RU2695370C2 - Производные аматоксина - Google Patents
Производные аматоксина Download PDFInfo
- Publication number
- RU2695370C2 RU2695370C2 RU2015142093A RU2015142093A RU2695370C2 RU 2695370 C2 RU2695370 C2 RU 2695370C2 RU 2015142093 A RU2015142093 A RU 2015142093A RU 2015142093 A RU2015142093 A RU 2015142093A RU 2695370 C2 RU2695370 C2 RU 2695370C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- amatoxin
- binding fragment
- cancer
- linker
- target
- Prior art date
Links
- WVHGJJRMKGDTEC-WCIJHFMNSA-N 2-[(1R,4S,8R,10S,13S,16S,27R,34S)-34-[(2S)-butan-2-yl]-8,22-dihydroxy-13-[(2R,3S)-3-hydroxybutan-2-yl]-2,5,11,14,27,30,33,36,39-nonaoxo-27lambda4-thia-3,6,12,15,25,29,32,35,38-nonazapentacyclo[14.12.11.06,10.018,26.019,24]nonatriaconta-18(26),19(24),20,22-tetraen-4-yl]acetamide Chemical class CC[C@H](C)[C@@H]1NC(=O)CNC(=O)[C@@H]2Cc3c([nH]c4cc(O)ccc34)[S@](=O)C[C@H](NC(=O)CNC1=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N1C[C@H](O)C[C@H]1C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)[C@H](C)O)C(=O)N2 WVHGJJRMKGDTEC-WCIJHFMNSA-N 0.000 title claims abstract description 97
- 231100000729 Amatoxin Toxicity 0.000 claims abstract description 115
- 108010014709 amatoxin Proteins 0.000 claims abstract description 97
- 238000009739 binding Methods 0.000 claims abstract description 96
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims abstract description 95
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 92
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 21
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 19
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims abstract description 11
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 9
- -1 heteroalkenylene Chemical group 0.000 claims description 52
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 claims description 50
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 24
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 24
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 24
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 21
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 21
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 claims description 19
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 16
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N urea group Chemical group NC(=O)N XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 125000002947 alkylene group Chemical group 0.000 claims description 13
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims description 12
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 12
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 claims description 12
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 10
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 claims description 9
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 8
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 8
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 claims description 8
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 claims description 8
- 125000005842 heteroatom Chemical group 0.000 claims description 8
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims description 8
- 125000000732 arylene group Chemical group 0.000 claims description 7
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 7
- JOYRKODLDBILNP-UHFFFAOYSA-N Ethyl urethane Chemical compound CCOC(N)=O JOYRKODLDBILNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 101001012157 Homo sapiens Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Proteins 0.000 claims description 6
- 102100030086 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Human genes 0.000 claims description 6
- 125000004450 alkenylene group Chemical group 0.000 claims description 6
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 6
- 125000002993 cycloalkylene group Chemical group 0.000 claims description 6
- 125000005549 heteroarylene group Chemical group 0.000 claims description 6
- 125000006588 heterocycloalkylene group Chemical group 0.000 claims description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 6
- 108091008104 nucleic acid aptamers Proteins 0.000 claims description 6
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 6
- QKFJKGMPGYROCL-UHFFFAOYSA-N phenyl isothiocyanate Chemical compound S=C=NC1=CC=CC=C1 QKFJKGMPGYROCL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 150000003568 thioethers Chemical class 0.000 claims description 6
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 claims description 5
- 125000004419 alkynylene group Chemical group 0.000 claims description 5
- 150000003857 carboxamides Chemical class 0.000 claims description 5
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 5
- 230000008685 targeting Effects 0.000 claims description 5
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 claims description 5
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 claims description 4
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 claims description 4
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 claims description 4
- 239000000969 carrier Substances 0.000 claims description 4
- 208000006990 cholangiocarcinoma Diseases 0.000 claims description 4
- 125000004474 heteroalkylene group Chemical group 0.000 claims description 4
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 claims description 4
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 claims description 4
- KXMMNJQMGILZDB-UHFFFAOYSA-N 1-(2-oxopyridine-1-carbothioyl)pyridin-2-one Chemical compound O=C1C=CC=CN1C(=S)N1C(=O)C=CC=C1 KXMMNJQMGILZDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- RLAROPIDCNCRNR-UHFFFAOYSA-N Cl.Cl.[C-]#N Chemical compound Cl.Cl.[C-]#N RLAROPIDCNCRNR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 claims description 3
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 claims description 3
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 claims description 3
- DHKHKXVYLBGOIT-UHFFFAOYSA-N acetaldehyde Diethyl Acetal Natural products CCOC(C)OCC DHKHKXVYLBGOIT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims description 3
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 claims description 3
- 208000035250 cutaneous malignant susceptibility to 1 melanoma Diseases 0.000 claims description 3
- RAFNCPHFRHZCPS-UHFFFAOYSA-N di(imidazol-1-yl)methanethione Chemical compound C1=CN=CN1C(=S)N1C=CN=C1 RAFNCPHFRHZCPS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 claims description 3
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 150000002576 ketones Chemical class 0.000 claims description 3
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 claims description 3
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 claims description 3
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 229940117953 phenylisothiocyanate Drugs 0.000 claims description 3
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 claims description 3
- ZWZVWGITAAIFPS-UHFFFAOYSA-N thiophosgene Chemical compound ClC(Cl)=S ZWZVWGITAAIFPS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 claims description 2
- 150000004657 carbamic acid derivatives Chemical group 0.000 claims description 2
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 claims description 2
- 230000000269 nucleophilic effect Effects 0.000 claims description 2
- 150000003141 primary amines Chemical class 0.000 claims description 2
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 claims 1
- 125000002485 formyl group Chemical class [H]C(*)=O 0.000 claims 1
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 14
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 12
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 abstract description 9
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 45
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 40
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 33
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 30
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 25
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 22
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 21
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 20
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 20
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 20
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 19
- 229960000575 trastuzumab Drugs 0.000 description 18
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 17
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 16
- BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N Methyl tert-butyl ether Chemical compound COC(C)(C)C BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 10
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 10
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 101800002638 Alpha-amanitin Proteins 0.000 description 9
- 102000009572 RNA Polymerase II Human genes 0.000 description 9
- 108010009460 RNA Polymerase II Proteins 0.000 description 9
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- CIORWBWIBBPXCG-SXZCQOKQSA-N alpha-amanitin Chemical compound O=C1N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N2C[C@H](O)C[C@H]2C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)[C@@H](O)CO)C(=O)N[C@@H](C2)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@H]1C[S@@](=O)C1=C2C2=CC=C(O)C=C2N1 CIORWBWIBBPXCG-SXZCQOKQSA-N 0.000 description 9
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 8
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 8
- DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N Tert-Butanol Chemical compound CC(C)(C)O DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 8
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 8
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 8
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 7
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 7
- 239000004080 beta amanitin Substances 0.000 description 7
- IEQCUEXVAPAFMQ-SXZCQOKQSA-N g729ypp47l Chemical compound O=C1N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N2C[C@H](O)C[C@H]2C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)[C@@H](O)CO)C(=O)N[C@@H](C2)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@H]1C[S@@](=O)C1=C2C2=CC=C(O)C=C2N1 IEQCUEXVAPAFMQ-SXZCQOKQSA-N 0.000 description 7
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 7
- 238000002953 preparative HPLC Methods 0.000 description 7
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 7
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 7
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 7
- BOHCOUQZNDPURZ-ICNZIKDASA-N 2-[(1R,4S,8R,10S,13S,16S,27R,34S)-34-[(2S)-butan-2-yl]-13-[(2R,3R)-3,4-dihydroxybutan-2-yl]-8-hydroxy-2,5,11,14,27,30,33,36,39-nonaoxo-27lambda4-thia-3,6,12,15,25,29,32,35,38-nonazapentacyclo[14.12.11.06,10.018,26.019,24]nonatriaconta-18(26),19,21,23-tetraen-4-yl]acetamide Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H]1NC(=O)CNC(=O)[C@@H]2Cc3c([nH]c4ccccc34)[S@](=O)C[C@H](NC(=O)CNC1=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N1C[C@H](O)C[C@H]1C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)[C@@H](O)CO)C(=O)N2 BOHCOUQZNDPURZ-ICNZIKDASA-N 0.000 description 6
- 102100031940 Epithelial cell adhesion molecule Human genes 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 6
- 108010004258 amaninamide Proteins 0.000 description 6
- BOHCOUQZNDPURZ-UHFFFAOYSA-N amaninamide Natural products O=C1NC(CC(N)=O)C(=O)N2CC(O)CC2C(=O)NC(C(C)C(O)CO)C(=O)NC(C2)C(=O)NCC(=O)NC(C(C)CC)C(=O)NCC(=O)NC1CS(=O)C1=C2C2=CC=CC=C2N1 BOHCOUQZNDPURZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 6
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 6
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 5
- QQLVIKWYAVVKKF-XYDKGUIVSA-N amanullin Chemical compound O=C1N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N2C[C@H](O)C[C@H]2C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C2)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@H]1CS(=O)C1=C2C2=CC=C(O)C=C2N1 QQLVIKWYAVVKKF-XYDKGUIVSA-N 0.000 description 5
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 5
- 125000001072 heteroaryl group Chemical group 0.000 description 5
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 5
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 5
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 5
- QCZXQEYEVLCQHL-HGJJDEFOSA-N viw95i76gy Chemical compound O=C1N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N2C[C@H](O)C[C@H]2C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)[C@@H](O)CO)C(=O)N[C@@H](C2)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]1C[S@@](=O)C1=C2C2=CC=CC=C2N1 QCZXQEYEVLCQHL-HGJJDEFOSA-N 0.000 description 5
- 239000003039 volatile agent Substances 0.000 description 5
- 238000010599 BrdU assay Methods 0.000 description 4
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 4
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 4
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 4
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 description 4
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 4
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 4
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 4
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 4
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 4
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 4
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 4
- 125000001570 methylene group Chemical group [H]C([H])([*:1])[*:2] 0.000 description 4
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 4
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 4
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 4
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 4
- UMGDCJDMYOKAJW-UHFFFAOYSA-N thiourea Chemical compound NC(N)=S UMGDCJDMYOKAJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- JPQAXLYDHQQGBO-UHFFFAOYSA-N γ-amanitine Chemical compound O=C1NC(CC(N)=O)C(=O)N2CC(O)CC2C(=O)NC(C(C)C(C)O)C(=O)NC(C2)C(=O)NCC(=O)NC(C(C)CC)C(=O)NCC(=O)NC1CSC1=C2C2=CC=C(O)C=C2N1 JPQAXLYDHQQGBO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000134916 Amanita Species 0.000 description 3
- 108010066687 Epithelial Cell Adhesion Molecule Proteins 0.000 description 3
- 101000920667 Homo sapiens Epithelial cell adhesion molecule Proteins 0.000 description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 3
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 3
- 125000003636 chemical group Chemical group 0.000 description 3
- 239000008139 complexing agent Substances 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 125000001183 hydrocarbyl group Chemical group 0.000 description 3
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 3
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 3
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 3
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000013421 nuclear magnetic resonance imaging Methods 0.000 description 3
- 125000003367 polycyclic group Chemical group 0.000 description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 3
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 3
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 3
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 3
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 3
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 3
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 3
- 235000001674 Agaricus brunnescens Nutrition 0.000 description 2
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 2
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 2
- 108091023037 Aptamer Proteins 0.000 description 2
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N Argon Chemical compound [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- 108010069514 Cyclic Peptides Proteins 0.000 description 2
- 102000001189 Cyclic Peptides Human genes 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 2
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 241000283074 Equus asinus Species 0.000 description 2
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 2
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 2
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 2
- AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N Glycolic acid Chemical compound OCC(O)=O AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 2
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CHKFLBOLYREYDO-SHYZEUOFSA-N [[(2s,4r,5r)-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)-4-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl] phosphono hydrogen phosphate Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1[C@H](O)C[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 CHKFLBOLYREYDO-SHYZEUOFSA-N 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 2
- 125000004390 alkyl sulfonyl group Chemical group 0.000 description 2
- 125000004104 aryloxy group Chemical group 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 150000001721 carbon Chemical group 0.000 description 2
- 239000011203 carbon fibre reinforced carbon Substances 0.000 description 2
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 2
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 2
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 2
- 150000005676 cyclic carbonates Chemical class 0.000 description 2
- 125000005724 cycloalkenylene group Chemical group 0.000 description 2
- 239000003405 delayed action preparation Substances 0.000 description 2
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 2
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 2
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 2
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 2
- 102000034238 globular proteins Human genes 0.000 description 2
- 108091005896 globular proteins Proteins 0.000 description 2
- 125000001188 haloalkyl group Chemical group 0.000 description 2
- 125000000592 heterocycloalkyl group Chemical group 0.000 description 2
- 239000002596 immunotoxin Substances 0.000 description 2
- 239000007972 injectable composition Substances 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000005075 mammary gland Anatomy 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 210000004882 non-tumor cell Anatomy 0.000 description 2
- SRDQDZSLNAKOIT-UHFFFAOYSA-N phallisin Chemical compound N1C(=O)C(C(O)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CC(O)(CO)CO)NC(=O)C(C2)NC(=O)C(C)NC(=O)C3CC(O)CN3C(=O)C1CSC1=C2C2=CC=CC=C2N1 SRDQDZSLNAKOIT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 2
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 2
- 230000007096 poisonous effect Effects 0.000 description 2
- 229920001308 poly(aminoacid) Polymers 0.000 description 2
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 description 2
- 229920000193 polymethacrylate Polymers 0.000 description 2
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 2
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 2
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 2
- GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L sodium sulfite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])=O GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 2
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 2
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 2
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 2
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 2
- 238000006257 total synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 2
- NXANGIZFHQQBCC-VIFPVBQESA-N (2s)-2-amino-3-(6-hydroxy-1h-indol-3-yl)propanoic acid Chemical compound OC1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 NXANGIZFHQQBCC-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- VXNZUUAINFGPBY-UHFFFAOYSA-N 1-Butene Chemical group CCC=C VXNZUUAINFGPBY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HIQIXEFWDLTDED-UHFFFAOYSA-N 4-hydroxy-1-piperidin-4-ylpyrrolidin-2-one Chemical compound O=C1CC(O)CN1C1CCNCC1 HIQIXEFWDLTDED-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WOVKYSAHUYNSMH-RRKCRQDMSA-N 5-bromodeoxyuridine Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(Br)=C1 WOVKYSAHUYNSMH-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 1
