RU2703416C2 - Соединения для транс-мембранной доставки молекул - Google Patents
Соединения для транс-мембранной доставки молекул Download PDFInfo
- Publication number
- RU2703416C2 RU2703416C2 RU2016142510A RU2016142510A RU2703416C2 RU 2703416 C2 RU2703416 C2 RU 2703416C2 RU 2016142510 A RU2016142510 A RU 2016142510A RU 2016142510 A RU2016142510 A RU 2016142510A RU 2703416 C2 RU2703416 C2 RU 2703416C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- disease
- protein
- formula
- membrane
- rna
- Prior art date
Links
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 title claims abstract description 49
- 239000012528 membrane Substances 0.000 title abstract description 48
- 238000012384 transportation and delivery Methods 0.000 title abstract description 29
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 92
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 68
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 claims abstract description 47
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 claims abstract description 41
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 37
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 claims abstract description 36
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 32
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 28
- 108091033409 CRISPR Proteins 0.000 claims abstract description 20
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims abstract description 20
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 claims abstract description 16
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims abstract description 16
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims abstract description 16
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims abstract description 16
- 239000000074 antisense oligonucleotide Substances 0.000 claims abstract description 10
- 238000012230 antisense oligonucleotides Methods 0.000 claims abstract description 10
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims abstract description 8
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 claims abstract description 6
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 31
- KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-M Carbamate Chemical group NC([O-])=O KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 6
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 claims description 6
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 claims description 6
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 claims description 6
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 5
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 5
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 claims description 5
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 4
- 208000006011 Stroke Diseases 0.000 claims description 3
- 239000012453 solvate Substances 0.000 claims description 3
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 claims description 2
- 208000020406 Creutzfeldt Jacob disease Diseases 0.000 claims description 2
- 208000003407 Creutzfeldt-Jakob Syndrome Diseases 0.000 claims description 2
- 208000010859 Creutzfeldt-Jakob disease Diseases 0.000 claims description 2
- 208000023105 Huntington disease Diseases 0.000 claims description 2
- 208000026072 Motor neurone disease Diseases 0.000 claims description 2
- 208000018737 Parkinson disease Diseases 0.000 claims description 2
- 230000008021 deposition Effects 0.000 claims description 2
- 208000014674 injury Diseases 0.000 claims description 2
- 208000023589 ischemic disease Diseases 0.000 claims description 2
- 208000005264 motor neuron disease Diseases 0.000 claims description 2
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 claims description 2
- 230000008733 trauma Effects 0.000 claims description 2
- 239000004055 small Interfering RNA Substances 0.000 claims 2
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 abstract description 11
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 8
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 6
- 239000013598 vector Substances 0.000 abstract description 2
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 abstract 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 44
- 238000000034 method Methods 0.000 description 30
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 26
- 239000005090 green fluorescent protein Substances 0.000 description 15
- -1 C 28 Chemical compound 0.000 description 14
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 13
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 13
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 13
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 description 11
- 102000004144 Green Fluorescent Proteins Human genes 0.000 description 11
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 11
- 239000000463 material Substances 0.000 description 10
- 101000907904 Homo sapiens Endoribonuclease Dicer Proteins 0.000 description 9
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 9
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 9
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 8
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 8
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 8
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 8
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 8
- 102100023387 Endoribonuclease Dicer Human genes 0.000 description 7
- 230000005684 electric field Effects 0.000 description 7
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 7
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 6
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 6
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 6
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 6
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 6
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 6
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 6
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 6
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 5
- 108010057163 Ribonuclease III Proteins 0.000 description 5
- 102000003661 Ribonuclease III Human genes 0.000 description 5
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 5
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 5
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 5
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 5
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 5
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 5
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 5
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 5
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 5
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 5
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 5
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 5
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 5
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 5
- 108020000948 Antisense Oligonucleotides Proteins 0.000 description 4
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 4
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 4
- 125000002947 alkylene group Chemical group 0.000 description 4
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 4
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 4
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 4
- 239000003613 bile acid Substances 0.000 description 4
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 125000004474 heteroalkylene group Chemical group 0.000 description 4
- 125000001072 heteroaryl group Chemical group 0.000 description 4
- 125000001183 hydrocarbyl group Chemical group 0.000 description 4
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 4
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 4
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 4
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 description 4
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 4
- 238000009256 replacement therapy Methods 0.000 description 4
- RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N thymine Chemical compound CC1=CNC(=O)NC1=O RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 3
- 230000008499 blood brain barrier function Effects 0.000 description 3
- 210000001218 blood-brain barrier Anatomy 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- PFKFTWBEEFSNDU-UHFFFAOYSA-N carbonyldiimidazole Chemical compound C1=CN=CN1C(=O)N1C=CN=C1 PFKFTWBEEFSNDU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 3
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 3
- 125000002228 disulfide group Chemical group 0.000 description 3
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 3
- 238000000799 fluorescence microscopy Methods 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 3
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 3
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 3
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 125000000548 ribosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 3
- 150000007970 thio esters Chemical class 0.000 description 3
- HSINOMROUCMIEA-FGVHQWLLSA-N (2s,4r)-4-[(3r,5s,6r,7r,8s,9s,10s,13r,14s,17r)-6-ethyl-3,7-dihydroxy-10,13-dimethyl-2,3,4,5,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-tetradecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl]-2-methylpentanoic acid Chemical compound C([C@@]12C)C[C@@H](O)C[C@H]1[C@@H](CC)[C@@H](O)[C@@H]1[C@@H]2CC[C@]2(C)[C@@H]([C@H](C)C[C@H](C)C(O)=O)CC[C@H]21 HSINOMROUCMIEA-FGVHQWLLSA-N 0.000 description 2
- XZNOAVNRSFURIR-UHFFFAOYSA-N 1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-(trifluoromethyl)propan-2-ol Chemical compound FC(F)(F)C(O)(C(F)(F)F)C(F)(F)F XZNOAVNRSFURIR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KBPLFHHGFOOTCA-UHFFFAOYSA-N 1-Octanol Chemical compound CCCCCCCCO KBPLFHHGFOOTCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000004042 4-aminobutyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])N([H])[H] 0.000 description 2
- 238000010354 CRISPR gene editing Methods 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 208000032382 Ischaemic stroke Diseases 0.000 description 2
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 2
- 238000012228 RNA interference-mediated gene silencing Methods 0.000 description 2
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N Uracil Chemical compound O=C1C=CNC(=O)N1 ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 2
- 229910052796 boron Inorganic materials 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001687 destabilization Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 2
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 2
- 229940011871 estrogen Drugs 0.000 description 2
- 239000000262 estrogen Substances 0.000 description 2
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 2
- 230000009368 gene silencing by RNA Effects 0.000 description 2
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 238000010362 genome editing Methods 0.000 description 2
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 150000004677 hydrates Chemical class 0.000 description 2
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 150000003568 thioethers Chemical class 0.000 description 2
- 229940113082 thymine Drugs 0.000 description 2
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PROQIPRRNZUXQM-UHFFFAOYSA-N (16alpha,17betaOH)-Estra-1,3,5(10)-triene-3,16,17-triol Natural products OC1=CC=C2C3CCC(C)(C(C(O)C4)O)C4C3CCC2=C1 PROQIPRRNZUXQM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZJIFDEVVTPEXDL-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) hydrogen carbonate Chemical compound OC(=O)ON1C(=O)CCC1=O ZJIFDEVVTPEXDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UGFWGXVDBIWDQQ-UHFFFAOYSA-N 1-bromotetradecan-1-ol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCC(O)Br UGFWGXVDBIWDQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VOXZDWNPVJITMN-ZBRFXRBCSA-N 17β-estradiol Chemical compound OC1=CC=C2[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 VOXZDWNPVJITMN-ZBRFXRBCSA-N 0.000 description 1
- VQKDJSXHVSAIAR-UHFFFAOYSA-N 1h-imidazol-2-yl carbamate Chemical compound NC(=O)OC1=NC=CN1 VQKDJSXHVSAIAR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ASJSAQIRZKANQN-CRCLSJGQSA-N 2-deoxy-D-ribose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)CC=O ASJSAQIRZKANQN-CRCLSJGQSA-N 0.000 description 1
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 1
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 108010077805 Bacterial Proteins Proteins 0.000 description 1
- ZOXJGFHDIHLPTG-UHFFFAOYSA-N Boron Chemical compound [B] ZOXJGFHDIHLPTG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-N Carbamic acid Chemical group NC(O)=O KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N D-ribofuranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H]1O HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N 0.000 description 1
- 230000007035 DNA breakage Effects 0.000 description 1
- 238000010442 DNA editing Methods 0.000 description 1
- 230000008265 DNA repair mechanism Effects 0.000 description 1
- 108010053770 Deoxyribonucleases Proteins 0.000 description 1
- 102000016911 Deoxyribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150066002 GFP gene Proteins 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- SMEROWZSTRWXGI-UHFFFAOYSA-N Lithocholsaeure Natural products C1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)CC2 SMEROWZSTRWXGI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 238000006751 Mitsunobu reaction Methods 0.000 description 1
- 108010021466 Mutant Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000008300 Mutant Proteins Human genes 0.000 description 1
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical group ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000012902 Nervous system disease Diseases 0.000 description 1
- 208000025966 Neurological disease Diseases 0.000 description 1
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- YGYAWVDWMABLBF-UHFFFAOYSA-N Phosgene Chemical compound ClC(Cl)=O YGYAWVDWMABLBF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000006335 Phosphate-Binding Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010058514 Phosphate-Binding Proteins Proteins 0.000 description 1
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010357 RNA editing Methods 0.000 description 1
- 230000026279 RNA modification Effects 0.000 description 1
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 description 1
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 1
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N Ribose Natural products OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 1
- XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N Silicon Chemical compound [Si] XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 1
- 240000003243 Thuja occidentalis Species 0.000 description 1
- 230000001594 aberrant effect Effects 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N alpha-D-Furanose-Ribose Natural products OCC1OC(O)C(O)C1O HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HSFWRNGVRCDJHI-UHFFFAOYSA-N alpha-acetylene Natural products C#C HSFWRNGVRCDJHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 description 1
- 229940009098 aspartate Drugs 0.000 description 1
- IVRMZWNICZWHMI-UHFFFAOYSA-N azide group Chemical group [N-]=[N+]=[N-] IVRMZWNICZWHMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PFYXSUNOLOJMDX-UHFFFAOYSA-N bis(2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) carbonate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)ON1C(=O)CCC1=O PFYXSUNOLOJMDX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930189065 blasticidin Natural products 0.000 description 1
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 125000003636 chemical group Chemical group 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012866 crystallographic experiment Methods 0.000 description 1
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 1
- 238000002224 dissection Methods 0.000 description 1
- 238000002330 electrospray ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 229960005309 estradiol Drugs 0.000 description 1
- 229930182833 estradiol Natural products 0.000 description 1
- PROQIPRRNZUXQM-ZXXIGWHRSA-N estriol Chemical compound OC1=CC=C2[C@H]3CC[C@](C)([C@H]([C@H](O)C4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 PROQIPRRNZUXQM-ZXXIGWHRSA-N 0.000 description 1
- 229960001348 estriol Drugs 0.000 description 1
- 125000005677 ethinylene group Chemical group [*:2]C#C[*:1] 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 229910052731 fluorine Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000001153 fluoro group Chemical group F* 0.000 description 1
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 1
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 1
- 238000012268 genome sequencing Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 1
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 description 1
- 102000051308 human DICER1 Human genes 0.000 description 1
- 230000036571 hydration Effects 0.000 description 1
- 238000006703 hydration reaction Methods 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 125000002883 imidazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 238000007917 intracranial administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 230000000302 ischemic effect Effects 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- SMEROWZSTRWXGI-HVATVPOCSA-N lithocholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)CC1 SMEROWZSTRWXGI-HVATVPOCSA-N 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N mercury Chemical compound [Hg] QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052753 mercury Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 150000004702 methyl esters Chemical class 0.000 description 1
- 230000011987 methylation Effects 0.000 description 1
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 description 1
- 108091070501 miRNA Proteins 0.000 description 1
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 125000003835 nucleoside group Chemical group 0.000 description 1
- 238000002515 oligonucleotide synthesis Methods 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 230000033116 oxidation-reduction process Effects 0.000 description 1
- 238000005192 partition Methods 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 230000005501 phase interface Effects 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 150000003212 purines Chemical class 0.000 description 1
- 150000003230 pyrimidines Chemical class 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 239000002342 ribonucleoside Substances 0.000 description 1
- 229930195734 saturated hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 229910052710 silicon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010703 silicon Substances 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000012385 systemic delivery Methods 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K thiophosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=S RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 238000001665 trituration Methods 0.000 description 1
- 229940035893 uracil Drugs 0.000 description 1
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
- A61K38/46—Hydrolases (3)
- A61K38/465—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1), e.g. lipases, ribonucleases
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
- A61K31/565—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids not substituted in position 17 beta by a carbon atom, e.g. estrane, estradiol
- A61K31/567—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids not substituted in position 17 beta by a carbon atom, e.g. estrane, estradiol substituted in position 17 alpha, e.g. mestranol, norethandrolone
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/20—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing sulfur, e.g. dimethyl sulfoxide [DMSO], docusate, sodium lauryl sulfate or aminosulfonic acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
- A61K47/554—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound the modifying agent being a steroid plant sterol, glycyrrhetic acid, enoxolone or bile acid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/02—Drugs for disorders of the nervous system for peripheral neuropathies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
- A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P39/00—General protective or antinoxious agents
- A61P39/02—Antidotes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07J—STEROIDS
- C07J31/00—Normal steroids containing one or more sulfur atoms not belonging to a hetero ring
- C07J31/006—Normal steroids containing one or more sulfur atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J31/003
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07J—STEROIDS
- C07J41/00—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring
- C07J41/0033—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005
- C07J41/0094—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005 containing nitrile radicals, including thiocyanide radicals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07J—STEROIDS
- C07J51/00—Normal steroids with unmodified cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton not provided for in groups C07J1/00 - C07J43/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/111—General methods applicable to biologically active non-coding nucleic acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/87—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
- C12N9/22—Ribonucleases RNAses, DNAses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/96—Stabilising an enzyme by forming an adduct or a composition; Forming enzyme conjugates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07J—STEROIDS
- C07J9/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of more than two carbon atoms, e.g. cholane, cholestane, coprostane
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07J—STEROIDS
- C07J9/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of more than two carbon atoms, e.g. cholane, cholestane, coprostane
- C07J9/005—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of more than two carbon atoms, e.g. cholane, cholestane, coprostane containing a carboxylic function directly attached or attached by a chain containing only carbon atoms to the cyclopenta[a]hydrophenanthrene skeleton
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering N.A.
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/35—Nature of the modification
- C12N2310/351—Conjugate
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2320/00—Applications; Uses
- C12N2320/30—Special therapeutic applications
- C12N2320/32—Special delivery means, e.g. tissue-specific
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y301/00—Hydrolases acting on ester bonds (3.1)
Abstract
Изобретение относится к биохимии и медицине. Предложено соединение для применения в трансмембранной доставке лекарственного средства, имеющее структуру (VI), (VII), (VIIa), (VIII), (IX) или (IXa), как указано в формуле. Структура молекулы создает векторную систему, способствующую движению молекулы в пределах фосфолипидной мембраны от границы раздела мембрана/вода к мембранному ядру. Соединения могут использоваться в медицинской практике, например в доставке природной или модифицированной РНК или ДНК, малой интерферирующей РНК (миРНК), антисмыслового олигонуклеотида (ASO) или терапевтического белка, CRISPR белка, дайсер-субстрата, содержащего двухцепочечную РНК из 25-30 нуклеотидов, которая включает последовательность гена-мишени для сайлесинга, или какой-либо их комбинации через биологические мембраны для лечения заболеваний. 2 з.п. ф-лы, 5 ил., 7 пр.
Description
ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Изобретение касается системы доставки и соответствующих способов для доставки молекул через биологические мембраны в клетки, необязательно с последующим внутриклеточным захватом.
ПРЕДПОСЫЛКИ СОЗДАНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Белок патология представляет собой общий знаменатель в этиологии или патогенеза многих медицинских расстройств, начиная с нарушения функции мутантного белка до патологического усиления функции, при которой специфический белок приобретает новое свойство, которое делает его токсичным. Концептуально, ингибирование синтеза этих белков с помощью генной терапии может быть многообещающим для пациентов, имеющих такую белковую аномалию.
Одним из главных достижений последних лет является концепция подавления экспрессии специфического гена с помощью РНК-интерференции, с использованием малых интерферирующих РНК (миРНК). РНК-интерференция основывается на коротких (≈19-27 пар оснований) двухцепочечных последовательностях РНК, способный действовать, совместно с клеточными биологическими системами (в частности, дайсером - белковым комплексом, который расщепляет двухцепочечную РНК для продуцирования миРНК и индуцированного РНК комплекса подавления экспрессии (RISC)), для того, чтобы ингибировать трансляцию и отметить для деградации специфические последовательности мРНК, таким образом, ингибируя экспрессию генов на стадии трансляции. Использование антисмыслового олигонуклеотида (АСО) с короткой последовательностью (обычно 13-25 нуклеотидов) немодифицированных или химически модифицированных молекул ДНК, комплементарных к специфической мРНК, также было предложено для ингибирования экспрессии и блокирования выработки соответствующего конкретного белка-мишени.
Тем не менее, несмотря на огромные потенциальные выгоды от таких подходов к медицинской помощи, трансмембранная доставка таких макромолекул остается существенной проблемой, из-за относительно больших и высоко заряженных структур миРНК (средняя МВт 13 «Да, около 40 отрицательно заряженных групп фосфатов). Таким образом, доставка трансмембранного миРНК требует преодоления очень большого энергетического барьера.
Мембранный дипольный потенциал представляет собой электрический потенциал, который существует в какой-либо фосфолипидной мембране, между границей раздела вода/мембрана и мембранным центром (положительным внутри). Предполагается генерирование глицерильных сложноэфирных связей за счет высокоупорядоченных карбонильных групп фосфолипидов. Его амплитуда составляет приблизительно 220-280 мВ. Поскольку находится в очень гидрофобной среде, с диэлектрической проницаемостью 2-4, это приводит к очень сильному электрическому полю 108-109 В/м. Предположительно, мембранный дипольный потенциал и связанное с ними внутри мембраны электрическое поле являются очень важными для функции мембранных белков. Дипольный потенциал, вероятно, играет важную физиологическую роль в определении конформации и активности мембранных белков. Тем не менее, на сегодняшний день, дипольный потенциал не привлекался к участию в медицинских использованиях.
Различные способы были разработаны для доставки олигонуклеотидов через биологические мембраны. Эти способы включают использование вирусных векторов, а также невирусных систем доставки, таких как катионные липиды или липосомы. Тем не менее, на сегодняшний день, использование этих способов в значительной степени ограничивается применениями in vitro, или для фокального введения in vivo, например, путем прямой инъекции в глаз или прямого введения в легкие. Например, электропорация представляет собой эффективный и широко используемый способ доставки макромолекул через биологические барьеры. В соответствии с этим способом, внешнее электрическое поле прикладывается к суспензии клеток, что приводит к столкновению заряженных молекул-мишеней с мембраной, с последующим временной и фокусной мембранной дестабилизацией и последующим прохождением макромолекул в клетку. Тем не менее, на сегодняшний день, электропорация используется в основном in vitro. Электропорация in vivo встретила ограниченный успех, и была сделана попытка только для определенных органов (например, мышцы, легкого), когда внешние электроды могут быть вставлены в орган-мишень.
В заключение, доставка макромолекул, таких как олигонуклеотиды, и других терапевтических агентов, через клеточные мембраны и другие биологические барьеры, такие как гематоэнцефалический барьер, по-прежнему представляет значительную неудовлетворенную потребность, и системная доставка (а именно доставка за счет внутривенного или перорального введения) таких макромолекул, по-прежнему остается огромным, не устраненной проблемой.
КРАТКОЕ ИЗЛОЖЕНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Варианты осуществления представленного изобретения предусматривают системы доставки, которые основываются на новом, рационально сконструированном "молекулярном двигателе". "Молекулярный двигатель" в соответствии с вариантами осуществления изобретения может использоваться для трансмембранной доставки лекарственных средств, которые могут включать низкомолекулярные лекарственные средства или макромолекулы, такие как пептиды, белки или олигонуклеотиды (например, одноцепочечная или двухцепочечная, РНК или ДНК). В конкретном варианте осуществления макромолекулы могут включать РНК цепи для подавления экспрессии гена, то есть, миРНК (малые интерферирующие РНК), или последовательностей ДНК предназначенные для использования в качестве антисмысловых олигонуклеотидов (ASO).
