RU2697499C1 - Бактерия вида Escherichia coli - продуцент L-треонина, способ микробиологического синтеза L-треонина с ее использованием. - Google Patents
Бактерия вида Escherichia coli - продуцент L-треонина, способ микробиологического синтеза L-треонина с ее использованием. Download PDFInfo
- Publication number
- RU2697499C1 RU2697499C1 RU2018134280A RU2018134280A RU2697499C1 RU 2697499 C1 RU2697499 C1 RU 2697499C1 RU 2018134280 A RU2018134280 A RU 2018134280A RU 2018134280 A RU2018134280 A RU 2018134280A RU 2697499 C1 RU2697499 C1 RU 2697499C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- threonine
- escherichia coli
- gene
- bacterium
- strain
- Prior art date
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
- C12P13/08—Lysine; Diaminopimelic acid; Threonine; Valine
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Группа изобретений относится к области биотехнологии. Предложена бактерия вида Escherichia coli, обладающая способностью продуцировать L-треонин, отличающаяся тем, что в ней инактивирован ген yifK. Предложен способ микробиологического синтеза L-треонина с использованием указанной бактерии. Предложен штамм Escherichia coli ВКПМ В-13240 - продуцент треонина. Группа изобретений позволяет расширить арсенал бактерий вида Escherichia coli, способных к продукции L-треонина, и арсенал способов микробиологического синтеза L-треонина, а также позволяет увеличить продукцию L-треонина в указанном модифицированном микроорганизме по сравнению с контрольным родительским микроорганизмом. 3 н.п. ф-лы, 1 ил., 1 табл., 3 пр.
Description
Настоящее изобретение относится к микробиологической промышленности, в частности, к микробиологическому синтезу L-треонина с использованием бактерии вида Escherichia coli.
Традиционно L-аминокислоты в промышленном масштабе могут быть получены методом ферментации с использованием штаммов микроорганизмов, выделенных из природных источников, или их мутантов, специально модифицированных для того, чтобы увеличить продукцию L-аминокислот.
Описано множество методов увеличения продукции L-аминокислот, например, путем трансформации микроорганизма рекомбинантной ДНК (US 4278765). Указанные методы основаны на повышении активности ферментов, вовлеченных в биосинтез аминокислот и/или уменьшении чувствительности целевого фермента к обратному ингибированию продуцируемой L-аминокислотой (WO 9516042, US 5661012, US 6040160).
Известны различные штаммы, использующиеся для производства L-треонина методом ферментации. Это штаммы с увеличенными активностями ферментов, вовлеченных в биосинтез L-треонина (US 5175107; US 5661012; US 5705371; US 5939307; ЕР 219027), штаммы, устойчивые к некоторым химических реагентам, таким как L-треонин и его аналоги (WO 0114525, ЕР 301572, US 5376538), штаммы с инактивированными ферментами системы деградации треонина (US 5939307 и US 6297031), штаммы, в которых устранена чувствительность целевого фермента к ингибированию продуцируемой аминокислотой или ее побочными продуктами по типу обратной связи (US 5175107 и US 5661012).
Известен штамм-продуцент L-треонина Е. coli ВКПМ В-3996 (US 5175107 и US 5705371), полученный путем введения в штамм Е. coli ВКПМ В-7 следующих мутаций и плазмиды:
- мутантный ген thrA (мутация thrA442) кодирует белок аспартокиназа-гомосериндегидрогеназу I, который устойчив к ингибированию треонином по типу обратной связи;
- мутантный ген ilvA (мутация ilvA442) кодирует белок треониндеаминазу, обладающую пониженной активностью, которая выражается в пониженном уровне биосинтеза изолейцина и в фенотипе с недостатком по изолейцину типа "leaky". В бактерии с мутацией ilvA442 транскрипция оперона thrABC не репрессируется изолейцином, что дает положительный эффект на продукцию треонина;
- инактивация гена tdh приводит к предотвращению деградации треонина, в указанный штамм была введена генетическая детерминанта ассимиляции сахарозы (гены scrKYABR);
- увеличение экспрессии генов, контролирующих биосинтез треонина, достигнута путем введения в штамм плазмиды pVIC40, содержащей мутантный треониновый оперон thrA442BC.
