JP2022548694A - 抗ｃｄ４５イムノグロブリンの放射能標識およびその使用方法 - Google Patents

抗ｃｄ４５イムノグロブリンの放射能標識およびその使用方法 Download PDF

Info

Publication number
JP2022548694A
JP2022548694A JP2022517380A JP2022517380A JP2022548694A JP 2022548694 A JP2022548694 A JP 2022548694A JP 2022517380 A JP2022517380 A JP 2022517380A JP 2022517380 A JP2022517380 A JP 2022517380A JP 2022548694 A JP2022548694 A JP 2022548694A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
μci
antibody
cells
subject
seq
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP2022517380A
Other languages
English (en)
Other versions
JPWO2021055638A5 (ja
Inventor
デール ラディック
サンデシュ セス
Original Assignee
アクティニウム ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by アクティニウム ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド filed Critical アクティニウム ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド
Publication of JP2022548694A publication Critical patent/JP2022548694A/ja
Publication of JPWO2021055638A5 publication Critical patent/JPWO2021055638A5/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
    • A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
    • A61K51/04—Organic compounds
    • A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
    • A61K51/10—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody
    • A61K51/1027—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody against receptors, cell-surface antigens or cell-surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/28—Bone marrow; Haematopoietic stem cells; Mesenchymal stem cells of any origin, e.g. adipose-derived stem cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K41/00—Medicinal preparations obtained by treating materials with wave energy or particle radiation ; Therapies using these preparations
    • A61K41/0038—Radiosensitizing, i.e. administration of pharmaceutical agents that enhance the effect of radiotherapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
    • A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
    • A61K51/04—Organic compounds
    • A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
    • A61K51/10—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody
    • A61K51/1093—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody conjugates with carriers being antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
    • A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
    • A61K51/04—Organic compounds
    • A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
    • A61K51/10—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody
    • A61K51/1093—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody conjugates with carriers being antibodies
    • A61K51/1096—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody conjugates with carriers being antibodies radioimmunotoxins, i.e. conjugates being structurally as defined in A61K51/1093, and including a radioactive nucleus for use in radiotherapeutic applications
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/289—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against CD45
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本明細書において、異常ヘモグロビン症および血液疾患の処置のために有用な組成物および方法が開示される。組成物は、単一線量で罹患体に完全に送達可能な単一罹患体線量として製剤化されるアクチニウム－２２５標識抗ＣＤ４５抗体（ＢＣ８）を含む。アクチニウム－２２５標識抗ＣＤ４５は、単独で、あるいは他の免疫治療薬もしくは放射線増感剤などの追加的な治療剤、または骨髄移植もしくは養子細胞治療などの追加的な治療的介入と併用して投与されてもよい。

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１９年９月１７日に出願された米国仮特許出願第６２／９０１，２９０号の優先権を主張するものであり、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
シーケンスリストの参照
本出願は、ＥＦＳを介して提出され、かつアメリカ合衆国特許規則：連邦規則法典第３７巻§１．５２（ｅ）（５）およびＰＣＴ規則１３の１（ａ）を遵守して示される補足ファイルとして本明細書に組み込まれる、本明細書の中で見出される配列と同じ配列を示す配列表を含む。
本開示は、ＣＤ４５に対するモノクローナル抗体を放射能標識するための方法と、ＣＤ４５に対する放射能標識モノクローナル抗体を含む組成物と、悪性血液疾患および非悪性血液疾患の処置のための放射能標識抗ＣＤ４５抗体の使用のための方法とに関する。
ＣＤ４５は、タンパク質チロシンホスファターゼ（ＰＴＰ）ファミリーのメンバーであり、Ｔ細胞受容体シグナル伝達およびＢ細胞受容体シグナル伝達において主要な役割を果たすＩ型膜貫通糖タンパク質である。ＣＤ４５は、Ｓｒｃファミリータンパク質－チロシンキナーゼＬｃｋおよびＦｙｎの活性化を制御する。ＣＤ４５欠損によって、重度の複合免疫欠損の形態のＴリンパ球機能不全およびＢリンパ球機能不全が生じる。それは、自己免疫疾患およびがん、ならびに真菌感染症を含む感染性疾患（Penninger et al., 2001, CD45: new jobs for an old acquaintance, Nat. Immunol., 2(5):389-396）、および代謝障害において重大な役割を果たすことも報告される。ＣＤ４５について記載される一次リガンドとしては、ガレクチン－１、ＣＤ１、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＴＣＲ、ＣＤ２２およびＴｈｙ－１が挙げられる。
ＣＤ４５は、白血球共通抗原（ＬＣＡ）、Ｔ２００またはＬｙ－５としても知られており、２つの細胞内ホスファターゼドメインと膜貫通ドメインと細胞外ドメインとからなる。適切なホスフェート活性（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ）のために両方の細胞内ホスファターゼドメインが必要とされるが、一方だけが内因性キナーゼ活性を有する（Desai et al., 1994, The catalytic activity of the CD45 membrane-proximal phosphatase domain is required for TCR signaling and regulation, EMBO J. 13:4002-4010）。
概して、成熟赤血球および成熟血小板を除いた造血起源の全ての細胞は、ＣＤ４５の少なくとも１種のアイソフォームを発現する。ＣＤ４５の高発現は、ほとんどの急性リンパ性白血病および急性骨髄性白血病で認められる。非造血起源の組織においてＣＤ４５が見出されないことから、白血病におけるその特異的発現によって、それは免疫治療薬を含む治療薬を開発するための良好な標的となってきた。例えば、ＣＤ４５は、循環白血球および悪性Ｂ細胞において、細胞１個当たりおよそ２００，０００～３００，０００の部位の密度で発現する。
白血病の処置における、単独の、または化学療法もしくは全身照射と併用する候補免疫治療剤として、ある特定の抗ＣＤ４５抗体（ＢＣ８）が調べられてきた。抗ＣＤ４５抗体ベースリンパ枯渇も知られている（例えば、Louis, et al., 2009, Blood, 113:2442-2450参照）。しかし、このアプローチには欠点があった。例えば、Ｌｏｕｉｓらの研究において、８人の患者は、抗ＣＤ４５抗体によってリンパ枯渇が生じ、注入後に末梢血中の所望のＴ細胞の頻度の増加を示した。しかし、３人の患者だけが臨床的有益性を有し、１人だけが完全奏効を有した。
ＣＤ４５は、細胞外ドメインにおける３４のエクソンの内の３つ（Ａ、ＢおよびＣで示されるエクソン４、５および６、図１参照）の代替的スプライシングによる複数のアイソフォームとして存在する（Streuli et al., 1987 Differential usage of three exons generates at least five different mRNAs encoding human leukocyte common antigens, J. Exp. Med. 166:1548-1566; Chang et al., 2016, Initiation of T cell signaling by CD45 segregation at 'close-contacts', Nat. Immunol. 17(5):574-582）。これらの３つのエクソンは、Ｏ－連結グリコシル化の多重部位をコードし、シアル酸によって可変的に修飾される。その結果、様々なアイソフォームは、実質的に大きさ（３９１～５５２個のアミノ酸、１８０～２４０ｋＤａの範囲の分子量）、形状および負電荷が異なる。残りの膜近位細胞外ドメインは、非常にＮ－グリコシル化され、高システインスペーサー領域の後に３つのフィブロネクチンＩＩＩ型の反復を含む。
ＣＤ４５の８種のアイソフォームが可能であるが、以下の６種のみ、すなわち、ＲＯ（３種のエクソン全てが存在しない）、ＲＡ（エクソンＡ）、ＲＢ（エクソンＢ）、ＲＡＢ（エクソンＡおよびＢ）、ＲＢＣ（エクソンＢおよびＣ）およびＲＡＢＣ（エクソンＡ、ＢおよびＣ）がヒトにおいて同定される。これらの異なるアイソフォームは、Ｂ細胞リンパ球およびＴ細胞リンパ球の亜集団において差次的に発現し、細胞の活性化状態および成熟状態に対して特異的である。例えば、ＣＤ４５－ＲＡおよびＣＤ４５－ＲＢは、ナイーブＴ細胞において発現するが、ＣＤ４５－ＲＯは、活性化Ｔ細胞、いくつかのＢ細胞サブセット、活性化単球／マクロファージおよび顆粒球において発現し、ＣＤ４５－ＲＡＢＣは、Ｂ細胞において優先的に発現する（Hermiston et al., 2003, CD45: A critical regulator of signaling thresholds in immune cells, Ann. Rev. Immunol., 21:107-137）。
ＣＤ４５の様々なアイソフォームを選択的に認識する抗体が同定されている。さらに、全ての異なるアイソフォームに共通するエピトープに結合するモノクローナル抗体（ｍＡｂ）も同定されている。例えば、抗ＣＤ４５マウス抗体ＢＣ８は、ＣＤ４５抗原の全ヒトアイソフォームを認識する。
骨髄移植を必要とする対象の処置のためのヨウ素－１３１（131Ｉ）で標識されたＢＣ８の使用が検討されてきたが（その全体が参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１７／１５５９３７号参照）、組成物ならびに悪性血液疾患および非悪性血液疾患の処置のためのそれらの使用方法の必要性が依然としてある。具体的に、（ｉ）化学療法薬よりも特異的な剤を用い、（ｉｉ）低線量で有効であるために十分な効力があり、（ｉｉｉ）少なくともいくつかの型の造血幹細胞が著しく枯渇しないようにする治療的組成物および方法の必要性がある。
本開示は、特異的細胞集団の枯渇、可逆的免疫抑制および／またはアブレーションのために有用な組成物および方法、ならびに、さらに、これらの組成物および方法を使用してある特定の悪性血液疾患および非悪性血液疾患を処置するための方法を提供するために、ＢＣ８モノクローナル抗体の汎特異的性質を利用する。
本開示は、造血系の様々な障害、ならびに、とりわけ、代謝障害、がんおよび自己免疫疾患の処置のための組成物およびそれらの使用方法を提供する。本開示は、さらに、造血幹細胞移植片の移植を促進するように造血幹細胞移植治療を受ける前の罹患体を前処置するための方法を特徴とする。前記罹患体は、異常ヘモグロビン症または他の造血病状などの１種または複数種の血液疾患に罹患するものであってもよい。前記罹患体は、造血幹細胞移植を必要とするものであってもよい。