- QSHLMQDRPXXYEE-UHFFFAOYSA-N 6-Hydroxytryptophan Natural products C1=CC(O)=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QSHLMQDRPXXYEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QCZXQEYEVLCQHL-UHFFFAOYSA-N Amanin Natural products O=C1NC(CC(O)=O)C(=O)N2CC(O)CC2C(=O)NC(C(C)C(O)CO)C(=O)NC(C2)C(=O)NCC(=O)NC(C(C)CC)C(=O)NCC(=O)NC1CS(=O)C1=C2C2=CC=CC=C2N1 QCZXQEYEVLCQHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000948470 Amanita phalloides Species 0.000 description 1
- 241000134901 Amanitaceae Species 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 1
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000011691 Burkitt lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 101100314454 Caenorhabditis elegans tra-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000282836 Camelus dromedarius Species 0.000 description 1
- 101710167800 Capsid assembly scaffolding protein Proteins 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 1
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 1
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- NXANGIZFHQQBCC-UHFFFAOYSA-N DL-6-Hydroxy-tryptophan Natural products OC1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 NXANGIZFHQQBCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010002156 Depsipeptides Proteins 0.000 description 1
- 102000001301 EGF receptor Human genes 0.000 description 1
- 108060006698 EGF receptor Proteins 0.000 description 1
- 101150029707 ERBB2 gene Proteins 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N Elaidinsaeure-aethylester Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 1
- VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N Ethene Chemical compound C=C VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005977 Ethylene Substances 0.000 description 1
- 239000004606 Fillers/Extenders Substances 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 206010017993 Gastrointestinal neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N Hydroxyproline Chemical compound O[C@H]1CN[C@H](C(O)=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N 0.000 description 1
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 1
- 102000010781 Interleukin-6 Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010038501 Interleukin-6 Receptors Proteins 0.000 description 1
- 229930194542 Keto Natural products 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 238000005684 Liebig rearrangement reaction Methods 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 241001024304 Mino Species 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- SCCQCCCXSLYFHJ-WHFBIAKZSA-N N,N-dihydroxy-L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N(O)O)C(O)=O SCCQCCCXSLYFHJ-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 241000577979 Peromyscus spicilegus Species 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 101710130420 Probable capsid assembly scaffolding protein Proteins 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 101710204410 Scaffold protein Proteins 0.000 description 1
- 108010003723 Single-Domain Antibodies Proteins 0.000 description 1
- 208000000453 Skin Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 101000677856 Stenotrophomonas maltophilia (strain K279a) Actin-binding protein Smlt3054 Proteins 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- UCKMPCXJQFINFW-UHFFFAOYSA-N Sulphide Chemical compound [S-2] UCKMPCXJQFINFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000024770 Thyroid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 1
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000004442 acylamino group Chemical group 0.000 description 1
- 125000004423 acyloxy group Chemical group 0.000 description 1
- 125000005035 acylthio group Chemical group 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000005157 alkyl carboxy group Chemical group 0.000 description 1
- 125000004414 alkyl thio group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000304 alkynyl group Chemical group 0.000 description 1
- QCZXQEYEVLCQHL-MIBTZWEZSA-N amanin Chemical compound O=C1N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N2C[C@H](O)C[C@H]2C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)[C@@H](O)CO)C(=O)N[C@@H](C2)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@H]1CS(=O)C1=C2C2=CC=CC=C2N1 QCZXQEYEVLCQHL-MIBTZWEZSA-N 0.000 description 1
- 125000003368 amide group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 125000004397 aminosulfonyl group Chemical group NS(=O)(=O)* 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 238000003782 apoptosis assay Methods 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012300 argon atmosphere Substances 0.000 description 1
- 125000003435 aroyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000005239 aroylamino group Chemical group 0.000 description 1
- 125000005333 aroyloxy group Chemical group 0.000 description 1
- 125000003710 aryl alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000005110 aryl thio group Chemical group 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229940009098 aspartate Drugs 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000852 azido group Chemical group *N=[N+]=[N-] 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 102000023732 binding proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 229920002988 biodegradable polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000004621 biodegradable polymer Substances 0.000 description 1
- 230000031018 biological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 201000001531 bladder carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 125000003917 carbamoyl group Chemical group [H]N([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 125000001951 carbamoylamino group Chemical group C(N)(=O)N* 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 239000004359 castor oil Substances 0.000 description 1
- 235000019438 castor oil Nutrition 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002742 combinatorial mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 1
- 125000000753 cycloalkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000004976 cyclobutylene group Chemical group 0.000 description 1
- 229940097362 cyclodextrins Drugs 0.000 description 1
- 125000004977 cycloheptylene group Chemical group 0.000 description 1
- 125000005725 cyclohexenylene group Chemical group 0.000 description 1
- 125000004956 cyclohexylene group Chemical group 0.000 description 1
- 125000004979 cyclopentylene group Chemical group 0.000 description 1
- 125000004980 cyclopropylene group Chemical group 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 238000006193 diazotization reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N dl-hydroxyproline Natural products OC1C[NH2+]C(C([O-])=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 125000005678 ethenylene group Chemical group [H]C([*:1])=C([H])[*:2] 0.000 description 1
- 125000005677 ethinylene group Chemical group [*:2]C#C[*:1] 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N ethyl oleate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N 0.000 description 1
- 229940093471 ethyl oleate Drugs 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 208000021045 exocrine pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000010685 fatty oil Substances 0.000 description 1
- 238000004362 fungal culture Methods 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N glycerol triricinoleate Natural products CCCCCC[C@@H](O)CC=CCCCCCCCC(=O)OC[C@@H](COC(=O)CCCCCCCC=CC[C@@H](O)CCCCCC)OC(=O)CCCCCCCC=CC[C@H](O)CCCCCC ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000037824 growth disorder Diseases 0.000 description 1
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 description 1
- 201000010536 head and neck cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000014829 head and neck neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 231100000844 hepatocellular carcinoma Toxicity 0.000 description 1
- 239000008131 herbal destillate Substances 0.000 description 1
- 229940022353 herceptin Drugs 0.000 description 1
- 125000004404 heteroalkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000004475 heteroaralkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000005553 heteroaryloxy group Chemical group 0.000 description 1
- 230000006266 hibernation Effects 0.000 description 1
- 238000004896 high resolution mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 229960002591 hydroxyproline Drugs 0.000 description 1
- 125000001841 imino group Chemical group [H]N=* 0.000 description 1
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 125000001041 indolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 239000002198 insoluble material Substances 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N isomaltotriose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O)O1 FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N 0.000 description 1
- 239000000644 isotonic solution Substances 0.000 description 1
- 125000000468 ketone group Chemical group 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 1
- QPJVMBTYPHYUOC-UHFFFAOYSA-N methyl benzoate Chemical compound COC(=O)C1=CC=CC=C1 QPJVMBTYPHYUOC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004530 micro-emulsion Substances 0.000 description 1
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- WVKNBCACIPKHEW-UHFFFAOYSA-N n,n-diethylethanamine;n,n-dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O.CCN(CC)CC WVKNBCACIPKHEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NELIAIPXAJJBKQ-UHFFFAOYSA-N n-iminoformamide Chemical compound N=NC=O NELIAIPXAJJBKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 1
- 230000035407 negative regulation of cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 125000000449 nitro group Chemical group [O-][N+](*)=O 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 201000008968 osteosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 125000004430 oxygen atom Chemical group O* 0.000 description 1
- 239000006179 pH buffering agent Substances 0.000 description 1
- 239000005022 packaging material Substances 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 235000021400 peanut butter Nutrition 0.000 description 1
- 125000005010 perfluoroalkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 229940021222 peritoneal dialysis isotonic solution Drugs 0.000 description 1
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 1
- 108700009879 phallisin Proteins 0.000 description 1
- WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N phenyl(114C)methanol Chemical compound O[14CH2]C1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N 0.000 description 1
- 125000000843 phenylene group Chemical group C1(=C(C=CC=C1)*)* 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- ACVYVLVWPXVTIT-UHFFFAOYSA-M phosphinate Chemical compound [O-][PH2]=O ACVYVLVWPXVTIT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- UEZVMMHDMIWARA-UHFFFAOYSA-M phosphonate Chemical compound [O-]P(=O)=O UEZVMMHDMIWARA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- LFGREXWGYUGZLY-UHFFFAOYSA-N phosphoryl Chemical group [P]=O LFGREXWGYUGZLY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 1
- 229920000867 polyelectrolyte Polymers 0.000 description 1
- 239000008389 polyethoxylated castor oil Substances 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000005522 programmed cell death Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 150000003230 pyrimidines Chemical class 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 229930195734 saturated hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 201000000849 skin cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000010802 sludge Substances 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000010265 sodium sulphite Nutrition 0.000 description 1
- 239000003549 soybean oil Substances 0.000 description 1
- 235000012424 soybean oil Nutrition 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 206010041823 squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 125000000446 sulfanediyl group Chemical group *S* 0.000 description 1
- 125000005420 sulfonamido group Chemical group S(=O)(=O)(N*)* 0.000 description 1
- BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M sulfonate Chemical compound [O-]S(=O)=O BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 150000003457 sulfones Chemical class 0.000 description 1
- 125000000472 sulfonyl group Chemical group *S(*)(=O)=O 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- NXQXVXILNVTMNA-UHFFFAOYSA-N tert-butyl n-(6-bromohexyl)carbamate Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)NCCCCCCBr NXQXVXILNVTMNA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002381 testicular Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 description 1
- 125000004149 thio group Chemical group *S* 0.000 description 1
- 201000002510 thyroid cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N trans-L-hydroxy-proline Natural products ON1CCCC1C(O)=O FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
- 125000002023 trifluoromethyl group Chemical group FC(F)(F)* 0.000 description 1
- 150000003673 urethanes Chemical class 0.000 description 1
- 208000010570 urinary bladder carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/64—Cyclic peptides containing only normal peptide links
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
- A61K47/55—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound the modifying agent being also a pharmacologically or therapeutically active agent, i.e. the entire conjugate being a codrug, i.e. a dimer, oligomer or polymer of pharmacologically or therapeutically active compounds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
- A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
- A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
- A61K47/6811—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin
- A61K47/6817—Toxins
- A61K47/6831—Fungal toxins, e.g. alpha sarcine, mitogillin, zinniol or restrictocin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
- A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
- A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
- A61K47/6855—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from breast cancer cell
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/32—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against translation products of oncogenes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/33—Fusion polypeptide fusions for targeting to specific cell types, e.g. tissue specific targeting, targeting of a bacterial subspecies
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Oncology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Hematology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
Abstract
Изобретение относится к конъюгатам аматоксина и мишень-связывающего фрагмента, например антитела, связанного определенными связями, которые являются применимыми в лечении рака и других расстройств и заболеваний. В дополнительном аспекте изобретение относится к фармацевтическим композициям, включающим такие конъюгаты. 3 н. и 14 з.п. ф-лы, 7 ил., 5 пр.
Description
ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0001] Изобретение относится к лечению опухолей. В одном аспекте настоящее изобретение относится к конъюгатам аматоксина и мишень-связывающего фрагмента, например, антитела, связанных определенными связями, которые являются применимыми в лечении рака и других расстройств и заболеваний. В дополнительном аспекте изобретение относится к фармацевтическим композициям, включающим указанные конъюгаты.
ПРЕДШЕСТВУЮЩИЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0002] Аматоксины представляют собой циклические пептиды, состоящие из 8 аминокислот. Они могут, например, быть выделены из грибов Amanita phalloides или получены синтетически. Аматоксины специфически ингибируют ДНК-зависимую РНК полимеразу II клеток млекопитающих, и посредством этого также транскрипцию и биосинтез белка пораженных клеток. Ингибирование транскрипции в клетках вызывает остановку роста и пролиферации. При отсутствии ковалентной связи комплекс между аманитином и РНК полимеразой II является очень тесным (KД=3 нМ). Диссоциация аманитина из фермента представляет собой очень медленный процесс, таким образом делая восстановление пораженных клеток маловероятным. Когда ингибирование транскрипции продолжается слишком долго, клетки подвергаются программируемой клеточной смерти (апоптозу).
[0003] Применение аматоксинов в качестве цитотоксических фрагментов для лечения опухолей уже изучали в 1981 году путем связывания анти-Thy 1.2 антитела с α-аманитином с использованием линкера, прикрепленного к индоловому циклу Trp (аминокислота 4; смотрите фиг.1) посредством диазотирования (Davis & Preston, Science 1981, 213, 1385-1388). Davis & Preston идентифицировали участок прикрепления как положение 7'. Morris & Venton также продемонстрировали, что замещение в положении 7' дает производное, которое сохраняет цитотоксическую активность (Morris & Venton, Int. J. Peptide Protein Res 1983, 21 419-430).
[0004] В патентной заявке EP 1859811 A1 (опубликованной 28 ноября 2007 г.) описаны конъюгаты, в которых γ C-атом аматоксина аминокислоты 1 β-аманитина был непосредственно связан, т.е. без линкерной структуры, с альбумином или моноклональным антителом HEA125, OKT3 или PA-1. Более того, показан ингибирующий эффект указанных конъюгатов в отношении пролиферации клеток рака молочной железы (MCF-7), клеток лимфомы Беркитта (Raji) и клеток Т лимфомы (Jurkat). Предполагали применение линкеров, включая линкеры, содержащие элементы, такие как амид, сложный эфир, простой эфир, тиоэфир, дисульфид, мочевина, тиомочевина, углеводородный фрагмент и подобные, но такие конструкты реально не были показаны и не было представлено больше подробностей, таких как места прикрепления на аматоксинах.
[0005] В патентных заявках WO 2010/115629 и WO 2010/115630 (обе опубликованные 14 октября 2010 г.) описаны конъюгаты, где антитела, такие как анти-EpCAM антитела, такие как гуманизированные huHEA125, связаны с аматоксинами посредством (i) γ C-атома аминокислоты 1 аматоксина, (ii) 6' C-атома аминокислоты 4 аматоксина, или (iii) посредством аминокислоты 3 δ C-атома аматоксина, в каждом случае или непосредственно или посредством линкера между антителом и аматоксинами. Предполагаемые линкеры включают элементы, такие как сложный эфир, простой эфир, уретан, пептидная связь и подобные. Более того, показаны ингибирующие эффекты таких конъюгатов в отношении пролиферации клеток рака молочной железы (клеточная линия MCF-7), карциномы поджелудочной железы (клеточная линия Colo205) и холангиокарциномы (клеточная линия OZ).
[0006] Взаимоотношения структурной активности аматоксинов обсуждаются у Wieland (T. Wieland, Peptides of Poisonous Amanita Mushrooms, Springer series in molecular biology, Springer Verlag New York, 1986). Гидроксильная группа аминокислоты 2 (гидроксипролин) и γ-гидроксигруппа аминокислоты 3 (дигидроксиизолейцин) расцениваются как необходимые для активности, тогда как функциональные группы на аминокислоте 1 (аспартат или аспарагин), аминокислоте 4 (6-гидрокситриптофан) и δ-гидроксигруппа на аминокислоте 3 более стойки к химической модификации. Это показывает, что последние положения являются предпочтительными сайтами для прикрепления линкеров, тогда как модификации первых необходимо избегать.
[0007] Известно, что аматоксины являются относительно нетоксичными при связывании с крупными биомолекулами носителями, такими как молекулы антител, и что они проявляют свою цитотоксическую активность только после отщепления биомолекулы носителя. В свете токсичности аматоксинов, предпочтительно для клеток печени, наиболее важно то, что конъюгаты аматоксина для целевой терапии опухолей остаются высоко стабильными после введения в плазму, и что высвобождение аматоксина развивается после интернализации в целевые клетки. В указанном контексте минимальные улучшения стабильности конъюгата могут иметь радикальные последствия в отношении терапевтического окна и безопасности конъюгатов аматоксина для терапевтических целей.
ЗАДАЧИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0008] Задачей настоящего изобретения является обеспечение дополнительных конъюгатов мишень-связывающего фрагмента и аматоксина, которые являются стабильными в плазме, так что их вредные побочные эффекты на клетки не-мишени минимизированы.
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0009] Настоящее изобретение основано на неожиданном наблюдении, что образование цикла посредством двух атомов кислорода, связанных с γ и δ C атомами аминокислоты 3 аматоксина, может улучшать переносимость конъюгатов мишень-связывающих фрагментов и аматоксина, не влияя на взаимодействие таких аматоксинов с их мишенью, ДНК-зависимой РНК полимеразой II клеток млекопитающих. К настоящему времени, наличие гидроксильной группы, связанной с γ C атомом аминокислоты 3 аматоксина, расценивается обязательным для эффекта аматоксинов и конъюгатов аматоксина. Wieland (T. Wieland, Peptides of Poisonous Amanita Mushrooms, Springer Series in Molecular Biology, Springer Verlag New York, 1986; Wieland T, Rempel D, Gebert U, Buku A, Boehringer H. Liber die Inhaltsstoffe des griinen Knollenblatterpilzes. XXXII. Chromatographische Auftrennung der Gesamtgifte und Isolierung der neuen Nebentoxine Amanin und Phallisin sowie des ungiftigen Amanullins. Liebigs Ann Chem. 1967;704:226-236) сообщают о натуральных аматоксинах, как амануллин, которые не имеют γ-гидроксильной группы существенно сниженной токсичности.
[0010] В первом аспекте настоящее изобретение относится к аматоксину формулы I
где:
R1 выбран из C=O, C=S, C=NR6 и CR7R8;
R2 выбран из S=O, SO2 и S;
R3 выбран из NHR5 и OR5;
R4 выбран из H, OR5 и OC1-6-алкила;
R6 выбран из C1-6-алкилен-R5, циклоалкилен-R5, гетероциклоалкилен-R5, арилен-R5 и гетероарилен-R5;
R7 и R8 независимо выбраны из H, C1-6-алкилен-R5, циклоалкилен-R5, гетероциклоалкилен-R5, арилен-R5 и гетероарилен-R5;
где:
(i) каждый R5 представляет собой H;
(ii) один из R5 представляет собой -Ln-X, где L является линкером, n выбран из 0 и 1, и X представляет собой химический фрагмент, который может быть связан с нацеливающим фрагментом, и где оставшиеся R5 представляют собой H; или
(iii) один из R5 представляет собой -Ln-X*-Y, где L является линкером, n выбран из 0 и 1, Y представляет собой нацеливающий фрагмент и X* представляет собой химический фрагмент, возникающий в результате связывания X с функциональной группой Y, и где оставшиеся R5 представляют собой H.
[0011] В другом аспекте настоящее изобретение относится к аматоксину по настоящему изобретению для применения в качестве лекарственного препарата.
[0012] В другом аспекте настоящее изобретение относится к аматоксину по настоящему изобретению для применения в лечении рака у пациента, предпочтительно где рак выбран из группы, состоящей из рака молочной железы, желудочно-кишечного рака, например, колоректального рака, рака поджелудочной железы, холангиокарциномы, печеночно-клеточной карциномы, остеосаркомы, рака легких, рака предстательной железы, плоскоклеточной карциномы, рака яичника, карциномы яичка, карциномы мочевого пузыря, рака желудка, рака головы и шеи, рака шейки матки, рака почки, глиом, рака кожи, например, злокачественной меланомы, рака щитовидной железы, лейкоза и злокачественной лимфомы.
[0013] В другом аспекте настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, включающей аматоксин по настоящему изобретению, и дополнительно включающей один или более фармацевтически приемлемых разбавителей, носителей, вспомогательных веществ, наполнителей, вяжущих веществ, смазывающих веществ, глидантов, дезинтегрирующих веществ, абсорбентов; и/или консервантов.
[0014] В другом аспекте настоящее изобретение относится к способу синтеза аматоксина по настоящему изобретению, включающему взаимодействие аматоксина формулы II
где:
R2 выбран из S=O, SO2 и S;
R3 выбран из NHR5 и OR5;
R4 выбран из H, OR5 и OC1-6-алкила;
R6 выбран из C1-6-алкилен-R5, циклоалкилен-R5, гетероциклоалкилен-R5, арилен-R5 и гетероарилен-R5;
R7 и R8 независимо выбраны из H, C1-6-алкилен-R5, циклоалкилен-R5, гетероциклоалкилен-R5, арилен-R5 и гетероарилен-R5;
где один из R5 представляет собой -Ln-X, где L является линкером, n выбран из 0 и 1, и X является химическим фрагментом, который может быть связан с нацеливающим фрагментом, и где оставшиеся R5 являются H;
с (i) Ν,Ν'-дисукцинимидилкарбонатом (DSC), (ii) тиокарбонилирующим реагентом, предпочтительно тиофосгеном, 1,1'-тиокарбонилдиимидазолом или 1,1'-тиокарбонилди-2(1H)-пиридоном; (iii) иминокарбонилирующим реагентом, предпочтительно дихлоридом изоцианида или фенилизотиоцианатом; или (iv) альдегидом, кетоном или ациклическим ацеталем.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
[0015] На фиг.1 показаны структурные формулы различных аматоксинов. Цифры жирным шрифтом (1-8) обозначают стандартную нумерацию восьми аминокислот, образующих аматоксин. Также показаны стандартные обозначения атомов в аминокислотах 1, 3 и 4 (греческие буквы α-γ, греческие буквы α-δ, и числа от 1' до 7', соответственно).
[0016] На фиг.2 показана цитотоксическая активность различных конъюгатов аматоксина-трастузумаба (торговое наименование Герцептин®) на клетках SK-OV-3 (рак яичника) в анализе BrdU после инкубации в течение 72 ч.
[0017] На фиг.3 показана цитотоксическая активность различных конъюгатов аматоксина-трастузумаба на клетках SK-OV-3 (рак яичника) в анализе BrdU после инкубации в течение 72 ч.
[0018] На фиг.4 показана цитотоксическая активность различных конъюгатов аматоксина-трастузумаба на клетках SKBR-3 (рак молочной железы) в анализе BrdU после инкубации в течение 72 ч.
[0019] На фиг.5 показана цитотоксическая активность различных конъюгатов аматоксина-трастузумаба на клетках JIMT-1 (рак молочной железы) в анализе BrdU после инкубации в течение 72 ч.
[0020] На фиг.6 показана эффективность in vivo двух различных конъюгатов аматоксина аматоксин-трастузумаб в модели ксенотрансплантата рака молочной железы JIMT-1.
[0021] На фиг.7 показана переносимость in vivo двух различных конъюгатов аматоксина аматоксин-трастузумаб у самок мышей NMRI nu/nu.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0022] Настоящее изобретение может быть более понятно со ссылками на следующее подробное описание изобретения и примеры, включенные в настоящее описание.
[0023] В первом аспекте настоящее изобретение относится к аматоксину формулы I
где:
R1 выбран из C=O, C=S, C=NR6 и CR7R8;
R2 выбран из S=О, SО2 и S;
R3 выбран из NHR5 и OR5;
R4 выбран из H, OR5 и OС1-6-алкила;
R6 выбран из С1-6-алкилен-R5, циклоалкилен-R5, гетероциклоалкилен-R5, арилен-R5 и гетероарилен-R5;
R7 и R8 независимо выбран из H, С1-6-алкилен-R5, циклоалкилен-R5, гетероциклоалкилен-R5, арилен-R5 и гетероарилен-R5;
где:
(i) каждый R5 представляет собой H;
(ii) один из R5 представляет собой -Ln-X, где L является линкером, n выбран из 0 и 1, и X представляет собой химический фрагмент, который может быть связан с нацеливающим фрагментом, и где оставшиеся R5 являются H; или
(iii) один из R5 представляет собой -Ln-X*-Y, где L является линкером, n выбран из 0 и 1, Y является нацеливающим фрагментом и X* является химическим фрагментом, появляющимся в результате связывания X с функциональной группой Y, и где оставшиеся R5 являются H.
[0024] Термин "мишень-связывающий фрагмент", как используется в настоящем описании, относится к любой молекуле или части молекулы, которые могут специфически связываться с целевой молекулой или целевым эпитопом. Предпочтительными мишень-связывающими фрагментами в контексте настоящей заявке являются (i) антитела или их антиген-связывающие фрагменты; (ii) антителоподобные белки; и (iii) аптамеры нуклеиновой кислоты. "Мишень-связывающие фрагменты", подходящие для применения в настоящем описании, обычно имеют молекулярную массу 40000 Дa (40 кДa) или более.
[0025] Как используется в настоящем описании, первое соединение (например, антитело) расценивают как "специфически связывающееся" со вторым соединением (например, антигеном, таким как целевой белок), если он имеет константу диссоциации KD к указанному второму соединению 100 мкΜ или менее, предпочтительно 50 мкΜ или менее, предпочтительно 30 мкΜ или менее, предпочтительно 20 мкΜ или менее, предпочтительно 10 мкΜ или менее, предпочтительно 5 мкΜ или менее, более предпочтительно 1 мкΜ или менее, более предпочтительно 900 нM или менее, более предпочтительно 800 нM или менее, более предпочтительно 700 нM или менее, более предпочтительно 600 нM или менее, более предпочтительно 500 нM или менее, более предпочтительно 400 нM или менее, более предпочтительно 300 нM или менее, более предпочтительно 200 нM или менее, более предпочтительно 100 нM или менее, более предпочтительно 90 нM или менее, более предпочтительно 80 нM или менее, более предпочтительно 70 нM или менее, еще более предпочтительно 60 нM или менее, еще более предпочтительно 50 нM или менее, еще более предпочтительно 40 нM или менее, еще более предпочтительно 30 нM или менее, еще более предпочтительно 20 нM или менее и еще более предпочтительно 10 нM или менее.
[0026] В контексте настоящей заявки термины "целевая молекула" и "целевой эпитоп", соответственно, относятся к антигену и эпитопу антигена, соответственно, которые специфически связываются мишень-связывающим фрагментом. Предпочтительно нацеливающей молекулой является антиген, ассоциированный с опухолью, в частности, антиген или эпитоп, который присутствует на поверхности одного или более типов опухолевых клеток или клеток, ассоциированных с опухолью в увеличенной концентрации и/или в иной стерической конфигурации по сравнению с поверхностью неопухолевых клеток. Предпочтительно указанный антиген или эпитоп присутствуют на поверхности одного или более типов клеток опухоли или стромы опухоли, но не на поверхности неопухолевых клеток. В определенных вариантах осуществления изобретения мишень-связывающий фрагмент специфически связывается с эпитопом HER-2/neu или молекулой адгезии эпителиальных клеток (EpCAM). В других вариантах осуществления изобретения указанный антиген или эпитоп предпочтительно экспрессируется на клетках, вовлеченных в аутоиммунные заболевания. В таких определенных вариантах осуществления изобретения мишень-связывающий фрагмент специфически связывается с эпитопом рецептора IL-6 (IL-6R). В других вариантах осуществления изобретения указанный антиген или эпитоп предпочтительно экспрессируется на клетках, вовлеченных в воспалительные заболевания.
[0027] Термин "антитело или его фрагмент, связывающий антиген", как используется в настоящем описании, относится к молекулам иммуноглобулина и иммунологически активным частям молекул иммуноглобулина, т.е. молекулам, которые содержат сайт связывания антигена, которые иммуноспецифически связывают антиген. Также включают иммуноглобулиноподобные белки, которые выбирают посредством методик, включающих, например, фаговое отображение для специфического связывания с целевой молекулой, например, целевым белком Her-2/neu или EpCAM. Молекулы иммуноглобулина по изобретению могут быть любого типа (например, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA и IgY), класса (например, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 и IgA2) или подкласса молекулы иммуноглобулина. "Антитела и их антиген-связывающие фрагменты", подходящие для применения в настоящем изобретении, включают, без ограничения, поликлональные, моноклональные, одновалентные, биспецифические, гетероконъюгатные, мультиспецифические, человеческие, гуманизированные (в частности CDR-привитые), деиммунизированные или химерные антитела, одноцепочечные антитела (например, scFv), Fab фрагменты, F(ab')2 фрагменты, фрагменты, полученные посредством Fab библиотеки экспрессии, диатела или тетратела (Holliger P. et al., 1993), нанотела, анти-идиотипические (анти-Id) антитела (включая, например, анти-Id антитела к антителам по изобретению) и эпитоп-связывающие фрагменты любого из вышеперечисленного.
[0028] В некоторых вариантах осуществления изобретения антиген-связывающими фрагментами являются фрагменты человеческих антиген-связывающих антител по настоящему изобретению и включают, без ограничения, Fab, Fab' и F(ab')2, Fd, одноцепочечное Fv (scFv), одноцепочечные антитела, дисульфидно-связанные Fv (dsFv) и фрагменты, включающие или VL или VH домен. Антиген-связывающие фрагменты антител, включая одноцепочечные антитела, могут включать вариабельный домен(ы) отдельно или в комбинации с полным или частью следующего: шарнирная область, домены CL, CH1, CH2 и CH3. Также включают в изобретение антиген-связывающие фрагменты, также включающие любую комбинацию вариабельных доменов(а) с шарнирной областью, доменами CL, CH1, CH2 и CH3.
[0029] Антитела, применимые в изобретении, могут иметь любое животное происхождение, включая птиц и млекопитающих. Предпочтительно антитела получают от человека, грызунов (например, мыши, крысы, морской свинки или кролика), цыплят, свиньи, козы, верблюда, коровы, лошади, осла, кошки или собаки. Особенно предпочтительно, чтобы антитела имели человеческое или мышиное происхождение. Как используется в настоящем описании, "человеческие антитела" включают антитела, имеющие последовательность аминокислот человеческого иммуноглобулина, и включают антитела, выделенные из библиотек человеческих иммуноглобулинов и/или от животных, трансгенных для одного или более человеческих иммуноглобулинов и которые не экспрессируют эндогенные иммуноглобулины, как описано, например, в патенте США № 5939598 Kucherlapati & Jakobovits.
[0030] Термин "антителоподобный белок" относится к белку, который был создан (например, посредством мутагенеза петель) для специфического связывания целевой молекулы. Обычно такие антителоподобные белки включают по меньшей мере одну вариабельную пептидную петлю, прикрепленную к обоим концам белковой складки. Такой двойной структурный конструкт существенно увеличивает аффинность связывания антителоподобного белка до уровня, сравнимого с таковым антитела. Длина вариабельной пептидной петли обычно состоит из 10-20 аминокислот. Каркасным белком может быть любой белок, имеющий хорошие свойства растворимости. Предпочтительно каркасным белком является мелкий глобулярный белок. Антителоподобные белки включают, без ограничения, белки миметики, антикалины и созданные белки повторов анкирина (для описания смотрите Binz et al. 2005). Антителоподобные белки могут быть получены из крупных библиотек мутантов, например, быть получены из крупных библиотек фагового отображения и могут быть выделены по аналогии с обычными антителами. Также антителоподобные связывающие белки могут быть получены путем комбинаторного мутагенеза поверхностно-выставленных остатков в глобулярных белках.
