given special attention by the veterinary services of many countries and international organizations (FAO / OIE). Following the results of the 81st FAO / OIE General Session (2013), a resolution was adopted according to which foot-and-mouth disease belonging to the “cross-border infections” group is recognized as a global problem that causes significant damage to trade and food security in all countries [1, 2]. The foot and mouth disease virus spreads easily, for this reason this disease can acquire the scope of epizootics [3, 4]. In the Russian Federation, a system of measures for the control and prevention of foot and mouth disease is used, which is aimed at preventing the virus from entering the country, systematic immunization of cattle and small cattle in the buffer zone, as well as monitoring the immune status of vaccinated animals. For immunization of animals, a vaccine made from a virus homologous to field isolates should be used [5, 6].

Недавние вспышки ящура демонстрируют, что эта крайне заразная вирусная инфекция парнокопытных животных продолжает оставаться значительной экономической проблемой во всем мире. Споры о наиболее эффективном способе реагирования на вспышки ящура в странах, свободных от болезни, по-прежнему сосредоточены на использовании вакцин. Экстренная вакцинация является одной из нескольких мер, которые могут быть применены для борьбы со вспышками ящура. Это может быть ценным дополнением к применению основных мер зоосанитарного контроля, которые должны включать быструю диагностику, отслеживание, контроль за передвижением и дезинфекцию и которые могут также включать убой инфицированных и контактирующих животных и их безопасное удаление [4, 7]. Критерии, которые определяют успешное применение экстренной вакцинации включают в себя доступ к вакцине, которая, во-первых, содержит штамм вируса достаточного антигенного родства в очаге; во-вторых, характеризуется приемлемой безвредностью и эффективностью; в-третьих, имеет соответствующий доступ, в том числе количество и своевременность поставок.Recent outbreaks of foot and mouth disease demonstrate that this highly contagious viral infection of artiodactyls continues to be a significant economic problem worldwide. Controversy over the most effective way to respond to outbreaks of foot and mouth disease in disease-free countries remains focused on the use of vaccines. Emergency vaccination is one of several measures that can be used to control outbreaks of foot and mouth disease. This can be a valuable addition to the application of basic measures of zoosanitary control, which should include quick diagnosis, tracking, monitoring of movement and disinfection, and which may also include the slaughter of infected and contacting animals and their safe removal [4, 7]. Criteria that determine the successful use of emergency vaccination include access to a vaccine, which, firstly, contains a strain of virus of sufficient antigenic affinity in the outbreak; secondly, it is characterized by acceptable harmlessness and efficiency; thirdly, it has appropriate access, including the quantity and timeliness of deliveries.

Планирование на случай непредвиденных обстоятельств должно включать обеспечение экстренной вакцинации и учитывать сложные решения не только о том, когда, где и как применять вакцину, но и ее экономические последствия [4, 6].Contingency planning should include the provision of emergency vaccination and take into account complex decisions not only about when, where and how to use the vaccine, but also its economic consequences [4, 6].

В литературных источниках указывают, что экстренная вакцинация крупного рогатого скота, овец и свиней вакцина может быть эффективной в профилактике заболевания в течение 4-5 дней после вакцинации [4, 8]. Эти исследования демонстрируют, что риск распространения инфекции уменьшается по мере увеличения интервала между вакцинацией и заражением вирусом и что вакцинация может уменьшить количество выделяемого вируса по сравнению с не вакцинированными животными [4, 5, 9].Literary sources indicate that emergency vaccination of cattle, sheep and pigs, the vaccine can be effective in preventing the disease within 4-5 days after vaccination [4, 8]. These studies demonstrate that the risk of spreading infection decreases as the interval between vaccination and virus infection increases and that vaccination can reduce the amount of virus released compared to unvaccinated animals [4, 5, 9].

В период с сентября 2017 г. по март 2018 г. было зарегистрировано около 30 вспышек ящура типа О у крупного рогатого скота, овец и коз в нескольких провинциях Монголии, территориально граничащей с Россией на севере и Китаем на юге. Постоянная возможность заноса возбудителя на территорию России диктует необходимость усиления противоящурных мероприятий, которые направлены на предупреждение заноса вируса в страну, проведение систематических мониторинговых исследований, а также осуществление поголовной вакцинации восприимчивых животных в буферной зоне [10, 11]. Из-за быстрого распространения инфекции меры контроля должны применяться сразу после вспышки, например, при использовании вакцин, которые вызывают быструю защиту. Вакцины за многие десятилетия их производства доказали свою неоспоримую пользу в борьбе с инфекционными заболеваниями. Для специфической профилактики ящура широко применяют моно- и поливалентные вакцины из инактивированного культурального вируса ящура [12]. Исследования по разработке вакцин для ранней защиты подтверждают, что при их использовании динамика нарастания иммунитета у восприимчивых животных в зоне вспышки служит барьером для вируса, приводит к сдерживанию инфекции и ее купированию в первичном очаге [13, 14].Between September 2017 and March 2018, about 30 outbreaks of type O foot and mouth disease were recorded in cattle, sheep and goats in several provinces of Mongolia, bordering Russia in the north and China in the south. The constant possibility of introducing the pathogen into the territory of Russia dictates the need to strengthen anti-FMD measures, which are aimed at preventing the virus from entering the country, conducting systematic monitoring studies, as well as carrying out universal vaccination of susceptible animals in the buffer zone [10, 11]. Due to the rapid spread of infection, control measures should be applied immediately after an outbreak, for example, when using vaccines that cause rapid protection. Vaccines over many decades of their production have proven their undeniable benefits in the fight against infectious diseases. For specific prophylaxis of foot and mouth disease, mono- and multivalent vaccines from inactivated culture of foot and mouth disease are widely used [12]. Studies on the development of vaccines for early protection confirm that when they are used, the dynamics of increasing immunity in susceptible animals in the outbreak area serves as a barrier to the virus, leading to containment of the infection and its stopping in the primary focus [13, 14].

Важной особенностью возбудителя ящура является антигенная изменчивость штаммов в пределах одного серотипа, возникающая в различные временные промежутки на разных территориях, и зависящая от видового состава восприимчивого поголовья животных, его иммунного статуса и множества других факторов. Преимущественно замены в аминокислотных последовательностях имеют место в полипептидах вирусных белках, составляющих капсид вириона. Возникающие антигенные изменения могут выражаться как в незначительных отличиях между штаммами, улавливаемых только с помощью тонких методов молекулярного анализа, так и в появлении совершенно отличающихся штаммов, требующих использования новых средств специфической профилактики вызываемой болезни [2, 3].An important feature of the causative agent of foot and mouth disease is the antigenic variation of strains within the same serotype that occurs at different time intervals in different territories and depends on the species composition of the susceptible livestock of animals, its immune status and many other factors. Mostly substitutions in amino acid sequences occur in the polypeptides of the viral proteins that make up the virion capsid. The arising antigenic changes can be expressed both in insignificant differences between the strains, captured only using subtle methods of molecular analysis, and in the appearance of completely different strains requiring the use of new means of specific prophylaxis of the disease caused [2, 3].

Изменения антигенного спектра, соответствующие обновлению структуры нового полевого изолята, могут варьировать от незначительных, детектируемых моноклональными антителами, до существенных, регистрируемых с помощью поликлональных иммуноглобулинов. Существенные генетические изменения природного изолята вызывают ослабление специфического иммунитета против ящура, индуцированного гетерологичным антигеном. В результате возникает необходимость создания новых средств диагностики и специфической иммунопрофилактики ящура.Changes in the antigenic spectrum, corresponding to the renewal of the structure of the new field isolate, can vary from insignificant detected by monoclonal antibodies to significant ones detected by polyclonal immunoglobulins. Significant genetic changes in the natural isolate cause a weakening of specific immunity against FMD induced by a heterologous antigen. As a result, there is a need to create new diagnostic tools and specific immunoprophylaxis of foot and mouth disease.

Известны штаммы возбудителя ящура типа О, которые долгое время применяли в качестве производственных в России в течение последних 50 лет.Known strains of the causative agent of foot and mouth disease type O, which have long been used as production in Russia over the past 50 years.

На территории РФ в ОПХ «Степное» села Элитное Уссурийского района Приморского края 13 апреля 2000 года от свиней выделен изолят вируса ящура типа О №1734/Приморский/2000. Сравнительный анализ нуклеотидных последовательностей штамма О №1734/Приморский/2000, показал, что данный вирус относится к генетической линии PanAsia типа О. Паназиатский вирус вызвал пандемию ящура в 1999-2000 годах в большинстве стран Азии, в том числе в Японии, Корее, Вьетнаме, Монголии, а также Армении и Грузии. Опустошительная эпизоотия ящура в Великобритании в 2001 году была также вызвана вирусом данной генетической линии. Штамм О №1734/Приморский/2000 имеет наиболее высокий уровень гомологии (98,74%) с изолятами О Вьетнам/99 и О Тайвань/99. При этом по антигенным характеристикам он отличается от всех выделенных ранее штаммов О1 №194 и О1 №1618/Чечено-Ингушский/66, используемых для изготовления средств диагностики и специфической профилактики [15].On April 13, 2000, foot and mouth disease isolate of type O No. 1734 / Primorsky / 2000 was isolated from pigs on the territory of the Russian Federation at the Stepnoye farm in the village of Elite, Ussuriysky District, Primorsky Territory. A comparative analysis of the nucleotide sequences of strain O No. 1734 / Primorsky / 2000 showed that this virus belongs to the PanAsia type O line. The pan-Asian virus caused a pandemic of foot and mouth disease in 1999-2000 in most countries in Asia, including Japan, Korea, and Vietnam , Mongolia, as well as Armenia and Georgia. The devastating epidemic of foot and mouth disease in the UK in 2001 was also caused by a virus of this genetic line. Strain O No. 1734 / Primorsky / 2000 has the highest homology level (98.74%) with isolates O Vietnam / 99 and O Taiwan / 99. Moreover, by antigenic characteristics, it differs from all previously isolated strains O 1 No. 194 and O 1 No. 1618 / Chechen-Ingush / 66, used for the manufacture of diagnostic tools and specific prophylaxis [15].

В Восточно-Гобийском аймаке Монголии в феврале 2004 года от КРС выделили штамм О №1964/Монголия/2004, который используется для производства диагностических и вакцинных препаратов [16].In the East Gobi aimak of Mongolia in February 2004, strain O No. 1964 / Mongolia / 2004 was isolated from cattle, which is used for the production of diagnostic and vaccine preparations [16].

В странах Юго-Восточной Азии (Бутан, Монголия, Непал, Китай и др.) за 2015-2017 гг.по квартальным данным WRL FMD неоднократно выделяли изоляты вируса ящура, которые по результатам молекулярно-биологического анализа гена VP1, относятся к генетической линии O/ME-SA/Ind-01d. Следует отметить, что вирус ящура линии О Ind-2001 был выделен на территории Российской Федерации впервые.In the countries of Southeast Asia (Bhutan, Mongolia, Nepal, China, etc.) for 2015-2017, according to quarterly WRL FMD data, FMD virus isolates were repeatedly isolated, which, according to the results of the molecular biological analysis of the VP 1 gene, belong to the genetic line O / ME-SA / Ind-01d. It should be noted that FMD virus of the O-Ind-2001 line was isolated in the Russian Federation for the first time.

Наиболее близкой предлагаемому изобретению по совокупности существенных признаков является вакцина инактивированная эмульсионная против ящура типа О, содержащая активное вещество в виде авирулентного и очищенного антигенного материала из гомологичного возбудителю инфекции штамма О №2147/Приморский/2012, полученного в чувствительной биологической системе, и целевые добавки в виде масляного адъюванта в соотношении, мкг/см3:The closest to the invention according to the set of essential features is an inactivated emulsion vaccine against foot and mouth disease type O containing the active substance in the form of avirulent and purified antigenic material from strain O No. 2147 / Primorsky / 2012, homologous to the pathogen, obtained in a sensitive biological system, and targeted additives in in the form of an oil adjuvant in a ratio, mcg / cm 3 :

Антигенный материалAntigenic material 3,03.0 Масляный адъювантOil adjuvant 500000,0÷600000,0.500000.0 ÷ 600000.0.

В качестве чувствительной биологической системы для репродукции вируса ящура используют перевиваемую суспензионную клеточную линию из почки новорожденного сирийского хомячка ВНК-21, в качестве поддерживающей среды применяют раствор Эрла без внесения сыворотки, с добавлением ферментативного гидролизата мышц сухого (ФГМС), гидролизата белков крови сухого (ГБКС) и антибиотиков при рН среды 7,4-7,6.An adaptable suspension cell line from the kidney of a newborn Syrian hamster VNK-21 is used as a sensitive biological system for the reproduction of foot and mouth disease virus; Earl solution without serum is added as a supporting medium, with the addition of dry muscle enzyme hydrolyzate (FGMS), dry blood protein hydrolyzate (GBKS) ) and antibiotics at a pH of 7.4-7.6.

Для инактивации вируса используют аминоэтилэтиленимин (АЭЭИ). При изготовлении эмульсионной вакцины в качестве адъювантов служат Montanide ISA-206. Очистку вируссодержащей суспензии от балластных примесей осуществляют с применением полигексаметиленгуанидин гидрохлорид (ПГМГ).For inactivation of the virus, aminoethylethyleneimine (AEEI) is used. In the manufacture of an emulsion vaccine, Montanide ISA-206 is used as adjuvant. Purification of the virus-containing suspension from ballast impurities is carried out using polyhexamethylene guanidine hydrochloride (PHMG).

Авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма О №2147/Приморский/2012 представляет собой суспензию, состоящую преимущественно из 146S и 75S иммуногенных компонентов вируса ящура.Avirulent and purified antigenic material from strain O No. 2147 / Primorsky / 2012 is a suspension consisting mainly of 146S and 75S immunogenic components of foot and mouth disease virus.

Существенный недостаток известных вакцин, в том числе и вакцины-прототипа, состоит в их недостаточной иммуногенной активности, что объясняется невысокой степенью защиты восприимчивых животных от эпизоотических изолятов вируса ящура типа О, циркулирующего в странах Центральной и Юго-Восточной Азии.A significant drawback of the known vaccines, including the prototype vaccine, is their insufficient immunogenic activity, which is explained by the low degree of protection of susceptible animals from epizootic isolates of FMD virus type O circulating in Central and Southeast Asia.

Для решения этой проблемы было создано настоящее изобретение, в которое входила разработка противоящурной инактивированной эмульсионной вакцины, обеспечивающей эффективную раннюю защиту восприимчивых животных против полевых изолятов вируса ящура типа О, распространенных на территории Центральной и Юго-Восточной Азии.To solve this problem, the present invention was created, which included the development of FMD inactivated emulsion vaccine that provides effective early protection of susceptible animals against field isolates of FMD virus type O, common in Central and Southeast Asia.

Технический результат от использования предлагаемого изобретения заключается в расширении арсенала вакцин для ранней защиты против ящура типа О инактивированных эмульсионных.The technical result from the use of the invention is to expand the arsenal of vaccines for early protection against foot and mouth disease type O inactivated emulsion.

Указанный технический результат достигнут созданием вакцины для ранней защиты против ящура типа О инактивированной эмульсионной, охарактеризованной следующей совокупностью признаков.The specified technical result was achieved by creating a vaccine for early protection against foot and mouth disease type O inactivated emulsion, characterized by the following set of features.

Разработанная вакцина в 1 см3 препарата содержит следующие компоненты: активное вещество в виде авирулентного и очищенного антигенного материала из гомологичного возбудителю инфекции штамма О №2344/Монголия/2017 вируса ящура, репродуцированного предпочтительно в перевиваемой суспензионной клеточной линии ВНК-21, в количестве не менее 3,0 мкг и масляный адъювант Montanide ISA-206 предпочтительно в количестве 500000,0-575000,0 мкг, соответственно.The developed vaccine in 1 cm 3 of the preparation contains the following components: the active substance in the form of avirulent and purified antigenic material from the foot-and-mouth disease virus homologous to the infection pathogen strain O No. 2344 / Mongolia / 2017, preferably reproduced in the transplantable suspension cell line VNK-21, in an amount of not less than 3.0 μg and Montanide ISA-206 oil adjuvant, preferably in an amount of 500,000.0-575000.0 μg, respectively.

Изолят вируса ящура, послуживший источником для получения штамма вируса ящура типа О №2344/Монголия/2017, был выделен в ноябре 2017 года от больных ящуром КРС, находящихся на территории Монголии (экспертиза №2344). Производственный штамм вируса ящура типа О №2344/Монголия/ 2017 получен путем последовательных пассажей на чувствительных гетеро- и гомологичных культурах клеток.The foot-and-mouth disease isolate, which served as a source for the type O foot-and-mouth disease virus strain No. 2344 / Mongolia / 2017, was isolated in November 2017 from foot and mouth disease cattle in Mongolia (examination No. 2344). The production strain of foot and mouth disease virus of type O No. 2344 / Mongolia / 2017 was obtained by successive passages on sensitive hetero- and homologous cell cultures.

Штамм вируса ящура типа О №2344/Монголия/2017 депонирован в Коллекцию штаммов микроорганизмов Федерального государственного бюджетного учреждения «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГБУ «ВНИИЗЖ»), под регистрационным номером: №116 - деп / 19-6 - КШМ ФГБУ «ВНИИЗЖ».The strain of foot and mouth disease virus type O No. 2344 / Mongolia / 2017 was deposited in the Collection of microorganism strains of the Federal State Budgetary Institution “Federal Center for Animal Health” (FSBI “VNIIZZH”), under registration number: No. 116 - dep / 19-6 - KShM FSBI “ ARRIAH ".

Штамм адаптирован к первично-трипсинизированным клеткам свиной почки и перевиваемым клеточным линиям из почки новорожденного сирийского хомячка (ВНК-21), почки свиньи (IB-RS-2) и почки сибирского горного козерога (ПСГК-30).The strain is adapted to primary trypsinized cells of the pig kidney and transplantable cell lines from the kidney of the newborn Syrian hamster (BHK-21), pig kidney (IB-RS-2) and kidney of the Siberian mountain ibex (PSGK-30).

Для изготовления вакцины в качестве чувствительной биологической системы используют предпочтительно перевиваемую суспензионную культуру клеток ВНК-21, а в качестве поддерживающей среды применяют раствор Эрла без внесения сыворотки с добавлением ФГМС, ГБКС и антибиотиков при рН среды 7,4-7,6. Инактивацию вируса проводят с использованием АЭЭИ с концентрацией 0,025-0,050% от объема вируссодержащей суспензии. По окончании процесса АЭЭИ нейтрализуют внесением в суспензию тиосульфата натрия [8]. Инактивированный антиген очищают от балластных примесей с помощью ПГМГ, который вносят в суспензию до концентрации 0,005-0,007% от общего объема [9].For the manufacture of the vaccine, a preferably transplantable suspension culture of BHK-21 cells is used as a sensitive biological system, and Earle's solution without serum is added as a supporting medium with the addition of FGMS, GBKS and antibiotics at a pH of 7.4-7.6. Inactivation of the virus is carried out using AEEI with a concentration of 0.025-0.050% of the volume of the virus-containing suspension. At the end of the process, AEEI is neutralized by adding sodium thiosulfate to the suspension [8]. The inactivated antigen is purified from ballast impurities using PHMG, which is added to the suspension to a concentration of 0.005-0.007% of the total volume [9].

Авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма О №2344/Монголия/2017 представляет собой суспензию, содержащую преимущественно 146S иммуногенный компонент вируса ящура.Avirulent and purified antigenic material from strain O No. 2344 / Mongolia / 2017 is a suspension containing predominantly 146S immunogenic component of foot and mouth disease virus.

Содержание компонента в продукте оценивают с помощью количественного варианта реакции связывания комплемента (РСК) [10]. Для приготовления вакцины используют вирусный материал, содержащий в 1 см3 не менее 0,5 мкг 146S иммуногенного компонента вируса ящура. Необходимую концентрацию 146S компонента в вакцинном препарате обеспечивают благодаря концентрированию антигена методом проточной ультрафильтрации.The content of the component in the product is evaluated using a quantitative version of the complement binding reaction (CSC) [10]. For the preparation of the vaccine, viral material containing at least 0.5 μg of 146S immunogenic component of foot and mouth disease virus is used in 1 cm 3 . The required concentration of the 146S component in the vaccine preparation is ensured by concentration of the antigen by flow ultrafiltration.

Эмульсионную инактивированную вакцину против ящура типа О получают путем диспергирования при помощи гомогенизатора концентрата ящурного антигена и масляного адъюванта в соотношении 1:1 по массе, соответственно. Для усиления иммунного ответа используют масляный адъювант производства фирмы «Seppic» Montanide ISA-206.An inactivated emulsion type O vaccine against foot and mouth disease is obtained by dispersing a homogeneous concentrate of FMD antigen and an oil adjuvant in a 1: 1 ratio by weight, respectively, using a homogenizer. To enhance the immune response, an oil adjuvant manufactured by Seppic Montanide ISA-206 is used.

Полученная вакцина представляет собой молокоподобную жидкость, не растворимую в воде.The resulting vaccine is a milk-like liquid, insoluble in water.

Предлагаемое изобретение включает следующую совокупность существенных признаков, обеспечивающих получение технического результата во всех случаях, на которые спрашивается правовая охрана:The present invention includes the following set of essential features that provide a technical result in all cases for which legal protection is requested:

1. Вакцина инактивированная эмульсионная против ящура типа О.1. Inactivated emulsion vaccine against foot and mouth disease type O.

2. Активное вещество в виде авирулентного и очищенного антигенного материала из гомологичного возбудителю инфекции штамма О №2344/Монголия/2017 вируса ящура в эффективном количестве.2. The active substance in the form of avirulent and purified antigenic material from an effective amount of foot and mouth disease virus homologous to the causative agent of strain O No. 2344 / Mongolia / 2017.

3. Целевые добавки.3. Targeted supplements.

Существенные отличительные признаки предлагаемой вакцины заключаются в том, что в качестве активного вещества она содержит авирулентный очищенный антигенный материал из штамма О №2344/Монголия/2017 в эффективном количестве.The salient features of the proposed vaccine are that it contains the avirulent purified antigenic material from strain O No. 2344 / Mongolia / 2017 in an effective amount as the active substance.

Предлагаемое изобретение характеризуется также другими отличительными признаками, выражающими конкретные формы выполнения или особые условия его использования:The present invention is also characterized by other distinctive features expressing specific forms of execution or special conditions for its use:

1. Авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма О №2344/Монголия/2017 вируса ящура типа О, полученный предпочтительно в суспензионной перевиваемой культуре клеток ВНК-21 и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S иммуногенный компонент вируса ящура в эффективном количестве.1. Avirulent and purified antigenic material from O type strain No. 2344 / Mongolia / 2017 of foot-and-mouth disease virus type O, obtained preferably in a suspension transplantable cell culture of BHK-21 and representing a suspension containing predominantly 146S immunogenic component of foot-and-mouth disease virus in an effective amount.

2. Авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма О №2344/Монголия/2017 вируса ящура типа О, полученный предпочтительно в суспензионной перевиваемой культуре клеток ВНК-21 и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S иммуногенный компонент вируса ящура в количестве не менее 3,0 мкг в 1 см3 готового препарата.2. Avirulent and purified antigenic material from strain O No. 2344 / Mongolia / 2017 of foot and mouth disease virus type O, obtained preferably in a suspension transplantable cell culture of BHK-21 and representing a suspension containing predominantly 146S immunogenic component of foot and mouth disease virus in an amount of at least 3.0 mcg in 1 cm 3 of the finished drug.

3. Из целевых добавок вакцина содержит масляный адъювант.3. Of the targeted additives, the vaccine contains an oil adjuvant.

4. Из целевых добавок вакцина содержит масляный адъювант Montanide ISA-206.4. Of the targeted supplements, the vaccine contains Montanide ISA-206 Oil Adjuvant.

5. Вакцина содержит масляный адъювант Montanide ISA-206 в количестве 500000,0-575000,0 мкг в 1 см3 готового препарата.5. The vaccine contains Montanide ISA-206 oil adjuvant in an amount of 500,000.0-575000.0 μg in 1 cm 3 of the finished product.

6. Авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма О №2344/Монголия/2017 вируса ящура, полученного предпочтительно в суспензионной перевиваемой культуре клеток BHK-21 и масляный адъювант Montanide ISA-206 в количестве, мкг/см готового препарата:6. Avirulent and purified antigenic material from strain O No. 2344 / Mongolia / 2017 of foot and mouth disease virus, obtained preferably in suspension transplantable cell culture BHK-21 and oil adjuvant Montanide ISA-206 in the amount, μg / cm of the finished product:

Авирулентный и очищенныйAvirulent and purified антигенный материал вируса ящураFMD virus antigen material не менее 3,0not less than 3.0 Масляный адъювантOil adjuvant 500000,0-575000,0500000.0-575000.0

Предлагаемая вакцина обладает высокой иммуногенной активностью и обеспечивает надежную раннюю защиту против вируса ящура типа О, циркулирующего в странах Центральной и Юго-Восточной Азии.The proposed vaccine has high immunogenic activity and provides reliable early protection against FMD virus type O circulating in Central and Southeast Asia.

Достижение технического результата от использования изобретения обеспечивается тем, что в состав предлагаемой противоящурной вакцины в качестве активного вещества введен антигенный материал из штамма О №2344/Монголия/2017, обладающий высокой иммуногенной активностью, создающий эффективную раннюю защиту восприимчивых животных против вируса ящура серотипа О, вызывающего в последние годы вспышки заболевания в странах Центральной и Юго-Восточной Азии.The achievement of the technical result from the use of the invention is ensured by the fact that antigenic material from strain O No. 2344 / Mongolia / 2017 is introduced into the composition of the proposed FMD vaccine, having high immunogenic activity, which creates effective early protection of susceptible animals against FMD virus serotype O, causing in recent years, outbreaks in Central and Southeast Asia.

Сущность изобретения представлена на дендрограмме, которая отражает филогенетическое взаимоотношение штамма О №2344/Монголия/2017 вируса ящура с эпизоотическими изолятами и вакцинными штаммами вируса ящура серологического типа О. Дендрограмма основана на сравнении полных нуклеотидных последовательностей гена VP1.The invention is presented in a dendrogram that reflects the phylogenetic relationship of strain O No. 2344 / Mongolia / 2017 of foot and mouth disease virus with epizootic isolates and vaccine strains of foot and mouth disease virus of serological type O. The dendrogram is based on a comparison of the complete nucleotide sequences of the VP 1 gene.

