RU2714155C2 - Слитый белок, наночастица, состоящая из множества мономеров указанного слитого белка, и их применение - Google Patents
Слитый белок, наночастица, состоящая из множества мономеров указанного слитого белка, и их применение Download PDFInfo
- Publication number
- RU2714155C2 RU2714155C2 RU2017114673A RU2017114673A RU2714155C2 RU 2714155 C2 RU2714155 C2 RU 2714155C2 RU 2017114673 A RU2017114673 A RU 2017114673A RU 2017114673 A RU2017114673 A RU 2017114673A RU 2714155 C2 RU2714155 C2 RU 2714155C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- amino acid
- mmp
- hft
- fusion protein
- acid sequence
- Prior art date
Links
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 title claims abstract description 36
- 239000000178 monomer Substances 0.000 title claims abstract description 7
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title abstract description 63
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title abstract description 56
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 claims abstract description 88
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 claims abstract description 45
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 41
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims abstract description 38
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 claims abstract description 34
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 claims abstract description 34
- 102000002274 Matrix Metalloproteinases Human genes 0.000 claims abstract description 33
- 108010000684 Matrix Metalloproteinases Proteins 0.000 claims abstract description 33
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 32
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 21
- 102000008857 Ferritin Human genes 0.000 claims abstract description 19
- 108050000784 Ferritin Proteins 0.000 claims abstract description 19
- 238000008416 Ferritin Methods 0.000 claims abstract description 19
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 19
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims abstract description 18
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 claims abstract description 8
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims abstract description 6
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 claims abstract description 6
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 claims abstract description 6
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 24
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 claims description 19
- 230000007017 scission Effects 0.000 claims description 19
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 18
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 16
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 15
- 102100026802 72 kDa type IV collagenase Human genes 0.000 claims description 13
- 101710151806 72 kDa type IV collagenase Proteins 0.000 claims description 11
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 10
- 108010015302 Matrix metalloproteinase-9 Proteins 0.000 claims description 4
- 102100030412 Matrix metalloproteinase-9 Human genes 0.000 claims description 4
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 4
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 4
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 3
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 3
- 125000001500 prolyl group Chemical group [H]N1C([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 claims description 3
- VKUYLANQOAKALN-UHFFFAOYSA-N 2-[benzyl-(4-methoxyphenyl)sulfonylamino]-n-hydroxy-4-methylpentanamide Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1S(=O)(=O)N(C(CC(C)C)C(=O)NO)CC1=CC=CC=C1 VKUYLANQOAKALN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 2
- 102100030417 Matrilysin Human genes 0.000 claims description 2
- 108090000855 Matrilysin Proteins 0.000 claims description 2
- 102100030416 Stromelysin-1 Human genes 0.000 claims description 2
- 101710108790 Stromelysin-1 Proteins 0.000 claims description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims 1
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 claims 1
- 210000002980 germ line cell Anatomy 0.000 claims 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 claims 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 abstract description 52
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 abstract description 10
- 230000000873 masking effect Effects 0.000 abstract description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 abstract 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 13
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 12
- 108010087924 alanylproline Proteins 0.000 description 11
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 11
- IPZQNYYAYVRKKK-FXQIFTODSA-N Ala-Pro-Ala Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O IPZQNYYAYVRKKK-FXQIFTODSA-N 0.000 description 9
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 9
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 8
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 8
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 8
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 8
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 7
- NZGRHTKZFSVPAN-BIIVOSGPSA-N Ala-Ser-Pro Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N NZGRHTKZFSVPAN-BIIVOSGPSA-N 0.000 description 6
- 101001002987 Homo sapiens Ferritin heavy chain Proteins 0.000 description 6
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 6
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 6
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 6
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 6
- 102000054087 human FTH1 Human genes 0.000 description 6
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 6
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 5
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 5
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 5
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 5
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 5
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 5
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 5
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 108010075016 Ceruloplasmin Proteins 0.000 description 4
- 102100023321 Ceruloplasmin Human genes 0.000 description 4
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 4
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000005741 Metalloproteases Human genes 0.000 description 4
- 108010006035 Metalloproteases Proteins 0.000 description 4
- DZZCICYRSZASNF-FXQIFTODSA-N Pro-Ala-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 DZZCICYRSZASNF-FXQIFTODSA-N 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 102100026144 Transferrin receptor protein 1 Human genes 0.000 description 4
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 4
- 108010092854 aspartyllysine Proteins 0.000 description 4
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 4
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- CXRCVCURMBFFOL-FXQIFTODSA-N Ala-Ala-Pro Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O CXRCVCURMBFFOL-FXQIFTODSA-N 0.000 description 3
- SWQALSGKVLYKDT-UHFFFAOYSA-N Gly-Ile-Ala Natural products NCC(=O)NC(C(C)CC)C(=O)NC(C)C(O)=O SWQALSGKVLYKDT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 3
- ADJDNJCSPNFFPI-FXQIFTODSA-N Ser-Pro-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@@H](N)CO ADJDNJCSPNFFPI-FXQIFTODSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000001028 anti-proliverative effect Effects 0.000 description 3
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 3
- 108010040443 aspartyl-aspartic acid Proteins 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 238000013461 design Methods 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 3
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 3
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 3
- 108010050848 glycylleucine Proteins 0.000 description 3
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 3
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 3
- 108010026333 seryl-proline Proteins 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 3
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YYSWCHMLFJLLBJ-ZLUOBGJFSA-N Ala-Ala-Ser Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YYSWCHMLFJLLBJ-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 2
- ROLXPVQSRCPVGK-XDTLVQLUSA-N Ala-Glu-Tyr Chemical compound N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)O ROLXPVQSRCPVGK-XDTLVQLUSA-N 0.000 description 2
- IFKQPMZRDQZSHI-GHCJXIJMSA-N Ala-Ile-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O IFKQPMZRDQZSHI-GHCJXIJMSA-N 0.000 description 2
- RZZMZYZXNJRPOJ-BJDJZHNGSA-N Ala-Ile-Lys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C)N RZZMZYZXNJRPOJ-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 2
- DWYROCSXOOMOEU-CIUDSAMLSA-N Ala-Met-Glu Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)N DWYROCSXOOMOEU-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- IORKCNUBHNIMKY-CIUDSAMLSA-N Ala-Pro-Glu Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O IORKCNUBHNIMKY-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- WQKAQKZRDIZYNV-VZFHVOOUSA-N Ala-Ser-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O WQKAQKZRDIZYNV-VZFHVOOUSA-N 0.000 description 2
- YNOCMHZSWJMGBB-GCJQMDKQSA-N Ala-Thr-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O YNOCMHZSWJMGBB-GCJQMDKQSA-N 0.000 description 2
- SNBHMYQRNCJSOJ-CIUDSAMLSA-N Arg-Gln-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O SNBHMYQRNCJSOJ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- JCAISGGAOQXEHJ-ZPFDUUQYSA-N Arg-Gln-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N JCAISGGAOQXEHJ-ZPFDUUQYSA-N 0.000 description 2
- CYXCAHZVPFREJD-LURJTMIESA-N Arg-Gly-Gly Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)NCC(O)=O CYXCAHZVPFREJD-LURJTMIESA-N 0.000 description 2
- MTYLORHAQXVQOW-AVGNSLFASA-N Arg-Lys-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O MTYLORHAQXVQOW-AVGNSLFASA-N 0.000 description 2
- HDHZCEDPLTVHFZ-GUBZILKMSA-N Asn-Leu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O HDHZCEDPLTVHFZ-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- ZELQAFZSJOBEQS-ACZMJKKPSA-N Asp-Asn-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O ZELQAFZSJOBEQS-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 2
- KGAJCJXBEWLQDZ-UBHSHLNASA-N Asp-Asp-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N KGAJCJXBEWLQDZ-UBHSHLNASA-N 0.000 description 2
- MJKBOVWWADWLHV-ZLUOBGJFSA-N Asp-Cys-Asp Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N)C(=O)O MJKBOVWWADWLHV-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 2
- YRBGRUOSJROZEI-NHCYSSNCSA-N Asp-His-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O YRBGRUOSJROZEI-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 2
- PCJOFZYFFMBZKC-PCBIJLKTSA-N Asp-Phe-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O PCJOFZYFFMBZKC-PCBIJLKTSA-N 0.000 description 2
- NOCCABSVTRONIN-CIUDSAMLSA-N Cys-Ala-Leu Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N NOCCABSVTRONIN-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- 241001198387 Escherichia coli BL21(DE3) Species 0.000 description 2
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- TWHDOEYLXXQYOZ-FXQIFTODSA-N Gln-Asn-Gln Chemical compound C(CC(=O)N)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)N TWHDOEYLXXQYOZ-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- CRRFJBGUGNNOCS-PEFMBERDSA-N Gln-Asp-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O CRRFJBGUGNNOCS-PEFMBERDSA-N 0.000 description 2
- LPIKVBWNNVFHCQ-GUBZILKMSA-N Gln-Ser-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O LPIKVBWNNVFHCQ-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- HTTSBEBKVNEDFE-AUTRQRHGSA-N Glu-Gln-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N HTTSBEBKVNEDFE-AUTRQRHGSA-N 0.000 description 2
- ATVYZJGOZLVXDK-IUCAKERBSA-N Glu-Leu-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O ATVYZJGOZLVXDK-IUCAKERBSA-N 0.000 description 2
- ILWHFUZZCFYSKT-AVGNSLFASA-N Glu-Lys-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O ILWHFUZZCFYSKT-AVGNSLFASA-N 0.000 description 2
- DDXZHOHEABQXSE-NKIYYHGXSA-N Glu-Thr-His Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N)O DDXZHOHEABQXSE-NKIYYHGXSA-N 0.000 description 2
- LCNXZQROPKFGQK-WHFBIAKZSA-N Gly-Asp-Ser Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O LCNXZQROPKFGQK-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- SWQALSGKVLYKDT-ZKWXMUAHSA-N Gly-Ile-Ala Chemical compound NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O SWQALSGKVLYKDT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- IUZGUFAJDBHQQV-YUMQZZPRSA-N Gly-Leu-Asn Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O IUZGUFAJDBHQQV-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- HFPVRZWORNJRRC-UWVGGRQHSA-N Gly-Pro-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)CN HFPVRZWORNJRRC-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DVHGLDYMGWTYKW-GUBZILKMSA-N His-Gln-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O DVHGLDYMGWTYKW-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- LJUIEESLIAZSFR-SRVKXCTJSA-N His-Leu-Cys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CN=CN1)N LJUIEESLIAZSFR-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- OQDLKDUVMTUPPG-AVGNSLFASA-N His-Leu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O OQDLKDUVMTUPPG-AVGNSLFASA-N 0.000 description 2