[0031] Термин "аптамер нуклеиновой кислоты" относится к молекуле нуклеиновой кислоты, которая была создана посредством повторных оборотов селекции in vitro или SELEX (систематическая эволюция лигандов путем экспоненциального обогащения) для связывания с целевой молекулой (для описания смотрите Brody and Gold, 2000). Аптамером нуклеиновой кислоты может быть молекула ДНК или РНК. Аптамеры могут содержать определенные модификации, например, модифицированные нуклеотиды, такие как 2'-фтор-замещенные пиримидины.
[0032] Как используется в настоящем описании, "конъюгат аптамера" относится к конъюгату токсина и мишень-связывающего фрагмента, в котором мишень-связывающий фрагмент представляет собой аптамер нуклеиновой кислоты в соответствии с вышеуказанной альтернативой (iii).
[0033] "Линкер" в контексте настоящего изобретения относится к молекуле, которая связывает два компонента, каждый прикрепленный к концу линкера, и которая увеличивает расстояние между двумя компонентами и облегчает стерические взаимодействия между указанными компонентами, например, в настоящем случае между мишень-связывающим фрагментом и аматоксином. В отсутствие линкера непосредственная связка аматоксина с мишень-связывающим фрагментом может снижать способность аматоксина взаимодействовать с РНК полимеразой II. В определенных вариантах осуществления изобретения линкер имеет непрерывные цепи между 1 и 30 атомами (например 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 или 30 атомами) в его основе, т.е. длину линкера определяют как самую короткую связь, измеряемую по количеству атомов или связей между фрагментом аматоксина и мишень-связывающим фрагментом, где одна сторона линкерной основы взаимодействует с аматоксином, и другая сторона - с мишень-связывающим фрагментом. В контексте настоящего изобретения линкером предпочтительно является группа C1-20-алкилен, C1-20-гетероалкилен, C2-20-алкенилен, C2-20-гетероалкенилен, C2-20-алкинилен, C2-20-гетероалкинилен, циклоалкилен, гетероциклоалкилен, арилен, гетероарилен, аралкилен или гетероаралкилен, необязательно замещенная. Линкер может содержать один или более структурных элементов, таких как карбоксамид, сложный эфир, простой эфир, тиоэфир, дисульфид, мочевина, тиомочевина, углеводородные фрагменты и подобные. Линкер также может содержать комбинации двух или более таких структурных элементов. Каждый из таких структурных элементов может присутствовать в линкере более чем однократно, например, дважды, три раза, четыре раза, пять раз или шесть раз. В некоторых вариантах осуществления изобретения линкер может включать дисульфидную связь. Понимают, что линкер прикрепляется в одной стадии или в двух или более последовательных стадиях к аматоксину и мишень-связывающему фрагменту. Для этого линкер несет две группы, предпочтительно на проксимальном или дистальном конце, которые могут (i) образовывать ковалентную связь с группой, присутствующей в одном из компонентов для связывания, предпочтительно, активированной группой на аматоксине или мишень-связывающем пептиде, или (ii) который является или может быть активирован с образованием ковалентной связи с группой на аматоксине. Соответственно предпочтительно, чтобы химические группы находились на дистальном и проксимальном конце линкера, что является результатом такой реакции связывания, например, сложный эфир, простой эфир, уретан, пептидная связь и др.
[0034] В контексте настоящего изобретения термин "аматоксин" включает все циклические пептиды, состоящие из 8 аминокислот, выделенные из рода Amanita и описанные в Wieland, T. and Faulstich H. (Wieland T, Faulstich H., CRC Crit Rev Biochem. 1978 Dec; 5(3): 185-260), и, более того, включает все их химические производные; дополнительно все их полусинтетические аналоги; дополнительно все их синтетические аналоги, построенные из строительных блоков в соответствии с основной структурой натуральных соединений (циклические, 8 аминокислот), дополнительно все синтетические или полусинтетические аналоги, содержащие негидроксилированные аминокислоты вместо гидроксилированных аминокислот, дополнительно все синтетические или полусинтетические аналоги, в которых тиоэфирсульфоксидный фрагмент заменен сульфидом, сульфоном или атомами, отличными от серы, например, атомом углерода как в карба-аналоге аманитина, в каждом случае, когда любое такое производное или аналог является функционально активным путем ингибирования РНК полимеразы II млекопитающего.
[0035] Как используется в настоящем описании, "химическое производное" (или коротко: "производное") соединения относится к видам, имеющим химическую структуру, которая сходна с соединением, все еще содержащую по меньшей мере одну химическую группу, не присутствующую в соединении, и/или не имеющую по меньшей мере одной химической группы, которая присутствует в соединении. Соединение, с которым сравнивают производное, известно как "исходное" соединение. Обычно "производное" может быть получено из исходного соединения в одной или более стадий химической реакции.
[0036] Как используется в настоящем описании, "аналог" соединения является структурно связанным, но не идентичным соединению и проявляет по меньшей мере один эффект соединения. Соединение, с которым сравнивают аналог, известно как "исходное" соединение. Вышеупомянутые эффекты включают, без ограничения: эффект связывания с другим соединением; ингибирующий эффект, например, эффект ингибирования ферментов; токсические эффекты; эффект активации, например, эффект ферментативной активации. Не требуется, чтобы аналог проявлял указанную активность в той же степени, как исходное соединение. Соединение расценивается как аналог в контексте настоящей заявки, если оно оказывает нужный эффект в степени по меньшей мере 1% (более предпочтительно по меньшей мере 5%, более предпочтительно по меньшей мере 10%, более предпочтительно по меньшей мере 20%, более предпочтительно по меньшей мере 30%; более предпочтительно по меньшей мере 40% и более предпочтительно по меньшей мере 50%) активности исходного соединения. Следовательно, "аналог аматоксина", как используется в настоящем описании, относится к соединению, которое структурно связано с любым из α-аманитина, β-аманитина, γ-аманитина, ε-аманитина, аманина, аманинамида, амануллина и аманулловой кислоты, как показано на фиг.1, и которое проявляет по меньшей мере 1% (более предпочтительно по меньшей мере 5%, более предпочтительно по меньшей мере 10%, более предпочтительно по меньшей мере 20%, более предпочтительно по меньшей мере 30%, более предпочтительно по меньшей мере 40% и более предпочтительно по меньшей мере 50%) ингибирующей активности в отношении РНК полимеразы II млекопитающих по сравнению с по меньшей мере одним из α-аманитина, β-аманитина, γ-аманитина, ε-аманитина, аманина, аманинамида, амануллина и аманулловой кислоты. "Аналог аматоксина", подходящий для применения в настоящем изобретении, может даже проявлять большую ингибирующую активность в отношении РНК полимеразы II млекопитающих, чем любой из α-аманитина, β-аманитина, γ-аманитина, ε-аманитина, аманина, аманинамида, амануллина и аманулловой кислоты. Ингибирующая активность может быть измерена путем определения концентрации, при которой развивается 50% ингибирование (значение IC50). Ингибирующая активность против РНК полимеразы II млекопитающих может быть определена опосредованно при помощи измерения ингибирующей активности в отношении клеточной пролиферации. Подходящий анализ для оценки ингибирования пролиферации клеток описан в примерах.
[0037] "Полусинтетический аналог" относится к аналогу, который был получен химическим синтезом с использованием соединений из натуральных источников (например, растительных материалов, бактериальных культур, грибковых культур или клеточных культур) в качестве исходного материала. Обычно "полусинтетический аналог" по настоящему изобретению синтезируют, начиная с соединения, выделенного из грибов семейства Amanitaceae. Наоборот, "синтетический аналог" относится к аналогу, синтезированному посредством так называемого тотального синтеза из мелких (обычно петрохимических) строительных блоков. Обычно такой тотальный синтез проводят без помощи биологических процессов.
[0038] Функционально аматоксины определяют как пептиды или депсипептиды, которые ингибируют РНК полимеразу II млекопитающих. Предпочтительными аматоксинами являются таковые с функциональной группой (например, карбоксильной группой, аминогруппой, гидроксигруппой, тиоловой группой или тиол-захватывающей группой), которые могут взаимодействовать с линкерными молекулами или мишень-связывающими фрагментами, как определено выше. Аматоксины, которые являются предпочтительно подходящими для конъюгатов по настоящему изобретению, представляют собой α-аманитин, β-аманитин, γ-аманитин, ε-аманитин, аманин, аманинамид, амануллин и аманулловую кислоту, как показано на фиг.1, а также их соли, химические производные, полусинтетические аналоги и синтетические аналоги. Особенно предпочтительными аматоксинами для применения в настоящем изобретении являются α-аманитин, β-аманитин и аманинамид.
[0039] В определенном варианте осуществления настоящего изобретения аматоксин по (iii), где функциональной группой Y аматоксина (iii) является амногруппа.
В таком определенном варианте осуществления изобретения X* представляет собой фрагмент мочевины.
[0040] В определенном варианте осуществления настоящего изобретения указанный остаток R5, представляя собой -Ln-X*-Y:
(i) присутствует в R1;
(ii) присутствует в R3;
(iii) присутствует в R4; или
(iv) присутствует в R5.
[0041] В определенном варианте осуществления настоящего изобретения указанный аматоксин выбран из α-аманитина, β-аманитина, аманина, аманинамида или из их солей или аналогов.
[0042] В определенных вариантах осуществления изобретения линкер L (ii) или (iii) представляет собой линейную цепь между 1 и 20 атомами, независимо выбираемыми из C, O, N и S, предпочтительно между 2 и 16 атомами, более предпочтительно между 5 и 14 атомами и еще более предпочтительно между 6 и 12 атомами. В определенных вариантах осуществления изобретения по меньшей мере 60% атомов в линейной цепи являются атомами С. В определенных вариантах осуществления изобретения атомы в линейной цепи связаны простыми связями.
[0043] В определенных вариантах осуществления изобретения линкер (ii) или (iii) имеет длину до 12 атомов, предпочтительно от 2 до 10, более предпочтительно от 4 до 9 и наиболее предпочтительно от 6 до 8 атомов.
[0044] В определенных вариантах осуществления изобретения линкером L является группа алкилен, гетероалкилен, алкенилен, гетероалкенилен, алкинилен, гетероалкинилен, циклоалкилен, гетероциклоалкилен, арилен, гетероарилен, аралкилен, или гетероаралкилен, включающая от 1 до 4 гетероатомов, выбираемых из N, O и S, где указанный линкер является необязательно замещенным.
[0045] Термин "алкилен" относится к двухвалентной насыщенной углеводородной группе с линейной цепью, имеющей от 1 до 20 атомов углерода, включая группы, имеющие от 1 до 10 атомов углерода. В определенных вариантах осуществления изобретения алкиленовыми группами могут быть низшие алкиленовые группы. Термин "низший алкилен" относится к алкиленовым группам, имеющим от 1 до 6 атомов углерода, и в определенных вариантах осуществления изобретения от 1 до 5 или от 1 до 4 атомов углерода. Примеры алкиленовых групп включают, без ограничения, метилен (-CH2-), этилен (-CH2-CH2-), н-пропилен, н-бутилен, н-пентилен и н-гексилен.
[0046] Термин "алкенилен" относится к двухвалентным группам с линейными цепями, имеющими от 2 до 20 атомов углерода, где по меньшей мере одна из связей углерод-углерод является двойной связью, тогда как другие связи могут быть простыми связями или дополнительными двойными связями. Термин "алкинилен" в настоящем описании относится к группам, имеющим от 2 до 20 атомов углерода, где по меньшей мере одна связь углерод-углерод является тройной связью, тогда как другие связи могут быть простыми, двойными или дополнительными тройными связями. Примеры алкениленовых групп включают этенилен (-CH=CH-), 1-пропенилен, 2-пропенилен, 1-бутенилен, 2-бутенилен, 3-бутенилен и подобные. Примеры алкиниленовых групп включают этинилен, 1-пропинилен, 2-пропинилен и так далее.
[0047] Как используется в настоящем описании, "циклоалкилен" относится к двухвалентномму циклу, являющемуся частью любой стабильной одноциклической или полициклической системы, где такой цикл имеет от 3 до 12 атомов углерода, но не имеет гетероатома, и где такой цикл является полностью насыщенным, и термин "циклоалкенилен" относится к двухвалентному циклу, являющемуся частью любой стабильной одноциклической или полициклической системы, где такой цикл имеет от 3 до 12 атомов углерода, но не имеет гетероатома, и где такой цикл является по меньшей мере частично ненасыщенным (за исключением любого ариленового цикла). Примеры циклоалкиленов включают, без ограничения, циклопропилен, циклобутилен, циклопентилен, циклогексилен и циклогептилен. Примеры циклоалкениленов включают, без ограничения циклопентенилен и циклогексенилен.
[0048] Как используется в настоящем описании, термины "гетероциклоалкилен" и "гетероциклоалкенилен" относятся к двухвалентному циклу, являющемуся частью любой стабильной одноциклической или полициклической системы циклов, где такой цикл имеет от 3 до около 12 атомов, и где такой цикл состоит из атомов углерода и по меньшей мере одного гетероатома, предпочтительно по меньшей мере одного гетероатома, независимо выбираемого из группы, состоящей из N, O и S, с гетероциклоалкиленом, относящимся к такому циклу, который является полностью насыщенным, и гетероциклоалкениленом, относящимся к циклу, который является по меньшей мере частично ненасыщенным (за исключением любого ариленового или гетероариленового цикла).
[0049] Термин "арилен" означает двухвалентный цикл или систему циклов, являющихся частью любой стабильной одноциклической или полициклической системы, где такой цикл или система циклов имеет от 3 до 20 атомов углерода, но не имеет гетероатома, такой цикл или система циклов состоит из ароматического фрагмента, как определено по правилу электронов "4n+2", включая фенилен.
[0050] Как используется в настоящем описании, термин "гетероарилен" относится к двухвалентному циклу или системе циклов, являющейся частью любой стабильной одно- или полициклических систем, где такой цикл или система циклов имеет от 3 до 20 атомов, такой цикл или система циклов состоит из ароматического фрагмента, что определено по правилу электронов "4n+2", и содержит атом углерода и один из гетероатомов азота, серы и/или кислорода.