Сущность изобретения изложена в перечне последовательностей, в котором:The invention is set forth in the list of sequences in which:

SEQ ID NO: 1 представляет последовательность нуклеотидов гена VP1 штамма О №2344/Монголия/2017 вируса ящура типа О;SEQ ID NO: 1 represents the nucleotide sequence of the VP 1 gene of strain O No. 2344 / Mongolia / 2017 of type O foot and mouth disease virus;

SEQ ID NO: 2 отражает последовательность аминокислот белка VP1 штамма О №2344/Монголия/2017 вируса ящура типа О.SEQ ID NO: 2 reflects the amino acid sequence of the VP 1 protein of strain O No. 2344 / Mongolia / 2017 of type O FMD virus.

Штамм О №2344/Монголия/2017 вируса ящура типа О характеризуется следующими признаками и свойствами.Strain O No. 2344 / Mongolia / 2017 of the FMD virus of type O is characterized by the following features and properties.

Морфологические признакиMorphological features

Штамм вируса ящура О №2344/Монголия/2017 относится к семейству Picornaviridae, роду Aphtovirus, серотипу О и обладает морфологическими признаками, характерными для возбудителя ящура: форма вириона икосаэдрическая, размер 23-25 нм. Вирион состоит из молекулы РНК, заключенной в белковую оболочку. Белковая оболочка состоит из 32 капсомеров, расположенных в кубической симметрии.The foot and mouth disease virus strain O No. 2344 / Mongolia / 2017 belongs to the Picornaviridae family, the genus Aphtovirus, O serotype and has morphological characteristics characteristic of the foot and mouth disease pathogen: the icosahedral virion form, size 23-25 nm. Virion consists of an RNA molecule enclosed in a protein coat. The protein shell consists of 32 capsomeres arranged in cubic symmetry.

Антигенные свойстваAntigenic properties

По своим антигенным свойствам штамм О №2344/Монголия/2017 вируса ящура относится к серотипу О. Вирус стабильно нейтрализуется гомологичной антисывороткой. Вирус не проявляет гемагглютинирующей активности (ГА-активности). У переболевших животных в сыворотке крови образуются типоспецифические антитела, выявляемые в иммуноферментном анализе (ИФА) и реакции микронейтрализации (РМН).According to its antigenic properties, strain O No. 2344 / Mongolia / 2017 of the foot and mouth disease virus belongs to the O serotype. The virus is stably neutralized by a homologous antiserum. The virus does not show hemagglutinating activity (GA activity). In sick animals, serum type-specific antibodies are formed that are detected in an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and microneutralization reaction (PMN).

Методом нуклеотидного секвенирования была определена первичная структура гена VP1 штамма вируса ящура О №2344/Монголия/2017. Сравнительный анализ нуклеотидных последовательностей показал, что штамм О №2344/Монголия/2017 вируса ящура принадлежит к генетической линии Ind-2001 топотипа Ближний Восток - Южная Азия.The primary structure of the VP 1 gene strain of foot and mouth disease virus No. 2344 / Mongolia / 2017 was determined by nucleotide sequencing. A comparative analysis of the nucleotide sequences showed that the strain O No. 2344 / Mongolia / 2017 of the foot and mouth disease virus belongs to the Ind-2001 genetic line of the Middle East - South Asia topotype.

Антигенное родство штамма О №2344/Монголия/2017 с производственными штаммами вируса ящура O1 Manisa, О №1734/Приморский/2000, О PanAsia-2, О №2147/Приморский/2012 и О №2212/Приморский/2014 изучено в РМН. Результаты исследований в РМН представлены в таблице 1, из которой следует, что антигенное соответствие (r1) составило для O1 Manisa - 0,45; О №1734/Приморский/2000 - 0,46; О PanAsia2 - 0,47; О №2147/Приморский/2012 - 0,74 и 0№2212/ Приморский/2014 - 0,24.Antigenic affinity of strain O No. 2344 / Mongolia / 2017 with production strains of foot-and-mouth disease virus O 1 Manisa, O No. 1734 / Primorsky / 2000, O PanAsia-2, O No. 2147 / Primorsky / 2012 and O No. 2212 / Primorsky / 2014 studied in RMN . The results of studies in the RMN are presented in table 1, from which it follows that the antigenic correspondence (r 1 ) amounted to 0.45 for O 1 Manisa; About No. 1734 / Primorsky / 2000 - 0.46; About PanAsia2 0.47; About No. 2147 / Primorsky / 2012 - 0.74 and 0№2212 / Primorsky / 2014 - 0.24.

При значении r1>0,3 полевой изолят и производственный штамм являются близкородственными, и вакцина из производственного штамма будет защищать от эпизоотического вируса, при значении r1<0,3 полевой изолят отличается от производственного штамма, и вакцина из данного штамма не защищает от эпизоотического вируса.When r 1 > 0.3, the field isolate and the production strain are closely related, and the vaccine from the production strain will protect against epizootic virus, when r 1 <0.3 the field isolate is different from the production strain, and the vaccine from this strain does not protect against epizootic virus.

Биотехнологические характеристикиBiotechnological characteristics

Штамм вируса ящура О №2344/Монголия/2017 репродуцируется в перевиваемых культурах клеток: почки сибирского горного козерога (ПСГК-30), почки свиньи (IB-RS-2), почки сирийского хомячка (ВНК-21). В течение 20-24 часов инкубирования урожай вируса в указанных культурах клеток достигает высоких значений от 5,70±0,25 до 6,25±0,25 lg ТЦД50/0,1 см3. Данный штамм сохраняет исходные характеристики при пассировании в клеточных культурах ПСГК-30 и IB-RS-2 на протяжении 3 последовательных пассажей (срок наблюдения). Кроме того, штамм О №2344/Монголия/2017 сохраняет исходные характеристики при пассировании в суспензионной клеточной линии ВНК-21 на протяжении 10 пассажей последовательных (срок наблюдения).Foot and mouth disease strain O No. 2344 / Mongolia / 2017 is reproduced in transplanted cell cultures: Siberian mountain capricorn kidney (PSGK-30), pig kidney (IB-RS-2), Syrian hamster kidney (VNK-21). Within 20-24 hours of incubation, the virus harvest in these cell cultures reaches high values from 5.70 ± 0.25 to 6.25 ± 0.25 lg TCD 50 / 0.1 cm 3 . This strain retains its original characteristics when passaged in PSGK-30 and IB-RS-2 cell cultures for 3 consecutive passages (observation period). In addition, strain O No. 2344 / Mongolia / 2017 retains its original characteristics when passaged in the BHK-21 suspension cell line for 10 consecutive passages (observation period).

Гено- и хемотаксономическая характеристикиGeno and chemotaxonomic characteristics

Штамм О №2344/Монголия/2017 вируса ящура принадлежит типу О, топотипу ME-SA генетической линии Ind-2001.Strain O No. 2344 / Mongolia / 2017 of foot and mouth disease virus belongs to type O, the topotype ME-SA of the genetic line Ind-2001.

Возбудитель является РНК-содержащим вирусом с молекулярной массой 7,6×106Д. Нуклеиновая кислота представлена одноцепочной линейной молекулой молекулярной массой 2,8×106 Д. Вирион имеет белковую оболочку, состоящую из четырех основных белков VP1, VP2, VP3 и VP4. Липопротеидная оболочка отсутствует.The causative agent is an RNA-containing virus with a molecular weight of 7.6 × 10 6 D. The nucleic acid is represented by a single-chain linear molecule with a molecular weight of 2.8 × 10 6 D. The virion has a protein shell consisting of four basic proteins VP 1 , VP 2 , VP 3 and VP 4 . The lipoprotein membrane is absent.

Основным антигенным белком является VP1. В вирионе содержится приблизительно 31,5% РНК и 68,5% белка. Вирионная РНК является инфекционной и участвует в образовании белков-предшественников в инфицированных клетках. Предшественники, в свою очередь, расщепляются с образованием более стабильных структурных и неструктурных полипептидов вируса. Из 8 неструктурных полипептидов, накапливающихся в инфицированных клетках, один (VP66a) является РНК-зависимой РНК-полимеразой, участвующей в репликации РНК новых вирионов.The main antigenic protein is VP 1 . The virion contains approximately 31.5% RNA and 68.5% protein. Virionic RNA is infectious and is involved in the formation of precursor proteins in infected cells. The precursors, in turn, are cleaved to form more stable structural and non-structural virus polypeptides. Of the 8 non-structural polypeptides that accumulate in infected cells, one (VP 66a ) is an RNA-dependent RNA polymerase involved in RNA replication of new virions.

Физические свойстваPhysical properties

Масса вириона составляет 8,4×1018 г. Константа седиментации - 146S. Плавучая плотность в градиенте сахарозы - 1,45 г/см3.The virion mass is 8.4 × 10 18 g. The sedimentation constant is 146S. The floating density in the sucrose gradient is 1.45 g / cm 3 .

Устойчивость к внешним факторамResistance to external factors

Штамм вируса ящура О №2344/Монголия/2017 устойчив к эфиру, хлороформу, фреону, ацетону и другим органическим растворителям и детергентам. Наиболее стабилен при рН 7,4-7,6. Сдвиги показателя кислотности как в кислую, так и в щелочную сторону ведут к инактивации вируса. Чувствителен к формальдегиду, УФ-облучению, γ-облучению, воздействию высоких температур.The foot and mouth disease virus strain No. 2344 / Mongolia / 2017 is resistant to ether, chloroform, freon, acetone and other organic solvents and detergents. Most stable at pH 7.4-7.6. Shifts in the acidity to both the acidic and alkaline sides lead to inactivation of the virus. It is sensitive to formaldehyde, UV radiation, γ-radiation, and high temperatures.

Дополнительные признаки и свойстваAdditional features and properties

Реактогенность - реактогенными свойствами не обладает.Reactogenicity - does not possess reactogenic properties.

Патогенность - патогенен для парнокопытных животных, новорожденных мышат, морских свинок.Pathogenicity - pathogenic for artiodactyl animals, newborn mice, guinea pigs.

Вирулентность - вирулентен для естественно-восприимчивых животных при контактном, аэрозольном и парентеральном заражении.Virulence - virulence for naturally susceptible animals with contact, aerosol and parenteral infection.

Стабильность - сохраняет исходные биологические свойства при пассировании в чувствительных биологических системах в течение 3 пассажей на перевиваемой культуре клеток IB-RS-2 (срок наблюдения).Stability - retains the original biological properties when passaged in sensitive biological systems for 3 passages on an inoculated IB-RS-2 cell culture (observation period).

При испытании было проведено 3 последовательных пассажей штамма вируса ящура О №2344/Монголия/2017 в перевиваемой культуре клеток IB-RS-2. Для определения биологической активности проводили титрование вируса каждого пассажа в перевиваемой культуре клеток IB-RS-2.During the test, 3 consecutive passages of a foot-and-mouth disease virus strain No. 2344 / Mongolia / 2017 were carried out in an IB-RS-2 transplanted cell culture. To determine the biological activity, each passage virus was titrated in an inoculated IB-RS-2 cell culture.

Исходя из полученных данных, можно утверждать, что штамм О №2344/Монголия/2017 по антигенному и иммунологическому спектрам является оригинальным, в таксономическом отношении новым, ранее неизвестным вариантом вируса ящура типа О, обладает более высокой протективной и иммуногенной активностью.Based on the data obtained, it can be argued that strain O No. 2344 / Mongolia / 2017 in terms of antigenic and immunological spectra is an original, taxonomically new, previously unknown variant of foot-and-mouth disease virus type O, has a higher protective and immunogenic activity.

Для снижения эпизоотической опасности ящура типа О и предотвращения возникновения новых очагов болезни важна своевременная вакцинопрофилактика, что требует разработки высокоиммуногенной вакцины.To reduce the epizootic danger of foot and mouth disease type O and to prevent the emergence of new foci of the disease, timely vaccination is important, which requires the development of a highly immunogenic vaccine.

Получена высокоиммуногенная инактивированная эмульсионная вакцина для ранней защиты против ящура типа О из штамма О №2344/Монголия/2017.Received highly immunogenic inactivated emulsion vaccine for early protection against foot and mouth disease type O from strain O No. 2344 / Mongolia / 2017.

Сущность предлагаемого изобретения пояснена примерами его использования, которые не ограничивают объем изобретения.The essence of the invention is illustrated by examples of its use, which do not limit the scope of the invention.

Пример 1. Получение и исследование биологических свойств штамма О №2344/Монголия/2017 вируса ящура.Example 1. The preparation and study of the biological properties of strain O No. 2344 / Mongolia / 2017 of foot and mouth disease virus.

Штамм О №2344/Монголия/2017 вируса ящура типа О был изолирован из полевого материала, поступившего в ФГБУ «ВНИИЗЖ» в виде эпителия афт от КРС, подозреваемых в заболевании ящуром, при проведении лабораторной диагностики этого заболевания и дифференциации его от других везикулярных болезней. С целью проведения изоляции вируса использован комплекс биологических, вирусологических и биохимических методов.Strain O No. 2344 / Mongolia / 2017, type O foot-and-mouth disease virus was isolated from field material received at the Federal State Budget Scientific Institution ARRIAH in the form of epithelium of aphthae from cattle suspected of foot and mouth disease during laboratory diagnosis of this disease and its differentiation from other vesicular diseases. In order to isolate the virus, a complex of biological, virological and biochemical methods was used.