- UXSATKFPUVZVDK-KKUMJFAQSA-N His-Lys-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC1=CN=CN1)N UXSATKFPUVZVDK-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 101000627872 Homo sapiens 72 kDa type IV collagenase Proteins 0.000 description 2
- XLXPYSDGMXTTNQ-DKIMLUQUSA-N Ile-Phe-Leu Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](Cc1ccccc1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O XLXPYSDGMXTTNQ-DKIMLUQUSA-N 0.000 description 2
- XLXPYSDGMXTTNQ-UHFFFAOYSA-N Ile-Phe-Leu Natural products CCC(C)C(N)C(=O)NC(C(=O)NC(CC(C)C)C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 XLXPYSDGMXTTNQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QVFGXCVIXXBFHO-AVGNSLFASA-N Leu-Glu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O QVFGXCVIXXBFHO-AVGNSLFASA-N 0.000 description 2
- WXUOJXIGOPMDJM-SRVKXCTJSA-N Leu-Lys-Asn Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O WXUOJXIGOPMDJM-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- ZAVCJRJOQKIOJW-KKUMJFAQSA-N Leu-Phe-Asp Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 ZAVCJRJOQKIOJW-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 2
- RIHIGSWBLHSGLV-CQDKDKBSSA-N Leu-Tyr-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O RIHIGSWBLHSGLV-CQDKDKBSSA-N 0.000 description 2
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 2
- BYPMOIFBQPEWOH-CIUDSAMLSA-N Lys-Asn-Asp Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N BYPMOIFBQPEWOH-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- LZWNAOIMTLNMDW-NHCYSSNCSA-N Lys-Asn-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CCCCN)N LZWNAOIMTLNMDW-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 2
- HQXSFFSLXFHWOX-IXOXFDKPSA-N Lys-His-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CN=CN1)NC(=O)[C@H](CCCCN)N)O HQXSFFSLXFHWOX-IXOXFDKPSA-N 0.000 description 2
- YXPJCVNIDDKGOE-MELADBBJSA-N Lys-Lys-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCCCN)N)C(=O)O YXPJCVNIDDKGOE-MELADBBJSA-N 0.000 description 2
- HSJIGJRZYUADSS-IHRRRGAJSA-N Met-Lys-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O HSJIGJRZYUADSS-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 2
- QYIGOFGUOVTAHK-ZJDVBMNYSA-N Met-Thr-Thr Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O QYIGOFGUOVTAHK-ZJDVBMNYSA-N 0.000 description 2
- YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N N-L-alpha-glutamyl-L-leucine Natural products CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(O)=O YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ULECEJGNDHWSKD-QEJZJMRPSA-N Phe-Ala-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 ULECEJGNDHWSKD-QEJZJMRPSA-N 0.000 description 2
- CGBYDGAJHSOGFQ-LPEHRKFASA-N Pro-Ala-Pro Chemical compound C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@@H]2CCCN2 CGBYDGAJHSOGFQ-LPEHRKFASA-N 0.000 description 2
- FXGIMYRVJJEIIM-UWVGGRQHSA-N Pro-Leu-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 FXGIMYRVJJEIIM-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 2
- POQFNPILEQEODH-FXQIFTODSA-N Pro-Ser-Ala Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O POQFNPILEQEODH-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 2
- BRKHVZNDAOMAHX-BIIVOSGPSA-N Ser-Ala-Pro Chemical compound C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N BRKHVZNDAOMAHX-BIIVOSGPSA-N 0.000 description 2
- HVKMTOIAYDOJPL-NRPADANISA-N Ser-Gln-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O HVKMTOIAYDOJPL-NRPADANISA-N 0.000 description 2
- SMIDBHKWSYUBRZ-ACZMJKKPSA-N Ser-Glu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O SMIDBHKWSYUBRZ-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 2
- GZFAWAQTEYDKII-YUMQZZPRSA-N Ser-Gly-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CO GZFAWAQTEYDKII-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- SKHPKKYKDYULDH-HJGDQZAQSA-N Thr-Asn-Leu Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O SKHPKKYKDYULDH-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 2
- YYZPVPJCOGGQPC-JYJNAYRXSA-N Tyr-His-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O YYZPVPJCOGGQPC-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 2
- MVFQLSPDMMFCMW-KKUMJFAQSA-N Tyr-Leu-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O MVFQLSPDMMFCMW-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 2
- SCZJKZLFSSPJDP-ACRUOGEOSA-N Tyr-Phe-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O SCZJKZLFSSPJDP-ACRUOGEOSA-N 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 108010047495 alanylglycine Proteins 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 108010093581 aspartyl-proline Proteins 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M coomassie brilliant blue Chemical compound [Na+].C1=CC(OCC)=CC=C1NC1=CC=C(C(=C2C=CC(C=C2)=[N+](CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=2C=CC(=CC=2)N(CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=C1 NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 2
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 2
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 2
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- YBMRDBCBODYGJE-UHFFFAOYSA-N germanium dioxide Chemical compound O=[Ge]=O YBMRDBCBODYGJE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010062266 glycyl-glycyl-argininal Proteins 0.000 description 2
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 2
- 208000014829 head and neck neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 239000012216 imaging agent Substances 0.000 description 2
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 108010009298 lysylglutamic acid Proteins 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 2
- 108010005942 methionylglycine Proteins 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 108010074082 phenylalanyl-alanyl-lysine Proteins 0.000 description 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 2
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 108700042769 prolyl-leucyl-glycine Proteins 0.000 description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 2
- 108010048818 seryl-histidine Proteins 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 2
- 108010073969 valyllysine Proteins 0.000 description 2
- SNTGWXAZMZPJPH-UHFFFAOYSA-N 1-(2,5-dioxopyrrolidin-1-yl)oxypyrrolidine-2,5-dione Chemical compound O=C1CCC(=O)N1ON1C(=O)CCC1=O SNTGWXAZMZPJPH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 4-[(4-anilino-5-sulfonaphthalen-1-yl)diazenyl]-5-hydroxynaphthalene-2,7-disulfonic acid Chemical compound C=12C(O)=CC(S(O)(=O)=O)=CC2=CC(S(O)(=O)=O)=CC=1N=NC(C1=CC=CC(=C11)S(O)(=O)=O)=CC=C1NC1=CC=CC=C1 QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XWFWAXPOLRTDFZ-FXQIFTODSA-N Ala-Pro-Ser Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O XWFWAXPOLRTDFZ-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- 241000024188 Andala Species 0.000 description 1
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010005949 Bone cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000018084 Bone neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000011691 Burkitt lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 206010007275 Carcinoid tumour Diseases 0.000 description 1
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- JPVYNHNXODAKFH-UHFFFAOYSA-N Cu2+ Chemical compound [Cu+2] JPVYNHNXODAKFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LBOLGUYQEPZSKM-YUMQZZPRSA-N Cys-Gly-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CS)N LBOLGUYQEPZSKM-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 102000016911 Deoxyribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010053770 Deoxyribonucleases Proteins 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010068516 Encapsulation reaction Diseases 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 208000000461 Esophageal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 208000022072 Gallbladder Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000032612 Glial tumor Diseases 0.000 description 1
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 description 1
- AIGROOHQXCACHL-WDSKDSINSA-N Glu-Gly-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O AIGROOHQXCACHL-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- VXQOONWNIWFOCS-HGNGGELXSA-N Glu-His-Ala Chemical compound C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CN=CN1)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N VXQOONWNIWFOCS-HGNGGELXSA-N 0.000 description 1
- BYYNJRSNDARRBX-YFKPBYRVSA-N Gly-Gln-Gly Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)NCC(O)=O BYYNJRSNDARRBX-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- UYPPAMNTTMJHJW-KCTSRDHCSA-N Gly-Ile-Trp Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(O)=O UYPPAMNTTMJHJW-KCTSRDHCSA-N 0.000 description 1
- HJARVELKOSZUEW-YUMQZZPRSA-N Gly-Pro-Gln Chemical compound [H]NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O HJARVELKOSZUEW-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 206010073073 Hepatobiliary cancer Diseases 0.000 description 1
- TXLQHACKRLWYCM-DCAQKATOSA-N His-Glu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O TXLQHACKRLWYCM-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- JCOSMKPAOYDKRO-AVGNSLFASA-N His-Glu-Lys Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N JCOSMKPAOYDKRO-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- 208000017604 Hodgkin disease Diseases 0.000 description 1
- 208000021519 Hodgkin lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 208000010747 Hodgkins lymphoma Diseases 0.000 description 1
- AQCUAZTZSPQJFF-ZKWXMUAHSA-N Ile-Ala-Gly Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(O)=O AQCUAZTZSPQJFF-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 1
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- WNGVUZWBXZKQES-YUMQZZPRSA-N Leu-Ala-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(O)=O WNGVUZWBXZKQES-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- QJXHMYMRGDOHRU-NHCYSSNCSA-N Leu-Ile-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(O)=O QJXHMYMRGDOHRU-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N Maleimide Chemical compound O=C1NC(=O)C=C1 PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000032271 Malignant tumor of penis Diseases 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 206010027406 Mesothelioma Diseases 0.000 description 1
- 208000029725 Metabolic bone disease Diseases 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- KZNQNBZMBZJQJO-UHFFFAOYSA-N N-glycyl-L-proline Natural products NCC(=O)N1CCCC1C(O)=O KZNQNBZMBZJQJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000015914 Non-Hodgkin lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 206010030155 Oesophageal carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 206010049088 Osteopenia Diseases 0.000 description 1
- 208000001132 Osteoporosis Diseases 0.000 description 1
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229930012538 Paclitaxel Natural products 0.000 description 1
- 208000000821 Parathyroid Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 208000002471 Penile Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010034299 Penile cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- XQLBWXHVZVBNJM-FXQIFTODSA-N Pro-Ala-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 XQLBWXHVZVBNJM-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- FUOGXAQMNJMBFG-WPRPVWTQSA-N Pro-Val-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 FUOGXAQMNJMBFG-WPRPVWTQSA-N 0.000 description 1
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 description 1
- 201000000582 Retinoblastoma Diseases 0.000 description 1
- 208000000453 Skin Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010041067 Small cell lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 239000012505 Superdex™ Substances 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 208000024313 Testicular Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010057644 Testis cancer Diseases 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 1
- 208000024770 Thyroid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 108010033576 Transferrin Receptors Proteins 0.000 description 1
- 206010046431 Urethral cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010046458 Urethral neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000002495 Uterine Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 208000009956 adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 201000005188 adrenal gland cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000024447 adrenal gland neoplasm Diseases 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 1
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 1
