RU2658438C2 - Химерное терапевтическое антитело нн1 против cd-37 - Google Patents
Химерное терапевтическое антитело нн1 против cd-37 Download PDFInfo
- Publication number
- RU2658438C2 RU2658438C2 RU2014125320A RU2014125320A RU2658438C2 RU 2658438 C2 RU2658438 C2 RU 2658438C2 RU 2014125320 A RU2014125320 A RU 2014125320A RU 2014125320 A RU2014125320 A RU 2014125320A RU 2658438 C2 RU2658438 C2 RU 2658438C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- antibody
- cell
- cells
- seq
- present
- Prior art date
Links
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 title description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 182
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 42
- 101000777628 Homo sapiens Leukocyte antigen CD37 Proteins 0.000 claims abstract description 40
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 40
- 229940051022 radioimmunoconjugate Drugs 0.000 claims abstract description 35
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 33
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 26
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims abstract description 17
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims abstract description 12
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 claims abstract description 11
- 102000048426 human CD37 Human genes 0.000 claims abstract description 10
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 6
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 34
- 102100031586 Leukocyte antigen CD37 Human genes 0.000 claims description 30
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 28
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 claims description 21
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 claims description 18
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 14
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 12
- 208000028564 B-cell non-Hodgkin lymphoma Diseases 0.000 claims description 11
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 claims description 11
- 208000010839 B-cell chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 claims description 10
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 claims description 10
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 claims description 10
- 208000031422 Lymphocytic Chronic B-Cell Leukemia Diseases 0.000 claims description 9
- 208000032852 chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 claims description 9
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 8
- 201000009277 hairy cell leukemia Diseases 0.000 claims description 8
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 7
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 7
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 3
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 abstract description 29
- 229960004641 rituximab Drugs 0.000 abstract description 21
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 abstract description 15
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 11
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 abstract description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 40
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 30
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 30
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 22
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 22
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 22
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 22
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 22
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 22
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 21
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 21
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 21
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 20
- 239000012911 assay medium Substances 0.000 description 15
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 15
- OZFAFGSSMRRTDW-UHFFFAOYSA-N (2,4-dichlorophenyl) benzenesulfonate Chemical compound ClC1=CC(Cl)=CC=C1OS(=O)(=O)C1=CC=CC=C1 OZFAFGSSMRRTDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 239000012591 Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline Substances 0.000 description 14
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 13
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 13
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 13
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 13
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 13
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 12
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 11
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 11
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 10
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 10
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 9
- 239000000463 material Substances 0.000 description 9
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 9
- VYZAMTAEIAYCRO-BJUDXGSMSA-N Chromium-51 Chemical compound [51Cr] VYZAMTAEIAYCRO-BJUDXGSMSA-N 0.000 description 8
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 8
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 8
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 8
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 8
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 8
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 8
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 8
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 7
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 7
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 7
- 230000026045 iodination Effects 0.000 description 7
- 238000006192 iodination reaction Methods 0.000 description 7
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 7
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 7
- 238000000163 radioactive labelling Methods 0.000 description 7
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 7
- UDOPJKHABYSVIX-UHFFFAOYSA-N 2-[4,7,10-tris(carboxymethyl)-6-[(4-isothiocyanatophenyl)methyl]-1,4,7,10-tetrazacyclododec-1-yl]acetic acid Chemical compound C1N(CC(O)=O)CCN(CC(=O)O)CCN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)C1CC1=CC=C(N=C=S)C=C1 UDOPJKHABYSVIX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 6
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 6
- 101100356020 Haemophilus influenzae (strain ATCC 51907 / DSM 11121 / KW20 / Rd) recA gene Proteins 0.000 description 6
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 6
- 101100042680 Mus musculus Slc7a1 gene Proteins 0.000 description 6
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 6
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 6
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 6
- 230000002637 immunotoxin Effects 0.000 description 6
- 229940051026 immunotoxin Drugs 0.000 description 6
- 239000002596 immunotoxin Substances 0.000 description 6
- 231100000608 immunotoxin Toxicity 0.000 description 6
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 6
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 6
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 6
- 229940126619 mouse monoclonal antibody Drugs 0.000 description 6
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 6
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 6
- 238000011363 radioimmunotherapy Methods 0.000 description 6
- 102100022005 B-lymphocyte antigen CD20 Human genes 0.000 description 5
- 101000897405 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD20 Proteins 0.000 description 5
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 5
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 5
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 5
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 5
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 5
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 5
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 description 5
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 5
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 4
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 4
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 4
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 4
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 4
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 4
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 4
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 4
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 4
- 238000011580 nude mouse model Methods 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 4
- 229960005267 tositumomab Drugs 0.000 description 4
- 208000011691 Burkitt lymphomas Diseases 0.000 description 3
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101001002657 Homo sapiens Interleukin-2 Proteins 0.000 description 3
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 3
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 3
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 3
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 3
- QPCDCPDFJACHGM-UHFFFAOYSA-N N,N-bis{2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl}glycine Chemical class OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(=O)O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O QPCDCPDFJACHGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 3
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 3
- 238000003501 co-culture Methods 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 3
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 3
- YEENEYXBHNNNGV-XEHWZWQGSA-M sodium;3-acetamido-5-[acetyl(methyl)amino]-2,4,6-triiodobenzoate;(2r,3r,4s,5s,6r)-2-[(2r,3s,4s,5r)-3,4-dihydroxy-2,5-bis(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]oxy-6-(hydroxymethyl)oxane-3,4,5-triol Chemical compound [Na+].CC(=O)N(C)C1=C(I)C(NC(C)=O)=C(I)C(C([O-])=O)=C1I.O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 YEENEYXBHNNNGV-XEHWZWQGSA-M 0.000 description 3
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 3
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RTQWWZBSTRGEAV-PKHIMPSTSA-N 2-[[(2s)-2-[bis(carboxymethyl)amino]-3-[4-(methylcarbamoylamino)phenyl]propyl]-[2-[bis(carboxymethyl)amino]propyl]amino]acetic acid Chemical compound CNC(=O)NC1=CC=C(C[C@@H](CN(CC(C)N(CC(O)=O)CC(O)=O)CC(O)=O)N(CC(O)=O)CC(O)=O)C=C1 RTQWWZBSTRGEAV-PKHIMPSTSA-N 0.000 description 2
- -1 4 -isothiocyanatobenzyl Chemical group 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 2
- 208000003950 B-cell lymphoma Diseases 0.000 description 2
- 238000011729 BALB/c nude mouse Methods 0.000 description 2
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 2
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 2
- 102000013463 Immunoglobulin Light Chains Human genes 0.000 description 2
- 108010065825 Immunoglobulin Light Chains Proteins 0.000 description 2
- 208000025205 Mantle-Cell Lymphoma Diseases 0.000 description 2
- 208000015914 Non-Hodgkin lymphomas Diseases 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- WDLRUFUQRNWCPK-UHFFFAOYSA-N Tetraxetan Chemical class OC(=O)CN1CCN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC1 WDLRUFUQRNWCPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JXLYSJRDGCGARV-WWYNWVTFSA-N Vinblastine Natural products O=C(O[C@H]1[C@](O)(C(=O)OC)[C@@H]2N(C)c3c(cc(c(OC)c3)[C@]3(C(=O)OC)c4[nH]c5c(c4CCN4C[C@](O)(CC)C[C@H](C3)C4)cccc5)[C@@]32[C@H]2[C@@]1(CC)C=CCN2CC3)C JXLYSJRDGCGARV-WWYNWVTFSA-N 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 2
- 238000011888 autopsy Methods 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 2
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 2
- 230000000536 complexating effect Effects 0.000 description 2
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 2
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 2
- VJJPUSNTGOMMGY-MRVIYFEKSA-N etoposide Chemical compound COC1=C(O)C(OC)=CC([C@@H]2C3=CC=4OCOC=4C=C3[C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@@H]4O[C@H](C)OC[C@H]4O3)O)[C@@H]3[C@@H]2C(OC3)=O)=C1 VJJPUSNTGOMMGY-MRVIYFEKSA-N 0.000 description 2
- 229960005420 etoposide Drugs 0.000 description 2
- 201000003444 follicular lymphoma Diseases 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 229960001001 ibritumomab tiuxetan Drugs 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 2
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 2
- 229960002450 ofatumumab Drugs 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 238000002428 photodynamic therapy Methods 0.000 description 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 2
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 2
- NRUKOCRGYNPUPR-QBPJDGROSA-N teniposide Chemical compound COC1=C(O)C(OC)=CC([C@@H]2C3=CC=4OCOC=4C=C3[C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@@H]4O[C@@H](OC[C@H]4O3)C=3SC=CC=3)O)[C@@H]3[C@@H]2C(OC3)=O)=C1 NRUKOCRGYNPUPR-QBPJDGROSA-N 0.000 description 2
- 229960001278 teniposide Drugs 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 2
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 2
- 229950000815 veltuzumab Drugs 0.000 description 2
- 229960003048 vinblastine Drugs 0.000 description 2
- JXLYSJRDGCGARV-XQKSVPLYSA-N vincaleukoblastine Chemical compound C([C@@H](C[C@]1(C(=O)OC)C=2C(=CC3=C([C@]45[C@H]([C@@]([C@H](OC(C)=O)[C@]6(CC)C=CCN([C@H]56)CC4)(O)C(=O)OC)N3C)C=2)OC)C[C@@](C2)(O)CC)N2CCC2=C1NC1=CC=CC=C21 JXLYSJRDGCGARV-XQKSVPLYSA-N 0.000 description 2
- FJQZXCPWAGYPSD-UHFFFAOYSA-N 1,3,4,6-tetrachloro-3a,6a-diphenylimidazo[4,5-d]imidazole-2,5-dione Chemical compound ClN1C(=O)N(Cl)C2(C=3C=CC=CC=3)N(Cl)C(=O)N(Cl)C12C1=CC=CC=C1 FJQZXCPWAGYPSD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LZBLLVHUXJXXNS-UHFFFAOYSA-N 2-[4,7,10-tris(2-amino-2-oxoethyl)-6-[(4-isothiocyanatophenyl)methyl]-1,4,7,10-tetrazacyclododec-1-yl]acetamide Chemical compound C1N(CC(N)=O)CCN(CC(=O)N)CCN(CC(N)=O)CCN(CC(N)=O)C1CC1=CC=C(N=C=S)C=C1 LZBLLVHUXJXXNS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UXGJAOIJSROTTN-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(4-chlorophenoxy)phenyl]-3h-benzimidazole-5-carboxamide Chemical compound N1C2=CC(C(=O)N)=CC=C2N=C1C(C=C1)=CC=C1OC1=CC=C(Cl)C=C1 UXGJAOIJSROTTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KCKDRILDHNXAAI-UHFFFAOYSA-N 2-cyclododecylacetamide Chemical compound NC(=O)CC1CCCCCCCCCCC1 KCKDRILDHNXAAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NEAQRZUHTPSBBM-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxy-3,3-dimethyl-7-nitro-4h-isoquinolin-1-one Chemical compound C1=C([N+]([O-])=O)C=C2C(=O)N(O)C(C)(C)CC2=C1 NEAQRZUHTPSBBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NDMPLJNOPCLANR-UHFFFAOYSA-N 3,4-dihydroxy-15-(4-hydroxy-18-methoxycarbonyl-5,18-seco-ibogamin-18-yl)-16-methoxy-1-methyl-6,7-didehydro-aspidospermidine-3-carboxylic acid methyl ester Natural products C1C(CC)(O)CC(CC2(C(=O)OC)C=3C(=CC4=C(C56C(C(C(O)C7(CC)C=CCN(C67)CC5)(O)C(=O)OC)N4C)C=3)OC)CN1CCC1=C2NC2=CC=CC=C12 NDMPLJNOPCLANR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AOJJSUZBOXZQNB-VTZDEGQISA-N 4'-epidoxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-VTZDEGQISA-N 0.000 description 1
- STQGQHZAVUOBTE-UHFFFAOYSA-N 7-Cyan-hept-2t-en-4,6-diinsaeure Natural products C1=2C(O)=C3C(=O)C=4C(OC)=CC=CC=4C(=O)C3=C(O)C=2CC(O)(C(C)=O)CC1OC1CC(N)C(O)C(C)O1 STQGQHZAVUOBTE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PBCZSGKMGDDXIJ-HQCWYSJUSA-N 7-hydroxystaurosporine Chemical compound N([C@H](O)C1=C2C3=CC=CC=C3N3C2=C24)C(=O)C1=C2C1=CC=CC=C1N4[C@H]1C[C@@H](NC)[C@@H](OC)[C@]3(C)O1 PBCZSGKMGDDXIJ-HQCWYSJUSA-N 0.000 description 1
- PBCZSGKMGDDXIJ-UHFFFAOYSA-N 7beta-hydroxystaurosporine Natural products C12=C3N4C5=CC=CC=C5C3=C3C(O)NC(=O)C3=C2C2=CC=CC=C2N1C1CC(NC)C(OC)C4(C)O1 PBCZSGKMGDDXIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000005020 Acaciella glauca Species 0.000 description 1
- 206010001526 Air embolism Diseases 0.000 description 1
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 description 1
- 108010077805 Bacterial Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108010006654 Bleomycin Proteins 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000004971 Cross linker Substances 0.000 description 1
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HTIJFSOGRVMCQR-UHFFFAOYSA-N Epirubicin Natural products COc1cccc2C(=O)c3c(O)c4CC(O)(CC(OC5CC(N)C(=O)C(C)O5)c4c(O)c3C(=O)c12)C(=O)CO HTIJFSOGRVMCQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 1
- 101000945318 Homo sapiens Calponin-1 Proteins 0.000 description 1
- 101000652736 Homo sapiens Transgelin Proteins 0.000 description 1
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 description 1
- XDXDZDZNSLXDNA-TZNDIEGXSA-N Idarubicin Chemical compound C1[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1C2=C(O)C(C(=O)C3=CC=CC=C3C3=O)=C3C(O)=C2C[C@@](O)(C(C)=O)C1 XDXDZDZNSLXDNA-TZNDIEGXSA-N 0.000 description 1
- XDXDZDZNSLXDNA-UHFFFAOYSA-N Idarubicin Natural products C1C(N)C(O)C(C)OC1OC1C2=C(O)C(C(=O)C3=CC=CC=C3C3=O)=C3C(O)=C2CC(O)(C(C)=O)C1 XDXDZDZNSLXDNA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940076838 Immune checkpoint inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 229930192392 Mitomycin Natural products 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N Mytomycin Chemical compound C1N2C(C(C(C)=C(N)C3=O)=O)=C3[C@@H](COC(N)=O)[C@@]2(OC)[C@@H]2[C@H]1N2 NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N 0.000 description 1
