RU2756474C1 - Тест-система для обнаружения РНК вируса SARS-CoV-2 в биоматериале от животных, пищевых продуктах и объектах окружающей среды методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени - Google Patents
Тест-система для обнаружения РНК вируса SARS-CoV-2 в биоматериале от животных, пищевых продуктах и объектах окружающей среды методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени Download PDFInfo
- Publication number
- RU2756474C1 RU2756474C1 RU2021114811A RU2021114811A RU2756474C1 RU 2756474 C1 RU2756474 C1 RU 2756474C1 RU 2021114811 A RU2021114811 A RU 2021114811A RU 2021114811 A RU2021114811 A RU 2021114811A RU 2756474 C1 RU2756474 C1 RU 2756474C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- cov
- sars
- virus
- rna
- animals
- Prior art date
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6804—Nucleic acid analysis using immunogens
Abstract
Изобретение относится к ветеринарной вирусологии, а именно к средствам молекулярной диагностики. Разработана высокочувствительная тест-система, состоящая из ОТ-ПЦР смеси, Taq-ДНК-полимеразы, обратной транскриптазы, положительного контроля и отрицательного контроля, позволяющая в кратчайшие сроки обнаруживать РНК вируса SARS-CoV-2 в биоматериале от животных, пищевых продуктах и объектах окружающей среды. Разработаны олигонуклеотидные праймеры и флуоресцентно-меченый зонд для амплификации и детекции участка гена N вируса SARS-CoV-2:
Изобретение может быть использовано для выявления РНК вируса SARS-CoV-2 в биоматериале от животных, пищевых продуктах и объектах окружающей среды с целью постановки и уточнения диагноза в клинической и лабораторной диагностике в ветеринарии. 1 з.п. ф-лы, 1 ил., 3 табл., 3 пр.
Description
Изобретение относится к ветеринарной вирусологии, к средствам молекулярной диагностики, а именно к выявлению РНК вируса SARS-CoV-2 в биоматериале от животных, пищевых продуктах и объектах окружающей среды.
Новый коронавирус SARS-CoV-2 вызывает тяжелую форму пневмонии у людей (COVID-19), подобную MERS-CoV и SARS-CoV. Он относится к семейству РНК-содержащих вирусов семейства Coronaviridae, линии Beta-CoVB.
Первые случаи заболевания человека пневмонией неизвестного происхождения были зарегистрированы в декабре 2019 года в городе Ухань китайской провинции Хубэй. Новый коронавирус был выделен из эпителиальных клеток дыхательных путей человека и идентифицирован как возбудитель заболевания. В настоящее время подавляющее большинство стран мира сообщили о случаях заболевания людей, и Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) объявила событие COVID-19 пандемией (2).
Пациенты с COVID-19 проявляют яркие клинические симптомы, такие как лихорадка, сухой кашель, одышка, ринорея, ангина, интерстициальные инфильтраты в легких (3).
Считается, что предшественником SARS-CoV-2 является короновирус летучих мышей (rhinolophus sinicus). От летучих мышей к человеку вирус перешел через промежуточного хозяина, установить которого пока не удалось. Глобальное распространение SARS-CoV-2 не ограничилось человеческой популяцией. В настоящее время имеется много сообщений о случаях обнаружения вируса SARS-CoV-2 у животных: норок, собак, кошек, тигров и львов. Опыты по экспериментальному заражению показали, что хорьки и кошки очень восприимчивы к SARS-CoV-2 и могут передавать вирус от инфицированных здоровым животным контактным или воздушно-капельным путем (1, 4).
Восприимчивость животных к SARS-CoV-2, вероятно, объясняется тем, что рецептором SARS-CoV-2 является клеточный ангиотензинпревращающий фермент 2 (АСЕ2), который почти идентичен или похож у человека и таких видов животных, как куньи, кошачьи, свиньи и обезьяны. Таким образом, существует потенциальная возможность формирования резервуара SARS-CoV-2 в популяции домашних животных, и эпидемиологический надзор за COVID-19 должен предусматривать и диагностические и мониторинговые исследования домашних животных.