[0051] В контексте настоящего изобретения термин "замещенный" указывает, что один или более атомов водорода, присутствующих в основе линкера, заменены с выбором из указанной групп(ы), с условием, что указанная нормальная валентность атома или таковая соответствующего атома группы, которая является замещенной, не превышается, и что замещение приводит к стабильному соединению. Термин "необязательно замещенный" означает, что линкер является или незамещенным, или замещенным, как определено в настоящем описании, одним или более заместителями, как определено в настоящем описании. Когда заместителем является кето (или оксо, т.е. =O) группа, тио или иминогруппа или подобные, то два водорода на линкерной основе заменены. Примерные заместители включают, например, алкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, гетероциклоалкил, арил, гетероарил, аралкил, гетероаралкил, ацил, ароил, гетероароил, карбоксил, алкокси, арилокси, ацилокси, ароилокси, гетероароилокси, алкоксикарбонил, галоген, (тио)эфир, циано, фосфорил, амино, имино, (тио)амидо, сульфгидрил, алкилтио, ацилтио, сульфонил, сульфат, сульфонат, сульфамоил, сульфонамидо, нитро, азидо, галоалкил, включая перфторалкил (такой как трифторметил), галоалкокси, алкилсульфанил, алкилсульфинил, алкилсульфонил, алкилсульфониламино, арилсульфоноамино, фосфорил, фосфат, фосфонат, фосфинат, алкилкарбокси, алкилкарбоксиамид, оксо, гидрокси, меркапто, амино (необязательно моно- или дизамещенный, например, алкилом, арилом, или гетероарилом), имино, карбоксамид, карбамоил (необязательно моно- или дизамещенный, например, алкилом, арилом, или гетероарилом), амидино, аминосульфонил, ациламино, ароиламино, (тио)уреидо, арилтио)уреидо, алкил(тио)уреидо, циклоалкил(тио)уреидо, арилокси, аралкокси или -О(CH2)n-OH, -O(CH2)n-NH2, -O(CH2)nCOOH, -(CH2)nCOOH, -C(O)0(CH2)nR, -(CH2)nN(H)C(O)OR или -N(R)S(O)2R, где n равно 1-4 и R независимо выбран из водорода, -алкила, -алкенила, -алкинила, -циклоалкила, -циклоалкенила, -(C-связанного-гетероциклоалкила), -(C-связанного-гетероциклоалкенила), -арила, и -гетероарила, с возможностью множественной степени замещения. Специалист в данном области понимает, что заместители, такие как гетероциклоалкил, арил, гетероарил, алкил и др., или функциональная группы, такие как -OH, -NHR и др., могут сами по себе быть замещены, если необходимо. Также специалист в данной области понимает, что замещенные фрагменты сами по себе могут быть также замещены, если требуется.
[0052] В определенных вариантах осуществления изобретения линкер L включает фрагмент, выбираемый из: дисульфида (-S-S-), простого эфира (-O-), тиоэфира (-S-), амина (-NH-), сложного эфира (-O-C(=O)- или -C(=О)-О-), карбоксамида (-NH-C(=O)- или -C(=O)-NH-), уретана (-NH-C(=O)-O- или -0-C(=O)-NH-) и фрагмента мочевины (-NH-C(=О)-NH-).
[0053] В определенных вариантах осуществления настоящего изобретения линкер L (ii) или (iii) включает m групп, выбираемые из: алкилена, алкенилена, алкинилена, циклоалкилена, гетероалкилена, гетероалкенилена, гетероалкинилена, гетероциклоалкилена, арилена, гетероарилена, аралкилена и гетероаралкилена, где каждая группа может независимо быть замещена, линкер дополнительно включает фрагмент n, независимо выбираемый из: дисульфида (-S-S-), простого эфира (-O-), тиоэфира (-S-), амина (-NH-), сложного эфира (-O-C(=O)- или -C(=О)-О-), карбоксамида (-NH-C(=O)- или -C(=O)-NH-), уретана (-NH-C(=O)-O- или -O-C(=O)-NH-) и фрагмента мочевины (-NH-C(=O)-NH-), где m=n+1. В определенных вариантах осуществления изобретения m равно 2 и n равно 1, или m равно 3 и n равно 2. В определенных вариантах осуществления изобретения линкер включает 2 или 3 незамещенных алкиленовых группы и 1 или 2, соответственно, дисульфидных, эфирных, тиоэфирных, аминовых, сложноэфирных, карбоксамидных, уретановых или фрагментов мочевины, связывающих незамещенные алкиленовые группы.
[0054] В определенных вариантах осуществления изобретения атомы C в линейной цепи являются независимо частью необязательно замещенных метиленовых групп (-CH2-). В таких определенных вариантах осуществления изобретения необязательные заместители независимо выбраны из галогена и C1-6-алкила, предпочтительно метила.
[0055] В определенных вариантах осуществления изобретения линкер L, предпочтительно линкер L, как показано в разделе [0043], выбран из следующей группы линкеров:
сторона аматоксина: -(CH2)2- сторона мишень-связывающего фрагмента;
сторона аматоксина: -(CH2)3- сторона мишень-связывающего фрагмента;
сторона аматоксина: -(CH2)4- сторона мишень-связывающего фрагмента;
сторона аматоксина: -(CH2)5- сторона мишень-связывающего фрагмента;
сторона аматоксина: -(CH2)6- сторона мишень-связывающего фрагмента;
сторона аматоксина: -(CH2)7- сторона мишень-связывающего фрагмента;
сторона аматоксина: -(CH2)8- сторона мишень-связывающего фрагмента;
сторона аматоксина: -(CH2)9- сторона мишень-связывающего фрагмента;
сторона аматоксина: -(CH2)10- сторона мишень-связывающего фрагмента;
сторона аматоксина: -(CH2)11 сторона мишень-связывающего фрагмента;
сторона аматоксина: -(CH2)12- сторона мишень-связывающего фрагмента;
сторона аматоксина: -(CH2)16- сторона мишень-связывающего фрагмента;
сторона аматоксина: -(CH2)2-S-S-(CH2)2- сторона мишень-связывающего фрагмента;
сторона аматоксина: -(CH2)3-S-S-(CH2)2- сторона мишень-связывающего фрагмента;
сторона аматоксина: -(CH2)2-S-S-(CH2)3- сторона мишень-связывающего фрагмента;
сторона аматоксина: -(CH2)3-S-S-(CH2)3- сторона мишень-связывающего фрагмента;
сторона аматоксина: -(CH2)4-S-S-(CH2)4- сторона мишень-связывающего фрагмента;
сторона аматоксина: -(CH2)2-CMe2-S-S-(CH2)2- сторона мишень-связывающего фрагмента;
сторона аматоксина: -(CH2)2-S-S-CMe2-(CH2)2- сторона мишень-связывающего фрагмента;
сторона аматоксина: -(CH2)2-O-(CH2)2- сторона мишень-связывающего фрагмента;
сторона аматоксина: -(CH2)2-О-(CH2)2-O-(CH2)2- сторона мишень-связывающего фрагмента;
сторона аматоксина: -(CH2)2-O-(CH2)2-O-(CH2)2-O-(CH2)2- сторона мишень-связывающего фрагмента;
сторона аматоксина: -(CH2)2-О-(CH2)2-O-(CH2)2-О-(CH2)2-O-(CH2)2- сторона мишень-связывающего фрагмента;
сторона аматоксина: -CH2-C6H4-NH-Cit-Val-(CH2)6- сторона мишень-связывающего фрагмента;
сторона аматоксина: -CH2-C6H4-NH-Lys-Phe-(CH2)6- сторона мишень-связывающего фрагмента;
сторона аматоксина: -CH2-C6H4-NH-Val-Val-(CH2)6- сторона мишень-связывающего фрагмента;
сторона аматоксина: -CH2-C6H4-NH-lle-Val-(CH2)6- сторона мишень-связывающего фрагмента;
сторона аматоксина: -CH2-C6H4-NH-His-Val-(CH2)6- сторона мишень-связывающего фрагмента;
сторона аматоксина: -CH2-C6H4-NH-Met-Val-(CН2)6- сторона мишень-связывающего фрагмента; и
сторона аматоксина: -CH2-C6H4-NH-Asn-Lys-(CH2)6- сторона мишень-связывающего фрагмента.
[0056] В определенных вариантах осуществления изобретения мишень-связывающий фрагмент специфически связывается с эпитопом, который присутствует на опухолевой клетке, предпочтительно где мишень-связывающий фрагмент специфически связывается с эпитопом рецептора 2 человеческого эпидермального фактора роста (HER2).
[0057] В определенных вариантах осуществления изобретения антителом является трастузумаб или HEA125, или фрагмент антитела, включающий антиген-связывающий фрагмент трастузумаба или HEA125.
[0058] В определенных вариантах осуществления изобретения более чем одна молекула аматоксина связана с одним мишень-связывающим фрагментом. Увеличение количества молекул аматоксина на конъюгат также увеличивает токсичность. Соответственно в определенном варианте осуществления изобретения соотношение мишень-связывающего фрагмента к аматоксину составляет между одним фрагментом, связывающим мишень с между 1 и 15 молекулами аматоксина, предпочтительно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 или 15. Для целей расчета соотношения в случае димеров антител, таких как IgG, димер расценивается как один мишень-связывающий фрагмент.
[0059] В определенных вариантах осуществления изобретения мишень-связывающий фрагмент выбран из группы, состоящей из:
(i) антитела или его антиген-связывающего фрагмента;
(ii) антитело-подобного белка; и
(iii) аптамера нуклеиновой кислоты.
[0060] В определенных вариантах осуществления изобретения антитело или его антиген-связывающий фрагмент выбран из диатела, тетратела, нанотела, химерного антитела, деиммунизированного антитела, гуманизированного антитела или человеческого антитела.
[0061] В определенных вариантах осуществления изобретения антиген-связывающий фрагмент выбран из группы, состоящей из Fab, F(ab')2, Fd, Fv, одноцепочечного Fv и дисульфидно-связанных Fv (dsFv).
[0062] В другом аспекте настоящее изобретение относится к аматоксину по настоящему изобретению для применения в качестве лекарственного препарата.
[0063] В другом аспекте настоящее изобретение относится к аматоксину по настоящему изобретению для применения в лечении рака у пациента, предпочтительно когда рак выбран из группы, состоящей из рака молочной железы, рака поджелудочной железы, холангиокарциномы, колоректального рака, рака легкого, рака предстательной железы, рака яичника, рака предстательной железы, рака желудка, рака почки, злокачественной меланомы, лейкоза и злокачественной лимфомы.
[0064] Как используется в настоящем описании, "пациент" означает любое млекопитающее или птицу, которые могут получить пользу от лечения конъюгатами токсина с мишень-связывающим фрагментом. Предпочтительно "пациент" выбран из группы, состоящей из лабораторных животных (например, мыши или крысы), домашних животных (включая морских свинок, кролика, кур, свиней, овец, коз, коров, лошадей, ослов, кошек или собак) или приматов, включая человека. Особенно предпочтительно, чтобы "пациентом" был человек.
[0065] Как используется в настоящем описании, "лечить", "лечение" или "терапия" заболевания или расстройства означает одно или более из следующего: (a) уменьшение тяжести расстройства; (b) ограничение или предотвращение развития характерных симптомов расстройств(а), которое лечат; (c) ингибирование ухудшения характерных симптомов расстройств(а), которое лечат; (d) ограничение или предотвращение рецидива расстройств(а) у пациентов, которые ранее имели расстройство(а); и (e) ограничение или предотвращение рецидива симптомов у пациентов, которые ранее имели симптомы расстройств(а).
[0066] Как используется в настоящем описании, лечение может включать введение конъюгата или фармацевтической композиции по настоящему изобретению пациенту, где "введение" включает введение in vivo, а также введение непосредственно в ткани ex vivo, например, в протезы вен.
[0067] В определенных вариантах осуществления изобретения используют терапевтически эффективное количество конъюгата по настоящему изобретению.
[0068] "Терапевтически эффективное количество" представляет собой количество терапевтического средства, достаточное для достижения желаемой цели. Эффективное количество заданного терапевтического средства варьируется в зависимости от факторов, таких как природа средства, путь введения, размер и вид животного, получающего терапевтическое средство и цели введения. Эффективное количество в каждом отдельном случае может быть эмпирически определено специалистом в области техники в соответствии с установленными методами в области техники.
[0069] В другом аспекте настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, включающей аматоксин по настоящему изобретению и дополнительно включающей один или более фармацевтически приемлемых разбавителей, носителей, вспомогательных веществ, наполнителей, вяжущих веществ, глидантов, дезинтегрирующих веществ, адсорбентов и/или консервантов.
[0070] "Фармацевтически приемлемый" означает одобренный регуляторными органами Федерального или государственного правительства или перечисленный в Фармакопее США или другой общепринятой фармакопее для применения у животных и предпочтительно у людей.
[0071] В определенных вариантах осуществления изобретения фармацевтическая композиция используется в форме системно вводимого лекарственного препарата. Они включают парентеральные средства, которые включают, среди остальных, инъекции и инфузии. Инъекционные препараты рецептируют или в форме ампул или в виде так называемых готовых к применению инъекционных препаратов, например, готовых к применению шприцев или одноразовых шприцев и, кроме этого, в флаконах с прокалываемой пробкой для многократного использования. Введение инъекционных препаратов может осуществляться в форме подкожного (п/к), внутримышечного (в/м), внутривенного (в/в) или внутрикожного (в/к) применения. В частности возможно получать соответственно подходящие инъекционные препараты в виде суспензии кристаллов, растворов, системы наночастиц или коллоидных диспергированных систем, как, например, гидрозоли.
[0072] Инъекционные композиции могут дополнительно быть получены в виде концентратов, которые могут быть растворены или диспергированы водными изотоничными разбавителями. Инфузия также может быть получена в форме изотонических растворов, жирных эмульсий, композиций липосом и микроэмульсий. Подобно инъекционным препаратам, инфузионные композиции также могут быть получены в форме концентратов для разведения. Инъекционные композиции также могут применяться в форме постоянных инфузий или в стационарной или в амбулаторной терапии, например, в качестве мини-помп.
[0073] Возможно добавлять композиции парентеральных лекарственных средств, например, альбумин, плазму, расширитель, поверхностно-активные вещества, органические разбавители, вещества, влияющие на рН, комплексообразующие вещества или полимерные вещества, в частности, в виде веществ, для воздействия на адсорбцию конъюгатов токсина и мишень-связывающего фрагмента по изобретению белками или полимерами, или они могут быть добавлены с целью снижения адсорбции конъюгатов токсина и мишень-связывающего фрагмента по изобретению к материалам, таким как инъекционные средства или упаковочные материалы, например, пластик или стекло.
[0074] Аматоксины по настоящему изобретению, включающие мишень-связывающий фрагмент, могут быть связаны с микроносителями или наночастицами в парентеральных препаратах, как, например, с мелко диспергированными частицами на основе поли(мет)акрилатов, полилактатов, полигликолатов, полиаминокислот или полиэфируретанов. Парентеральные композиции также могут быть модифицированы как препараты депо, например, на основе "системы доставки на основе множественных частиц", если конъюгаты токсина и мишень-связывающего фрагмента по изобретению вводят в мелко измельченной, диспергированной и суспендированной форме, соответственно, или в виде суспензии кристаллов в лекарственном препарате или на основе "системы доставки на основе одной частицы", если конъюгаты токсина и мишень-связывающего фрагмента по изобретению заключены в композицию, например, в таблетку или стержень, который впоследствии имплантируют. Такие импланты или препараты депо в композициях на основе одной частицы и множества частиц часто состоят из так называемых биоразлагаемых полимеров, как, например, полиэфиры молочной кислоты и гликолевой кислоты, полиэфируретаны, полиаминокислоты, поли(мет)акрилаты или полисахариды.