- ZDZOTLJHXYCWBA-VCVYQWHSSA-N N-debenzoyl-N-(tert-butoxycarbonyl)-10-deacetyltaxol Chemical compound O([C@H]1[C@H]2[C@@](C([C@H](O)C3=C(C)[C@@H](OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C=4C=CC=CC=4)C[C@]1(O)C3(C)C)=O)(C)[C@@H](O)C[C@H]1OC[C@]12OC(=O)C)C(=O)C1=CC=CC=C1 ZDZOTLJHXYCWBA-VCVYQWHSSA-N 0.000 description 1
- 108020004485 Nonsense Codon Proteins 0.000 description 1
- 101710160107 Outer membrane protein A Proteins 0.000 description 1
- 229930012538 Paclitaxel Natural products 0.000 description 1
- 108010064851 Plant Proteins Proteins 0.000 description 1
- 229940079156 Proteasome inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 239000008156 Ringer's lactate solution Substances 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 108700031126 Tetraspanins Proteins 0.000 description 1
- 102000043977 Tetraspanins Human genes 0.000 description 1
- 102100031013 Transgelin Human genes 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- QYSXJUFSXHHAJI-XFEUOLMDSA-N Vitamin D3 Natural products C1(/[C@@H]2CC[C@@H]([C@]2(CCC1)C)[C@H](C)CCCC(C)C)=C/C=C1\C[C@@H](O)CCC1=C QYSXJUFSXHHAJI-XFEUOLMDSA-N 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 229960000548 alemtuzumab Drugs 0.000 description 1
- 229940100198 alkylating agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002168 alkylating agent Substances 0.000 description 1
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 description 1
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- XCPGHVQEEXUHNC-UHFFFAOYSA-N amsacrine Chemical compound COC1=CC(NS(C)(=O)=O)=CC=C1NC1=C(C=CC=C2)C2=NC2=CC=CC=C12 XCPGHVQEEXUHNC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001220 amsacrine Drugs 0.000 description 1
- 230000000340 anti-metabolite Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 238000011230 antibody-based therapy Methods 0.000 description 1
- 229940100197 antimetabolite Drugs 0.000 description 1
- 239000002256 antimetabolite Substances 0.000 description 1
- 239000003972 antineoplastic antibiotic Substances 0.000 description 1
- 238000003782 apoptosis assay Methods 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 229960002170 azathioprine Drugs 0.000 description 1
- LMEKQMALGUDUQG-UHFFFAOYSA-N azathioprine Chemical compound CN1C=NC([N+]([O-])=O)=C1SC1=NC=NC2=C1NC=N2 LMEKQMALGUDUQG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 229960001561 bleomycin Drugs 0.000 description 1
- OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O bleomycin A2 Chemical compound N([C@H](C(=O)N[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)NCCC=1SC=C(N=1)C=1SC=C(N=1)C(=O)NCCC[S+](C)C)[C@@H](O[C@H]1[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)O[C@@H]1[C@H]([C@@H](OC(N)=O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)C=1N=CNC=1)C(=O)C1=NC([C@H](CC(N)=O)NC[C@H](N)C(N)=O)=NC(N)=C1C OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 238000010322 bone marrow transplantation Methods 0.000 description 1
- 229960001467 bortezomib Drugs 0.000 description 1
- GXJABQQUPOEUTA-RDJZCZTQSA-N bortezomib Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)B(O)O)NC(=O)C=1N=CC=NC=1)C1=CC=CC=C1 GXJABQQUPOEUTA-RDJZCZTQSA-N 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- ZEWYCNBZMPELPF-UHFFFAOYSA-J calcium;potassium;sodium;2-hydroxypropanoic acid;sodium;tetrachloride Chemical compound [Na].[Na+].[Cl-].[Cl-].[Cl-].[Cl-].[K+].[Ca+2].CC(O)C(O)=O ZEWYCNBZMPELPF-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 208000035269 cancer or benign tumor Diseases 0.000 description 1
- 229960004562 carboplatin Drugs 0.000 description 1
- 190000008236 carboplatin Chemical compound 0.000 description 1
- 125000004181 carboxyalkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000012820 cell cycle checkpoint Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000000973 chemotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 229960004630 chlorambucil Drugs 0.000 description 1
- JCKYGMPEJWAADB-UHFFFAOYSA-N chlorambucil Chemical compound OC(=O)CCCC1=CC=C(N(CCCl)CCCl)C=C1 JCKYGMPEJWAADB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004316 cisplatin Drugs 0.000 description 1
- DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L cisplatin Chemical compound N[Pt](N)(Cl)Cl DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 238000011278 co-treatment Methods 0.000 description 1
- 230000002301 combined effect Effects 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 238000010668 complexation reaction Methods 0.000 description 1
- 229960004397 cyclophosphamide Drugs 0.000 description 1
- 239000003145 cytotoxic factor Substances 0.000 description 1
- STQGQHZAVUOBTE-VGBVRHCVSA-N daunorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(C)=O)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 STQGQHZAVUOBTE-VGBVRHCVSA-N 0.000 description 1
- 229960000975 daunorubicin Drugs 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 206010012818 diffuse large B-cell lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 239000003534 dna topoisomerase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229960003668 docetaxel Drugs 0.000 description 1
- 230000002900 effect on cell Effects 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 230000012202 endocytosis Effects 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 229960001904 epirubicin Drugs 0.000 description 1
- 229950009760 epratuzumab Drugs 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 229950001109 galiximab Drugs 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- SDUQYLNIPVEERB-QPPQHZFASA-N gemcitabine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1C(F)(F)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 SDUQYLNIPVEERB-QPPQHZFASA-N 0.000 description 1
- 229960005277 gemcitabine Drugs 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 230000007614 genetic variation Effects 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940121372 histone deacetylase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 239000003276 histone deacetylase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 102000055277 human IL2 Human genes 0.000 description 1
- 210000004754 hybrid cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001146 hypoxic effect Effects 0.000 description 1
- 229960000908 idarubicin Drugs 0.000 description 1
- 229960001101 ifosfamide Drugs 0.000 description 1
- HOMGKSMUEGBAAB-UHFFFAOYSA-N ifosfamide Chemical compound ClCCNP1(=O)OCCCN1CCCl HOMGKSMUEGBAAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012274 immune-checkpoint protein inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 231100000110 immunotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002625 immunotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 229960004768 irinotecan Drugs 0.000 description 1
- UWKQSNNFCGGAFS-XIFFEERXSA-N irinotecan Chemical compound C1=C2C(CC)=C3CN(C(C4=C([C@@](C(=O)OC4)(O)CC)C=4)=O)C=4C3=NC2=CC=C1OC(=O)N(CC1)CCC1N1CCCCC1 UWKQSNNFCGGAFS-XIFFEERXSA-N 0.000 description 1
- 239000000644 isotonic solution Substances 0.000 description 1
- 238000005304 joining Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 201000007919 lymphoplasmacytic lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 210000003519 mature b lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229960004961 mechlorethamine Drugs 0.000 description 1
- HAWPXGHAZFHHAD-UHFFFAOYSA-N mechlorethamine Chemical compound ClCCN(C)CCCl HAWPXGHAZFHHAD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000001465 metallisation Methods 0.000 description 1
- 229960000282 metronidazole Drugs 0.000 description 1
- VAOCPAMSLUNLGC-UHFFFAOYSA-N metronidazole Chemical compound CC1=NC=C([N+]([O-])=O)N1CCO VAOCPAMSLUNLGC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OBBCSXFCDPPXOL-UHFFFAOYSA-N misonidazole Chemical compound COCC(O)CN1C=CN=C1[N+]([O-])=O OBBCSXFCDPPXOL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229950010514 misonidazole Drugs 0.000 description 1
- CFCUWKMKBJTWLW-BKHRDMLASA-N mithramycin Chemical compound O([C@@H]1C[C@@H](O[C@H](C)[C@H]1O)OC=1C=C2C=C3C[C@H]([C@@H](C(=O)C3=C(O)C2=C(O)C=1C)O[C@@H]1O[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2O[C@H](C)[C@H](O)[C@H](O[C@@H]3O[C@H](C)[C@@H](O)[C@@](C)(O)C3)C2)C1)[C@H](OC)C(=O)[C@@H](O)[C@@H](C)O)[C@H]1C[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](C)O1 CFCUWKMKBJTWLW-BKHRDMLASA-N 0.000 description 1
- 229960004857 mitomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000002625 monoclonal antibody therapy Methods 0.000 description 1
- 230000000869 mutational effect Effects 0.000 description 1
- QOSWSNDWUATJBJ-UHFFFAOYSA-N n,n'-diphenyloctanediamide Chemical compound C=1C=CC=CC=1NC(=O)CCCCCCC(=O)NC1=CC=CC=C1 QOSWSNDWUATJBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000037434 nonsense mutation Effects 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 229960003347 obinutuzumab Drugs 0.000 description 1
- 238000011275 oncology therapy Methods 0.000 description 1
- 238000011369 optimal treatment Methods 0.000 description 1
- 229960001756 oxaliplatin Drugs 0.000 description 1
- DWAFYCQODLXJNR-BNTLRKBRSA-L oxaliplatin Chemical compound O1C(=O)C(=O)O[Pt]11N[C@@H]2CCCC[C@H]2N1 DWAFYCQODLXJNR-BNTLRKBRSA-L 0.000 description 1
- 229960001592 paclitaxel Drugs 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 229960003330 pentetic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 229940021222 peritoneal dialysis isotonic solution Drugs 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 239000003186 pharmaceutical solution Substances 0.000 description 1
- 235000021118 plant-derived protein Nutrition 0.000 description 1
- 229960003171 plicamycin Drugs 0.000 description 1
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000005522 programmed cell death Effects 0.000 description 1
- XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M propidium iodide Chemical compound [I-].[I-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CCC[N+](C)(CC)CC)=C1C1=CC=CC=C1 XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000003207 proteasome inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 239000012217 radiopharmaceutical Substances 0.000 description 1
- 229940121896 radiopharmaceutical Drugs 0.000 description 1
- 230000002799 radiopharmaceutical effect Effects 0.000 description 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 238000002864 sequence alignment Methods 0.000 description 1
- 230000037432 silent mutation Effects 0.000 description 1
- 238000009097 single-agent therapy Methods 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000011301 standard therapy Methods 0.000 description 1
- 238000009168 stem cell therapy Methods 0.000 description 1
- 238000011476 stem cell transplantation Methods 0.000 description 1
- 238000009580 stem-cell therapy Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- JJAHTWIKCUJRDK-UHFFFAOYSA-N succinimidyl 4-(N-maleimidomethyl)cyclohexane-1-carboxylate Chemical compound C1CC(CN2C(C=CC2=O)=O)CCC1C(=O)ON1C(=O)CCC1=O JJAHTWIKCUJRDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N taxol Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 229940044693 topoisomerase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 229960000303 topotecan Drugs 0.000 description 1
- UCFGDBYHRUNTLO-QHCPKHFHSA-N topotecan Chemical compound C1=C(O)C(CN(C)C)=C2C=C(CN3C4=CC5=C(C3=O)COC(=O)[C@]5(O)CC)C4=NC2=C1 UCFGDBYHRUNTLO-QHCPKHFHSA-N 0.000 description 1
- 229950001802 toralizumab Drugs 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 229960000653 valrubicin Drugs 0.000 description 1
- ZOCKGBMQLCSHFP-KQRAQHLDSA-N valrubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@](CC2=C(O)C=3C(=O)C4=CC=CC(OC)=C4C(=O)C=3C(O)=C21)(O)C(=O)COC(=O)CCCC)[C@H]1C[C@H](NC(=O)C(F)(F)F)[C@H](O)[C@H](C)O1 ZOCKGBMQLCSHFP-KQRAQHLDSA-N 0.000 description 1
- 238000003026 viability measurement method Methods 0.000 description 1
- 229960004528 vincristine Drugs 0.000 description 1
- OGWKCGZFUXNPDA-XQKSVPLYSA-N vincristine Chemical compound C([N@]1C[C@@H](C[C@]2(C(=O)OC)C=3C(=CC4=C([C@]56[C@H]([C@@]([C@H](OC(C)=O)[C@]7(CC)C=CCN([C@H]67)CC5)(O)C(=O)OC)N4C=O)C=3)OC)C[C@@](C1)(O)CC)CC1=C2NC2=CC=CC=C12 OGWKCGZFUXNPDA-XQKSVPLYSA-N 0.000 description 1
- OGWKCGZFUXNPDA-UHFFFAOYSA-N vincristine Natural products C1C(CC)(O)CC(CC2(C(=O)OC)C=3C(=CC4=C(C56C(C(C(OC(C)=O)C7(CC)C=CCN(C67)CC5)(O)C(=O)OC)N4C=O)C=3)OC)CN1CCC1=C2NC2=CC=CC=C12 OGWKCGZFUXNPDA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004355 vindesine Drugs 0.000 description 1
- UGGWPQSBPIFKDZ-KOTLKJBCSA-N vindesine Chemical compound C([C@@H](C[C@]1(C(=O)OC)C=2C(=CC3=C([C@]45[C@H]([C@@]([C@H](O)[C@]6(CC)C=CCN([C@H]56)CC4)(O)C(N)=O)N3C)C=2)OC)C[C@@](C2)(O)CC)N2CCC2=C1N=C1[C]2C=CC=C1 UGGWPQSBPIFKDZ-KOTLKJBCSA-N 0.000 description 1
- 229960002066 vinorelbine Drugs 0.000 description 1
- GBABOYUKABKIAF-GHYRFKGUSA-N vinorelbine Chemical compound C1N(CC=2C3=CC=CC=C3NC=22)CC(CC)=C[C@H]1C[C@]2(C(=O)OC)C1=CC([C@]23[C@H]([C@]([C@H](OC(C)=O)[C@]4(CC)C=CCN([C@H]34)CC2)(O)C(=O)OC)N2C)=C2C=C1OC GBABOYUKABKIAF-GHYRFKGUSA-N 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- QYSXJUFSXHHAJI-YRZJJWOYSA-N vitamin D3 Chemical compound C1(/[C@@H]2CC[C@@H]([C@]2(CCC1)C)[C@H](C)CCCC(C)C)=C\C=C1\C[C@@H](O)CCC1=C QYSXJUFSXHHAJI-YRZJJWOYSA-N 0.000 description 1
- 235000005282 vitamin D3 Nutrition 0.000 description 1
- 239000011647 vitamin D3 Substances 0.000 description 1
- 229940021056 vitamin d3 Drugs 0.000 description 1
- WAEXFXRVDQXREF-UHFFFAOYSA-N vorinostat Chemical compound ONC(=O)CCCCCCC(=O)NC1=CC=CC=C1 WAEXFXRVDQXREF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000237 vorinostat Drugs 0.000 description 1
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2896—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against molecules with a "CD"-designation, not provided for elsewhere
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
- A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
- A61K51/04—Organic compounds
- A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
- A61K51/10—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody
- A61K51/1027—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody against receptors, cell-surface antigens or cell-surface determinants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2887—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against CD20
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
- A61K2039/507—Comprising a combination of two or more separate antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
- C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
- C07K2317/734—Complement-dependent cytotoxicity [CDC]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Optics & Photonics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Oncology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Настоящее изобретение относится к области иммунологии. Предложена молекула антитела, связывающегося с CD37 человека и имеющего константные области человеческого происхождения. Также рассмотрена молекула ДНК, кодирующая такое антитело, экспрессионный вектор, клетка-хозяин и способ получения антитела. Кроме того, описаны радиоиммуноконъюгат на основе упомянутого антитела и набор для его получения, а также фармацевтические композиции, способ элиминации В-клеток и способ лечения В-клеточных злокачественных новообразований. Химерное антитело по настоящему изобретению вызывает антителозависимую клеточную цитотоксичность (ADCC) в большей степени по сравнению с антителом Ритуксимаб. Благодаря способности связывать CD37 человека и вызывать ADCC предложенное антитело может найти дальнейшее применение в терапии. 11 н.п. ф-лы, 7 ил., 14 пр., 3 табл.
Description
Область техники
Настоящее изобретение относится к иммунотерапии и радиоиммунотерапии гемабластозов химерным или гуманизированным антителом с неожиданно высокой цитотоксичностью, а также к различным применениям антител.
Уровень техники
Настоящее изобретение относится к химерным и гуманизированным антителам против CD37, а также к их получению и применению.
Настоящее изобретение также относится к иммунотерапии и радиоиммунотерапии, которые основаны на элиминации B-клеток.
В частности, настоящее изобретение относится к молекулам антител против CD-37 для применения в таком лечении, например, лечении B-клеточных злокачественных образований и аутоиммунных состояний.
Иммунотерапия с применением моноклональных антител (mAbs) зародилась как безопасный и избирательный способ лечения рака и других заболеваний.
В частности, роль моноклональных антител в терапии, которая основана на элиминации B-клеток, например, при лечении B-клеточных злокачественных новообразований, расширилась после введения ритуксимаба, антитела, которое направлено против антигена CD20 на поверхности B-клеток.
Антиген CD37 - это антиген клеточной поверхности, который не рассматривался в качестве мишени при B-клеточных злокачественных новообразованиях в той же степени, как антиген B-клеток CD20.
CD37, член суперсемейства тетраспанинов, является в значительной степени гликозилированной молекулой клеточной поверхности с четырьмя трансмембранными доменами и двумя внеклеточными петлями.