Рекомендованным методом специфической лабораторной диагностики COVID-19 является выявление РНК SARS-CoV-2 методом ПНР. Благодаря высокой чувствительности и специфичности метод ПНР является идеальным для первичного скрининга.
Целью изобретения является создание тест-системы для обнаружения РНК вируса SARS-CoV-2 методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени в биоматериале от животных, пищевых продуктах и объектах окружающей среды.
На сегодняшний день разработано достаточное количество тест-систем, для выявления возбудителя SARS-CoV-2 у людей, однако они не предназначены для анализа биоматериала от животных, пищевых продуктах и объектах окружающей среды.
Таким образом, разработка надежного чувствительного и специфичного метода обнаружения РНК вируса SARS-CoV-2 в биоматериале от животных, пищевых продуктах и объектах окружающей среды является актуальной технической проблемой. Для ее решения была создана тест-система ПЦР-РВ, содержащая специфичные олигонуклеотидные праймеры и флуоресцентно-меченный олигонуклеотидный зонд, а также осуществлен подбор условий проведения исследований с помощью разработанного диагностикума, обеспечивающий минимальный риск контаминации тестируемых образцов и исключающих субъективность при оценке результатов.
Изобретение относится к тест-системе для специфичной идентификации РНК вируса SARS-CoV-2 в биоматериале от животных, пищевых продуктах и объектах окружающей среды методом ПНР в режиме реального времени, состоящей из смеси олигонуклеотидных праймеров и флуоресцентно-меченного зонда, фермента Taq-полимеразы, обратной транскриптазы, положительного контроля и отрицательного контроля.
Флуоресценцию измеряют по каналу ROX. Пересечение кривой флуоресценции и линии порогового цикла (Ct), свидетельствует о наличии в образце РНК вируса SARS-CoV-2, причем, чем меньше показатель Ct, тем выше концентрация РНК вируса SARS-CoV-2 в исследуемом образце. Отсутствие пересечения кривой флуоресценции с пороговой линией свидетельствует об отсутствии РНК вируса SARS-CoV-2 в тестируемом материале.
Представленный метод включает последовательности олигонуклеотидов, специфичные только для вируса SARS-CoV-2 и имеющие следующую нуклеотидную последовательность:
Forward GGACCCCAAAATCAGCGAAA
Reverse CTGGTTACTGCCAGTTGAATC
probe ROX CACCCCGCATTACGTTTGGTGGAC BHQ2
Изобретение может быть использовано для выявления РНК вируса SARS-CoV-2 в пробах биологического материала от животных, пищевых продуктах и объектах окружающей среды с целью проведения клинической и лабораторной диагностики, а также научно-исследовательских работ в области ветеринарии.
Техническим результатом изобретения является: высокая специфичность в отношении всех возможных генетических вариантов вируса SARS-CoV-2, широкий спектр пригодного для проведения исследований биологического материала от животных (смывы со слизистых оболочек носовой и ротовой полости, внутренние органы, сыворотка крови, цельная кровь, культура клеток), пищевых продуктов и объектов окружающей среды, без риска получения ложноположительных результатов; минимальные требования для постановки ПЦР-РВ, что дает возможность использования широкого спектра амплификаторов; сокращение времени тестирования проб на наличие РНК вируса SARS-CoV-2, в том числе и при проведении массовых исследований; расширение арсенала средств диагностики Covid-19.
Сущность изобретения заключается в том, что тест-система способна выявлять РНК вируса SARS-CoV-2 в биоматериале от животных, пищевых продуктах и объектах окружающей среды. Высокая степень специфичности тест-системы подтверждена с помощью лабораторных исследований на панели проб гомологичных и гетерологичных вирусов.