本明細書に記載されるように、造血幹細胞は、造血系統において多くの細胞型に分化することが可能であり、罹患体において欠乏している細胞型を定植または再定植するために罹患体に投与され得る。本開示は、（ｉ）異所性血液細胞、がん細胞または自己免疫細胞など、ＣＤ４５を発現する細胞の集団を選択的に枯渇させるか、可逆的に抑制するか、またはアブレーションすることによって、本明細書に記載される、とりわけ血液疾患、代謝疾患、がんまたは自己免疫疾患などの疾患を直接処置するため、および／または（ｉｉ）罹患体内の内因性造血幹細胞の集団を枯渇させるか、可逆的に抑制するか、またはアブレーションするために、造血細胞を標的とすることが可能な放射能標識抗体、具体的にはアクチニウム－２２５（225Ａｃ）またはルテチウム－１７７（177Ｌｕ）で標識した抗ＣＤ４５－イムノグロブリンで罹患体を処置する方法を特徴とする。
前者の活性は、Ｂ細胞系統またはＴ細胞系統の白血病細胞またはリンパ腫細胞などの造血系統の細胞、いくつかの細胞型の中でとりわけ自己抗原と交差反応するＴ細胞受容体を発現するＴ細胞などの自己免疫性リンパ球に関連する広範囲の障害の直接処置を可能にする。後者の活性、すなわち、造血幹細胞の選択的枯渇、可逆的抑制またはアブレーションによって、ひいては、続いて外因性（例えば、自己由来、同種または同系）造血幹細胞移植片の移植によって充填され得る空孔が生じる。
したがって、本開示は、異常ヘモグロビン症（例えば、鎌状赤血球症またはＳＣＤ、およびβ－サラセミア）、先天性免疫不全（例えば、重症複合免疫不全またはＳＣＩＤ、ファンコニ貧血、ウィスコット－アルドリッチ症候群、ダイアモンド－ブラックファン貧血およびシュワッハマン－ダイアモンド症候群、アデノシンデアミナーゼ欠損）およびウイルス感染症（例えば、ＨＩＶ感染症および後天性免疫不全症候群）などの様々な非癌性造血状態を処置するための方法を提供する。本開示は、さらに、血液がんまたは固形腫瘍などの癌性障害を処置するための方法を提供する。例示的な血液がんとしては、急性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫および非ホジキンリンパ腫が挙げられる。
したがって、本開示は、そのアクチニウム－２２５（225Ａｃ）またはルテチウム－１７７（177Ｌｕ）で放射能標識された形態における単離された抗ＣＤ４５イムノグロブリン（例えば、ＢＣ８ ｍＡｂクローン）を含む安定化された組成物と、悪性血液疾患および非悪性血液疾患ならびに悪性血液障害および非悪性血液障害の処置のためのその治療的使用とに関する。ヒトにおけるＣＤ４５抗原の全てのアイソフォームに結合するその能力によって、ＢＣ８抗体は、高密度ＣＤ４５抗原保持細胞において、特異的かつ優先的に、治療的に高い放射線量を蓄積することが期待される。
よって、本開示は、225Ａｃまたは177Ｌｕなどの放射性核種でＢＣ８抗体などの抗ＣＤ４５イムノグロブリンを放射能標識するための方法にも関する。ある特定の態様によれば、ＢＣ８抗体は、Ｓ－２－（４－イソチオシアナトベンジル）－１，４，７，１０テトラアザシクロドデカンテトラ酢酸（ｐ－ＳＣＮ－Ｂｎ－ＤＯＴＡ；ＤＯＴＡと称する）などのキレート剤にコンジュゲートしてＤＯＴＡ－ＢＣ８を形成し、225Ａｃなどの放射性核種で放射能標識されて、225Ａｃ－ＤＯＴＡ－ＢＣ８（すなわち、225Ａｃ－ＢＣ８）または177Ｌｕを形成して、177Ｌｕ－ＤＯＴＡ－ＢＣ８（すなわち、177Ｌｕ－ＢＣ８）を提供する。
225Ａｃ－ＢＣ８または177Ｌｕ－ＢＣ８は、１種または複数種の薬学的に許容される担体、塩または賦形剤を含む、安定化された製剤として提供されてもよい。ある特定の例示的な担体または賦形剤としては、食塩水、リン酸緩衝食塩水（例えば、５０ｍＭのＰＢＳ緩衝液、ｐＨ７）ならびに／または０．５％～５．０％（ｗ／ｖ）の、アスコルビン酸、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、ＨＳＡの水溶性塩およびそれらの混合物の内の１種もしくは複数種が挙げられる。
ＢＣ８抗体は、配列番号１に示される通りのアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインと、配列番号９に示される通りのＮ末端アミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインとを含んでもよい。ＢＣ８抗体は、配列番号３、配列番号４および配列番号５に示される通りのアミノ酸配列を有する少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を有する軽鎖可変ドメインを含んでもよい。ＢＣ８抗体は、配列番号１２または配列番号１３に示される（ｓｅｔ ｆｏｒ ｔｈｅ）通りのアミノ酸配列を有する軽鎖を含んでもよい。
ＢＣ８抗体は、配列番号２に示される通りのアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメイン、または配列番号１０に示される通りのＮ末端アミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインを含んでもよい。ＢＣ８抗体は、配列番号６、配列番号７および配列番号８に示される通りのアミノ酸配列を有する少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を有する重鎖可変ドメインを含んでもよい。ＢＣ８抗体は、配列番号１５または配列番号１６に示される通りのアミノ酸配列を有する重鎖を含んでもよい。
ある特定の態様によれば、ＢＣ８抗体は、配列番号１５または配列番号１６に示されるアミノ酸配列を有する重鎖を含み、ここで（Ｎ末端アミノ酸に対して）１４１位のアミノ酸はＡＳＰまたはＡＳＮである。ＢＣ８タンパク質の集団内の１４１位におけるＡＳＰ：ＡＳＮの比は、１０：９０～９０：１０など、１：９９～９９：１の範囲内であってもよい。
ある特定の態様によれば、ＢＣ８抗体は、配列番号２に示される通りのアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメイン、または配列番号１０に示される通りのＮ末端アミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインを含み、ここで前記重鎖の（Ｎ末端アミノ酸に対して）１４１位におけるアミノ酸はＡＳＰまたはＡＳＮであり、ＢＣ８タンパク質の集団内におけるＡＳＰ：ＡＳＮの比は、１０：９０～９０：１０など、１：９９～９９：１の範囲内である。
ある特定の態様によれば、上述したＢＣ８抗体のいずれか、すなわち、配列番号１～１０の１つまたは複数を含むものは、キメラ抗体またはヒト化抗体、すなわち、ＢＣ８ｃであってもよい。ＢＣ８ｃ抗体は、それぞれ配列番号１７～配列番号１９に示される通りのアミノ酸配列を有するヒトＩｇＧ１重鎖定常領域、ヒトＩｇＧ２重鎖定常領域もしくはヒトＩｇＧ４重鎖定常領域、（突然変異Ｓ２２８Ｐを含む）配列番号２０に示される通りのアミノ酸配列を有するヒトＩｇＧ４重鎖定常領域、および／または配列番号２１に示される通りのアミノ酸配列を有するヒトカッパ軽鎖定常領域を含んでもよい。
本開示は、ＣＤ４５陽性血液学的悪性疾患に罹患した対象を直接処置するための方法であって、有効量の225Ａｃ－ＢＣ８または177Ｌｕ－ＢＣ８を、低線量の単一治療剤として、単独で、または他の治療と併用して、前記対象に投与することを含む方法を提供する。
本開示は、ＣＤ４５陽性血液学的悪性疾患に罹患した対象を直接処置するための方法であって、有効量の225Ａｃ－ＢＣ８または177Ｌｕ－ＢＣ８を、低線量の単一治療剤として、単独で、または幹細胞担体による他の療法と併用して、前記対象に投与することを含む方法を提供する。
本開示は、対象の造血幹細胞を枯渇させるか、可逆的に抑制するか、またはアブレーションするための方法であって、有効量の225Ａｃ－ＢＣ８または177Ｌｕ－ＢＣ８を前記対象に投与することを含む方法に関する。
本開示は、造血幹細胞を骨髄破壊しない、したがって不可逆的に枯渇させない線量で有効量の225Ａｃ－ＢＣ８または177Ｌｕ－ＢＣ８を前記対象に投与することによって（例えば、白血病、リンパ腫、骨髄腫、ＭＤＳに見出される通りの）循環腫瘍細胞を枯渇させるか、または可逆的に抑制するための方法を提供する。そのような細胞は、少なくとも、調節性Ｔ細胞、骨髄由来サプレッサー細胞、腫瘍感作マクロファージ、ＩＬ－１および／またはＩＬ－６を分泌する活性化マクロファージ、ならびにそれらの組合せのいずれかを含んでもよい。
本開示は、対象のリンパ球を枯渇させるか、可逆的に抑制するか、またはアブレーションするための方法であって、有効量の225Ａｃ－ＢＣ８または177Ｌｕ－ＢＣ８を前記対象に投与することを含む方法をさらに提供する。
本開示は、非癌性障害に罹患した対象を処置するための方法であって、前記対象の造血幹細胞を枯渇させるか、可逆的に抑制するか、またはアブレーションするために有効な量の225Ａｃ－ＢＣ８または177Ｌｕ－ＢＣ８を前記対象に投与することを含む方法も提供する。ある特定の態様によれば、前記障害は、遺伝子編集細胞治療を介して処置可能であり、前記方法は、225Ａｃ－ＢＣ８または177Ｌｕ－ＢＣ８の投与後に前記対象の障害を処置するために前記対象における前記治療を行うことをさらに含む。ある特定の態様によれば、前記障害はＳＣＤであり、前記治療は遺伝子編集β－グロビン造血幹細胞治療である。ある特定の態様によれば、前記障害はＳＣＩＤであり、前記治療は遺伝子編集造血幹細胞治療であり、ここで前記編集遺伝子は、一般的なガンマ鎖（γｃ）遺伝子、アデノシンデアミナーゼ（ＡＤＡ）遺伝子および／またはヤヌスキナーゼ３（ＪＡＫ３）遺伝子である。前記幹細胞治療は、例えば、同種異系または自己由来であり得る。
本開示は、遺伝子編集細胞治療を介して処置可能な癌性障害に罹患した対象を処置するための方法であって、（ｉ）前記対象の造血幹細胞を枯渇させるか、可逆的に抑制するか、またはアブレーションするために有効な量の225Ａｃ－ＢＣ８または177Ｌｕ－ＢＣ８を前記対象に投与すること、および（ｉｉ）適切な時間期間の後、前記対象に対して前記治療を行って前記対象の障害を処置することを含む方法も提供する。ある特定の態様によれば、前記対象の障害を処置するために適切な前記治療は、骨髄移植または養子細胞治療であってもよい。
最後に、本開示は、（ａ）225Ａｃ－ＢＣ８または177Ｌｕ－ＢＣ８などの放射能標識抗ＣＤ４５抗体と、（ｂ）対象に、前記対象の造血幹細胞を枯渇させるために有効な量の抗体を投与するように使用者に指示するラベルとを含む製造物品を提供する。
本特許または本出願ファイルは、カラーで実行された少なくとも１つの図面を含む。（１つまたは複数の）カラー図面を有する本特許または本特許出願刊行物のコピーは、要求および必要な手数料の支払いに応じて米国特許商標庁によって提供されるであろう。
ヒトＣＤ４５遺伝子の差次的スプライシングによって生成されたＣＤ４５の様々なアイソフォームにおけるエクソン使用法の概略図を示す。 抗ＣＤ４５ ｍＡｂ ＢＣ８の軽鎖（ＶＬ）および重鎖（ＶＨ）の相補性決定領域（ＣＤＲ）、フレームワーク領域および可変ドメイン配列のタンパク質配列を提供する。ＣＤＲは、太字であり、かつ下線が引かれている（配列番号１および配列番号２）。 抗ＣＤ４５ ｍＡｂ ＢＣ８の軽鎖および重鎖のＣＤＲおよびＮ末端タンパク質配列（配列番号３～配列番号１０）を提供する。 抗ＣＤ４５ ｍＡｂ ＢＣ８の軽鎖の全ヌクレオチド（配列番号１１）配列および全アミノ酸（配列番号１２）配列を提供する。 リーダー配列を有さない抗ＣＤ４５ ｍＡｂ ＢＣ８の軽鎖のアミノ酸（配列番号１３）配列を提供する。 （タンパク質配列のｎ末端から）１４１位におけるアスパラギンがタンパク質集団の少なくとも一部においてアスパラギン酸に脱アミノ化されていることが見出されている抗ＣＤ４５ ｍＡｂ ＢＣ８の重鎖の全ヌクレオチド（配列番号１４）配列および全アミノ酸（配列番号１５）配列を提供する。 （タンパク質配列のｎ末端から）１４１位におけるアスパラギンがタンパク質集団の少なくとも一部においてアスパラギン酸に脱アミノ化されていることが見出されている、リーダー配列を有さない抗ＣＤ４５ ｍＡｂ ＢＣ８の重鎖のアミノ酸（配列番号１６）配列を提供する。 それぞれヒト重鎖定常領域のアミノ酸配列の配列番号１７～１９を提供する。 それぞれヒト重鎖定常領域のアミノ酸配列の配列番号１７～１９を提供する。 それぞれヒト重鎖定常領域のアミノ酸配列の配列番号１７～１９を提供する。 突然変異Ｓ２２８Ｐを含むヒト重鎖定常領域のアミノ酸配列（配列番号２０）を提供する。 ヒトカッパ軽鎖定常領域のアミノ酸配列（配列番号２１）を提供する。 本開示のある特定の態様にかかる養子細胞治療を行う前に対象をリンパ枯渇させるための方法を示す。 本開示にかかるリンパ枯渇プロトコールについての例示的なクリアランス時間および投与時間を示す薬物動態学的データを示す。 アクチニウム（225Ａｃ）で抗ＣＤ４５ ｍＡｂ ＢＣ８を放射能標識するための方法の概略図を提供し、図９Ａは、ＣＤ４５に対するモノクローナル抗体への二官能性キレート剤Ｓ－２－（４－イソチオシアナトベンジル）－１，４，７，１０テトラアザシクロドデカンテトラ酢酸（ｐ－ＳＣＮ－Ｂｎ－ＤＯＴＡ；図においてＤＯＴＡと称する）の付着を示し、図９Ｂは、225Ａｃ－ＤＯＴＡ－抗ＣＤ４５を提供するための225ＡｃによるＤＯＴＡ－抗ＣＤ４５コンジュゲートの放射能標識を示す。 アクチニウム（225Ａｃ）で抗ＣＤ４５ ｍＡｂ ＢＣ８を放射能標識するための方法の概略図を提供し、図９Ａは、ＣＤ４５に対するモノクローナル抗体への二官能性キレート剤Ｓ－２－（４－イソチオシアナトベンジル）－１，４，７，１０テトラアザシクロドデカンテトラ酢酸（ｐ－ＳＣＮ－Ｂｎ－ＤＯＴＡ；図においてＤＯＴＡと称する）の付着を示し、図９Ｂは、225Ａｃ－ＤＯＴＡ－抗ＣＤ４５を提供するための225ＡｃによるＤＯＴＡ－抗ＣＤ４５コンジュゲートの放射能標識を示す。 ＳＥＣ－ＨＰＬＣからのＢＣ８標準物質および225Ａｃ－ＤＯＴＡ－ＢＣ８についての溶出プロファイル（サイズ排除クロマトグラフィ高速液体クロマトグラフィ）を提供し、図１０Ａは、ＢＣ８標準物質の溶出を示し、図１０Ｂは、225Ａｃ－ＤＯＴＡ－ＢＣ８の溶出を示す（１３分におけるピークは、コンジュゲート抗体を安定化するために加えられたＨＳＡである）。 ＳＥＣ－ＨＰＬＣからのＢＣ８標準物質および225Ａｃ－ＤＯＴＡ－ＢＣ８についての溶出プロファイル（サイズ排除クロマトグラフィ高速液体クロマトグラフィ）を提供し、図１０Ａは、ＢＣ８標準物質の溶出を示し、図１０Ｂは、225Ａｃ－ＤＯＴＡ－ＢＣ８の溶出を示す（１３分におけるピークは、コンジュゲート抗体を安定化するために加えられたＨＳＡである）。 時間の関数としての様々な保存希釈度および温度における225Ａｃ－ＤＯＴＡ－ＢＣ８の安定性を示すグラフを提供する。 Ｒａｍｏｓ細胞（ＣＤ４５陽性細胞）およびＥＬ４細胞（Ｃｄ４５陰性細胞）に対する225Ａｃ－ＤＯＴＡ－ＢＣ８免疫反応性を示すグラフを提供する。 フローサイトメトリーによって測定されたＣｙｔｏｔｒｏｌ細胞への様々な抗体試料の結合を示すグラフを提供し、図１３Ａは、Ｃｙｔｏｔｒｏｌ細胞へのナイーブＢＣ８抗体およびナイーブ１８Ｂ７（非特異的対照）抗体の結合を比較し、図１３Ｂは、Ｃｙｔｏｔｒｏｌ細胞へのナイーブＢＣ８抗体およびＤＯＴＡ－ＢＣ８抗体の結合を比較する。 