[0075] Адъювантами и носителями, добавляемыми во время получения фармацевтических композиций по настоящему изобретению, рецептируемых в виде парентеральных препаратов, предпочтительно являются стерильная вода (вода стерильная), вещества, влияющие на значение рН, как, например, органические или неорганические кислоты или основания, а также их соли, буферные вещества для регуляции значений рН, вещества для изотонизации, как, например, хлорид натрия, гидрокарбонат натрия, глюкоза и фруктоза, тенсиды и поверхностно-активные вещества, как, например, частичные эфиры жирных кислот полиоксиэтиленсорбита (например, Tween®) или, например, сложные эфиры жирной кислоты и полиоксиэтиленов (например, Cremophor®), жирные масла, например, арахисовое масло, соевое масло или касторовое масло, синтетические эфиры жирных кислот, как, например, этилолеат, изопропилмиристат и нейтральное масло (например, Miglyol), а также полимерные добавки, как, например, желатин, декстран, поливинилпирролидон, добавки, которые увеличивают растворимость органических растворителей, как, например, пропиленгликоль, этанол, Ν,Ν-диметилацетамид, пропиленгликоль или комплексообразующие вещества, как, например, цитрат и мочевина, консерванты, как, например, гидроксипропиловый эфир и метиловый эфир бензойной кислоты, бензиловый спирт, антиоксиданты, как, например, сульфит натрия, и стабилизаторы, как, например, EDTA.
[0076] При рецептировании фармацевтических композиций по настоящему изобретению в виде суспензий в предпочтительном варианте осуществления изобретения добавляют загустители для предотвращения оседания конъюгатов токсина и мишень-связывающих фрагментов по изобретению, тенсиды и полиэлектролиты для обеспечения ресуспендирования осадка и/или комплексообразующие добавки, как, например, EDTA. Также возможно получать комплексы активного ингредиента с различными полимерами. Примерами таких полимеров являются полиэтиленгликоль, полистирол, карбоксиметилцеллюлоза, Pluronics® или сложные эфиры жирных кислот и полиэтилен сорбита. Конъюгаты токсина и мишень-связывающих фрагментов по изобретению также могут быть включены в жидкие композиции в форме соединений включения, например, с циклодекстринами. В определенных вариантах осуществления изобретения диспергирующие вещества могут быть добавлены в виде дополнительных добавок. Для получения лиофилизатов могут быть использованы зависающие вещества, как маннит, декстран, сахароза, человеческий альбумин, лактоза, PVP или множество желатинов.
[0077] В определенных вариантах осуществления настоящего изобретения X представляет собой производное карбаминовой кислоты -NH-C(O)-Z, где Z является уходящей группой, которая может быть заменена нуклеофильной группой мишень-связывающего фрагмента, предпочтительно первичным амином мишень-связывающего фрагмента.
[0078] В определенных вариантах осуществления изобретения Z выбран из: -бутилокси, -сукцинимидилокси, -1-O-сукцинимидилокси-3-сульфоната (-сульфо-NHS), -О-(4-нитрофенилокси), -O-(3-нитрофенилокси), -O-(2,4-динитрофенилокси), -O-(2,4-дихлор-6-нитрофенилокси), -пентафторфенилокси, -пентахлорфенилокси, -O-(2,4,5-трихлорфенилокси), -O-(3,4-дигидро-3-гидрокси-4-оксо-1,2,3-бензотриазин-3-ил), -O-(эндо-1-гидрокси-5-норборнен-2,3-дикарбоксимид-1-ил), -1-фталимидоилокси, -1-бензотриазолилокси, -1-(7-азабензотриазолил)окси и -N-имидазолила.
[0079] В другом аспекте настоящее изобретение относится к способу синтеза аматоксина по настоящему изобретению, включающему стадию взаимодействия аматоксина формулы II
где:
R2 выбран из S=О, SО2 и S;
R3 выбран из NHR5 и OR5;
R4 выбран из H, OR5 и OC1-6-алкила;
R6 выбран из C1-6-алкилен-R5, циклоалкилен-R5, гетероциклоалкилен-R5, арилен-R5 и гетероарилен-R5;
R7 и R8 независимо выбраны из H, C1-6-алкилен-R5, циклоалкилен-R5, гетероциклоалкилен-R5, арилен-R5 и гетероарилен-R5;
где один из R5 представляет собой -Ln-X, где L является линкером, n выбран из 0 и 1, и X представляет собой химический фрагмент, который может быть связан с нацеливающим фрагментом, и где оставшиеся R5 являются H;
с (i) Ν,Ν'-дисукцинимидилкарбонатом (DSC), (ii) тиокарбонилирующим реагентом, предпочтительно тиофосгеном, 1,1'-тиокарбонилдиимидазолом или 1,1'-тиокарбонилди-2(1H)-пиридоном; (iii) иминокарбонилирующим реагентом, предпочтительно дихлоридом изоцианида или фенилизотиоцианатом, или (iv) альдегидом, кетоном или ациклическим ацеталем.
ПРИМЕРЫ
Пример 1: синтез конъюгированных молекул аматоксина
1.1 Синтез 6'-N-Boc-(6-аминогексил)-α-аманитина HDP 30.0132
[0080] В атмосфере аргона и при комнатной температуре 180 мг (196 мкмоль) высушенного в вакууме α-аманитина растворяли в 5000 мкл сухого диметилсульфоксида (ДМСО). Добавляли N-Boc-аминогексилбромид (439 мг, 8 эквивалентов) и 1 M гидроксид натрия (215,5 мкл, 1,1 экв.). Через 2 ч при комнатной температуре реакционную смесь подкисляли до pH=5 с помощью 100 мкл 1 M раствора уксусной кислоты в ДМСО. Летучие вещества испаряли в вакууме, и остаток растворяли в 500 мкл метанола и добавляли к 40 мл ледяного метил-трет-бутилового эфира (MTBE). Осадок центрифугировали и промывали путем ресуспендирования в 40 мл MTBE. Осадок забирали в 4000 мкл метанола, фильтровали и очищали в порциях по 500 мкл препаративной ВЭЖХ на колонке C18 (250×21,2 мм, Luna RP-18, 10 мкм, 100 Å). Растворитель A: вода, растворитель B: метанол; градиент: 0 мин 5% B; 5 мин 5% B; 20 мин 100% B; 25 мин 100% B; 27 мин 5% B; 35 мин 5% B; ток 30 мл/мин. Фракции с временем удержания 18,4-19,1 мин собирали, и растворители выпаривали до 126 мг (57%) HDP 30,0132 в виде бесцветного твердого вещества.
[0081] МС (ESI+) 1118,5 [M+H]+, 1140,5 [M+Na]+.
[0082] Путем выпаривания фракций с временем удержания 12,8-13,4 мин могут быть восстановлены 35 мг (19%) α-аманитина.
1.2 Синтез 6'-(6-аминогексил)-α-аманитина HDP 30.0134
[0083] 6'-NH-boc-6-аминогексил-α-аманитин (HDP 30.0132, 81,82 мг, 73,17 мкмоль) растворяли в 300 мкл трифторуксусной кислоты (TFA). Реакционную смесь перемешивали в атмосфере аргона при комнатной температуре. Через 2 мин кислоту удаляли в вакууме при 20°C, и следы TFA удаляли посредством совместного выпаривания с 2×3 мл сухого толуола. Остаток растворяли в 3000 мкл воды/метанола 95:5, содержащих 0,05% TFA, и очищали в порциях 500 мкл препаративной ВЭЖХ на колонке C18 (250×21,2 мм, Luna RP-18, 10 мкл, 100 Å). Растворитель A: вода (содержащая 0,05% TFA), растворитель B: метанол (содержащий 0,05% TFA). Градиент: 0 мин 5% B; 5 мин 5% B; 20 мин 100% B; 25 мин 100% B; 27 мин 5% B; 35 мин 5% B; ток 30 мл/мин. Фракцию с временем удержания 13,4-13,9 мин собирали, и растворители выпаривали для получения 75,52 мг (89%) HDP 30.0134 в виде бесцветного твердого вещества.
[0084] HR-МС (ESI+) 1018,46749 рассчитано 1018,46679 для C45H68N11O14S [M+H]+
1.3 Синтез 6'-(6-(сукцинимидилоксикарбонил)-аминогексил-α-аманитина HDP 30.0643
[0085] HDP 30.0134 (160,52 мг, 141,78 мкмоль) растворяли в 1000 мкл сухого диметилформамида (DMF) и 363,19 мг (10 экв.) Ν,Ν'-дисукцинимидил карбоната (DSC) в 4000 мкл сухого DMF добавляли одновременно с последующими 39,3 мкл (2 экв.) триэтиламина, и смесь перемешивали при комнатной температуре. Через 30 мин реакционную смесь добавляли по каплям в равных частях в две центрифужные пробирки, заполненные 40 мл ледяного MTBE. Полученный осадок центрифугировали и промывали ресуспендированием в 40 мл MTBE каждая. Осадки сушили в вакууме, растворяли и комбинировали в 2400 мкл 95% метанола, содержащего 0,05% TFA, и очищали в порциях 400 мкл препаративной ВЭЖХ на колонке C18 (250×21,2 мм, Luna RP-18, 10 пм, 100 Å). Растворитель A: вода (содержащая 0,05% TFA). Растворитель B: метанол (содержащий 0,05% TFA). Градиент: 0 мин 5% B; 5 мин 5% B; 20 мин 100% B; 25 мин 100% B; 27 мин 5% B; 35 мин 5% B; ток 30 мл/мин. Фракцию с временем удержания 15,4-16,5 мин собирали, и растворители выпаривали, и остаток лиофилизировали из 8 мл трет-бутанола до 151,46 мг (92%) HDP 30.0643 в виде белого порошка.
[0086] МС (ESI+) 1159,1 [M+H], 1181,0 [M+Na]+.
1.4 Синтез производного циклического карбоната HDP 30.1165
[0087] 10,23 мг (9,04 мкмоль) HDP 30.0134 растворяли в 500 мкл сухого диметилформамида (DMF) и одновременно добавляли 452 мкл (10 эквивалентов) 0,2 M раствора Ν,Ν'-дисукцинимидилкарбоната (DSC) в сухом DMF. Добавляли триэтиламин (2,51 мкл, 2 эквивалента), и смесь перемешивали в течение 90 мин при комнатной температуре. Впоследствии летучие вещества удаляли в вакууме при температуре бани 40°C. Остаток растворяли в 500 мкл 95% метанола, содержащего 0,05% TFA, и очищали препаративной ВЭЖХ на колонке C18 (250×21,2 мм, Luna RP-18, 10 пм, 100 Å). Растворитель A: вода (0,05% TFA). Растворитель B: метанол (0,05% TFA). Градиент: 0 мин 5% B; 5 мин 5% B; 20 мин 100% B; 25 мин 100% B; 27 мин 5% B; 35 мин 5% B; ток 30 мл/мин. Фракцию с временем удержания 15,4-16,5 мин собирали и растворители выпаривали, и остаток лиофилизировали из 2 мл трет-бутанола до 9,06 мг (85%) HDP 30.1065 в виде белого порошка.
[0088] МС (ESI+) 1185,10 [M+H]+, 1207,07 [M+Na]+.
1.5 Синтез 6'-N-Boc-(6-аминогексил)-S-деокси-α-аманитина HDP 30.0741
[0089] К раствору HDP 30.0132 (18,64 мг, 16,67 мкмоль) в 2 мл этанола добавляли молибденгексакарбонил (51 мг, 11,6 эквивалентов), и смесь нагревали в герметичной пробирке до 75°C в течение 25 ч. Впоследствии летучие вещества удаляли в вакууме, и остаток забирали в 2 мл метанола. Нерастворимый материал удаляли центрифугированием, и надосадочную жидкость концентрировали до 500 мкл и очищали препаративной ВЭЖХ на колонке C18 (250×21,2 мм, Luna RP-18, 10 пм, 100 Å). Растворитель A: вода, растворитель B: метанол; градиент: 0 мин 5% B; 5 мин 5% B; 20 мин 100% B; 25 мин 100% B; 27 мин 5% B; 35 мин 5% B; ток 30 мл/мин. Фракцию с временем удержания 17,9-18,6 мин собирали, и растворители выпаривали до 10,95 мг (60%) HDP 30.0741 в виде бесцветного твердого вещества.
[0090] МС (ESI+) 1102,3 [M+H], 1124,5 [M+Na]+.
1.6 Синтез 6'-(6-аминогексил)-S-деокси-α-аманитина HDP 30.0743
[0091] HDP 30.0741 (10,95 мг, 9,93 мкмоль) растворяли в 500 мкл TFA и инкубировали в течение 2 мин при комнатной температуре. Затем летучие вещества выпаривали в вакууме, и следы TFA удаляли совместным выпариванием с 2×1 мл сухого толуола. 12,38 мг сырого продукта использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.
[0092] МС (ESI+) 1002,4 [M+H]+, 1024,3 [M+Na]+.
1.7 Синтез 6'-(6-(сукцинимидилоксикарбонил)-аминогексил-S-дезокси-α-аманитина HDP 30.1033
[0093] HDP 30.0743 (12,38 мг, 10,51 мкмоль) растворяли в 500 мкл сухого диметилформамида (DMF), и сразу добавляли 525 (10 экв.) 0,2 н. раствора Ν,Ν'-дисукцинимидил карбоната (DSC) в сухом DMF с последующими 2,91 мкл (2 экв.) триэтиламина, и смесь перемешивали при комнатной температуре. Через 30 мин реакционную смесь добавляли по каплям в центрифужные пробирки, заполненные 10 мл ледяного MTBE. Полученный осадок центрифугировали и промывали ресуспендированием в 10 мл MTBE каждый. Осадок сушили в вакууме, растворяли в 500 мкл 95% метанола, содержащего 0,05% TFA, и очищали препаративной ВЭЖХ на колонке C18 (250×21,2 мм, Luna RP-18, 10 пм, 100 Å). Растворитель A: вода (содержащая 0,05% TFA). Растворитель B: метанол (содержащий 0,05% TFA). Градиент: 0 мин 5% B; 5 мин 5%; B 20 мин 100% B; 25 мин 100% B; 27 мин 5% B; 35 мин 5% B; ток 30 мл/мин. Фракцию с временем удержания 16,0-17,2 мин собирали, и растворители выпаривали, и остаток лиофилизировали из 3 мл трет-бутанола до 10,93 мг (91%) HDP 30.1033 в виде белого порошка.
[0094] МС (ESI+) 1143,3 [M+H]+.