Сущность изобретения пояснена на графическом изображении, на котором показана специфичность тест-системы, проверенная на нескольких видах вирусов:
1 - принадлежащих к семейству Coronaviridae (вирус SARS-CoV-2, вирус трансмиссивного гастроэнтерита свиней (ТГС), вирус эпизоотической диареи свиней (ЭДС), респираторный коронавирус свиней (РКВС), коронавирус КРС, вирус инфекционного бронхита кур (ИБК));
2 - на гетерологичных вирусах с/х животных: вирус репродуктивно-респираторного синдрома свиней (РРСС), парвовирус свиней (ПВС), цирковирус свиней типа 2 (ЦВС2), вирус болезни Ауески (ВБА), вирус инфекционной бурсальной болезни (ИББ), вирус гриппа А, вирус инфекционного ринотрахеита (ИРТ), вирус парагриппа-3 (ПГ3) и на РНК/ДНК, выделенной из тканей свиней, КРС, кур. Положительная реакция наблюдалась только с РНК вируса SARS-CoV-2, что свидетельствует о специфичности метода (Фиг. 1).
Детекция продуктов амплификации осуществляется методом регистрации флуоресценции, генерируемой в результате разрушения гибридизационного зонда, находящегося на 5'-конце флуорофора ROX, а на 3'-конце - гасителя BHQ2. В отсутствии мишени флуорофор и гаситель сближены, и наблюдается лишь незначительная флуоресценция, так как гаситель поглощает испускаемое флуорофором излучение. При накоплении в ходе ПЦР специфических продуктов зонд гибридизируется на ампликон, что ведет к его разрушению за счет 5'-экзонуклеазной активности Taq-полимеразы. В результате флуорофор отделяется от гасителя и его излучение может быть детектировано. Таким образом, увеличение флуоресценции прямо пропорционально количеству синтезированного ПЦР-продукта.
Для разработки праймеров, из базы данных GenBank были получены полногеномные последовательности коронавирусов. Последовательности выравнивали, затем визуально оценивали консервативные участки, на основе которых были получены ряд праймеров. В результате тестирования при различных параметрах была получена оптимальная пара праймеров и зонда, которые используются в тест-системе.
Набор для выявления РНК вируса SARS-CoV-2 в ПЦР-РВ состоит из следующих компонентов:
№1 ОТ-ПЦР-смесь, объем 1,100 см3 - 1 пробирка;
№2 фермент Taq ДНК-полимераза, объем 0,015 см3 - 1 пробирка;
№3 фермент M-MLV-ревертаза, объем 0,030 см3 - 1 пробирка;
№4 положительный контроль, объем 0,100 см3 - 1 пробирка;
№5 отрицательный контроль, объем 0,100 см3 - 1 пробирка.
В качестве отрицательного контроля используется деионизованная вода, а в качестве положительного контроля - плазмидная ДНК, содержащая вставку фрагмента гена N вируса SARS-CoV-2.
ПЦР в режиме реального времени с обратной транскрипцией проводится в программируемом амплификаторе в одну стадию с использованием смеси, включающей на одну реакцию: ОТ-ПЦР-смесь (№1), ферментов Taq-ДНК-полимеразы (№2) и обратной транскриптазы (№3). Перед началом постановки реакции необходимо разморозить все компоненты реакции (за исключением ферментов), встряхнуть их на шейкере, затем центрифугировать несколько секунд на низкоскоростной центрифуге.
Смесь для проведения реакции готовят в пробирке в расчете на одну реакцию (V=25 мкл) следующим образом:
| - ОТ-ПЦР-смесь №1 | 20 мкл, |
| - фермент Taq-ДНК-полимераза №2 | 0,25 мкл, |
| - фермент M-MLV-ревертаза №3 | 0,5 мкл |
Приготовленную в отдельных 1,5 мл пробирках смесь для проведения реакции переносят по 20 мкл в 0,2 мл пробирки и вносят 5 мкл суммарной РНК, выделенной из анализируемых проб. В соответствующие пробы вносят также образцы отрицательного и положительного контролей. Общий объем смеси - 25 мкл.
Пробирки устанавливают в амплификатор для постановки ПЦР в режиме реального времени, отмечают в программе расположение и характеристику проб, выбирают рабочий краситель (ROX), устанавливают в программе температурно-временной профиль реакции.
Программирование амплификатора осуществляется согласно инструкции производителя. Подобран режим термического профиля, который должен соответствовать показателям, описанным в таблице 1: обратная транскрипция 42°С - 15 мин, денатурация при 95°С в течение 5 мин и термического циклирования при 95°С - 15 сек., 55°С - 15 сек; 72°С - 20 сек - 40 циклов.