Экспрессия CD37 наблюдается в нормальных B-клетках, при неходжкинской лимфоме (NHL), в том числе при лимфоме из клеток мантийной зоны (MCL), лимфоме Беркитта (BL), лимфоме малых лимфоцитов (SLL) и фолликулярной лимфоме (FL), лимфоме из клеток маргинальной зоны (MZL), диффузной B-клеточной лимфоме (DLBCL), лимфоплазмоцитарной лимфомы (LL) и хронического лимфоцитарного лейкоза (CLL).
Такой паттерн экспрессии делает CD37 привлекательной мишенью для терапии рака, опосредованной антителом.
CD37 был впервые описан в 1986 году и характеризуется моноклональным антителом мыши MB-1 (Link et al., 1986).
Физиологическая роль CD37 неизвестна.
Связывание специфичного к CD37 моноклонального анттела (mAb) с раковыми клетками может запускать различные механизмы: Во-первых, после связывания антитела с внеклеточным доменом антигена CD37 может активироваться каскад реакций комплемента и лизис клетки-мишени.
Во-вторых, антитело против CD37 может опосредовать антитело-зависимую клеточную цитотоксичность (ADCC) в клетке-мишени, которая происходит после того, как Fc часть связанного антитела распознается соответствующими рецепторами на цитотоксических клетках иммунной системы.
B-третьих, антитело может изменить способность B-клеток реагировать на антиген или другие стимулы.
Наконец, антитело против CD37 может инициировать запрограммированную гибель клеток (апоптоз).
mAb против CD37 MB-1 оценивали в двух радиоиммунотерапевтических испытаниях на больных B-NHL (B-клеточная неходжкинская лимфома;. Press et al., 1989; Kaminski et al., 1992).
В других работах также раскрыты моноклональные антитела против CD37, которые демонстрируют потенциал (например, WO 2009/019312 Heider et al., и WO 2011/092295 авторов настоящего изобретения), но необходимо пройти еще долгий путь, прежде чем будет доказано, что CD37 является идеальной альтернативой CD20 для лечения B-клеточных злокачественных новообразований.
В заключение было показано, что антиген CD37 часто экспрессируется на опухолевых клетках при нескольких B-клеточных злокачественных новообразованиях человека и на нормальных зрелых B-лимфоцитах и, таким образом, терапия на основе антитела против CD37 может быть перспективным подходом для лечения B-клеточных злокачественных новообразований.
Хотя антитела против CD37 или подобные антителам молекулы, как описано выше (например, MB-1), показали противоопухолевую эффективность на B-клеточных злокачественных новообразованиях и способность поражать CD37, существует потребность в альтернативных антителах против CD37 для улучшения лекарственных средств, основанных на элиминации B-клеток.
Таким образом, улучшенное антитело против CD37 было бы полезно для создания новых способов лечения B-клеточных злокачественных новообразований
Краткое описание изобретения
Объект настоящего изобретения относится к химерному или гуманизированному антителу, полученному из моноклонального антитела мыши HH1.
В частности, объектом настоящего изобретения является обеспечение химерного или гуманизированного антитела.
Один аспект настоящего изобретения относится к молекуле антитела, которое связывается с CD37 человека и которое является производным от a) моноклонального антитела мыши, которое определяется i) вариабельной областью тяжелой цепи, содержащей аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1; и ii) вариабельной областью легкой цепи, содержащей аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 3, или от б) антитела, не являющегося антителом человека, распознающим тот же эпитоп CD37 человека, что и антитело, определенное в а) или распознающим эпитоп, который близок или перекрывается с указанным эпитопом; причем указанная молекула антитела представляет собой химерное или гуманизированное антитело.
Еще один аспект настоящего изобретения относится к молекуле ДНК, кодирующей антитела согласно настоящему изобретению.
Еще один аспект настоящего изобретения относится к клетке-хозяину, несущей одну или более молекул ДНК, кодирующих антитела согласно настоящему изобретению.
Еще один аспект настоящего изобретения относится к способу получения антитела согласно настоящему изобретению, включающему трансфекцию клетки-хозяина млекопитающего одним или более векторами, кодирующими антитела согласно настоящему изобретению, культивирование клетки-хозяина и выделение и очистку молекулы антитела.
Другой аспект настоящего изобретения относится к фармацевтической композиции, содержащей в качестве активного ингредиента одно или несколько антител согласно настоящему изобретению и фармацевтически приемлемый носитель.
Еще один аспект настоящего изобретения относится к фармацевтической композиции для применения при лечении B-клеточных злокачественных новообразований.
Еще один аспект настоящего изобретения относится к способу лечения пациента, страдающего от B-клеточного злокачественного новообразования, выбранного из группы, состоящей из B-клеточной неходжкинской лимфомы, B-клеточного хронического лимфоцитарного лейкоза, волосатоклеточного лейкоза, лимфоплазмоцитарной лимфомы и миеломной болезни, включающему введение указанному пациенту эффективного количества фармацевтической композиции согласно настоящему изобретению.
Еще один аспект настоящего изобретения относится к радиоиммуноконъюгату, который связывает CD37 человека, содержащему: а) антитело согласно настоящему изобретению, б) линкер, в) радионуклид, выбранный из группы, состоящей из 211At, 213Bi, 212Bi, 212Pb, 225Ac, 227Th, 90Y, 186Re, 188Re, 199Au, 194Ir, 166Ho, 159Gd, 153Sm, 149Pm, 142Pr, 111Ag, 109Pd, 77As, 67Cu, 47Sc и 177Lu.
Еще один аспект настоящего изобретения относится к фармацевтической композиции, содержащей радиоиммуноконъюгат, описанный выше.
Другой аспект настоящего изобретения относится к фармацевтической композиции, описанной выше, для применения при лечении B-клеточного злокачественного новообразования, выбранного из группы, состоящей из B-клеточной неходжкинской лимфомы, B-клеточного хронического лимфоцитарного лейкоза, волосатоклеточного лейкоза, лимфоплазмоцитарной лимфомы и миеломной болезни.
Дополнительный аспект настоящего изобретения относится к способу лечения B-клеточного злокачественного новообразования, выбранного из группы, состоящей из B-клеточной неходжкинской лимфомы, B-клеточного хронического лимфоцитарного лейкоза, волосатоклеточного лейкоза, лимфоплазмоцитарной лимфомы и миеломной болезни, включающему введение эффективного количества фармацевтической композиции согласно настоящему изобретению.
Еще один аспект настоящего изобретения относится к набору для получения радиоиммуноконъюгата согласно настоящему изобретению, содержащему два или более флаконов, где один флакон содержит конъюгат, содержащий хелатирующий агент, связанный с антителом согласно настоящему изобретению; а второй флакон содержит радионуклид.
Кроме того аспектом изобретения является применение химерных антител для блокирования антигена CD37 в нормальных тканях перед применением меченного радиоактивным изотопом антитела мыши или химерного HH1 для терапии.
Краткое описание чертежей
На фигуре 1 показана точечная диаграмма проточной цитометрии при пропускании клеток Daudi и гистограмма для связывания chHH1.1 (изотип IgG1) против CD37 и отсутствия связывания антитела против NIP (отрицательный контроль). Фигура 1 демонстрирует значительное связывание chHH1 с антигеном.
На фигуре 2 показано связывание chHH1.1 с клетками лимфомы линии Daudi. Она демонстрирует быстрое и эффективное связывание с мишенью.
Фигура 3 показывает, что chHH1 имеет аналогичную ADCC, что и ритуксимаб, несмотря на меньшее количество антигенов, и значительную интернализацию CD37 целевыми клетками лимфомы линии Daudi.
Фигура 4 иллюстрирует ADCC на РВМС, стимулированных IL-2, в качестве эффекторных клеток, и клетках Rec-1 в качестве клеток-мишеней в трех различных соотношениях эффектора и клеток-мишеней. Средние и SD для трех индивидуумов.
На фигуре 5 показана CDC с 10% сывороткой на трех индивидуумах для клеток Rec-1, меченных HH1 мыши, ритуксимабом, chHH1.1 или комбинацией ритуксимаба и chHH1.1.
Фигура 6 показывает биораспределение (% I.D./г) 125I-chHH1.3 в женских особях голых мышей через 24 и 48 часов после инъекции.
Фигура 7 показывает процент специфического лизиса из-за ADCC в клетках Daudi с NK-клетками в качестве эффекторных. Кровь брали у двух индивидуумов, и один эксперимент проводили с соотношением NK-клеток на 1 клетку Daudi, а другой эксперимент с соотношением 15:1.
Далее настоящее изобретение будет описано более подробно.
Подробное описание изобретения
Настоящее изобретение относится к гуманизированным или химерным антителам, полученным из моноклонального антитела мыши HH1.
Гуманизированные или химерные антитела представляют собой антитела из видов, отличных от человека, чьи аминокислотные последовательности были изменены, чтобы увеличить их сходство с вариантами антител, естественно образующимися в организме человека.
Процесс «гуманизации» обычно применяют к моноклональным антителам, разработанным для введения человеку.
Гуманизация может быть необходима, когда процесс разработки специфических антител включает их образование в нечеловеческой иммунной системе (например, в организме мыши).
Белковые последовательности антител, полученных таким образом, частично отличаются от гомологичных антител, естественно образующихся в организме человека, и поэтому являются потенциально иммуногенными при введении человеку.
Не все моноклональные антитела, предназначенные для введения человеку, нужно гуманизировать, так как многие способы лечения являются краткосрочными.
Гуманизация, как правило, рассматривается отдельно от создания химерных антител мышь-человек.
Таким образом, хотя химерное антитело обычно создают для получения антител, более подобных антителам человека (путем замены Fc области антитела мыши, на такую же область из антитела человека) простые химеры такого типа обычно не упоминаются как гуманизированные.
До некоторой степени белковая последовательность гуманизированного антитела, по существу, идентична человеческому варианту, несмотря на нечеловеческое происхождение некоторых из ее участков определяющих комплементарность (CDR), ответственных за способность антитела связываться с его антигеном-мишенью.
Тем не менее, в настоящем контексте термин химерное антитело и гуманизированное антитело используются взаимозаменяемо, как относящиеся к антителу, которое было создано с помощью генной инженерии и получено из моноклонального антитела мыши HH1.
Химерные или гуманизированные антитела, полученные из моноклонального антитела HH1
Тяжелой цепью иммуноглобулина (IgH) является большая полипептидная субъединица антитела (иммуноглобулина).
Типичное антитело состоит из двух тяжелых цепей иммуноглобулина (Ig) и двух легких цепей Ig.
Существует несколько различных типов тяжелой цепи, которые определяют класс или изотип антитела.
Эти типы тяжелой цепи варьируют у различных животных.
Легкая цепь иммуноглобулина является малой полипептидной субъединицей антитела (иммуноглобулина).
У человека есть два типа легких цепей (как и у других млекопитающих), каппа (κ) цепь, кодируемая в каппа-локусе иммуноглобулина на хромосоме 2, и лямбда (λ) цепь, кодируемая в лямбда локусе иммуноглобулина на хромосоме 22.
Антитела производят B-лимфоциты, каждый из которых экспрессирует только один класс легкой цепи.
Будучи полученным однажды, класс легкой цепи остается фиксированным в течение всего срока жизни B-лимфоцита.
У здоровых индивидуумов общее соотношение каппа к лямбда составляет примерно 2:1 в сыворотке крови (измерение общих интактных антител) или 1:1,5, если измерять свободные легкие цепи, сильно отличающееся соотношение свидетельствует о новообразовании.
Точное нормальное соотношение каппа к лямбда находится в диапазоне от 0,26 до 1,65.
Количество и каппа, и лямбда цепей может увеличиваться пропорционально, поддерживая нормальное соотношение.
И вариабельные, и константные цепи химерного или гуманизированного антитела, полученного из моноклонального антитела мыши HH1, могут отличаться от известных последовательностей.
Примеры таких отличий ясны из настоящего изобретения и включают выбор константных цепей, генетические вариации вариабельных цепей и вариации Fc домена, для модулирования эффекторных функций.
Авторы настоящего изобретения используют генноинженерные химерные, гуманизированные антитела, полученные из моноклонального антитела мыши HH1.
Эти антитела демонстрируют перспективный эффект для поиска оптимального лечения связанных с B-клетками злокачественных новообразований.
Эти эффекты проявляются в экспериментах настоящего изобретения.
Таким образом, аспект настоящего изобретения относится к молекуле антитела, которое связывается с CD37 человека и которое является производным от а) моноклонального антитела мыши, которое определяется i) вариабельной областью тяжелой цепи, содержащей аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1; и ii) вариабельной областью легкой цепи, содержащей аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 3, или от б) антитела, не являющегося антителом человека, распознающим тот же эпитоп CD37 человека, что и антитело, определенное в а) или распознающим эпитоп, который близок или перекрывается с указанным эпитопом; причем указанная молекула антитела представляет собой химерное или гуманизированное антитело.
Одним из вариантов осуществления настоящего изобретения является химерное антитело, характеризующееся i) вариабельной областью тяжелой цепи, содержащей аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1; ii) вариабельной областью легкой цепи, содержащей аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 3, iii) константными тяжелыми и легкими цепями, которые имеют человеческое происхождение.
Другим вариантом осуществления настоящего изобретения является химерное антитело, характеризующееся i) константной областью тяжелой цепи, выбранной из группы, состоящей из цепей IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4, и ii) константной областью легкой цепи, представляющей собой каппа или лямбда цепь.
Еще одним вариантом осуществления настоящего изобретения является константная область тяжелой цепи, которая определяется как i) содержащая аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6 и/или SEQ ID NO: 7, и в которой константная область легкой цепи ii) содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 9.
Еще одним вариантом осуществления настоящего изобретения является константная область тяжелой цепи, которая определяется как i) содержащая аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 11 и/или SEQ ID NO: 14, и где константная область легкой цепи ii) содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 13.
Последовательность ДНК полноразмерной тяжелой цепи Fc chHH1.3 с мутацией представлена в SEQ ID NO: 10.
Аминокислотная последовательность полноразмерной легкой цепи Fc chHH1.3 представлена в SEQ ID NO: 11.
Последовательность ДНК полноразмерной тяжелой цепи Fc chHH1.3 с мутацией представлена в SEQ ID NO: 12.
Аминокислотная последовательность полноразмерной легкой цепи Fc chHH1.3 с мутацией представлена в SEQ ID NO: 13.
Последовательность Fc chHH1.3 без мутации (константная область) представлена в SEQ ID NO: 14.
Молекулы нуклеиновых кислот, кодирующие антитела согласно настоящему изобретению
Процесс гуманизации основан на том, что получение моноклональных антител может быть осуществлено с применением рекомбинантной ДНК, чтобы создать конструкции, способные к экспрессии в культуре клеток млекопитающих.
То есть, участки генов, способные продуцировать антитела, выделяют и клонируют в клетки, которые могут быть выращены в резервуаре так, что антитела, образованные на основе ДНК клонированных генов, могут быть собраны en masse.
Этап с участием рекомбинантной ДНК обеспечивает удобный момент, который может быть легко использован для изменения аминокислотной последовательности экспрессируемого антитела.
Поэтому изменения в структуре антитела, полученные в процессе гуманизации, осуществляются с помощью методик на уровне ДНК.
Таким образом, аспект настоящего изобретения относится к молекуле ДНК, кодирующей гуманизированные или химерные антитела согласно настоящему изобретению.
Одним вариантом осуществления настоящего изобретения является молекула ДНК, кодирующая кодирующую область вариабельной области тяжелой цепи гуманизированного или химерного антитела согласно настоящему изобретению.
Другим вариантом осуществления настоящего изобретения является кодирующая область вариабельной области тяжелой цепи, слитая с областью, кодирующей константную область тяжелой цепи человеческого происхождения.
Такая константная область тяжелой цепи человека может быть выбрана из группы, состоящей из IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4.
Одним из вариантов осуществления настоящего изобретения является IgG1, кодируемый последовательностью, представленной в SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6 и/или SEQ ID NO: 7.
Одним из вариантов осуществления настоящего изобретения является тяжелая цепь IgG3, кодируемая последовательностью, представленной в SEQ ID NO: 10.
Одним из вариантов осуществления настоящего изобретения является легкая цепь IgG3, кодируемая последовательностью, представленной в SEQ ID NO: 12.