Штамм Е. coli ВКПМ В-3996 в ходе ферментации продуцирует 85 г/л L-треонина.
При конструирования продуцентов важным является также поиск новых генов-мишеней, модификация которых приводит к увеличению продукции L-треонина.
Технической задачей, на решение которой направлено настоящее изобретение является расширение арсенала бактерий вида Escherichia coli, способных к продукции L-треонина, а также расширение арсенала способов микробиологического синтеза L-треонина.
Поставленная задача решена тем, что получена бактерии принадлежащая к к виду Escherichia coli, обладающая способностью продуцировать треонин, у которой инактивирован ген yifK.
Термин "ген yifK инактивирован" означает, что целевой ген модифицирован таким образом, что такой модифицированный ген кодирует мутантный белок со сниженной активностью, или что такой модифицированный ген кодирует полностью неактивный белок. Также возможно, что естественная экспрессия модифицированного участка ДНК невозможна из-за делеции целевого гена или его части, сдвига рамки считывания данного гена или введения missense/nonsense мутации или модификации прилегающей к гену областей, которые включают последовательности, контролирующие экспрессию гена, такие как промотор(ы), энхансер(ы), аттенуатор(ы), сайт(ы) связывания рибосомы, и т.д.
Инактивацию указанного гена осуществляют любым возможным методом, например, такими как мутагенез с использованием УФ излучения или обработка нитрозогуанидином (N-метил-N-нитро-N'-нитрозогуанидин), сайт-направленный мутагенез, инактивации гена с помощью гомологичной рекомбинации, или/и инсерционно-делеционного мутагенеза (Yu, D. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2000, 97:12: 5978-83); (Datsenko K.A. and Wanner B.L., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2000, 97:12: 6640-45), также называемого "Red-зависимая интеграция".
Для получения плазмидной ДНК, разрезания и лигирования ДНК, трансформации, выбора олигонуклеотидов в качестве праймеров и т.д. используют обычные методы, хорошо известные специалисту в данной области (например, Sambrook, J., Fritsch, E.F., and Maniatis, Т., "Molecular Cloning A Laboratory Manual, Second Edition", Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989)).
Поставленная задача решена также тем, что предложен способ микробиологического синтеза L-треонина, включающий в себя культивирование бактерии вида Escherichia coli в питательной среде, отличающийся тем, что в качестве бактерии обладающей способностью продуцировать треонин, используют бактерию вида Escherichia coli, в которой инактивирован ген yifK.
Культивирование осуществляют в любой подходящей среде предпочтительно в аэробных условиях, таких как перемешивание культуральной жидкости на качалке, взбалтывание с аэрацией, при температуре в пределах от 20 до 40°С, предпочтительно в пределах от 30 до 38°С. рН среды поддерживают в пределах от 5 до 9, предпочтительно от 6.5 до 7.2. рН среды регулируют аммиаком, карбонатом кальция, различными кислотами, основаниями или буферными растворами. Выращивание осуществляют в течение 1-5 дней.
Изобретение проиллюстрировано следующими фигурами графического изображения: Фиг. 1. Схема плазмиды pMW-attL-SacB-Cm-attR
Пример 1. Конструирование штамма с инактивированным геном yifK.
Инактивацию гена осуществляют в штамме ВКПМ В-13207, который получен на основе дикого штамма Escherichia coli K-12 MG1655 (АТСС 47076) в результате проведения нескольких раундов мутагеза различными мутирующими агентами с целью отбора мутантов наиболее устойчивых к L-треонину, и последующего введения направленных генетических модификаций: замена промотора генов треонинового оперона, введение десенсибилизирующей мутации в ген thrA, оверэспрессия rhtA, инактивация гена sstT, инактивация гена рохВ, кодирующего пируватоксидазу,.