Результаты интерпретируют на основании наличия или отсутствия пересечения кривой флуоресценции с пороговой линией, что соответствует наличию или отсутствию значения порогового цикла «Ct» в соответствующей графе в таблице результатов реакции, выведенной в результате машинного анализа.
Если регистрируемое значение Ct≤35, результат обнаружения РНК вируса SARS-CoV-2 считается положительным.
Если значение Ct не регистрируется, результат обнаружения РНК вируса SARS-CoV-2 считается отрицательным.
Если регистрируемое значение Ct находится в пределах от 35 до 40, результат обнаружения РНК вируса SARS-CoV-2 считается сомнительным и подлежит повторному исследованию. Если при проведении повторного исследования регистрируемое значение Ct≤40, результат обнаружения РНК вируса SARS-CoV-2 считается положительным; если значение Ct не регистрируется, результат обнаружения РНК вируса SARS-CoV-2 считается отрицательным.
Результат считается достоверным только в случае, если:
- для положительного контроля амплификатором на канале ROX регистрируется значение порогового цикла амплификации - Ct≤30;
- для отрицательного контроля амплификатором не регистрируется какого-либо значения порогового цикла на канале ROX.
Результат считается недостоверным (не подлежат учету) в случае, если: для образца положительного контроля регистрируется значение Ct>30;
- для образца отрицательного контроля регистрируется какое-либо значение Ct.
Сущность предлагаемого изобретения пояснена примерами его использования, которые не ограничивают объем изобретения.
Пример 1. Оценка специфичности тест-системы.
Специфичность метода была проверена на нескольких видах вирусов, принадлежащих к семейству Coronaviridae (вирус SARS-CoV-2, вирус ТГС, вирус ЭДС, респираторный коронавирус свиней, коронавирус КРС, вирус инфекционного бронхита кур), других вирусах с/х животных (РРСС, ПВИС, ЦВС-2, ВБА, ИББ, гриппа А, ИРТ, ПГ-3), а также на РНК/ДНК, выделенной из тканей свиней, КРС, кур. Положительная реакция наблюдалась только с РНК вируса SARS-CoV-2, что свидетельствует о специфичности метода (табл. 2). Полученные данные приведены на графическом изображении (Фиг. 1).
Из таблицы 2 видно, что разработанная тест-система специфично выявляет вирус SARS-CoV-2.
Работу с нуклеиновой кислотой проводили в условиях, регламентированных МУ 1.3. 2569-09 «Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I-IV групп патогенности» (5).
Процедуру выделения нуклеиновых кислот из исследуемого материала проводили с использованием 6М гуанидинтиоцианата и стекловолокнистых фильтров GF/F (6).
ПЦР в режиме реального времени и регистрацию результатов проводили в приборе по описанной выше программе.
Результаты интерпретировали на основании наличия (или отсутствия) пересечения кривой флуоресценции с установленной на соответствующем уровне пороговой линии, что соответствует наличию (или отсутствию) значения порогового цикла Ct в соответствующей графе в таблице результатов. Результат считали положительным в случае, если кривая накопления флуоресценции для соответствующего образца имела характерную «сигмовидную» форму и пересекала пороговую линию.
При тестировании специфичности тест-системы с использованием нуклеиновых кислот различных видов вирусов семейства Coronaviridae и гетерологичных вирусов ложноположительных и ложноотрицательных результатов не выявлено (табл. 2).
Пример 2. Оценка чувствительности тест-системы.
Для определения чувствительности исследовали серию последовательных 10-кратных разведений РНК вируса SARS-CoV-2.
Чувствительность определяли как процентное отношение положительных результатов (полученных при использовании предлагаемой тест-системы) к общему количеству исследований. Определение чувствительности осуществляли по формуле:
Se = (ИП/(ИП+ЛО)) × 100%,
где: Se - чувствительность тест-системы;
ИП - истинноположительный результат,
ЛО - ложноотрицательный результат.
Все исследованные пробы с наличием РНК вируса SARS-CoV-2 показали в предлагаемой тест-системе положительный результат (табл. 3). Таким образом, рассчитанная чувствительность предлагаемой тест-системы составила 100%
Пример 3. Оценка воспроизводимости тест-системы.