フローサイトメトリーによって測定されたＣｙｔｏｔｒｏｌ細胞への様々な抗体試料の結合を示すグラフを提供し、図１３Ａは、Ｃｙｔｏｔｒｏｌ細胞へのナイーブＢＣ８抗体およびナイーブ１８Ｂ７（非特異的対照）抗体の結合を比較し、図１３Ｂは、Ｃｙｔｏｔｒｏｌ細胞へのナイーブＢＣ８抗体およびＤＯＴＡ－ＢＣ８抗体の結合を比較する。 フローサイトメトリーによって測定されたＣｙｔｏｔｒｏｌ細胞へのナイーブＢＣ８およびＤＯＴＡ－ＢＣ８の結合を比較するグラフを提供する。 洗浄後に細胞上に保持された分画放射線によって測定される通りの225Ａｃ－１８Ｂ７の結合（Ｃｙｔｏｔｒｏｌ細胞への結合）と比較した225Ａｃ（すなわち、225Ａｃ－ＤＯＴＡ－ＢＣ８）による標識の直後の図１４Ａに由来するＤＯＴＡ－ＢＣ８試料の結合を示す棒グラフを提供する。 フローサイトメトリー（図１５Ａ）によって、または洗浄後に細胞上に保持された分画放射線によって測定される通りの225Ａｃ（すなわち、225Ａｃ－ＤＯＴＡ－ＢＣ８；図１５Ｂ）による標識後に測定された（ｍｅａｓｕｒｅ）異なるヒト多発性骨髄腫細胞系、すなわち、Ｈ９２９およびＵ２６６へのＤＯＴＡ－ＢＣ８の結合を比較するグラフを示す。 フローサイトメトリー（図１５Ａ）によって、または洗浄後に細胞上に保持された分画放射線によって測定される通りの225Ａｃ（すなわち、225Ａｃ－ＤＯＴＡ－ＢＣ８；図１５Ｂ）による標識後に測定された（ｍｅａｓｕｒｅ）異なるヒト多発性骨髄腫細胞系、すなわち、Ｈ９２９およびＵ２６６へのＤＯＴＡ－ＢＣ８の結合を比較するグラフを示す。 １時間、４時間、２４時間、４８時間および９６時間における対照マウス内の225Ａｃ－ＤＯＴＡ－ＢＣ８（図１６Ａ）抗体および225Ａｃ－ＤＯＴＡ－１８Ｂ７（図１６Ｂ）抗体の体内分布を比較する棒グラフを示す。 １時間、４時間、２４時間、４８時間および９６時間における対照マウス内の225Ａｃ－ＤＯＴＡ－ＢＣ８（図１６Ａ）抗体および225Ａｃ－ＤＯＴＡ－１８Ｂ７（図１６Ｂ）抗体の体内分布を比較する棒グラフを示す。 １時間、４時間、２４時間、４８時間および９６時間におけるＵ２６６ ＳＣＩＤ－ＮＯＤ腫瘍保持マウスおよびＨ９２９ ＳＣＩＤ－ＮＯＤ腫瘍保持マウス内の225Ａｃ－ＤＯＴＡ－１８Ｂ７（対照；図１７Ａ）抗体および225Ａｃ－ＤＯＴＡ－ＢＣ８（図１７Ｂ）抗体の体内分布を比較する棒グラフを示す。 １時間、４時間、２４時間、４８時間および９６時間におけるＵ２６６ ＳＣＩＤ－ＮＯＤ腫瘍保持マウスおよびＨ９２９ ＳＣＩＤ－ＮＯＤ腫瘍保持マウス内の225Ａｃ－ＤＯＴＡ－１８Ｂ７（対照；図１７Ａ）抗体および225Ａｃ－ＤＯＴＡ－ＢＣ８（図１７Ｂ）抗体の体内分布を比較する棒グラフを示す。 225Ａｃ－ＤＯＴＡ－ＢＣ８または225Ａｃ－ＤＯＴＡ－１８Ｂ７（対照）による放射線免疫治療処置後におけるＨ９２９多発性骨髄腫異種移植片保持ＳＣＩＤ－ＮＯＤマウスの腫瘍容積を比較するグラフを示す。 225Ａｃ－ＤＯＴＡ－ＢＣ８または225Ａｃ－ＤＯＴＡ－１８Ｂ７（対照）による放射線免疫治療処置後におけるＵ２６６多発性骨髄腫異種移植片保持ＳＣＩＤ－ＮＯＤマウスの腫瘍容積を比較するグラフを示す。 Ｕ２６６多発性骨髄腫異種移植片保持ＳＣＩＤ－ＮＯＤマウスおよびＨ９２９多発性骨髄腫異種移植片保持ＳＣＩＤ－ＮＯＤマウスから切除された腫瘍の組織学的分析を示し、図１９Ａは、未処置Ｈ９２９腫瘍を示し、図１９Ｂは、225Ａｃ－ＤＯＴＡ－ＢＣ８処置Ｈ９２９腫瘍を示し、図１９Ｃは、未処置Ｕ２６６腫瘍を示し、図１９Ｄは、225Ａｃ－ＤＯＴＡ－ＢＣ８処置Ｕ２６６腫瘍を示す。 注射の１時間後、２４時間後、４８時間後、７２時間後、９６時間後および６日後に得られた111Ｌｎ－抗ＣＤ４５が注射（ｉ．ｐ．）されたＣ５７Ｂｌ／６マウスのマイクロＳＰＥＣ／ＣＴスキャンを示す。 （Ａ）177Ｌｕ－抗ＣＤ４５または（Ｂ）131Ｉ－抗ＣＤ４５による処置後における、腫瘍を保持しないＣ５７Ｂｌ／６マウス内の様々な免疫細胞亜集団の枯渇量の棒グラフを示す。 （Ａ）177Ｌｕ－抗ＣＤ４５または（Ｂ）131Ｉ－抗ＣＤ４５による処置後における、腫瘍を保持しないＣ５７Ｂｌ／６マウス内の様々な免疫細胞亜集団の枯渇量の棒グラフを示す。 （Ａ）177Ｌｕ－抗－ＣＤ４５または（Ｂ）131Ｉ－抗－ＣＤ４５による処置後における、腫瘍を保持しないＣ５７Ｂｌ／６マウスの脾臓内の様々な免疫細胞集団の枯渇量の棒グラフを示す。 177Ｌｕ－抗ＣＤ４５リンパ枯渇および131Ｉ－抗ＣＤ４５リンパ枯渇がＯＴ Ｉ養子細胞治療モデルにおける腫瘍制御を可能にすることを示すグラフを示し、（Ａ）は、養子導入ＯＴ Ｉ Ｔ細胞の前の177Ｌｕ－抗ＣＤ４５および131Ｉ－抗ＣＤ４５によって媒介される、標的とされる前処置によって、ＥＧ．７腫瘍増殖の制御が可能になったことを示し、（Ｂ）は、各群における個別のマウスについての腫瘍の大きさを示し、（Ｃ）は、処置を受けなかったか、またはＯＴ Ｉ Ｔ細胞の処置を受けた対照マウス、ならびに177Ｌｕ－抗ＣＤ４５および131Ｉ－抗ＣＤ４５で前処置されたマウスの生存率を示す。 177Ｌｕ－抗ＣＤ４５リンパ枯渇および131Ｉ－抗ＣＤ４５リンパ枯渇がＯＴ Ｉ養子細胞治療モデルにおける腫瘍制御を可能にすることを示すグラフを示し、（Ａ）は、養子導入ＯＴ Ｉ Ｔ細胞の前の177Ｌｕ－抗ＣＤ４５および131Ｉ－抗ＣＤ４５によって媒介される、標的とされる前処置によって、ＥＧ．７腫瘍増殖の制御が可能になったことを示し、（Ｂ）は、各群における個別のマウスについての腫瘍の大きさを示し、（Ｃ）は、処置を受けなかったか、またはＯＴ Ｉ Ｔ細胞の処置を受けた対照マウス、ならびに177Ｌｕ－抗ＣＤ４５および131Ｉ－抗ＣＤ４５で前処置されたマウスの生存率を示す。 177Ｌｕ－抗ＣＤ４５リンパ枯渇および131Ｉ－抗ＣＤ４５リンパ枯渇がＯＴ Ｉ養子細胞治療モデルにおける腫瘍制御を可能にすることを示すグラフを示し、（Ａ）は、養子導入ＯＴ Ｉ Ｔ細胞の前の177Ｌｕ－抗ＣＤ４５および131Ｉ－抗ＣＤ４５によって媒介される、標的とされる前処置によって、ＥＧ．７腫瘍増殖の制御が可能になったことを示し、（Ｂ）は、各群における個別のマウスについての腫瘍の大きさを示し、（Ｃ）は、処置を受けなかったか、またはＯＴ Ｉ Ｔ細胞の処置を受けた対照マウス、ならびに177Ｌｕ－抗ＣＤ４５および131Ｉ－抗ＣＤ４５で前処置されたマウスの生存率を示す。
配列の簡単な説明
配列番号１は、抗ＣＤ４５マウスイムノグロブリンＢＣ８の軽鎖の可変ドメインのアミノ酸配列である。
配列番号２は、抗ＣＤ４５マウスイムノグロブリンＢＣ８の重鎖の可変ドメインのアミノ酸配列である。
配列番号３は、抗ＣＤ４５マウスイムノグロブリンＢＣ８の軽鎖のＣＤＲ１のアミノ酸配列である。
配列番号４は、抗ＣＤ４５マウスイムノグロブリンＢＣ８の軽鎖のＣＤＲ２のアミノ酸配列である。
配列番号５は、抗ＣＤ４５マウスイムノグロブリンＢＣ８の軽鎖のＣＤＲ３のアミノ酸配列である。
配列番号６は、抗ＣＤ４５マウスイムノグロブリンＢＣ８の重鎖のＣＤＲ１のアミノ酸配列である。
配列番号７は、抗ＣＤ４５マウスイムノグロブリンＢＣ８の重鎖のＣＤＲ２のアミノ酸配列である。
配列番号８は、抗ＣＤ４５マウスイムノグロブリンＢＣ８の重鎖のＣＤＲ３のアミノ酸配列である。
配列番号９は、抗ＣＤ４５マウスイムノグロブリンＢＣ８の軽鎖のＮ末端のアミノ酸配列である。
配列番号１０は、抗ＣＤ４５マウスイムノグロブリンＢＣ８の重鎖のＮ末端のアミノ酸配列である。
配列番号１１は、抗ＣＤ４５マウスイムノグロブリンＢＣ８の軽鎖のヌクレオチド配列である。
配列番号１２は、リーダー配列を含む抗ＣＤ４５マウスイムノグロブリンＢＣ８の軽鎖のアミノ酸配列である。
配列番号１３は、タンパク質Ｎ末端で開始する（すなわち、リーダー配列が存在しない）抗ＣＤ４５マウスイムノグロブリンＢＣ８の軽鎖のアミノ酸配列である。
配列番号１４は、抗ＣＤ４５マウスイムノグロブリンＢＣ８の重鎖のヌクレオチド配列である。
配列番号１５は、リーダー配列を含む抗ＣＤ４５マウスイムノグロブリンＢＣ８の重鎖のアミノ酸配列である。
配列番号１６は、タンパク質Ｎ末端で開始する（すなわち、リーダー配列が存在しない）抗ＣＤ４５マウスイムノグロブリンＢＣ８の重鎖のアミノ酸配列である。
配列番号１７は、ヒトＩｇＧ１重鎖定常領域のアミノ酸配列である。
配列番号１８は、ヒトＩｇＧ２重鎖定常領域のアミノ酸配列である。
配列番号１９は、ヒトＩｇＧ４重鎖定常領域のアミノ酸配列である。
配列番号２０は、突然変異Ｓ２２８Ｐを含むヒトＩｇＧ４重鎖定常領域のアミノ酸配列である。
配列番号２１は、ヒトカッパ軽鎖定常領域のアミノ酸配列である。
定義および略語
本出願にわたって、様々な刊行物が引用される。これらの刊行物の開示は、本開示が関係する当業技術をより完全に記載するために、本出願内に参照により本明細書に組み込まれる。
本出願において、以下のように示される意味を有する、ある特定の用語が使用される。
単数形「１つ（ａ）」、「１つ（ａｎ）」、「前記（ｔｈｅ）」および同種のものは、文脈によって明確に規定されない限り、複数の指示物を含む。したがって、例えば、「１つの（ａｎ）」抗体に対する参照は、単一の抗体および複数の異なる抗体を含む。
「約」という用語は、数値的な表示、例えば、温度、時間、量および濃度（範囲を含む）の前に使用される場合、±１０％、±５％または±１％変化してもよい近似値を示す。
本明細書において使用される場合、抗体に関する「投与」は、抗体送達のために適切な任意の知られた方法を介して対象の身体に抗体を送達することを意味する。具体的な投与様式としては、限定されるものではないが、静脈内投与、経皮投与、皮下投与、腹腔内投与および鞘内投与が挙げられる。抗体のための例示的な投与方法は、その全体が本明細書における参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１６／１８７５１４号に実質的に記載されている通りであってもよい。
さらに、本開示の態様によれば、抗体は、１種または複数種のルーチン的に使用される薬学的に許容される担体を使用して製剤化され得る。そのような担体は、当業者によく知られている。例えば、注射可能薬物送達系としては、溶剤、懸濁剤、ゲル剤、マイクロスフェアおよびポリマー注射剤が挙げられ、溶解性改変剤（ｓｏｌｕｂｉｌｉｔｙ－ａｌｔｅｒｉｎｇ ａｇｅｎｔｓ）（例えば、エタノール、プロピレングリコールおよびスクロース）およびポリマー（例えば、ポリカプロラクトン（ｐｏｌｙｃａｐｒｙｌａｃｔｏｎｅｓ）およびＰＬＧＡ）などの賦形剤を含むことができる。
本明細書において使用される場合「抗体」という用語は、限定されるものではないが、（ａ）抗原を認識する、２つの重鎖と２つの軽鎖とを含む免疫グロブリン分子、（ｂ）ポリクローナル免疫グロブリン分子およびモノクローナル免疫グロブリン分子、（ｃ）その一価断片および二価断片（例えば、ジ－Ｆａｂ）、ならびに（ｄ）その二重特異性形態を含む。イムノグロブリン分子は、ＩｇＡ、分泌型ＩｇＡ、ＩｇＧおよびＩｇＭが挙げられるが、それらに限定されるものではない、一般的に知られているクラスのいずれかに由来してもよい。ＩｇＧサブクラスも当業者によく知られており、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２、ヒトＩｇＧ３およびヒトＩｇＧ４が挙げられるが、それらに限定されるものではない。抗体は、天然に生じること、および天然に生じないことの両方が可能である（例えば、ＩｇＧ－Ｆｃ－サイレント）。さらに、抗体としては、キメラ抗体、完全合成抗体、単鎖抗体およびそれらの断片が挙げられる。抗体は、ヒト、ヒト化または非ヒトであってもよい。
「ヒト化」抗体は、非ヒト抗体のＣＤＲドメインの外側のアミノ酸の一部、ほとんど、または全てがヒトイムノグロブリンに由来する対応するアミノ酸と置換された抗体を指す。抗体のヒト化形態の一実施形態において、ＣＤＲドメインの外側のアミノ酸の一部、ほとんど、または全ては、ヒトイムノグロブリンに由来するアミノ酸と置換されているが、一方で１つまたは複数のＣＤＲ領域内のアミノ酸の一部、ほとんど、または全ては変化していない。アミノ酸の小さな付加、欠失、挿入、置換または修飾は、抗体が特定の抗原に結合する能力を抑止しない限り許容可能である。「ヒト化」抗体は、元の抗体と同様の抗原特異性を保持する。
「キメラ抗体」は、可変領域がマウス抗体に由来し、定常領域がヒト抗体に由来する抗体など、可変領域がある種に由来し、定常領域が別の種に由来する抗体を指す。
本明細書において使用される場合、「非癌性障害」または「非悪性障害」としては、限定されるものではないが、異常ヘモグロビン症（例えば、ＳＣＤ）、先天性免疫不全（例えば、ＳＣＩＤ）、自己免疫障害（例えば、多発性硬化症、リウマチ様関節炎、強皮症、全身性狼蒼、１型糖尿病、重症筋無力症（ｍｙａｔｈｅｎｉａ ｇｒａｖｉｓ）、シェーグレン病（ｓｊｏｇｅｎ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ）、多発性筋炎など）およびウイルス感染症（例えば、ＨＩＶ感染症）が挙げられる。非癌性障害は、例えば、固形がん（例えば、腫瘍）および血液悪性疾患を含まない。
本明細書において使用される場合、「がん」または「悪性障害」としては、限定されるものではないが、固形がん（例えば、腫瘍）および血液悪性疾患が挙げられる。血液がんとしても知られる「血液悪性疾患」は、骨髄、または免疫系の他の細胞などの造血組織を起源とするがんである。血液悪性疾患としては、限定されるものではないが、白血病（例えば、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性前骨髄球性白血病、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性混合系統系白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、毛様細胞性白血病および大顆粒リンパ球性白血病）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、骨髄増殖性障害（真性赤血球増加症、本態性血小板増加症、原発性骨髄線維症および慢性骨髄性白血病）、リンパ腫、多発性骨髄腫、ＭＧＵＳおよび同様の障害、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、縦隔原発Ｂ細胞性大細胞型リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、形質転換濾胞性リンパ腫、脾臓周辺帯リンパ腫、リンパ球性リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫ならびに他のＢ細胞悪性疾患が挙げられる。
「固形がん」としては、限定されるものではないが、骨がん、膵がん、皮膚がん、頭部もしくは頸部のがん、皮膚悪性黒色腫または眼内悪性黒色腫、子宮がん、卵巣がん、前立腺がん、直腸がん、肛門部のがん、胃がん、精巣がん、子宮がん、ファロピウス管の癌腫、子宮内膜の癌腫、子宮頚部の癌腫、膣の癌腫、外陰部の癌腫、食道のがん、小腸のがん、内分泌系のがん、甲状腺のがん、副甲状腺のがん、副腎のがん、軟質組織の肉腫、尿道のがん、陰茎のがん、小児腫瘍、膀胱のがん、腎臓もしくは尿管のがん、腎盂の癌腫、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、腫瘍血管新生、脊髄の軸の腫瘍、脳幹部神経膠腫、下垂体腺腫、カポシ肉腫、類表皮がん、扁平上皮細胞がん、アスベストによって誘導されるものを含む環境誘導がんが挙げられる。