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000033558 biomineral tissue development Effects 0.000 description 1
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 208000002458 carcinoid tumor Diseases 0.000 description 1
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000003679 cervix uteri Anatomy 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 238000013329 compounding Methods 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000011461 current therapy Methods 0.000 description 1
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 description 1
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 201000004101 esophageal cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 201000010175 gallbladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 1
- SDUQYLNIPVEERB-QPPQHZFASA-N gemcitabine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1C(F)(F)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 SDUQYLNIPVEERB-QPPQHZFASA-N 0.000 description 1
- 229960005277 gemcitabine Drugs 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 208000005017 glioblastoma Diseases 0.000 description 1
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 1
- 108010078144 glutaminyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 125000003827 glycol group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 201000010536 head and neck cancer Diseases 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003463 hyperproliferative effect Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000007917 intracranial administration Methods 0.000 description 1
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 108010071673 magnetoferritin Proteins 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000026037 malignant tumor of neck Diseases 0.000 description 1
- 208000026045 malignant tumor of parathyroid gland Diseases 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 239000002539 nanocarrier Substances 0.000 description 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 1
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000011164 ossification Effects 0.000 description 1
- 210000000963 osteoblast Anatomy 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 229960001592 paclitaxel Drugs 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 201000002530 pancreatic endocrine carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000005298 paramagnetic effect Effects 0.000 description 1
- 210000002990 parathyroid gland Anatomy 0.000 description 1
- 230000006320 pegylation Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 230000036470 plasma concentration Effects 0.000 description 1
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 201000000849 skin cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000000587 small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 1
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002626 targeted therapy Methods 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N taxol Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N 0.000 description 1
- 238000011191 terminal modification Methods 0.000 description 1
- 201000003120 testicular cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 1
- 201000002510 thyroid cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 description 1
- 108010038745 tryptophylglycine Proteins 0.000 description 1
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 description 1
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010046766 uterine cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 description 1
- 206010046885 vaginal cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000013139 vaginal neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 1
- 238000002424 x-ray crystallography Methods 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
- A61K39/001154—Enzymes
- A61K39/001158—Proteinases
- A61K39/001159—Matrix metalloproteinases [MMP]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
- A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
- A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/62—DNA sequences coding for fusion proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B82—NANOTECHNOLOGY
- B82Y—SPECIFIC USES OR APPLICATIONS OF NANOSTRUCTURES; MEASUREMENT OR ANALYSIS OF NANOSTRUCTURES; MANUFACTURE OR TREATMENT OF NANOSTRUCTURES
- B82Y5/00—Nanobiotechnology or nanomedicine, e.g. protein engineering or drug delivery
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/31—Fusion polypeptide fusions, other than Fc, for prolonged plasma life, e.g. albumin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/33—Fusion polypeptide fusions for targeting to specific cell types, e.g. tissue specific targeting, targeting of a bacterial subspecies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/50—Fusion polypeptide containing protease site
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Oncology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Nanotechnology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Изобретение относится к биотехнологии, конкретно к рекомбинантным слитым белкам, и может быть использовано в медицине. Получен слитый белок, основанный на тяжелой цепи ферритина человека, который содержит на N-конце белка по меньшей мере одну последовательность расщепления матриксной металлопротеиназы (ММР) и неструктурированного полипептида, состоящего по существу из пролина, серина и аланина (PAS), действующего в качестве маскирующего полимера. Получена также наночастица, состоящая из нескольких мономеров указанного слитого белка. Наночастица или слитый белок входят в состав противоопухолевой фармацевтической композиции совместно с доксорубицином. Изобретение позволяет повысить стабильность комплекса белок-лекарственное средство. 6 н. и 7 з.п. ф-лы, 13 ил., 11 пр.
Description
Настоящее изобретение относится к слитому белку, к наночастицам, состоящим из множества мономеров указанного слитого белка, к нуклеиновым кислотам, кодирующим указанный слитый белок, и к их диагностическому и терапевтическому применению.
Селективное высвобождение терапевтических средств в пораженной области является одной из самых важных задач по улучшению текущей терапии. В этом контексте применение наночастиц в качестве носителей (нановекторов) терапевтических средств обеспечивает возможность как обойти биологические барьеры, которые могут присутствовать на пути от места введения до конечной цели, так и, в частности, обеспечить накопление лекарственного средства селективным образом в пораженной области, предпочтительнее, чем в нормальных тканях. В качестве основополагающей предпосылки нановектор должен обладать способностью связывать большое количество лекарственного средства эффективным образом.
Среди известных носителей для целевого высвобождения лекарственного средства наночастицы на основе ферритинов (FTS) привлекают все большее внимание благодаря их исключительным характеристикам биосовместимости, способности проникать сквозь биологические барьеры, функционализационной универсальности и возможности связывать определенные виды лекарственных средств (Vannucci, L., Falvo, E., Ceci, P. Multifunctional Protein-Based Nanoparticles for Cancer Theranosis. 2014, A. Prokop et al. (eds.), Intracellular Delivery II, Fundamental Biomedical Technologies 7). FTS представляют собой высоко симметричные мультимерные белковые структуры, состоящие из 24 субъединиц, которые собираются в молекулярную структуру по существу со сферической оболочкой, окружающей полость, которая физиологически используется для хранения железа. Наружный диаметр и внутренний диаметр составляют 12 и 8 нм, соответственно. Такая молекулярная структура по типу оболочки обозначается далее как «наночастица» или «HFt наночастица».
Наночастицы на основе тяжелой цепи ферритина человека (HFt) демонстрируют ряд преимуществ по сравнению с другими системами высвобождения лекарственных средств, особенно в связи с применением in vivo у человека. Фактически, молекулы HFt предназначены для прохождения сквозь биологические барьеры (20 нм малого диаметра), и в физиологических условиях они присутствуют как в клетках, так и в крови, хотя и в низких концентрациях (приблизительно 20 мкг/л).
Являясь природными элементами, они обладают меньшей вероятностью вызывать сильный аутоиммунный (внешний) гуморальный и/или Т-клеточный иммунный ответ.
Кроме того, HFt являются одними из нескольких природных наночастиц, которые сами по себе способны связываться с опухолевыми клетками эффективным и селективным путем. Действительно, с использованием одной из самых привлекательных молекул для таргетной терапии злокачественных новообразований, рецептор трансферрина 1 (TfR1), было показано, что HFt интернализируется. TfR1 действительно активирован на поверхности многих типов злокачественных опухолей (вплоть до в 100 раз выше, чем на нормальных клетках) и эффективно интернализируется. Для более 474 образцов клинических тканей, HFt, но не из легких цепей ферритина человека (Lft), была доказана интернализация TfR1 и специфическое распознание многих типов опухолей (т.е. рак печени, легких, поджелудочной железы, толстой кишки, шейки матки, яичников, простаты, молочной железы, саркомы и тимуса) по сравнению с неопухолевыми тканями, с 98% чувствительностью и 95% специфичностью (Fan K, Cao C, Pan Y, Lu D, Yang D, Feng J, et al. Magnetoferritin nanoparticles for targeting and visualizing tumour tissues. Nat Nanotechnol. 2012;7:459-64).
Однако, нативная HFt имеет несколько недостатков. Во-первых, выходы, с которыми она способна связываться с определенными типами лекарственных средств, такими как, например, доксорубицин (один из противоопухолевых препаратов с широким спектром противоопухолевой активности), являются низкими, и это может ограничить их возможное применение и клинические разработки. Во-вторых, нативная HFt при системном пути введения имеет очень короткий период полураспада в плазме, примерно 2-3 часа. И, наконец, ее природная ферроксидазная активность может ингибировать развитие и созревание остеобластов человека и приводить к снижению минерализации, к остеопении и остеопорозу (Zarjou A, Jeney V, Arosio P, Poli M, Zavaczki E, Balla G, Balla J. Ferritin ferroxidase activity: a potent inhibitor of osteogenesis. J Bone Miner Res. 2010,25:164-72). По этой причине целесообразно использовать вариант HFt с отсутствием ферроксидазной активности, приобретенной в результате сайт-специфической мутации (в настоящем документе обозначена как vHFt), который не вызывает ингибирования.
Для того, чтобы одновременно устранить все недостатки, перечисленные выше в отношении нативной HFt, авторы настоящего изобретения решили генетически модифицировать тяжелую цепь ферритина человека (HFt), действуя непосредственно на наружную поверхность белка. При этом способность инкапсулировать лекарственное средство доксорубицин в полость белка значительно и неожиданно улучшилась, а полураспад в плазме увеличился, не влияя на способность белка распознавать опухолевые клетки.
Эти и другие цели достигаются благодаря слитому белку, как охарактеризовано в прилагаемой формуле изобретения в пункте 1. Другие независимые пункты и зависимые пункты относятся к дополнительным аспектам и конкретным вариантам осуществления настоящего изобретения, которые являются неотъемлемой частью настоящего описания.
Дополнительные признаки и преимущества настоящего изобретения станут очевидны из следующего далее подробного описания, которое предназначено только для иллюстративных целей, а не для ограничения, со ссылками на прилагаемые чертежи, на которых:
На Фигуре 1 схематически представлено получение наночастиц HFt, в которых N-конец каждого из 24 мономеров генетически связан с расщепляемыми пептидными последовательностями и с последовательностями, по существу состоящими из пролина, аланина и серина (PAS). Для ясности показано только 5 из 24 N-концов.
На Фигуре 2 схематически представлено получение наночастиц HFt, которые несут терапевтические и/или диагностические молекулы. Они могут быть загружены во внутреннюю полость или связан с внешней поверхностью белка.
На Фигуре 3 изображена общая диаграмма, которая описывает способ действия наночастиц HFt на опухолевые клетки.
На Фигуре 4 показан белковый профиль экспрессии одной из полученных конструкций, HFt-ММР-PAS75 (длина PAS: 75 остатков), с помощью SDS-PAGE с последующим окрашиванием Кумасси синим R-250. Рекомбинантный белок получали в E. Coli BL21DE3, используя IPTG-индуцируемую плазмиду, pet-11A, и очищали, как описано в разделе, относящемся к примерам. Дорожка 1: SDS-PAGE растворимых и нерастворимых фракций, отличных от IPTG-индуцированных клеток. Дорожка 2: SDS-PAGE растворимых и нерастворимых фракций клеток, индуцированных 0,5 мМ IPTG. Полоса HFt-ММР-PAS обозначена черной стрелкой и перемещается приблизительно при 40 кДа, в отличие от вычисленной массы, равной 28,5 кДа. Это явление согласуется с другими сообщениями для PASилированных белков и обусловлено пониженным связыванием SDS последовательностей PAS. Кроме того, последовательности PAS слабо окрашиваются Кумасси синим, что приводит к заниженной оценке белковой полосы в геле.