Одним из вариантов осуществления настоящего изобретения является IgG3 с мутационной заменой H435, кодируемый последовательностью, представленной в SEQ ID NO: 12.
Еще в одном варианте осуществления настоящее изобретение включает константные области тяжелой цепи человека с одной или несколькими заменами в Fc области.
Другой вариант осуществления настоящего изобретения относится к молекуле ДНК, содержащей участок, кодирующий вариабельную область легкой цепи химерного или гуманизированного антитела согласно настоящему изобретению.
Такой участок, кодирующий вариабельную область легкой цепи, может быть слит с областью, кодирующей константную область легкой цепи человеческого происхождения.
Константная область легкой цепи может быть каппа или лямбда цепью.
В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения легкая цепь каппа кодируется последовательностью, представленной в SEQ ID NO: 9.
Молекулы ДНК могут быть сконструированы и оптимизированы для экспрессии в клетке-мишени.
Экспрессионный вектор, также известный как экспрессионная конструкция, в общем, является плазмидой, которая используется для введения определенного гена (в данном контексте молекулы ДНК согласно изобретению) в клетку-мишень.
После того, как экспрессионный вектор оказывается внутри клетки, белок, который кодируется геном, образуется с помощью клеточной транскрипции и трансляционного аппарата рибосомных комплексов.
Плазмида часто бывает создана таким образом, чтобы содержать регуляторные последовательности, которые действуют как энхансерные и промоторные области и приводят к эффективной транскрипции гена, который несет экспрессионный вектор.
Целью применения хорошо разработанного экспрессионного вектора является производство больших количеств стабильной матричной РНК, и, следовательно, белка.
Экспрессионные векторы являются основными инструментами для биотехнологии и производства белков, таких как инсулин, которые важны для медицинского лечения конкретных заболеваний, например, диабета.
После экспрессии генного продукта, требуется очистка белка; а так как вектор вводят в клетку-хозяина, белок интереса должен быть очищен от белков клетки-хозяина.
Поэтому, чтобы сделать процесс очистки более простым, клонированный ген должен иметь метку. Эта метка может быть гистидиновой (His) меткой или любым другим маркерным пептидом.
Таким образом, аспект настоящего изобретения относится к экспрессионным векторам, содержащим молекулу ДНК, описанную выше.
Клетки, содержащие и экспрессирующие антитела согласно настоящему изобретению
Описанные выше молекулы ДНК или экспрессионные векторы могут быть введены в клетку-хозяина.
Такие клетки могут, с помощью гибридомной технологии, становиться иммортализованными клетками, которые продуцируют химерные или гуманизированные антитела.
Гибридомная технология является технологией формирования гибридных клеточных линий (называемых гибридомы) путем слияния специфических продуцирующих антитело B-клеток с клеткой миеломы (рак B-клеток), выбранной за ее способность расти в культуре ткани и за отсутствие синтеза цепей антител.
Все антитела, продуцируемые гибридомой, обладают единственной специфичностью и поэтому являются моноклональными антителами (в отличие от поликлональных антител).
Таким образом, один аспект настоящего изобретения относится к клетке-хозяину, несущей один или более векторов или молекул ДНК согласно настоящему изобретению.
Один вариант осуществления настоящего изобретения относится к клетке-хозяину, несущей экспрессионный вектор, содержащий молекулу ДНК, кодирующую вариабельную область тяжелой цепи HH1, и второй экспрессионный вектор, содержащий молекулу ДНК, кодирующую вариабельную область легкой цепи согласно настоящему изобретению.
В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения клетка-хозяин является клеткой млекопитающего.
В другом варианте осуществления настоящего изобретения клетка является клеткой гибридомы.
Способы получения антител согласно настоящему изобретению
Химерные или гуманизированные антитела согласно настоящему изобретению могут быть получены несколькими способами.
Один способ получения таких антител включает трансфекцию клетки-хозяина млекопитающего одним или более векторами согласно настоящему изобретению, культивирование клетки-хозяина и выделение и очистку молекулы антитела.
Другой способ получения таких антител включает создание гибридомных клеток, которые продуцируют химерные или гуманизированные антитела согласно настоящему изобретению.
Идентичность последовательности
Согласно общепринятому определению «идентичность» здесь определяется как идентичность между последовательностями генов или белков на нуклеотидном или аминокислотном уровне, соответственно.
Таким образом, в данном контексте «идентичность последовательности» является мерой идентичности между белками на уровне аминокислот и мерой идентичности между нуклеиновыми кислотами на уровне нуклеотидов.
Идентичность последовательности белка может быть определена путем сравнения аминокислотной последовательности в заданном положении в каждой последовательности, когда последовательности выровнены.
Кроме того, идентичность последовательности нуклеиновой кислоты может быть определена путем сравнения нуклеотидной последовательности в заданном положении в каждой последовательности, когда последовательности выровнены.
Для определения процента идентичности двух последовательностей нуклеиновых кислот или двух аминокислот, последовательности выравнивают с целью оптимального сравнения (например, в первую аминокислотную или нуклеотидную последовательности могут быть введены разрывы для оптимального выравнивания со второй аминокислотной или нуклеотидной последовательностью). Затем сравниваются аминокислотные остатки или нуклеотиды в соответствующих положениях.
Когда позиция в первой последовательности занята тем же аминокислотным остатком или нуклеотидом в соответствующем положении во второй последовательности, то молекулы являются идентичными в данном положении. Процент идентичности между двумя последовательностями является функцией числа идентичных положений, общих для последовательностей (т.е. % идентичности = число идентичных положений/общее число положений (например, перекрывающихся позиций) × 100). В одном варианте осуществления эти две последовательности имеют одинаковую длину.
Можно выровнять последовательности вручную и посчитать количество идентичных нуклеотидов или аминокислот. Альтернативно, выравнивание двух последовательностей для определения процента идентичности может быть осуществлено с использованием математических алгоритмов. Такой алгоритм включен в программы NBLAST и XBLAST. Поиск нуклеиновых кислот BLAST может быть осуществлен с помощью программы NBLAST, баллы = 100, длина слова = 12, чтобы получить нуклеотидную последовательность, гомологичную молекуле нуклеиновой кислоты согласно изобретению. Поиск белков BLAST может быть осуществлен с помощью программы XBLAST, баллы = 50, длина слова = 3, чтобы получить аминокислотную последовательность, гомологичную молекуле белка согласно изобретению.
Для получения выравнивания с разрывами для сравнения можно применять Gapped BLAST. Кроме того, для выполнения повторяющегося поиска может быть применен PSI-Blast, который выявляет отдаленные отношения между молекулами. При применении программ NBLAST, XBLAST и Gapped BLAST могут быть использованы параметры по умолчанию соответствующих программ. См. http://www.ncbi.nlm.nih.gov. Кроме того, идентичность последовательности может быть рассчитана после выравнивания последовательностей, например, программой BLAST в базе данных EMBL (www.ncbi.nlm.gov/CGI-BIN/BLAST).
Как правило, для выравнивания могут быть использованы настройки по умолчанию в отношении, например, «матрицы похожести» и «штраф за разрыв». В контексте настоящего изобретения могут быть предпочтительными настройки по умолчанию BLASTN и PSI BLAST.
Процент идентичности между двумя последовательностями может быть определен с применением методик, аналогичных описанным выше, с учетом или без учета разрывов. При расчете процента идентичности учитываются только точные совпадения.
Вариант осуществления настоящего изобретения относится к выделенной нуклеиновой кислоте, содержащей нуклеотидную последовательность, имеющую 80% идентичности с последовательностью VH (SEQ ID NO: 2) и/или последовательностью VL (SEQ ID NO: 4) антитела HH1.
Вариант осуществления настоящего изобретения относится к выделенной нуклеиновой кислоте, содержащей нуклеотидную последовательность VH (SEQ ID NO: 2) и/или VL (SEQ ID NO: 4) антитела HH1.
В другом варианте осуществления изобретения выделенная нуклеиновая кислота содержит нуклеотидную последовательность, имеющую по меньшей мере 90% идентичности с последовательностью VH (SEQ ID NO: 2) и/или последовательностью VL (SEQ ID NO: 4) антитела HH1, например, 90% идентичности, 91% идентичности, 92% идентичности, 93% идентичности, 94% идентичности, 95% идентичности, 96% идентичности, 97% идентичности, 98% идентичности или 99% идентичности.
Другой вариант осуществления изобретения относится к антителу, содержащему полипептидную последовательность, имеющую 80% идентичности с последовательностью VH (SEQ ID NO: 1) и/или последовательностью VL (SEQ ID NO: 3) антитела HH1.
Другой вариант осуществления изобретения относится к антителу, содержащему полипептидную последовательность VH (SEQ ID NO: 1) и/или последовательность VL (SEQ ID NO: 3) антитела HH1.
В другом варианте осуществления настоящего изобретения антитело содержит полипептидную последовательность, имеющую по меньшей мере 90% идентичности с последовательностью VH (SEQ ID NO: 1) и/или последовательностью VL (SEQ ID NO: 3) антитела HH1, например, 90% идентичности, 91% идентичности, 92% идентичности, 93% идентичности, 94% идентичности, 95% идентичности, 96% идентичности, 97% идентичности, 98% идентичности или 99% идентичности.
В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения эти антитела являются химерными или гуманизированными антителами, полученными из моноклонального антитела HH1.
Генетические изменения
Генетические изменения вызваны изменением порядка оснований в нуклеотидах в генах. Эти изменения вызывают мутации в генах, а затем в белках, которые такие гены кодируют.
Эти мутации могут быть либо смысловыми, либо миссенс-мутациями, либо заменами.
Вариант осуществления настоящего изобретения относится к выделенной нуклеотидной последовательности цепи VH (SEQ ID NO: 2) и/или цепи VL (SEQ ID NO: 4) моноклонального антитела HH1, которая содержит по меньшей мере 50, например, 20, например, 10, например, 5, например, 4, например, 3, например, 2, например, 1 смысловую мутацию.
Другой вариант осуществления настоящего изобретения относится к выделенной нуклеотидной последовательности цепи VH (SEQ ID NO: 2) и/или цепи VL (SEQ ID NO: 4) моноклонального антитела HH1, которая содержит 0-50, например, 1-50, например, 0-20, например, 1-20, например, 0-10, например, 1-10, например, 0-5, например, 1-5, например, 3, например, 1 смысловую мутацию.
Миссенс-мутация (тип несинонимичной мутации) представляет собой точечную мутацию, в которой изменен один нуклеотид, в результате чего образуется кодон, который кодирует другую аминокислоту (мутации, которые изменяют аминокислоту на стоп-кодон называются нонсенс-мутациями, а не миссенс-мутациями). Миссенс-мутация может сделать полученный белок нефункциональным.
Однако не все миссенс-мутации приводят к заметным изменениям белка. Аминокислота может быть заменена аминокислотой с очень сходными химическими свойствами, и в этом случае белок может функционировать нормально; это называется нейтральной, «тихой» или консервативной мутацией.
Альтернативно, замена аминокислоты может произойти в области белка, которая существенно не влияет на вторичную структуру белка или функции. Когда аминокислота может кодироваться более чем одним ко доном (так называемое «вырожденное кодирование») мутация в ко доне может не вызвать никаких изменений при трансляции; это называется синонимичной мутацией (форма молчащей мутации), а не миссенс-мутацией.
Один из вариантов осуществления настоящего изобретения относится к антителу, содержащему полипептидную последовательность цепи VH (SEQ ID NO: 2) и/или цепи VL (SEQ ID NO: 4) моноклонального антитела HH1, которая содержит по меньшей мере 50, например, 20, например, 10, например, 5, например, 4, например, 3, например, 2, например, 1 миссенс-мутацию.
Один из вариантов осуществления настоящего изобретения относится к антителу, содержащему полипептидную последовательность цепи VH (SEQ ID NO: 2) и/или цепи VL (SEQ ID NO: 4) моноклонального антитела HH1, которая содержит 0-50, например, 1-50, например, 0-20, например, 1-20, например, 0-10, например, 1-10, например, 0-5, например, 1-5, например, 3, например, 1 миссенс-мутацию.
Консервативная замена является заменой одной аминокислоты на другую с примерно аналогичными свойствами так, что общему функционированию, скорее всего, не будет нанесен серьезный ущерб.
В другом варианте осуществления настоящего изобретения миссенс-мутации являются консервативными мутациями или заменами.
Еще один вариант осуществления настоящего изобретения относится к выделенной нуклеотидной последовательности или полипептидной последовательности с 80% идентичности с последовательностью вариабельной области тяжелой цепи (SEQ ID NO: 1) и/или последовательностью вариабельной области легкой цепи (SEQ ID NO: 3) последовательности HH1, где вариантами последовательности являются консервативные замены.
Другим вариантом осуществления настоящего изобретения является последовательность, идентичная на 80%, имеющая, например, 90% идентичности, 91% идентичности, 92% идентичности, 93% идентичности, 94% идентичности, 95% идентичности, 96% идентичности, 97% идентичности, 98% идентичности или 99% идентичности, где вариантами последовательности являются консервативные замены.
Для того чтобы улучшить этап радиоактивного мечения, может быть выгодно вводить дополнительный лизин в, например, Fc часть химерного или гуманизированного антитела согласно настоящему изобретению.
Это может уменьшить вероятность присоединения связывающих лизин хелатирующих агентов к антигенсвязывающим сайтам антитела, тем самым снижая риск аномальной иммунореактивности в ходе радиоактивного мечения.
Способы введения лизина в, например, Fc часть HH1 известны в данной области техники, например, в Hemminki et al., 1995.
Вариант осуществления настоящего изобретения относится к радиоиммуноконъюгату согласно настоящему изобретению, который был модифицирован 10 Lys в Fc части HH1, например, 8 Lys, например, 6 Lys, например, 5 Lys, например, 4 Lys, например, 3 Lys, например, 2 Lys, например, 1 Lys.
Могут быть выбраны другие варианты Fc части антител согласно настоящему изобретению с целью оптимизации или модулирования одной или нескольких эффекторных функций.
Эти модуляции эффекторных функций делают, например, чтобы увеличить антитело-зависимую клеточную цитотоксичность (ADCC).
Такие вариации Fc части известны в данной области.
Таким образом, один аспект настоящего изобретения относится к антителу согласно настоящему изобретению, которое имеет одну или более мутаций в Fc области, которые модулируют одну или несколько эффекторных функций.
Иммуноконъюгаты
Иммуноконъюгаты являются антителами, конъюгированными (соединенными) со второй молекулой, обычно токсином, радиоизотопом или меткой.
Такие иммуноконъюгаты химерного и гуманизированного HH1 являются всеми аспектами настоящего изобретения.
Один тип является химерным и гуманизированным HH1 согласно настоящему изобретению, соединенным с или связанным с хелатирующим линкером.
Хелатирующие линкеры описаны в приведенном ниже разделе в отношении радиоиммуноконъюгатов, и поэтому хелатирующие линкеры, описанные в нем, считаются удобными для иммуноконъюгатов, содержащих химерное и гуманизированное HH1 согласно настоящему изобретению, соединенное с или связанное с хелатирующим линкером.
Радиоиммуноконъюгаты
Аспект настоящего изобретения относится к радиоиммуноконъюгату, который связывает CD37 человека, содержащему химерное или гуманизированное антитело, полученное из моноклонального антитела HH1 в соответствии с настоящим изобретением, линкер и радионуклид, выбранный из группы, состоящей из
211At, 213Bi, 212Bi, 212Pb, 225Ac, 227Th, 90Y, 186Re, 188Re, 199Au, 194Ir, 166Ho, 159Gd, 153Sm, 149Pm, 142Pr, 111Ag, 109Pd, 77As, 67Cu, 47Sc и 177Lu.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения линкер представляет собой хелатирующий линкер.
В другом варианте осуществления настоящего изобретения радионуклид является радионуклидом, выбранным из группы, состоящей из 177Lu, 225Ac, 227Th и 90Y.
В другом варианте осуществления настоящего изобретения радионуклид является 177Lu.
В другом варианте осуществления настоящего изобретения радионуклид является 212Pb.