При определении воспроизводимости исследовали одну положительную и одну отрицательную пробу в 10 повторностях, выполненных при измененных условиях измерения: одним исследователем в параллельных исследованиях в течение разных дней (10 дней) и двумя разными исследователями в параллельных исследованиях (в 10 повторах). Для определения сходимости учитывали степень близости результатов последовательных измерений одной и той же пробы. Для предлагаемой тест-системы воспроизводимость была абсолютна, т.е. положительная проба всегда показывала положительный результат, а отрицательная проба - отрицательный результат.
Таким образом, предлагаемое изобретение может быть использовано в ветеринарной практике для выявления РНК вируса SARS-CoV-2 в биоматериале от животных, пищевых продуктах и объектах окружающей среды с целью постановки и уточнения диагноза, для решения научно-исследовательских задач, проведения мониторинга распространения вируса SARS-CoV-2 у животных. Полученные характеристики тест-системы соответствуют критериям, предъявляемым к качественным лабораторным методам исследования.
Источники информации, принятые во внимание при составлении описания изобретения к заявке на выдачу патента РФ на изобретение «Тест-система для обнаружения РНК вируса SARS-CoV-2 в биоматериале от животных методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени».
1. Bats, pangolins, minks and other animals - villains or victims of SARS-CoV-2? / B. do Valel, A. P. Lopes, M. da Conceicao Fontes [et al.] // Veterinary Research Communications (2021) https://doi.org/10.1007/s11259-021-09787-2.
2. Diagnosis of the Coronavirus disease (COVID-19): rRT-PCR or CT / C. Long, H. Xu, Q. Shen, [et al.] // European Journal of Radiology 126 (2020) https://doi.org/10.1016/j.ejrad.2020.108961.
3. Featuring COVID-19 cases via screening symptomatic patients with epidemiologiclink during flu season in a medical center ofcentral Taiwan / W. Hsih, M. Cheng, M. Ho [et al.] // Journal of Microbiology, Immunology and Infection (article in press) https://doi.org/10.1016/j.jmii.2020.03.008.
4. SARS-CoV-2 host diversity: An update of natural infections and experimental evidence / G. Hossain, A. Javed, S. Akter [et al] // Journal of Microbiology, Immunology and Infection (2021) 54, 175el81.
5. МУ 1.3.2569-09 Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I-IV групп патогенности.
6. Использование аэросила А-300 и фильтров GF/F (GF/C) для очистки фрагментов ДНК, ДНК-плазмид и РНК / Грибанов О.Г., Щербаков А.В., Перевозчикова Н.А. [и др.] // Биохимия. - 1996. - Т. 21, №6. - С. 1064-1070.
Claims (4)
1. Тест-система для обнаружения РНК вируса SARS-CoV-2 методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени, включающая ОТ-ПЦР смесь, содержащую олигонуклеотидные праймеры и флуоресцентно-меченный зонд для амплификации и детекции участка гена N вируса SARS-CoV-2:
фермент Taq-ДНК-полимеразу, обратную транскриптазу, положительный контроль, отрицательный контроль; отличающаяся тем, что используются олигонуклеотидные праймеры и зонд в реакции ПЦР в режиме реального времени, состоящей из следующих этапов: обратная транскрипция 42°С - 15 мин, денатурация при 95°С в течение 5 мин и термического циклирования при 95°С - 15 с, 55°С - 15 с; 72°С - 20 с - 40 циклов, образец считается положительным на наличие РНК вируса SARS-CoV-2, если значение Ct≤35, образец считается отрицательным на наличие РНК вируса SARS-CoV-2, если значение Ct отсутствует/не регистрируется, однако в случае, если значение Ct для проб находится в пределах от 35 до 40, результат обнаружения РНК вируса SARS-CoV-2 считается сомнительным и подлежит повторному исследованию, при этом, если при проведении повторного исследования регистрируемое значение Ct≤40, результат обнаружения РНК вируса SARS-CoV-2 считается положительным; если значение Ct не регистрируется, результат обнаружения РНК вируса SAPvS-CoV-2 считается отрицательным.