Инактивацию гена yifK осуществляют путем замены его ORF (номер последовательности по базе данных GenBank NC_000913.3: 3980887..3982272), последовательностью, несущей селективный маркер устойчивости к хлорамфениколу, методом ПЦР с использованием следующих олигонуклеотидов:
YifK-SC-up 5'-
TAACGATAACCGGTAACACCGGAAAGCATGCAAACACAACACG
AGGATTTCAGGGTTTTCCCAGTCACGA
YifK-SC-down 5'-
CCCTTTTTAAATAAATTGCGCGTTTGGTTACGGTTTGTGCGTTTT
GCTGCATGTTGTGTGGAATTGTGAGC
Олигонуклеотиды подбирают таким образом, чтобы после удаления маркера оставить делецию in-frame, и таким образом не изменить уровень экспрессии нижележащих генов. В качестве матрицы для синтеза используют плазмиду pMW-attL-SacB-Cm-attR (RU 2546237). На фиг. 1 представлена схема указанной плазмиды. В своем составе эта плазмида несет следующие генетические элементы: ген cat, обуславливающий устойчивость клеток к хлорамфениколу для прямого отбора трансформантов; ген sac В, кодирующий фермент левансахаразу и используемый в качестве маркера для контрселекции; последовательности фага λ attL и attR - сайты узнавания системы рекомбинации Int/Xis; repA - репликон; ген bla, кодирующий бета-лактамазу, обуславливающий устойчивость к ампициллину. Амплификацию фрагмента проводят с использованием полимеразы Pfu (Thermo Fisher Scientific) для того, чтобы избежать ошибок в последовательности. Используют следующий температурный профиль для ПЦР: денатурация при 94°С в течение 4 мин; 25 циклов: 20 сек при 94°С, 20 сек при 55°С, 6 мин при 72°С; и заключительная полимеризация: 5 мин при 72°С. ПЦР продукт размером размером 3949 п. о. очищают методом экстракции из агарозного геля и далее используют для трансформации штамма ВКПМ В-13207, который предварительно трансформируют плазмидой pKD46, которая необходима для интеграции продукта ПЦР в хромосому штамма. Плазмида pKD46 (Datsenko, K.А. and Wanner, B.L., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2000, 97:12:6640-45) содержит фрагмент ДНК фага λ (инвентарный номер последовательности J02459 в базе данных GenBank) длиной 2,154 нуклеотида (31088-33241), а также содержит гены Red гомологичной системы рекомбинации (β,γ, ехо гены) под контролем промотора ParaB; индуцируемого арабинозой.
Электрокомпетентные клетки получают следующим образом: ночную культуру штамма Е. coli ВКПМ В-13207 выращивают при 30°С в жидкой среде LB (мас. %: триптон - 1, NaCl - 1, дрожжевой экстракт - 0,5, вода - остальное, рН 7,0) с добавкой ампициллина (125 мг/л), разводят в 100 раз при помощи 5 мл среды SOB (мас. %: триптон 2, дрожжевой экстракт - 0,5, MgCl2 - 0,0956, MgSO4⋅7H2O - 0,252, NaCl - 0,0058, KCl - 0,0185, вода остальное) с добавлением ампициллина (100 мг/л) и L-арабинозы (1 мМ). Полученную культуру растят с перемешиванием при 30°С до достижения оптической плотности ОП660нм 0,6 ед., после чего делают клетки электрокомпетентными путем концентрации в 100 раз и трехкратного отмывания ледяной деионизированной Н2О. Электропорацию проводят с использованием 40 мкл клеток и 1 мкг продукта ПЦР. После электропорации клетки инкубируют с 1 мл среды SOC (мас. %: триптон 2, дрожжевой экстракт - 0,5, глюкоза - 0,36, MgCl2 - 0,0956, MgSO4⋅7H2O - 0,252, NaCl - 0,0058, KCl - 0,0185, вода остальное) при 37°С в течение 2,5 часов, после чего высевают на чашки с L-агаром (мас. %: агар-агар - 2, триптон - 1, NaCl - 1, дрожжевой экстракт - 0,5, вода -остальное, рН 7,0) с добавлением хлорамфеникола (10 мг/л).
Отбор трансформантов, несущих делецию в гене yifK, проводят на чашках с L-агаром с добавлением хлорамфениола. Отобранные клоны далее проверяют методом ПЦР на наличие инсерции в локусе yifK. Для амплификации фрагмента используют полимеразу Taq (Thermo Fisher Scientific) и следующие олигонуклеотиды:
yifK-out-F 5'-ACTGCCGTCTGGTACATCC
yifK-out-R 5'-ATTGTCACAACTTCTAATAATGG
Для проведения ПЦР используют следующий температурный профиль: денатурация при 94°С в течение 4 мин; 25 циклов: 20 сек при 94°С, 20 сек при 55°С, 2 мин 30 сек при 72°С; и заключительная полимеризация: 5 мин при 72°С.
