RU2731282C1 - Штамм Escherichia coli с инактивированным геном ttdT - продуцент L-треонина - Google Patents

Штамм Escherichia coli с инактивированным геном ttdT - продуцент L-треонина Download PDF

Info

Publication number
RU2731282C1
RU2731282C1 RU2019137672A RU2019137672A RU2731282C1 RU 2731282 C1 RU2731282 C1 RU 2731282C1 RU 2019137672 A RU2019137672 A RU 2019137672A RU 2019137672 A RU2019137672 A RU 2019137672A RU 2731282 C1 RU2731282 C1 RU 2731282C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
gene
threonine
ttdt
strain
escherichia coli
Prior art date
Application number
RU2019137672A
Other languages
English (en)
Inventor
Татьяна Владимировна Выборная
Дмитрий Михайлович Бубнов
Андрей Александрович Хозов
Тигран Владимирович Юзбашев
Александр Сергеевич Федоров
Светлана Сергеевна Мокрова
Максим Дмитриевич Кудима
Сергей Павлович Синеокий
Original Assignee
Федеральное государственное бюджетное учреждение "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов Национального исследовательского центра "Курчатовский институт" (НИЦ "Курчатовский институт" - ГосНИИгенетика)
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Федеральное государственное бюджетное учреждение "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов Национального исследовательского центра "Курчатовский институт" (НИЦ "Курчатовский институт" - ГосНИИгенетика) filed Critical Федеральное государственное бюджетное учреждение "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов Национального исследовательского центра "Курчатовский институт" (НИЦ "Курчатовский институт" - ГосНИИгенетика)
Priority to RU2019137672A priority Critical patent/RU2731282C1/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2731282C1 publication Critical patent/RU2731282C1/ru

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/70—Vectors or expression systems specially adapted for E. coli
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
    • C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
    • C12P13/08—Lysine; Diaminopimelic acid; Threonine; Valine

Landscapes

  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)

Abstract

Изобретение относится к микробиологической промышленности. Предложен штамм Escherichia coli с инактивированным геном ttdT, продуцирующий L-треонин. Штамм депонирован в ВКПМ под регистрационным номером ВКПМ В-13514. Указанный штамм способен синтезировать 16,8 г/л L-треонина при культивировании в пробирке. Изобретение позволяет расширить арсенал штаммов Escherichia coli, продуцирующих L-треонин. 1 табл., 2 пр., 1 ил.