В еще одном варианте радионуклид является другим бета-излучателем или альфа-излучателем.
Радионуклид может быть присоединен к антителу через первоначальное взаимодействие бифункционального хелатирующего агента, например, p-SCN-bn-DOTA (Macrocyclics, Tx, USA) с антителом, с последующей очисткой для удаления несвязанного хелатирующего агента, а затем реакцией конъюгата антитела с хелатирующим агентом с радионуклидом, с последующей очисткой для удаления несвязанного радионуклида.
В качестве альтернативы, хелатирующий агент и радионуклид могут быть соединены в первую очередь, а затем конъюгированы с антителом.
Хелатирующие линкеры, такие как, например, p-SCN-bn-DOTA, могут применяться для присоединения других металлических радионуклидов к производным антитела HH1 аналогично тому, как описано для 177Lu.
Можно применять линкер любого типа с достаточной способностью к комплексообразованию и функциональной группой, позволяющей прямую или косвенную конъюгацию с белком или пептидом.
Примеры таких линкеров описаны в литературе (например, Brechbiel, 2008; Liu, 2008). Некоторыми полезными примерами являются бифункциональные циклические 10 энтеросорбенты, например, p-SCN-BN-DOTA, эфир DOTA-NHS, p-SCN-Bn-TCMC; бифункциональные линейные энтеросорбенты, например, p-SCN-BN-DTPA и CHX-Aʺ-DTPA.
Радионуклиды в настоящем изобретении предпочтительно можно конъюгировать с молекулой с помощью бифункциональных хелатирующих агентов.
Это могут быть циклические, линейные или разветвленные хелатирующие агенты. Отдельно следует упомянуть хелатирующие полиаминополикислоты, которые содержат линейную, циклическую или разветвленную полиазаалкановую основу с кислотными (например, карбоксиалкильной) группами, присоединенными к азотам основы.
Примеры подходящих хелатирующих агентов включают производные DOTA, такие как п-изотиоцианатобензил-1,4,7,10-тетраазациклододекан-1,4,7,10-тетрауксусной кислоты (p-SCN-Bz-DOTA) или 8-2-(4-изотиоцианатобензил)-1,4,7,10-тетра (2-карбамоилметил)циклододекан и производные DTPA, такие как п-изотиоцианатобензил-диэтилентриаминпентауксусная кислота (p-SCN-Bz-DTPA), первый из которых является циклическим хелатирующим агентом, последний - линейным хелатирующим агентом.
Металлирование комплексообразующего фрагмента может быть выполнено до или после конъюгации комплексообразующего фрагмента с направляющей частью.
Процедура радиоактивного мечения будет в общем более удобна с точки зрения используемого времени, если хелатирующий агент конъюгируют с антителом до радиоактивного мечения.
Принципы подготовки меченных радиоактивным изотопом конъюгатов с применением хелатирующих агентов, прикрепленных к антителу, описаны более широко, например, в Liu, 2008.
Таким образом, полученные на основе HH1 химерные или гуманизированные антитела могут применяться для получения радиоиммуноконъюгатов с различиями в свойствах излучения и эффективном периоде полураспада.
Например радиоиммуноконъюгат против CD37, состоящий из химерного или гуманизированного антитела, полученного из моноклонального антитела HH1 в соответствии с настоящим изобретением, хелатирующего линкера и бета- или альфа-излучающих радионуклидов, в том числе, но не ограничиваясь 177Lu, 211At, 213Bi, 212Bi, 212Pb, 225Ac, 227Th, 90Y, 186Re, 188Re, 199Au, 194Ir, 166Ho, 159Gd, 153Sm, 149Pm, 142Pr, 111Ag, 109Pd, 77As, 67Cu, 47Sc могут быть получены и применены для получения фармацевтических препаратов и применяться в терапевтических целях.
Иммунотоксины
Иммунотоксин является сконструированным человеком белком, который состоит из направляющей части, соединенной с токсином. Когда белок связывается с клеткой, он попадает внутрь с помощью эндоцитоза, и токсин убивает клетку.
Они обычно используются для лечения некоторых видов рака и некоторых вирусных инфекций.
Эти белки обычно изготавливают из модифицированного антитела или фрагмента антитела, соединенного с фрагментом токсина.
Направляющая часть состоит из Fv части антитела, которая направляет иммунотоксин на конкретный тип клеток.
Токсин обычно представляет собой цитотоксический белок, полученный из бактериального или растительного белка, из которого удален природный связывающий домен, так что Fv направляет токсин с антигеном на клетку-мишень.
В другом варианте осуществления настоящего изобретения токсин представляет собой химиотерапевтическую молекулу, в том числе, но не ограничиваясь ими, алкилирующие агенты (цисплатин, карбоплатин, оксалиплатин, мехлорэтамин, циклофосфамид, хлорамбуцил, ифосфамид), антиметаболиты (азатиоприн, меркаптопурин, пиримидины), алкалоиды (винкристин, винбластин, винорелбин, виндезин, паклитаксел, доцетаксел, этопозид, тенипозид), ингибиторы топоизомеразы (иринотекан, топотекан, амсакрин, этопозид, тенипозид) и цитотоксические антибиотики (актиномицин, доксорубицин, даунорубицин, валрубицин, идарубицин, эпирубицин, блеомицин, пликамицин, митомицин).
В одном варианте осуществления изобретения доксорубицин конъюгируют с антителом через кросс-линкер SMCC-гидразид (4-[N-малеимидометил]циклогексан-1 карбоксилгидразид).
Иммунотоксин действует через связывание антитела (или другой направляющей части) с антигеном на клетке-мишени с последующим входом в клетку токсина, который убивает клетку.
Таким образом, аспект настоящего изобретения относится к иммунотоксину, который содержит антитело согласно настоящему изобретению или его фрагмент.
Фармацевтическая композиция
Антитела для лечения заболеваний обычно применяют в виде фармацевтических композиций.
Такие композиции оптимизированы по таким параметрам, как физиологическая переносимость и срок годности.
Таким образом, аспект настоящего изобретения относится к фармацевтической композиции, содержащей в качестве активного ингредиента одну или более молекул антитела против CD37 согласно настоящему изобретению (то есть химерное или гуманизированное антитело, полученное из HH1 или их фрагмент) и фармацевтически приемлемый носитель.
Один из вариантов осуществления настоящего изобретения относится к фармацевтической композиции, описанной выше, дополнительно содержащей один или более дополнительных терапевтических агентов.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения упомянутый один или более дополнительных терапевтических агентов выбирают из агентов, направленных на B-клеточный антиген, отличный от CD37.
Такой антиген может быть B-клеточным антигеном CD20.
В другом варианте осуществления настоящего изобретения упомянутый один или более дополнительных терапевтических агентов выбран из агентов, индуцирующих апоптоз.
Продукт для радиоиммунотерапии на основе химерного или гуманизированного HH1, как правило, может быть выполнен в виде фармацевтической композиции, состоящей из радионуклида, в соответствии с приведенным выше описанием, связанного с помощью хелатообразующего агента с химерным или гуманизированным антителом HH1, растворенных в буферном растворе, который в значительной степени поддерживает химическую целостность радиоиммуноконъюгата и физиологически приемлем для введения пациентам.
Таким образом, аспект настоящего изобретения относится к фармацевтической композиции, содержащей радиоиммуноконъюгат согласно настоящему изобретению и фармацевтически приемлемый носитель и/или вспомогательное вещество.
Приемлемые фармацевтические носители включают, но не ограничиваются ими, нетоксичные буферные растворы, наполнители, изотонические растворы и т.д. Более конкретно, фармацевтический носитель может быть, но не ограничивается ими, нормальным физиологическим раствором (0,9%), полунормальным физиологическим раствором, лактатом Рингера, 5% декстрозой, 3,3% декстроза/0.3% физиологического раствора. Физиологически приемлемый носитель может содержать радиолитический стабилизатор, например, аскорбиновую кислоту, который поддерживает целостность радиофармацевтического препарата во время хранения и транспортировки.
Один из вариантов осуществления настоящего изобретения включает фармацевтическую композицию согласно настоящему изобретению и одно или более дополнительных антител или радиоиммуноконъюгатов. Антитела включают, но не ограничиваются указанными, Ритуксимаб, Epratuzumab, L19, F8, F16, Galiximab, Toralizumab, Alemtuzumab, Ofatumumab, Veltuzumab, Afiituzumab, Tositumomab, Reditux, Ibritumomab, K7153A, 37.1 и HH1.
Радиоиммуноконъюгаты включают, но не ограничиваются ими, Zevalin, Bexxar и Betalutin.
В другом варианте осуществления настоящего изобретения один или более дополнительных антител или радиоиммуноконъюгатов направлены на CD20. Антитела включают, но не ограничиваются ими, Ритуксимаб, Veltuzumab, Ofatumumab, Afutuzumab, Tositumomab, Reditux и Ibritumomab. Радиоиммуноконъюгаты включают, но не ограничиваются ими, Zevalin и Bexxar.
Еще один вариант осуществления настоящего изобретения относится к фармацевтической композиции согласно настоящему изобретению для лечения злокачественных B-клеток, экспрессирующих антиген CD37.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения фармацевтическая композиция предназначена для лечения B-клеточных злокачественных новообразований, выбранных из группы, состоящей из B-клеточной неходжкинской лимфомы, B-клеточного хронического лимфоцитарного лейкоза, волосатоклеточного лейкоза, лимфоплазмоцитарной лимфомы и миеломной болезни.
Лечение
Терапевтическое применение фармацевтического раствора в соответствии с настоящим изобретением может осуществляться для лечения злокачественных клеток, экспрессирующих антиген CD37, включая, но не ограничиваясь ими, B-клеточные злокачественные новообразования, выбранные из группы, состоящей из B-клеточной неходжкинской лимфомы, B-клеточного хронического лимфолейкоза, волосатоклеточного лейкоза, лимфоплазмоцитарной лимфомы и миеломной болезни.
Другие применения включают лечение аутоиммунных заболеваний и лечение эффектов, связанных с трансплантацией.
Терапия может быть основана на, но не ограничиваются ими, излучении бета-частиц или излучении альфа-частиц, или их комбинации.
Лечение можно осуществлять в виде монотерапии или в комбинации с другим лечением, предпочтительно, стандартной терапией. Таким другим лечением могут быть предварительная обработка, хирургия, химиотерапия (включая доксорубицин, винбластин и гемцитабин), иммунотерапия, фотодинамическая терапия, ингибитор протеасом (включая бортезомибом), ингибиторы гистондеацетилазы (включая вориностат и субероиланилид гидроксамовой кислоты), витамин D3 и аналоги витамина D3, ингибиторы контрольных точек клеточного цикла (в том числе UCN-01 и 2-(4-(4-хлорфенокси)фенил)-1H-бензимидазол-5-карбоксамид), радиосенсибилизаторы гипоксических клеток (включая метронидазол и мисонидазол), радиосенсибилизаторы индукторы апоптоза (в том числе витаферин A), радиоиммунотерапия или сочетание двух или более из них.
Введение означает внутривенное вливание или внутривенную инъекцию. Более конкретно, радиоиммуноконъюгат согласно настоящему изобретению можно вводить непосредственно в вену с помощью периферической венозной канюли, соединенной с капельной камерой, которая предотвращает воздушную эмболию и позволяет оценить скорость тока жидкости в организм пациента.
В одном варианте осуществления радиоиммуноконъюгат можно вводить несколько раз.
В другом варианте осуществления настоящего изобретения радиоиммуноконъюгат может быть введен повторно, но с различными радионуклидами, например, за бета-радиоиммунотерапией может последовать альфа-радиоиммунотерапия, или наоборот.
Аспект настоящего изобретения относится к применению радиоиммуноконъюгатов согласно настоящему изобретению для лечения B-клеточных злокачественных новообразований.
Один из вариантов осуществления настоящего изобретения относится к применению радиоиммуноконъюгатов согласно настоящему изобретению при совместном введении или в дополнение к другой терапии.
В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения другие способы лечения выбраны из предварительной обработки, химиотерапии, терапии моноклональными антителами, хирургии, лучевой терапии и/или фотодинамической терапии.
В другом варианте осуществления настоящего изобретения другие способы лечения представляют собой трансплантацию костного мозга или трансплантацию и/или терапию стволовыми клетками.
Другой вариант осуществления настоящего изобретения включает терапевтическую предварительную обработку с применением моноклонального антитела против CD20 и/или против CD37 перед обработкой радиоиммуноконъюгатом согласно настоящему изобретению.
Одним из вариантов осуществления настоящего изобретения является предварительная обработка, осуществляемая путем введения химерного антитела согласно настоящему изобретению, с последующей обработкой радиоиммуноконъюгатом из химерного антитела HH1 или радиоиммуноконъюгатом с антителом HH1.
Аспект настоящего изобретения относится к способу лечения B-клеточных злокачественных образований, выбранных из группы, состоящей из B-клеточной неходжкинской лимфомы, B-клеточного хронического лимфоцитарного лейкоза, волосатоклеточного лейкоза, лимфоплазмоцитарной лимфомы и миеломной болезни, включающему введение эффективного количества фармацевтической композиции согласно настоящему изобретению.
Одним вариантом осуществления настоящего изобретения является применение и способы лечения согласно настоящему изобретению, проведенные in vitro или ex vivo.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения дозировка антитела 10 составляет 1-1000 мг на пациента, более предпочтительно 5-50 мг на пациента, и 177Lu до 1-200 МБк/кг, более предпочтительно 10-100 МБк/кг массы тела.
Фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению, содержащие химерное или гуманизированное антитело согласно настоящему изобретению, могут применяться для элиминации B-клеток, которые экспрессируют CD37 на своей поверхности.
Такие фармацевтические композиции могут применяться для лечения B-клеточных злокачественных новообразований.
Эти B-клеточные злокачественные новообразования могут быть выбраны из группы, состоящей из B-клеточной неходжкинской лимфомы, B-клеточного хронического лимфоцитарного лейкоза, волосатоклеточного лейкоза, лимфоплазмоцитарной лимфомы и миеломной болезни.
Вариант осуществления настоящего изобретения относится к фармацевтической композиции, содержащей химерное или гуманизированное антитело согласно настоящему изобретению для применения при лечении аутоиммунных или воспалительных заболеваний, которые связаны с B-клетками в их патологией.
Другой вариант осуществления настоящего изобретения относится к способу элиминации экспрессирующих CD37 B-клеток из популяции клеток, включающему введение к указанной популяции клеток молекулы антитела согласно настоящему изобретению фармацевтической композиции, содержащей такую молекулу антитела.
Еще один вариант осуществления настоящего изобретения относится к способу лечения пациента, страдающего от B-клеточного злокачественного новообразования, выбранного из группы, состоящей из B-клеточной неходжкинской лимфомы, B-клеточного хронического лимфоцитарного лейкоза и миеломной болезни, включающему введение указанному пациенту эффективного количества фармацевтической композиции химерного или гуманизированного антитела согласно настоящему изобретению.
В отдельном варианте осуществления химерное или гуманизированное HH1 вводят пациенту, до терапии радиоактивной или иммунотоксичной версией мышиного, химерного или гуманизированного HH1, чтобы защитить нормальные клетки тканей и улучшить поглощение опухолью.
Дозировка должна быть достаточной, чтобы блокировать поглощение нормальными тканями, но не чрезмерной, так как это приведет к уменьшению поглощения опухолью. Например, химерное или гуманизированное HH1 должно быть дано в дозировке от 0,5 мг до 1 г на пациента.
Ее можно применять, например, за неделю до и/или 1-5 часа до введения радиоиммуноконъюгата.
Наборы
Аспект настоящего изобретения относится к набору для получения радиоиммуноконъюгата согласно настоящему изобретению, содержащему два или более флаконов, где один флакон содержит конъюгат, содержащий хелатирующий агент, соединенный с моноклональным антителом мыши HH1; и второй флакон содержит радионуклид.
Применение набора может требовать проведения некоторых процедур, которые необходимо выполнить до инфузии, например, радиоактивного мечения и/или очистки.
Один из вариантов осуществления настоящего изобретения относится к набору согласно настоящему изобретению, в котором содержимое одного или нескольких флаконов либо лиофилизировано, либо находится в растворе.