На Фигуре 5 показаны профили эксклюзионной хроматографии нативной HFt (пунктирные линии) и конструкций слитого белка HFt-ММР-PAS75 (сплошные линии), HFt-ММР-PAS40 (прерывистые и пунктирные линии) или HFt с функциональной группой полиэтиленгликоля (REG) 5 кДа (HFT-PEG5K, прерывистые линии).
На Фигуре 6 показаны типичные профили эксклюзионной хроматографии HFt-MMP-PAS75 до (сплошные линии) и после (пунктирные линии) удаления PAS протеазой ММР-2/9 (коллагеназа IV) in vitro.
На Фигуре 7 показаны профили перемещения полос HFt-ММР-PAS75 до и после удаления PAS под действием протеазы ММР-2/9 (коллагеназа IV) in vitro. SDS-PAGE окрашивали Кумасси синим R-250. Дорожка 1: маркерный белок; Дорожка 2: HFt (1 мг/мл); Дорожка 3: HFt-ММР-PAS75 (2 мг/мл) после расщепления in vitro с помощью 0,2 мг/мл протеазы ММР-2/9 (коллагеназа IV); Дорожка 4: HFt-ММР-PAS75 (2 мг/мл) после расщепления in vitro с помощью 0,2 мг/мл протеазы ММР-2/9 (коллагеназа IV).
На Фигуре 8 показана способность инкапсулировать доксорубицин у двух из полученных конструкций (HFt-ММР-PAS40 и HFt-ММР-PAS75) по сравнению с нативным белком HFt и другими данными из литературы. Величины относительного выхода указаны в единицах % восстановления белка и числа инкапсулированных молекул доксорубицина. Можно видеть, что эти конструкции, являющиеся объектом этого патента, неожиданно и непредвиденно приобрели улучшенную способность инкапсулировать лекарственное средство доксорубицин, по крайней мере, в 6 раз по сравнению с нативной HFt.
На Фигуре 9 показана стабильность комплексов ферритин-доксорубицин (HFt-DOXO, HFt-ММР-PAS40-DOXO и HFt-ММР-PAS75-DOXO) при 4°С и 37°С в единицах % высвобождения лекарственного средства в течение времени. Из-за изменений, проведенных в HFt, как описано в этом патенте, конструкция HFt-ММР-PAS40 (те же результаты были получены также с HFt-ММР-PAS75) является гораздо более стабильной (низкий % высвобождения лекарственного средства в течение времени при хранении при 4 или 37°С) в связанной с лекарством форме по сравнению с соответствующей нативной конструкцией HFt. Звездочка (*) указывает на то, что количество высвобожденного лекарственного вещества не может быть определено в течение этого периода времени в образцах нативной HFt, поскольку вещество, как правило, становится мутным и выпадает в осадок.
На Фигуре 10 показан типичный профиль эксклюзионной хроматографии HFt-MMP-PAS40-DOXO с показаниями при длине волны 280 нм (сплошные линии) и 485 нм (пунктирные линии).
На Фигуре 11 показано антипролиферативное действие доксорубицина, HFtT-MMP-PAS75 и HFt-MMP-PAS75-DOXO в отношении клеток саркомы HT-1080.
На Фигуре 12 показаны результаты фармакокинетических экспериментов на доксорубицин-содержащих соединениях. Величины концентрация доксорубицина в плазме были рассчитаны в разное время (10, 60, 180, 360 и 1440 минут) после внутривенной инъекции здоровым мышам чистого лекарственного средства доксорубицина и INNO-206 (новый и более активный состав доксорубицина) или доксорубицина, инкапсулированного в соединения на основе ферритина: нативная HFt, HFt-ММЗ-PAS40 и HFt-ММЗ-PAS75.
На Фигуре 13 показан типичный эксперимент для оценки терапевтического эффекта у мышей с опухолью поджелудочной железы человека (ксенотрасплантаты). Группы мышей (n=6), после того как размер опухоли достигал примерно 100 мм3, обрабатывали 4 раза (каждые 4 дня) одной дозой 5 мг/кг доксорубицина. Тестируемыми соединениями были: INNO-206, HFt-ММЗ-PAS40-DOXO и HFt-ММЗ-PAS75-DOXO. На фигуре вес опухоли (и характерные изображения) регистрировали через примерно 3 недели после начала лечения.
Слитый белок, который является объектом настоящего изобретения, содержит по крайней мере три домена.
Первый домен содержит аминокислотную последовательность тяжелой цепи ферритина человека. Такая аминокислотная последовательность представляет собой нативную последовательность или вариант нативной последовательности, которая по крайней мере на 90% идентична по последовательности. Так как длина тяжелой цепи ферритина человека составляет 183 аминокислоты (SEQ ID NO:1), то вариант, который по крайней мере на 90% идентичен по последовательности, содержит до 19 аминокислотных замен по сравнению с нативной последовательностью. Это определение включает, кроме прочего, аминокислотную последовательность SEQ ID NO:2 вышеуказанного варианта vHFt, не имеющего активность ферроксидазы, который является альтернативным вариантом. Аминокислотная последовательность vHFt характеризуется двумя аминокислотными заменами: лизин вместо глутамата 62 и глицин вместо гистидина 65.
Второй домен слитого белка по настоящему изобретению содержит аминокислотную последовательность по меньшей мере одного сайта расщепления матричной металлопротеиназы (ММР), в частности, ММР-2, ММР-3, ММР-7 или ММР-9. В качестве неограничивающего примера в описании перечислено несколько пептидов, которые моделируют последовательность расщепления цепи коллагена и расщепляются особенно эффективным образом под действием ММР-2 и ММР-9:
Gly-Pro-Leu-Gly-Ile-Ala-Gly-Gln (SEQ ID NO:3)
Gly-Pro-Gln-Gly-Ile-Trp-Gly-Gln (SEQ ID NO:4)
Pro-Leu-Gly-Leu-Ala-Gly (SEQ ID NO:5)
Pro-Val-Gly-Leu-Ile-Gly (SEQ ID NO:6)
Cys-Gly-Leu-Asp-Asp (SEQ ID NO:7).
Аминокислотные последовательности, которые содержат сайт расщепления для предполагаемого для использования фермента, также могут быть сконструированы таким образом, чтобы участок расщепления повторялся несколько раз, например, так, как это показано в последовательности ниже:
Gly-Pro-Leu-Gly-Ile-Ala-Gly-Gln-Gly-Pro-Leu-Gly-Ile-Ala-Gly-Gln (SEQ ID NO:8).
Все ранее указанные аминокислотные последовательности являются характерными, но не ограничивающими примерами получения слитых белков и наночастиц согласно настоящему изобретению.
Третий домен слитого белка по изобретению, связанный с N-концом, состоит из аминокислотной последовательности полипептида, которая богата пролином, серином и аланином (для краткости указан как «PAS») для повышения стабильности белка во время процесса инкапсулирования лекарственного средства, предпочтительно, лекарственного средства доксорубицина, и повышения стабильности комплекса белок-лекарственное средство. Наличие PAS способно также маскировать поверхность белка и таким образом увеличивать время полужизни из плазмы.
Полипептид PAS состоит в основном из аминокислотных последовательностей, богатых Pro, Ala и Ser, которые образуют неструктурированный полимер, длина которого, предпочтительно, меньше 80 аминокислотных остатков, более предпочтительно, от 20 до 80 аминокислотных остатков, еще более предпочтительно, от 40 до 75 аминокислотных остатков. В предпочтительном варианте осуществления количество пролиновых остатков вышеуказанного полипептида PAS составляет 10-40% от общего количества аминокислотных остатков полипептида PAS.
Примеры полипептидов PAS, особенно подходящие для применения в рамках настоящего изобретения и поэтому являющиеся предпочтительными, представляют собой полипептиды PAS из 40 или 75 аминокислотных остатков, например следующие:
ASPAAPAPASPAAPAPSAPAASPAAPAPASPAAPAPSAPA (SEQ ID NO:9)
ASPAAPAPASPAAPAPSAPAASPAAPAPASPAAPAPSAPAASPAAPAPASPAAPAPSAPAASPAAPAPASPAAPA (SEQ ID NO:10).
Стабилизирующий и маскирующий полипептид PAS добавляли к поверхности HFt на всем протяжении короткой пептидной последовательности, которая, как ранее указывалось, содержит один или более сайтов расщепления металлопротеиназы, получая таким образом слитый белок по изобретению с замещаемой маскировкой. Действительно, полипептид PAS может быть селективно удален в тканях-мишенях посредством внеклеточной матриксной металлопротеиназы (MMP). В частности, было показано, что ММP-2 и MMP-9 являются ключевыми металлопротеиназами, которые сверхэкспрессированы в опухолевом микроокружении и участвуют в ангиогенезе, инвазии и опухолевых метастазах.
Применение полипептидов PAS на мультимерной поверхности ферритина в рамках настоящего изобретения дает несколько преимуществ по сравнению с известными из уровня техники. Для того, чтобы инкапсулировать лекарственное средство или низкомолекулярные молекулы в белковую полость ферритина, до настоящего времени были предприняты самые очевидные действия, которые непосредственно модифицируют лекарственное средство или внутреннюю полость белка. Таким образом, взаимосвязь между лекарственным средством (или низкомолекулярной молекулой) и связывающими сайтами во внутренней полости ферритина является более предпочтительной. Например, с доксорубицином был заранее был получен комплекс с медью (II) для повышения инкапсуляционного выхода (Zhen Z et al., ACS Nano. 2013 Jun 25;7(6):4830-7). Наночастицы золота инкапсулировали, генетически модифицируя внутреннюю полость ферритина золото-связывающим пептидом (Zheng B et al. Nanotechnology. 2010 Jan 29;21(4):045305). Однако авторы настоящего изобретения решили воздействовать непосредственно на внешнюю поверхность белка, используя инертные полимеры PAS с целью стабилизации белка во время резкого изменения рН, который обычно используется для диссоциации (рН 2,0) и повторной ассоциации (рН 7,5) HFt в присутствии лекарственного средства. Присутствие полимера PAS может также ограничить неспецифическое связывание лекарственного средства на поверхности.