Биологические и вирусологические методы включали выделение вируса в культуре первично-трипсинизированных клеток свиной почки (СП), перевиваемых линиях клеток ПСГК-30, IB-RS-2 с последующей адаптацией в течение 3 последовательных пассажей (таблица 2). Для постановки биопробы в первичных и перевиваемых культурах клеток их выращивали на соответствующих питательных средах, в стационарных условиях во флаконах с площадью поверхности 25 см2, отмывали от ростовой среды и заражали 10% суспензией афтозного материала (множественность заражения составляла 1-10 ТЦД50/клетка), приготовленной в растворе Хенкса с 0,5% гидролизата лактальбумина (ГЛА) и антибиотиками по стандартной рецептуре. Для удаления микрофлоры и балластных клеточных компонентов суспензию обрабатывали 10% хлороформа. После инкубации при температуре 37±1°С в течение 0,5 часа во флаконы вносили по 5 см поддерживающей среды и инкубировали при температуре 37±1°С до появления цитопатического действия (ЦПД) вируса, характеризующегося округлением клеток, дегенерацией и отделением клеток от стекла, повышением оптической плотности суспензии в видимом спектре света. После развития ЦПД флаконы подвергали процессу замораживания-оттаивания, очистке клеточной взвеси хлороформом и центрифугированию при 3000 об/мин (1200 g) в течение 0,25 ч. Полученный вирусосодержащий материал использовали для последующих пассажей и исследования в РСК для детекции вирусного антигена, при этом использовали коммерческие типоспецифические сыворотки, хранящихся в музее штаммов ФГБУ «ВНИИЗЖ». Возбудитель ящура считали адаптированным к культурам клеток, если в течение 18-24 часов клеточный монослой деструктировал под влиянием вируса на 90-100%.Biological and virological methods included the isolation of the virus in a culture of primary trypsinized pig kidney cells (SP), transplanted PSGK-30, IB-RS-2 cell lines, followed by adaptation for 3 consecutive passages (table 2). For staging biological samples in primary and transplantable cell cultures, they were grown on appropriate nutrient media, under stationary conditions in bottles with a surface area of 25 cm 2 , washed from the growth medium and infected with a 10% suspension of aphthous material (the multiplicity of infection was 1-10 TCD 50 / cell ) prepared in a Hanks solution with 0.5% lactalbumin hydrolyzate (GLA) and antibiotics according to a standard formulation. To remove microflora and ballast cell components, the suspension was treated with 10% chloroform. After incubation at a temperature of 37 ± 1 ° C for 0.5 hours, 5 cm of the supporting medium were added to the vials and incubated at a temperature of 37 ± 1 ° C until the cytopathic effect (CPP) of the virus was observed, characterized by rounding of cells, degeneration and separation of cells from glass, increasing the optical density of the suspension in the visible spectrum of light. After the development of the CPD, the bottles were subjected to freezing-thawing, purification of the cell suspension with chloroform and centrifugation at 3000 rpm (1200 g) for 0.25 hours. The obtained virus-containing material was used for subsequent passages and studies in the CSC for the detection of viral antigen, while used commercial type-specific sera stored in the Museum of strains of FSBI "ARRIAH". The causative agent of foot and mouth disease was considered adapted to cell cultures if within 18-24 hours the cell monolayer was destroyed by 90-100% under the influence of the virus.

Вирус, адаптированный к культуре клеток IB-RS-2, использовали для получения антигена для РСК.The virus adapted to the IB-RS-2 cell culture was used to produce antigen for CSC.

Вирус, адаптированный к культуре клеток ПСГК-30, был использован для заражения суспензии клеток ВНК-21 с целью получения антигена для изготовления экспериментальной серии вакцины, а также для гипериммунизации морских свинок.The virus adapted to the PSGK-30 cell culture was used to infect the VNK-21 cell suspension in order to obtain antigen for the manufacture of an experimental vaccine series, as well as for hyperimmunization of guinea pigs.

Результаты исследований представлены в таблице 3, данные которой свидетельствуют о высокой адаптационной активности штамма О №2344/Монголия/2017 вируса ящура типа О к использованным клеточным культурам.The research results are presented in table 3, the data of which testify to the high adaptive activity of strain O No. 2344 / Mongolia / 2017 of type O foot and mouth disease virus to the used cell cultures.

Пример 2. Сравнительный анализ биологических свойств штамма О №2344/Монголия/2017 с производственными штаммами вируса ящура типа О.Example 2. A comparative analysis of the biological properties of strain O No. 2344 / Mongolia / 2017 with production strains of foot and mouth disease virus type O.

При изучении свойств штамма О №2344/Монголия/2017 вируса ящура выявлены значительные преимущества в сравнении с другими используемыми производственными штаммами О №2344/Монголия/2017, О №2147/Приморский/2012, О №1734/Приморский/2000, О №1618/Чечено-Ингушский/66, O/PanAsia2. В качестве тест-системы для заражения использовали суспензию клеток линии ВНК-21 с концентрацией 3,0-3,5 млн клеток/см3. Доза заражения составляла 0,005 ТЦД50/клетка.When studying the properties of strain O No. 2344 / Mongolia / 2017 of foot and mouth disease virus, significant advantages were revealed in comparison with other used production strains O No. 2344 / Mongolia / 2017, O No. 2147 / Primorsky / 2012, O No. 1734 / Primorsky / 2000, O No. 1618 / Chechen-Ingush / 66, O / PanAsia2. As a test system for infection, a suspension of cells of the BHK-21 line with a concentration of 3.0-3.5 million cells / cm 3 was used . The infection dose was 0.005 TCD 50 / cell.

В таблице 4 приведены результаты культивирования вируса ящура штаммов представленных штаммов из которой следует, что разрушение клеток ВНК-21 до 90-95% у штамма О №2344/Монголия/2017 наступает спустя 20,0±0,5 ч, при этом для штаммов О №2147/Приморский/2012, О №1734/Приморский/2000, О №1618/Чечено-Ингушский/66 и O/PanAsia2 это время снижено до 14,0±0,5, 13,5±1,0, 12,0±1,5, 12,5±1,0 ч, соответственно. При этом результаты репродукции вируса ящура указанных штаммов свидетельствуют о преимуществах О №2344/Монголия/2017, поскольку для него характерны более высокие значения титра инфекционной активности (6,25±0,25 lg ТЦД50/0,1 см3) по сравнению со штаммами О №2147/Приморский/2012, О №1734/Приморский/2000, О №1618/Чечено-Ингушский/66, O/PanAsia2 для которых значения титра инфекционности соответствовали показаниям 6,00±0,15, 6,00±0,15, 6,10±0,25, 6,00±0,25 lg ТЦД50/0,1 см3. По итогам сравнительного анализа выявлено, что накопление 146S иммуногенного компонента для полученного штамма О №2344/Монголия/2017 составляла 2,20±0,06 мкг/см3, что на 35,8, 21,55, 22,91, 42,86% выше по сравнению с репродукцией штаммов О №2147/Приморский/2012, О №1734/Приморский/2000, О №1618/Чечено-Ингушский/66, O/PanAsia2, соответственно. Следует также отметить, что при культивировании штамма О №2344/Монголия/2017 массовая доля 146S компонента от содержания общего вирусного белка составляет 83,33±1,55%, что на 11,32, 15,28, 18,24, 12,28% выше по сравнению со средними данными для штаммов О №2147/Приморский/2012, О №1734/Приморский/2000, О №1618/Чечено-Ингушский/66, O/PanAsia2, соответственно.Table 4 shows the results of the cultivation of foot-and-mouth disease virus of the strains of the presented strains from which it follows that the destruction of BHK-21 cells to 90-95% in strain O No. 2344 / Mongolia / 2017 occurs after 20.0 ± 0.5 hours, while for strains About No. 2147 / Primorsky / 2012, About No. 1734 / Primorsky / 2000, About No. 1618 / Chechen-Ingush / 66 and O / PanAsia2 this time is reduced to 14.0 ± 0.5, 13.5 ± 1.0, 12 , 0 ± 1.5, 12.5 ± 1.0 h, respectively. Moreover, the results of the reproduction of foot and mouth disease virus of the indicated strains indicate the advantages of О No. 2344 / Mongolia / 2017, since it is characterized by higher values of the titer of infectious activity (6.25 ± 0.25 log TCD 50 / 0.1 cm 3 ) compared to strains About No. 2147 / Primorsky / 2012, About No. 1734 / Primorsky / 2000, About No. 1618 / Chechen-Ingush / 66, O / PanAsia2 for which the values of the infectivity titer corresponded to the readings of 6.00 ± 0.15, 6.00 ± 0 , 15, 6.10 ± 0.25, 6.00 ± 0.25 log TCD 50 / 0.1 cm 3 . According to the results of a comparative analysis, it was found that the accumulation of 146S immunogenic component for the obtained strain O No. 2344 / Mongolia / 2017 was 2.20 ± 0.06 μg / cm 3 , which is 35.8, 21.55, 22.91, 42, 86% higher in comparison with the reproduction of strains O No. 2147 / Primorsky / 2012, O No. 1734 / Primorsky / 2000, O No. 1618 / Chechen-Ingush / 66, O / PanAsia2, respectively. It should also be noted that during the cultivation of strain O No. 2344 / Mongolia / 2017, the mass fraction of the 146S component of the total viral protein content is 83.33 ± 1.55%, which is 11.32, 15.28, 18.24, 12, 28% higher than the average for strains O No. 2147 / Primorsky / 2012, O No. 1734 / Primorsky / 2000, O No. 1618 / Chechen-Ingush / 66, O / PanAsia2, respectively.

Пример 3. Получение инактивированного антигена и исследование влияния инактивации и очистки антигенного материала с помощью АЭЭИ и ПГМГ на количество 146S компонента вируса ящура штамма О №2344/Монголия/2017.Example 3. Obtaining an inactivated antigen and studying the effect of inactivation and purification of antigenic material using AEI and PHMG on the amount of 146S component of foot and mouth disease virus strain O No. 2344 / Mongolia / 2017.

Инактивированную эмульсионную вакцину для ранней защиты против ящура типа О готовят из штамма О №2344/Монголия/2017 вируса ящура, выращенного в суспензионной перевиваемой клеточной линии ВНК-21. В качестве поддерживающей среды используют раствор Эрла без сыворотки с добавлением ФГМС, ГБКС и антибиотиков при рН среды 7,4-7,6. Культуру клеток заражают вирусом из расчета 0,005-0,100 ТЦД50/клетка.An inactivated emulsion vaccine for early protection against type O foot and mouth disease is prepared from strain O No. 2344 / Mongolia / 2017 of foot and mouth disease virus grown in the BHK-21 suspension transplantable cell line. As a supporting medium, an Earle solution without serum is used with the addition of FGMS, GBKS and antibiotics at a pH of 7.4-7.6. The cell culture is infected with a virus at the rate of 0.005-0.100 TCD 50 / cell.

Культивирование вируса осуществляют при температуре 35-37°С. Через 6-7 часов инкубирования оценивают концентрацию живых и мертвых клеток при их окрашивании трипановым синим. Если количество живых клеток составляет 15-20%, то экспозицию с вирусом продолжают еще 2-4 часа. При достижении цитопатического действия около 85-95% репродукцию вируса ящура прекращают, а полученную суспензию контролируют на стерильность и содержание 146S компонента. Концентрация 146S компонента вируса ящура в суспензии должна составлять не менее 0,5 мкг/см3. Сразу по окончании цикла репродукции вируса, не прекращая процесса термостатирования, в вируссодержащую суспензию добавляют 15-20%-ный раствор АЭЭИ, подкисленный ледяной уксусной кислотой до рН 8,2-8,5. Конечная концентрация АЭЭИ в вируссодержащей суспензии должна составлять 0,025-0,050%. Инактивацию инфекционности вируса проводят в течение 12 часов при температуре 36-37°С и рН 7,2-7,6 с перемешиванием через 5-6 часов в течение 3-5 минут. Для флокуляции балластных примесей и инактивации возможных контаминантов в теплую суспензию вносят 10%-ный раствор ПГМГ до концентрации 0,005-0,007%. Флокулированные балластные примеси подвергают седиментации с последующей декантацией.The cultivation of the virus is carried out at a temperature of 35-37 ° C. After 6-7 hours of incubation, the concentration of living and dead cells when they are stained with trypan blue is estimated. If the number of living cells is 15-20%, then exposure to the virus continues for another 2-4 hours. When a cytopathic effect is achieved, about 85-95% of the reproduction of foot and mouth disease virus is stopped, and the suspension obtained is monitored for sterility and the content of the 146S component. The concentration of 146S component of the virus of foot and mouth disease in suspension should be at least 0.5 μg / cm 3 . Immediately after the end of the virus reproduction cycle, without stopping the thermostating process, a 15–20% AEEI solution, acidified with glacial acetic acid to pH 8.2–8.5, is added to the virus-containing suspension. The final concentration of AEEI in the virus-containing suspension should be 0.025-0.050%. Inactivation of the infectiousness of the virus is carried out for 12 hours at a temperature of 36-37 ° C and a pH of 7.2-7.6 with stirring after 5-6 hours for 3-5 minutes. For flocculation of ballast impurities and inactivation of possible contaminants, a 10% solution of PHMG is added to the warm suspension to a concentration of 0.005-0.007%. Flocculated ballast impurities are subjected to sedimentation followed by decantation.