При смешивании содержимого двух флаконов для получения радиоиммуноконъюгата образуется конечный продукт. Таким образом, в другом варианте осуществления настоящего изобретения радиоиммуноконъюгат образуется путем смешивания содержимого двух флаконов.
Этот продукт может требовать очистки перед применением.
Следует отметить, что варианты осуществления и признаки, описанные в контексте одного из аспектов настоящего изобретения, также применимы и к другим аспектам изобретения.
Все ссылки на патенты и не на патенты, приведенные в настоящей заявке, включены в данное описание в качестве ссылки во всей их полноте.
Далее изобретение будет описано более подробно в следующих неограничивающих примерах.
Примеры
Пример 1: Создание химерного антитела
Химерный вариант антитела HH1 получали с применением экспрессионных векторов для V-области гена.
Векторы, содержащие гены цепей VH и VL получали методом ОТ-ПЦР.
Затем V-гены секвенировали и создавали новые специфические праймеры для амплификации V-генов, прежде чем клонировать их в вектор pLNOH2, содержащий гены константной области антитела человека IgG (Cγ3, Gγ1 и CH1γ3).
Вектор pLNOH2, содержащий константные области IgG1CH1 (SEQ ID NO. 5), IgG1CH2 (SEQ ID NO. 6), IgG1CH3 (SEQ ID NO. 7), приведен в SEQ ID NO. 8.
Тяжелую и легкую цепи из векторов pLNOH2 (SEQ ID NO. 5) и pLNOK объединяли, чтобы создать комбинированный вектор pLNOH2γ1/κ αCD37. Полный ген легкой цепи (SEQ ID NO: 9), промотор CMV и сигнал полиаденилирования pLNOκ αCD37 переклонировали в pLNOH2 hlgG1 αCD37.
В комбинированном векторе тяжелая и легкая цепи экспрессировались с отдельных промоторов CMV.
Определение константного домена
Константные домены в последовательности pLNOH2 были определены из последовательности IgG1 человека в базе IMGT (номер доступа: Ζ17370).
Ген и аминокислотная последовательность вариабельных областей антитела chHH1 против CD37 является следующими:
VH αCD37 (аминокислотная последовательность: SEQ ID NO: 1 и нуклеотидная последовательность: SEQ ID NO: 2)
Нуклеотидная последовательность (SEQ ID NO: 2):
Аминокислотная последовательность (SEQ ID NO: 1):
VL αCD37 (аминокислотная последовательность: SEQ ID NO: 3 и нуклеотидная последовательность: SEQ ID NO: 4)
Нуклеотидная последовательность (SEQ ID NO: 4):
Аминокислотная последовательность (SEQ ID NO: 3):
Пример 2: Проточная цитометрия для оценки связывания антигена
Анализ связывания hchlgG1 ααCD37 b (chHH1) с клетками Daudi, экспрессирующими CD37.
Клетки окрашивали и фиксировали.
Связывание с мишенью созданного chHH1 анализировали с помощью проточной цитометрии. Клетки Daudi, экспрессирующие CD37, окрашивали либо chHH1, либо hlgG1 αΝΙΡ. В левой панели выбраны интактные клетки Daudi, а на правой панели представлена гистограмма интенсивности флуоресценции этих окрашенных клеток. chHH1 связывалось с клетками Daudi, экспрессирующими CD37 (сплошная линия), а химерный αΝΙΡ IgG1 нет (пунктирная линия).
Пример 3: Радиоактивное мечение химерного HH1
Иодирование: антитела метили I путем непрямого йодирования с помощью предварительно покрытых пробирок для йодирования IODOGEN (Pierce, Rockford, IL) в соответствии с описанием производителя.
Мечение 111In и 177Lu: сначала провели реакцию антител с хелатирующим агентом (p-SCN-n-DTPA или p-SCN-BN-DOTA).
Хелатирующий агент DTPA или DOTA растворяли в 0,05 M HCl и затем добавляли к антителу, pH которого доводили до приблизительно 8,5 промыванием карбонатным буфером в соотношении 5:1. Затем pH снова проверяли и при необходимости доводили снова. Раствор встряхивали в течение 60 минут при комнатной температуре, а затем реакцию прекращали добавлением 50 мкл 200 мМ раствора глицина (на мг антитела).
Чтобы удалить свободный хелатирующий агент, конъюгированные антитела 4-5 раз промывали PBS (PAA), а затем доводили до pH 5 путем промывки ацетатом аммония. Затем к 0,5 мг DOTA-Ab добавляли 111In или 177Lu (Perkin Elmer, Boston, MA, USA) и встряхивали в течение одного часа при 42°C.
Наконец, продукт очищали путем элюции с гель-фильтрационной колонки, например, Sephadex G-25 PD10 (GE health) или подобной. Общий выход мечения варьировал от 17% до 63%.
Качество радиоиммуноконъюгатов измеряли, используя клетки лимфомы и модифицированный метод Lindmo (пример 4).
Пример 4: Иммунореактивность
Предпосылки: Для измерения способности антитела связывать антиген-положительные клетки-мишени применяли анализ иммунореактивности.
Методы: Проводили два параллельных анализа на 5, 10, 40, 100 или 300 миллионах клеток в мл в примерно 0,3 мл.
К половине пробирок добавили немеченые антитела в концентрации 0,5 мг/мл и инкубировали в течение 15 мин, чтобы блокировать антиген.
После во все пробирки добавляли 5-20 нг/мл радиоиммуноконъюгата и суспензию инкубировали при 4°C с использованием шейкера в течение приблизительно 2 часов.
После этого пробирки центрифугировали, и супернатант удаляли и хранили для подсчета. Осадки повторно суспендировали в 1 мл PBS и центрифугировали. Эту процедуру промывки повторяли дважды и супернатанты объединяли. Пробирки, содержащие осадок или объединенные супернатанты подсчитывали на гамма-счетчике.
Конкретную оценку активности рассчитывали по следующей формуле: Счет незаблокированного осадка (PCN), счет объединенного супернатанта (CSC) и всего использовано (TA) для каждого образца. Специфическое связывание (SB) рассчитывали следующим образом: (PCN/TA)-(PCN/TA) заблокированных = SB.
Значения SB вычисляли для каждой концентрации клеток и наносили на график двойной обратной зависимости, иммунореактивную фракцию при бесконечном доступе к антигену определяли по Lindmo et al. (J Immunol Methods. 1984 Aug 3; 72 (1): 77-89).
Результаты: При измерении двух партий меченого 177Lu химерного HH1 иммунореактивности составили 48,1% и 84,5% соответственно. В одной партии меченого 125I химерного HH1 иммунореактивность составила 67,6%. В заключение, эти данные соответствуют тем, которые обычно получают для HH1 мыши, и это показывает, что химерные HH1 имеют подходящую способность для направления на антиген.
Пример 5: Связывание с опухолевыми клетками in vitro
Введение: Связывание проводили с целью определения равновесной константы связывания (Kd) chHH1, среднего количества антигенов на клетках Daudi (Bmax) и константы скорости связывания (ka) chHH1 (Dahle et al., 2007).
Материалы и методы: chHH1 метили 125I (пример 3). 5 миллионов клеток на мл в 0,4 мл среды суспендировали в пробирках. Одну половину клеток блокировали 0,5 мг/мл немеченого chHH1 в течение 15 минут перед добавлением меченого 125I chHH1. Другую половину клеток не блокировали. Обе параллели инкубировали с 100, 1000, 5000 и 10000 нг/мл I251-HH1. Клетки инкубировали в течение 5, 10, 20, 30 минут и 1, 1,5 и 2 часов. После инкубации клетки промывали PB S с 5% эмбриональной телячьей сывороткой. Клетки, супернатант и жидкости для промывки подсчитывали в гамма-счетчике. Эксперимент повторяли три раза.
Результаты: Типичные кривые связывания приведены на фигуре 2. Kd chHH1 составила 3,0±0,3, Bmax клеток Daudi составила 330000±4000 антигенов CD37 на клетку, и ka chHH1 составила 0,36±0,03 нМ/ч. Данные похожи на аналогичные значения для HH1 мыши (Kd=2,7±0,3, Bmax=340000±5000 антигенов CD37 на клетку и ka 0,72±0,03 нМ/ч).
Пример 6: Биораспределение и направленность на опухоль в мышах
Биораспределение меченого 177Lu химерного HH1 изучали на самцах голых мышей линии Balb/C.
Материалы и методы: радиоактивное мечение осуществили с применением p-SCN-BN-DOTA в качестве бифункционального хелатирующего агента, чтобы объединить радионуклид с антителом (см. пример 3). Препарат вводили в хвостовую вену инъекцией 100 мкл раствора для каждого животного.
Использовали самцов голых мышей линии Balb/C с массой тела 21-25 г.
Каждому животному вводили дозу радиоиммуноконюгата с активностью 120 кБк. Пять животных использовали для одной временной точки. Вскрытие проводили после цервикальной дислокации в различные моменты времени после инъекции. Определяли вес каждого образца ткани и измеряли 111In с помощью калиброванного гамма-счетчика (автоматический гамма-счетчик Cobra II, Packard Instrument Company, Meriden, CT, USA). Образцы вводимого раствора использовали в качестве контроля при измерении.
Результаты: Биораспределение меченного 177Lu химерного HH1 через 1 час, 20 часов и через шесть дней после инъекции представлены в Таблице 1. Данные показывают, что антитело имеет соответствующее биораспределение, аналогичное тому, которое наблюдали для меченного радиоактивным нуклидом ритуксимаба (Dahle et al, 2006 Nuci Med Biol, 33, 271-279). В заключение, биораспределение меченного химерного HH1 показывает, что антитело имеет подходящие свойства для применения in vivo.
Пример 7: Анализ ADCC in vitro с использованием измерения жизнеспособности с помощью проточной цитометрии
Предпосылки: Свойство ADCC химерного антитела HH1 оценивали с помощью клеток Натуральных киллеров (NK) и клеток лимфомы Daudi.
Методы: Кровь человека собрали у добровольцев и обработали Lymphoprep и Dynabeads для получения изолированных NK клеток. Клетки Daudi обрабатывали DiOC18 для окрашивания клеток.
Клетки-мишени Daudi метили 10 мкл DiOC18 при 106 клеток-мишеней/мл путем инкубации в течение 30 минут при 37°C. Клетки два раза промывали PBS и ресуспендировали в 1 мл в среде для культивирования клеток.
Обработанные DiOC18 клетки Daudi метили антителами путем добавления или химерного HH1, или контрольного ритуксимаба в концентрации 10 мкг/мл и инкубировали в течение 15 минут на льду, центрифугировали и ресуспендировали для удаления несвязанного антитела.
Различные количества NK-клеток разбавляли до концентрации 4×105/мл (40:1), 2×105/мл (20:1), 1×105/мл (10:1) и 5×104/мл (5:1) средой для культивирования клеток. Контрастирующий краситель пропидийиодид готовили путем добавления 40 мкл Р1/мл среды для культивирования, чтобы сделать раствор контрастирующего красителя.
Меченые клетки Daudi разбавляли средой для культивирования до 104/мл. Анализ начинали путем смешивания 50 мкл эффекторных клеток и 50 мкл клеток Daudi в реакционной пробирке.
В реакционную пробирку добавляли 50 мкл раствора PI. После двух часов инкубации при 37°C оценивали процент выживших клеток Daudi с помощью проточной цитометрии.
С chHH1 11% клеток Daudi погибло от ADCC, в то время как для ритуксимаба 15% клеток погибли от ADCC. Процент индукции ADCC существенно не отличается для двух антител (см. фигуру 3).
Пример 8: Анализ ADCC in vitro с применением стимулированных интерлейкином PBMC
Предпосылки: ADCC активность mAb HH1 мыши и химерной версии mAb HH1 оценивали с помощью анализа высвобождения Cr51.
Материалы и методы: Способность HH1 мыши и химерного HH1 опосредовать антитело-зависимую клеточную цитотоксичность (ADCC) оценивали с помощью клеток Daudi качестве клеток-мишеней и стимулированных IL2 РВМС человека в качестве эффекторных клеток.
Клетки Daudi (линия клеток лимфомы Беркитта) выращивали во флаконах для культивирования тканей (175 см2) с использованием RPMI-1640, дополненной 10% инактивированной нагреванием фетальной бычьей сывороткой, 1 мМ пирувата натрия, 2 мМ L-глутамина и 1% Пен/Стрепт. Культуры поддерживали при концентрации клеток между 3×105 и 1,5×106/мл путем пересаживания в свежую среду для культивирования 2-3 раза в неделю. Аликвоту клеточной культуры при плотности клеток между 0,5×106/мл и 1,0×106/мл центрифугировали (1200 оборотов в минуту) в течение 5 мин.
Клетки один раз промывали промывочным буфером (DPBS с 2%FCS) и осаждали (1200 оборотов в минуту, 5 минут). Клеточный осадок ресуспендировали в среде для анализа [RPMI с HEPES, 10% FCS] и проводили подсчет клеток. Концентрацию клеток доводили до 1×106/мл для мечения хромом-51.
Примерно 30-50 мл цельной крови отбирали в пробирки с ЭДТА у здоровых доноров и использовали для выделения PBMC. Цельную кровь разводили 1:1 DPBS (сбалансированный солевой раствор Хэнкса без кальция и магния) в 50 мл пробирке.
Разбавленную цельную кровь наслаивали на Lymphoprep (Medinor) в соотношении 2:1 в 50 мл пробирку и центрифугировали при 1000×g в течение 20 мин при медленном торможении. Мононуклеарные клетки отбирали с поверхности раздела и дважды промывали DPBS (300×g, 10 мин).
Осажденные клетки осторожно ресуспендировали в среде для культивирования (RPMI-1640 с добавлением 10% инактивированной нагреванием фетальной бычьей сыворотки, 1% Пен/Стерп) с помощью пипетки и количество клеток определяли с помощью счетчика клеток.
Концентрацию PBMC доводили до 5×105/мл и сохраняли в среде для культивирования, содержащей 25 нг/мл IL-2 (eBiosciences), и культивировали в 6-луночном планшете для культивирования при 37°C в CO2-инкубаторе в течение 3 дней. Стимулированные IL-2 РВМС собирали, подсчитывали и ресуспендировали в среде для анализа [RPMI с HEPES, 10% FCS] в концентрации 1,5×106/мл.
1×106 клеток Daudi метили 3,7 МБк хрома-51 (Cr51) в объеме 1 мл при 37°C в течение 1 часа.
Меченые клетки три раза промывали DPBS с 2% FCS центрифугированием (2000 оборотов в минуту, 5 мин).
Меченые клетки разделяли на аликвоты равного объема для связывания с HH1 мыши и химерным HH1, включая контроль без антител. Все образцы инкубировали при 37°C в течение 10 мин, затем центрифугировали и дважды промывали DPBS с 2% FCS центрифугированием (2000 оборотов в минуту, 5 мин).
Совместное культивирование эффекторных клеток с клетками-мишенями проводили в трех повторностях в 96-луночных круглодонных микротитрационных планшетах в конечном объеме 200 мкл.
Сначала посеяли 10000 клеток-мишеней в объеме 100 мкл в среде для анализа, а затем эффекторные клетки в объеме 100 мкл в различной концентрации до достижения исследуемых соотношений эффектор:мишень.
В качестве контроля клетки-мишени культивировали либо только в среде для анализа (спонтанный лизис), либо в среде для анализа с 1% Triton X-100 (максимальный лизис).
Смешанные культуры инкубировали при 37°C в CO2-инкубаторе с увлажнением в 10 течение 4 часов. Цитотоксический эффект измеряли по выделению Cr51 в супернатант. В конце инкубации клетки удаляли из культуральной среды центрифугированием (1500 оборотов в минуту, 5 минут) при комнатной температуре. Свободные от клеток супернатанты (100 мкл/лунку) переносили в соответствующие 96-луночному планшету микропробирки 0,2 мл. Количество выделенного Cr51 измеряли путем подсчета с помощью счетчика гамма-излучения Packard Cobra II.