Кроме того, присутствие PAS также может быть способом увеличения периода полураспада белка в плазме, как было недавно предложено компанией XL-protein Gmbh для ряда белков. В самом деле, эта технология, обозначенная как «PASилирование», способна увеличить период полураспада в плазме био-фармацевтических препаратов, используя природную неструктурированную аминокислотную цепь в качестве биологической альтернативы PEG (Schlapschy M, Binder U, Börger C, Theobald I, Wachinger K, Kisling S, Haller D, Skerra A. PASylation: a biological alternative to PEGylation for extending the plasma half-life of pharmaceutically active proteins. Protein Eng Des Sel. 2013, 26:489-501). Используя эту технологию биологически активный белок генетически слит с полипептидной последовательностью, содержащей несколько сотен остатков низкомолекулярных аминокислот пролина, серина и аланина (PAS). Как правило, последовательность PAS состоит из 100-3000 остатков (предпочтительно 400-600 остатков), слитых с биологически активным белком. Биологически активные белки, указанные в патенте WO 2008/155134, подпадают под следующие категории: связывающие белки, фрагменты антител, цитокины, факторы роста, ферменты, гормоны. Тяжелая цепь ферритина человека не указывается и, особенно в форме vHFt, не относится к перечисленным категориям. Согласно результатам тестирования, проведенного авторами настоящего изобретения, которые будут описаны более подробно далее, для тяжелой цепи ферритина человека (нативной или варианта) последовательность PAS может быть значительно короче, чем описанная в публикации WO 2008/155134, например, меньше 80 аминокислотных остатков. Другими словами, за счет использования конкретной способности HFt образовывать наночастицу, состоящую из 24 мономеров, оказалось, что значительно более короткие последовательности PAS эффективны для увеличения периода полураспада HFt в плазме in vivo. Выбор длины маскирующего полипептида PAS является важной стадией при разработке HFt, снабженной желаемыми характеристиками. На самом деле, с одной стороны, in vivo период полураспада должен быть достаточно длинным, чтобы позволить HFt накапливаться в желаемом месте. С другой стороны, HFt должна быть способна высвобождаться из маскирующего полимера в средах, богатых металлопротеиназой (ММР). Если последовательность PAS слишком короткая, то конструкция может быть выведена из организма слишком быстро. Если последовательность PAS слишком длинная, то это может препятствовать проникновению через биологические барьеры, которые отделяют ее от целевой ткани и клеток (то есть, кровеносные сосуды, непроницаемые перегородки, опухоли стромы и тому подобное) и/или маскировке сайта или сайтов расщепления MMP.
Кроме того, получение конечного белкового продукта, который сверхэкспрессируется, полностью растворим, и который имеет правильную укладку и сборку, не является очевидным заранее, если N-конец белка модифицирован, как и в случае слитого белка по настоящему изобретению. Действительно, хорошо известно, что N-концевая модификация белка может привести к ухудшению экспрессии, растворимости и/или правильной укладки и сборки.
Все эти результаты, в частности, улучшение выхода инкапсулирования лекарственного средства доксорубицина, были неожиданно получены авторами настоящего изобретения, которые сконструировали наночастицы на основе тяжелой цепи ферритина человека (HFT) в нативной форме или в виде варианта (предпочтительно vHFt), используя как технологию слитых генов, так и технологию получения рекомбинантных белков. В частности, как будет подробно описано в разделе, относящемся к примерам, были сделаны генетические конструкции, которые, в одной последовательности нуклеиновой кислоты (например, ДНК), кодируют три последовательности, приведенные на Фигуре 1: i) HFt (или vHFt); ii) короткие пептидные последовательности (ММР), расщепляемые ММР-2/9; iii) неструктурированные полипептидные последовательности, богатые Pro, Ser и Ala (PAS), предпочтительно, с длиной, составляющей от 20 до 80 остатков. Последовательности ii) и iii) связаны с N-концом HFt для обратимой маскировки.
В некоторых вариантах осуществления изобретения слитый белок HFT по настоящему изобретению содержит первую и/или вторую линкерную аминокислотную(ые) последовательность(и), соответственно, связывающую(ие) первый домен со вторым доменом и/или второй домен с третьим доменом. Первая и/или вторая аминокислотные последовательности могут быть одинаковыми или отличаться друг от друга.
Как уже было указано выше, слитые белки HFt, полученные авторами настоящего изобретения, спонтанно образуют наночастицы HFt, способные нести терапевтические (химические соединения, моноклональные антитела, пептиды и тому подобное) и/или диагностические молекулы (Фигура 2). В предпочтительном варианте осуществления по меньшей мере 5 терапевтических и/или диагностических молекул инкапсулированы во внутреннюю полость наночастицы HFt или ковалентно связаны с поверхностью наночастицы HFt. Количество связанного препарата и стабильность комплекса белок-лекарственное средство значительно увеличиливалась по сравнению с немодифицированным белком благодаря наличию полипептидов PAS. Как используется в настоящем описании, термин «стабильность комплекса белок-лекарственное средство» относится к способности слитого белка HFt удерживать лекарственное средство в полости и не высвобождать его в течение времени хранения комплекса. Высвобождение лекарственного средства из белка HFt перед его конечным использованием может привести к нежелательным эффектам, таким как выпадение в осадок, кластеризация и потеря конечного продукта.
Наночастицы HFt по настоящему изобретению, которые выступают как системы нацеленного связывания и высвобождения лекарственных средств и диагностических агентов, будут временно неактивными в циркуляции и в тканях, которые не экспрессируют ММР или которые экспрессируют их недостаточно, и впоследствии будет активированы, когда достигнут ткани-мишени, богатой ММР (ММP-2/9), где лекарственная нагрузка может быть высвобождена (Фигура 3). Терапевтическая молекула представляет собой, например, фармацевтический активный ингредиент. Как используется в настоящем описании, термин "фармацевтический активный ингредиент" или просто "активный ингредиент" относится к любой фармацевтически активной молекуле (химическое соединение, моноклональное антитело, пептид и тому подобное), например, к молекуле, которая может быть использована для лечения злокачественного новообразования. Предпочтительные активные ингредиенты для использования в настоящем изобретении представляют собой, например, но ими не ограничиваются, доксорубицин, паклитаксел, гемцитабин и активные ингредиенты на основе платины. Также может быть использован предшественник активных ингредиентов, перечисленных выше.
Диагностическая молекула представляет собой, например, визуализирующий агент. Как используется в настоящем описании, термин "визуализирующий агент" относится к молекуле, которая обеспечивает возможность визуализации органов, тканей или систем организма. Примеры визуализирующих агентов включают парамагнитные агенты, оптические зонды и радионуклиды. Термин "оптический зонд" относится к флуоресцентному соединению, которое может быть обнаружено путем возбуждения при первой длине волны и считывании при второй длине волны. Примеры оптических зондов включают флуоресцеин изотиоцианат и 5- (и 6)-карбокситетраметилродамин, сукцинимидиловый эфир.
При диагностическом и терапевтическом применении наночастицы HFt по настоящему изобретению, которые действуют как нацеленные системы носителей, могут быть введены индивиду или пациенту посредством любого подходящего пути введения, например перорально, парентерально, внутривенно, внутрибрюшинно, внутримышечно, в виде суппозиториев, внутриочагово, интраназально или подкожно, интратекально, интралимфатически, путем ингаляции микрокапель или путем имплантации устройства замедленного высвобождения, например осмотического насоса. Как используется в настоящем описании, термин «индивид» относится к животным, таким как млекопитающие, включая человека, коров, овец, коз, лошадей, собак, кошек, кроликов, крыс, мышей и тому подобное.
Как используется в настоящем описании, термин «лечение» относится к свидетельству успешного или улучшенного лечения определенного заболевания, поражения, состояния или симптома, или, при определенных обстоятельствах, к профилактике возникновения симптома или состояния.
При терапевтическом применении наночастицы HFt по изобретению используются для введения терапевтически эффективной дозы фармацевтически активного ингредиента. "Терапевтически эффективная доза" означает дозу, которая дает терапевтический эффект, для достижения которого ее вводят. Точная доза будет зависеть от ряда факторов, в том числе цели лечения, индивида, заболевания, на которое направлено лечение, и тому подобное, и может быть легко определена средним специалистом в данной области, используя известные per se методики (см, например, Lieberman, Pharmaceutical Dosage Forms (vols. 1-3, 1992); Lloyd, The Art, Science and Technology of Pharmaceutical Compounding (1999); Pickar, Dosage Calculations (1999); and Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th Edition, 2003, Gennaro, Ed., Lippincott, Williams & Wilkins).
Наночастицы HFt по изобретению могут быть использованы для лечения любого заболевания, которое требует введения фармацевтического ингредиента, например, путем изолирования активного ингредиента в полости наночастицы или путем его ковалентного связывания с поверхностью наночастиц. Наночастицы могут быть также использованы для диагностики, более конкретно, для визуализации заболеваний, путем изолирования активного ингредиента в полости наночастицы или путем его ковалентного связывания с поверхностью наночастиц.
Наночастицы HFt по настоящему изобретению могут быть введены индивиду для лечения любого заболевания, предпочтительно, гиперпролиферативного заболевания, включая злокачественное новообразование, например: карцинома, глиома, мезотелиома, меланома, саркома, лимфома, лейкоз, аденокарцинома, рак молочной железы, рак яичников, рак шейки матки, глиобластома, лейкоз, лимфома, рак предстательной железы, лимфома Беркитта, рак головы и шеи, рак толстой кишки, колоректальный рак, немелкоклеточный рак легкого, мелкоклеточный рак легкого, рак пищевода, рак желудка, рак поджелудочной железы, гепатобилиарный рак, рак мочевого пузыря, мелкоклеточный рак кишечника, рак прямой кишки, рак почки, рак желчного пузыря, рак полового члена, рак уретры, рак яичка, рак шейки матки, рак влагалища, рак матки рак щитовидной железы, паратиреоидный рак, рак надпочечников, эндокринный рак поджелудочной железы, карциноидная опухоль, рак кости, рак кожи, ретинобластома, множественная меланома, лимфома Ходжкина, неходжкинская лимфома (см CANCER: PRINCIPLES AND PRACTICE (DeVita, V. T. et al. 2008 Edition) для другие виды злокачественного новообразования).
Следующие примеры приведены с целью иллюстрации, но не в качестве ограничения объема настоящего изобретения, определенного в прилагаемой формуле изобретения.
ПРИМЕРЫ
Пример 1
Конструирование экспрессионных векторов для слитных белков HFt-ММЗ-PAS40 и HFt-ММЗ-PAS75
В качестве первой стадии создания конструкции HFt-MMP-PAS (или vHFt-MMP-PAS) конструировали несколько молекулярных моделей на основе трехмерной структуры HFt, которая была определена экспериментально с помощью рентгеновской кристаллографии и является доступной в Protein Data Bank (PDB) под кодом 3AJO. Для того, чтобы модифицировать эту структуру вычислительным образом, использовали программное обеспечение InsightII molecular modelling software (Accelrys Inc.)
i) для того, чтобы сконструировать модель варианта HFt, описанную Vannucci et al. (2012), которая имеет подходящий гидродинамический объем, использовали полимер, содержащий 110 единиц PEG, который был связан с группами -SH, представленными на поверхности HFt. Полимеры PEG создавали по образцу в плотно упакованной конформации на поверхности белка для того, чтобы отразить гидродинамический объем, который был экспериментально измерен для замедленной циркуляции PEGилированной HFt (PEG 5 кДа) (см Vannucci et al., 2012).
ii) для того, чтобы сконструировать модель новой HFt, выбранную последовательность расщепления ММР (SEQ ID NO:5) связывали с экспонированным N-концом каждой субъединицы HFt (SEQ ID NO:1) и конструировали ряд полимеров PAS различной длины. Эти полимеры PAS присоединяли к последовательности расщепления MMP посредством трех остатков глицина, и их объем был сравним с объемом PEGлированной HFt. Сначала выбирали две длины PAS, так как они отражали два разных сценария, то есть расширенную конформацию (PAS40) и более упакованную конформацию (PAS75), принимая во внимание, что из-за наличия пептидных связей и остатков пролина полимеры PAS значительно снижают степень свободы по сравнению с очень гибким PEG.