Результаты исследований по изучению влияния инактивации и очистки антигенного материала с помощью АЭЭИ и ПГМГ на количество 146S компонента вируса ящура штамма О №2344/Монголия/2017 отражены в таблице 5. Из данных таблицы 5 видно, что до инактивации среднее значение концентрации общего вирусного белка составило 2,64±0,04 мкг/см3, 146S компонента - 2,20±0,03 мкг/см3. После процесса инактивации средние показатели снизились на 87,96-94,09%) и составили для общего вирусного белка 2,41±0,05 мкг/см3, для 146S компонента (вирионов) - 1,99±0,06 мкг/см. Таким образом, 146S иммуногенный компонент штамма О №2344/Монголия/2017 вируса ящура устойчив к инактивации и очистке.The results of studies on the effect of inactivation and purification of antigenic material using AEI and PHMG on the amount of 146S component of foot-and-mouth disease virus strain O No. 2344 / Mongolia / 2017 are shown in table 5. From the data in table 5 it is seen that before inactivation the average concentration of total viral protein was 2.64 ± 0.04 μg / cm 3 , 146S component - 2.20 ± 0.03 μg / cm 3 . After the inactivation process, the average values decreased by 87.96-94.09%) and amounted to 2.41 ± 0.05 μg / cm 3 for the total viral protein, 1.99 ± 0.06 μg / for the 146S component (virions) cm. Thus, the 146S immunogenic component of strain O No. 2344 / Mongolia / 2017 of foot and mouth disease virus is resistant to inactivation and purification.

Пример 4. Концентрирование антигена вируса ящура штамма О №2344/Монголия/2017 для получения вакцины.Example 4. Concentration of antigen of foot and mouth disease virus strain No. 2344 / Mongolia / 2017 to obtain a vaccine.

Необходимую концентрацию 146S компонентов в прививной дозе эмульсионной вакцины из штамма О №2344/Монголия/2017 получают путем концентрирования антигена проточной ультрафильтрацией с применением ультрафильтров при давлением 1,5 атм. Полученный концентрат антигена хранят при температуре 4-6°С до момента использования. Получаемую вакцину расфасовывают в стеклянные или пластиковые флаконы и проводят контроль стерильности продукции в соответствии с ГОСТ 28085-89.The required concentration of 146S components in the graft dose of the emulsion vaccine from strain O No. 2344 / Mongolia / 2017 is obtained by concentration of the antigen by flow ultrafiltration using ultrafilters at a pressure of 1.5 atm. The resulting antigen concentrate is stored at a temperature of 4-6 ° C until use. The resulting vaccine is packaged in glass or plastic bottles and sterilized products are monitored in accordance with GOST 28085-89.

Пример 5. Процесс диспергирования антигена и адъюванта для получения инактивированной эмульсионной вакцины против ящура из штамма О №2344/Монголия/2017.Example 5. The process of dispersing the antigen and adjuvant to obtain an inactivated emulsion vaccine against foot and mouth disease from strain O No. 2344 / Mongolia / 2017.

Инактивированную эмульсионную вакцину для ранней защиты против ящура типа О получают путем диспергирования на коллоидных мельницах концентрата антигена и масляного адъюванта. В качестве адъюванта применяют Montanide ISA-206 производства фирмы «Seppic» (Франция, стандарт ИСО 9001).An inactivated emulsion vaccine for early protection against type O foot and mouth disease is obtained by dispersing antigen concentrate and an oil adjuvant in colloid mills. Montanide ISA-206 manufactured by Seppic (France, ISO 9001 standard) is used as an adjuvant.

При изготовлении эмульсионной вакцины на основе Montanide ISA-206 адъювант и антиген подогревают до температуры 25-30°С и на гомогенизаторе проводят их диспергирование в соотношении 1:1.In the manufacture of an emulsion vaccine based on Montanide ISA-206, the adjuvant and antigen are heated to a temperature of 25-30 ° C and dispersed in a 1: 1 ratio on a homogenizer.

В результате получают вакцину инактивированную эмульсионную против ящура из производственного штамма О №2344/Монголия/2017, которая представляет собой молокоподобную жидкость, нерастворимую в воде. Вакцина имеет жидкую консистенцию, легко рассасывается в месте введения, не вызывает образования абсцессов, общей реакции в виде повышения температуры. Обладает выраженной иммуногенной активностью для КРС и свиней в прививной дозе 2 см3 через 21 день после введения. В 1 см3 должно содержаться не менее 3 мкг 146S компонента вируса ящура. Оптимальный компонентный состав полученной вакцины представлен на странице 9.The result is an inactivated emulsion vaccine against foot and mouth disease from the production strain O No. 2344 / Mongolia / 2017, which is a milk-like liquid insoluble in water. The vaccine has a liquid consistency, easily dissolves at the injection site, does not cause the formation of abscesses, a general reaction in the form of an increase in temperature. It has a pronounced immunogenic activity for cattle and pigs in a vaccination dose of 2 cm 3 21 days after administration. At least 3 μg of the 146S component of the foot and mouth disease virus should be contained in 1 cm 3 . The optimal component composition of the resulting vaccine is presented on page 9.

Пример 6. Оценка авирулентности и безвредности инактивированной эмульсионной вакцины против ящура из штамма О №2344/Монголия/2017.Example 6. Evaluation of the avirulence and harmlessness of an inactivated emulsion vaccine against foot and mouth disease from strain O No. 2344 / Mongolia / 2017.

Для определения авирулентности вакцины на свиньях отобранную пробу вакцинного препарата вводили внутрикожно по 0,1 см3 в две точки венчика на каждой конечности. В исследовании использовали свиней массой 35-40 кг. В течение 10 суток наблюдения животные остались клинически здоровыми, и при патологоанатомическом исследовании не было обнаружено изменений, характерных для ящура. Это свидетельствовало об отсутствии вирулентных свойств разработанной вакцины.To determine the virulence of the vaccine in pigs, a sample of the vaccine preparation was injected intracutaneously at 0.1 cm 3 at two points of the corolla on each limb. The study used pigs weighing 35-40 kg. During the 10 days of observation, the animals remained clinically healthy, and the pathological study did not reveal any changes characteristic of foot and mouth disease. This indicated the absence of virulent properties of the developed vaccine.

Контроль безвредности продукта на свиньях проводили путем внутримышечного введения вакцины в область верхней трети шеи в дозе 6 см3. Срок наблюдения также составлял 10 суток. Следует отметить, что после инокуляции температура тела животного может повышаться до 41°С и удерживаться на этом уровне в течение 1-3 суток.The safety of the product in pigs was controlled by intramuscular injection of the vaccine in the region of the upper third of the neck at a dose of 6 cm 3 . The observation period was also 10 days. It should be noted that after inoculation, the body temperature of the animal can increase to 41 ° C and stay at this level for 1-3 days.

По результатам исследований вакцина была признана безвредной, все животные в период наблюдения оставались клинически здоровыми, при патологоанатомическом анализе некроза тканей на месте введения вакцины не обнаружено.According to the results of the studies, the vaccine was found to be harmless, all animals remained clinically healthy during the observation period, and no pathological anatomical analysis of tissue necrosis was detected at the injection site.

Пример 7. Оценка гуморального иммунитета у свиней при использовании противоящурной вакцины из штамма О №2344/Монголия/2017 против гомологичного штамма и гетерологичных штаммов O/PanAsia2 и О №2147/Приморский/2012.Example 7. Evaluation of humoral immunity in pigs when using FMD vaccine from strain O No. 2344 / Mongolia / 2017 against a homologous strain and heterologous strains O / PanAsia2 and O No. 2147 / Primorsky / 2012.

Проведена оценка гуморального иммунитета у свиней, привитых инактивированной противоящурной эмульсионной вакциной из штамма О №2344/Монголия/2017 против гомологичного штамма и гетерологичных штаммов O/PanAsia2 и О №2147/Приморский/2012.The humoral immunity in pigs vaccinated with inactivated FMD vaccine from strain O No. 2344 / Mongolia / 2017 against the homologous strain and heterologous strains O / PanAsia2 and O No. 2147 / Primorsky / 2012 was evaluated.

Проведены испытания эмульсионной вакцины против ящура типа О, изготовленной так, как описано в примерах 4, 5, 6 и содержащей, мкг в 4 см3:Tested emulsion vaccine against foot and mouth disease type O, made as described in examples 4, 5, 6 and containing, mcg in 4 cm 3 :

авирулентный и очищенныйavirulent and purified антигенный материал из штаммаstrain antigenic material О №2344/Монголия/2017 вируса ящура типа ОAbout No. 2344 / Mongolia / 2017, type O FMD virus 24,2224.22 масляный адъювант ISA-206oil adjuvant ISA-206 2200000,02,200,000.0

Испытание провели на 5 головах свиней. Эмульсионную вакцину вводили внутримышечно в дозе 4,0 см3. Результаты исследований представлены в таблице 6, из данных которой видно, что эмульсионная вакцина стимулировала у свиней выработку вируснейтрализующих антител (ВНА) против гомологичного штамма О №2344/Монголия/2017 на 4 сутки после вакцинации в количестве 3,00±0,36 log2, против гетерологичных штаммов O/PanAsia2 - 1,50±0,18 log2 и О №2147/Приморский/2012 - 1,75±0,18 log2. На 7 сутки после инокуляции титры антител против гомологичного штамма О №2344/Монголия/2017 составили 3,90±0,30 log2, против гетерологичных штаммов O/PanAsia2 - 2,00±0,33 log2 и О №2147/Приморский/2012 - 3,25±0,26 log2. Разница в титрах вируснейтрализующих антител является существенной и достоверной. Таким образом, моновалентная эмульсионная противоящурная вакцина из штамма О №2344/Монголия/2017 обеспечивает раннюю защиту подсвинков от гомологичного штамма и гетерологичных штаммов O/PanAsia2 и О №2147/Приморский/2012.The test was carried out on 5 heads of pigs. The emulsion vaccine was administered intramuscularly at a dose of 4.0 cm 3 . The research results are presented in table 6, the data of which shows that the emulsion vaccine stimulated the production of virus neutralizing antibodies (VNA) in pigs against homologous strain O No. 2344 / Mongolia / 2017 on the 4th day after vaccination in the amount of 3.00 ± 0.36 log 2 against heterologous strains of O / PanAsia2 - 1.50 ± 0.18 log 2 and O No. 2147 / Primorsky / 2012 - 1.75 ± 0.18 log 2 . On the 7th day after inoculation, antibody titers against homologous strain O No. 2344 / Mongolia / 2017 amounted to 3.90 ± 0.30 log 2 , against heterologous O / PanAsia2 strains 2.00 ± 0.33 log 2 and O No. 2147 / Primorsky / 2012 - 3.25 ± 0.26 log 2 . The difference in the titers of neutralizing antibodies is significant and significant. Thus, the monovalent emulsion anti-FMD vaccine from strain O No. 2344 / Mongolia / 2017 provides early protection of gilts from the homologous strain and heterologous strains O / PanAsia2 and O No. 2147 / Primorsky / 2012.

Пример 8. Оценка гуморального иммунитета у свиней при использовании противоящурной вакцины из штамма O/PanAsia2 против гомологичного штамма и гетерологичного штамма О №2344/Монголия/2017.Example 8. Evaluation of humoral immunity in pigs when using FMD vaccine from strain O / PanAsia2 against a homologous strain and heterologous strain O No. 2344 / Mongolia / 2017.

Проведена оценка гуморального иммунитета у свиней на 4 и 7 сутки после вакцинации, привитых инактивированной противоящурной эмульсионной вакциной из штамма O/PanAsia2, против гетерологичного штамма О №2344/Монголия/2017 вируса ящура.The humoral immunity in pigs was assessed on days 4 and 7 after vaccination inoculated with inactivated FMD vaccine from strain O / PanAsia2 against heterologous strain O No. 2344 / Mongolia / 2017 of foot and mouth disease virus.

Проведены испытания эмульсионной вакцины против ящура типа О, изготовленной так, как описано в примерах 4, 5, 6 и содержащей, мкг в 4 см3:Tested emulsion vaccine against foot and mouth disease type O, made as described in examples 4, 5, 6 and containing, mcg in 4 cm 3 :

авирулентный и очищенныйavirulent and purified антигенный материал из штаммаstrain antigenic material O/PanAsia2 вируса ящура типа ОO / PanAsia2 type O foot and mouth disease virus 21,2221.22 масляный адъювант ISA-206oil adjuvant ISA-206 2200000,02,200,000.0

Испытание провели на 5 головах свиней. Эмульсионную вакцину вводили внутримышечно в дозе 4,0 см3. Результаты исследований представлены в таблице 7, из данных которой видно, что эмульсионная вакцина стимулировала у свиней выработку ВНА против гомологичного штамма O/PanAsia2 на 4 сутки после иммунизации в количестве 3,00±0,38 log2, против гетерологичного штамма О №2344/Монголия/2017 - 2,05±0,17 log2. На 7 сутки после инокуляции титры антител против гомологичного вируса ящура O/PanAsia2 соответствовали значению 3,40±0,36 log2, против гетерологичного штамма О №2344/Монголия/2017 - 2,35±0,31 log2. Разница в титрах вируснейтрализующих антител является существенной и достоверной. Из этого следует, что вакцина, изготовленная из производственного штамма O/PanAsia2 не создает гуморальный иммунитет для защиты животных от заражения гетерологичным штаммом вируса ящура О №2344/Монголия/2017.The test was carried out on 5 heads of pigs. The emulsion vaccine was administered intramuscularly at a dose of 4.0 cm 3 . The research results are presented in table 7, the data of which shows that the emulsion vaccine stimulated pigs to produce BHA against the homologous strain O / PanAsia2 on the 4th day after immunization in the amount of 3.00 ± 0.38 log 2 , against the heterologous strain O No. 2344 / Mongolia / 2017 - 2.05 ± 0.17 log 2 . On the 7th day after inoculation, antibody titers against homologous foot and mouth disease virus O / PanAsia2 corresponded to 3.40 ± 0.36 log 2 , against heterologous strain O No. 2344 / Mongolia / 2017, 2.35 ± 0.31 log 2 . The difference in the titers of neutralizing antibodies is significant and significant. It follows that the vaccine made from the production strain O / PanAsia2 does not create humoral immunity to protect animals from infection with the heterologous strain of foot and mouth disease virus O No. 2344 / Mongolia / 2017.