Результаты: Результаты эксперимента представлены в таблице 2. Как показано, лизис клеток Daudi, предварительно обработанных химерным HH1, был значимым для всех трех доноров крови.
Предварительная обработка HH1 мыши, по всей видимости, не вызвала какого-либо значительного лизиса по сравнению с клетками Daudi, необработанными предварительно антителом.
Эффекторные клетки из трех индивидуумов. Данные нормализовали на измеренный лизис клеток без антитела, который был выбран в качестве 100%.
Вывод: При анализе in vitro с использованием РВМС человека, химерное HH1 вызывает значительную ADCC в плане лизиса клеток на клетках лимфомы in vitro, в то время как HH1 мыши не оказывает сколько-нибудь значительного эффекта на лизис клеток по сравнению с отсутствием обработки.
Пример 9: Сравнение связывания между химерным HH1 и HH1 мыши
Чтобы оценить, сохраняет ли химерное HH1 способность связывать эпитоп и антиген, клетки насыщали химерным HH1 и HH1 мыши, а затем исследовали способность блокировать связывание меченного радионуклидом HH1.
Материалы и методы: суспензию клеток Daudi распределяли на 6 пробирок по 1,7 млн. клеток в 0,2 мл PBS в каждую пробирку. Пробирки 1 и 2 оставляли незаблокированными, пробирки 3 и 4 блокировали путем добавления 3 мкг HH1 в 5 мкл и в пробирки 5 и 6 добавляли 3 мкг химерного HH1 в 5 мкл.
Пробирки инкубировали в течение 10 минут, а затем добавляли 2 нг меченного 125I HH1 и дополнительно инкубировали в течение 40 минут при комнатной температуре с использованием клеточного шейкера.
Общую активность в каждой пробирке измеряли с использованием гамма-счетчика LKB, и после этого клетки промывали три раза 1 мл PBS с 0,5% BSA и 1 мМ DTPA. В конечных осадках определяли радиоактивность, чтобы определить активность по связыванию клеток.
Результаты: установили, что незаблокированные клетки сохранили 42,7% радиоактивности (диапазон 42,7%-42,7%). Клетки, заблокированные HH1, сохранили 1,6% радиоактивности (диапазон 1.4%-1.8%). Клетки, заблокированные химерным HH1, сохранили 1,3% радиоактивности (диапазон 1.1%-1.5%).
В заключение, то, что связывание меченного HH1 мыши весьма эффективно блокируется химерным HH1 и в той же степени блокируется HH1 мыши, означает, что способность связывать антиген и эпитоп у химерной версии HH1 сохраняется.
Это также показывает, что химерное HH1 может быть полезным в качестве предварительной обработки для блокирования антигена CD37 в нормальных тканях до терапии радиоиммуноконъюгатом или иммунотоксином с HH1.
Пример 10: ADCC chHH1.1 на клетках Rec-1 в качестве клеток-мишеней
Материалы и методы:
Кровь отбирали у трех здоровых индивидуумов в пробирки с ЭДТА и использовали для выделения мононуклеарных клеток периферической крови (РВМС). Цельную кровь разводили 1:1 DPBS (DPBS, Hyclone, Thermo Scientific, USA) в 50 мл пробирке. Разбавленную цельную кровь наслаивали на Lymphoprep (Medinor, Norway) в соотношении 2:1 в 50 мл пробирке и центрифугировали при 1000×g в течение 20 мин при медленном торможении.
Мононуклеарные клетки отбирали с границы раздела фаз и дважды промывали DPBS (300×g, 10 мин). Осажденные клетки осторожно ресуспендировали в среде для культивирования (RPMI-1640 с добавлением 10% инактивированной нагреванием фетальной бычьей сыворотки) с помощью пипетки и определяли количество клеток с помощью клеточного счетчика.
РВМС стимулировали 25 нг/мл рекомбинантного IL-2 человека (eBiosciences) в течение 3 дней.
В качестве клеток-мишеней для анализа цитотоксичности использовали клетки лимфомы мантийной зоны Rec-1. Их выращивали во флаконах для культивирования тканей (175 см2) с использованием RPMI-1640 (Hyclone, Thermo Scientific, USA) с добавлением 10% инактивированной нагреванием фетальной бычьей сыворотки (PAA, Thermo Scientific, USA).
Осадок клеток ресуспендировали в среде для анализа (RPMI, 10% FCS) и проводили подсчет клеток. Концентрацию клеток доводили до 5×106/мл для мечения хромом-51.
5×106 клеток метили 3,7 МБк хрома-51 (51Cr) (PerkinElmer, Netherlands) в объеме 1 мл при 37°C в течение 1 часа. Меченые клетки три раза промывали центрифугированием в DPBS с 2% FCS (2000 оборотов в минуту, 5 мин).
Меченые клетки разделяли на аликвоты равного объема для связывания 20 мкг/мл HH1 мыши, 20 мкг/мл ритуксимаба, 20 мкг/мл chHH1.1 (изотип IgG1) или комбинацией 20 мкг/мл ритуксимаба и 20 мкг/мл chHH1.1, в том числе для контроля без антител. Все образцы инкубировали при 37°C в течение 10 мин, затем центрифугировали и дважды промывали DPBS с 2% FCS центрифугированием (2000 оборотов в минуту, 5 мин).
Эффекторные клетки культивировали с клетками-мишенями в соотношении 40:1, 20:1 или 10:1 в 96-луночных круглодонных микротитрационных планшетах в конечном объеме 200 мкл. Сначала высевали 10000 клеток-мишеней в объеме 100 мкл в среде для анализа, а затем PBMC человека в объеме 100 мкл. В качестве контроля клетки-мишени культивировали только в среде для анализа (спонтанный лизис) и в среде для анализа с 1% Triton X-100 (максимальный лизис, общее выделение).
Все образцы изготовили в трех повторностях. Совместную культуру инкубировали при 37°C в CO2-инкубаторе с увлажнением в течение 4 часов. Цитотоксический эффект измеряли по выделению 51Cr в супернатант. В конце инкубации клетки удаляли из среды для культивирования центрифугированием (1500 оборотов в минуту, 5 минут) при комнатной температуре. Свободные от клеток супернатанты (150 мкл/лунку) переносили в соответствующие 96-луночному планшету микропробирки 0,2 мл. Количество выделенного 51Cr измеряли с помощью гамма-счетчика (Cobra II, Packard, land).
% специфического лизиса рассчитывали по следующей формуле: 100 × (экспериментальное выделение - спонтанное выделение)/(общее выделение - спонтанное выделение). Экспериментальное выделение является средним значением повторностей обработанных образцов. Для каждой обработки антителом делали три повторности образцов для спонтанного выделения и полного выделения, и использовали средние значения для экспериментальных образцов с обработкой соответствующим антителом.
Результаты:
Фигура 4 показывает, что chHH1.1 было настолько же эффективно при индукции специфического лизиса путем ADCC на клетках Rec-1, что и ритуксимаб, и немного более эффективно, чем HH1 мыши. Сочетание chHH1 и ритуксимаба привело к немного более высокой эффективности специфического лизиса, чем обработка одним из двух антител.
Вывод:
ADCC является активным механизмом действия для chHH1.1 на клетках Rec-1. Комбинированная обработка ритуксимабом и chHH1.1 привела к немного более высокой ADCC, чем каждым из антител по отдельности.
Пример 11: CDC chHH1.1 на клетках Rec-1 в качестве клеток-мишеней
Материалы и методы:
Кровь отбирали у трех здоровых индивидуумов и сыворотку отделяли центрифугированием.
В качестве клеток-мишеней для анализа цитотоксичности использовали клетки лимфомы мантийной зоны Rec-1 (LG Standards, Boras, Sweden). Их выращивали во флаконах для культивирования тканей (175 см2) с использованием RPMI-1640 (Hyclone, Thermo Scientific, USA) с добавлением 10% инактивированной нагреванием фетальной бычьей сыворотки (РАА, Thermo Scientific, USA).
Клеточный осадок ресуспендировали в среде для анализа (RPMI, 10% FCS) и проводили подсчет клеток. Концентрацию клеток доводили до 5×106/мл для мечения хромом-51.
5×106 клеток метили 3,7 МБк хрома-51 (51Cr) (PerkinElmer, Netherlands) в объеме 1 мл при 37°C в течение 1 часа. Меченые клетки три раза промывали DPBS с 2% FCS центрифугированием (2000 оборотов в минуту, 5 мин). Меченые клетки разделяли на аликвоты равного объема для связывания 20 мкг/мл HH1 мыши, 20 мкг/мл ритуксимаба, 20 мкг/мл chHH1.1 (изотип IgG1) или комбинацией 20 мкг/мл ритуксимаба и 20 мкг/мл chHH1.1, в том числе для контроля без антител. Все образцы инкубировали при 37°C в течение 10 мин, затем центрифугировали и дважды промывали DPBS с 2% FCS центрифугированием (2000 оборотов в минуту, 5 мин).
Клетки-мишени культивировали с 10% сывороткой в 96-луночных круглодонных микротитрационных планшетах в конечном объеме 200 мкл. В качестве контроля клетки-мишени культивировали только в среде для анализа (спонтанный лизис) и в среде для анализа с 1% Triton X-100 (максимальный лизис, общее выделение).
Все образцы изготовили в трех повторностях. Совместную культуру инкубировали при 37°C в CO2-инкубаторе с увлажнением в течение 2 часов. Цитотоксический эффект измеряли по выделению 51Cr в супернатант. В конце инкубации клетки удаляли из среды для культивирования центрифугированием (1500 оборотов в минуту, 5 минут) при комнатной температуре. Свободные от клеток супернатанты (150 мкл/лунку) переносили в сответствующие 96-луночному планшету микропробирки 0,2 мл. Количество выделенного 51Cr измеряли с помощью гамма-счетчика (Cobra II, Packard, land).
% специфического лизиса рассчитывали по следующей формуле: 100 × (экспериментальное выделение - спонтанное выделение)/(общее выделение - спонтанное выделение). Экспериментальное выделение является средним значением повторностей обработанных образцов. Для каждой обработки антителом делали три повторности образцов для спонтанного выделения и полного выделения, и использовали средние значения для экспериментальных образцов с обработкой соответствующим антителом.
Результаты:
На фигуре 5 показано, что отдельно chHH1.1 не работает через механизм CDC, но chHH1.1 и ритуксимаб вместе имели больший эффект на специфический лизис, чем суммарный эффект ритуксимаба и chHH1.1 по отдельности.
Выводы:
CDC не является активным механизмом действия для chHH1.1 отдельно. Однако, обнаружили синергический эффект совместной обработки chHH1.1 и ритуксимабом.
Пример 12: Связывание 125I-chHH1.3 с клетками Ramos Материалы и методы:
Химерное HH1 изотипа IgG3 (chHHl.3) и HH1 мыши (mHH1) метили 125I с применеием метода непрямого йодирования в соответствии с методикой, описанной производителем пробирок для йодирования (Pierce, UK). В одном эксперименте клетки Ramos блокировали 20 мг chHH1.3 или mHH1 и метили радиоактивным изотопом I-chHH1.3 для измерения неспецифического связывания.
В другом эксперименте клетки Ramos блокировали 20 мг chHH1.3, mHH1 или chHH1.1, а затем метили радиоактивным изотопом с 125I-mHH1 для измерения неспецифического связывания. Связывание с незаблокированными клетками в обоих экспериментах использовали для измерения общего связывания.
Последовательность ДНК полноразмерной тяжелой цепи Fc chHH1.3 с мутацией представлена в SEQ ID NO: 10.
Аминокислотная последовательность полноразмерной легкой цепи Fc chHH1.3 с мутацией представлена в SEQ ID NO: 11.
Последовательность ДНК полноразмерной тяжелой цепи Fc chHH1.3 с мутацией представлена в SEQ ID NO: 12.
Аминокислотная последовательность полноразмерной легкой цепи Fc chHH1.3 с мутацией представлена в SEQ ID NO: 13.
Последовательность Fc chHH1.3 без мутации (константная область) представлена в SEQ ID NO: 14.
Результаты:
Когда незаблокированные клетки Ramos метили радиоактивным изотопом с помощью 125I-chHH1.3, общее связывание составило 81%, а когда клетки Ramos метили радиоактивным изотопом с помощью 125I-mHH1, общее связывание составило 77%. Однако когда заблокированные chHH1.3 или mHH1 клетки метили радиоактивным изотопом с помощью 125I-chHH1.3, неспецифическое связывание составило 0,8% и 44% соответственно, что указывает, что chHH1.3 имеет более высокое сродство к антигену CD37, чем mHH1. Кроме того, когда блокированные chHH1.3, mHH1 или chHH1.1 клетки метили радиоактивным изотопом с помощью 125I-mHH1, неспецифическое связывание составило 0,3%, 0,5% и 0,7%, соответственно, что означает, что три антитела связываются с тем же эпитопом на антигене CD37.
Выводы:
Результаты показали, что mHH1, chHH1.1 и chHH1.3 связываются с одинаковым эпитопом на CD37. Неожиданно, сродство chHH1.3 было выше, чем у mHH1.
Пример 13: Биораспределение 125I-chHH1.3 в голых мышах
Материалы и методы:
Химерное HH1 изотипа IgG3 (chHH1.3) метили 125I с применением метода непрямого йодирования в соответствии с методикой, описанной производителем пробирок для йодирования (Pierce, UK).
Препараты вводили в хвостовую вену инъекцией 100 мкл раствора для каждого животного. В мышей вводили дозу с активностью 600 кБк. Для одной временной точки использовали двух животных. Вскрытие проводили после цервикальной дислокации через 24 часа и 48 часов после инъекции. Определяли вес каждого образца ткани и измеряли активность I в каждом образце ткани с помощью калиброванного гамма-счетчика (Cobra II auto-gamma detector, Packard Instrument Company, Meriden, CT, USA). Образцы вводимого раствора использовали в качестве контроля при измерении. Для каждой временной точки корректировали процент распада введенной дозы на грамм ткани (% ID/г).
Результаты и выводы:
Антитело ChHH1.3 продемонстрировало соответствующее распределение в голых мышах (фигура 6).
Фигура 6. Биораспределение (% ID/г) 125I-chHH1.3 в женских особях голых мышей через 24 и 48 часов после инъекции.
Пример 14: ADCC и CDC активность chHHl.3 на клетках Daudi
Материалы и методы:
Для экспериментов по определению ADCC и CDC проводили те же процедуры, что описаны в примерах 10 и 11, кроме того, что использовали коммерчески доступную сыворотку для анализа CDC и РВМС стимулировали в течение ночи 25 нг/мл рекомбинантного IL-2 человека (eBiosciences) перед выделением натуральных киллеров, с применением того же подхода, что и в примере 7. Для выделения PBMC кровь отбирали у двух индивидуумов в пробирки с ЭДТА.
В качестве клеток-мишеней для анализа цитотоксичности использовали клетки лимфомы линии Daudi (LG standards, Boras, Sweden) (клетки-мишени). Их выращивали во флаконах для культивирования тканей (175 см2) с использованием RPMI-1640 (Hyclone, Thermo Scientific, USA) с добавлением 10% инактивированной нагреванием фетальной бычьей сыворотки (PAA, Thermo Scientific, USA).
Клеточный осадок ресуспендировали в среде для анализа (RPMI, 10% FCS) и проводили подсчет клеток. Концентрацию клеток доводили до 5×106/мл для мечения хромом-51.
5×106 клеток Daudi метили 4 МБк хрома-51 (51Cr) (PerkinElmer, Netherlands) в объеме 1 мл при 37°C в течение 1 часа. Меченые клетки три раза промывали DPBS с 2% FCS центрифугированием (2000 оборотов в минуту, 5 мин). Меченые клетки разделяли на аликвоты равного объема для связывания 20 мг/мл антитела chHH1.3 или комбинации chHH1.3 и ритуксимаба, каждого по 20 мг/мл, а также для контроля без антитела. Все образцы инкубировали при 37°C в течение 10 мин, затем центрифугировали и дважды промывали DPBS с 2% FCS центрифугированием (2000 оборотов в минуту, 5 мин).