Конъюгаты лекарственных средств (например, низкомолекулярные лекарственных средств или макромолекулы) с "молекулярным двигателем" в соответствии с вариантами осуществления изобретения может быть использованным в медицинской практике, среди прочего, для лечения заболеваний, в которых аберрантные белки или белковая дисфункция играет роль, и в которых подавление экспрессии генов, кодирующих данные белки, может быть благоприятным; например, при лечении дегенеративных заболеваний, рака, токсического или ишемического инсультов, инфекций, или иммуноопосредованных расстройств.
В одном варианте осуществления предусматривается соединение для трансмембранной доставки лекарственного средства, где соединение соответствует Формуле II
в которой a представляет собой целое число 1, 2, 3 или 4, и в которой A выбирают из структур, которые представлены формулами III, IV и V
в которой М выбирают из -O- или -CH2-; и g и h независимо представляют собой целое число, выбранное из 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 и 16; и в которой
B представляет собой насыщенный или частично насыщенный линейный, разветвленный или циклический C1, C2, С3, C4, С5, C6, C7, C8, C9, C10, C11, С12, С13, С14, C15, С16, С17, С18, С19, С20, С21, С22, С23, С24, С25, С26, С27, С28, С29, С30, С31, С32, С33, С34, С35, С36, С37, С38, С39, С40, С41, С42 алкил, алкилен, гетероалкилен, арил, гетероарил; стероид или их комбинацию; Q или отсутствует, или выбирают из сложного эфира, тио-сложного эфира, амида, карбамата, дисульфида [-(S-S)-], простого эфира [-O-], pH-чувствительного фрагмента, и чувствительного к окислению-восстановлению фрагмента;
L отсутствует или представляет собой необязательно замещенный линейный, циклический или разветвленный, насыщенный, ненасыщенный или частично насыщенный C1, C2, C3, C4, C5, C6, C7, C8, C9, C10, C11, C12, С13, С14, С15, C16, C17, C18, C19, С20, С21, С22, С23, С24, С25, С26, С27, С28, C29, С30, С31, С32, С33, С34, С35, С36, С37, С38, С39, С40, С41, С42 алкил, алкилен, гетероалкилен, арил, гетероарил; стероид или -(O-СН2-СН2)u-, где u представляет собой целое число 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10; или их комбинации; упомянутое соединение способно связываться с лекарственным средством.
В одном варианте осуществления предусматривается конъюгат, содержащий соединение, как описано выше, присоединенное к лекарственному средству. Некоторые варианты осуществления изобретения касаются способа доставки лекарственного средства через биологическую мембрану, где способ включает инкубирование клеток с конъюгатом, как описано выше.
Другой вариант осуществления касается способа лечения заболевания где указанный способ включает введение пациенту, который нуждается в этом, соответствующего количества фармацевтической композиции, содержащей конъюгат, как описано выше.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
Изобретение далее будет описано с использованием некоторых примеров и вариантов осуществления, неограничивающим способом, со ссылкой на следующие иллюстративные фигуры, таким образом, что изобретение может быть более понятным с использованием чертежей:
Фиг. 1А представляет собой схематическое представление принципа асимметричной полярности, лежащего в основе активности соединений в соответствии с вариантами осуществления настоящего изобретения;
Фиг. 1B схематически изображает структурные фрагменты молекул согласно изобретению, как продемонстрировано соединением в соответствии с Формулой IX;
Фиг. 2 схематически иллюстрирует потенциальный механизм действия конъюгата в соответствии с вариантами осуществления изобретения;
Фиг. 3 схематически иллюстрирует механизм захвата миРНК в пределах цитоплазмы, используя дайсер фермент;
Фиг. 4 показывает иллюстративную структуру конъюгата, содержащего "молекулярный двигатель" согласно изобретению, конъюгированный с Cas9 белком; и
Фиг. 5А и 5B показывают результаты биологической активности соединений в соответствии с вариантами осуществления изобретения; фиг.5А показывает результаты флуоресцентной микроскопии и фиг.5B показывает результаты количественного анализа по ИФА ридеру после 24 часов инкубирования.
ДЕТАЛЬНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Варианты осуществления представленного изобретения касаются новых соединений, которые могут действовать в качестве систем доставки лекарственных средств через биологические мембраны, такие как фосфолипидные клеточные мембраны, в цитоплазму. Соединения в соответствии с вариантами осуществления изобретения содержат новые, рационально сконструированные "молекулярные двигатели" предназначенные для движения в пределах фосфолипидных мембран, из раздела фаз мембрана/вода к мембранному ядру, используя внутримембранное электрическое поле, которое связано с мембранным дипольным потенциалом. Когда присоединенная к лекарственному средству, указанная система доставки действует, чтобы тянуть лекарственное средство по направлению к мембранному ядру, и способствовать его трансмембранному движению. Среди прочего, данная система доставки предназначается для доставки терапевтических макромолекул: белков или олигонуклеотидов, причем последний с одной или двумя цепями ДНК или РНК. Среди прочего, указанная система доставки предназначается для доставки антисмысловых олигонуклеотидов (ASO), миРНК и терапевтических белков, таких как белок Cas9.
Одним из принципов, лежащих в основе структуры соединений в соответствии с вариантами осуществления настоящего изобретения, является принцип "асимметричной полярности", относительно гидрофобных, незаряженных молекул, которые в соответствии со своим 1одР, распределены в биологических мембранах (смотрите Фиг. 1А). Молекулы являются полярными, с их частичными зарядами, распределенными неравномерно: частичный отрицательный заряд является сильно локализованным и целенаправленным, в то время как частичный положительный заряд рассредоточен вдоль углеводородных цепей внутри молекулы. Кроме того, частичный положительный заряд также замаскирован, посредством взаимодействий дисперсионного типа с соседними углеводородными цепями внутри мембраны липидной среды (дисперсионные взаимодействия). Следовательно, как это схематически показано на Фиг. 1А, молекула в соответствии с вариантами осуществления изобретения перемещается в мембранной среде как отрицательно заряженная молекула. Поскольку внутреннее электрическое поле мембраны имеет отрицательный полюс на границе раздела мембрана/вода, и положительный полюс в мембранном центре, молекула движется в соответствующем электрическом поле в направлении мембранного центра, и при присоединении к грузу (например, миРНК или ASO, терапевтическому белку или другому лекарственному препарату), он тянет груз к мембранному центру.
Кроме того, когда необязательно расщепляемая группа (например, дисульфидная группа или олигонуклеотидная последовательность, расщепляемая дайсер ферментом) включена в молекулу в соответствии с вариантами осуществления изобретения, она может действовать как ловушка для груза (например, миРНК или ASO или другого лекарственного средства) в цитоплазме клетки-мишени, и также помогает в поддержании градиента концентрации конъюгата через клеточную мембрану. Термин "расщепляемая группа" в контексте представленного изобретения, таким образом, касается химического фрагмента, способного претерпевать спонтанное или фермент-направленное расщепление в определенных физиологических условиях, таких как изменения pH или изменения в окислительно-восстановительном состоянии. Примеры расщепляемых групп включают сложный эфир, тио-сложный эфир, амид, карбамат, дисульфид [-(S-S)-] простой эфир (-O-) или тио-простой эфир (-S-). Концептуально, расщепляемая группа может помочь в захвате лекарственного средства в его клетки-мишени после ее трансмембранного прохода, или помочь в поддержании градиента концентрации через биологические мембраны.
Например, в случае конъюгата в соответствии с вариантом осуществления настоящего изобретения, который включает миРНК, ASO или терапевтические белки, и дисульфидную группу; оказавшись внутри цитоплазмы, преобладающая окружающая восстановительная среда будет действовать так, чтобы восстановить дисульфидную связь до -SH группы, с высвобождением груза из части доставки. Лишенная "молекулярных двигателей" (фрагмента доставки), макромолекула груза затем будет захвачена в цитоплазме, где, например, в случае миРНК, будет готова к взаимодействию с РНК-индуцированным комплексом подавления экспрессии (RISC) для того, чтобы заглушить экспрессию определенного гена. В соответствии с вариантами осуществления изобретения, указанный ген может кодировать белок, принимающий участие в этиологии или патогенеза конкретного заболевания.
В соответствии с одним вариантом осуществления изобретения, груз представляет собой терапевтический белок, который доставляется через клеточные мембраны клеток для того, чтобы оказать благотворные терапевтические эффекты на внутриклеточные белки-мишени.
Область белковых лекарственных средств для внутриклеточных мишеней (PDIT) представляет собой новую область производных в части от завершения проекта секвенирования генома человека, что позволяет идентифицировать огромное количество внутриклеточных мишеней для потенциальных медицинских вмешательств путем введения белковых лекарственных средств, средств подавления экспрессии гена, РНК или ДНК компилирования или белок замещающей терапии. По своему характеру такие терапевтические стратегии могут быть полезны для какого-либо заболевания. Конкретным, весьма привлекательным кандидатом белком в области PDIT является CRISPR (короткие полиндромные повторы, регулярно расположенные группами) - связанный белок, и, в частности, белок Cas9. Совсем недавно обнаруженный белок, первоначально представляет собой бактериальный белок, естественно, используемый бактериями в качестве противовирусного механизма. Практически, этот белок может быть загружен с помощью какой-либо последовательности РНК, влекущие за собой специфичность в направленности белка, специфически к какому-либо локусу в геноме. Потенциально, такой локус может представлять собой сайт укрывательства мутантного дефектного гена. В этом сайте, белок Cas9 затем будет индуцировать точное рассечение, то есть, будет вызывать двухцепочечный разрыв ДНК. Затем активируются встречающиеся в природе механизмы репарации ДНК для того, чтобы восстановить этот участок аномально функционирующего гена. Таким образом, этот белок обеспечивает высокую эффективность редактирования гена (добавление, разрыв или изменение последовательности специфических генов) и регулирования и репарации гена, применимые к видам по всему дереву жизни. Предоставляя белок Cas9 и соответствующую направляющую РНК в клетку, геном организма может быть разрезан в каком-либо желаемом месте, и подвергнут редактированию и репарации.
Как проиллюстрировано ниже, вариант осуществления изобретения включает конъюгаты, содержащие один или несколько "молекулярных двигателей" и Cas9 белок или соответствующие белки, которые играют роль в редактировании ДНК или РНК. Другой вариант осуществления изобретения включает терапевтических белок, введенный в качестве заместительной терапии для лечения заболевания, которое ассоциируется с относительно сниженными уровнями специфического, физиологически-важного белка.