1.8 Синтез производного циклического карбоната HDP 30.1036
[0095] Сырой HDP 30.0743 (12,38 мг, 9,93 мкмоль) растворяли в 500 мкл сухого диметилформамида (DMF), и сразу добавляли 497 мкл (10 эквивалентов) 0,2 M раствора Ν,Ν'-дисукцинимидил карбоната в сухом DMF. Добавляли триэтиламин (2,75 мкл, 2 эквивалента), и смесь перемешивали в течение 90 мин при комнатной температуре. Впоследствии летучие вещества удаляли в вакууме при температуре бани 40°C. Остаток растворяли в 500 мкл 95% метанола, содержащего 0,05% TFA, и очищали препаративной ВЭЖХ на колонке C18 (250×21,2 мм, Luna RP-18, 10 мкм, 100 Å). Растворитель A: вода (0,05% TFA). Растворитель B: метанол (0,05% TFA). Градиент: 0 мин 5% B; 5 мин 5% B; 20 мин 100% B; 25 мин 100% B; 27 мин 5% B;, 35 мин 5% B; ток 30 мл/мин. Фракцию с временем удержания 15,9-17,2 мин собирали, и растворитель выпаривали, и остаток лиофилизировали из 3 мл трет-бутанола до 10,06 мг (87%) HDP 30.1036 в виде белого порошка.
[0096] МС (ESI+) 1191,08 [M+Na]+.
Пример 2: синтез конъюгатов антител аматоксина - конъюгация трастузумаба с пре-активированными аматоксин-NHS-карбаматами
1.1 Трастузумаб-30.0643
[0097] 1,15 мг преактивированного производного аматоксин-линкера HDP 30.0643 растворяли в 230 мкл сухого диметилсульфоксида (ДМСО), и добавляли к 3,33 мл раствора антитела 6 мг/мл в фосфатном буферном растворе (PBS, pH=7,4). Полученный раствор встряхивали при 4°C в течение ночи и разделяли посредством гель-фильтрации Sephadex G-25 (колонка PD-10; GE Healthcare Life Sciences). Колонки PD-10 предварительно промывали 6×5 мл раствора PBS, pH=7,4. Фракции конъюгатов определяли посредством раствора Брэдфорда и комбинировали в один раствор. Раствор затем диализировали в кассете Slide-A-Lyzer (Thermo Scientific; 0,5-3 мл; 20000 MWCO) против 1 л PBS pH 7,4 в течение ночи при 4°C. Концентрацию белка определяли посредством RotiQuant-Assay (Carl Roth; Germany). Концентрацию ADC повышали в центрифужных фильтрах Amicon Ultra 50Ό00 MWCO (Millipore; центрифугирование при 4000 об/мин) и наконец доводили до 3 мг/мл. Аманитиновую нагрузку трастузумаба определяли посредством УФ поглощения при A=280 нм и A=310 нм.
1.2 Трастузумаб-30.1033
[0098] 2,00 мг преактивированного производного аматоксина-линкера HDP 30.1033 растворяли в 400 мкл сухого диметилсульфоксида (ДМСО), и добавляли к 2,62 мл раствора антитела 10 мг/мл в фосфатном буферном растворе (PBS, pH=7,4). Полученный раствор встряхивали при 4°C в течение ночи и разделяли посредством гель-фильтрации Sephadex G-25 (колонка PD-10; GE Healthcare Life Sciences). Колонки PD-10 предварительно промывали 6×5 мл раствора PBS, pH=7,4. Фракции конъюгатов определяли посредством раствора Брэдфорда и комбинировали в один раствор. Затем раствор диализировали в кассете Slide-A-Lyzer (Thermo Scientific; 0,5-3 мл; 20000 MWCO) против 1 л PBS pH 7,4 в течение ночи при 4°C. Концентрацию белка определяли посредством RotiQuant-Assay (Carl Roth; Germany). Концентрацию ADC увеличивали в центрифужных фильтрах Amicon Ultra 50000 MWCO (Millipore; центрифугирование при 4000 об/мин) и наконец доводили до 3 мг/мл. Аманитиновую нагрузку трастузумаба определяли посредством определения УФ абсорбции при A=280 нм и A=310 нм.
1.3 Трастузумаб-30.1036
[0099] 2,00 мг преактивированного производного аматоксина-линкера HDP 30.1036 растворяли в 400 мкл сухого диметилсульфоксида (ДМСО), и добавляли к 2,57 мл раствора антитела 10 мг/мл в фосфатном буферном растворе (PBS, pH=7,4). Полученный раствор встряхивали при 4°C в течение ночи и разделяли гель-фильтрацией Sephadex G-25 (колонка PD-10; GE Healthcare Life Sciences). Колонки PD-10 предварительно промывали 6×5 мл PBS растворами, pH=7,4. Фракции конъюгата определяли посредство раствора Брэдфорда и комбинировали в один раствор. Затем раствор диализировали в кассете Slide-A-Lyzer (Thermo Scientific; 0,5-3 мл; 20000 MWCO) против 1 л PBS pH 7,4 в течение ночи при 4°C. Концентрацию белка определяли посредством RotiQuant-Assay (Carl Roth; Germany). Концентрацию ADC увеличивали в центрифужных фильтрах Amicon Ultra 50Ό00 MWCO (Millipore; центрифугирование при 4000 об/мин) и наконец доводили до 3 мг/мл. Аманитиновую нагрузку трастузумаба определяли посредством УФ абсорбции при A=280 нм и A=310 нм.
1.4 Трастузумаб-30.1165
[0100] 0,90 мг преактивированного производного аматоксина-линкера HDP 30.1165 растворяли в 180 мкл сухого диметилсульфоксида (ДМСО), и добавляли к 2,00 мл раствора антитела 5 мг/мл в фосфатном буфером растворе (PBS, pH=7,4). Полученный раствор встряхивали при 4°C в течение ночи и разделяли посредством гель-фильтрации Sephadex G-25 (колонка PD-10; GE Healthcare Life Sciences). Колонки PD-10 предварительно промывали 6×5 мл PBS растворами, pH=7,4. Фракции конъюгата определяли посредством раствора Брэдфорда и комбинировали в один раствор. Раствор затем диализировали в кассете Slide-A-Lyzer (Thermo Scientific; 0,05-3 мл; 20000 MWCO) против 1 л PBS pH 7,4 в течение ночи при 4°C. Концентрацию белка определяли посредством RotiQuant-Assay (Carl Roth; Germany). Концентрацию ADC увеличивали в центрифужных фильтрах Amicon Ultra 50Ό00 MWCO (Millipore; центрифугирование при 4000 об/мин) и наконец доводили до 3 мг/мл. Аманитиновую нагрузку трастузумаба определяли путем определения УФ абсорбции при A=280 нм и A=310 нм.
Антитело | Производное токсина-линкера | Конъюгат | Нагрузка |
Трастузумаб | HDP 30.1036 | Her-30.1036 | 4,0 |
Трастузумаб | HDP 30.0643 | Her-30.0643 | 4,4 |
Трастузумаб | HDP 30.1165 | Her-30.1165 | 5,0 |
Трастузумаб | HDP 30.1033 | Her-30.1033 | 3,9 |
Пример 3: цитотоксичность Her-30.0643 [4,4], Her-30.1033 [3,9], Her-30.1036 [4,0] и Her-30.1165 [5,0] на HER2-позитивных опухолевых клеточных линиях in vitro
[0101] Цитотоксическую активность конъюгатов трастузумаба-аматоксина оценивали in vitro с клеточными линиями HER2-положительных опухолей SK-OV-3 (яичника), SKBR-3 (молочной железы) и JIMT-1 (молочной железы) и анализом включения хемилюминесцента BrdU (Roche Diagnostics). Выживаемость клеток определяли после 72 ч инкубации с различными концентрациями конъюгатов при 37°C и 5% CO2 посредством измерения фиксированных и проницаемых клеток с помощью анти-BrdU-HRP антитела в счетчике микропланшетов BMG Labtech Optima. Значение EC50 дозозависимой кривой рассчитывали посредством программного обеспечения Graphpad Prism 4.0.
[0102] Значения EC50 конъюгатов трастузумаба-аматоксина в различных Her2 положительных клеточных линиях (смотрите также фиг.2-5):
Конъюгат | SKOV-3 | SKBR-3 | JIMT-1 |
Her-30.1036 [4,0] | 3,8×10-11 М | 3,3×10-11 М | 2,1×10-9 М |
Her-30.0643 [4,4] | 2,9×10-11 М | 2,0×10-11 М | 1,0×10-9 М |
Her-30.1165 [5,0] | 1,1×10-10 М | - | - |
Her-30.1033 [3,9] | 2,7×10-11 М | 1,3×10-11 М | 7,9×10-9 М |
Пример 4: in vivo эффективность Her-30.0643 [4,4] и Her-30.1036 [4,0] в трастузумаб-резистентной модели ксенотрансплантата JIMT-1
[0103] Покупали интактных самок атимических мышей NMRI nu/nu в возрасте шести недель (Janvier) и случайно делили на три группы по восемь мышей в каждой. 5×106 JIMT-1 клеток вводили п/к в бок каждой мыши. Конъюгаты трастузумаба-аматоксина Her-30.0643 [4,4] и Her-30.1036 [4,0] вводили однократно в/в в дозе 30 мкг/кг и 150 мкг/кг в отношении аманитина в день 14 после инокуляции опухоли, тогда как отрицательному контролю вводили носитель (PBS буфер). Объем опухоли записывали (смотрите фиг.6). Оба конъюгата показали высокую противоопухолевую активность, приводя к полной редукции опухоли при 30 мкг и 150 мкг/кг.
Пример 5: переносимость Her-30.0643 [4,4] и Her-30.1036 [4,0] у мышей
[0104] Покупали семинедельных интактных самок атимичных мышей NMRI nu/nu (Janvier) и случайно делили на три группы по три мыши в каждой группе. Конъюгаты герцептина-аматоксина Her-30.0643 [4,4] и Her-30.1036 [4,0] вводили однократно в/в в дозе 300 мкг/кг, тогда как отрицательному контролю вводили носитель (PBS буфер). Массу мышей записывали (смотрите фиг.7). Все животные, получавшие Her-30.0643 [4,4], умерли в течение девяти дней после применения, тогда как все животные, получавшие Her-30.1036 [4,0], продемонстрировали массу тела, сравнимую с группой отрицательного контроля после дня 14.
Claims (45)
1. Аматоксин формулы I
где:
R1 выбран из C=O, C=S, C=NR6 и CR7R8;
R2 выбран из S=O, SO2 и S;
R3 выбран из NHR5 и OR5;
R4 выбран из H, OR5 и OC1-6-алкила;
R6 выбран из C1-6-алкилен-R5, циклоалкилен-R5, гетероциклоалкилен-R5, арилен-R5 и гетероарилен-R5;
R7 и R8 независимо выбраны из H, C1-6-алкилен-R5, циклоалкилен-R5, гетероциклоалкилен-R5, арилен-R5 и гетероарилен-R5;
где:
(i) каждый R5 представляет собой H;
(ii) один из R5 представляет собой -Ln-X, где L является линкером, n выбран из 0 и 1 и X представляет собой химический фрагмент, который может быть связан с нацеливающим фрагментом, и где оставшиеся R5 являются H; или
(iii) один из R5 представляет собой -Ln-X*-Y, где L является линкером, n выбран из 0 и 1, Y представляет собой нацеливающий фрагмент и X* является химическим фрагментом, образующимся в результате связывания X с функциональной группой Y, и где оставшиеся R5 являются H.
2. Аматоксин по п.1(iii), где указанной функциональной группой Y является аминогруппа.
3. Аматоксин по п.2, где X* является фрагментом мочевины.
4. Аматоксин по любому из пп.1(iii), 2 и 3, где указанный остаток R5, представляя собой -Ln-X*-Y, является:
(i) присутствующим в R1;
(ii) присутствующим в R3;
(iii) присутствующим в R4 или
(iv) присоединенным к N1’.
5. Аматоксин по любому одному из пп.1, 2 или 3, где n равно 1 и где линкер имеет длину до 12 атомов, предпочтительно от 2 до 10, более предпочтительно от 4 до 9 и наиболее предпочтительно от 6 до 8 атомов.
6. Аматоксин по любому одному из пп.1, 2 или 3, где линкером L является группа алкилен, гетероалкилен, алкенилен, гетероалкенилен, алкинилен, гетероалкинилен, циклоалкилен, гетероциклоалкилен, арилен, гетероарилен, аралкилен или гетероаралкилен, состоящая из 1-4 гетероатомов, выбираемых из N, O и S, где указанный линкер является необязательно замещенным.
7. Аматоксин по любому одному из пп.1, 2 или 3, где линкер L включает фрагмент, выбираемый из: дисульфида, простого эфира, тиоэфира, амина, сложного эфира, карбоксамида, уретана и фрагмента мочевины.
8. Аматоксин по любому одному из пп.1, 2 или 3, где мишень-связывающий фрагмент специфически связывается с эпитопом, который присутствует на опухолевой клетке, предпочтительно где мишень-связывающий фрагмент специфически связывается с эпитопом рецептора 2 человеческого эпидермального фактора роста (HER2).
9. Аматоксин по любому одному из пп.1, 2 или 3, где мишень-связывающий фрагмент выбран из группы, состоящей из:
(i) антитела или его антиген-связывающего фрагмента;
(ii) антитело-подобного белка и
(iii) аптамера нуклеиновой кислоты.
10. Аматоксин по п.9, где антитело или его антиген-связывающий фрагмент выбран из диатела, тетратела, нанотела, химерного антитела, деиммунизированного антитела, гуманизированного антитела или человеческого антитела.
11. Аматоксин по п. 9, где антиген-связывающий фрагмент выбран из группы, состоящей из Fab, F(ab')2, Fd, Fv, одноцепочечного Fv и дисульфидно-связанного Fv (dsFv).
12. Аматоксин по любому одному из пп.1, 2, 3, 10 или 11 для применения в качестве лекарственного препарата для лечения рака.
13. Аматоксин по любому одному из пп.1, 2, 3, 10 или 11 для применения в лечении рака у пациента, предпочтительно когда рак выбран из группы, состоящей из рака молочной железы, рака поджелудочной железы, холангиокарциномы, колоректального рака, рака легкого, рака предстательной железы, рака яичника, рака желудка, рака почки, злокачественной меланомы, лейкоза и злокачественной лимфомы.
14. Фармацевтическая композиция для лечения рака, включающая терапевтически эффективное количество аматоксина по любому из пп.1(iii)-11 и дополнительно включающая один или более фармацевтически приемлемых разбавителей, носителей, вспомогательных веществ, наполнителей, вяжущих веществ, смазывающих веществ, глидантов, дезинтегрирующих веществ, адсорбентов и/или консервантов.
15. Аматоксин по п.1(ii), где X представляет собой производное карбамовой кислоты -NH-C(O)-Z, где Z представляет собой уходящую группу, которая может быть заменена нуклеофильной группой мишень-связывающего фрагмента, предпочтительно первичным амином мишень-связывающего фрагмента.