Для анализа CDC клетки-мишени Daudi культивировали с 10 и 30% сывороткой в 96-луночных круглодонных микротитрационных планшетах в конечном объеме 200 мкл. Для ADCC эффекторные NK клетки культивировали с клетками-мишенями Daudi в соотношении 10:1 (индивидуум 1) или 15:1 (индивидуум 2) в 96-луночных круглодонных микротитрационных планшетах в конечном объеме 200 мкл.
В качестве контроля клетки-мишени культивировали только в среде для анализа (спонтанный лизис) и в среде для анализа с 1% Triton X-100 (максимальный лизис, общее выделение).
Все образцы изготовили в трех повторностях. Совместную культуру инкубировали при 37°C в CO2-инкубаторе с увлажнением в течение 2 часов. Цитотоксический эффект измеряли по выделению 51Cr в супернатант. В конце инкубации клетки удаляли из среды для культивирования центрифугированием (1500 оборотов в минуту, 5 минут) при комнатной температуре. Свободные от клеток супернатанты (150 мкл/лунку) переносили в соответствующие 96-луночному планшету микропробирки 0,2 мл. Количество выделенного 51Cr измеряли с помощью гамма-счетчика (Cobra II, Packard, land).
% специфического лизиса рассчитывали по следующей формуле: 100 × (экспериментальное выделение - спонтанное выделение)/(общее выделение - спонтанное выделение). Экспериментальное выделение является средним значением повторностей обработанных образцов. Для каждой обработки антителом делали три повторности образцов для спонтанного выделения и полного выделения и использовали средние значения для экспериментальных образцов с обработкой соответствующим антителом.
Результаты:
Антитело chHH1.3 не вызвало специфического лизиса клеток B-клеточной лимфомы линии Daudi по механизму CDC. Однако наблюдали четкий эффект антитела chHH1.3 на специфический лизис клеток Daudi по механизму ADCC (фигура 7).
Выводы:
CDC не является активным механизмом, в то время как ADCC является активным механизмом для chHHl.3 с клетками Daudi в качестве мишени.
Claims (17)
1. Молекула антитела, которая связывается с CD37 человека и которая является химерным антителом, которое определяется
i) вариабельной областью тяжелой цепи, содержащей аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1;
ii) вариабельной областью легкой цепи, содержащей аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 3,
iii) константными областями тяжелой и легкой цепей, которые имеют человеческое происхождение, причем указанная константная область тяжелой цепи i) содержит аминокислотную последовательность, кодируемую последовательностью нуклеиновой кислоты, представленной в SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6 и SEQ ID NO: 7, и при этом указанная константная область легкой цепи ii) содержит аминокислотную последовательность, кодируемую последовательностью нуклеиновой кислоты, представленной в SEQ ID NO: 9.
2. Молекула ДНК, кодирующая антитело по п. 1, причем участок, кодирующий вариабельную область тяжелой цепи, соединен с областью, кодирующей константную область тяжелой цепи человеческого происхождения, и при этом указанная константная область тяжелой цепи человека представляет собой IgG1 и указанный IgG1 кодируется последовательностью, представленной в SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6 и SEQ ID NO: 7.
3. Экспрессионный вектор, содержащий молекулу ДНК по п. 2.
4. Клетка-хозяин, несущая один или более векторов по п. 3.
5. Способ получения антитела по п. 1, включающий трансфекцию клетки-хозяина млекопитающего одним или более векторами по п. 3, культивирование указанной клетки-хозяина и выделение и очистку молекулы антитела.
6. Фармацевтическая композиция для лечения В-клеточных злокачественных новообразований, содержащая в качестве активного ингредиента одну или более молекул антитела против CD37 по п. 1 и фармацевтически приемлемый носитель, причем количество антитела НН1 составляет по меньшей мере 0,5 мг и не более 1 г.
7. Способ элиминации экспрессирующих CD37 В-клеток из популяции клеток, включающий введение к указанной популяции клеток молекулы антитела по п. 1 или фармацевтической композиции, содержащей такую молекулу антитела, по п. 6.
8. Радиоиммуноконъюгат для лечения В-клеточных злокачественных новообразований, который связывает СD37 человека, содержащий:
а) антитело по п. 1,
б) линкер и
в) радионуклид, выбранный из группы, состоящей из 211At, 213Bi, 212Bi, 212Pb, 225Ac, 227Th, 90Y, 186Re, 188Re, 199Au, 194Ir, 166Ho, 159Gd, 153Sm, 149Pm, 142Pr, 111Ag, 109Pd, 77As, 67Cu, 47Sc и 177Lu.
9. Фармацевтическая композиция для лечения В-клеточных злокачественных новообразований, содержащая радиоиммуноконъюгат по п. 8 и фармацевтически приемлемый носитель, причем количество антитела НН1 составляет по меньшей мере 0,5 мг и не более 1 г.
10. Способ лечения В-клеточных злокачественных новообразований, выбранных из группы, состоящей из В-клеточной неходжкинской лимфомы, В-клеточного хронического лимфоцитарного лейкоза, волосатоклеточного лейкоза, лимфоплазмоцитарной лимфомы и миеломной болезни, включающий введение эффективного количества фармацевтической композиции по любому из пп. 6 и 9.
11. Набор для получения радиоиммуноконъюгата по п. 8, содержащий два или более флакона, причем один флакон содержит конъюгат, содержащий хелатирующий агент, связанный с антителом по п. 1, и второй флакон содержит радионуклид.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201161569981P | 2011-12-13 | 2011-12-13 | |
US61/569,981 | 2011-12-13 | ||
PCT/IB2012/057230 WO2013088363A1 (en) | 2011-12-13 | 2012-12-12 | Chimeric therapeutic anti - cd37 antibodie hh1 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2014125320A RU2014125320A (ru) | 2016-02-10 |
RU2658438C2 true RU2658438C2 (ru) | 2018-06-21 |
Family
ID=47603883
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2014125320A RU2658438C2 (ru) | 2011-12-13 | 2012-12-12 | Химерное терапевтическое антитело нн1 против cd-37 |
Country Status (17)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US20140348745A1 (ru) |
EP (2) | EP3272364B1 (ru) |
JP (1) | JP2015501654A (ru) |
KR (1) | KR20140103140A (ru) |
CN (2) | CN109276713A (ru) |
AU (1) | AU2012354140B2 (ru) |
BR (1) | BR112014014258A2 (ru) |
CA (1) | CA2858964A1 (ru) |
ES (1) | ES2827787T3 (ru) |
HK (1) | HK1203372A1 (ru) |
IL (1) | IL233084A (ru) |
MX (1) | MX358502B (ru) |
PH (1) | PH12014501338A1 (ru) |
PL (1) | PL3272364T3 (ru) |
RU (1) | RU2658438C2 (ru) |
SG (1) | SG11201403134PA (ru) |
WO (1) | WO2013088363A1 (ru) |
Families Citing this family (17)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN106046159B (zh) | 2010-03-12 | 2020-06-16 | 德彪发姆国际有限公司 | Cd37结合分子及其免疫缀合物 |
RU2681953C2 (ru) * | 2013-06-07 | 2019-03-14 | Нордик Нановектор Аса | Способ повышения уровней экспрессии антигенов |
WO2015017552A1 (en) | 2013-08-01 | 2015-02-05 | Agensys, Inc. | Antibody drug conjugates (adc) that bind to cd37 proteins |
US9433690B1 (en) * | 2015-02-26 | 2016-09-06 | Sciencons AS | Radiopharmaceutical solutions with advantageous properties |
JP6979877B2 (ja) | 2015-06-08 | 2021-12-15 | デビオファーム インターナショナル, エス. アー. | 抗cd37イムノコンジュゲートおよび抗cd20抗体の組み合わせ |
EA201890347A1 (ru) * | 2015-08-28 | 2018-09-28 | Дебиофарм Интернэшнл, С.А. | Антитела и исследования для обнаружения cd37 |
GB201600328D0 (en) | 2016-01-08 | 2016-02-24 | Univ Oslo Hf | Anti-CD37 chimeric antigen receptors and immune cells expressing them |
JP2019529433A (ja) * | 2016-09-16 | 2019-10-17 | ノルディック ナノベクター アルメン アクスイェ セルスカプ | リロトマブおよび177Lu‐リロトマブ・サテトラキセタンを用いた非ホジキンリンパ腫の治療方法 |
EP3535297B1 (en) | 2016-11-02 | 2022-08-10 | Debiopharm International, S.A. | Methods for improving anti-cd37 immunoconjugate therapy |
RS64815B1 (sr) * | 2017-01-12 | 2023-12-29 | Radiomedix Inc | Lečenje ćelija kancera koje prekomerno eksprimiraju receptore za somatostatin primenom derivata oktreotida heliranih sa radioizotopima |
US20210106703A1 (en) * | 2017-11-22 | 2021-04-15 | Nordic Nanovector Asa | Radioimmunoconjugates in combination with other drugs as treatment against nhl |
EP4308169A2 (en) * | 2021-03-19 | 2024-01-24 | Heidelberg Pharma Research GmbH | B-lymphocyte specific amatoxin antibody conjugates |
WO2023054285A1 (ja) * | 2021-09-29 | 2023-04-06 | 国立大学法人大阪大学 | α線放出抗体薬物複合体 |
WO2023057583A1 (en) * | 2021-10-06 | 2023-04-13 | Nordic Nanovector Asa | Humanized hh1 |
WO2023057595A1 (en) * | 2021-10-06 | 2023-04-13 | Nordic Nanovector Asa | Humanized hh1 rew |
JPWO2023068226A1 (ru) * | 2021-10-18 | 2023-04-27 | ||
WO2023133488A1 (en) * | 2022-01-06 | 2023-07-13 | The General Hospital Corporation | Methods of cell ablation |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20100189722A1 (en) * | 2007-08-09 | 2010-07-29 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Anti cd37 antibodies |
RU2423381C2 (ru) * | 2005-07-25 | 2011-07-10 | Трабьон Фармасьютикалз, Инк. | Снижение количества в-клеток с использованием cd37-специфических и cd20-специфических связывающих молекул |
WO2011092295A2 (en) * | 2010-01-29 | 2011-08-04 | Nordic Nanovector As | Novel radioimmunoconjugates and uses thereof |
Family Cites Families (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
IL162181A (en) * | 1988-12-28 | 2006-04-10 | Pdl Biopharma Inc | A method of producing humanized immunoglubulin, and polynucleotides encoding the same |
DE69229482T2 (de) * | 1991-04-25 | 1999-11-18 | Chugai Seiyaku K.K., Tokio/Tokyo | Rekombinierte humane antikörper gegen den humanen interleukin 6-rezeptor |
MX2007012197A (es) * | 2005-03-31 | 2007-11-21 | Biomedics Inc | Anticuerpo monoclonal anti-cd20. |
TW201031749A (en) * | 2009-02-10 | 2010-09-01 | Otsuka Chemical Co Ltd | IgG-Fc fragment and method for manufacturing the same |
CN106046159B (zh) * | 2010-03-12 | 2020-06-16 | 德彪发姆国际有限公司 | Cd37结合分子及其免疫缀合物 |
-
2012
- 2012-12-12 PL PL17190590T patent/PL3272364T3/pl unknown
- 2012-12-12 JP JP2014546713A patent/JP2015501654A/ja active Pending
- 2012-12-12 MX MX2014006998A patent/MX358502B/es active IP Right Grant
- 2012-12-12 SG SG11201403134PA patent/SG11201403134PA/en unknown
- 2012-12-12 KR KR1020147018915A patent/KR20140103140A/ko not_active Application Discontinuation
- 2012-12-12 BR BR112014014258-0A patent/BR112014014258A2/pt not_active IP Right Cessation
- 2012-12-12 US US14/364,620 patent/US20140348745A1/en not_active Abandoned
- 2012-12-12 ES ES17190590T patent/ES2827787T3/es active Active
- 2012-12-12 AU AU2012354140A patent/AU2012354140B2/en not_active Ceased
- 2012-12-12 RU RU2014125320A patent/RU2658438C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2012-12-12 EP EP17190590.4A patent/EP3272364B1/en active Active
- 2012-12-12 EP EP12818820.8A patent/EP2790740A1/en not_active Ceased
- 2012-12-12 CN CN201811108570.7A patent/CN109276713A/zh active Pending
- 2012-12-12 CA CA2858964A patent/CA2858964A1/en not_active Abandoned
- 2012-12-12 CN CN201280069676.5A patent/CN104114192A/zh active Pending
- 2012-12-12 WO PCT/IB2012/057230 patent/WO2013088363A1/en active Application Filing
-
2014
- 2014-06-11 PH PH12014501338A patent/PH12014501338A1/en unknown
- 2014-06-12 IL IL233084A patent/IL233084A/en active IP Right Grant
-
2015
- 2015-04-22 HK HK15103922.0A patent/HK1203372A1/xx unknown
-
2017
- 2017-12-19 US US15/847,667 patent/US20180194852A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2423381C2 (ru) * | 2005-07-25 | 2011-07-10 | Трабьон Фармасьютикалз, Инк. | Снижение количества в-клеток с использованием cd37-специфических и cd20-специфических связывающих молекул |
US20100189722A1 (en) * | 2007-08-09 | 2010-07-29 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Anti cd37 antibodies |
WO2011092295A2 (en) * | 2010-01-29 | 2011-08-04 | Nordic Nanovector As | Novel radioimmunoconjugates and uses thereof |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
KABAT E.A. et al. "Sequences of proteins of immunological interest", DIANE publishing, 1991, Vol.1, 5 th ed., pp.647-696. * |
SMELAND E. et al. "Characterization of two murine monoclonal antibodies reactive with human B cells", Scandinavian journal of immunology, 1985, 21(3): 205-214. * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
AU2012354140B2 (en) | 2017-10-12 |
EP3272364B1 (en) | 2020-07-29 |
PL3272364T3 (pl) | 2021-04-06 |
WO2013088363A1 (en) | 2013-06-20 |
EP3272364A1 (en) | 2018-01-24 |
RU2014125320A (ru) | 2016-02-10 |
CA2858964A1 (en) | 2013-06-20 |
AU2012354140A1 (en) | 2014-07-03 |
US20140348745A1 (en) | 2014-11-27 |
IL233084A (en) | 2017-06-29 |
MX2014006998A (es) | 2015-02-20 |
CN109276713A (zh) | 2019-01-29 |
SG11201403134PA (en) | 2014-07-30 |
HK1203372A1 (en) | 2015-10-30 |
PH12014501338A1 (en) | 2014-09-15 |
US20180194852A1 (en) | 2018-07-12 |
IL233084A0 (en) | 2014-08-03 |
EP2790740A1 (en) | 2014-10-22 |
NZ626188A (en) | 2016-12-23 |
CN104114192A (zh) | 2014-10-22 |
BR112014014258A2 (pt) | 2020-10-27 |
JP2015501654A (ja) | 2015-01-19 |
MX358502B (es) | 2018-08-23 |
KR20140103140A (ko) | 2014-08-25 |
ES2827787T3 (es) | 2021-05-24 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2658438C2 (ru) | Химерное терапевтическое антитело нн1 против cd-37 | |
Buchsbaum et al. | Therapy with unlabeled and 131I-labeled pan-B-cell monoclonal antibodies in nude mice bearing Raji Burkitt's lymphoma xenografts | |
JP2020141693A (ja) | Cd37結合分子及びそのイムノコンジュゲート | |
US8628749B2 (en) | Radioimmunoconjugates and uses thereof | |
EP3049118B1 (en) | Anti-cd146 monoclonal antibody | |
KR102033819B1 (ko) | 상향조절 항원 발현 방법 | |
EA007467B1 (ru) | Применение cd23 антагонистов для лечения опухолевых заболеваний | |
JP2022548694A (ja) | 抗cd45イムノグロブリンの放射能標識およびその使用方法 | |
Pagé | Tumor targeting in cancer therapy | |
NZ626188B2 (en) | Chimeric therapeutic anti - cd37 antibody hh1 | |
DiJulio | Monoclonal antibodies: Overview and use in hematologic malignancies | |
Sharkey et al. | Antibodies and Their Conjugates for the Targeted Therapy of Cancer |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
HZ9A | Changing address for correspondence with an applicant | ||
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20191213 |