Соединения в соответствии с вариантами осуществления изобретения, как правило, включают гидрофобный (коэффициент распределения октанол к воде (logP>1)), дипольный, незаряженный химический фрагмент, сконструированный в соответствии с принципом асимметричной полярности (объясненным выше). Как обсуждалось, уникальная структура молекулы, будучи гидрофобной, нейтральной, но содержащей сосредоточенные частичные отрицательные заряды и рассредоточенные частичные положительные заряды, создает векторную систему, когда приложить силовом поле мембраны, при котором молекула движется в пределах фосфолипидной мембраны, от границы раздела мембрана/вода к мембранному ядру. При присоединении к лекарственному средству данная молекула будет соответственно тянуть лекарственное средство к мембранному ядру.
Как схематически проиллюстрировано на Фиг. 1B соединения в соответствии с вариантами осуществления изобретения (продемонстрированные, например, в виде соединений в соответствии с Формулой IX), как правило, включают "молекулярный двигатель", который, как правило, представляет собой комбинацию следующих структурных элементов:
(i). Отрицательный полюс (A): как правило, содержащий по меньшей мере 1 электроотрицательный атом, выбранный из галогена (например, атома(ов) фтора) и кислорода; где в случае, когда полюс содержит несколько электроотрицательных атомов, они расположены в пространстве в сфокусированном, сферическом (или близком к сферическому) расположении. Из-за электроноакцепторных свойств указанных атомов и их расположения в пространстве, отрицательный полюс соединения является обогащенным электронами фокусом.
(ii). Положительный полюс (B): содержащий относительно электроположительные атомы, выбранные из углерода, кремния, бора, фосфора и серы; расположенные таким образом, чтобы обеспечить максимальное взаимодействие с соседними углеводородными цепями, когда вводить в фосфолипидную мембрану, предпочтительно за счет расположения в виде алифатической или ароматической структуры линейных, разветвленных или циклических цепей, или их комбинаций. В одном варианте осуществления изобретения, положительный полюс содержит линейную насыщенную углеводородную цепь, или стероидный фрагмент, такой как холестерин, желчные кислоты, эстрадиол, эстриол или их комбинации.
Кроме того, соединение "молекулярный двигатель" в соответствии с вариантами осуществления изобретения может включать один или несколько линкеров (L) и расщепляемых групп (Q), дополнительно описанные ниже. Соединение может быть конъюгированным с или связанным с лекарственным средством (D) посредством линкера или расщепляемой группы.
Варианты осуществления изобретения, кроме того, касаются применения соединений в соответствии с вариантами осуществления изобретения, конъюгированные с лекарственными средствами, такими как белки или олигонуклеотиды (например, миРНК или ASO) в лечении заболеваний, таких как дегенеративные заболевания, рак, токсический или ишемический инсульты, инфекции или иммуноопосредованные расстройства, в которых специфические белки могут играть роль в этиологии заболеваний или патогенезе, и в которых подавление экспрессии соответствующего(их) гена(ов) посредством миРНК или антисмысловых механизмов может иметь благоприятные эффекты в ингибировании процессов, связанных с заболеванием. Например, конъюгаты в соответствии с вариантами осуществления изобретения может использоваться как антисмысловую терапию, которая является формой медицинского лечения, включающего введение цепи или двойной цепи нуклеиновой кислоты (ДНК, РНК или химического аналога), которая будет связываться с ДНК, кодирующей специфический белок, или с соответствующей информационной РНК (мРНК). Данное лечение действует так, чтобы ингибировать экспрессию гена и предотвращать продуцирование соответствующего белка. Альтернативно, конъюгаты согласно изобретению, могут содержать терапевтические белки, такие как белок Cas9.
Термины "лекарственное средство" или "медикамент" в контексте представленного изобретения касаются химического вещества, которое при введении пациенту, страдающему от заболевания, являются способными оказывать благоприятные эффекты на пациента. Указанные благоприятные эффекты могут улучшать симптомы, или противодействовать эффекту агента или вещества, которое играет роль в процессе заболевания. Лекарственное средство может содержать низкомолекулярное соединение или макромолекулу, такие как белок или цепи РНК или ДНК, введенные для того, чтобы ингибировать экспрессию гена. Среди прочего, лекарственное средство может включать миРНК или ASO. В некоторых вариантах осуществления, лекарственное средство направлено на лечение дегенеративных заболеваний, рака, ишемического, инфекционного или токсического инсультов, или иммуноопосредованных расстройств.
Варианты осуществления изобретения предусматривают новые конъюгаты, содержащие соединения в соответствии с вариантами осуществления изобретения, и лекарственное средство. Варианты осуществления изобретения, кроме того, предусматривают новые фармацевтические композиции, содержащие указанные конъюгаты, и новые способы лечения заболеваний, не основании данных фармацевтических композиций.
В соответствии с некоторыми вариантами осуществления, соединения и фармацевтические композиции изобретения могут использоваться для того, чтобы достигнуть более эффективного действия заместительной белковой терапии или генной терапии, такой как миРНК или антисмысловая терапия (ASO) in vivo.
Конъюгат в соответствии с вариантами осуществления изобретения может давать преимущества в улучшение доставки миРНК, ASO или терапевтических белков через клеточные мембраны или через гематоэнцефалический барьер, таким образом, улучшая эффективность миРНК или ASO в одном или нескольких аспектах, такую как, например, эффективность, токсичность или фармакокинетику.
Как описано выше, в качестве не ограничивающего потенциального механизма действия (МОА), конъюгаты в соответствии с вариантами осуществления изобретения, содержащие лекарственное средство, такое как миРНК или терапевтический белок, когда он расположен в пределах фосфолипидной мембраны, "молекулярный двигатель" (например, как это описано выше) действует, чтобы тянуть лекарственное средство к сердцевине мембраны. Следовательно, фокальная дестабилизация мембраны может происходить с латеральным движением фосфолипидных головных групп и генерации переходных мембранных пор, через которые может иметь место трансмембранное прохождение препарата. Данный потенциальный МОА схематически представлен на Фиг. 2.
В примере, схематически представлена на Фиг. 2, конъюгат содержит груз, который представляет собой миРНК, ASO или терапевтический белок, а также дисульфидные группы, для захвата груза в цитоплазме. На первой стадии (А) "двигатель" перемещается от поверхности мембраны к мембранному ядру, в соответствии с принципом асимметричной полярности, приводимый в действие электрическим полем внутренней мембраны.
На второй стадии (В) макромолекула, связанная с "двигателем" вынужден подойти к поверхности мембраны, таким образом, возмущая гидратные оболочки. Следовательно, имеется латеральное перемещение фосфолипидных головных групп, и формирование переходных мембранных пор, через которую макромолекула доставляется в клетку. Последующее замыкание переходной поры является термодинамически благоприятным (С).
В другом варианте осуществления захват миРНК в цитоплазме может включать способ, включающий: (i). введение дайсер субстрата, содержащего двухцепочечную РНК из 25-30 нуклеотидов, который включает последовательность для подавление экспрессии гена-мишени, в котором "молекулярный(ые) двигатель(и)" присоединен(ы) к 3'-концу нетранскрибируемой (клонированной) цепи и/или к 5'-концу антисмысловой (направляющей) цепи; (ii), введение конъюгата в соответствии с вариантами осуществления настоящего изобретения, которые будут вызывать транс-мембранную доставку лекарственного средства (например, миРНК) и расщепление дсРНК дайсер-ферментом, таким образом, удаляя "молекулярный(ые) двигатель(и)" из конъюгата, и высвобождая миРНК. миРНК, из-за его многочисленных отрицательных зарядов, будет захвачен в цитоплазме и будет иметь возможность взаимодействовать с комплексом RISC для подавления экспрессии гена-мишени.
В одном варианте осуществления показано схематически проиллюстрированный на Фиг. 3 механизм для захвата миРНК в пределах цитоплазмы, используя дайсер-фермент. Показан дайсер-субстрат, содержащий двухцепочечную РНК из 25-30 нуклеотидов, которая включает последовательность для подавления экспрессии гена-мишени. "Молекулярный двигатель" (стрелка) присоединяется к 3'-концу нетранскрибируемой (клонированной) цепи и/или к 5'-концу антисмысловой (направляющей) цепи миРНК, предназначенной для того, чтобы заглушить ген-мишень. После трансмембранной доставки, происходит расщепление дсРНК дайсер-ферментом, удаление "молекулярных двигателей" из конъюгата, и высвобождение миРНК для того, чтобы взаимодействовать с комплексом RISC, для подавления экспрессии гена-мишени. По этому механизму, миРНК, из-за ее многочисленных отрицательных зарядов, таким образом, захватывается в цитоплазме.
Конъюгаты в соответствии с вариантами осуществления изобретения могут быть описаны общей формулой (I):
включая фармацевтически приемлемые соли, гидраты, сольваты и метало-хелаты соединения, представленного структурой, как показано Формулой (I), и сольваты и гидраты солей, в которой:
D представляет собой лекарственное средство, которое доставляется через биологические мембраны. D может представлять собой низкомолекулярное лекарственное средство, пептид, белок, или нативный или модифицированный, одноцепочечную или двухцепочечную ДНК или РНК, такую как миРНК или ASO;
E представляет собой соединение в соответствии с вариантами осуществления изобретения; y и z каждый представляет собой целое число, независимо выбранное из 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6; по меньшей мере один из y или z является отличным от нуля. В одном варианте осуществления, y=1 и z=o; в другом варианте осуществления y=1 и z=1. Е может быть описанным общей формулой (II):
в которой a представляет собой целое число, выбранное из 1, 2, 3 или 4 и A выбирают из структур, которые представлены формулами III, IV и V - такой, как описано ниже;
B представляет собой химическую группу насыщенного или частично насыщенного линейного, разветвленного или циклического C1, С2, С3, С4, С5, С6, С7, С8, С9, C10, C11, С12, С13, С14, C15, C16, C17, C18, C19, C20, C21, C22, C23, C24, C25, C26, C27, C28, C29, C30, C31, C32, C33, C34, C35, C36, C37, C38, C39, C40, C41, C42 алкила, алкилена, гетероалкилена, арила, гетероарила; стероидный фрагмент, такой как холестерин, желчная кислота, эстроген, или их комбинацию;
Q отсутствует или выбирают из сложного эфира, тио-сложного эфира, амида, карбамата, дисульфида [-(S-S)-], простого эфира [-O-], pH-чувствительного фрагмента, и чувствительного к окислению-восстановлению фрагмента;
L может отсутствовать или быть таким же B как определено выше, и могут включать необязательно замещенный (кислородом, гидроксилом, азотом, фосфатом или серой) линейный, циклический или разветвленный, насыщенный, ненасыщенный или частично насыщенный C1, С2, С3, С4, С5, C6, С7, С8, C9, C10, C11, C12, С13, С14, C15, C16, С17, C18, C19, С20, С21, С22, С23, С24, С25, С26, С27, С28, С29, С30, С31, С32, С33, С34, С35, С36, С37, С38, С39, С40, С41, С42 алкил, алкилен, гетероалкилен, арил, гетероарил; стероид такой как холестерин, желчная кислота; эстроген, химический фрагмент структуры -(O-СН2-CH2)u-, в которой и представляет собой целое число 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10; или их комбинации. Как обсуждалось выше, А выбирают из структур как представлено в следующих формулах III, IV, V, в которых * представляет собой точку присоединения к B, Q, L или D:
в которой M выбирают из -O- или -CH2-;
в которой g представляет собой целое число, выбранное из 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 и 16;
в которой h представляет собой целое число, выбранное из 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 и 16.