本明細書において使用される場合、「負荷」という用語は、癌性細胞に関連して使用される場合、量を意味する。そのように、癌性細胞「負荷」は、癌性細胞の量を意味する。癌性細胞は、それらの組織の起源（すなわち、疾患の原発部位）に関する負荷、例えば、ＡＭＬの場合は「骨髄芽球負荷」を有する。癌性細胞は、起源のもの以外の１種または複数種の組織に関する負荷、例えば、ＡＭＬの場合は血液、肝臓および脾臓における芽球負荷も有する。「末梢負荷」という用語は、そのような細胞に関する。ＡＭＬの場合は芽球などの癌性細胞の末梢負荷は、異なる転帰を伴う異なる方法で測定され得る。例えば、ＡＭＬの場合、「末梢芽球負荷」は、骨髄外の総芽球集団、または血液、脾臓および肝臓を組み合わせた総量芽球集団、または単に単位量当たりの細胞で測定される通りの血液の芽球集団として測定され得る。ＡＭＬおよび骨髄を起源とする他のがんに関連して本明細書において使用される場合、特に記載されない限り、「末梢癌性細胞負荷」（例えば、末梢芽球負荷）という用語は、単位量当たりの細胞（例えば、個／μＬ）において測定される通りの血液の癌性細胞集団を指す。この血液ベース測定は、例えば脾臓負荷および肝臓負荷のより扱いにくい測定の有用な代用である。
本明細書において、最大安全線量で血液悪性疾患関連抗原を標的とする剤、例えば、本開示の放射能標識抗ＣＤ４５抗体を対象に投与する際、前記剤が、その部位におけるその標的抗原の９０％超に結合するために十分な量で疾患の原発部位に達しない場合、対象における末梢癌性細胞負荷は「高い」。逆に、前記剤を最大安全線量で対象に投与する際、前記剤が、その部位におけるその標的抗原の９０％超に結合するために十分な量で疾患の原発部位に達する場合、対象における末梢癌性細胞負荷は「低い」。ＡＭＬの場合、低末梢芽球負荷の例は、１，０００個／μＬ以下、５００個／μＬ以下、４００個／μＬ以下、３００個／μＬ以下、２００個／μＬ以下、１００個／μＬ以下、および５０個／μＬ以下の血液芽球負荷を生じるものである。
本明細書において使用される場合、「低線量」の本開示の放射能標識抗ＣＤ４５抗体は、亜飽和しているものであり、よって、標的抗原（すなわち、ＣＤ４５分子）の存在よりも少ない標的抗原結合部位（すなわち、投与された抗体におけるＣＤ４５結合部位）を対象の身体内に導入する。ある特定の態様によれば、低線量の放射能標識抗ＣＤ４５抗体は、ＣＤ４５分子に対するＣＤ４５結合部位の比が９：１０以下、例えば、１：２以下、または１：５以下、または１：１０以下、または１：２０以下、または１：１００以下であるものである。
本明細書において使用される場合、「対象」または「罹患体」という用語は、交換可能であり、限定されるものではないが、ヒト、非ヒト霊長類、イヌ、ネコ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、ウシ、ウサギ、ブタ、ラットおよびマウスなどの哺乳動物を含む。対象がヒトである場合、対象は任意の年齢であり得る。ある特定の態様によれば、対象は乳児である。さらなる態様によれば、対象は、１歳、２歳、３歳、４歳、５歳、６歳、７歳、８歳、９歳または１０歳である。さらに他の態様によれば、対象は、１０歳～１５歳、または１５歳～２０歳である。さらに他の態様によれば、対象は、２０歳以上、２５歳以上、３０歳以上、３５歳以上、４０歳以上、４５歳以上、５０歳以上、５５歳以上、６０歳以上、６５歳以上、７０歳以上、７５歳以上、８０歳以上、８５歳以上、または９０歳以上である。
本明細書において使用される場合、障害に罹患した対象を「処置する」ことは、限定されるものではないが、（ｉ）障害の進行を緩慢化すること、停止すること、もしくは好転させること、（ｉｉ）障害の病徴の進行を緩慢化すること、停止すること、もしくは好転させること、（ｉｉｉ）障害の再発の可能性を低下させ、理想的には除去すること、および／または（ｉｖ）障害の病徴が再発する可能性を低下させ、理想的に除去することを含む。ある特定の好ましい態様によれば、障害に罹患した対象を処置することは、（ｉ）障害の進行を、理想的には前記障害を除去するまで好転させること、および／または（ｉｉ）障害の病徴の進行を、理想的には前記病徴を除去するまで好転させること、および／または（ｉｉｉ）再発の可能性を低下させるか、もしくは除去することを意味する。理想的には、障害に罹患した対象を処置することは、障害を、その遺伝子的原因を除去するか、または、それ以外の場合、無能にすることによって治癒させることを意味する。
本明細書において使用される場合、対象の特異的細胞型に関して「枯渇させること」は、対象内のその細胞集団を、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％または９５％減少させることを意味する。本明細書において使用される場合、対象の特異的細胞型に関して「アブレーションすること」は、対象内のその細胞集団を、９５％超、例えば、少なくとも９６％、または９７％、または９８％、または９９％、または１００％も減少させることを意味する。
本開示の組成物および方法を用いて枯渇させる特異的細胞型としては、少なくとも、造血幹細胞（すなわち、血球芽細胞とも称される多分化能造血幹細胞）およびリンパ球、例えば、末梢血リンパ球または骨髄リンパ球が挙げられる。造血幹細胞（「ＨＳＣ」）は、造血のプロセス中に全ての分化血液細胞型から生じる、多分化能で自己複製する前駆細胞である。ＨＳＣは、２種の系統制限リンパ球系寡能性前駆細胞および系統制限骨髄赤血球寡能性前駆細胞に分化すると考えられるが、血液系統発生についての代替的「骨髄ベース」モデルには、両系統から子孫を生成する能力を有する新規中間骨髄リンパ球系前駆細胞が記載される。
本明細書において使用される場合、「造血幹細胞」（「ＨＳＣ」）という用語は、自己複製し、かつ、顆粒球（例えば、前骨髄球、好中球、好酸球、好塩基球）、赤血球（例えば、網状赤血球、赤血球）、血小板（例えば、巨核芽球、血小板産生巨核球、血小板）、単球（例えば、単球、マクロファージ）、樹状細胞、ミクログリア、破骨細胞およびリンパ球（例えば、ＮＫ細胞、Ｂ細胞およびＴ細胞）が挙げられるが、それらに限定されるものではない多様な系統を含む成熟血液細胞に分化する能力を有する未熟血液細胞を指す。そのような細胞としては、ＣＤ３４＋胞体を挙げることができる。ＣＤ３４＋細胞は、ＣＤ３４細胞表面マーカーを発現する未熟細胞である。
ＨＳＣ集団を測定するための方法はルーチン的である。それらは、例えば、骨髄試料中におけるヒトＨＳＣを検出するためのフローサイトメトリーの使用と、様々な細胞表面マーカー（例えば、Ｌｉｎ、ＣＤ３４、ＣＤ３８、ＣＤ４３、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ５９、ＣＤ９０、ＣＤ１０９、ＣＤ１１７、ＣＤ１３３、ＣＤ１６６およびＨＬＡ ＤＲ）についての染色とを含む。罹患体の免疫細胞の減少を末梢血で検出してもよい。末梢血リンパ球集団を測定するための方法はルーチン的である。それらは、例えば、ＣＤ４５、ＣＤ３、ＣＤ４またはＣＤ８などの特異的細胞表面マーカー（ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａ ｃｅｌｌ ｓｕｒｆａｃｅ ｍａｒｋｅｒ）に対する蛍光抗体による標識に基づいてリンパ球数を決定するための全血試料におけるフローサイトメトリーを含む。末梢血好中球集団を測定するための方法もルーチン的である。それらは、例えば、Ｌｙ６Ｇなどの特異的細胞表面マーカーに対する蛍光抗体による標識に基づいて好中球数を決定するための全血試料におけるフローサイトメトリーを含む。
本開示のある特定の態様によれば、対象のリンパ球の減少は、対象の末梢血リンパ球レベルを測定することによって決定される。本明細書において使用される場合、対象の「末梢血リンパ球」は、対象の血液中において循環する成熟リンパ球を意味する。末梢血リンパ球の例としては、限定されるものではないが、末梢血Ｔ細胞、末梢血ＮＫ細胞および末梢血Ｂ細胞が挙げられる。よって、例えば、対象の末梢血リンパ球の少なくとも１つの型の集団が９５％以下減少した場合、対象のリンパ球集団は枯渇する。例えば、対象の末梢血Ｔ細胞レベルが５０％低下し、対象の末梢血ＮＫ細胞レベルが４０％低下し、かつ／または対象の末梢血Ｂ細胞レベルが３０％低下する場合、対象のリンパ球は枯渇する。この例において、好中球などの別の免疫細胞型のレベルが低下しない場合であっても、対象のリンパ球は枯渇する。ある特定の態様によれば、対象のリンパ球を枯渇させることは、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％または９５％の末梢血リンパ球集団の減少によって反映される。
本明細書において使用される場合、造血幹細胞移植を「必要とする」罹患体としては、１つまたは複数の血液細胞型の欠損または欠乏を示す罹患体、および幹細胞障害、自己免疫疾患、がん、または本明細書に記載される他の病状を有する罹患体が挙げられる。造血幹細胞は、概して、１）多分化能（したがって、顆粒球（例えば、前骨髄球、好中球、好酸球、好塩基球）、赤血球（例えば、網状赤血球、赤血球）、血小板（例えば、巨核芽球、血小板産生巨核球、血小板）、単球（例えば、単球、マクロファージ）、樹状細胞、ミクログリア、破骨細胞、リンパ球（例えば、ＮＫ細胞、Ｂ細胞およびＴ細胞）が挙げられるが、それらに限定されるものではない複数の異なる血液系統に分化することが可能）、２）自己複製（したがって、母細胞として同等の可能性を有する娘細胞を生じることが可能）、および３）移植レシピエント内に再導入される能力を示し、その結果、それらは、造血幹細胞ニッチに戻り、増殖性でかつ持続する造血を再確立する。
追加的にまたは代替的には、造血幹細胞移植「を必要とする」罹患体は、病状に罹患しているか、または罹患していないが、それにもかかわらず、巨核球、血小板、血小板、赤血球、肥満細胞、骨髄芽球（ｍｙｅｏｂｌａｓｔｓ）、好塩基球、好中球、好酸球、ミクログリア、顆粒球、単球、破骨細胞、抗原提示細胞、マクロファージ、樹状細胞、ナチュラルキラー細胞、Ｔリンパ球およびＢリンパ球など、造血系統内の１つまたは複数の内因性細胞型のレベルの低下（例えば、他の点で健康な対象のレベルと比較した）を示す罹患体であってもよい。
抗ＣＤ４５抗体
本明細書において使用される場合、「抗ＣＤ４５抗体」または「抗ＣＤ４５－イムノグロブリン」は、ＣＤ４５のエピトープに結合する抗体である。ある特定の態様によれば、抗ＣＤ４５抗体は、モノクローナル抗体「ＢＣ８」によって認識されるエピトープに結合し得る。ＢＣ８は、それを作製する方法であるとして知られている。これらの方法は、例えば、その全体が本明細書に参照により組み込まれる国際公開第２０１７／１５５９３７号に、および本明細書において提供される実施例に記載される。
ＢＣ８モノクローナル抗体は、リーダー配列を含む配列番号１２に示されるアミノ酸配列（図４Ａ）またはリーダー配列を含まない配列番号１３に示されるアミノ酸配列（図４Ｂ）を有する軽鎖を含んでもよい。ＢＣ８モノクローナル抗体は、配列番号１に示されるアミノ酸配列（図２）を有する軽鎖可変領域を含んでもよい。ＢＣ８モノクローナル抗体は、配列番号９に示されるＮ末端アミノ酸配列（図３）を有する軽鎖を含んでもよい。ある特定の態様によれば、軽鎖は、配列番号３、配列番号４または配列番号５に示される通りのアミノ酸配列（図３）を有する少なくとも１つの相補性決定領域を含む。ある特定の態様によれば、軽鎖は、配列番号９に示されるＮ末端アミノ酸配列と、配列番号３、配列番号４または配列番号５に示される通りのアミノ酸配列（図３）を有する少なくとも１つの相補性決定領域とを含む。
ＢＣ８モノクローナル抗体は、リーダー配列を含む配列番号１５に示されるアミノ酸配列（図５Ａ）またはリーダー配列を含まない配列番号１６に示されるアミノ酸配列（図５Ｂ）を有する重鎖を含んでもよい。ＢＣ８モノクローナル抗体は、配列番号２に示されるアミノ酸配列（図２）を有する重鎖可変領域を含んでもよい。ＢＣ８モノクローナル抗体は、配列番号１０に示されるＮ末端アミノ酸配列（図３）を有する重鎖を含んでもよい。ある特定の態様によれば、重鎖は、配列番号６、配列番号７または配列番号８に示される通りのアミノ酸配列（図３）を有する少なくとも１つの相補性決定領域を含む。ある特定の態様によれば、重鎖は、配列番号１０に示されるＮ末端アミノ酸配列と、配列番号６、配列番号７または配列番号８に示される通りのアミノ酸配列（図３）を有する少なくとも１つの相補性決定領域とを有する重鎖を含む。
ある特定の態様によれば、ＢＣ８モノクローナル抗体は、（Ｎ末端アミノ酸に対して）１４１位のアミノ酸がＡＳＰまたはＡＳＮである配列番号１５または配列番号１６に示されるアミノ酸配列を有する重鎖を含む。ＢＣ８タンパク質の集団における１４１位におけるＡＳＰ：ＡＳＮの比は、１０：９０～９０：１０など、１：９９～９９：１の範囲内であってもよい。
ある特定の態様によれば、ＢＣ８モノクローナル抗体は、（Ｎ末端アミノ酸に対して）定常領域の１４１位のアミノ酸がＡＳＰまたはＡＳＮである配列番号２に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む。ＢＣ８タンパク質の集団における１４１位におけるＡＳＰ：ＡＳＮの比は、１０：９０～９０：１０など、１：９９～９９：１の範囲内であってもよい。
ある特定の態様によれば、ＣＤ４５に対する抗体（抗ＣＤ４５抗体）は、キメラ抗体またはヒト化抗体であってもよい。例えば、ＢＣ８モノクローナル抗体は、ヒト化ＢＣ８抗体またはキメラＢＣ８抗体（本明細書において「ＢＣ８ｃ」と称される）を含んでもよい。例えば、ヒト化ＢＣ８ｃモノクローナル抗体は、重鎖についてはヒトＩｇＧ１定常領域、ヒトＩｇＧ２定常領域またはヒトＩｇＧ４定常領域上に、または軽鎖についてはヒトカッパ領域上にグラフトされた親マウス可変（Ｖ）領域を含んでもよい。ＩｇＧ４抗体は、重鎖および付加軽鎖（半分子）を他の分子に由来する重鎖－軽鎖対と取り替えることによってＦａｂアームを交換することが可能であり、それによって二重特異性抗体が生じる。本明細書において「Ｆａｂアーム交換」と称されるこのプロセスは、マウスにおいてインビトロおよびインビボにおける還元条件下で生じることが示された。Ｆａｂアーム交換が生じるＩｇＧ４抗体の能力は、ＩｇＧ４ ＣＨ３ドメインの配列決定因子と組み合わせて不安定なコア－ヒンジ配列に帰された。Ｐｒｏ（Ｓ２２８Ｐ）によるコア－ヒンジ残基Ｓｅｒ２２８の置換によって、インビトロおよびインビボにおけるＩｇＧ４分子の部分的安定化が生じる。よって、ある特定の態様によれば、ＩｇＧ４は、２２８位においてＳまたはＰを含むことが可能であり、ここで突然変異Ｓ２２８Ｐは、Ａｂを安定化し、Ｆａｂアーム交換を防止することに役立つ可能性がある。
そのようなキメラ化、すなわち、ＢＣ８をヒト化してＢＣ８ｃを生成することは、本技術分野で知られている方法によって、例えば、インフレームでＢＣ８マウス重鎖Ｖ領域およびＢＣ８マウス軽鎖Ｖ領域ならびに内因性マウスシグナル配列をコードするＤＮＡをヒト重鎖定常領域（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４）またはヒトＣカッパをすでに含む重鎖および軽鎖のための哺乳動物発現ベクターにクローニングすることによって達成され得る。
したがって、ある特定の態様によれば、ＢＣ８モノクローナル抗体は、キメラＢＣ８、すなわちＢＣ８ｃであってもよく、配列番号１７に示される通りのアミノ酸配列を有するヒトＩｇＧ１重鎖定常領域、または配列番号１８に示される通りのアミノ酸配列を有するヒトＩｇＧ２重鎖定常領域、または配列番号１９に示される通りのアミノ酸配列を有するヒトＩｇＧ４重鎖定常領域、または配列番号２０に示される通りのアミノ酸配列を有するヒトＩｇＧ４重鎖定常領域、または配列番号２１に示される通りのアミノ酸配列を有するヒトカッパ軽鎖定常領域（図６Ａ～図６Ｅ）を含んでもよい。