Наличие продукта размером 4572 п. о. интерпретируют как интеграцию кассеты в целевой локус. Для удаления вспомогательной плазмиды pKD46, проводят 2 пассажа на L-агаре с хлорамфениколом (10 мг/л) при 42°С и полученные колонии проверяют на чувствительность к ампициллину.
По результатам проверки было отобрано 6 клонов, несущих делецию в гене yifK.
Пример 2. Отбор наиболее продуктивного клона.
Для проверки влияния делеции гена yifK на продукцию L-треонина проводят пробирочную ферментацию шести отобранных клонов, в качестве контрольного штамма используют родительский штамм ВКПМ В-13207.
Штаммы выращивают на чашках с L-агаром в течение 24 часов при 37°С. Для приготовления инокулята используют посевную среду следующего состава (мас. %)
Дрожжевой экстракт | 3,5 |
Глюкоза | 0,25 |
NaCl | 0,25 |
KH2PO4 | 0,25 |
Вода | остальное |
В пробирки объемом 50 мл с рабочим объемом 5 мл посевной среды вносят биомассу клеток до стартового значения оптической плотности равной ОП660нм 0,1 ед. Пробирки инкубируют на роторной качалке в течение 5 часов при 37°С и скорости перемешивания 220 об/мин. Для основного процесса ферментации используют среду следующего состава (мас. %):
Глюкоза | 4,0 |
(NH4)2SO4 | 3,0 |
Кукурузный экстракт | 1,0 |
KH2PO4 | 0,25 |
MgSO4-7H2O | 0,2 |
Лимонная кислота | 0,0192 |
FeSO4⋅7H2O | 0,003 |
MnSO4⋅H2O | 0,0021 |
СаСО3 | 2,0 |
Вода | остальное |
Растворы глюкозы, сульфата марганца и сульфата магния стерилизуют отдельно автоклавированием при 121°С в течение 40 мин. Навески СаСО3 по 40 мг стерилизуют в стеклянных пробирках автоклавированием при 121°С в течение 20 мин. рН доводят до значения 7,0. Раствор сульфата железа стерилизуют фильтрованием через мембрану диаметром пор 22 мкм.
Полученный инокулят вносят в пробирки объемом 50 мл с рабочим объемом 2 мл ферментационной среды и до оптической плотности ОП660 нм 0,1 ед. Клетки культивируют в течение 24 часов при 37°С на роторной качалке - 220 об/мин.
После выращивания количество накопленного в среде L-треонина определяют с методом ВЭЖХ - (Waters 2695, Alliance). Результаты ферментации шести клонов приведены в табл. 1.
Как видно из табл. 1, клон 5, содержащий делецию гена yifK, накапливает большее количество L-треонина по сравнению с контрольным штаммом ВКПМ В-13207. Отобранный клон 5 был депонирован во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов и ему присвоен регистрационный номер ВКПМ В-13240
Штамм Escherichia coli ВКПМ В-13240 характеризуется следующими признаками:
Культурально-морфологические признаки. Грамм-отрицательная бактерия. Суточная культура в жидкой LB представлена слабо подвижными клетками округлой формы 1 мкм в диаметре. При культивировании на L-агаре в течение 18-24 часов при 37°С образуюет круглые, беловатый, полупрозрачные на свет колонии колонии 1-2 мм, поверхность колонии гладкая, края ровные или слегка волнистые, центр колоний приподнят, структура однородная, консистенция пастообразная, легко эмульгируется. При культивировании агаризованной среде Эндо (мас. %: пептон - 1, лактоза - 1, Na2SO3 - 0,33, K2HPO4 - 0,25, фуксин основной - 0,03, агар-агар - 2%, вода - остальное) при 37°С образуются колонии, круглой формы с ровным четко очерченным краем малиново-красного цвета с металлическим блеском. Диаметр колоний 0,5-1,5 мм.
Физиолого-биохимические признаки. Факультативный анаэроб. Сахара не сбраживает. Ассимилирует: D-глюкозу, L-арабинозу, D-маннитол, D-ксилозу, в меньшей мере: D-галактозу, D-лактозу. Отсутствует способность к гидролизу крахмала. Отстутствует потребность в факторах роста. Штамм устойчив к хлорамфениколу. Заявляемый штамм продуцирует треонин. Оптимальное значение рН для роста 7,2-7,4. Не растет при температурах свыше 45°С. Оптимальная температура роста 37°С. Штамм не патогенен.