Связывание D с фрагментами молекулы может происходить через эфирную, сложноэфирную, амидную, тиосложноэфирную, тиоэфирную или карбаматную группы. В случае, когда D представляет собой олигонуклеотид, связывание может происходить с нуклеиновым основанием, с рибозным фрагментом (например, через 2', 3' или 5' положения), или с фосфатным фрагмент нуклеотида; связывание может происходить или с терминальным или с нетерминальным нуклеотидом олигонуклеотидной цепи; в случае, когда D представляет собой белок, его связывание с другими фрагментами молекулы может происходить через связывание с боковой(ыми) цепью(ями) аминокислот белка, таких как лизин, глутамат или аспартат.
Термин "олигонуклеотид", в контексте изобретения, может включать ДНК или РНК молекулы, где каждая представляет собой одноцепочечную или двухцепочечную последовательность из одного или нескольких нуклеотидов. Каждый нуклеотид содержит азотистое основание (нуклеиновое основание), пятиуглеродный сахар (рибозу или дезоксирибозу), и фосфатную группу. Нуклеиновые основания выбирают из пуринов (аденина, гуанина) и пиримидинов (тимина, цитозина, урацила). Кроме того, термин может касаться модифицированных форм нуклеотидов, в которых модифицирование может быть в скелете молекулы (например, фосфоротиоат) или в нуклеиновом основании (например, метилирование в 2' положении рибозной группы в РНК). Данные модификации могут давать свойства, такие как улучшенная стабильность или улучшенная фармакокинетика олигонуклеотида, и использование таких модифицированных также олигонуклеотидов находится в пределах объема изобретения.
Связывание может происходить с нуклеиновым основанием, с рибозным фрагментом (например, через 2', 3' или 5' положениях), или связывание с фосфатным фрагментом нуклеотида. Связывание может происходить или с терминальным или нетерминальным нуклеотидом олигонуклеотидной цепи.
В одном варианте осуществления, раскрывается способ специфического ингибирования генной экспрессии, или in vitro, или in vivo; где указанный способ включает применение конъюгата изобретения, или соответствующей фармацевтической композиции, где D представляет собой миРНК или ASO, предназначенной подавлять экспрессию специфического гена, который кодирует патогенный белок, который принимает участие в этиологии или патогенезе заболевания.
Соответственно, конъюгаты в соответствии с вариантами осуществления изобретения могут использоваться для лечения заболевания. Варианты осуществления изобретения также раскрывают способ медицинского лечения, включающий введение пациенту, который нуждается в этом, соответствующего количества фармацевтической композиции в соответствии с вариантами осуществления изобретения. В одном варианте осуществления, введенная фармацевтическая композиция может включать миРНК или антисмысловой олигонуклеотид, активный в ингибировании экспрессии гена, который кодирует специфический патогенный (то есть, связанный с заболеванием) белок.
В одном варианте осуществления, молекула в соответствии с общей Формулой I, включает E, который имеет структуру, как представлено Формулой (VI)
в которой n и m представляют собой целые числа, каждый независимо выбранный из нуля и 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20; k представляет собой целое число, выбранное из 2, 3, 4, 5, 6, 7. В одном варианте осуществления k=2; Z отсутствует или представляет собой -S-S-, и Q является таким, как описано выше и представляет собой связывание с D.
В другом варианте осуществления, молекула в соответствии с общей Формулой I, включает E, который имеет структуру, которые представлены формулами VII или VIIa:
В другом варианте осуществления, молекула в соответствии с общей Формулой I, включает E, который имеет структуру, как представлено Формулой VIII:
в которой n и m представляют собой целые числа, каждый независимо выбранный из нуля и 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20; Z отсутствует или представляет собой -S-S-; и Q (как описано выше) представляет собой связывание с D.
В еще другом вариант осуществления, молекула в соответствии с общей Формулой I, включает E, который имеет структуру, которые представлены формулами IX или IXa:
Кроме того, в пределах объема изобретения являются молекулы (также называемые "предшественниками"), используемыми в синтезе конъюгатов в соответствии с вариантами осуществления изобретения.
В одном варианте осуществления такая молекула имеет структуру, представленную Формулой X:
в которой W представляет собой соединение в соответствии с какой-либо из Формул II, III, IV, V, VI, VII, VIIa, VIII, IX или IXa. Данный предшественник может быть используемым, среди прочего, для присоединения к 5'-концу олигонуклеотида.
Другой предшественник изобретения имеет структуру в соответствии с Формулой (XI):
в которой G представляет собой соединение в соответствии с какой-либо из Формул II, III, IV, V, VI, VII, VIIa, VIII, IX или IXa. Данный предшественник может быть используемым, среди прочего, для присоединения к 3'-концу олигонуклеотида.
Варианты осуществления изобретения могут дополнительно включать фармацевтические композиции, содержащие конъюгат, который включает молекулу в соответствии с какой-либо из I, II, III, IV, V, VI, VII, VIIa, VIII, IX или IXa, и фармацевтически-приемлемую соль или носитель.
Изобретение также включает способы специфического ингибирования экспрессии гена, in vitro или in vivo. В одном варианте осуществления, способ может включать применение конъюгата в соответствии с Формулой I или соответствующей фармацевтической композиции, в которой D представляет собой миРНК или ASO, предназначенный для того, чтобы подавлять экспрессию специфического гена, где указанный ген кодирует патогенный белок, который принимает участие в этиологии или патогенезе заболевания; или терапевтический белок.
Конъюгаты в соответствии с вариантами осуществления изобретения, может использоваться для лечения заболевания. Варианты осуществления изобретения включают способы медицинского лечения, включающие введение пациенту, который нуждается в этом, соответствующего количества фармацевтической композиции, содержащей конъюгат в соответствии с Формулой I, где D представляет собой лекарственное средство, используемое для лечения соответствующего заболевания. В одном варианте осуществления, способ является для генетического лечения миРНК или ASO, где указанный способ включает введение пациенту, который нуждается в этом, соответствующего количества фармацевтической композиции, содержащей конъюгат согласно изобретению в соответствии с Формулой I, где D представляет собой миРНК, ASO или терапевтический белок, используемый в ингибировании генной экспрессии, который принимает участие в заболевании конкретного пациента.
В другом варианте осуществления изобретения, D представляет собой белок, который доставляется через биологические фосфолипидные мембраны в клетки, или через биологические барьеры, такие как гематоэнцефалический барьер.
В другом варианте осуществления изобретения, D представляет собой нормальный белок, вводимый как заместительная терапия, например, для того, чтобы заменить мутированное нарушение функционирующего белка.
В другом варианте осуществления, D представляет собой белок, который принимает участие в генном регулировании, включая, среди прочего, белки, которые принимают участие в ДНК или РНК редактировании (добавлении, разрыве или изменении последовательности специфических генов). В одном варианте осуществления, указанный белок может быть членом CRISPR (короткие полиндромные повторы с регулярно расположенными группами) - связанных белков. Специфически, указанный белок может представлять собой или может содержать Cas9 белок (CRISPR ассоциированный белок 9), РНК-направляющую ДНК нуклеазного фермента, или его аналога.
В одном варианте осуществления, изобретение описывает способ генетического лечения заболевания, где указанный способ включает введение пациенту, который нуждается в этом, соответствующего количества фармацевтической композиции, содержащей конъюгат в соответствии с Формулой I, где D представляет собой CRISPR белок, такой как Cas9, вводимый вместе с соответствующим направляющим олигонуклеотидом, таким образом, достигая доставку указанного белка, загруженного соответствующим направляющим олигонуклеотидом в клетках, где они могут влиять на активность своего генома редактирования. Направляющий олигонуклеотид, в данном контексте, представляет собой последовательность РНК или ДНК, который направляет Cas-9 белок со специфическим локусом (местом) на ДНК, для того, чтобы восстановить дефект генетического материала. В случае Cas9 белка, направляющий олигонуклеотид представляет собой РНК.
Таким образом, конъюгаты в соответствии с вариантами осуществления изобретения, и соответствующие фармацевтические композиции и способы, могут быть благоприятными, среди прочего, для лечения заболеваний, выбранных, среди прочего, из рака, токсических инсультов, ишемического заболевание, инфекционного заболевание, болезни депонирования белка, травмы, иммуноопосредованного заболевания, или дегенеративного заболевания.
В области неврологических расстройств, конъюгаты в соответствии с вариантами осуществления изобретения может быть используемыми, среди прочего, для лечения нейродегенеративных заболеваний, таких как болезнь Альцгеймера, болезнь двигательных нейронов, болезнь Паркинсона, болезнь Хантингтона, рассеянный склероз и болезнь Крейтцфельда-Якоба.
ПРИМЕРЫ
Пример 1: Общий способ для синтеза конъюгатов содержащих олигонуклеотиды. в соответствии с вариантами осуществления изобретения:
Вначале, ген, который подавляется D, выбирается на основании их роли в заболевании в этиологии или патогенезе. Затем, на основании биоинформационных методик, известных в данной области, определяют нуклеотидную последовательность (как правило, из 19-21 пар оснований для RISC субстрата, и 25-29 для дайсер-субстрата) соответствующей миРНК ДНК деквенса ASO.