ある特定の態様によれば、ＢＣ８モノクローナル抗体は、配列番号１７～配列番号２０の内のいずれか１つに示される通りのアミノ酸配列を有するヒトＩｇＧ１重鎖定常領域、ヒトＩｇＧ２重鎖定常領域またはヒトＩｇＧ４重鎖定常領域および配列番号２１に示される通りのアミノ酸配列を有するヒトカッパ軽鎖定常領域（図６Ａ～図６Ｅ）を含むキメラ（ＢＣ８ｃ）であってもよい。
ある特定の態様によれば、キメラＢＣ８ｃモノクローナル抗体は、配列番号１に示されるアミノ酸配列（図２）を有する軽鎖可変領域を含んでもよい。ＢＣ８ｃモノクローナル抗体は、配列番号９に示されるＮ末端アミノ酸配列（図３）を有する軽鎖を含んでもよい。ＢＣ８ｃモノクローナル抗体は、配列番号３、配列番号４または配列番号５に示される通りのアミノ酸配列（図３）を有する少なくとも１つの相補性決定領域を有する軽鎖を含んでもよい。
ある特定の態様によれば、キメラＢＣ８ｃモノクローナル抗体は、配列番号２に示されるアミノ酸配列（図２）を有する重鎖可変領域を含んでもよい。ＢＣ８ｃモノクローナル抗体は、配列番号１０に示されるＮ末端アミノ酸配列（図３）を有する重鎖を含んでもよい。ＢＣ８ｃモノクローナル抗体は、配列番号６、配列番号７または配列番号８に示される通りのアミノ酸配列（図３）を有する少なくとも１つの相補性決定領域を有する重鎖を含んでもよい。
ある特定の態様によれば、ＢＣ８またはＢＣ８ｃモノクローナル抗体の重鎖は、Ｃ末端リシン、Ｃ末端リシン（Ｋ）を喪失したＣ末端グリシン（Ｇ）を含むか、またはＧＫ両方を喪失している。本明細書に記載される修飾重鎖定常領域を含む抗体を参照する場合、前記抗体は、Ｃ末端ＧＫもしくはＣ末端Ｋを有するか、または、代替的に、ＧＫもしくはＫを喪失する、提供された配列を含んでもよい。
罹患体特異的組成物
本明細書において使用される場合、225Ａｃ標識ＢＣ８を含む組成物は、アクチニウム－２２５標識抗体および非標識抗体の両方を含み、少数のものはアクチニウム－２２５標識抗体である。同様に、177Ｌｕ標識ＢＣ８について、前記組成物は、標識抗体集団および非標識抗体集団の両方を含む。非標識抗体に対する標識抗体の比は、知られた方法を用いて調整され得る。したがって、本開示のある特定の態様によれば、抗ＣＤ４５抗体は、最高１００ｍｇ、例えば、最高６０ｍｇ、例えば、５ｍｇ～４５ｍｇの総タンパク質量で、または０．００１ｍｇ／ｋｇ（罹患体重）～３．０ｍｇ／ｋｇ（罹患体重）、例えば、０．００５ｍｇ／ｋｇ（罹患体重）～２．０ｍｇ／ｋｇ（罹患体重）、もしくは０．０１ｍｇ／ｋｇ（罹患体重）～１ｍｇ／ｋｇ（罹患体重）、もしくは０．１ｍｇ／ｋｇ（罹患体重）～０．６ｍｇ／ｋｇ（罹患体重）、もしくは０．３ｍｇ／ｋｇ（罹患体重）、もしくは０．４ｍｇ／ｋｇ（罹患体重）、もしくは０．５ｍｇ／ｋｇ（罹患体重）、もしくは０．６ｍｇ／ｋｇ（罹患体重）の総タンパク質量で提供されてもよい。
本開示のある特定の態様によれば、放射能標識抗ＣＤ４５抗体（すなわち、225Ａｃ標識ＢＣ８または177Ｌｕ標識ＢＣ８）は、標識画分および非標識画分を含んでもよく、ここで標識：非標識の比は、約０．０１：１０～１：１０、例えば、０．０１：５～０．１：５、または０．０１：３～０．１：３、または０．０１：１～０．１：１の標識：非標識であってよい。その上、放射能標識抗ＣＤ４５抗体は、特定の罹患体に合わせた単一線量組成物として提供されてもよく、ここで前記組成物中における標識抗ＣＤ４５抗体および非標識抗ＣＤ４５抗体の量は、少なくとも罹患体の質量、年齢、性別および／または疾患状況もしくは健康状態に依存してもよい。例えば、その全体が本明細書における参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１６／１８７５１４号に開示される投与方法を参照すること。ある特定の態様によれば、放射能標識抗ＣＤ４５抗体は、複数の線量で提供されてもよく、ここでレジメンにおける各線量は、特定の罹患体に合わせた組成物を含んでもよく、ここで前記組成物中における標識抗ＣＤ４５抗体および非標識抗ＣＤ４５抗体の量は、少なくとも罹患体の質量、年齢、性別、および／または疾患状況もしくは健康状態に依存してもよい。
抗ＣＤ４５抗体の標識画分および非標識画分の本発明の組合せによって前記組成物を特定の罹患体に合わせることが可能になり、ここでモノクローナル抗体の放射線量およびタンパク質用量の各々は、少なくとも１つの罹患体特異的パラメータに基づいてその罹患体に個別化される。よって、前記組成物の各バイアルは特定の罹患体のために作製されてもよく、バイアルの全含有量は単一用量でその罹患体に送達される。処置レジメンが複数の用量を必要とする場合、各用量は、「単一用量」（すなわち、１回で投与されるバイアル中の全含有量）として罹患体に投与されるバイアル中における罹患体特異的用量として製剤化されてもよい。後続の用量は、同様の方法で製剤化されてもよく、その結果、前記レジメンにおける各用量は、単一用量容器における罹患体特異的用量を提供する。本開示の組成物の長所の１つは、医療従事者が廃棄するか、もしくは取り扱う必要がある残りの放射線がない、例えば希釈がないか、または罹患体のための用量を得るための他の操作がないということである。単一用量容器で提供される場合、前記容器は、罹患体への注入のための注入チューブセットにおいて単に一列で配置される。その上、前記量は、医療過誤（すなわち、前記組成物の全量が１回の注入で投与されることになっている場合における不正確な用量の送達）の可能性が大きく低下するように標準化され得る。
血液疾患の処置
血液学的起源の悪性疾患の大部分は、骨髄由来であろうとリンパ球由来であろうと、異なる程度に腫瘍細胞の表面上にＣＤ４５を発現する。これには、白血病（例えば、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性前骨髄球性白血病、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性混合系統系白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、毛様細胞性白血病および大顆粒リンパ球性白血病）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、骨髄増殖性障害（真性赤血球増加症、本態性血小板増加症、原発性骨髄線維症および慢性骨髄性白血病）、リンパ腫、多発性骨髄腫、ＭＧＵＳおよび同様の障害、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、縦隔原発Ｂ細胞性大細胞型リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、形質転換濾胞性リンパ腫、脾臓周辺帯リンパ腫、リンパ球性リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫ならびに他のＢ細胞悪性疾患が挙げられる。よって、ある量の放射能標識抗ＣＤ４５抗体は、罹患体に投与される場合、末梢ならびに骨髄、脾臓およびリンパ節などの免疫細胞コンパートメント、における腫瘍芽球数を減少させるための直接の抗腫瘍治療として有効である。
放射能標識抗ＣＤ４５抗体による直接治療は、腫瘍芽球数を減少させるために必要な低線量単剤として、しかし可逆的に予備の造血幹細胞として、または他の治療剤、例えば、化学療法剤または標的治療剤（例えば、限定されるものではないが、ＨＤＡＣ阻害剤、ＢＣＬ２阻害剤、モノクローナル抗体またはチロシンキナーゼ受容体阻害剤－ＴＫＩ）と併用であってもよい。
造血幹細胞を不可逆的に枯渇させることなく腫瘍増殖を制御しかつ芽球数を減少させるのに有効な225Ａｃ放射能標識抗ＣＤ４５抗体の線量によって、閾値レベルを下回る骨髄への放射線曝露が送達される。２Ｇｙの線量は非骨髄破壊的放射線量であると考えられる。理想的線量によって、白血病腫瘍細胞またはリンパ腫腫瘍細胞を除去し、一過性であるが可逆的な骨髄抑制を提供するのに十分高い少なくとも２Ｇｙの線量が送達される。２Ｇｙを上回るが骨髄破壊的線量未満の線量レベルは、リンパ腫および白血病における腫瘍負荷を制御するのに有効であることが期待される。さらに、単一低線量放射能標識抗ＣＤ４５抗体処置を別の標的とされた剤と併用する場合、より低い線量の抗体放射性コンジュゲートを使用して、さらに造血幹細胞の枯渇を回避する、効力のある抗腫瘍活性が達成され得る。
例示的な低線量は、１０μＣｉ～１００μＣｉなどの１５０μＣｉ未満である225Ａｃ－ＢＣ８の線量、または０．０１μＣｉ／ｋｇ～１．５μＣｉ／ｋｇ、もしくは０．１μＣｉ／ｋｇ～１．０μＣｉ／ｋｇなどの２μＣｉ／ｋｇ未満の線量であってもよい。
循環腫瘍芽細胞および循環骨髄芽細胞の枯渇
限定されるものではないが、白血病、例えば、急性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、多発性骨髄腫などが挙げられる血液悪性疾患は、有効な治療に対する固有のセットの問題をもたらす。あまりに迅速に死滅させる場合、多くの場合白血病に関連する循環腫瘍細胞の高負荷は、罹患体に有毒である可能性がある。細胞減少治療は、循環芽細胞の数字が減少するプロセスである。
ある特定の態様によれば、細胞減少治療は、血液学的悪性疾患を処置するために使用されてもよく、概して、循環腫瘍細胞（例えば白血病、リンパ腫、骨髄腫、ＭＤＳ）を枯渇させるが、骨髄破壊的ではなく、したがってＨＳＣを不可逆的に枯渇させない線量などの低線量の放射能標識抗ＣＤ４５の投与を含む。例示的な低線量は、１０μＣｉ～１００μＣｉなどの１５０μＣｉ未満である225Ａｃ－ＢＣ８の線量、または０．０１μＣｉ／ｋｇ～１．５μＣｉ／ｋｇ、もしくは０．１μＣｉ／ｋｇ～１．０μＣｉ／ｋｇなどの２μＣｉ／ｋｇ未満の線量であってもよい。
造血幹細胞治療
造血幹細胞治療は、骨髄移植（ＢＭＴ）などの造血幹細胞の投与を含む。造血幹細胞は、インビボで細胞の欠損集団または欠乏集団を再構成するために、造血系統の１つまたは複数の細胞型が欠損または欠乏した罹患体に投与されてもよい。例えば、罹患体は、がんまたは異常ヘモグロビン症（例えば、非悪性異常ヘモグロビン症）、例えば、鎌状赤血球貧血、サラセミア、ファンコニ貧血、再生不良性貧血およびウィスコット－アルドリッチ症候群に罹患していてもよい。対象は、アデノシンデアミナーゼ重症複合免疫不全（ＡＤＡ ＳＣＩＤ）、ＨＩＶ／エイズ、異染性ロイコジストロフィー、ダイアモンド－ブラックファン貧血およびシュワッハマン－ダイアモンド症候群に罹患している対象であってもよい。対象は、遺伝性血液疾患（例えば、鎌状赤血球貧血）または自己免疫障害、例えば、強皮症、多発性硬化症、潰瘍性大腸炎、クローン病、１型糖尿病もしくは他の自己免疫病状を有するか、あるいは罹患してもよい。
前記がんは、神経芽細胞腫または血液がんであってもよい。例えば、対象は、白血病、リンパ腫または骨髄腫を有してもよい。一部の実施形態において、対象は、急性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫または非ホジキンリンパ腫を有する。対象は、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）を有してもよい。
遺伝子編集
遺伝子編集技術は、ＴＡＬＥＮ法、ＣＲＩＳＰＲ／ｃａｓ９法および亜鉛フィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）法などの部位特異的編集方法の出現と共に実質的に進歩した。これらの方法は、悪性遺伝性疾患および非悪性遺伝性疾患に罹患した罹患体のための治療的可能性を有する。
遺伝子編集によって、修飾遺伝要素の妥当で適切な発現のための内因性遺伝子調節および内因性遺伝子制御下のままにあるゲノムＤＮＡの配列は、正確かつ永久に改変される。現在、ヒトゲノム遺伝子編集のためのヌクレアーゼの４つの主要なクラス、すなわち、亜鉛フィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、転写アクチベータ様エフェクタヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、メガヌクレアーゼ（ＭＮ）およびクラスター化して規則的な配置の短い回文配列リピート（ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９）がある。これらの各々は、ＤＮＡの特異的標的配列を認識し、それに結合することができる。アプローチに応じて、標的ＤＮＡは、一方または両方のストランドに切断され得る。突然変異を補正するために、標的病変の部位において導入された切断の相同性指向修復のために補正鋳型が使用される。突然変異の挿入または欠失を組み込むことによって特定の遺伝子を非発現化するか、またはアブレーションするために、この技術を利用することもできる。さらに、例えばＴ細胞受容体アルファ定常座（Ｔ－ｃｅｌｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｌｐｈａ ｃｏｎｓｔａｎｔ ｌｏｃｕｓ）（ＴＲＡＣ）内においてある遺伝子を別のものと機能的に置換することによって、Ｔ細胞の特異性を変化させるために、遺伝子編集技術を利用することもできる（Eyquem, et. al., 2017, Nature. 543:113-117）。
養子細胞治療（「ＡＣＴ」）
養子細胞治療は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）もしくはＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現する細胞の投与を含んでもよいか、または腫瘍浸潤性リンパ球（ＴＩＬ）を含んでもよい。ＣＡＲ／ＴＣＲを発現する細胞の集団は、抗原を認識するＣＡＲ／ＴＣＲを発現する活性化Ｔ細胞またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞または樹状細胞の集団を含んでもよい。樹状細胞は、抗原提示と、腫瘍の直接の死滅とが可能である。ＣＡＲ／ＴＣＲを発現する細胞の集団は、遺伝子編集細胞の集団を含んでもよい。
本明細書において使用される場合、「遺伝子編集」ＣＡＲ Ｔ細胞という用語は、「遺伝子操作」ＣＡＲ Ｔ細胞および「操作」ＣＡＲ Ｔ細胞という用語と同義である。チェックポイント受容体（例えば、ＰＤ１、Ｌａｇ３またはＴＩＭ３）を「妥当に発現することができない」遺伝子編集ＣＡＲ Ｔ細胞は、完全長機能的チェックポイント受容体を発現しない。例えば、限定されるものではないが、（ｉ）細胞のＰＤ１遺伝子がアブレーションされているか、または（ｉｉ）それ以外の場合、細胞のＰＤ１遺伝子が、完全に、もしくは、さらに部分的に機能的ＰＤ１産物を生成しないように改変されているので、ＰＤ１を妥当に発現することができない遺伝子編集ＣＡＲ Ｔ細胞は、そうすることができない可能性がある。すなわち、ある特定の態様によれば、細胞のＰＤ１遺伝子が改変されてＰＤ１発現を減少させているので、ＰＤ１を妥当に発現することができない遺伝子編集ＣＡＲ Ｔ細胞は、そうすることができない可能性がある。同様に、Ｔ細胞受容体を「妥当に発現することができない」遺伝子編集ＣＡＲ Ｔ細胞は、完全長機能的Ｔ細胞受容体を発現しない。