Ген HFt-ММР-PAS40 получали путем объединения трех различных последовательностей в одну последовательность: HFt (SEQ ID NO:1), ММР (SEQ ID NO:5) и PAS (SEQ ID NO:9). Линкер, состоящий из трех остатков глицина, встраивали между HFt и ММР и между ММР и PAS.
Ген HFt-ММР-PAS75 получали путем объединения трех различных последовательностей в одну последовательность: HFt (SEQ ID NO:1), ММР (SEQ ID NO:5) и PAS (SEQ ID NO:10). Линкер, состоящий из трех остатков глицина, встраивали между HFt и ММР и между ММР и PAS.
Вектор экспрессии, рЕТ-11а, содержащий ген HFt-ММР-PAS40 или ген HFT-ММР-PAS75, синтезировали, используя GENEART AG (Germania). Синтез гена проводили с учетом оптимизации кодонов для высоких уровней экспрессии в E.coli.
Пример 2
Бактериальная экспрессия и очистка слитого белка HFt-MMP-PAS40 и HFt-MMP-PAS75
Векторы экспрессии pET-11a, содержащие HFt-ММР-PAS40 или HFt-ММР-PAS75 из Примера 1, вводили в E.coli BL21 (DE3) и секвенировали с помощью метода дидезокси-секвенирования, чтобы подтвердить наличие правильного гена. Клетки E. coli BL21 (DE3), содержащие рекомбинантную плазмиду, культивировали до OD600 со значением 0,6 при 37°C в 1 л жидкой среды Terrific Broth (TB), содержащей ампициллин (23,6 г/л дрожжевого экстракта, 11,8 г/л триптона, 9,4 г/л K2HPO4, 2,2 г/л KH2PO4). Генную экспрессию индуцировали, добавляя 0,5 мМ изопропил тио-β-D-галактозида (IPTG), и культуру дополнительно инкубировали в течение 3 часов. Клетки собирали центрифугированием (15000 оборотов в минуту в течение 20 минут), суспендировали в 50 мМ Трис-HCl (рН 7,5), 0,5 мМ дитиотреитола, 1 мМ ЭДТА и 300 мМ NaCl и разрушали ультразвуком. Лизат центрифугировали при 15000 оборотах в минуту в течение 40 минут, и супернатант, содержащий растворимую фракцию, обрабатывают в течение 30 минут при температуре 37°С 0,1 мг/мл ДНКазой, обогащенной 5 мМ MgCl2, нагревали до 75°С в течение 10 мин, охлаждали на льду, а затем центрифугировали для удаления денатурированных белков. Извлеченный супернатант осаждали, используя концентрацию 65% насыщенного (масс/объем) сульфата аммония. Осадок ресуспендировали и подвергали диализу в течение ночи против 30 мМ Tris-HCl, рН 7,5, 0,25 М NaCl, а затем нагружали на колонку Superdex 200 HiLoad 26/600 (GE Healthcare), предварительно уравновешенную фосфатным буфером (PBS). Фракции собирали, концентрировали, фильтровали в стерильных условиях и хранили при температуре 4°С. Чистоту всех препаратов оценивали, окрашивая Кумасси синим 15% PAGE геля в присутствии SDS. Концентрацию белка определяли спектрофотометрически при длине волны 280 нм, используя коэффициент молярной экстинкции, полученный с помощью программного обеспечения ProtParam (www.expasy.org).
Бактериальный профиль экспрессии для конструкции HFt-ММР-PAS75 показан на Фигуре 4.
Пример 3
Получение PEGилированного варианта белка HFt
Нативная HFt была PEGилирована с помощью PEG 5 кДа, и ее использовали в качестве эталона в экспериментах с эксклюзионной хроматографией (SEC). Растворы (2 мг/мл) инкубировали вместе с 1,0 мМ метоксиполиэтиленгликоль малеимида 5 кДа (Sigma-Aldrich) в PBS при рН 7,0 и при комнатной температуре в течение приблизительно 2 часов при перемешивании. Затем образцы отфильтровывали и заменяли 5 раз H2Оdd, используя 30 кДа спиновое фильтрационное устройство от компании Amicon Ultra-15 (Millipore Corporate) для удаления избытка реагентов. Образец PEGилированного (HFt-PEG5K) стерильно фильтровали и хранили при температуре 4°С.
Пример 4
Оценка гидродинамического объема для HFt, HFt-MMP-PAS40, HFt-MMP-PAS75 и HFt-PEG5K с помощью эксклюзионной хроматографии (SEC)
Эксперименты SEC проводили с помощью гель-фильтрации на колонке Superose 6, уравновешенной фосфатным буфером (PBS) при рН 7,5. Все образцы получали в концентрации 1 мг/мл в фильтрованном PBS.
Все профили элюции SEC анализировали с помощью Origin 8.0 (OriginLab Corporation, Northampton, MA). Профили элюции для HFt и ее слитого белка или функционализированных вариантов показаны на Фигуре 5. Эти результаты указывают и на то, что оба PASилированных варианта имеют гидродинамические объемы, которые выше по сравнению с нативным белком, и то, что они сравнимы с PEGилированным вариантом (PEG 5 кДа) HFt, где HFt-MMP-PAS75 немного выше, а HFt-MMP-PAS40 немного ниже. Кроме того, оба PASилированных варианта более однородны и имеют монодисперсный профиль по сравнению с PEGилированным вариантом. Эти гидродинамические объемы рассматривают как подходящие значения для целей настоящего изобретения, и оба слитых белка HFt-MMP-PAS75 и HFt-ММР-PAS40 были дополнительно охарактеризованы и использованы для инкапсулирования лекарственных средств и в качестве наноносителей при лечении злокачественного новообразования.
Пример 5
Удаление защитной PAS из слитого белка HFt-ММР-PAS75 в присутствии протеазы ММР2/9
in vitro
Для анализа ферментативно расщепляемых ММР-чувствительных конъюгатов, было изучено расщепление HFt-MMP-PAS75 в присутствии ММР-2/9. Раствор HFt-MMP-PAS75 смешивали с коллагеназой IV (содержащей ММР2 и 9) и инкубировали при 37°С в течение 2 часов. Затем образцы исследовали в экспериментах SEC, используя гель-фильтрацию на колонке Superose 6, уравновешенную фосфатным буфером (PBS) при рН 7,5 (Фигура 6), и с помощью гель-хроматографии на SDS (Фигура 7).
Пример 6
Получение HFt-MMP-PAS40 и HFt-MMP-PAS75, несущих химиотерапевтическое средство
В качестве химиотерапевтического средства авторы настоящего изобретения привели пример, в котором использовали лекарственное средство доксорубицин (DOXO). DOXO был инкапсулирован внутрь белковой полости двух слитых белков, используя процесс соединения-рассоединения белка как функцию рН. Реакцию проводили, используя предпочтительную концентрацию 1,5 мМ DOXO и предпочтительную концентрацию 5 мкМ белка. Реакцию инкапсулирования проводили путем осторожного перемешивания DOXO и белка в темноте в кислой среде при рН в интервале от 1,8 до 2,5, более предпочтительно, 2,0. Температура реакции, как правило, находилась в диапазоне от 10°С до 40°С, предпочтительно, при +25°С, в течение периода от 5 до 30 минут, предпочтительно, в течение 10 минут. После этого раствор быстро доводили до рН в интервале от 6,5 до 9,0, более предпочтительно, до рН 7,5, используя концентрированный NaOH, и перемешивали в течение дополнительных 30 минут. Затем раствор центрифугировали при 15000 оборотах в минуту в течение 30 минут при 4°С, и супернатант подвергали диализу в фосфатном буфере с рН 7,4 (PBS) в течение периода между 10 и 16 часов в темноте при температуре 4°С. На конечной стадии раствор доводили до нужной концентрации с помощью 30 кДа спинового устройства Amicon Ultra-15 (Millipore Corporate). Наночастицы HFt (NP), содержащие DOXO (HFt-ММР-PAS40-DOXO и HFt-ММР-PAS75-DOXO), стерильно фильтровали и хранили при 4°С в темноте.
Пример 7
Тестирование инкапсулирующего выхода лекарственного средства доксорубицина
Способность инкапсулировать доксорубицин двумя полученными конструкциями (HFt-ММР-PAS40 и HFt-ММР-PAS75) исследовали и сравнивали с нативным белком HFt и с другими данными из литературы. Количество доксорубицина определяли после того, как образцы инкубировали с кислым изопропанолом (2н HCl) при температуре 25°C в течение 30 минут. Оценку проводили с помощью УФ-видимого спектрофотометра с показаниями при длине волны 485 нм и коэффициенте экстинкции для DOXO 9250 М-1см-1.
Величины относительного выхода указывали в единицах % восстановления белка и числа инкапсулированных молекул доксорубицина (Фигура 8). Можно видеть, что эти конструкции, являющиеся объектом изобретения по данному патенту, неожиданно и непредвиденно приобретали улучшенную способность инкапсулировать лекарственное средство доксорубицин, по крайней мере, в 6 раз по сравнению с нативной HFt.
Пример 8
Тестирование стабильности комплексов ферритин-доксорубицин
Стабильность комплексов ферритин-доксорубицин тестировали при температуре 4°С и 37°С в единицах % высвобождения лекарственного средства в течение времени. % высвобождения доксорубицина оценивали с помощью эксклюзионной хроматографии (SEC), используя гель-фильтрацию на колонке Superose 6, уравновешенной фосфатным буфером (PBS) при рН 7,5. Все образцы получали при 1 мг/мл в фильтрованном PBS, после поглощения при 280 и 485 нм. Типичный профиль элюции для HFt-MMP-PAS40-DOXO показан на Фигуре 9.
Как показано на Фигуре 10, из-за изменений, проведенных в HFt, как описано в этом патенте, конструкция HFt-ММР-PAS40 (те же результаты были получены также с HFt-ММР-PAS75) является гораздо более стабильной в лекарственно-связанной форме по сравнению с соответствующей нативной конструкцией HFt.