Description

Настоящее изобретение относится к микробиологической промышленности, в частности к микробиологическому синтезу L-треонина с использованием бактерии вида Escherichia coli.
Традиционно L-аминокислоты в промышленном масштабе могут быть получены методом ферментации с использованием штаммов микроорганизмов, выделенных из природных источников, или их мутантов, специально модифицированных для того, чтобы увеличить продукцию L-аминокислот.
Описано множество методов увеличения продукции L-аминокислот, например, путем трансформации микроорганизма рекомбинантной ДНК (US 4278765). Указанные методы основаны на повышении активности ферментов, вовлеченных в биосинтез аминокислот и/или уменьшении чувствительности целевого фермента к обратному ингибированию продуцируемой L-аминокислотой (WO 9516042, US 5661012, US 6040160).
Известны различные штаммы, использующиеся для производства L-треонина методом ферментации. Это штаммы с увеличенными активностями ферментов, вовлеченных в биосинтез L-треонина (US 5175107; US 5661012; US 5705371; US 5939307; ЕР 219027), штаммы, устойчивые к некоторым химических реагентам, таким как L-треонин и его аналоги (WO 0114525, ЕР 301572, US 5376538), штаммы с инактивированными ферментами системы деградации треонина (US 5939307 и US 6297031), штаммы, в которых устранена чувствительность целевого фермента к ингибированию продуцируемой аминокислотой или ее побочными продуктами по типу обратной связи (US 5175107 и US 5661012).
Известен штамм-продуцент L-треонина Е. coli ВКПМ В-3996 (SU 1694643, US 5175107 и US 5705371), полученный путем введения в штамм Е. coli ВКПМ В-7 следующих мутаций и плазмиды:
- мутантный ген thrA (мутация thrA442) кодирует белок аспартокиназа-гомосериндегидрогеназу I, который устойчив к ингибированию треонином по типу обратной связи;
- мутантный ген ilvA (мутация ilvA442) кодирует белок треониндеаминазу, обладающую пониженной активностью, которая выражается в пониженном уровне биосинтеза изолейцина и в фенотипе с недостатком по изолейцину типа "leaky". В бактерии с мутацией ilvA442 транскрипция оперона thrABC не репрессируется изолейцином, что дает положительный эффект на продукцию L-треонина;
- инактивация гена tdh приводит к предотвращению деградации L-треонина, в указанный штамм была введена генетическая детерминанта ассимиляции сахарозы (гены scrKYABR);
- увеличение экспрессии генов, контролирующих биосинтез L-треонина, достигнуто путем введения в штамм плазмиды pVIC40, содержащей мутантный треониновый оперон thrA442BC.
Штамм Е. coli ВКПМ В-3996 в ходе ферментации пробирках продуцирует 13 г/л L-треонина (RU 2182173), при культивировании в ферментере - 85 г/л L-треонина (US 5175107).
При конструирования продуцентов важным является также поиск новых генов-мишеней, модификация которых приводит к увеличению продукции L-треонина.
Технической задачей, на решение которой направлено настоящее изобретение является расширение арсенала штаммов Escherichia coli, способных к продукции L-треонина.
Поставленная задача решена тем, что получен штамм бактерии Escherichia coli ВКПМ В-13514 с инактивированным геном ttdT, обладающий способностью продуцировать L-треонин.
Термин "ген ttdT инактивирован" означает, что целевой ген модифицирован таким образом, что такой модифицированный ген кодирует мутантный белок со сниженной активностью, или полностью неактивный белок. Также возможно, что естественная экспрессия модифицированного участка ДНК невозможна из-за делеции целевого гена или его части, сдвига рамки считывания данного гена или введения missense/nonsense мутации или модификации прилегающей к гену областей, которые включают последовательности, контролирующие экспрессию гена, такие как промотор(ы), энхансер(ы), аттенуатор(ы), сайт(ы) связывания рибосомы, и т.д.
Инактивация гена может быть осуществлена любым возможным методом, например, такими как мутагенез с использованием УФ излучения или обработка нитрозогуанидином (N-метил-N'-нитро-N-нитрозогуанидин), сайт-направленный мутагенез, инактивации гена с помощью гомологичной рекомбинации, или/и инсерционно-делеционного мутагенеза (Yu, D. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2000, 97:12: 5978-83); (Datsenko K.A. and Wanner B.L., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2000, 97:12: 6640-45), также называемого "Red-зависимая интеграция".