ある特定の態様によれば、機能的内因性Ｔ細胞受容体は、外因的に形質導入されたＣＡＲまたは組換えＴＣＲの天然のＴＣＲ座への「ノックイン」による編集によって置換される。遺伝子編集ＣＡＲ Ｔ細胞としては、限定されるものではないが、以下のもの、すなわち、（ｉ）ＰＤ１を妥当に発現することができないが、全ての他のチェックポイント受容体およびＴ細胞受容体を妥当に発現する同種異系遺伝子編集ＣＡＲ Ｔ細胞、（ｉｉ）特定のＴ細胞受容体を妥当に発現することができないが、全てのチェックポイント受容体および全ての他のＴ細胞受容体を妥当に発現する同種異系遺伝子編集ＣＡＲ Ｔ細胞、および（ｉｉｉ）ＰＤ１を妥当に発現することができず、特定のＴ細胞受容体を妥当に発現することができないが、全ての他のチェックポイント受容体および全ての他のＴ細胞受容体を妥当に発現する同種異系遺伝子編集ＣＡＲ Ｔ細胞を挙げることができる。
同種万能ＣＡＲ Ｔ細胞を生成するためのＴ細胞遺伝子編集の例としては、Ｅｙｑｕｅｍらの取り組みが挙げられる（Eyquem, et. al., 2017, Nature. 543:113-117）。その研究において、内因性Ｔ細胞受容体アルファ定常座（ＴＲＡＣ）は、組換えＣＡＲ遺伝子構築物で効果的に置換された。この方法によって、組換えＣＡＲは、効果的に細胞の天然ＴＣＲ調節シグナルの制御下で配置された。この同じ戦略によって、ＣＡＲまたは組換えＴＣＲは、全てのＴ細胞内で発現されることが知られているＴ細胞受容体ベータ定常遺伝子座（ＴＲＢＣ）またはベータ２ミクログロブリン（Ｂ２Ｍ）ＭＨＣ－Ｉ関連遺伝子座内へのノックインによって効果的に挿入されてもよい。別の例としては、Ｒｅｎらの取り組みが挙げられる（Ren, et. al., 2017, Clin. Cancer Res 23:2255-2266）。チェックポイント受容体が免疫抑制性であり、外因性自己由来ＣＡＲ Ｔ細胞または外因性同種ＣＡＲ Ｔ細胞の刺激を弱めるかもしれないということを認識した際、このグループは、ＣＲＩＳＰＲ／ｃａｓ９技術を活用して内因性ＴＣＲα座および内因性ＴＣＲβ座（ＴＲＡＣおよびＴＲＢＣ）ならびにＢ２Ｍ遺伝子をアブレーションしたが、内因性ＰＤ１遺伝子も非発現化した。このアプローチによって、操作細胞は、移植片対宿主疾患を誘発しなかったが、免疫チェックポイント受容体抑制に抵抗した。
リンパ枯渇および骨髄破壊
ある用量のＨＳＴ（例えば、骨髄移植）または操作免疫細胞を罹患体に投与する前に、罹患体のリンパ枯渇を行うことは一般的である。リンパ枯渇プロセスは、ＢＭＴ方法および養子細胞治療（ＡＣＴ）方法の成功にとって重要であり、実際に必須であると考えられる。前記プロセスによって、免疫微小環境（例えば、骨髄）内に十分な空きを生じさせて移入細胞の移植が可能になる。それによって、良好なサイトカインプロファイルを誘発することによって移入細胞の移植、増殖および残存の成功ための良好な免疫ホメオスタシス環境も作られる。それは、特に操作細胞の確立および増殖のための末梢免疫ニッチ（例えば、骨髄、脾臓およびリンパ節）内において、このサイトカインプロファイルを誘発する。（例えば、Maine, et al., 2002, J. Clin. Invest., 110:157-159; Muranski, et al., 2006, Nat. Clin. Pract. Oncol., 3(12):668-681; Klebanoff, et al., 2005, Trends Immunol., 26(2): 111-117参照）。
上に示されるように、骨髄由来細胞およびリンパ球由来細胞はＣＤ４５を発現する。造血幹細胞を不可逆的に枯渇させることなく芽球数を減少させるのに有効な225Ａｃ放射能標識抗ＣＤ４５抗体の線量によって、閾値レベルを下回って、骨髄に放射線曝露が送達される。２Ｇｙの線量は、放射線の非骨髄破壊的線量であると考えられる。少なくとも２Ｇｙの線量は、一過性であるが可逆的な骨髄抑制を提供する可能性がある。骨髄破壊的線量は、８～１８Ｇｙの範囲内など、変化し得るが、典型的には、骨髄に１０～１２Ｇｙ超送達する線量が挙げられる。したがって、（幹細胞担体の有無にかかわらず）可逆的免疫抑制を提供し得る治療的低線量範囲は、２Ｇｙ以上であるが、８Ｇｙ以下などの骨髄破壊的線量を下回る。より高い線量のためには、幹細胞担体が必要であり得る。
本明細書において使用される場合、放射能標識抗ＣＤ４５抗体の量は、投与の際、細胞集団を少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％または９５％減少させる場合、特異的標的細胞型を枯渇させるために「有効」である。例えば、放射能標識抗ＣＤ４５抗体の量は、投与の際、対象の好中球が枯渇することなく、または対象の好中球が１０％未満または２０％未満減少すると共に末梢血リンパ球が枯渇する場合、対象の末梢血リンパ球を枯渇させるために「有効」である。放射能標識抗ＣＤ４５抗体の「有効」量は、例えば、少なくとも２０％、または３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％もしくは９５％、対象の調節性Ｔ細胞、骨髄由来サプレッサー細胞、腫瘍感作マクロファージ、ＩＬ－１および／またはＩＬ－６を分泌する活性化マクロファージ、ならびにそれらの組合せを枯渇させる量にも関連し得る。
本明細書において使用される場合、放射能標識抗ＣＤ４５抗体の量は、投与の際、対象のＨＳＣレベルまたはリンパ球レベルなどの細胞集団が９５％超、例えば、少なくとも９６％、または９７％または９８％または９９％も減少する場合、標的細胞型を可逆的に抑制するために「有効」である。「可逆的免疫抑制」は、標的細胞をアブレーションすることなく、すなわち、骨髄破壊線量未満である線量（非骨髄破壊的線量）で、標準的リンパ枯渇より大きな程度に標的細胞を枯渇させるための、低線量治療薬またはその組合せ、例えば、本明細書に開示されるアクチニウム－２２５標識ＢＣ８の使用を概して含む。その上、可逆的免疫抑制は、標的化免疫集団（免疫特権細胞集団または免疫特権細胞組織）が一過性に枯渇するだけであるが、他の非標的集団は影響を受けないことを示す可能性がある。
以下に開示されるように、本開示の可逆的免疫抑制は、アクチニウム－２２５標識ＢＣ８と、例えば別の免疫治療剤または放射線増感剤などの別の剤との投与を概して含んでもよい。
本明細書において使用される場合、放射能標識抗ＣＤ４５抗体の量は、投与の際、対象のＨＳＣレベルまたはリンパ球レベルなどの細胞集団が１００％低下する（骨髄破壊とも称される）場合、標的細胞型をアブレーションするために「有効」である。
本開示のある特定の態様によれば、放射能標識抗ＣＤ４５抗体は、アクチニウム－２２５標識ＢＣ８（225Ａｃ標識ＢＣ８）であり、225Ａｃ標識ＢＣ８の有効量は、例えば、５．０μＣｉ／ｋｇを下回る（すなわち、対象に投与される225Ａｃ－ＢＣ８の量によって、対象の体重の１キログラム当たりの５．０μＣｉを下回る放射線量が送達される場合）。
本開示の態様によれば、225Ａｃ標識ＢＣ８の有効量は、４．５μＣｉ／ｋｇ、４．０μＣｉ／ｋｇ、３．５μＣｉ／ｋｇ、３．０μＣｉ／ｋｇ、２．５μＣｉ／ｋｇ、２．０μＣｉ／ｋｇ、１．５μＣｉ／ｋｇ、１．０μＣｉ／ｋｇ、０．９μＣｉ／ｋｇ、０．８μＣｉ／ｋｇ、０．７μＣｉ／ｋｇ、０．６μＣｉ／ｋｇ、０．５μＣｉ／ｋｇ、０．４μＣｉ／ｋｇ、０．３μＣｉ／ｋｇ、０．２μＣｉ／ｋｇ、０．１μＣｉ／ｋｇ、０．０５μＣｉ／ｋｇまたは０．０１μＣｉ／ｋｇを下回る。ある特定の態様によれば、225Ａｃ標識ＢＣ８の有効量は、少なくとも０．０１μＣｉ／ｋｇ、または０．０５μＣｉ／ｋｇ、０．１μＣｉ／ｋｇ、０．２μＣｉ／ｋｇ、０．３μＣｉ／ｋｇ、０．４μＣｉ／ｋｇ、０．５μＣｉ／ｋｇ、０．６μＣｉ／ｋｇ、０．７μＣｉ／ｋｇ、０．８μＣｉ／ｋｇ、０．９μＣｉ／ｋｇ、１μＣｉ／ｋｇ、１．５μＣｉ／ｋｇ、２μＣｉ／ｋｇ、２．５μＣｉ／ｋｇ、３μＣｉ／ｋｇ、３．５μＣｉ／ｋｇ、４μＣｉ／ｋｇもしくは４．５μＣｉ／ｋｇである。ある特定の態様によれば、225Ａｃ標識ＢＣ８は、本明細書に記載される通りの上限および下限のいずれの組合せも含む線量、例えば、少なくとも０．１μＣｉ／ｋｇ～５μＣｉ／ｋｇ未満、または少なくとも０．５μＣｉ／ｋｇ～３μＣｉ／ｋｇ未満で投与されてもよい。
ある特定の態様によれば、225Ａｃ標識ＢＣ８の有効量は、１．０ｍＣｉを下回り、例えば０．５ｍＣｉを下回る（すなわち、225Ａｃは、非質量ベース線量で対象に投与される）。ある特定の態様によれば、225Ａｃ標識ＢＣ８の有効線量は、１．０ｍＣｉを下回ってもよく、例えば、０．９ｍＣｉ、０．８ｍＣｉ、０．７ｍＣｉ、０．６ｍＣｉ、０．５ｍＣｉ、０．４５ｍＣｉ、０．４ｍＣｉ、０．３５ｍＣｉ、０．３ｍＣｉ、０．２５ｍＣｉ、０．２ｍＣｉ、０．１ｍＣｉ、９０μＣｉ、８０μＣｉ、７０μＣｉ、６０μＣｉ、５０μＣｉ、４０μＣｉ、３０μＣｉ、２０μＣｉ、１０μＣｉまたは５μＣｉを下回ってもよい。225Ａｃ標識ＢＣ８の有効量は、少なくとも２μＣｉであってもよく、例えば、少なくとも５μＣｉ、１０μＣｉ、２０μＣｉ、３０μＣｉ、４０μＣｉ、５０μＣｉ、６０μＣｉ、７０μＣｉ、８０μＣｉ、９０μＣｉ、１００μＣｉ、１２０μＣｉ、１４０μＣｉ、１６０μＣｉ、１８０μＣｉ、２００μＣｉ、３００μＣｉ、４００μＣｉ、５００μＣｉ、６００μＣｉ、７００μＣｉ、８００μＣｉまたは９００μＣｉであってもよい。ある特定の態様によれば、225Ａｃ標識ＢＣ８は、本明細書に記載される通りの上限および下限のいずれの組合せも含む線量、例えば、少なくとも１５μＣｉ～１２０μＣｉ未満、または少なくとも２０μＣｉ～１００μＣｉ未満、または８０μＣｉ～５００μＣｉ未満で投与されてもよい。ある特定の態様によれば、225Ａｃ標識ＢＣ８は、低線量で投与されてもよい。例示的な低線量は、１５０μＣｉ未満、例えば、１０μＣｉ～１００μＣｉである225Ａｃ－ＢＣ８の線量、または２μＣｉ／ｋｇ未満、例えば、０．０１μＣｉ／ｋｇ～１．５μＣｉ／ｋｇ、もしくは０．１μＣｉ／ｋｇ～１．０μＣｉ／ｋｇの線量であってもよい。
本開示のある特定の態様によれば、放射能標識抗ＣＤ４５抗体は、ルテチウム－１７７標識ＢＣ８（177Ｌｕ標識ＢＣ８）であり、177Ｌｕ標識ＢＣ８の有効量は、例えば、５００μＣｉ／ｋｇを下回る（すなわち、対象に投与される177Ｌｕ－ＢＣ８の量によって、対象の体重の1キログラム当たりの５００μＣｉを下回る放射線量が送達される場合）。
本開示の態様によれば、177Ｌｕ標識ＢＣ８の有効量は、４５０μＣｉ／ｋｇ、４００μＣｉ／ｋｇ、３５０μＣｉ／ｋｇ、３００μＣｉ／ｋｇ、２５０μＣｉ／ｋｇ、２００μＣｉ／ｋｇ、１５０μＣｉ／ｋｇ、１００μＣｉ／ｋｇ、９０μＣｉ／ｋｇ、８０μＣｉ／ｋｇ、７０μＣｉ／ｋｇ、６０μＣｉ／ｋｇ、５０μＣｉ／ｋｇ、４０μＣｉ／ｋｇ、３０μＣｉ／ｋｇ、２０μＣｉ／ｋｇ、１０μＣｉ／ｋｇ、５μＣｉ／ｋｇまたは１μＣｉ／ｋｇを下回る。ある特定の態様によれば、177Ｌｕ標識ＢＣ８の有効量は、少なくとも１μＣｉ／ｋｇ、２．５μＣｉ／ｋｇ、５μＣｉ／ｋｇ、１０μＣｉ／ｋｇ、２０μＣｉ／ｋｇ、３０μＣｉ／ｋｇ、４０μＣｉ／ｋｇ、５０μＣｉ／ｋｇ、６０μＣｉ／ｋｇ、７０μＣｉ／ｋｇ、８０μＣｉ／ｋｇ、９０μＣｉ／ｋｇ、１００μＣｉ／ｋｇ、１５０μＣｉ／ｋｇ、２００μＣｉ／ｋｇ、２５０μＣｉ／ｋｇ、３００μＣｉ／ｋｇ、３５０μＣｉ／ｋｇ、４００μＣｉ／ｋｇまたは４５０μＣｉ／ｋｇである。ある特定の態様によれば、177Ｌｕ標識ＢＣ８は、本明細書に記載される通りの上限および下限のいずれの組合せも含む線量、例えば、少なくとも５μＣｉ／ｋｇ～５０μＣｉ／ｋｇ未満、または少なくとも５０μＣｉ／ｋｇ～５００μＣｉ／ｋｇ未満で投与されてもよい。
ある特定の態様によれば、177Ｌｕ標識ＢＣ８の有効量は、２０ｍＣｉを下回り、例えば、１５ｍＣｉ、１０ｍＣｉ、９ｍＣｉ、８ｍＣｉ、７ｍＣｉ、６ｍＣｉ、５ｍＣｉ、３ｍＣｉ、２ｍＣｉ、１ｍＣｉ、８００μＣｉ、６００μＣｉ、４００μＣｉ、２００μＣｉ、１００μＣｉまたは５０μＣｉを下回る。177Ｌｕ標識ＢＣ８の有効量は、少なくとも１０μＣｉ、例えば、少なくとも２５μＣｉ、５０μＣｉ、１００μＣｉ、２００μＣｉ、３００μＣｉ、４００μＣｉ、５００μＣｉ、６００μＣｉ、７００μＣｉ、８００μＣｉ、９００μＣｉ、１ｍＣｉ、２ｍＣｉ、３ｍＣｉ、４ｍＣｉ、５ｍＣｉ、１０ｍＣｉまたは１５ｍＣｉであってもよい。ある特定の態様によれば、177Ｌｕ標識ＢＣ８は、本明細書に記載される通りの上限および下限のいずれの組合せも含む線量、例えば、少なくとも１０μＣｉ～２０ｍＣｉ未満、または少なくとも１００μＣｉ～３ｍＣｉ未満、または３ｍＣｉ～２０ｍＣｉ未満で投与されてもよい。
本明細書において使用される場合、対象に放射能標識抗ＣＤ４５抗体を投与した後から、対象に対して追加的な治療を行う前の「適切な時間期間」は、投与された抗体が、対象の標的細胞、例えば、対象のＨＳＣおよび／またはリンパ球を枯渇させるか、可逆的に抑制するか、またはアブレーションすることを可能にするために十分な時間期間である。ある特定の態様によれば、適切な時間期間は、１５日間未満、１４日間未満、１３日間未満、１２日間未満、１１日間未満、１０日間未満、９日間未満、８日間未満、７日間未満、６日間未満、５日間未満、４日間未満、または３日間未満である。ある特定の態様によれば、適切な時間期間は、１日間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、８日間、９日間、１０日間、１１日間、１２日間、１３日間、１４日間、１５日間、または１５日間超である。
ある特定の態様によれば、ＡＣＴ手法が実施され得る放射能標識抗ＣＤ４５抗体を投与した後の適切な時間期間は、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、８日間または９日間、例えば、好ましくは、６日間、７日間または８日間である。
本出願にわたって、様々な刊行物が引用される。これらの刊行物の開示は、本開示が関係する当業技術をより完全に記載するために、本出願に参照により本明細書に組み込まれる。特に定義されない限り、本明細書において使用される全ての専門用語および科学用語は、本開示が属する当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に記載されるものと同様または同等の方法および材料を本明細書に記載される実施または試験において使用することができるが、適切な方法および材料は以下に記載される。
発明の詳細な説明
本開示は、対象における特異的細胞、例えば、対象の造血幹細胞またはリンパ球を枯渇させるか、可逆的に免疫抑制するか、またはアブレーションするための予想外に優れた方法を提供することによって、本技術分野において満たされていない必要性を解決するものである。これらの細胞の可逆的免疫抑制は、ＣＤ４５陽性血液学的悪性疾患の処置において有用である可能性があり、亜飽和放射線量における抗ＣＤ４５抗体の投与などの低線量治療薬を使用して達成され得る。
放射能標識抗ＣＤ４５抗体は、骨髄移植の前の標的骨髄破壊的前処置の臨床的可能性を示した。ＣＤ４５は、造血幹細胞、リンパ系細胞および骨髄細胞を含む全ての有核免疫細胞内で高発現するので、前処置のための魅力的な標的である。効力のあるアルファ放射体２２５アクチニウム（225Ａｃ）は、標的前処置のための有望な放射性核種であり、短い経路長にわたる線エネルギー付与が高く（８０～１００ｋｅＶ／μｍ）、半減期が９．９日間と長い。
その上、高線量治療薬、すなわち、より高い放射線量を使用したこれらの細胞の枯渇またはアブレーションは、骨髄移植および／または養子細胞治療（例えば、キメラ抗原受容体治療、ＣＡＲ Ｔ細胞治療またはＴＣＲ細胞治療）または遺伝子編集細胞ベース治療（例えば、鎌状赤血球症（ＳＣＤ）のための遺伝子編集β－グロビン造血幹細胞治療）などの細胞ベース治療に対する先行モデルである可能性がある。