2. Тест-система по п. 1, обладающая высокой чувствительностью и специфичностью, позволяющая обнаружить и выявить РНК вируса SARS-CoV-2 в биологическом материале от животных, пищевых продуктах и объектах окружающей среды.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2021114811A RU2756474C1 (ru) | 2021-05-24 | 2021-05-24 | Тест-система для обнаружения РНК вируса SARS-CoV-2 в биоматериале от животных, пищевых продуктах и объектах окружающей среды методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2021114811A RU2756474C1 (ru) | 2021-05-24 | 2021-05-24 | Тест-система для обнаружения РНК вируса SARS-CoV-2 в биоматериале от животных, пищевых продуктах и объектах окружающей среды методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2756474C1 true RU2756474C1 (ru) | 2021-09-30 |
Family
ID=77999972
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2021114811A RU2756474C1 (ru) | 2021-05-24 | 2021-05-24 | Тест-система для обнаружения РНК вируса SARS-CoV-2 в биоматериале от животных, пищевых продуктах и объектах окружающей среды методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2756474C1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2772362C1 (ru) * | 2021-12-31 | 2022-05-19 | федеральное государственное бюджетное учреждение "Научно-исследовательский институт гриппа им. А.А. Смородинцева" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Тест-система для выявления SARS-CoV-2 линии Омикрон методом одношаговой полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2731390C1 (ru) * | 2020-04-12 | 2020-09-02 | Общество с ограниченной ответственностью «Система-БиоТех» | Тест-система и способ для выявления РНК коронавируса SARS-COV-2, вируса-возбудителя коронавирусного заболевания 2019 COVID-19, методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (Варианты) |
| RU2733665C1 (ru) * | 2020-06-16 | 2020-10-06 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФБУН ГНЦ ВБ "Вектор" Роспотребнадзора) | Набор олигодезоксирибонуклетидных праймеров и флуоресцентно-меченого зонда для идентификации РНК коронавирусов человека SARS и 2019-nCoV методом ОТ-ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме реального времени |
| US20210040571A1 (en) * | 2018-07-25 | 2021-02-11 | Sense Biodetection Limited | Nucleic acid detection method |
-
2021
- 2021-05-24 RU RU2021114811A patent/RU2756474C1/ru active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20210040571A1 (en) * | 2018-07-25 | 2021-02-11 | Sense Biodetection Limited | Nucleic acid detection method |
| RU2731390C1 (ru) * | 2020-04-12 | 2020-09-02 | Общество с ограниченной ответственностью «Система-БиоТех» | Тест-система и способ для выявления РНК коронавируса SARS-COV-2, вируса-возбудителя коронавирусного заболевания 2019 COVID-19, методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (Варианты) |
| RU2733665C1 (ru) * | 2020-06-16 | 2020-10-06 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФБУН ГНЦ ВБ "Вектор" Роспотребнадзора) | Набор олигодезоксирибонуклетидных праймеров и флуоресцентно-меченого зонда для идентификации РНК коронавирусов человека SARS и 2019-nCoV методом ОТ-ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме реального времени |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2775481C1 (ru) * | 2021-12-06 | 2022-07-01 | Общество с ограниченной ответственностью "БиотехГен" (ООО "БиотехГен") | Набор синтетических олигонуклеотидов для выявления РНК вирусов SARS-CoV-2, SARS-CoV, MERS-CoV, HCoV-229E, HCoV-NL63, HCoV-OC43, HCoV-HKU1 семейства Coronaviridae методом петлевой изотермальной амплификации (LAMP) |
| RU2772362C1 (ru) * | 2021-12-31 | 2022-05-19 | федеральное государственное бюджетное учреждение "Научно-исследовательский институт гриппа им. А.А. Смородинцева" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Тест-система для выявления SARS-CoV-2 линии Омикрон методом одношаговой полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией |
| RU2779025C1 (ru) * | 2022-05-20 | 2022-08-30 | федеральное государственное бюджетное учреждение "Научно-исследовательский институт гриппа им. А.А. Смородинцева" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Тест-система на основе полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией для выявления SARS-CoV-2 линии Омикрон с определением субварианта BA.1 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Reid et al. | Comparison of reverse transcription polymerase chain reaction, enzyme linked immunosorbent assay and virus isolation for the routine diagnosis of foot-and-mouth disease | |
| CN111286559B (zh) | 检测非洲猪瘟病毒的引物、探针及试剂盒 | |
| RU2694558C1 (ru) | Способ выявления генома возбудителя коронавирусной инфекции у крупного рогатого скота | |
| CN110747293B (zh) | 用于鉴别猪水泡病毒、口蹄疫病毒与塞尼卡谷病毒的三重荧光rt-pcr检测试剂盒 | |
| RU2756474C1 (ru) | Тест-система для обнаружения РНК вируса SARS-CoV-2 в биоматериале от животных, пищевых продуктах и объектах окружающей среды методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени | |
| Landolt et al. | Use of real-time reverse transcriptase polymerase chain reaction assay and cell culture methods for detection of swine influenza A viruses | |
| RU2668398C1 (ru) | Олигонуклеотидные праймеры и флуоресцентно-меченый зонд, способ и тест-система для выявления генома полевых изолятов вируса заразного узелкового дерматита (нодулярного дерматита) КРС в реакции полимеразной цепной реакции в режиме реального времени | |
| RU2733665C1 (ru) | Набор олигодезоксирибонуклетидных праймеров и флуоресцентно-меченого зонда для идентификации РНК коронавирусов человека SARS и 2019-nCoV методом ОТ-ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме реального времени | |
| RU2698662C1 (ru) | Тест-система для выявления РНК возбудителя вируса артериита у лошадей | |
| RU2700481C1 (ru) | Способ выявления РНК возбудителя вируса артериита у лошадей | |
| RU2694499C1 (ru) | Тест-система для обнаружения генома возбудителя коронавирусной инфекции у крупного рогатого скота с помощью мультиплексной полимеразной цепной реакции с флуоресцентной детекцией в режиме реального времени | |
| KR101423303B1 (ko) | 소설사병 바이러스성 원인체의 유전자 진단을 위한 프로브, 프라이머 및 이를 이용한 진단방법 | |
| CN111363849A (zh) | 一种新型冠状病毒核酸检测试剂盒及检测方法 | |
| CN111500793A (zh) | 一种犬细小病毒的检测引物、试剂盒及其使用方法 | |
| Geng et al. | Triplex qRT-PCR with specific probe for synchronously detecting Bovine parvovirus, bovine coronavirus, bovine parainfluenza virus and its applications | |
| KR100904772B1 (ko) | 유전자칩, 이를 이용한 돼지콜레라 바이러스 또는소바이러스성설사증 바이러스 유전자의 검사방법 및 그를포함하는 진단키트 | |
| RU2738901C1 (ru) | Тест-система для выявления генома вируса ЧМЖ методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени | |
| RU2732626C1 (ru) | Система олигонуклеотидных праймеров и зонда для выявления ДНК Mycoplasma bovigenitalium | |
| CN113699219B (zh) | 一种同时检测猪肺炎支原体和猪衣原体的巢氏pcr引物组及其应用 | |
| RU2700254C1 (ru) | Тест-система для выявления ДНК вируса ринотрахеита (bovine herpes virus 1, BoHV-1) у крупного рогатого скота | |
| CN112501351B (zh) | 尼帕病毒TaqMan探针荧光定量PCR试剂盒及其应用 | |
| RU2740808C1 (ru) | Система олигонуклеотидных праймеров и зонда для выявления ДНК Mycoplasma bovis | |
| Lin et al. | DEVELOPMENT OF A UPL PROBE-BASED REAL-TIME PCR ASSAY OF PORCINE DELTACORONAVIRUS IN TAIWAN | |
| RU2809224C1 (ru) | Способ опосредованного определения титра инфекционной активности альфа-коронавируса собак производственного штамма РИЧ в сырье для вакцины методом ОТ-ПЦР в режиме реального времени | |
| RU2756924C2 (ru) | Способ ранней пцр-диагностики вируса алеутской болезни норок carnivore amdoparvovirus |