Пример 3. Оценка продуктивности штамма Е. coli ВКПМ В-13240 в ферментере.
Культуру клеток штамма ВКПМ В-13240 выращивают на чашках с L-агаром в течение 24 часов при 37°С. Для приготовления инокулята используют посевную среду, описанную в Примере 2. В качалочные колбы объемом 750 мл с рабочим объемом 15 мл посевной среды вносят суспензию клеток до получения оптической плотности ОП660нм 0,1 ед. Колбы инкубируют на качалке при 220 об/мин и при температуре 37°С до достижения ОП660нм 5-6 ед.
Для выращивания посевного материала в 3,0-л ферментере КФ-103 (ООО-фирма «Проинтех») готовят посевную среду следующего состава (мас. %):
Глюкоза | 6,0 |
Кукурузный экстракт | 1,2 |
KH2PO4 | 0,125 |
(NH4)2SO4 | 0,1 |
MgSO4⋅7 H2O | 0,1 |
Пеногаситель Бреокс | 0,05 |
Лимонная кислота | 0,014 |
FeSO4⋅7H2O | 0,003 |
MnSO4⋅H2O | 0,0021 |
Вода | остальное |
Среду переносят в ферментер и стерилизуют автоклавированием в течение 40 минут при 121°С. Раствор глюкозы с концентрацией 77% (мас.) стерилизуют автоклавированием отдельно в течение 30 минут при 121°С. После стерилизации раствор глюкозы вносят в ферментер, используя инокулятницу.
В ферментер засевают инокулят, выращеный в колбах, до старового значения оптической плотности ОП660 0,003 ед. Культивирование проводят в ферментере с рабочим объемом 1 л при 39°С, при перемешивании 700 об/мин, при аэрации - 1,0 л/мин, при рН=6,9 с титрованием 25% (об.) водным аммиаком. Культивирование проводят до достижения оптической плотности значения ОП660нм 12 ед.
Для проведения основного процесса биосинтеза L-треонина в ферментере используют среду следующего состава (мас. %):
Глюкоза | 1,5 |
Кукурузный экстракт | 1,0 |
KH2PO4 | 0,25 |
MgSO4⋅7 H2O | 0,15 |
FeS04⋅7 H2O | 0,103 |
(NH4)2SO4 | 0,05 |
Пеногаситель Бреокс | 0,05 |
MnSO4⋅H2O | 0,0021 |
Вода | остальное |
Среду переносят в ферментер и стерилизуют автоклавированием в течение 40 минут при 121°С. Раствор глюкозы с концентрацией 51,1% (мас.), стерилизуют автоклавированием отдельно в течение 30 минут при 121°С. После стерилизации раствор глюкозы вносят в ферментер, используя инокулятницу.
Культивирование проводят в 3,0-л ферментерах с начальным рабочим объемом 1 л при 33°С; при начальном перемешивании 500 об/мин; при аэрации - 1,0 л/мин; при рН=6.9 с титрованием 25% (об.) водным аммиаком. Значение pO2 поддерживают на уровне 20,0% с использованием каскадной регулировки скорости вращения мешалки до 1200 об/мин (максимально возможная скорость).
В ферментер вносят культуру, выращенную в посевном ферментере, до стартового значения ОП660нм 2 ед. Культивирование продолжают в течение 36 часов. По окончании процесса количество накопленного в среде L-треонина определяют с методом ВЭЖХ.
По результатам культивирования штамма ВКПМ В-13240 по окончании ферментации концентрация L-треонина в культуральной жидкости составила 98,9 г/л.
Claims (3)
1. Бактерия вида Escherichia coli, обладающая способностью продуцировать L-треонин, отличающаяся тем, что в ней инактивирован ген yifK.
2. Способ микробиологического синтеза L-треонина, включающий в себя выращивание бактерии вида Escherichia coli в подходящей питательной среде, отличающийся тем, что в качестве бактерии используют бактерию по п. 1.