Синтез проводят в 3'-5' направлении. Твердофазный синтез применяется, с использованием имидофосфитных структурных блоков, полученных из защищенных 2'-дезоксинуклеозидов (dA, dC, dG и T), рибонуклеозидов (А, С, G и U), или химически модифицированных нуклеозидов, например, LNA (закрытая нуклеиновая кислота) или BNA (мостиковые нуклеиновые кислоты). Структурные блоки последовательно соединены с возрастанием цепи олигонуклеотида, в порядке, предусмотренном последовательностью желаемого миРНК или ASO.
После конструирования олигонуклеотида, соединение в соответствии с вариантами осуществления настоящего изобретения (Е, как определено выше), добавляют в качестве одного из структурных блоков олигонуклеотида. Необязательно, соединение может быть добавлено в форме предшественника, как описано выше. Для добавления соединения к 5'-концу олигонуклеотида, соединение в форме предшественника, может включать имидофосфитную группировку. Для добавления соединения к 3'-концу олигонуклеотида, соединение в форме предшественника, может включать ацетиленовый или азидные фрагменты. Как правило, процесс полностью автоматизирован. После завершения сборки цепи, продукт высвобождается из твердой фазы в раствор, снимается защита и собирается. Нужный конъюгат затем собирают и выделяют с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ), для получения желаемых олигонуклеотиды с высокой степенью чистоты. В случае миРНК, каждая из комплементарной нити РНК синтезируется отдельно, а затем отжиг двух нитей выполняется, с получением желаемой миРНК, двухцепочечной РНК.
Пример 2: Способ синтеза конкретного иллюстративного соединения в соответствии с вариантом осуществления изобретения:
Синтез иллюстративного соединения в соответствии с вариантами осуществления изобретения инициируется из литохолевой кислоты желчных кислот, (которая может служить в качестве примера фрагмента B, как описано выше).
Перфтор-трет-бутанол является коммерчески доступным, и может служить в качестве примера фрагмента A, как описано выше.
Синтез протекает, как описано на схеме I ниже. В данном примере, Е фрагмент предназначен для того, чтобы быть связанным с 5-концом олигонуклеотида, и, следовательно, имидофосфитный фрагмент добавляется на последней стадии синтеза.
25 г материала 1 превращали в 26 г (количественно) метилового сложного эфира (материал 2). 26 г материала 2 подвергали взаимодействию с TBDMSCI NS получали 29 г (87%) ЯМР чистого материала 3. Восстановление материала 3 (29 г) до материала 4 с NaBH4 ТГФ/МеОН давало, после обработки и очистки, 25 г материала 4 (85%) по ЯМР с все еще некоторыми следовыми количествами материала 3. Реакция Мицунобу материала 4 с перфтор-трет-бутанолом давала, после обработки с использованием колоночной хроматографии и растирания с MeOH, 33,5 г (92%) материала 5, с которого после этого снимали защиту, чтобы получить стероид 6. Стероид 6 (2,5 г) затем сочетали с THP-защищенным бромтетрадеканолом. Сочетание занимало 3 дня, и 4 эквивалента THP-защищенного бромтетрадеканола было необходимо для того, чтобы достичь полного превращения. Продукт чистили с использованием колоночной хроматографии. После удаления защитной группы (ТНР) с МеОН/1,4-диоксаном (HCl, 4 N)/TTO, продукт 7 чистили с использованием колоночной хроматографии для того, чтобы удалить примеси. Продукт 7 (1,5 г, 48%) получали в виде белого твердого вещества. Продукт 7 затем превращали в требуемое соединение 8, путем присоединения имидофосфитной группы.
Пример 3: Структуры предшественников и соответствующих соединений, присоединенных к олигонуклеотидам
5' модификация:
Предшественник:
В качестве присоединенного к олигонуклеотиду:
3' модификация:
Предшественник:
DMT = Диметокситритил;
CPG = Стекло с контролируемым размером пор (CPG) в качестве твердой подложки для синтеза олигонуклеотида.
В качестве присоединенного к олигонуклеотиду:
5' модификация; присоединение соединения к нуклеиновому основанию (например, тимин):
Предшественник, присоединенный к олигонуклеотиду
Пример 4; Иллюстративная структура соединения, конъюгированного с белком Cas9 в соответствии с вариантами осуществления изобретения
Структура "молекулярного двигателя" согласно изобретению, конъюгированного с белком Cas9 схематически проиллюстрирована на Фиг. 4. Структура основывается на кристаллографическом исследовании структуры белка Cas9 (Nishimazu FG, et al., Cell 156: 935-949, 2014). Соединения E в соответствии с вариантами осуществления изобретения будут присоединяться через их Q группу к белку, связываясь с лизиновыми боковыми-цепями на поверхности белка. Для присоединения будут использоваться активные сложные эфиры. Спирт будет превращен в карбонатный активный сложный эфир, который предпочтительно взаимодействует с азотом (боковые цепи лизина белка) в связи с кислородом (вода). Реакцию будут проводить в соответствии со следующей схемой II:
Возможные дериватизирующие агенты:
Фосген: связывание происходит посредством хлорформиатного сложного эфира.
Дисукцинимидилкарбонат (X = N-гидроксисукцинимид): связывание происходит посредством сукцинимидилкарбоната.
Карбонилдиимидазол (CDI, X = Имидазол): связывание происходит посредством имидазолилкарбамата.
Введение метки в белок с какой-либо из данных групп происходит в свободную аминогруппы (не Трис), слабощелочной буфер (pH=8-9). Точка связи является гидрофобной, таким образом, требует сопутствующий растворитель (обычно ДМФ или ДМСО) для реакции с белками. Высокая реакционная способность означает сокращение времени реакции, но также более низкую селективность к азоту по отношению к кислороду и более короткое время жизни в водном буфере. Со всеми активными сложными эфирами, продукт представляет собой карбамат, который может быть восприимчивым к ферментативному расщеплению. Из этих трех приведенных выше вариантов, карбонилдиимидазол имеет самую высокую селективность к азоту по отношению к кислороду, а также наиболее простой синтез. С другой стороны, дериватизация белка может занять больше времени (возможно, в течение ночи). Число E фрагментов на молекулу белка определяется, предварительно установив требуемые молярные соотношения.
Пример 5: Клеточный захват и локализация меченной Cy3 SS 29-звенной ДНК-последовательности in vitro в соответствии с вариантами осуществления настоящего изобретения.
Клеточная культура:
NIH-3T3 клеточные линии стабильно трансфицированные с GFP получали от Cell Biolabs, San-Diago, USA (cat-AKR214).
Клетки выращивали в среде Игла, модифицированной по способу Дульбекко (DMEM; Gibco cat-41965), дополненной 10% фетальной бычьей сывороткой (FBS; Biological Industries cat-04-011-1A), 2 мМ L-глутамина (Biological Industries cat-03-020-1B), 1% пенициллин-стрептомицин (Biological Industries cat-03-031-1 В) и 10 мкг/мл бластицидин (Enzo cat-ALX-380-089) при 37°C во влажном инкубаторе, содержащем 5% CO2.
Оценка доставки 29-мерной ДНК в клетки; In-vitro анализ:
За один день до эксперимента NIH-3T3-GFP клетки в экспоненциальной фазе роста высевали в 24-луночные планшеты с плотностью 4,5×104 клеток/лунку с DMEM плюс среда для роста с добавками (500 мкл/лунка) без антибиотиков. Каждый из меченных Cy3 олигонуклеотидов разбавляли 100 мкл/лунка Opti-Mem (Life technologies-Cat. 31985062) и добавляли к клеткам с конечной концентрацией, которая варьирует от 40 до 100 нМ. Накопление меченной Cy3 олигонуклеотидной системы доставки в пределах клеток оценивали через 2, 4, 8 и 24 часа после инкубирования. После периода инкубирования клетки промывали сбалансированным солевым раствором Хенкса (HBSS буфер; Biological Industries) и подвергали анализу.
Обнаружение и количественное определение Cy3-положительной популяции проводили с использованием многомодового ридера Tecan Infinite® 200 PRO (длина волны возбуждения 548±4,5 нм и эмиссии 580±10 нм).
Транс-мембранную доставку соединения в соответствии с вариантами осуществления изобретения, присоединенное к Cy3-оцДНК олигонуклеотид (29 нуклеотидов) (Syncom, the Netherlands; IDT, USA) сравнивали с контрольным Cy3-оцДНК олигонуклеотидом (IDТ, USA) и выражали в процентах от Cy3-положительных клеток по сравнению с необработанными клетками.
Флуоресцентная микроскопия:
NIH-3T3 GFP клетки с плотностью 4,5×104/лунку высевали за 24 ч до экспериментов. Среду для роста заменяли на свежую среду, содержащую соединение в соответствии с вариантами осуществления изобретения, присоединенного к Cy3-оцДНК олигонуклеотиду (29 нуклеотидов) (40-100 нМ растворенного в воде без дезоксирибонуклеазы/рибонуклеазы) или контрольной Cy3-оцДНК (IDT, USA) и инкубировали 2, 4, 8 и 24 ч при 37°С.
После инкубирования, клетки промывали HBSS и визуализировали с использованием флуоресцентного микроскопа Olympus (BX51TF; Olympus Optical, U.K.), с УФ излучением от ртутной лампы. Cy3-флуорофор визуализировали с длиной волны возбуждения 470-495 нм и эмиссии на 590 нм. GFP-флуорофор визуализировали с длиной волны возбуждения 530-550 нм и эмиссии на 510-550 нм.
Биологическая активность конъюгата в соответствии с вариантами осуществления изобретения, при доставке через фосфолипидные мембраны, в клетки, ASO оц (одноцепочечной) 29-мерной ДНК, связанной с его 5'-концом, посредством фосфатной связи с E фрагментом (в данном примере соединение Формулы VIIa) в соответствии с вариантами осуществления изобретения, описывается на фигурах 5A и 5B Конструкт также имел iCy3-флуорофор на 5'-конце. Оценивали доставку в NIH-3T3 клетки, стабильно трансфицированных с GFP белком.
Фиг. 5А показывает результаты 3T3-GFP клеток, которые инкубировали с соединением в соответствии с вариантами осуществления изобретения, присоединенными к Cy3-оцДНК ("E-конъюгат") или Cy3-оцДНК в концентрации 100 нМ в течение периода времени 8 часов. Клетки впоследствии анализировали с использованием флуоресцентной микроскопии (×20 величина).
E-конъюгат показан на верхней панели, тогда как нижняя панель представляет собой контрольный ASO, не содержащий соединение в соответствии с вариантами осуществления изобретения ("E фрагмент").