Пример 9
Анти-пролиферативные эффекты HFt-MMP-PAS75-DOXO
in vitro
Для тестирования пролиферации клетки саркомы человека (HT-1080) высевали на 96-луночные планшеты в количестве приблизительно от 5×103/лунка в 200 мкл полной среды при 37°С. На следующий день в лунки добавляли PBS, HFt-ММР-PAS75, доксорубицин или HFt-ММР-PAS75-DOXO, трехкратно, при различных концентрациях доксорубицина, и клетки культивировали в течение 72 часов. В течение последних 4 часов в культуре добавляли [3Н]-тимидин (1 мкКю/лунка; 1 мКю=37 МБк), и включение оценивали путем лизиса клеток и подсчета TCA-выделяемой радиоактивности.
Антипролиферативные эффекты HFt-MMP-PAS75-DOXO на культивированные злокачественные клетки показаны на Фигуре 11. Полученные результаты свидетельствуют о том, что HFt-ММР-PAS75-DOXO эффективно ингибирует клетки саркомы, выросшие in vivo зависимым от концентрации образом, причем значения IC50 одинаковые или ниже по сравнению с неинкапсулированным доксорубицином. Эти результаты имеют важное значение в свете потенциального терапевтического применения.
Пример 10
Фармакокинетические исследования доксорубицин-содержащих соединений
Для того, чтобы оценить стабильность в плазме и фармакокинетику, доксорубицин-содержащие соединения вводили внутривенно здоровым мышам. Затем отбирали образцы крови в разные моменты времени (10, 60, 180, 360 и 1440 минут), разбавляли подкисленным изопропанолом (0,75 н HCl) в соотношении 1:10 и замораживали при -20°C. На следующий день извлеченный доксорубицин количественно измеряли, измеряя флуоресценцию при возбуждении 485 нм и излучении 590 нм, используя многорежимный сканирующий считивающий ридер. Оценивали следующие образцы: доксорубицин, INNO-206 (новый и более активный препарат доксорубицина), HFt-DOXO, HFt-ММР-PAS40-DOXO и HFt-ММР-PAS75-DOXO. Результаты показаны на Фигуре 12.
Пример 11
Оценка терапевтического эффекта доксорубицин-содержащих соединений на животных моделях
Типичный эксперимент по оценке терапевтического эффекта доксорубицин-содержащих соединений проводили на мышах с опухолью поджелудочной железы человека (ксенотрансплантаты). Группы мышей (n=6) после того, как размер опухоли достигал примерно 100 мм3, обрабатывали 4 раза (каждые 4 дня) одной дозой 5 мг/кг доксорубицина. Тестированными соединениями были: INNO-206, HFt-ММЗ-PAS40-DOXO и HFt-ММЗ-PAS75-DOXO. Результат типичного эксперимента массы опухоли (и характерных изображений) через приблизительно 3 недели после начала лечения приведен на Фигуре 13. Как показано на фигуре, доксорубицин-содержащие конструкции, полученные авторами настоящего изобретения, обладают более высокой терапевтической активностью по сравнению с новым составом лекарственного средства доксорубицина (INNO-206) в тестированных дозах.
--->
ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110> Consiglio Nazionale delle Ricerche
<120> Слитый белок, наночастица, состоящая из множества мономеров
указанного слитого белка, и их применение
<130> I0160220-EC
<160> 10
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 183
<212> Белок
<213> Homo sapiens
<400> 1
Met Thr Thr Ala Ser Thr Ser Gln Val Arg Gln Asn Tyr His Gln Asp
1 5 10 15
Ser Glu Ala Ala Ile Asn Arg Gln Ile Asn Leu Glu Leu Tyr Ala Ser
20 25 30
Tyr Val Tyr Leu Ser Met Ser Tyr Tyr Phe Asp Arg Asp Asp Val Ala
35 40 45
Leu Lys Asn Phe Ala Lys Tyr Phe Leu His Gln Ser His Glu Glu Arg
50 55 60
Glu His Ala Glu Lys Leu Met Lys Leu Gln Asn Gln Arg Gly Gly Arg
65 70 75 80
Ile Phe Leu Gln Asp Ile Lys Lys Pro Asp Cys Asp Asp Trp Glu Ser
85 90 95
Gly Leu Asn Ala Met Glu Cys Ala Leu His Leu Glu Lys Asn Val Asn
100 105 110
Gln Ser Leu Leu Glu Leu His Lys Leu Ala Thr Asp Lys Asn Asp Pro
115 120 125
His Leu Cys Asp Phe Ile Glu Thr His Tyr Leu Asn Glu Gln Val Lys
130 135 140
Ala Ile Lys Glu Leu Gly Asp His Val Thr Asn Leu Arg Lys Met Gly
145 150 155 160
Ala Pro Glu Ser Gly Leu Ala Glu Tyr Leu Phe Asp Lys His Thr Leu
165 170 175
Gly Asp Ser Asp Asn Glu Ser
180
<210> 2
<211> 183
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариант тяжелой цепи ферритина человека (vHFt)
<400> 2
Met Thr Thr Ala Ser Thr Ser Gln Val Arg Gln Asn Tyr His Gln Asp
1 5 10 15
Ser Glu Ala Ala Ile Asn Arg Gln Ile Asn Leu Glu Leu Tyr Ala Ser
20 25 30
Tyr Val Tyr Leu Ser Met Ser Tyr Tyr Phe Asp Arg Asp Asp Val Ala
35 40 45
Leu Lys Asn Phe Ala Lys Tyr Phe Leu His Gln Ser His Glu Lys Arg
50 55 60
Glu Gly Ala Glu Lys Leu Met Lys Leu Gln Asn Gln Arg Gly Gly Arg
65 70 75 80
Ile Phe Leu Gln Asp Ile Lys Lys Pro Asp Cys Asp Asp Trp Glu Ser
85 90 95
Gly Leu Asn Ala Met Glu Cys Ala Leu His Leu Glu Lys Asn Val Asn
100 105 110
Gln Ser Leu Leu Glu Leu His Lys Leu Ala Thr Asp Lys Asn Asp Pro
115 120 125
His Leu Cys Asp Phe Ile Glu Thr His Tyr Leu Asn Glu Gln Val Lys
130 135 140
Ala Ile Lys Glu Leu Gly Asp His Val Thr Asn Leu Arg Lys Met Gly
145 150 155 160
Ala Pro Glu Ser Gly Leu Ala Glu Tyr Leu Phe Asp Lys His Thr Leu
165 170 175
Gly Asp Ser Asp Asn Glu Ser
180
<210> 3
<211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Пептид, имитирующий сайт расщепления MMP
<400> 3
Gly Pro Leu Gly Ile Ala Gly Gln
1 5
<210> 4
<211> 8
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Пептид, имитирующий сайт расщепления MMP
<400> 4
Gly Pro Gln Gly Ile Trp Gly Gln
1 5
<210> 5
<211> 6
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Пептид, имитирующий сайт расщепления MMP
<400> 5
Pro Leu Gly Leu Ala Gly
1 5
<210> 6
<211> 6
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Пептид, имитирующий сайт расщепления MMP
<400> 6
Pro Val Gly Leu Ile Gly
1 5
<210> 7
<211> 5
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Пептид, имитирующий сайт расщепления MMP
<400> 7
Cys Gly Leu Asp Asp
1 5
<210> 8
<211> 16
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Пептид с повторяющимися сайтами расщепления MMP
<400> 8
Gly Pro Leu Gly Ile Ala Gly Gln Gly Pro Leu Gly Ile Ala Gly Gln
1 5 10 15
<210> 9
<211> 40
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Последовательность PAS
<400> 9
Ala Ser Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ser Pro Ala Ala Pro Ala Pro
1 5 10 15
Ser Ala Pro Ala Ala Ser Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ser Pro Ala
20 25 30
Ala Pro Ala Pro Ser Ala Pro Ala
35 40
<210> 10
<211> 75
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> последовательность PAS
<400> 10
Ala Ser Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ser Pro Ala Ala Pro Ala Pro
1 5 10 15
Ser Ala Pro Ala Ala Ser Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ser Pro Ala
20 25 30
Ala Pro Ala Pro Ser Ala Pro Ala Ala Ser Pro Ala Ala Pro Ala Pro
35 40 45
Ala Ser Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ser Ala Pro Ala Ala Ser Pro Ala
50 55 60
Ala Pro Ala Pro Ala Ser Pro Ala Ala Pro Ala
65 70 75
<---
Claims (20)
1. Слитый белок для инкапсулирования лекарственных средств, состоящий, в нижеследующем порядке, из:
(a) первого домена, который содержит аминокислотную последовательность тяжелой цепи нативного ферритина человека или его варианта, которая по крайней мере на 90% идентична аминокислотной последовательности тяжелой цепи нативного ферритина человека;
(b) второго домена, который содержит аминокислотную последовательность сайта расщепления матриксной металлопротеиназы (ММР); и
(c) третьего N-концевого домена, который состоит из неструктурированного полипептида из по крайней мере 20 аминокислотных остатков, состоящего по существу из пролина, серина и аланина (PAS), где длина PAS меньше 80 аминокислотных остатков, предпочтительно состоит от 20 до 80 аминокислотных остатков, более предпочтительно состоит от 40 до 75 аминокислотных остатков,
где первый и второй домены связаны посредством первой линкерной аминокислотной последовательности и второй и третий домены связаны посредством второй линкерной аминокислотной последовательности.
2. Слитый белок по п.1, где:
(a) первый домен состоит из аминокислотной последовательности тяжелой цепи нативного ферритина человека или его варианта, которая по крайней мере на 90% идентична аминокислотной последовательности тяжелой цепи нативного ферритина человека;
(b) второй домен состоит из аминокислотной последовательности сайта расщепления матриксной металлопротеиназы (ММР); и
(c) третий N-концевой домен состоит из неструктурированного полипептида из по крайней мере 20 аминокислотных остатков, состоящего по существу из пролина, серина и аланина (PAS), в котором длина PAS меньше 80 аминокислотных остатков, предпочтительно состоит от 20 до 80 аминокислотных остатков, более предпочтительно состоит от 40 до 75 аминокислотных остатков.
3. Слитый белок по п.1 или 2, в котором первый домен содержит аминокислотную последовательность тяжелой цепи нативного ферритина человека SEQ ID NO: 1 или аминокислотную последовательность варианта тяжелой цепи ферритина человека SEQ ID NO: 2.
4. Слитый белок по п.1 или 2, в котором второй домен содержит аминокислотную последовательность сайта расщепления матриксной металлопротеиназы (MMP), выбранной из группы, состоящей из ММP-2, ММP-3, ММP-7 и MMP-9.