3. Штамм Escherichia coli ВКПМ В-13240 - продуцент треонина.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2018134280A RU2697499C1 (ru) | 2018-09-28 | 2018-09-28 | Бактерия вида Escherichia coli - продуцент L-треонина, способ микробиологического синтеза L-треонина с ее использованием. |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2018134280A RU2697499C1 (ru) | 2018-09-28 | 2018-09-28 | Бактерия вида Escherichia coli - продуцент L-треонина, способ микробиологического синтеза L-треонина с ее использованием. |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2697499C1 true RU2697499C1 (ru) | 2019-08-14 |
Family
ID=67640326
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2018134280A RU2697499C1 (ru) | 2018-09-28 | 2018-09-28 | Бактерия вида Escherichia coli - продуцент L-треонина, способ микробиологического синтеза L-треонина с ее использованием. |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2697499C1 (ru) |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2731282C1 (ru) * | 2019-11-22 | 2020-09-01 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов Национального исследовательского центра "Курчатовский институт" (НИЦ "Курчатовский институт" - ГосНИИгенетика) | Штамм Escherichia coli с инактивированным геном ttdT - продуцент L-треонина |
RU2758269C1 (ru) * | 2020-10-05 | 2021-10-27 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов Национального исследовательского центра "Курчатовский институт" (НИЦ "Курчатовский институт" - ГосНИИгенетика) | Штамм Escherichia coli с инактивированным геном lysP - продуцент L-треонина |
RU2787585C1 (ru) * | 2022-10-18 | 2023-01-11 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный исследовательский центр "Курчатовский институт" | Штамм Escherichia coli с инактивированным геном yhjE - продуцент L-треонина |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5175107A (en) * | 1988-10-25 | 1992-12-29 | Ajinomoto Co., Inc. | Bacterial strain of escherichia coli bkiim b-3996 as the producer of l-threonine |
RU2392322C2 (ru) * | 2007-08-14 | 2010-06-20 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-ТРЕОНИНА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ, ПРИНАДЛЕЖАЩЕЙ К РОДУ Escherichia, В КОТОРОЙ ИНАКТИВИРОВАН ГЕН yahN |
RU2515095C1 (ru) * | 2012-11-19 | 2014-05-10 | Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" (ФГУП "ГосНИИгенетика") | Бактерия рода escherichia - продуцент l-треонина и способ микробиологического синтеза l-треонина с ее использованием |
RU2546237C1 (ru) * | 2013-11-07 | 2015-04-10 | Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроогранизмов" (ФГУП "ГосНИИгенетика") | Рекомбинантный штамм escherichia coli-продуцент l-треонина |
-
2018
- 2018-09-28 RU RU2018134280A patent/RU2697499C1/ru active
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5175107A (en) * | 1988-10-25 | 1992-12-29 | Ajinomoto Co., Inc. | Bacterial strain of escherichia coli bkiim b-3996 as the producer of l-threonine |
RU2392322C2 (ru) * | 2007-08-14 | 2010-06-20 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-ТРЕОНИНА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ, ПРИНАДЛЕЖАЩЕЙ К РОДУ Escherichia, В КОТОРОЙ ИНАКТИВИРОВАН ГЕН yahN |
RU2515095C1 (ru) * | 2012-11-19 | 2014-05-10 | Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" (ФГУП "ГосНИИгенетика") | Бактерия рода escherichia - продуцент l-треонина и способ микробиологического синтеза l-треонина с ее использованием |
RU2546237C1 (ru) * | 2013-11-07 | 2015-04-10 | Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроогранизмов" (ФГУП "ГосНИИгенетика") | Рекомбинантный штамм escherichia coli-продуцент l-треонина |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2731282C1 (ru) * | 2019-11-22 | 2020-09-01 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов Национального исследовательского центра "Курчатовский институт" (НИЦ "Курчатовский институт" - ГосНИИгенетика) | Штамм Escherichia coli с инактивированным геном ttdT - продуцент L-треонина |