16. Аматоксин по п.15, где Z выбран из: -бутилокси, -сукцинимидилокси, -1-O-сукцинимидилокси-3-сульфоната (-сульфо-NHS), -O-(4-нитрофенилокси), -O-(3-нитрофенилокси), -O-(2,4-динитрофенилокси), -O-(2,4-дихлор-6-нитрофенилокси), -пентафторфенилокси, -пентахлорфенилокси, -О-(2,4,5-трихлорфенилокси), -O-(3,4-дигидро-3-гидрокси-4-оксо-1,2,3-бензотриазин-3-ил), -O-(эндо-1-гидрокси-5-норборнен-2,3-дикарбоксимид-1-ил), -1-фталимидоилокси, -1-бензотриазолилокси, -1-(7-азабензотриазолил)окси и -N-имидазолила.
17. Способ синтеза аматоксина по п.15 или 16, включающий стадию реакции аматоксина формулы II
где:
R2 выбран из S=O, SO2 и S;
R3 выбран из NHR5 и OR5;
R4 выбран из H, OR5 и OC1-6-алкила;
R6 выбран из C1-6-алкилен-R5, циклоалкилен-R5, гетероциклоалкилен-R5, арилен-R5 и гетероарилен-R5;
R7 и R8 независимо выбраны из H, C1-6-алкилен-R5, циклоалкилен-R5, гетероциклоалкилен-R5, арилен-R5 и гетероарилен-R5;
где один из R5 представляет собой -Ln-X, где L является линкером, n выбран из 0 и 1 и X является химическим фрагментом, который может быть связан с нацеливающим фрагментом, и где оставшиеся R5 являются H;
с (i) Ν,Ν'-дисукцинимидилкарбонатом (DSC), (ii) тиокарбонилирующим реагентом, предпочтительно тиофосгеном, 1,1'-тиокарбонилдиимидазолом или 1,1'-тиокарбонилди-2(1H)-пиридоном; (iii) иминокарбонилирующим реагентом, предпочтительно дихлоридом изоцианида или фенилизотиоцианатом; или (iv) альдегидом, кетоном или ациклическим ацеталем.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP13001074.7A EP2774624A1 (en) | 2013-03-04 | 2013-03-04 | Amatoxin derivatives |
EP13001074.7 | 2013-03-04 | ||
PCT/EP2014/000614 WO2014135282A1 (en) | 2013-03-04 | 2014-03-10 | Amatoxin derivatives |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2015142093A RU2015142093A (ru) | 2017-04-07 |
RU2695370C2 true RU2695370C2 (ru) | 2019-07-23 |
Family
ID=47826817
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2015142093A RU2695370C2 (ru) | 2013-03-04 | 2014-03-10 | Производные аматоксина |
Country Status (20)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US9982018B2 (ru) |
EP (2) | EP2774624A1 (ru) |
KR (1) | KR20160006162A (ru) |
AR (1) | AR095019A1 (ru) |
AU (1) | AU2014224928B2 (ru) |
BR (1) | BR112015021838B1 (ru) |
CA (1) | CA2903614C (ru) |
DK (1) | DK2964264T3 (ru) |
ES (1) | ES2652182T3 (ru) |
HK (2) | HK1200312A1 (ru) |
IL (1) | IL240863B (ru) |
MX (1) | MX366503B (ru) |
NO (1) | NO2964264T3 (ru) |
NZ (1) | NZ710729A (ru) |
RU (1) | RU2695370C2 (ru) |
SG (1) | SG11201507089PA (ru) |
TW (1) | TW201441248A (ru) |
UA (1) | UA117364C2 (ru) |
WO (1) | WO2014135282A1 (ru) |
ZA (1) | ZA201505790B (ru) |
Families Citing this family (29)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
AR101844A1 (es) | 2014-09-12 | 2017-01-18 | Genentech Inc | Anticuerpos y conjugados modificados genéticamente con cisteína |
PE20170670A1 (es) | 2014-09-12 | 2017-06-06 | Genentech Inc | Anticuerpos anti-cll-1 e inmunoconjugados |
DK3191135T3 (da) | 2014-09-12 | 2020-10-12 | Genentech Inc | Anti-HER2-antistoffer og immunokonjugater |
EP3215519A1 (en) | 2014-11-06 | 2017-09-13 | Novartis AG | Amatoxin derivatives and conjugates thereof as inhibitors of rna polymerase |
HUE051776T2 (hu) * | 2015-03-04 | 2021-03-29 | Univ Texas | TP53 hemizigóta elvesztését mutató rák kezelésére szolgáló eljárások |
CA2978064A1 (en) * | 2015-03-09 | 2016-09-15 | Heidelberg Pharma Gmbh | Amatoxin-antibody conjugates |
JP6632118B2 (ja) * | 2015-09-04 | 2020-01-15 | 学校法人 岩手医科大学 | 腫瘍の再発を抑制する医薬 |
MA43354A (fr) | 2015-10-16 | 2018-08-22 | Genentech Inc | Conjugués médicamenteux à pont disulfure encombré |
US10464969B2 (en) | 2016-05-05 | 2019-11-05 | Novartis Ag | Amatoxin derivatives and conjugates thereof as inhibitors of RNA polymerase |
JP7022080B2 (ja) | 2016-05-27 | 2022-02-17 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | 部位特異的抗体-薬物複合体の特徴付けのための生化学分析的方法 |
US20190328901A1 (en) | 2016-06-17 | 2019-10-31 | Magenta Therapeutics, Inc. | Compositions and methods for the depletion of cells |
JP7062647B2 (ja) | 2016-06-17 | 2022-05-06 | マジェンタ セラピューティクス インコーポレイテッド | Cd117+細胞を枯渇させるための組成物及び方法 |
WO2018027204A1 (en) | 2016-08-05 | 2018-02-08 | Genentech, Inc. | Multivalent and multiepitopic anitibodies having agonistic activity and methods of use |
BR112019012937A2 (pt) | 2016-12-23 | 2019-12-10 | Heidelberg Pharma Res Gmbh | novo conjugado de amanitina |
MX2019008205A (es) | 2017-01-20 | 2020-01-23 | Magenta Therapeutics Inc | Composiciones y metodos para el agotamiento de células cd137+. |
CA3095071A1 (en) * | 2017-08-18 | 2019-02-21 | Sichuan Baili Pharm Co. Ltd | Non-natural amatoxin-type antibody conjugate |
WO2019084064A2 (en) | 2017-10-24 | 2019-05-02 | Magenta Therapeutics, Inc. | COMPOSITIONS AND METHODS FOR DEPLOYING CD117 + CELLS |
AU2018354189A1 (en) | 2017-10-24 | 2020-04-23 | Crispr Therapeutics Ag | Compositions and methods for the depletion of CD117+ cells |
CN111989122A (zh) * | 2018-04-13 | 2020-11-24 | 海德堡医药研究有限责任公司 | 用于治疗实体瘤的靶向鹅膏毒素缀合物 |
JP2021532116A (ja) | 2018-07-23 | 2021-11-25 | マジェンタ セラピューティクス インコーポレイテッドMagenta Therapeutics, Inc. | 同種異系の細胞療法における抗−cd5抗体薬物コンジュゲート(adc)の使用 |
JP2022530026A (ja) | 2019-04-24 | 2022-06-27 | ハイデルベルク ファルマ リサーチ ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング | アマトキシン抗体薬物複合体及びその使用 |
JP2022533430A (ja) * | 2019-05-23 | 2022-07-22 | ハイデルベルク ファルマ リサーチ ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング | 切断可能なリンカーを有する抗体薬物複合体 |
KR102092817B1 (ko) * | 2019-08-22 | 2020-03-24 | 한국화학연구원 | 아마톡신 유도체 및 이의 제조방법 |
CN111308100B (zh) * | 2020-04-13 | 2023-04-21 | 北京维德维康生物技术有限公司 | 一种检测β-鹅膏毒肽的酶联免疫试剂盒及其制备和应用 |
KR20230069211A (ko) | 2020-09-18 | 2023-05-18 | 아라리스 바이오테크 아게 | 아미노산-기반 링커를 사용한 트란스글루타미나제 접합 방법 |
MX2023004606A (es) | 2020-10-25 | 2023-05-08 | Araris Biotech Ag | Medios y metodos para producir conjugados de ligador-anticuerpo. |
BR112023018189A2 (pt) * | 2021-03-19 | 2023-10-24 | Heidelberg Pharma Res Gmbh | Conjugados de anticorpos de amatoxina específicos de linfócitos b, composição famacêutica e uso relacionados |
CN118159298A (zh) | 2021-10-25 | 2024-06-07 | 阿拉里斯生物技术股份公司 | 生产抗体-接头偶联物的方法 |
WO2023161291A1 (en) | 2022-02-22 | 2023-08-31 | Araris Biotech Ag | Peptide linkers comprising two or more payloads |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2007121326A2 (en) * | 2006-04-12 | 2007-10-25 | Crosslink Genetics Corporation | Compositions and methods for modulating gene expression |
WO2010115629A2 (en) * | 2009-04-08 | 2010-10-14 | Deutsches Krebsforschungszentrum | Amatoxin-armed therapeutic cell surface binding components designed for tumour therapy |
WO2012041504A1 (en) * | 2010-09-30 | 2012-04-05 | Heidelberg Pharma Gmbh | Amatoxin-conjugates with improved linkers |
RU2013145314A (ru) * | 2011-03-10 | 2015-04-20 | Хайдельберг Фарма Гмбх | Коньюгаты аматоксина с улучшенными связями |
Family Cites Families (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0463151B1 (en) | 1990-01-12 | 1996-06-12 | Cell Genesys, Inc. | Generation of xenogeneic antibodies |
ATE521366T1 (de) | 2006-05-27 | 2011-09-15 | Faulstich Heinz Dr | Anwendung von amatoxin-konjugaten und phallotoxin-konjugaten mit makromolekülen zur krebstherapie und therapie von entzündungen |
CN102387815A (zh) | 2009-04-08 | 2012-03-21 | 海因茨·福尔斯蒂奇 | 用于治疗癌症的具鹅膏蕈毒素的靶结合部分 |
-
2013
- 2013-03-04 EP EP13001074.7A patent/EP2774624A1/en not_active Withdrawn
-
2014
- 2014-03-04 TW TW103107305A patent/TW201441248A/zh unknown
- 2014-03-05 AR ARP140100717A patent/AR095019A1/es unknown
- 2014-03-10 NO NO14709884A patent/NO2964264T3/no unknown
- 2014-03-10 RU RU2015142093A patent/RU2695370C2/ru active
- 2014-03-10 EP EP14709884.2A patent/EP2964264B1/en active Active
- 2014-03-10 KR KR1020157027378A patent/KR20160006162A/ko not_active Application Discontinuation
- 2014-03-10 ES ES14709884.2T patent/ES2652182T3/es active Active
- 2014-03-10 CA CA2903614A patent/CA2903614C/en active Active
- 2014-03-10 MX MX2015011583A patent/MX366503B/es active IP Right Grant
- 2014-03-10 BR BR112015021838-5A patent/BR112015021838B1/pt active IP Right Grant
- 2014-03-10 SG SG11201507089PA patent/SG11201507089PA/en unknown
- 2014-03-10 AU AU2014224928A patent/AU2014224928B2/en active Active
- 2014-03-10 DK DK14709884.2T patent/DK2964264T3/en active
- 2014-03-10 NZ NZ710729A patent/NZ710729A/en unknown
- 2014-03-10 WO PCT/EP2014/000614 patent/WO2014135282A1/en active Application Filing
- 2014-03-10 US US14/769,970 patent/US9982018B2/en active Active
- 2014-10-03 UA UAA201509530A patent/UA117364C2/uk unknown
- 2014-12-24 HK HK14113008.7A patent/HK1200312A1/xx unknown
-
2015
- 2015-08-12 ZA ZA2015/05790A patent/ZA201505790B/en unknown
- 2015-08-26 IL IL240863A patent/IL240863B/en active IP Right Grant
-
2016
- 2016-04-01 HK HK16103769.5A patent/HK1215795A1/zh unknown
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2007121326A2 (en) * | 2006-04-12 | 2007-10-25 | Crosslink Genetics Corporation | Compositions and methods for modulating gene expression |
WO2010115629A2 (en) * | 2009-04-08 | 2010-10-14 | Deutsches Krebsforschungszentrum | Amatoxin-armed therapeutic cell surface binding components designed for tumour therapy |
WO2012041504A1 (en) * | 2010-09-30 | 2012-04-05 | Heidelberg Pharma Gmbh | Amatoxin-conjugates with improved linkers |
RU2013145314A (ru) * | 2011-03-10 | 2015-04-20 | Хайдельберг Фарма Гмбх | Коньюгаты аматоксина с улучшенными связями |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
JAN ANDERL ET AL, "Chemical modification allows phallotoxins and amatoxins to be used as tools in cell biology", BEILSTEIN JOURNAL OF ORGANIC CHEMISTRY, 2012, vol. 8, pages 2072 - 2084. * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
AR095019A1 (es) | 2015-09-16 |
MX366503B (es) | 2019-07-11 |
EP2964264A1 (en) | 2016-01-13 |
MX2015011583A (es) | 2016-07-29 |
AU2014224928A1 (en) | 2015-09-10 |
NZ710729A (en) | 2019-05-31 |
EP2964264B1 (en) | 2017-09-13 |
RU2015142093A (ru) | 2017-04-07 |
SG11201507089PA (en) | 2015-10-29 |
WO2014135282A8 (en) | 2015-09-17 |
BR112015021838A2 (pt) | 2017-07-18 |
IL240863A0 (en) | 2015-10-29 |
US9982018B2 (en) | 2018-05-29 |
US20160002298A1 (en) | 2016-01-07 |
TW201441248A (zh) | 2014-11-01 |
DK2964264T3 (en) | 2017-12-11 |
AU2014224928B2 (en) | 2017-10-19 |
NO2964264T3 (ru) | 2018-02-10 |
IL240863B (en) | 2019-02-28 |
ES2652182T3 (es) | 2018-01-31 |
BR112015021838B1 (pt) | 2021-12-28 |
CA2903614C (en) | 2021-07-06 |
HK1200312A1 (en) | 2015-08-07 |
UA117364C2 (uk) | 2018-07-25 |
CA2903614A1 (en) | 2014-09-12 |
ZA201505790B (en) | 2017-11-29 |
HK1215795A1 (zh) | 2016-09-15 |
EP2774624A1 (en) | 2014-09-10 |
WO2014135282A1 (en) | 2014-09-12 |
KR20160006162A (ko) | 2016-01-18 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2695370C2 (ru) | Производные аматоксина | |
RU2601411C2 (ru) | Конъюгаты аматоксинов с улучшенными линкерами | |
US20180185509A1 (en) | Amatoxin-conjugates with improved linkages | |
JP6321687B2 (ja) | アマトキシン誘導体 | |
RU2575854C2 (ru) | Конъюгаты аматоксина с улучшенными связями | |
NZ614548B2 (en) | Amatoxin-conjugates with improved linkages |