したがって、本開示は、対象における特異的細胞を枯渇させるか、可逆的に免疫抑制するか、またはアブレーションするために、225Ａｃ－ＢＣ８などの放射能標識抗ＣＤ４５抗体を用いる。前記抗体は、標的前処置を介して対象の造血幹細胞またはリンパ球を安全かつ効果的に枯渇させるか、またはアブレーションすることが可能である。このアプローチによって、化学療法薬または外部ビーム放射などの、より特異的でない剤によって引き起こされる、ある特定の副作用が回避される。
本開示は、とりわけ、造血系統における細胞型の疾患、がん、自己免疫疾患、代謝障害および幹細胞障害などの様々な障害を処置する方法を提供する。本明細書に記載される組成物および方法は、（ｉ）がん細胞（例えば、白血病細胞）および自己免疫細胞（例えば、自己反応性Ｔ細胞）の集団など、病状を生じる細胞の集団を直接枯渇させるか、もしくはアブレーションすること、および／または（ｉｉ）移植細胞が戻り得るニッチを提供することによって移植造血幹細胞の移植を促進するように内因性造血幹細胞の集団を枯渇させるか、もしくはアブレーションすることが可能である。
上記の活性は、225Ａｃ－ＢＣ８または177Ｌｕ－ＢＣ８を含む組成物の投与によって達成され得る。疾患の直接処置の場合、この投与は、目的の病状を生じる細胞の量の減少を引き起こす可能性がある。造血幹細胞移植治療のための罹患体を準備する場合、この投与は、内因性造血幹細胞の集団の選択的な枯渇、可逆的抑制またはアブレーションを引き起こす可能性があり、それによって、移植された外因性造血幹細胞、すなわち、骨髄移植または養子細胞移入によって続いて充填され得る、骨髄またはリンパ球などの造血組織内に空孔が生じる。
放射能標識免疫治療薬
本開示の態様によれば、抗ＣＤ４５イムノグロブリンＢＣ８は、225Ａｃまたは177Ｌｕを含んでもよい。ある特定の好ましい態様によれば、抗ＣＤ４５イムノグロブリンＢＣ８は、アルファ線放射性核種アクチニウム２２５（225Ａｃ）で放射能標識されてもよい。モノクローナル抗体ＢＣ８にコンジュゲートされる225Ａｃ負荷量によって、直接（１つまたは複数の）標的細胞に高エネルギーアルファ粒子が送達され、それによって致死的な二本鎖ＤＮＡ切断が生じる。その短い経路長のため、その高エネルギーアルファ粒子放射の範囲は、小さな細胞径の厚さだけであり、それによって近くの非悪性組織または正常組織の損傷が限定される。よって、225Ａｃ－ＢＣ８は、177Ｌｕ－ＢＣ８よりも少ない放熱量で、治療有効線量を提供することができる。
さらに、225Ａｃ抗体コンジュゲートは、低標的抗原発現腫瘍を有する罹患体においても有効であることが見出されているので、従来技術の抗体－薬物コンジュゲートを超える重要な長所を提供する。このことは225Ａｃの大きい細胞毒性効果のためであるが、それは、何百もの抗体分子が標的細胞または標的組織に対する効果を発揮するためにそれらのそれぞれの抗原に結合することが必要である抗体－薬物コンジュゲートとは著しい対照をなす。
薬物または毒素を超える放射性負荷量の他の長所としては、１）放射線を送達する抗体が細胞を死滅させるために内在化される必要はないということ、２）抗体が標的組織または標的腫瘍内における全ての細胞を標的とする必要はないということ、および３）抗体－薬物コンジュゲートとは対照的に、抗体に連結される放射性同位体が後続の使用を限定する著しい免疫応答を誘発する可能性が低いということ、が挙げられる。その上、本明細書において報告される研究は、225Ａｃ標識抗体の安定性と、それらの高標的細胞傷害性とを示している。
本開示のある特定の態様によれば、225Ａｃは、モノクローナル抗体にコンジュゲートされるキレート剤によって付加されてもよいか、またはキレート化されてもよい。以下の実施例３で詳細に記載されるように、抗ＣＤ４５イムノグロブリンは、まずキレート剤コンジュゲート抗ＣＤ４５（「コンジュゲート抗ＣＤ４５」）を形成し、次いでコンジュゲート抗ＣＤ４５で放射性核種をキレート化して放射能標識抗ＣＤ４５（すなわち、225Ａｃ－ＢＣ８）を形成することによって調製されてもよい。
本明細書に記載される放射能標識抗ＣＤ４５を形成する方法によれば、キレート剤を含む緩衝溶液中に、ＣＤ４５に対するモノクローナル抗体を溶解してもよい。ｐＨは、コンジュゲーション反応混合物中における抗体とのキレート剤のコンジュゲーションのための条件を最適化するために選択されてもよい。コンジュゲーション反応混合物は、重炭酸塩緩衝液またはリン酸緩衝液を含んでもよい。コンジュゲーション反応混合物は、ｐＨが約８．０～約９．２であってもよい。例えば、コンジュゲーション反応混合物は、ｐＨが約８．０、約８．１、約８．３、約８．４、約８．５、約８．６、約８．７、約８．８、約８．９、約９．０、約９．１または約９．２であってもよい。コンジュゲーション反応混合物の温度は、標的部分とのキレート剤のコンジュゲーションを促進するために調整されてもよい。例えば、コンジュゲーション反応混合物は、およそ室温または約３７℃の温度でインキュベートされ得る。コンジュゲーション反応混合物は、例えば約１．５時間など、コンジュゲーションを提供するために十分な任意の時間、インキュベートされてもよい。
コンジュゲート抗ＣＤ４５は、放射性核種を含む緩衝溶液中に溶解されてもよい。ｐＨは、キレート化反応混合物中におけるコンジュゲート抗ＣＤ４５による放射性核種のキレート化のための条件を最適化するために選択されてもよい。キレート化反応混合物は、ｐＨが約５．５～約７．０であってもよい。例えば、キレート化反応混合物は、ｐＨが、約５．５、約５．６、約５．７、約５．８、約５．９、約６．０、約６．１、約６．２、約６．３、約６．４、約６．５、約６．６、約６．７、約６．８、約６．９または約７．０であってもよい。
キレート化反応混合物の温度は、コンジュゲート抗ＣＤ４５イムノグロブリンによる放射性核種のキレート化を促進するために調整されてもよい。例えば、キレート化反応混合物は、約３７℃の温度でインキュベートされてもよい。キレート化反応混合物は、約１．５時間インキュベートされてもよい。しばらくして、反応抑制キレート化合物（例えばジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＤＴＰＡ））の添加によって溶液を反応抑制してもよく、反応混合物を精製してもよい。反応抑制キレート化合物の添加後、例えば、反応抑制キレート化合物の添加後に約３７℃で約３０分間、キレート化反応混合物をさらにインキュベートしてもよい。
本開示において有用なキレート剤は、金属イオンを隔離することに加えて、抗体などの生物学的担体に共有結合する能力の二重の機能性を有する化合物である。本技術分野において多くのキレート剤が知られている。本開示における使用のために適切な、例示的なキレート剤としては、Ｓ－２－（４－イソチオシアナトベンジル）－１，４，７，１０テトラアザシクロドデカンテトラ酢酸（ｐ－ＳＣＮ－Ｂｎ－ＤＯＴＡ）、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）；エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）；１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’’’－四酢酸（ＤＯＴＡ）；ｐ－イソチオシアナト－ベンジル－１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－四酢酸（ｐ－ＳＣＮ－Ｂｚ－ＤＯＴＡ）；１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’－三酢酸（ＤＯ３Ａ）；１，４，７，１０－テトラアザシクロ－ドデカン－１，４，７，１０－テトラキス（２－プロピオン酸）（ＤＯＴＭＡ）；３，６，９－トリアザ－１２－オキサ－３，６，９－トリカルボキシメチレン－１０－カルボキシ－１３－フェニル－トリデカン酸（「Ｂ－１９０３６」）；１，４，７－トリアザシクロノナン－Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’－三酢酸（ＮＯＴＡ）；１，４，８，１１－テトラアザシクロテトラデカン－Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’’’－四酢酸（ＴＥＴＡ）；トリエチレンテトラアミン六酢酸（ＴＴＨＡ）；トランス－１，２－ジアミノヘキサン四酢酸（ＣＹＤＴＡ）；１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１－（２－ヒドロキシプロピル）－４，７，１０－三酢酸（ＨＰ－ＤＯ３Ａ）；トランスシクロヘキサンジアミン四酢酸（ＣＤＴＡ）；トランス（１，２）－シクロヘキサンジエチレントリアミン五酢酸（ｔｒａｎｓ（１，２）－ｃｙｃｌｏｈｅｘａｎｅ ｄｉｅｔｙｌｅｎｅ ｔｒｉａｍｉｎｅ ｐｅｎｔａａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ）（ＣＤＴＰＡ）；１－オキサ－４，７，１０－トリアザシクロドデカン－Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’－三酢酸（ＯＴＴＡ）；１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－テトラキス｛３－（４－カルボキシル）－ブタン酸｝；１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－テトラキス（酢酸－メチルアミド）；１，４，７，１０－テトラアザシクロ－ドデカン－１，４，７，１０－テトラキス（メチレンホスホン酸）；およびそれら誘導体などのキレート剤が挙げられるが、それらに限定されるものではない。
コンジュゲーション反応混合物の他の成分からコンジュゲートＣＤ４５を、またはキレート化反応混合物の他の成分から放射能標識抗ＣＤ４５を分離するために、１つまたは複数のステップを使用してもよい。例えば、濾過装置を通した反応混合物の濾過によってそれぞれの反応混合物の他の成分からコンジュゲート抗ＣＤ４５または放射能標識抗ＣＤ４５を分離することができるように、反応混合物を特定の分子量カットオフを有する濾過装置（例えば、ミリポア遠心装置）に移すことができる。濾過は、純度が少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または少なくとも約９９．５％のコンジュゲート抗ＣＤ４５または放射能標識抗ＣＤ４５を得るために使用され得る。
本開示のある特定の態様によれば、分離（例えば、精製）からのコンジュゲート抗ＣＤ４５イムノグロブリンまたは放射能標識抗ＣＤ４５イムノグロブリンの収率は、最終産物の少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、または少なくとも約９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％である。
本開示の一態様によれば、まず、ｐ－ＳＣＮ－Ｂｎ－ＤＯＴＡまたはＤＯＴＡキレート剤でモノクローナル抗体をコンジュゲートしてコンジュゲート抗ＣＤ４５イムノグロブリンを形成した後、コンジュゲート抗ＣＤ４５イムノグロブリンにおけるｐ－ＳＣＮ－Ｂｎ－ＤＯＴＡまたはＤＯＴＡによって225Ａｃのキレート化を行って放射能標識抗ＣＤ４５イムノグロブリンを形成してもよい。したがって、本開示の態様によれば、抗ＣＤ４５イムノグロブリンを標識するために225Ａｃを含む単一のステップだけが必要とされる。
本開示のある特定の態様によれば、放射能標識抗ＣＤ４５イムノグロブリン225Ａｃ－ＢＣ８は、比較的安定している。例えば、225Ａｃ－ＢＣ８の８５％超が、４℃で２４時間保存した後、無傷のままである可能性がある（図１１参照）。その上、225Ａｃ－ＢＣ８は、ＣＤ４５発現細胞（図１２、１５Ａ、１５Ｂを参照）およびＣＤ４５発現組織（図１６Ａ参照）に対する特異性を示す。225Ａｃ－ＢＣ８の標識効率性、安定性および免疫反応性は、合わさって有効な治療剤を提供する。
177Ｌｕ－ＤＯＴＡ－ＢＣ８を提供するためのルテチウム－１７７（177Ｌｕ）による放射能標識も可能であり、本開示の範囲内である。その上、225Ａｃ－ＢＣ８または177Ｌｕ－ＢＣ８に対する参照は、特に示されない限り、それぞれ、225Ａｃ－ＤＯＴＡ－ＢＣ８または177Ｌｕ－ＤＯＴＡ－ＢＣ８のいずれかの参照を含んでもよい。
標的細胞を枯渇させるか、またはアブレーションするための方法
本開示は、対象の造血幹細胞を枯渇させるか、可逆的に抑制するか、またはアブレーションするための方法であって、有効量の放射能標識抗ＣＤ４５イムノグロブリン、例えば、225Ａｃ－ＢＣ８を対象に投与することを含む方法を提供する。本開示は、対象のリンパ球を枯渇させるための方法であって、225Ａｃ－ＢＣ８などの有効量の放射能標識抗ＣＤ４５イムノグロブリンを対象に投与することを含む方法を提供する。本開示は、対象の造血がん芽球を枯渇させるか、減少させるか、または除去するための方法であって、225Ａｃ－ＢＣ８などの有効量の放射能標識抗ＣＤ４５イムノグロブリンを単剤治療として単独で、または他の治療と併用して対象に投与することを含む方法を提供する。
この方法のある特定の態様によれば、225Ａｃ－ＢＣ８の有効量は、対象の体重の０．０５μＣｉ／ｋｇ～５．０μＣｉ／ｋｇである。有効量の例としては、限定されるものではないが、０．０５μＣｉ／ｋｇ～５．０μＣｉ／ｋｇ、例えば、０．１μＣｉ／ｋｇ～０．２μＣｉ／ｋｇ、０．２μＣｉ／ｋｇ～０．３μＣｉ／ｋｇ、０．３μＣｉ／ｋｇ～０．４μＣｉ／ｋｇ、０．４μＣｉ／ｋｇ～０．５μＣｉ／ｋｇ、０．５μＣｉ／ｋｇ～０．６μＣｉ／ｋｇ、０．６μＣｉ／ｋｇ～０．７μＣｉ／ｋｇ、０．７μＣｉ／ｋｇ～０．８μＣｉ／ｋｇ、０．８μＣｉ／ｋｇ～０．９μＣｉ／ｋｇ、０．９μＣｉ／ｋｇ～１．０μＣｉ／ｋｇ、１．０μＣｉ／ｋｇ～１．５μＣｉ／ｋｇ、１．５μＣｉ／ｋｇ～２．０μＣｉ／ｋｇ、２．０μＣｉ／ｋｇ～２．５μＣｉ／ｋｇ、２．５μＣｉ／ｋｇ～３．０μＣｉ／ｋｇ、３．０μＣｉ／ｋｇ～３．５μＣｉ／ｋｇ、３．５μＣｉ／ｋｇ～４．０μＣｉ／ｋｇ、４．０μＣｉ／ｋｇ～４．５μＣｉ／ｋｇ、または４．５μＣｉ／ｋｇ～５．０μＣｉ／ｋｇが挙げられる。
この方法のある特定の態様によれば、225Ａｃ－ＢＣ８の有効量は、１ｍＣｉ未満、例えば、５００μＣｉ未満である。有効量の例としては、１μＣｉ～５００μＣｉ、例えば、１０μＣｉ～４００μＣｉ、または１０μＣｉ～３００μＣｉ、１０μＣｉ～２００μＣｉ、１０μＣｉ～１００μＣｉ、１５μＣｉ～７５μＣｉ、２０μＣｉ～７５μＣｉ、１０μＣｉ～５０μＣｉ、５０μＣｉ～１００μＣｉ、１００μＣｉ～１５０μＣｉ、１５０μＣｉ～２００μＣｉ、２００μＣｉ～２５０μＣｉ、２５０μＣｉ～３００μＣｉ、３００μＣｉ～３５０μＣｉ、３５０μＣｉ～４００μＣｉ、４００μＣｉ～４５０μＣｉ、または４５０μＣｉ～５００μＣｉが挙げられるが、それらに限定されるものではない。
例示的な低線量は、１２０μＣｉ未満、例えば、１０μＣｉ～１００μＣｉである225Ａｃ－ＢＣ８の低線量、または２μＣｉ／ｋｇ未満、例えば、０．０１μＣｉ／ｋｇ～１．５μＣｉ／ｋｇ、もしくは０．１μＣｉ／ｋｇ～１．０μＣｉ／ｋｇの線量であってもよい。
225Ａｃ－ＢＣ８の例示的な高線量は、少なくとも１２０μＣｉ、例えば、１２０μＣｉ～５００μＣｉの中線量～高線量、または少なくとも２μＣｉ／ｋｇ、例えば、２μＣｉ／ｋｇ～５μＣｉ／ｋｇ、もしくは３μＣｉ／ｋｇ～５μＣｉ／ｋｇの線量であってもよい。