В данной работе инактивацию гена ttdT проводят путем замены открытой рамки считывания гена на селективный маркер aadA, ген устойчивости к спекциномицину. Полученный таким образом штамм не способен синтезировать белок TtdT, кодируемый геном ttdT.
Изобретение проиллюстрировано следующими фигурами графического изображения:
Фиг. 1. Схема плазмиды pISA.
Пример 1. Конструирование штамма с инактивированным геном ttdT
Инактивацию гена осуществляют в штамме ВКПМ В-13207, который получен на основе дикого штамма Escherichia coli K-12 MG1655 (АТСС 47076) в результате проведения нескольких раундов мутагеза различными мутирующими агентами с целью отбора мутантов наиболее устойчивых к L-треонину, и последующего введения направленных генетических модификаций: замена промотора генов треонинового оперона, введение десенсибилизирующей мутации в ген thrA, оверэспрессия rhtA, инактивация гена sstT, инактивация гена рохВ, кодирующего пируватоксидазу.
Делецию гена ttdT осуществляют путем замены его ORF (номер последовательности по базе данных GenBank NC_000913.3 U00096.3: 3208024..3209487), на селективный маркер устойчивости к спектиномицину, методом ПЦР с использованием следующих олигонуклеотидов:
Figure 00000001
В качестве матрицы для синтеза используют плазмиду pISA (Биотехнология 2019 Т. 35 №4 с. 42-54). В своем составе эта плазмида (фиг. 1) несет следующие генетические элементы: ген aadA, обуславливающий устойчивость клеток к спектиномицину для прямого отбора трансформантов; последовательности фага λ attL и attR - сайты узнавания системы рекомбинации Int/Xis; repA - репликон; ген bla, кодирующий бета-лактамазу, обуславливающий устойчивость к ампициллину.
Амплификацию фрагмента проводят с использованием полимеразы KAPA (KAPAbiosystems) для того, чтобы избежать ошибок в последовательности. Используют следующий температурный профиль для ПЦР: денатурация при 95°C в течение 3 мин; 25 циклов: 20 сек при 98°C, 20 сек при 60°C, 2 мин при 72°C; и заключительная полимеризация: 2 мин при 72°C. ПЦР продукт размером 2036 п.о. очищают методом экстракции из агарозного геля и далее используют для трансформации штамма ВКПМ В-13207, который предварительно трансформируют плазмидой pKD46, которая необходима для интеграции продукта ПЦР в хромосому штамма. Плазмида pKD46 (Datsenko, K.А. and Wanner, B.L., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2000, 97:12:6640-45) содержит фрагмент ДНК фага X (инвентарный номер последовательности J02459 в базе данных GenBank) длиной 2,154 нуклеотида (31088-33241), а также содержит гены Red гомологичной системы рекомбинации (β, γ, ехо гены) под контролем промотора ParaB; индуцируемого арабинозой.
Электрокомпетентные клетки получают следующим образом: ночную культуру штамма Е. coli ВКПМ В-13207 выращивают при 30°C в жидкой среде LB (мас. %): триптон - 1, NaCl - 1, дрожжевой экстракт - 0,5, вода - остальное, рН 7,0 с добавкой ампициллина (125 мг/л), разводят в 100 раз при помощи 5 мл среды SOB (мас. %): триптон 2, дрожжевой экстракт - 0,5, MgCl2 - 0,0956, MgSO4⋅7H2O - 0,252, NaCl - 0,0058, KCl - 0,0185, вода остальное с добавлением ампициллина (100 мг/л) и L-арабинозы (1 мМ). Полученную культуру растят с перемешиванием при 30°C до достижения оптической плотности ОП600нм 0,6 ед., после чего делают клетки электрокомпетентными путем концентрации в 100 раз и трехкратного отмывания ледяной деионизированной H2O. Электропорацию проводят с использованием 40 мкл клеток и 1 мкг продукта ПЦР. После электропорации клетки инкубируют в 1 мл среды SOC (мас. %): триптон 2, дрожжевой экстракт - 0,5, глюкоза - 0,36, MgCl2 - 0,0956, MgSO4⋅7H2O - 0,252, NaCl - 0,0058, KCl - 0,0185, вода - остальное при 37°C в течение 2,5 часов, после чего высевают на чашки со средой LA (мас. %): агар-агар - 2, триптон - 1, NaCl - 1, дрожжевой экстракт - 0,5, вода - остальное, рН 7,0 с добавлением спектиномицина (75 мкг/мл).
Отбор трансформантов, несущих делецию в гене ttdT, проводят на чашках со средой LA с добавлением спектиномицина. Наличие инсерции в локусе ttdT у отобранных клонов подтверждают методом ПЦР. Для амплификации фрагмента используют полимеразу Taq (Thermo Fisher Scientific) и следующие олигонуклеотиды:
Figure 00000002
Figure 00000003
Для проведения ПЦР используют следующий температурный профиль: денатурация при 94°C в течение 4 мин; 25 циклов: 20 сек при 94°C, 20 сек при 55°C, 1 мин 30 сек при 72°C; и заключительная полимеризация: 5 мин при 72°C.
Наличие продукта размером 2336 п.о. интерпретируют как интеграцию кассеты в целевой локус. Для удаления вспомогательной плазмиды pKD46, проводят 2 пассажа на среде LA со спектиномицином при 42°C и полученные колонии тестируют на чувствительность к ампициллину.
В результате отобрано 5 клонов, несущих делецию в гене ttdT.
Пример 2. Отбор наиболее продуктивного клона
Для проверки влияния делеции гена ttdT на продукцию L-треонина проводят пробирочную ферментацию пяти отобранных клонов, в качестве контрольного штамма используют родительский штамм ВКПМ В-13207.
Штаммы выращивают на чашках со средой LA в течение 24 часов при 37°C. Для приготовления инокулята используют посевную среду следующего состава (мас. %)
Дрожжевой экстракт 3,5
Глюкоза 0,25
NaCl 0,25
KH2PO4 0,25
Вода - остальное
В пробирки объемом 50 мл с рабочим объемом 5 мл посевной среды вносят биомассу клеток до стартового значения оптической плотности равной ОП660нм 0,1 ед. Пробирки инкубируют на роторной качалке в течение 5 часов при 37°C и скорости перемешивания 220 об/мин. Для основного процесса ферментации используют среду следующего состава (мас. %):
Глюкоза 4,0
(NH4)2SO4 3,0
Кукурузный экстракт 1,0
KH2PO4 0,25
MgSO4⋅7H2O 0,2
Лимонная кислота 0,0192
FeSO4⋅7H2O 0,003
MnSO4⋅H2O 0,0021
СаСО3 2,0
Вода - остальное
Растворы глюкозы, сульфата марганца и сульфата магния стерилизуют отдельно автоклавированием при 121°C в течение 40 мин. Навески CaCO3 по 40 мг стерилизуют в стеклянных пробирках автоклавированием при 121°C в течение 20 мин. рН доводят до значения 7,0. Раствор сульфата железа стерилизуют фильтрованием через мембрану диаметром пор 22 мкм.
Полученный инокулят вносят в пробирки объемом 50 мл с рабочим объемом 2 мл ферментационной среды до стартовой оптической плотности ОП660нм 0,1 ед. Клетки культивируют в течение 24 часов при 37°C на роторной качалке - 220 об/мин.
После выращивания количество накопленного в среде L-треонина определяют с методом ВЭЖХ (Waters 2695, Alliance). Результаты ферментации пяти клонов приведены в табл. 1.
Figure 00000004
Как видно из табл. 1, клон 2, содержащий делецию гена ttdT, накапливает большее количество L-треонина по сравнению с контрольным штаммом ВКПМ В-13207. Отобранный клон 2 депонирован в Биоресурсном центре Всероссийская Коллекция Промышленных Микроорганизмов (БРЦ ВКПМ) НИЦ «Курчатовский институт» - ГосНИИгенетика как Escherichia coli ВКПМ В-13514.
Заявляемый штамм Escherichia coli ВКПМ В-13514 характеризуется следующими признаками:
Культурально-морфологические характеристики
Грамм-отрицательная бактерия. Суточная культура в жидкой LB представлена слабо подвижными клетками округлой формы 1 мкм в диаметре. При культивировании на L-агаре в течение 18-24 часов при 37°C образует круглые, беловатый, полупрозрачные на свет колонии колонии 1-2 мм, поверхность колонии гладкая, края ровные или слегка волнистые, центр колоний приподнят, структура однородная, консистенция пастообразная, легко эмульгируется. При культивировании на агаризованной среде Эндо (мас. %: пептон - 1, лактоза - 1, Na2SO3 - 0,33, K2HPO4 - 0,25, фуксин основной - 0,03, агар-агар - 2%, вода - остальное) при 37°C образуются колонии, круглой формы с ровным четко очерченным краем малиново-красного цвета с металлическим блеском. Диаметр колоний 0,5-1,5 мм.
Физиолого-биохимические характеристики.
Факультативный анаэроб. Сахара не сбраживает. Ассимилирует: D-глюкозу, L-арабинозу, D-маннитол, D-ксилозу, в меньшей мере: D-галактозу, D-лактозу. Отсутствует способность к гидролизу крахмала. Отсутствует потребность в факторах роста. Штамм устойчив к хлорамфениколу. Оптимальное значение рН для роста 7,2-7,4. Не растет при температурах свыше 45°C. Оптимальная температура роста 37°C. Штамм не патогенен.
Таким образом, получен штамм Escherichia coli ВКПМ В-13514 с инактивированным геном ttdT, способный синтезировать до 16,8 г/л L-треонина при культивировании в пробирках.