Пример 9. Оценка гуморального иммунитета у свиней при использовании противоящурной вакцины из штаммаExample 9. Evaluation of humoral immunity in pigs using the FMD vaccine from the strain

О №2147/Приморский/2012 против гомологичного штамма и гетерологичного штамма О №2344/Монголия/2017.About No. 2147 / Seaside / 2012 against a homologous strain and a heterologous strain About No. 2344 / Mongolia / 2017.

Проведена оценка гуморального иммунитета у свиней на 4 и 7 сутки после вакцинации, привитых инактивированной противоящурной эмульсионной вакциной из штамма О №2147/Приморский/2012, против гетерологичного штамма О №2344/Монголия/2017 вируса ящура.The humoral immunity in pigs was evaluated on days 4 and 7 after vaccination inoculated with inactivated FMD vaccine from strain O No. 2147 / Primorsky / 2012 against the heterologous strain O No. 2344 / Mongolia / 2017 of foot and mouth disease virus.

Проведены испытания эмульсионной вакцины против ящура типа О, изготовленной так, как описано в примерах 4, 5, 6 и содержащей, мкг в 4 см3:Tested emulsion vaccine against foot and mouth disease type O, made as described in examples 4, 5, 6 and containing, mcg in 4 cm 3 :

авирулентный и очищенныйavirulent and purified антигенный материал из штаммаstrain antigenic material О №2147/Приморский/2012 вируса ящура типа ОAbout No. 2147 / Seaside / 2012, type O FMD virus 20,0020.00 масляный адъювант ISA-206oil adjuvant ISA-206 2200000,02,200,000.0

Испытание провели на 5 головах свиней. Эмульсионную вакцину вводили внутримышечно в дозе 4,0 см3. Результаты исследований представлены в таблице 8, из данных которой видно, что эмульсионная вакцина стимулировала у свиней выработку вируснейтрализующих антител против гомологичного штамма О №2147/Приморский/2012 на 4 сутки после иммунизации в количестве 3,35±0,17 log2, против гетерологичного штамма О №2344/Монголия/2017 - 3,25±0,18 log2. На 7 сутки после инокуляции титры антител против гомологичного штамма вируса ящура О №2147/Приморский/2012 составили 4,20±0,29 log2, против гетерологичного штамма О №2344/Монголия/2017 - 3,60±0,27 log2. Разница в титрах вируснейтрализующих антител является существенной и достоверной. Из этого следует, что вакцина, изготовленная из производственного штамма О №2147/Приморский/2017 не создает гуморальный иммунитет для защиты животных от заражения гетерологичным штаммом вируса ящура О №2344/Монголия/2017.The test was carried out on 5 heads of pigs. The emulsion vaccine was administered intramuscularly at a dose of 4.0 cm 3 . The research results are presented in table 8, the data of which shows that the emulsion vaccine stimulated the production of virus-neutralizing antibodies against the homologous strain O No. 2147 / Primorsky / 2012 on day 4 after immunization in the amount of 3.35 ± 0.17 log 2 , against heterologous strain O No. 2344 / Mongolia / 2017 - 3.25 ± 0.18 log 2 . On the 7th day after inoculation, antibody titers against a homologous strain of foot and mouth disease virus No. 2147 / Primorsky / 2012 amounted to 4.20 ± 0.29 log 2 , against heterologous strain O No. 2344 / Mongolia / 2017 - 3.60 ± 0.27 log 2 . The difference in the titers of neutralizing antibodies is significant and significant. It follows that the vaccine made from the production strain O No. 2147 / Primorsky / 2017 does not create humoral immunity to protect animals from infection with a heterologous strain of foot and mouth disease virus No. 2344 / Mongolia / 2017.

Пример 10. Оценка гуморального иммунитета у КРС при использовании противоящурной вакцины из штамма О №2344/Монголия/2017 против гомологичного штамма и гетерологичных штаммов O/PanAsia2 и О №2147/Приморский/2012.Example 10. Evaluation of humoral immunity in cattle when using FMD vaccine from strain O No. 2344 / Mongolia / 2017 against a homologous strain and heterologous strains O / PanAsia2 and O No. 2147 / Primorsky / 2012.

Проведена оценка гуморального иммунитета у КРС, привитых инактивированной противоящурной эмульсионной вакциной из штамма О №2344/Монголия/2017 против гомологичного штамма и гетерологичных штаммов O/PanAsia2 и О №2147/Приморский/2012.The humoral immunity of cattle grafted with an inactivated FMD vaccine from strain O No. 2344 / Mongolia / 2017 against the homologous strain and heterologous strains O / PanAsia2 and O No. 2147 / Primorsky / 2012 was evaluated.

Проведены испытания эмульсионной вакцины против ящура типа О, изготовленной так, как описано в примерах 4, 5, 6 и содержащей, мкг в 4 см3:Tested emulsion vaccine against foot and mouth disease type O, made as described in examples 4, 5, 6 and containing, mcg in 4 cm 3 :

авирулентный и очищенныйavirulent and purified антигенный материал из штаммаstrain antigenic material О №2344/Монголия/2017 вируса ящура типа ОAbout No. 2344 / Mongolia / 2017, type O FMD virus 24,2224.22 масляный адъювант ISA-206oil adjuvant ISA-206 2200000,02,200,000.0

Испытание провели на 6 головах КРС. Эмульсионную вакцину вводили внутримышечно в дозе 4,0 см3. Результаты исследований представлены в таблице 9, из данных которой видно, что эмульсионная вакцина стимулировала у КРС выработку вируснейтрализующих антител против гомологичного штамма О №2344/Монголия/2017 на 4 сутки после вакцинации в количестве 3,46±0,24 log2, против гетерологичных штаммов O/PanAsia2 и О №2147/Приморский/2012 - 3,21±0,33 и 3,21±0,22 log2, соответственно. На 7 сутки после инокуляции титры антител против гомологичного штамма О №2344/Монголия/2017 составили 5,00±0,21 log2, а против гетерологичных штаммов O/PanAsia2 и О №2147/Приморский/2012 - 4,46±0,12 и 4,33±0,11 log2, соответственно. Разница в титрах вируснейтрализующих антител является существенной и достоверной. Иными словами, моновалентная эмульсионная противоящурная вакцина из штамма О №2344/Монголия/2017 обеспечивает раннюю защиту КРС от гомологичного штамма и гетерологичных штаммов O/PanAsia2 и О №2147/Приморский/2012.The test was conducted on 6 heads of cattle. The emulsion vaccine was administered intramuscularly at a dose of 4.0 cm 3 . The research results are presented in table 9, from the data of which it is seen that the emulsion vaccine stimulated the production of virus-neutralizing antibodies in cattle against homologous strain O No. 2344 / Mongolia / 2017 on the 4th day after vaccination in the amount of 3.46 ± 0.24 log 2 , against heterologous strains O / PanAsia2 and O No. 2147 / Primorsky / 2012 - 3.21 ± 0.33 and 3.21 ± 0.22 log 2 , respectively. On the 7th day after inoculation, antibody titers against homologous strain O No. 2344 / Mongolia / 2017 amounted to 5.00 ± 0.21 log 2 , and against heterologous strains O / PanAsia2 and O No. 2147 / Primorsky / 2012 - 4.46 ± 0, 12 and 4.33 ± 0.11 log 2 , respectively. The difference in the titers of neutralizing antibodies is significant and significant. In other words, a monovalent emulsion anti-FMD vaccine from strain O No. 2344 / Mongolia / 2017 provides early protection of cattle from the homologous strain and heterologous strains O / PanAsia2 and O No. 2147 / Primorsky / 2012.

Пример 11. Оценка гуморального иммунитета у крупного рогатого скота при использовании противоящурной вакцины из штамма O/PanAsia2 против гомологичного штамма и гетерологичного штамма О №2344/Монголия/2017.Example 11. Evaluation of humoral immunity in cattle using the FMD vaccine from strain O / PanAsia2 against the homologous strain and heterologous strain O No. 2344 / Mongolia / 2017.

Проведена оценка гуморального иммунитета у КРС на 4 и 7 сутки после вакцинации, привитых инактивированной эмульсионной противоящурной вакциной из штамма O/PanAsia2, против гетерологичного штамма О №2344/Монголия/2017 вируса ящура.The humoral immunity of cattle was evaluated on days 4 and 7 after vaccination inoculated with inactivated emulsion FMD vaccine from strain O / PanAsia2 against heterologous strain O No. 2344 / Mongolia / 2017 of foot and mouth disease virus.

Проведены испытания эмульсионной вакцины против ящура типа О, изготовленной так, как описано в примерах 4, 5, 6 и содержащей, мкг в 4 см3:Tested emulsion vaccine against foot and mouth disease type O, made as described in examples 4, 5, 6 and containing, mcg in 4 cm 3 :

авирулентный и очищенныйavirulent and purified антигенный материал из штаммаstrain antigenic material O/PanAsia2 вируса ящура типа ОO / PanAsia2 type O foot and mouth disease virus 21,2221.22 масляный адъювант ISA-206oil adjuvant ISA-206 2200000,02,200,000.0

Испытание провели на 6 головах КРС. Эмульсионную вакцину вводили внутримышечно в дозе 4,0 см3. Результаты исследований представлены в таблице 10, из данных которой следует, что полученная вакцина стимулировала у КРС выработку вируснейтрализующих антител против гомологичного штамма O/PanAsia2 на 4 сутки после иммунизации в количестве 2,42±0,14 log2, против гетерологичного штамма О №2344/Монголия/2017 - 2,00±0,22 log2. На 7 сутки после инокуляции титры антител против гомологичного вируса ящура O/PanAsia2 составили 4,92±0,15 log2, против гетерологичного штамма О №2344/Монголия/2017 - 2,83±0,13 log2. Разница в титрах вируснейтрализующих антител является существенной и достоверной. Из этого следует, что инактивированная эмульсионная противоящурная вакцина, изготовленная из производственного штамма O/PanAsia2 не создает гуморальный иммунитет для защиты животных от заражения гетерологичным вирусом ящура О №2344/Монголия/2017.The test was conducted on 6 heads of cattle. The emulsion vaccine was administered intramuscularly at a dose of 4.0 cm 3 . The results of the studies are presented in table 10, from the data of which it follows that the vaccine obtained stimulated the production of virus-neutralizing antibodies in cattle against the homologous strain O / PanAsia2 on the 4th day after immunization in the amount of 2.42 ± 0.14 log 2 , against the heterologous strain O No. 2344 / Mongolia / 2017 - 2.00 ± 0.22 log 2 . On the 7th day after inoculation, antibody titers against homologous foot and mouth disease virus O / PanAsia2 amounted to 4.92 ± 0.15 log 2 , against heterologous strain O No. 2344 / Mongolia / 2017 - 2.83 ± 0.13 log 2 . The difference in the titers of neutralizing antibodies is significant and significant. It follows that an inactivated emulsion FMD vaccine made from the production strain O / PanAsia2 does not create humoral immunity to protect animals from infection with the heterologous foot and mouth disease virus No. 2344 / Mongolia / 2017.

Пример 12. Оценка гуморального иммунитета у КРС при использовании противоящурной вакцины из штамма О №2147/Приморский/2012 против гомологичного штамма и гетерологичного штамма О №2344/Монголия/2017.Example 12. Evaluation of humoral immunity in cattle when using FMD vaccine from strain O No. 2147 / Primorsky / 2012 against a homologous strain and heterologous strain O No. 2344 / Mongolia / 2017.

Проведена оценка гуморального иммунитета у КРС на 4 и 7 сутки после вакцинации, привитых инактивированной эмульсионной противоящурной вакциной из штамма О №2147/Приморский/2012, против гетерологичного штамма О №2344/Монголия/2017 вируса ящура.The humoral immunity of cattle was evaluated on days 4 and 7 after vaccination inoculated with inactivated emulsion FMD vaccine from strain O No. 2147 / Primorsky / 2012, against the heterologous strain O No. 2344 / Mongolia / 2017 of foot and mouth disease virus.