Как показано, в то время как контрольный конструкт, не содержащий E фрагмент, не проявлял какой-либо значительной доставки в клетки, E-конъюгат проявлял захват в почти во всех клетках. Изображения были получены после 8 часов инкубирования при . Показано инкубирование со 100 нМ E-конъюгата.
Количественный анализ согласно ИФА
3T3-GFP клетки инкубировали с E-конъюгатом или Cy3-оцДНК при варьировании концентрациями (40 нМ и 100 нМ) в течение 24 часов. Клетки промывали и определяли с помощью ИФА флуориметра. Cy3 флуоресцентные уровни сравнивали с 3T3-GFP необработанными клетками.
Как показано на Фиг. 5B, при дозах 40 нМ и 100 нМ, конъюгат проявлял 4-кратную и 3-кратную повышенную доставку в клетках, по сравнению с контролями.
Пример 6: Нокдаун мРНК с использованием миРНК in vitro
Оценивают ингибиторную активность 25-27 пар оснований дсРНК в клетках стабильно экспрессирующих GFP (зеленый флуоресцентный белок) ген-репортер. Для данной цели, стабильно трансфицированные NIH 3T3 клетки, экспрессирующие GFP являются трансфицированными с 25-27-мерными дсРНК дуплексами (каждый при 10-40 нМ). Для того, чтобы получить количественную оценку продолжительности нокдаун GFP гена, будут проводить эксперимент по определению зависимости от времени, наблюдая GFP экспрессию после трансфекции.
За один день до эксперимента NIH-3T3-GFP клетки в экспоненциальной фазе роста будут высевать в 24-луночные планшеты с плотностью 4,5×104 клеток/лунку с DMEM плюс среда для роста с добавками (500 мкл/лунка) без антибиотиков. Каждый из меченных Cy3 олигонуклеотидов разбавляли 100 мкл/лунка Opti-Mem (Life technologies-Cat. 31985062) и добавляли к клеткам с конечной концентрацией, которая варьирует от 40 до 100 нМ. Нокдаун мРНК GFP в пределах клеток будут оценивать через 24, 48 и 72 ч после инкубирования. После периода инкубирования клетки промывали сбалансированным солевым раствором Хенкса (HBSS буфер; Biological Industries) и подвергали анализу. Обнаружение и количественное определение GFP-положительной популяции проводили с использованием многомодового ридера Tecan Infinite® 200 PRO (длина волны возбуждения 488±4,5 нм и эмиссии 535±10 нм).
Активность нокдауна соединения в соответствии с вариантами осуществления изобретения, присоединенного к дсРНК с 25-27 парами основ (Syncom, the Netherlands; IDT, USA) будут сравнивать с контрольными дсРНК с 25-27 парами основ (IDT, USA) и выражали как процент от GFP-положительных клеток по сравнению с необработанными клетками.
Пример 7: Механизм внутриклеточного захвата миРНК. включающий введение дайсер-субстрата
В варианте осуществления изобретения способ захвата миРНК в цитоплазме основывается на активности дайсер-фермента, при обработке двухцепочечной РНК, разрезая его на размер 19-21 пар оснований, приемлемой для взаимодействия с комплексом RISC для подавления экспрессии гена. Указанный способ включает: (i). введение дайсер-субстрата, содержащего двухцепочечную РНК из 25-30 нуклеотидов, которая включает последовательность для подавления экспрессии гена-мишени, где соединения в соответствии с вариантами осуществления изобретения присоединяются к 3'-концу нетранскрибируемой (клонированной) цепи и/или к 5'-концу антисмысловой (направляющей) цепи; (ii), транс-мембранную доставку миРНК; и (iii), расщепление дсРНК с использованием дайсер-фермента, таким образом высвобождая миРНК для взаимодействия с комплексом RISC, для подавления экспрессии гена-мишени.
Для анализа дайсер-расщепления in vitro, миРНК дуплексы (100 пиоль) могут быть инкубированными в 20 мл 20 мМ Tris pH 8,0, 200 мМ NaCl, 2,5 мМ MgCl2, с 1 единицей рекомбинантного человеческого дайсера (Stratagene) в течение 24 ч. Аликвоту в 3 мл от каждой реакционной смеси (15 пмоль РНК) будут отбирать в 15% неденатурирующий полиакриламидный гель, окрашенный GelStar (Ambrex) и визуализировать с использованием УФ возбуждения. Жидкостная хроматография с ионизацией электрораспылением масс-спектроскопия (ESILCMS) дуплексных РНК перед и после обработки дайсером будет выполняться с использованием системы Oligo HTCS (Novatia), которая состоит из ThermoFinniganTSQ7000, системы данных Xcalibur, система программного обеспечения обработки данных ProMass и Paradigm MS4 ВЭЖХ (Michrom BioResources).
Claims (22)
1. Соединение для применения в трансмембранной доставке лекарственного средства, имеющее структуру, представленную формулой (VI)
в которой n и m представляют собой целые числа, каждый независимо выбранный из нуля и 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20;
k представляет собой целое число, выбранное из 2, 3, 4, 5, 6 или 7; и
Z отсутствует или представляет собой карбамат или представляет собой -S-S- и
Q представляет собой точку связывания с лекарственным средством;
или имеющее структуру, представленную формулой (VII)
или имеющее структуру, представленную формулой (VIIa)
или имеющее структуру, представленную формулой (VIII)
в которой n и m представляют собой целые числа, каждый независимо выбранный из нуля и 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20;
Z отсутствует или представляет собой -S-S- или карбамат и
Q представляет собой точку связывания с лекарственным средством;
или имеющее структуру, представленную формулой (IX)
или имеющее структуру, представленную формулой (IXa)
или его фармацевтически приемлемая соль, гидрат или сольват.
2. Соединение по п.1, где указанное лекарственное средство выбирают из природной или модифицированной РНК или ДНК, малой интерферирующей РНК (миРНК), антисмыслового олигонуклеотида (ASO) или терапевтического белка, CRISPR белка, дайсер-субстрата, содержащего двухцепочечную РНК из 25-30 нуклеотидов, которая включает последовательность гена-мишени для сайлесинга, или какой-либо их комбинации.
3. Соединение по п.1, где указанное лекарственное средство применяют для лечения по меньшей мере одного заболевания, выбранного из рака, токсического инсульта, ишемического заболевания, инфекционного заболевание, болезни депонирования белка, травмы, иммуноопосредованного заболевания, или дегенеративного заболевания, такого как болезнь Альцгеймера, болезнь двигательных нейронов, болезнь Паркинсона, болезнь Хантингтона, рассеянный склероз и болезнь Крейтцфельда-Якоба.
Applications Claiming Priority (11)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201461971548P | 2014-03-28 | 2014-03-28 | |
US61/971,548 | 2014-03-28 | ||
US201461978903P | 2014-04-13 | 2014-04-13 | |
US61/978,903 | 2014-04-13 | ||
US201462002870P | 2014-05-25 | 2014-05-25 | |
US62/002,870 | 2014-05-25 | ||
US201462008509P | 2014-06-06 | 2014-06-06 | |
US62/008,509 | 2014-06-06 | ||
US201462091551P | 2014-12-14 | 2014-12-14 | |
US62/091,551 | 2014-12-14 | ||
PCT/IL2015/000019 WO2015145417A1 (en) | 2014-03-28 | 2015-03-29 | Compounds and methods for trans-membrane delivery of molecules |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2016142510A RU2016142510A (ru) | 2018-05-03 |
RU2016142510A3 RU2016142510A3 (ru) | 2019-02-20 |
RU2703416C2 true RU2703416C2 (ru) | 2019-10-16 |
Family
ID=54194063
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2016142510A RU2703416C2 (ru) | 2014-03-28 | 2015-03-29 | Соединения для транс-мембранной доставки молекул |
Country Status (12)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US9687556B2 (ru) |
EP (1) | EP3125946B1 (ru) |
JP (1) | JP6669719B2 (ru) |
KR (1) | KR20160138210A (ru) |
CN (1) | CN106456804B (ru) |
AU (1) | AU2015237746B2 (ru) |
BR (1) | BR112016022553A2 (ru) |
CA (1) | CA2944141C (ru) |
IL (1) | IL248067B (ru) |
MX (1) | MX2016012716A (ru) |
RU (1) | RU2703416C2 (ru) |
WO (1) | WO2015145417A1 (ru) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2756569C1 (ru) * | 2015-08-20 | 2021-10-01 | Апосенс Лтд. | Соединения и способы трансмембранной доставки молекул |
US11230710B2 (en) | 2017-01-09 | 2022-01-25 | Aposense Ltd | Compounds and methods for trans-membrane delivery of molecules |
Families Citing this family (28)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2013066438A2 (en) | 2011-07-22 | 2013-05-10 | President And Fellows Of Harvard College | Evaluation and improvement of nuclease cleavage specificity |
US9163284B2 (en) | 2013-08-09 | 2015-10-20 | President And Fellows Of Harvard College | Methods for identifying a target site of a Cas9 nuclease |
US9359599B2 (en) | 2013-08-22 | 2016-06-07 | President And Fellows Of Harvard College | Engineered transcription activator-like effector (TALE) domains and uses thereof |
US9322037B2 (en) | 2013-09-06 | 2016-04-26 | President And Fellows Of Harvard College | Cas9-FokI fusion proteins and uses thereof |
US9526784B2 (en) | 2013-09-06 | 2016-12-27 | President And Fellows Of Harvard College | Delivery system for functional nucleases |
US9228207B2 (en) | 2013-09-06 | 2016-01-05 | President And Fellows Of Harvard College | Switchable gRNAs comprising aptamers |
US20150165054A1 (en) | 2013-12-12 | 2015-06-18 | President And Fellows Of Harvard College | Methods for correcting caspase-9 point mutations |