Claims (1)

  1. Штамм Escherichia coli ВКПМ В-13514 с инактивированным геном ttdT - продуцент L-треонина.
RU2019137672A 2019-11-22 2019-11-22 Штамм Escherichia coli с инактивированным геном ttdT - продуцент L-треонина RU2731282C1 (ru)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2019137672A RU2731282C1 (ru) 2019-11-22 2019-11-22 Штамм Escherichia coli с инактивированным геном ttdT - продуцент L-треонина

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2019137672A RU2731282C1 (ru) 2019-11-22 2019-11-22 Штамм Escherichia coli с инактивированным геном ttdT - продуцент L-треонина

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2731282C1 true RU2731282C1 (ru) 2020-09-01

Family

ID=72421537

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2019137672A RU2731282C1 (ru) 2019-11-22 2019-11-22 Штамм Escherichia coli с инактивированным геном ttdT - продуцент L-треонина

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2731282C1 (ru)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2775206C1 (ru) * 2021-10-01 2022-06-28 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный исследовательский центр "Курчатовский институт" (НИЦ "Курчатовский институт") Штамм Escherichia coli с инактивированным геном yjeM - продуцент L-треонина

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2546237C1 (ru) * 2013-11-07 2015-04-10 Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроогранизмов" (ФГУП "ГосНИИгенетика") Рекомбинантный штамм escherichia coli-продуцент l-треонина
RU2697499C1 (ru) * 2018-09-28 2019-08-14 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов Национального исследовательского центра "Курчатовский институт" (НИЦ "Курчатовский институт" - ГосНИИгенетика) Бактерия вида Escherichia coli - продуцент L-треонина, способ микробиологического синтеза L-треонина с ее использованием.

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2546237C1 (ru) * 2013-11-07 2015-04-10 Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроогранизмов" (ФГУП "ГосНИИгенетика") Рекомбинантный штамм escherichia coli-продуцент l-треонина
RU2697499C1 (ru) * 2018-09-28 2019-08-14 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов Национального исследовательского центра "Курчатовский институт" (НИЦ "Курчатовский институт" - ГосНИИгенетика) Бактерия вида Escherichia coli - продуцент L-треонина, способ микробиологического синтеза L-треонина с ее использованием.

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
BUBNOV D.M. ET AL. Development of new versatile plasmid-based systems for λRed-mediated Escherichia coli genome engineering. Journal of Microbiological Methods, 151 (2018) 48-56. *
KIM O.B., UNDEN G. The L-tartrate/succinate antiporter TtdT (YgjE) of L-tartrate fermentation in Escherichia coli. J Bacteriol. 2007;189(5):1597-1603. *
ЮЗБАШЕВ Т.В. И ДР. Направленная модификация метаболизма Escherichia coli для создания штаммов — продуцентов треонина. Биотехнология, 2013, N 2, С. 8-33. *
ЮЗБАШЕВ Т.В. И ДР. Направленная модификация метаболизма Escherichia coli для создания штаммов — продуцентов треонина. Биотехнология, 2013, N 2, С. 8-33. KIM O.B., UNDEN G. The L-tartrate/succinate antiporter TtdT (YgjE) of L-tartrate fermentation in Escherichia coli. J Bacteriol. 2007;189(5):1597-1603. BUBNOV D.M. ET AL. Development of new versatile plasmid-based systems for λRed-mediated Escherichia coli genome engineering. Journal of Microbiological Methods, 151 (2018) 48-56. *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2775206C1 (ru) * 2021-10-01 2022-06-28 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный исследовательский центр "Курчатовский институт" (НИЦ "Курчатовский институт") Штамм Escherichia coli с инактивированным геном yjeM - продуцент L-треонина
RU2787583C1 (ru) * 2022-10-18 2023-01-11 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный исследовательский центр "Курчатовский институт" Штамм Escherichia coli с инактивированным геном yqeG - продуцент L-треонина