Проведены испытания эмульсионной вакцины против ящура типа О, изготовленной так, как описано в примерах 4, 5, 6 и содержащей, мкг в 4 см3:Tested emulsion vaccine against foot and mouth disease type O, made as described in examples 4, 5, 6 and containing, mcg in 4 cm 3 :

авирулентный и очищенныйavirulent and purified антигенный материал из штаммаstrain antigenic material О №2147/Приморский/2012 вируса ящура типа ОAbout No. 2147 / Seaside / 2012, type O FMD virus 20,0020.00 масляный адъювант ISA-206oil adjuvant ISA-206 2200000,02,200,000.0

Испытание провели на 6 головах КРС. Эмульсионную вакцину вводили внутримышечно в дозе 4,0 см3. Результаты исследований представлены в таблице 11, из данных которой видно, что инактивированная эмульсионная противоящурная вакцина у свиней стимулировала выработку вируснейтрализующих антител против гомологичного штамма О №2147/Приморский/2012 на 4 сутки после иммунизации в количестве 2,25±0,14 log2, против гетерологичного штамма О №2344/Монголия/2017 - 1,79±0,10 log2. На 7 сутки после инокуляции титры антител составили против гомологичного вируса ящура О №2147/Приморский/2012 - 4,13±0,11 log2, против гетерологичного штамма О №2344/Монголия/2017 - 3,46±0,10 log2. Разница в титрах вируснейтрализующих антител является существенной и достоверной. Иными словами, что вакцина, изготовленная из производственного штамма О №2147/Приморский/2017 не создает гуморальный иммунитет для защиты животных от заражения гетерологичным штаммом вируса ящура О №2344/Монголия/2017.The test was conducted on 6 heads of cattle. The emulsion vaccine was administered intramuscularly at a dose of 4.0 cm 3 . The research results are presented in table 11, from the data of which it is seen that the inactivated emulsion FMD vaccine in pigs stimulated the production of virus-neutralizing antibodies against homologous strain O No. 2147 / Primorsky / 2012 on the 4th day after immunization in the amount of 2.25 ± 0.14 log 2 , against the heterologous strain O No. 2344 / Mongolia / 2017 - 1.79 ± 0.10 log 2 . On the 7th day after inoculation, antibody titers were against a homologous foot and mouth disease virus O No. 2147 / Primorsky / 2012 - 4.13 ± 0.11 log 2 , against a heterologous strain O No. 2344 / Mongolia / 2017 - 3.46 ± 0.10 log 2 . The difference in the titers of neutralizing antibodies is significant and significant. In other words, a vaccine made from production strain O No. 2147 / Primorsky / 2017 does not create humoral immunity to protect animals from infection with a heterologous strain of foot and mouth disease virus No. 2344 / Mongolia / 2017.

Пример 13. Оценка иммуногенной активности вакцин против ящура из штаммов О №2147/Приморский/2012 и O/PanAsia2 на естественно восприимчивых животных против гетерологичного штамма О №2344/Монголия/2017.Example 13. Evaluation of the immunogenic activity of vaccines against foot and mouth disease from strains O No. 2147 / Primorsky / 2012 and O / PanAsia2 in naturally susceptible animals against heterologous strain O No. 2344 / Mongolia / 2017.

Проведены испытания эмульсионных вакцин против ящура типа О, изготовленной так, как описано в примерах 4, 5, 6 и содержащей, мкг в 4 см3:Tests of emulsion vaccines against foot and mouth disease type O, made as described in examples 4, 5, 6 and containing, mcg in 4 cm 3 :

авирулентный и очищенныйavirulent and purified антигенный материал из штаммаstrain antigenic material О №2344/Монголия/2017 вируса ящура типа ОAbout No. 2344 / Mongolia / 2017, type O FMD virus 24,2224.22 масляный адъювант ISA-206oil adjuvant ISA-206 2200000,0.2,200,000.0 авирулентный и очищенныйavirulent and purified антигенный материал из штаммаstrain antigenic material O/PanAsia2 вируса ящура типа ОO / PanAsia2 type O foot and mouth disease virus 21,2221.22 масляный адъювант ISA-206oil adjuvant ISA-206 2200000,0.2,200,000.0 авирулентный и очищенныйavirulent and purified антигенный материал из штаммаstrain antigenic material О №2147/Приморский/2012 вируса ящура типа ОAbout No. 2147 / Seaside / 2012, type O FMD virus 20,0020.00 масляный адъювант ISA-206oil adjuvant ISA-206 2200000,0.2,200,000.0

Испытания провели на 48 головах подсвинках и 48 головах КРС результаты исследований указаны в таблицах 12 и 13. Эмульсионные вакцины вводили в дозе 4 см3.The tests were carried out on 48 heads of gilts and 48 heads of cattle, the research results are shown in tables 12 and 13. Emulsion vaccines were administered in a dose of 4 cm 3 .

Из данных таблиц 12 и 13 следует, что разработанная инактивированная эмульсионная противоящурная вакцина для ранней защиты из штамма О №2344/Монголия/2017 по итогам контрольного заражения штаммами О №2344/Монголия/2017, O/PanAsia2 и О №2147/Приморский/2012 обеспечивает защиту против гомологичного и гетерологичных штаммов вируса ящура типа О.From the data of tables 12 and 13 it follows that the developed inactivated emulsion FMD vaccine for early protection from strain O No. 2344 / Mongolia / 2017 following the control of infection with strains O No. 2344 / Mongolia / 2017, O / PanAsia2 and O No. 2147 / Primorsky / 2012 provides protection against homologous and heterologous strains of foot and mouth disease virus type O.

Таким образом, приведенная выше информация свидетельствует о том, что вакцина инактивированная эмульсионная против ящура типа О, воплощающая предлагаемое изобретение, предназначена для использования в сельском хозяйстве, а именно в ветеринарной вирусологии и биотехнологии; подтверждена возможность осуществления представленного; вакцина, изготовленная из штамма О №2344/Монголия/2017 в соответствии с предлагаемым изобретением, обладает высокой иммуногенной активностью и способна обеспечить раннюю эффективную защиту восприимчивых животных против эпизоотического штамма вируса ящура типа О, циркулирующего в странах Центральной и Юго-Восточной Азии.Thus, the above information indicates that the inactivated emulsion vaccine against foot and mouth disease type O, embodying the invention, is intended for use in agriculture, namely in veterinary virology and biotechnology; confirmed the possibility of implementing the presented; the vaccine made from strain O No. 2344 / Mongolia / 2017 in accordance with the invention has high immunogenic activity and is able to provide early effective protection of susceptible animals against the epizootic strain of FMD virus type O circulating in Central and Southeast Asia.

Источники информации, принятые во внимание при составлении описания изобретения к заявке на выдачу патента РФ на изобретение «Вакцина для ранней защиты против ящура типа О эмульсионная инактивированная»:Sources of information taken into account when drawing up the description of the invention to the application for the grant of a patent of the Russian Federation for the invention "Vaccine for early protection against foot and mouth disease type O inactivated emulsion":

1. Annual OIE/FAO FMD Reference Laboratory Network Report / N. Ferris, N. Knowles [et al.]. - Pirbright, 2007. - URL: http://www.wrlfmd.org/ref_labs/fmd_ref_lab_reports.htm.1. Annual OIE / FAO FMD Reference Laboratory Network Report / N. Ferris, N. Knowles [et al.]. - Pirbright, 2007. - URL: http://www.wrlfmd.org/ref_labs/fmd_ref_lab_reports.htm.

2. OIE. Manual of diagnostic tests and vaccines for terrestrial animals - 24th Ed. -, Paris, 2015 - Vol. 1, Chapter 2.1.5. - P. 166-169.2. OIE. Manual of diagnostic tests and vaccines for terrestrial animals - 24th Ed. -, Paris, 2015 - Vol. 1, Chapter 2.1.5. - P. 166-169.

3. Бурдов A.H., Дудников А.И., Малярец П.В. и др. Ящур. - М.: Агропромиздат, 1990. - 320 с.3. Burdov A.H., Dudnikov A.I., Malyarets P.V. and other foot and mouth disease. - M .: Agropromizdat, 1990 .-- 320 p.

4. Пономарев А.П., Узюмов В.Л., Груздев К.Н. Вирус ящура: структура, биологические и физико-химические свойства. - Владимир: Фолиант, 2006. - 250 с.4. Ponomarev A.P., Uzumov V.L., Gruzdev K.N. Foot and mouth disease virus: structure, biological and physico-chemical properties. - Vladimir: Tome, 2006 .-- 250 p.

5. Aspects of emergency vaccination against foot-and-mouth disease / P. Barnett, J.M/ Garland, R.P. Kitching [et.al.] // Comparative Immunology, Microbiology and Infectious Diseases. - October 2002. - V. 25. - P. 345-364.5. Aspects of emergency vaccination against foot-and-mouth disease / P. Barnett, J.M / Garland, R.P. Kitching [et.al.] // Comparative Immunology, Microbiology and Infectious Diseases. - October 2002. - V. 25. - P. 345-364.

6. Brown F. A brief history of FMD and its casual agent. FMD: Control Strateies: Proc. Jnt. Symp. 2-5. June 2002, Lyons, France. - Paris, 2003. - p. 13-21.6. Brown F. A brief history of FMD and its casual agent. FMD: Control Strateies: Proc. Jnt. Symp 2-5. June 2002, Lyons, France. - Paris, 2003 .-- p. 13-21.

7. Pepep X. Ящур. - M., 1971. - 432 c.7. Pepep X. Foot and mouth disease. - M., 1971. - 432 c.

8. Grubman M.J. Development of novel stategies to control FMD: marker vaccines and antivirals Biologicals. - 2005. - Vol. 33. №4. - P. 227-234.8. Grubman M.J. Development of novel stategies to control FMD: marker vaccines and antivirals Biologicals. - 2005. - Vol. 33. No. 4. - P. 227-234.

9. Alexandersen, S., Zhang, Z., Donaldson, A.L. and Garland, A.J.M. (2003) The pathogenesis and diagnosis of foot and mouth disease. J. Compr. Pathol., V. 129. - p. 268-282.9. Alexandersen, S., Zhang, Z., Donaldson, A.L. and Garland, A.J.M. (2003) The pathogenesis and diagnosis of foot and mouth disease. J. Compr. Pathol., V. 129. - p. 268-282.

10. Рахманов A.M. Современная эпизоотическая ситуация в мире по ящуру и меры ее контроля.//Ветеринарная медицина мiжвiд. тем. наук. Харкiв, 2013. - С. 37-38.10. Rakhmanov A.M. The current epizootic situation in the world for foot-and-mouth disease and measures for its control. // Veterinary medicine mizhvid. by that. sciences. Kharkiv, 2013 .-- S. 37-38.

11. J.S. Salt, P.V. Barnett, P. Dani L. Williams. Emergency vaccination of pigs against foot-and-mouth disease: protection against disease and reduction in contact transmission / Vaccine. - 1998. - V. 16. - P. 746-754.11. J.S. Salt, P.V. Barnett, P. Dani L. Williams. Emergency vaccination of pigs against foot-and-mouth disease: protection against disease and reduction in contact transmission / Vaccine. - 1998. - V. 16. - P. 746-754.

12. Михалишин Д.В., Лезова Т.Н., Ходакова Н.Н., Борисов А.В., Клюкина Н.Д., Стариков В.А., Михалишин В.В., Балашов А.Н. Динамика развития противоящурного гуморального иммунитета у крупного рогатого скота, иммунизированного трехвалентной сорбированной вакциной типов А, О, Азия-1 // Труды Федерального центра охраны здоровья животных. - Владимир, 2007. - Т. 5. - С. 75-82.12. Mikhalishin D.V., Lezova T.N., Khodakova N.N., Borisov A.V., Klyukina N.D., Starikov V.A., Mikhalishin V.V., Balashov A.N. Dynamics of development of FMD humoral immunity in cattle immunized with a trivalent sorbed vaccine of types A, O, Asia-1 // Transactions of the Federal Center for Animal Health. - Vladimir, 2007.- T. 5. - S. 75-82.

13. Aspects of emergency vaccination against foot-and-mouth disease / P. Barnett, J.M/ Garland, R.P. Kitching [et.al.] // Comparative Immunology, Microbiology and Infectious Diseases. - 2002. - V. 25. - P. 345-364.13. Aspects of emergency vaccination against foot-and-mouth disease / P. Barnett, J.M / Garland, R.P. Kitching [et.al.] // Comparative Immunology, Microbiology and Infectious Diseases. - 2002. - V. 25. - P. 345-364.

14. Horsingtona J., Zhangb Z., Bittnerb H., Holeb K., Singanallura N.В., Alexandersenb S., Vosloo W.. Early protection in sheep against intratypic heterologous challengewith serotype О foot-and-mouth disease virus using high-potency, emergency vaccine // Vaccine. - 2015. - V.35. - P. 422-429.14. Horsingtona J., Zhangb Z., Bittnerb H., Holeb K., Singanallura N.V., Alexandersenb S., Vosloo W. .. Early protection in sheep against intratypic heterologous challengewith serotype About foot-and-mouth disease virus using high-potency, emergency vaccine // Vaccine. - 2015. - V.35. - P. 422-429.

15. Спирин В.К. Иммунобиологические свойства эпизоотического штамма вируса ящура типа О №1734 Приморский/2000 / В.К. Спирин, А.И. Егорова, С.Р. Кременчугская [и др.] // Тр. Федерального центра охраны здоровья ж-ных. - Владимир. - 2007. - Т. 5. - С. 52-58.15. Spirin V.K. Immunobiological properties of the epizootic strain of FMD virus type O No. 1734 Primorsky / 2000 / V.K. Spirin, A.I. Egorova, S.R. Kremenchug [et al.] // Tr. Federal Center for Women's Health. - Vladimir. - 2007. - T. 5. - S. 52-58.

16. Фомина Т.А. Иммунобиологические свойства эпизоотического штамма вируса ящура типа О №1964/Монголия/2004 / Т.А. Фомина, В.К. Спирин, А.И. Егорова [и др.] // Труды Федерального центра охраны здоровья животных. - Владимир. - 2005. - Т. 3. - С. 94-104.16. Fomina T.A. Immunobiological properties of the epizootic strain of FMD virus type O No. 1964 / Mongolia / 2004 / T.A. Fomina, V.K. Spirin, A.I. Egorova [et al.] // Proceedings of the Federal Center for Animal Health. - Vladimir. - 2005. - T. 3. - S. 94-104.