US11318206B2 (en) | 2014-03-28 | 2022-05-03 | Aposense Ltd | Compounds and methods for trans-membrane delivery of molecules |
US10077453B2 (en) | 2014-07-30 | 2018-09-18 | President And Fellows Of Harvard College | CAS9 proteins including ligand-dependent inteins |
EP3365357B1 (en) | 2015-10-23 | 2024-02-14 | President and Fellows of Harvard College | Evolved cas9 proteins for gene editing |
AU2017306676B2 (en) | 2016-08-03 | 2024-02-22 | President And Fellows Of Harvard College | Adenosine nucleobase editors and uses thereof |
AU2017308889B2 (en) | 2016-08-09 | 2023-11-09 | President And Fellows Of Harvard College | Programmable Cas9-recombinase fusion proteins and uses thereof |
US11542509B2 (en) | 2016-08-24 | 2023-01-03 | President And Fellows Of Harvard College | Incorporation of unnatural amino acids into proteins using base editing |
SG11201903089RA (en) | 2016-10-14 | 2019-05-30 | Harvard College | Aav delivery of nucleobase editors |
WO2018119359A1 (en) | 2016-12-23 | 2018-06-28 | President And Fellows Of Harvard College | Editing of ccr5 receptor gene to protect against hiv infection |
WO2018165504A1 (en) | 2017-03-09 | 2018-09-13 | President And Fellows Of Harvard College | Suppression of pain by gene editing |
US11542496B2 (en) | 2017-03-10 | 2023-01-03 | President And Fellows Of Harvard College | Cytosine to guanine base editor |
IL306092A (en) | 2017-03-23 | 2023-11-01 | Harvard College | Nucleic base editors that include nucleic acid programmable DNA binding proteins |
WO2018209320A1 (en) | 2017-05-12 | 2018-11-15 | President And Fellows Of Harvard College | Aptazyme-embedded guide rnas for use with crispr-cas9 in genome editing and transcriptional activation |
US10195286B2 (en) * | 2017-07-04 | 2019-02-05 | Aposense Ltd. | Compounds and methods for trans-membrane delivery of molecules |
JP2020534795A (ja) | 2017-07-28 | 2020-12-03 | プレジデント アンド フェローズ オブ ハーバード カレッジ | ファージによって支援される連続的進化(pace)を用いて塩基編集因子を進化させるための方法および組成物 |
WO2019039403A1 (ja) | 2017-08-22 | 2019-02-28 | 国立大学法人名古屋大学 | 修飾ポリヌクレオチド |
WO2019139645A2 (en) | 2017-08-30 | 2019-07-18 | President And Fellows Of Harvard College | High efficiency base editors comprising gam |
US11795443B2 (en) | 2017-10-16 | 2023-10-24 | The Broad Institute, Inc. | Uses of adenosine base editors |
CA3087294A1 (en) * | 2018-01-01 | 2019-07-04 | Aposense Ltd. | Compounds and methods for trans-membrane delivery of molecules |
JP2022526908A (ja) | 2019-03-19 | 2022-05-27 | ザ ブロード インスティテュート,インコーポレーテッド | 編集ヌクレオチド配列を編集するための方法および組成物 |
AU2021267940A1 (en) | 2020-05-08 | 2022-12-08 | President And Fellows Of Harvard College | Methods and compositions for simultaneous editing of both strands of a target double-stranded nucleotide sequence |
EP4062942A1 (en) | 2021-03-22 | 2022-09-28 | Ludwig-Maximilians-Universität München | Disulfide-based prodrug compounds |
Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1998050041A1 (en) * | 1997-05-06 | 1998-11-12 | Imarx Pharmaceutical Corp. | Novel prodrugs comprising fluorinated amphiphiles |
US6028066A (en) * | 1997-05-06 | 2000-02-22 | Imarx Pharmaceutical Corp. | Prodrugs comprising fluorinated amphiphiles |
WO2005077968A2 (en) * | 2004-02-13 | 2005-08-25 | Innoventus Project Ab | 17-methylene-or 17 - spiro - cyclopropane 7 - substituted estra - 1, 3, 5 (10) - triene derivatives with anti - estrogenic activity |
US20060167223A1 (en) * | 2002-11-08 | 2006-07-27 | Bernard Pucci | Novel ampiphilic fluorocarbon molecular vectors for biomedical and medical use |
RU2408605C2 (ru) * | 2005-02-18 | 2011-01-10 | Анджиокем Инк. | Полипептид, способный преодолевать гематоэнцефалический барьер, и его конъюгат |
US20110123457A1 (en) * | 2008-06-19 | 2011-05-26 | Yihua Yu | Conjugates of 19f mr imaging tracers and chemotherapeutic agents for drug quantification and drug dose individualization |
Family Cites Families (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE69736981D1 (de) * | 1996-05-01 | 2007-01-04 | Imarx Pharmaceutical Corp | In vitro verfahren zum einbringen von nukleinsäuren in eine zelle |
JP5352462B2 (ja) | 2006-09-22 | 2013-11-27 | ダーマコン, インコーポレイテッド | 二本鎖オリゴヌクレオチド複合体、rna干渉による遺伝子サイレンシング方法、および医薬品組成物 |
KR101661636B1 (ko) * | 2008-05-13 | 2016-09-30 | 유니버시티 오브 워싱톤 | 세포로의 전달을 위한 이블록 공중합체 및 그의 폴리뉴클레오티드 복합체 |
AU2009293658A1 (en) * | 2008-09-22 | 2010-03-25 | James Cardia | Reduced size self-delivering RNAi compounds |
GB201122458D0 (en) * | 2011-12-30 | 2012-02-08 | Univ Wageningen | Modified cascade ribonucleoproteins and uses thereof |
LT3401400T (lt) * | 2012-05-25 | 2019-06-10 | The Regents Of The University Of California | Būdai ir kompozicijos, skirtos rnr molekulės nukreipiamai tikslinės dnr modifikacijai ir rnr molekulės nukreipiamam transkripcijos moduliavimui |
MX2014014650A (es) * | 2012-05-30 | 2015-10-14 | Univ Washington | Minivectores superenrollados como una herramienta para la reparacion, alteración y reemplazo de ácido desoxirribonucleico. |
WO2014127052A1 (en) * | 2013-02-13 | 2014-08-21 | Zondlo Neal | Perfluoro-tert-butyl hydroxyproline |
CN105873902B (zh) | 2013-11-18 | 2019-03-08 | 阿克丘勒斯治疗公司 | 用于rna递送的可电离的阳离子脂质 |
-
2015
- 2015-03-29 AU AU2015237746A patent/AU2015237746B2/en active Active
- 2015-03-29 KR KR1020167029764A patent/KR20160138210A/ko unknown
- 2015-03-29 MX MX2016012716A patent/MX2016012716A/es unknown
- 2015-03-29 RU RU2016142510A patent/RU2703416C2/ru active
- 2015-03-29 EP EP15770224.2A patent/EP3125946B1/en active Active
- 2015-03-29 BR BR112016022553A patent/BR112016022553A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2015-03-29 JP JP2017501533A patent/JP6669719B2/ja active Active
- 2015-03-29 CA CA2944141A patent/CA2944141C/en active Active
- 2015-03-29 CN CN201580027762.3A patent/CN106456804B/zh active Active
- 2015-03-29 WO PCT/IL2015/000019 patent/WO2015145417A1/en active Application Filing
- 2015-08-20 US US14/830,799 patent/US9687556B2/en active Active
-
2016
- 2016-09-27 IL IL248067A patent/IL248067B/en active IP Right Grant
Patent Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1998050041A1 (en) * | 1997-05-06 | 1998-11-12 | Imarx Pharmaceutical Corp. | Novel prodrugs comprising fluorinated amphiphiles |
US6028066A (en) * | 1997-05-06 | 2000-02-22 | Imarx Pharmaceutical Corp. | Prodrugs comprising fluorinated amphiphiles |
US20060167223A1 (en) * | 2002-11-08 | 2006-07-27 | Bernard Pucci | Novel ampiphilic fluorocarbon molecular vectors for biomedical and medical use |
WO2005077968A2 (en) * | 2004-02-13 | 2005-08-25 | Innoventus Project Ab | 17-methylene-or 17 - spiro - cyclopropane 7 - substituted estra - 1, 3, 5 (10) - triene derivatives with anti - estrogenic activity |
RU2408605C2 (ru) * | 2005-02-18 | 2011-01-10 | Анджиокем Инк. | Полипептид, способный преодолевать гематоэнцефалический барьер, и его конъюгат |
US20110123457A1 (en) * | 2008-06-19 | 2011-05-26 | Yihua Yu | Conjugates of 19f mr imaging tracers and chemotherapeutic agents for drug quantification and drug dose individualization |
Non-Patent Citations (8)
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2756569C1 (ru) * | 2015-08-20 | 2021-10-01 | Апосенс Лтд. | Соединения и способы трансмембранной доставки молекул |
US11230710B2 (en) | 2017-01-09 | 2022-01-25 | Aposense Ltd | Compounds and methods for trans-membrane delivery of molecules |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
RU2016142510A3 (ru) | 2019-02-20 |
AU2015237746B2 (en) | 2020-01-30 |
WO2015145417A1 (en) | 2015-10-01 |
MX2016012716A (es) | 2017-08-16 |
EP3125946B1 (en) | 2022-12-07 |
JP6669719B2 (ja) | 2020-03-18 |
AU2015237746A1 (en) | 2016-11-03 |
CN106456804A (zh) | 2017-02-22 |
KR20160138210A (ko) | 2016-12-02 |
CN106456804B (zh) | 2020-03-17 |
US9687556B2 (en) | 2017-06-27 |
IL248067A0 (en) | 2016-11-30 |
RU2016142510A (ru) | 2018-05-03 |
JP2017509710A (ja) | 2017-04-06 |
IL248067B (en) | 2020-10-29 |
BR112016022553A2 (pt) | 2017-08-15 |
EP3125946A4 (en) | 2017-11-01 |
CA2944141A1 (en) | 2015-10-01 |
CA2944141C (en) | 2023-03-28 |
EP3125946A1 (en) | 2017-02-08 |
US20160106855A1 (en) | 2016-04-21 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2703416C2 (ru) | Соединения для транс-мембранной доставки молекул | |
CN108135924B (zh) | 用于跨膜递送分子的化合物和方法 | |
US9012225B2 (en) | Lipophilic polynucleotide conjugates | |
EP3565603B1 (en) | Compounds and methods for trans-membrane delivery of molecules | |
CN117858948A (zh) | 新的治疗剂递送部分及其用途 | |
CN111246855A (zh) | 用于分子的跨膜递送的化合物和方法 | |
US9889202B2 (en) | Compounds and methods for trans-membrane delivery of molecules | |
US20170037401A1 (en) | Compounds and methods for trans-membrane delivery of molecules | |
US11318206B2 (en) | Compounds and methods for trans-membrane delivery of molecules | |
WO2020044349A1 (en) | Compounds, cojugates and compositions for use in the methods for trans-membrane delivery of molecules | |
CN111615404A (zh) | 用于分子的跨膜递送的化合物和方法 | |
US20160120996A1 (en) | Compounds and methods for trans-membrane delivery of molecules |