RU2758269C1 (ru) * | 2020-10-05 | 2021-10-27 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов Национального исследовательского центра "Курчатовский институт" (НИЦ "Курчатовский институт" - ГосНИИгенетика) | Штамм Escherichia coli с инактивированным геном lysP - продуцент L-треонина |
RU2787585C1 (ru) * | 2022-10-18 | 2023-01-11 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный исследовательский центр "Курчатовский институт" | Штамм Escherichia coli с инактивированным геном yhjE - продуцент L-треонина |
RU2817252C1 (ru) * | 2023-09-20 | 2024-04-12 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный исследовательский центр "Курчатовский институт" | Штамм Escherichia coli - продуцент L-треонина |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2144564C1 (ru) | ФРАГМЕНТ ДНК rhtB, КОДИРУЮЩИЙ СИНТЕЗ БЕЛКА RhtB, ПРИДАЮЩЕГО УСТОЙЧИВОСТЬ К L-ГОМОСЕРИНУ БАКТЕРИЯМ ESCHERICHIA COLI, И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТ | |
RU2148642C1 (ru) | Фрагмент днк rhtc, кодирующий синтез белка rhtc, придающего повышенную устойчивость к l-треонину бактериям escherichia coli, и способ получения l-аминокислоты | |
KR100792095B1 (ko) | L-페닐알라닌 생산능을 갖는 대장균 변이주로부터유전자조작된 l-트립토판 생산능을 갖는 재조합 대장균균주 및 이를 이용한 트립토판 제조방법 | |
AU712821B2 (en) | Production of tryptophan by the bacterium Escherichia coli | |
US6297031B1 (en) | Escherichia coli strain and method for producing L-threonine | |
RU2418069C2 (ru) | Способ конструирования рекомбинантных бактерий, принадлежащих к роду pantoea, и способ продукции l-аминокислот с использованием бактерий, принадлежащих к роду pantoea | |
FI92717B (fi) | Bakteerikanta Escherichia coli VKPM (BK M) B-3996 L-treoniinin tuottajana | |
US6132999A (en) | L-threonine-producing microbacteria and a method for the production of L-threonine | |
CN100582220C (zh) | 含有与色氨酸的生物合成有关的突变基因的大肠杆菌突变体和用所述突变体生产色氨酸的方法 | |
US20090093030A1 (en) | fadR KNOCK-OUT MICROORGANISM AND METHODS FOR PRODUCING L-THREONINE | |
CN1351660A (zh) | 微生物的定向进化 | |
RU2697499C1 (ru) | Бактерия вида Escherichia coli - продуцент L-треонина, способ микробиологического синтеза L-треонина с ее использованием. | |
KR20050079344A (ko) | galR 유전자가 불활성화된 L-쓰레오닌 생성 미생물,그를 제조하는 방법 및 상기 미생물을 이용한L-쓰레오닌의 제조방법 | |
CN109666617A (zh) | 一种l-高丝氨酸的生产菌株及其构建方法和应用 | |
RU2728251C1 (ru) | Штамм Escherichia coli с инактивированным геном ychE - продуцент L-треонина | |
RU2546239C1 (ru) | РЕКОМБИНАНТНЫЙ ШТАММ Escherichia coli, ОБЛАДАЮЩИЙ КОНСТИТУТИВНОЙ АСПАРТАЗНОЙ АКТИВНОСТЬЮ И СПОСОБ СИНТЕЗА L-АСПАРАГИНОВОЙ КИСЛОТЫ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ЭТОГО ШТАММА В КАЧЕСТВЕ БИОКАТАЛИЗАТОРА | |
RU2787585C1 (ru) | Штамм Escherichia coli с инактивированным геном yhjE - продуцент L-треонина | |
RU2787583C1 (ru) | Штамм Escherichia coli с инактивированным геном yqeG - продуцент L-треонина | |
RU2774071C1 (ru) | Штамм Escherichia coli с инактивированным геном sdaC - продуцент L-треонина | |
RU2731282C1 (ru) | Штамм Escherichia coli с инактивированным геном ttdT - продуцент L-треонина | |
RU2775206C1 (ru) | Штамм Escherichia coli с инактивированным геном yjeM - продуцент L-треонина | |
RU2748676C1 (ru) | Штамм Escherichia coli с инактивированным геном ydgI - продуцент L-треонина | |
RU2758269C1 (ru) | Штамм Escherichia coli с инактивированным геном lysP - продуцент L-треонина | |
RU2697219C1 (ru) | Рекомбинантный штамм бактерии Escherichia coli - продуцент L-треонина | |
CN1293184C (zh) | 生产l-亮氨酸的方法 |