Figure 00000001
Figure 00000001

Figure 00000002
Figure 00000002

Figure 00000003
Figure 00000003

Figure 00000004
Figure 00000004

Figure 00000005
Figure 00000005

Figure 00000006
Figure 00000006

Figure 00000007
Figure 00000007

Figure 00000008
Figure 00000008

Figure 00000009
Figure 00000009

Figure 00000010
Figure 00000010

Figure 00000011
Figure 00000011

Figure 00000012
Figure 00000012

Figure 00000013
Figure 00000013

Figure 00000014
Figure 00000014

Figure 00000015
Figure 00000015

Figure 00000016
Figure 00000016

Claims (8)

1. Вакцина для ранней защиты против ящура типа О инактивированная эмульсионная, содержащая активное вещество и адъюванты, отличающаяся тем, что в качестве активного вещества она содержит авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма вируса Aphtae epizooticae «О №2344/Монголия/2017», сем. Picornaviridae, рода Aphtovirus, типа О, депонированного в Коллекцию штаммов микроорганизмов ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГБУ «ВНИИЗЖ»), под регистрационным номером: №116 - деп / 19-6 - КШМ ФГБУ «ВНИИЗЖ», в эффективном количестве.1. The vaccine for early protection against type O foot and mouth disease inactivated emulsion, containing the active substance and adjuvants, characterized in that it contains avirulent and purified antigenic material from the Aphtae epizooticae virus strain “O No. 2344 / Mongolia / 2017”, sem . Picornaviridae, genus Aphtovirus, type O, deposited in the Collection of microorganism strains of the Federal Center for Animal Health (FSBI ARRIAH), under registration number: No. 116 - dep / 19-6 - KShM FSBI ARRIAH, in an effective amount . 2. Вакцина по п. 1, отличающаяся тем, что она содержит авирулентный и очищенный антигенный материал из гомологичного возбудителю инфекции штамма О №2344/Монголия/2017, полученный в чувствительной биологической системе и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S иммуногенный компонент вируса ящура типа О.2. The vaccine according to claim 1, characterized in that it contains avirulent and purified antigenic material from strain O No. 2344 / Mongolia / 2017 homologous to the pathogen, obtained in a sensitive biological system and consisting of a suspension containing predominantly 146S immunogenic component of FMD virus ABOUT. 3. Вакцина по п. 2, отличающаяся тем, что она содержит авирулентный и очищенный антигенный материал из гомологичного возбудителю инфекции штамма О №2344/Монголия/2017, полученный предпочтительно в перевиваемой культуре клеток ВНК-21 и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S иммуногенный компонент вируса ящура типа О.3. The vaccine according to claim 2, characterized in that it contains avirulent and purified antigenic material from strain O No. 2344 / Mongolia / 2017 homologous to the infection pathogen, preferably obtained in the transplantable cell culture of BHK-21 and which is a suspension containing predominantly 146S immunogenic component of the FMD virus type O. 4. Вакцина по п. 3, отличающаяся тем, что она содержит авирулентный и очищенный антигенный материал из гомологичного возбудителю инфекции штамма О №2344/Монголия/2017, полученный предпочтительно в перевиваемой культуре клеток ВНК-21 и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S иммуногенный компонент вируса ящура типа О в количестве не менее 3,0 мкг в 1 см3 готового препарата.4. The vaccine according to claim 3, characterized in that it contains avirulent and purified antigenic material from strain O No. 2344 / Mongolia / 2017 homologous to the infection pathogen, preferably obtained in the transplantable cell culture of BHK-21 and representing a suspension containing predominantly 146S immunogenic component of the FMD virus type O in an amount of not less than 3.0 μg in 1 cm 3 of the finished product. 5. Вакцина по п. 1, отличающаяся тем, что в качестве адъюванта она содержит масляный адъювант Montanide ISA-206.5. The vaccine according to claim 1, characterized in that as an adjuvant it contains an oil adjuvant of Montanide ISA-206. 6. Вакцина по п. 5, отличающаяся тем, что она содержит масляный адъювант Montanide ISA-206 предпочтительно в количестве 500000,0-575000,0 мкг в 1 см3 готового препарата.6. The vaccine according to claim 5, characterized in that it contains an oil adjuvant of Montanide ISA-206, preferably in an amount of 500,000.0-575000.0 μg in 1 cm 3 of the finished product. 7. Вакцина по любому из пп. 1-6, отличающаяся тем, что она содержит авирулентный и очищенный антигенный материал из гомологичного возбудителю инфекции штамма О №2344/Монголия/2017, полученный предпочтительно в перевиваемой культуре клеток ВНК-21 и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S иммуногенный компонент вируса ящура типа О, масляный адъювант Montanide ISA-206 в соотношении, мкг 1 см3 готового препарата:7. The vaccine according to any one of paragraphs. 1-6, characterized in that it contains avirulent and purified antigenic material homologous to the pathogen of strain O strain No. 2344 / Mongolia / 2017, obtained preferably in a transplantable cell culture of BHK-21 and representing a suspension containing mainly 146S immunogenic component of foot and mouth disease virus type Oh, oil adjuvant Montanide ISA-206 in the ratio, mcg 1 cm 3 of the finished product: Авирулентный и очищенный антигенный материалAvirulent and purified antigenic material из штамма О №2344/Монголия/2017 вируса ящураfrom strain O No. 2344 / Mongolia / 2017 of the foot and mouth disease virus типа О type O не менее 0,3                                                                      not less than 0.3 Масляный адъювант Montanide ISA-206Oil Adjuvant Montanide ISA-206 500000,0-575000,0                      500000.0-575000.0
RU2019116926A 2019-05-31 2019-05-31 Vaccine for early protection against foot-and-mouth disease of type o inactivated emulsion RU2699671C1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2019116926A RU2699671C1 (en) 2019-05-31 2019-05-31 Vaccine for early protection against foot-and-mouth disease of type o inactivated emulsion

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2019116926A RU2699671C1 (en) 2019-05-31 2019-05-31 Vaccine for early protection against foot-and-mouth disease of type o inactivated emulsion

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2699671C1 true RU2699671C1 (en) 2019-09-09

Family

ID=67851521

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2019116926A RU2699671C1 (en) 2019-05-31 2019-05-31 Vaccine for early protection against foot-and-mouth disease of type o inactivated emulsion

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2699671C1 (en)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2722671C1 (en) * 2019-10-01 2020-06-02 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") Bhk-21/susp/arriah - continuous suspension subline of newborn syrian hamster kidney cells, intended for reproduction of foot-and-mouth disease viruses, rabies, parainfluenza-3, aujeszky's disease in producing antiviral vaccines, as well as for making diagnostic and preventive veterinary biopreparations
CN112094821A (en) * 2020-09-28 2020-12-18 中国农业科学院兰州兽医研究所 O-type foot-and-mouth disease virus strain and application thereof

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4508708A (en) * 1981-06-05 1985-04-02 De Staat Der Nederlanden, Vertegenwoozdigd Doozde Minister Van Volksgezondheid En Milieuhygiene Virus vaccines and process for preparing the same
CN1966079A (en) * 2006-11-15 2007-05-23 张中洋 Immunoglobulin for resisting O and Asia I type foot and mouth disease used for cow and pig
RU2593718C1 (en) * 2015-03-16 2016-08-10 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") Inactivated emulsion vaccine against foot-and-mouth disease types a, o, asia-1
CN107266537A (en) * 2017-08-01 2017-10-20 天信和(苏州)生物科技有限公司 Foot-and-mouth disease antigen 146S concentrating and purifying process
RU2665849C1 (en) * 2017-12-15 2018-09-04 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") Inactivated emulsion vaccine against foot-and-mouth disease type o
RU2682876C1 (en) * 2017-12-18 2019-03-22 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") Inactivated emulsion vaccine for o-type aphthous fever

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4508708A (en) * 1981-06-05 1985-04-02 De Staat Der Nederlanden, Vertegenwoozdigd Doozde Minister Van Volksgezondheid En Milieuhygiene Virus vaccines and process for preparing the same
CN1966079A (en) * 2006-11-15 2007-05-23 张中洋 Immunoglobulin for resisting O and Asia I type foot and mouth disease used for cow and pig
RU2593718C1 (en) * 2015-03-16 2016-08-10 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") Inactivated emulsion vaccine against foot-and-mouth disease types a, o, asia-1
CN107266537A (en) * 2017-08-01 2017-10-20 天信和(苏州)生物科技有限公司 Foot-and-mouth disease antigen 146S concentrating and purifying process
RU2665849C1 (en) * 2017-12-15 2018-09-04 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") Inactivated emulsion vaccine against foot-and-mouth disease type o
RU2682876C1 (en) * 2017-12-18 2019-03-22 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") Inactivated emulsion vaccine for o-type aphthous fever

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2722671C1 (en) * 2019-10-01 2020-06-02 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") Bhk-21/susp/arriah - continuous suspension subline of newborn syrian hamster kidney cells, intended for reproduction of foot-and-mouth disease viruses, rabies, parainfluenza-3, aujeszky's disease in producing antiviral vaccines, as well as for making diagnostic and preventive veterinary biopreparations
CN112094821A (en) * 2020-09-28 2020-12-18 中国农业科学院兰州兽医研究所 O-type foot-and-mouth disease virus strain and application thereof

Similar Documents

Publication Publication Date Title
FI117513B (en) Process for the cultivation of PRRS virus and its use in vaccines
Kim et al. Development of inactivated trivalent vaccine for the teratogenic Aino, Akabane and Chuzan viruses
US7309493B2 (en) Inactivated bovine scours vaccines, process and method of preventing bovine scours
RU2593718C1 (en) Inactivated emulsion vaccine against foot-and-mouth disease types a, o, asia-1
RU2699671C1 (en) Vaccine for early protection against foot-and-mouth disease of type o inactivated emulsion
RU2603003C1 (en) Inactivated sorptive vaccine to fmd types a, o, asia-1
RU2451745C2 (en) A 2045/KYRGYZSTAN/ 2007 STRAIN OF FOOT-AND-MOUTH DISEASE VIRUS Aphtae epizooticae TYPE A FOR ANTIGENIC AND IMMUNOGENIC PERFORMANCE CONTROL OF FOOT-AND-MOUTH DISEASE VACCINES AND FOR PRODUCTION OF BIOPREPARATIONS FOR DIAGNOSIS AND SPECIFIC PREVENTION OF FOOT-AND-MOUTH DISEASE TYPE A
RU2665849C1 (en) Inactivated emulsion vaccine against foot-and-mouth disease type o
Ronchi et al. Immunogenicity of two adjuvant formulations of an inactivated African horse sickness vaccine in guinea-pigs and target animals
RU2682876C1 (en) Inactivated emulsion vaccine for o-type aphthous fever
Mirchamsy et al. Inactivated African horse sickness virus cell culture vaccine
RU2563522C1 (en) STRAIN O №2102/Zabaikalsky/2010 FMD VIRUS Aphtae epizooticae OF TYPE O FOR CONTROL OF ANTIGENIC AND IMMUNOGENIC ACTIVITY OF FMD VACCINES AND FOR PRODUCTION OF BIOLOGICAL PRODUCTS FOR DIAGNOSTICS AND SPECIFIC PROPHYLAXIS OF FMD OF TYPE O
RU2220744C1 (en) Vaccine against foot-and-mouth asia-1 type and method for it preparing
RU2603255C1 (en) STRAIN A N2155/Baikal/2013 OF MURRAIN VIRUS Aphtae epizooticae TYPE A FOR CONTROL OF ANTIGENIC AND IMMUNOGENIC ACTIVITY AND TO PRODUCE BIOPREPARATIONS FOR DIAGNOSTICS AND SPECIFIC PREVENTION OF MURRAIN TYPE A
RU2741639C1 (en) Vaccine for early protection against foot-and-mouth disease of type asia-1 inactivated emulsion
NZ226353A (en) Feline infectious peritonitus (fip) vaccine
RU2665850C1 (en) Inactivated emulsion vaccine against foot-and-mouth disease type a
RU2204599C1 (en) Foot-and-mouth virus strain &#34;primorsky-2000&#34; 1734 of type o1 for diagnostic and vaccine preparation preparing
RU2804875C1 (en) Culture inactivated adsorbed vaccine against fmd of sat-2/vii genotype from sat-2/eritrea/1998 strain
RU2526570C2 (en) Inactivated sorbent type a foot-and-mouth disease vaccine
RU2681815C1 (en) Inactivated sorptive foot-and-mouth disease type a vaccine
RU2294759C2 (en) Inactivated emulsion vaccine against foot-and-mouth disease of type a
RU2817031C1 (en) Aphtae epizooticae foot-and-mouth disease virus strain &#34;o no 2222/taiwan/1/2012&#34; for production of biopreparations for diagnosis and specific prevention of foot-and-mouth disease
RU2824662C1 (en) Culture inactivated emulsion vaccine against foot-and-mouth disease of asia-1/g-v genotype from asia-1/g-v/2006 strain
RU2810131C1 (en) CULTURE INACTIVATED SORBED VACCINE AGAINST FOOT AND MOUTH DISEASE OF O/ME-SA/PanAsia2ANT-10 GENOTYPE FROM O N2356/PAKISTAN/2018 STRAIN