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2144564C1 (ru) ФРАГМЕНТ ДНК rhtB, КОДИРУЮЩИЙ СИНТЕЗ БЕЛКА RhtB, ПРИДАЮЩЕГО УСТОЙЧИВОСТЬ К L-ГОМОСЕРИНУ БАКТЕРИЯМ ESCHERICHIA COLI, И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТ
RU2148642C1 (ru) Фрагмент днк rhtc, кодирующий синтез белка rhtc, придающего повышенную устойчивость к l-треонину бактериям escherichia coli, и способ получения l-аминокислоты
KR100792095B1 (ko) Ｌ-페닐알라닌 생산능을 갖는 대장균 변이주로부터유전자조작된 ｌ-트립토판 생산능을 갖는 재조합 대장균균주 및 이를 이용한 트립토판 제조방법
ES2382473T3 (es) Procedimiento de producción de L-treonina usando un microorganismo que tiene el gen galR inactivado
US20090093030A1 (en) fadR KNOCK-OUT MICROORGANISM AND METHODS FOR PRODUCING L-THREONINE
CN100582220C (zh) 含有与色氨酸的生物合成有关的突变基因的大肠杆菌突变体和用所述突变体生产色氨酸的方法
CN1351660A (zh) 微生物的定向进化
KR20000029691A (ko) 에스케리챠콜리의신규균주,그제조방법및그균주를엘-트레오닌생산을위한발효공정에사용하는용도
RU2697499C1 (ru) Бактерия вида Escherichia coli - продуцент L-треонина, способ микробиологического синтеза L-треонина с ее использованием.
RU2728251C1 (ru) Штамм Escherichia coli с инактивированным геном ychE - продуцент L-треонина
RU2288265C2 (ru) Способ получения l-треонина
CN109666617A (zh) 一种l-高丝氨酸的生产菌株及其构建方法和应用
RU2731282C1 (ru) Штамм Escherichia coli с инактивированным геном ttdT - продуцент L-треонина
RU2774071C1 (ru) Штамм Escherichia coli с инактивированным геном sdaC - продуцент L-треонина
RU2775206C1 (ru) Штамм Escherichia coli с инактивированным геном yjeM - продуцент L-треонина
RU2787583C1 (ru) Штамм Escherichia coli с инактивированным геном yqeG - продуцент L-треонина
RU2748676C1 (ru) Штамм Escherichia coli с инактивированным геном ydgI - продуцент L-треонина
RU2787585C1 (ru) Штамм Escherichia coli с инактивированным геном yhjE - продуцент L-треонина
RU2758269C1 (ru) Штамм Escherichia coli с инактивированным геном lysP - продуцент L-треонина
CN1293184C (zh) 生产l－亮氨酸的方法
RU2728242C1 (ru) Штамм Escherichia coli - продуцент L-треонина
RU2697219C1 (ru) Рекомбинантный штамм бактерии Escherichia coli - продуцент L-треонина
US20090298138A1 (en) Microorganism producing l-threonine having an inactivated lysr gene, method for producing the same and method for producing l-threonine using the microorganism
RU2339699C2 (ru) РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДА pT7ΔpckA::loxpcat ОБЕСПЕЧИВАЮЩАЯ СИНТЕЗ L-ТРЕОНИНА В КЛЕТКАХ Escherichia coli, И РЕКОМБИНАНТНЫЙ ШТАММ Escherichia coli FTR2717 (KCCM-10475) - ПРОДУЦЕНТ L-ТРЕОНИНА
RU2817252C1 (ru) Штамм Escherichia coli - продуцент L-треонина