5. Слитый белок по п.4, в котором аминокислотная последовательность сайта расщепления матриксной металлопротеиназы (ММР) выбрана из группы, состоящей из SEQ ID NO:3-8.
6. Слитый белок по п.1 или 2, в котором количество остатков пролина вышеуказанного полипептида PAS составляет 10-40% от общего количества аминокислотных остатков указанного полипептида.
7. Слитый белок по п.1 или 2, в котором аминокислотная последовательность полипептида PAS выбрана из SEQ ID NO:9 и SEQ ID NO:10.
8. Слитый белок по п.1 или 2, который связан с активным ингредиентом.
9. Наночастица для инкапсулирования лекарственных средств, состоящая из 24 мономеров слитого белка по любому из пп.1-8.
10. Выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая слитый белок по любому из пп.1-7.
11. Экспрессионный вектор, содержащий нуклеиновую кислоту по п.10.
12. Клетка-хозяин для экспрессии слитого белка по любому из пп.1-7, содержащая вектор по п.11, где указанная клетка-хозяин не является клеткой зародышевой линии или клеткой эмбриона человека.
13. Фармацевтическая композиция для лечения опухоли, содержащая комплекс слитого белка по любому из пп.1-8 или наночастицы по п.9 с доксорубицином и по крайней мере один фармацевтически приемлемый наполнитель, носитель или разбавитель.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ITTO2014A000779 | 2014-09-30 | ||
| ITTO20140779 | 2014-09-30 | ||
| PCT/IB2015/057448 WO2016051340A1 (en) | 2014-09-30 | 2015-09-29 | A fusion protein, a nanoparticle composed by a plurality of monomers of said fusion protein, and uses thereof |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2017114673A RU2017114673A (ru) | 2018-11-02 |
| RU2017114673A3 RU2017114673A3 (ru) | 2019-04-25 |
| RU2714155C2 true RU2714155C2 (ru) | 2020-02-12 |
Family
ID=51904166
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2017114673A RU2714155C2 (ru) | 2014-09-30 | 2015-09-29 | Слитый белок, наночастица, состоящая из множества мономеров указанного слитого белка, и их применение |
Country Status (11)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US10640775B2 (ru) |
| EP (1) | EP3186192B1 (ru) |
| JP (1) | JP6745795B2 (ru) |
| CN (1) | CN106922149B (ru) |
| CA (1) | CA2963053C (ru) |
| DK (1) | DK3186192T3 (ru) |
| ES (1) | ES2665218T3 (ru) |
| PL (1) | PL3186192T3 (ru) |
| PT (1) | PT3186192T (ru) |
| RU (1) | RU2714155C2 (ru) |
| WO (1) | WO2016051340A1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2816651C1 (ru) * | 2019-12-23 | 2024-04-02 | Иллумина, Инк. | Наночастица с одним сайтом для присоединения матричного полинуклеотида |
Families Citing this family (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109422799B (zh) * | 2017-08-22 | 2022-07-29 | 复旦大学 | 多烯紫杉醇抗肝癌靶向前药及其药用用途 |
| WO2019087155A1 (en) | 2017-11-06 | 2019-05-09 | Thena Biotech S.r.l. | Fusion-proteins based on human ferritin and protease-cleavable peptides and their use as chemotherapeutics carriers |
| KR20190105752A (ko) * | 2018-03-06 | 2019-09-18 | 한국과학기술연구원 | 신규 항암 융합단백질 및 그의 용도 |
| CN108707618B (zh) * | 2018-05-16 | 2022-04-08 | 华南农业大学 | 一种基于人铁蛋白的纳米酶及其制备方法 |
| CN112912385A (zh) * | 2018-10-29 | 2021-06-04 | 味之素株式会社 | 包封有有机化合物的铁蛋白的制造方法 |
| CN114616241B (zh) * | 2019-07-12 | 2024-08-16 | 昆山新蕴达生物科技有限公司 | 基于铁蛋白重链亚基的药物载体 |
| CN111203546B (zh) * | 2020-01-21 | 2021-08-17 | 中国农业大学 | 一种十六聚体铁蛋白-金纳米簇及其制备方法 |
| JPWO2021251358A1 (ru) * | 2020-06-09 | 2021-12-16 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2442169C2 (ru) * | 2006-11-02 | 2012-02-10 | АйТиАй СКОТЛАНД ЛИМИТЕД | Система магнитного распознавания |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DK2369005T3 (da) | 2007-06-21 | 2013-06-24 | Univ Muenchen Tech | Biologisk aktive proteiner med forøget stabilitet in vivo og/eller in vitro |
| CN103561771B (zh) * | 2011-03-17 | 2019-01-04 | 伯明翰大学 | 重新定向的免疫治疗 |
| US20140121127A1 (en) * | 2012-10-31 | 2014-05-01 | The Wistar Institute Of Anatomy And Biology | Methods and Compositions for Diagnosis of Ovarian Cancer |
| CN104013599B (zh) * | 2014-05-28 | 2016-11-23 | 中国科学院生物物理研究所 | 一种肿瘤特异性靶向给药的药物载体及其应用 |
-
2015
- 2015-09-29 WO PCT/IB2015/057448 patent/WO2016051340A1/en active Application Filing
- 2015-09-29 CA CA2963053A patent/CA2963053C/en active Active
- 2015-09-29 ES ES15791743.6T patent/ES2665218T3/es active Active
- 2015-09-29 EP EP15791743.6A patent/EP3186192B1/en active Active
- 2015-09-29 JP JP2017518147A patent/JP6745795B2/ja active Active
- 2015-09-29 RU RU2017114673A patent/RU2714155C2/ru active
- 2015-09-29 DK DK15791743.6T patent/DK3186192T3/en active
- 2015-09-29 PL PL15791743T patent/PL3186192T3/pl unknown
- 2015-09-29 US US15/515,875 patent/US10640775B2/en active Active
- 2015-09-29 CN CN201580052773.7A patent/CN106922149B/zh active Active
- 2015-09-29 PT PT157917436T patent/PT3186192T/pt unknown
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2442169C2 (ru) * | 2006-11-02 | 2012-02-10 | АйТиАй СКОТЛАНД ЛИМИТЕД | Система магнитного распознавания |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| FALVO E. ET AL., Antibody-drug conjugates: targeting melanoma with cisplatin encapsulated in protein-cage nanoparticles based on human ferritin, NANOSCALE, 2013, v. 5, n. 24, p.12278-12281. * |
| POTRICH C. ET AL., Cytotoxic activity of a tumor protease-activated pore-forming toxin, BIOCONJUGATE CHEMISTRY, 2005, v. 16, n. 9, p.369 - 376. * |
| VANNUCCI L.et al. Multifunctional Protein-Based Nanoparticles for Cancer Theranosis, INTRACELLULAR DELIVERY II: FUNDAMENTALS AND APPLICATIONS,2014, p. 231 - 253. * |
| VANNUCCI L.et al. Multifunctional Protein-Based Nanoparticles for Cancer Theranosis, INTRACELLULAR DELIVERY II: FUNDAMENTALS AND APPLICATIONS,2014, p. 231 - 253. POTRICH C. ET AL., Cytotoxic activity of a tumor protease-activated pore-forming toxin, BIOCONJUGATE CHEMISTRY, 2005, v. 16, n. 9, p.369 - 376. FALVO E. ET AL., Antibody-drug conjugates: targeting melanoma with cisplatin encapsulated in protein-cage nanoparticles based on human ferritin, NANOSCALE, 2013, v. 5, n. 24, p.12278-12281. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2816651C1 (ru) * | 2019-12-23 | 2024-04-02 | Иллумина, Инк. | Наночастица с одним сайтом для присоединения матричного полинуклеотида |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ES2665218T3 (es) | 2018-04-24 |
| US10640775B2 (en) | 2020-05-05 |
| WO2016051340A1 (en) | 2016-04-07 |
| RU2017114673A (ru) | 2018-11-02 |
| PL3186192T3 (pl) | 2018-07-31 |
| EP3186192A1 (en) | 2017-07-05 |
| JP6745795B2 (ja) | 2020-08-26 |
| CA2963053C (en) | 2024-01-23 |
| US20170298364A1 (en) | 2017-10-19 |
| PT3186192T (pt) | 2018-04-09 |
| CA2963053A1 (en) | 2016-04-07 |
| CN106922149A (zh) | 2017-07-04 |
| DK3186192T3 (en) | 2018-04-23 |
| JP2017532958A (ja) | 2017-11-09 |
| CN106922149B (zh) | 2021-11-23 |
| EP3186192B1 (en) | 2018-02-14 |
| RU2017114673A3 (ru) | 2019-04-25 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2714155C2 (ru) | Слитый белок, наночастица, состоящая из множества мономеров указанного слитого белка, и их применение | |
| JP7297745B2 (ja) | ヒトフェリチンおよびプロテアーゼ切断可能ペプチドに基づく融合タンパク質ならびに化学療法用担体としてのそれらの使用 | |
| JP6553105B2 (ja) | クロロトキシン変異体、コンジュゲート、およびそれらを使用する方法 | |
| US20190101528A1 (en) | Lipocalin fusion partners | |
| KR102057356B1 (ko) | Ｘｔｅｎ 콘주게이트 조성물 및 그의 제조 방법 | |
| KR102051038B1 (ko) | 나노입자 약물 컨쥬게이트 | |
| KR20180002645A (ko) | 나노입자 면역컨쥬게이트 | |
| Nhàn et al. | Peptide-based agents for cancer treatment: current applications and future directions | |
| RU2689689C2 (ru) | Конъюгаты антитело-уреаза для терапевтических целей | |
| WO2017039382A1 (ko) | 인간 유래 페리틴 모노머 단편 및 이를 이용한 융합폴리펩티드 | |
| JP2011525491A (ja) | Ｃｒｋｌ標的化ペプチド | |
| CN104800855B (zh) | 用于光学成像和光动力治疗的肿瘤靶向融合蛋白药物载体 | |
| CN105531284A (zh) | 细胞穿透肽和包含其的缀合物 | |
| Jalil et al. | Peptide-based therapeutics in cancer therapy | |
| Khalily et al. | Peptide‐based diagnostic and therapeutic agents: Where we are and where we are heading? | |
| CN107847554A (zh) | 治疗性肽及其使用方法 | |
| MXPA05000778A (es) | Uso de ureasa para inhibir el crecimiento de celulas cancerosas. | |
| US20240115717A1 (en) | Chlorotoxin derivatives and use thereof | |
| KR20230041901A (ko) | 신규 단백질 및 이를 포함하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 | |
| WO2018183232A2 (en) | Peptides and methods for targeted delivery to tumors |