この方法のある特定の態様によれば、225Ａｃ－ＢＣ８の有効量は、対象の造血幹細胞またはリンパ球を枯渇させるために有効な量、例えば、対象の造血幹細胞の少なくとも２５％、または対象の造血幹細胞の少なくとも５０％、または対象の造血幹細胞の少なくとも７０％、または対象の造血幹細胞の少なくとも８０％、または対象の造血幹細胞の最高９０％を枯渇させるために情動的な（ａｆｆｅｃｔｉｖｅ）量である。
この方法のある特定の態様によれば、225Ａｃ－ＢＣ８の有効量は、対象の造血幹細胞またはリンパ球を完全にアブレーションすることなく、対象の造血幹細胞またはリンパ球、例えば、対象の造血幹細胞の少なくとも９０％、または対象の造血幹細胞の少なくとも９２％、もしくは少なくとも９４％、もしくは少なくとも９６％、もしくは最高９８％を可逆的に免疫抑制するために有効な量である。
この方法のある特定の態様によれば、225Ａｃ－ＢＣ８の有効量は、骨髄破壊なしで、対象の循環腫瘍細胞、例えば、造血幹細胞またはリンパ球、例えば、対象の造血幹細胞もしくはリンパ球の少なくとも２５％を枯渇させるために情動的な量、または対象の造血幹細胞もしくはリンパ球の少なくとも５０％、または対象の造血幹細胞もしくはリンパ球の少なくとも７０％、または対象の造血幹細胞もしくはリンパ球の少なくとも８０％、または対象の造血幹細胞もしくはリンパ球の最高９０％を枯渇させるために有効な量である。ある特定の態様によれば、この量は、225Ａｃ－ＢＣ８の低線量、例えば、１５０μＣｉ未満または１２０μＣｉ未満、例えば、１０μＣｉ～１００μＣｉ、または２μＣｉ／ｋｇ未満、例えば、０．０１μＣｉ／ｋｇ～１．５μＣｉ／ｋｇ、もしくは０．１μＣｉ／ｋｇ～１．０μＣｉ／ｋｇの線量であってもよい。この線量は、単独で投与されてもよく、または以下に開示される通りのさらに追加的な治療薬と共に投与されてもよい。
この方法のある特定の態様によれば、225Ａｃ－ＢＣ８の有効量は、単一剤として、または他の治療と併用して、罹患体の造血がん芽球を２５％、５０％または１００％枯渇させるか、減少させるか、または除去するために有効な量である。罹患体のがん芽球を枯渇させるか、減少させるか、または除去するのに有効な線量によって、投与される線量に依存して幹細胞担体が必要となる可能性がある。
そのような細胞を枯渇させるか、もしくは可逆的に抑制した際、またはその完全なアブレーションの後、幹細胞担体を罹患体に提供してもよい。例えば、高がん細胞負荷の罹患体の処置によって、より高い線量の放射能標識抗ＣＤ４５抗体が必要とされる可能性があり、したがって、罹患体の造血幹細胞の著しい割合の枯渇または抑制が生じる可能性がある。そのような場合、幹細胞担体がそれらの細胞の再増殖を生じさせることが必要である可能性がある。ある特定の態様によれば、幹細胞担体を必要としない可能性があり、十分な量の造血幹細胞が存在する可能性があり、再増殖することができる可能性がある。
この方法のある特定の態様によれば、225Ａｃ－ＢＣ８の有効量は、対象の造血幹細胞の１００％をアブレーションする（骨髄破壊とも称される）ために有効な量である。例示的な線量としては、少なくとも高線量として本明細書に示されるものが挙げられる。
前記方法は、概して、単一罹患体特異的線量などの単一線量の有効量の225Ａｃ－ＢＣ８を対象に投与することを含む。リンパ球または造血幹細胞の減少量は、上記で本明細書に開示される方法のいずれかによって決定されてもよい。225Ａｃ－ＢＣ８の線量は、所望される枯渇または免疫抑制の量に依存してもよい。例えば、造血幹細胞の枯渇は、225Ａｃ－ＢＣ８の２Ｇｙ未満などの低線量で達成されてもよい。造血幹細胞の可逆的免疫抑制は、225Ａｃ－ＢＣ８の８Ｇｙ未満の線量、例えば、２Ｇｙ～８Ｇｙの線量で達成されてもよく、アブレーションは、225Ａｃ－ＢＣ８の８Ｇｙ以上などの高線量、例えば、約１０～１２Ｇｙで達成されてもよい。
前記方法は、単一罹患体特異的線量の部分の複数の投与または複数の単一罹患体特異的線量の投与などの分割線量で、有効量の225Ａｃ－ＢＣ８を対象に投与することをさらに含んでもよい。第２の剤と共に投与される場合、225Ａｃ－ＢＣ８の線量は、所望される枯渇または免疫抑制の量に依存してもよい。
非悪性血液疾患を処置するための方法
この枯渇方法（本明細書において前処置方法とも称される）は、例えば、造血幹細胞の枯渇が望ましい後続の遺伝子編集細胞ベース治療の転帰を向上させるために有用であり得る。この方法のある特定の態様によれば、対象は、遺伝子編集細胞治療を介して処置可能な非癌性障害に罹患しており、前記障害を処置するためにそのような治療を受けてようとしているところである。本開示は、遺伝子的編集細胞治療を介して処置可能な非癌性障害に罹患した対象を処置するための方法であって、（ｉ）対象の造血幹細胞を枯渇させるために有効な量の放射能標識抗ＣＤ４５抗体を対象に投与すること、および（ｉｉ）適切な時間期間の後、対象における治療を行って対象の障害を処置することを含む方法も提供する。
非癌性障害の例としては、限定されるものではないが、異常ヘモグロビン症（例えば、ＳＣＤおよびβ－サラセミア）、先天性免疫不全（例えば、ＳＣＩＤおよびファンコニ貧血）およびウイルス感染症（例えば、ＨＩＶ感染症）が挙げられる。ある特定の態様によれば、前記障害はＳＣＤであり、前記治療は、遺伝子編集β－グロビン造血幹細胞治療である。幹細胞治療は、例えば、同種異系または自己由来であり得る。ある特定の態様によれば、前記障害はＳＣＩＤであり、前記治療は、編集遺伝子が一般的ガンマ鎖（γｃ）遺伝子、アデノシンデアミナーゼ（ＡＤＡ）遺伝子および／またはヤヌスキナーゼ３（ＪＡＫ３）遺伝子である遺伝子編集造血幹細胞治療である。幹細胞治療は、例えば、同種異系または自己由来であり得る。
対象方法のある特定の好ましい態様によれば、放射能標識抗ＣＤ４５抗体は、225Ａｃ－ＢＣ８などの放射能標識ＢＣ８である。225Ａｃ－ＢＣ８の有効量は、対象の造血幹細胞を欠乏させるか、可逆的に抑制するか、またはアブレーションするために有効な（ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｔｏｏ）量であり、例えば、対象の質量の０．０１μＣｉ／ｋｇ～１．０μＣｉ／ｋｇ、１．０μＣｉ／ｋｇ～３．０μＣｉ／ｋｇ、３．０μＣｉ／ｋｇ～５．０μＣｉ／ｋｇ、または０．１μＣｉ／ｋｇ～５．０μＣｉ／ｋｇであり得る。ある特定の態様によれば、前記方法は、（ｉ）０．１μＣｉ／ｋｇ～５．０μＣｉ／ｋｇの225Ａｃ－ＢＣ８を対象に投与すること、および（ｉｉ）６日後、７日後または８日後に、対象に対する治療を行って、対象の障害を処置することを含む。ある特定の他の態様によれば、前記方法は、（ｉ）０．１μＣｉ／ｋｇ～１．０μＣｉ／ｋｇの225Ａｃ－ＢＣ８を対象に投与すること、および（ｉｉ）６日後、７日後または８日後に、対象に対する治療を行って、対象の障害を処置することを含む。さらに他の態様によれば、前記方法は、（ｉ）１．０μＣｉ／ｋｇ～３．０μＣｉ／ｋｇの225Ａｃ－ＢＣ８を対象に投与すること、および（ｉｉ）６日後、７日後または８日後に、対象に対する治療を行って、対象の障害を処置することを含む。さらに他の態様によれば、前記方法は、（ｉ）３．０μＣｉ／ｋｇ～５．０μＣｉ／ｋｇの225Ａｃ－ＢＣ８を対象に投与すること、および（ｉｉ）６日後、７日後または８日後に、対象に対する治療を行って、対象の障害を処置することを含む。
悪性血液疾患を処置するための方法
本開示は、悪性疾患または悪性障害、例えば、がんに罹患した対象を処置するための方法も提供する。前記方法は、対象のＨＳＣもしくはリンパ球または造血がん芽球を枯渇させるか、可逆的に抑制するか、またはアブレーションするために有効な量の放射能標識抗ＣＤ４５抗体を対象に投与することを概して含んでもよい。少なくとも１つの例示的な方法によれば、低線量の放射能標識抗ＣＤ４５抗体は、骨髄破壊なしで、造血幹細胞もしくはリンパ球および／または循環腫瘍細胞の数を減少させるか、または枯渇させるために投与される。前記線量は、本明細書に定義される通りの低線量であってもよい。
ある特定の態様によれば、前記方法は、幹細胞担体を投与することをさらに含んでもよい。ある特定の態様によれば、前記方法は、適切な時間期間の後、前処置治療を行うことをさらに含んでもよい。前処置治療は、骨髄移植などの造血幹細胞移植、または対象のがんを処置するための対象に対する養子細胞治療であってもよい。
この方法のある特定の態様によれば、前記対象は、がんに罹患しており、前記がんを処置するために養子細胞治療を受けようとしているところである。養子細胞治療は知られており、例えば、ＣＡＲ Ｔ細胞治療（例えば、自己由来細胞治療および同種異系細胞治療）が挙げられる。養子細胞治療は、対象におけるがんの退縮を促進する方法を提供し、概して、（ｉ）自己由来Ｔ細胞を回収すること（白血球搬出）、（ｉｉ）Ｔ細胞を拡大すること（培養）、（ｉｉｉ）非骨髄破壊的リンパ枯渇化学療法を対象に投与すること、および（ｉｖ）非骨髄破壊的リンパ枯渇化学療法を投与した後、拡大したＴ細胞を対象に投与することを含む。本開示の方法は、リンパ枯渇化学療法の代わりに、および／または拡大細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、樹状細胞など）の投与後に、放射能標識抗ＣＤ４５抗体を使用することを含む。抗ＣＤ４５抗体のこの後半の投与（すなわち、拡大細胞の投与後）は、自己由来幹細胞（ＨＳＣＴ）の移植、または第２の有効量もしくは有効な数の拡大細胞の投与の準備において使用されてもよい。
したがって、本開示は、血液学的悪性疾患などの増殖性疾患の処置のための方法であって、放射能標識抗ＣＤ４５抗体の投与および養子細胞治療を含む方法を提供する。養子細胞治療は、概して、放射能標識抗ＣＤ４５抗体によるリンパ枯渇の後の再注入（ＣＡＲ Ｔ細胞治療などの養子細胞治療）の前に編集される遺伝子であってもよい自己由来細胞のアフェレーシスを含む。別の場合、養子細胞治療を提供するために、リンパ枯渇の後に同種細胞を再注入してもよい。本開示の方法によれば、放射能標識抗ＣＤ４５抗体は、養子細胞治療の３～９日前、例えば、６～８日前に、単一線量として提供されてもよい。
この方法のある特定の態様によれば、放射能標識抗ＣＤ４５抗体は、上記で記載される通りの線量で提供される、上記で記載される通りの放射能標識ＢＣ８であり、ここで線量は、概して特異的放射性核種標識（例えば、225Ａｃ－ＢＣ８）に依存する。この方法のある特定の態様によれば、放射能標識抗ＣＤ４５抗体を投与した後の適切な時間期間は、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、８日間または９日間、例えば、好ましくは、６日間、７日間または８日間である。
ある特定の態様によれば、がんに罹患した対象を処置するための前記方法は、（ｉ）対象のリンパ球を枯渇させるために有効な単一線量の放射能標識抗ＣＤ４５抗体を対象に投与すること、および（ｉｉ）適切な時間期間（例えば、６日間、７日間または８日間）の後、対象に対する養子細胞治療を行って、対象のがんを処置することからなる。ある特定の態様によれば、がんに罹患した対象を処置するための前記方法は、（ｉ）対象のリンパ球を枯渇させるために有効な単一線量の放射能標識抗ＣＤ４５抗体を対象に投与すること、および（ｉｉ）適切な時間期間（例えば、６日間、７日間または８日間）の後、対象に対する養子細胞治療を行って、対象のがんを処置することからなる。
この方法のある特定の態様によれば、225Ａｃ－ＢＣ８の有効量は、対象の体重の０．０１μＣｉ／ｋｇ～５．０μＣｉ／ｋｇである。
ある特定の態様によれば、がんに罹患した対象を処置するための前記方法は、（ｉ）対象を骨髄抑制するために有効な単一線量の放射能標識抗ＣＤ４５抗体を対象に投与すること、および（ｉｉ）適切な時間期間（例えば、４日間、５日間、６日間、７日間または８日間）の後、対象に対する骨髄移植を行って、対象のがんを処置することからなる。ある特定の態様によれば、がんに罹患した対象を処置するための前記方法は、（ｉ）対象の骨髄球を枯渇させるために有効な単一線量の放射能標識抗ＣＤ４５抗体を対象に投与すること、および（ｉｉ）適切な時間期間（例えば、４日間、５日間、６日間、７日間または８日間）の後、対象に対する骨髄移植を行って、対象のがんを処置することからなる。
この方法のある特定の態様によれば、225Ａｃ－ＢＣ８の有効量は、低線量、例えば、１２０μＣｉ未満、例えば、１０μＣｉ～１００μＣｉの線量であるか、または２μＣｉ／ｋｇ未満、例えば、０．０１μＣｉ／ｋｇ～１．５μＣｉ／ｋｇ、もしくは０．１μＣｉ／ｋｇ～１．０μＣｉ／ｋｇの線量である。
追加的な治療剤
本開示の組成物および方法は、ある特定の追加的な治療剤と併用して使用されてもよい。例えば、追加的な免疫治療剤は、本明細書に開示される抗ＣＤ４５抗体組成物と併用して投与されてもよい。例示的な追加的な免疫治療剤としては、少なくともＣＤ３３および／またはＣＤ３８に対する抗体（例えば、その全体が本明細書における参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１９／０９４９３１号参照）、ならびに／またはＣＤ３４、ＣＤ１１７および／もしくはＣＤ１３５に対する抗体（例えば、米国仮特許出願第６２／８３８，６４６号および米国仮特許出願第６２／８３８，５８９号参照。それらの全体は、参照により本明細書に組み込まれる）が挙げられる。
本開示の組成物および方法は、開示される放射線免疫治療（例えば、225Ａｃ－ＢＣ８）の有効性を増強し得る放射線増感剤と併用して使用されてもよい。例えば、Ｂｃｌ－２阻害剤は、225Ａｃ－ＢＣ８によって提供されるものなどの放射線と併用して、多くのがん細胞系に対して活性であってもよい。追加的に、Ｂｃｌ－２タンパク質の小型分子阻害剤は、エトポシド、ドキソルビシン、シスプラチン、パクリタキセルおよび放射線が挙げられるが、それらに限定されものではない他の抗がん剤との相乗効果を示す。
アポトーシスを阻害することは、正常細胞からがん細胞への遷移における必要なステップとして広く受け入れられ、いくつかのがん治療は、このプロセスを逆転させることによってそれらの効果を発揮する。アポトーシスへの関与は、ミトコンドリア外膜の透過化、すなわち、Ｂｃｌ－２ファミリーの異なるメンバーの間の結合によって調節されるプロセスによって引き起こされる。さらに、Ｂｃｌ－２ファミリーメンバーは、それらが、異なる型の細胞死も引き起こすかまたは修飾する変性タンパク質応答および自己貪食などのプロセスを修飾する小胞体にも結合する。
Ｂｃｌ－２過剰発現は、最初に、ｔ（１４；１８）転位の結果として、ならびに急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）および非ホジキンリンパ腫における予後不良マーカーとして、濾胞性リンパ腫において記載された。Ｂｃｌ－２の過剰発現は、続いて、前立腺癌、乳癌および結腸癌ならびに神経膠芽細胞腫において記載された。Ｍｃｌ－１、すなわち、別の抗アポトーシスＢｃｌ－２関連タンパク質の過剰発現が再発ＡＭＬにおいて同定され、予後不良と関連した。がん細胞において同定されたＢｃｌ－２関連タンパク質発現の他の変化としては、Ｂａｘ遺伝子における異なる突然変異、および抗アポトーシスＢｃｌ－２タンパク質に対するアポトーシス促進性Ｂｃｌ－２タンパク質の比の変化が挙げられる。したがって、多くの場合、通常のアポトーシス機構における欠損のためにがん細胞がアポトーシスプログラムを実行することができないことは、放射線および／または免疫治療誘導アポトーシスに対する耐性の増加と関連する。
したがって、本開示の方法は、放射能標識抗ＣＤ４５抗体と相乗的な方法でがん細胞におけるアポトーシスを直接的または間接的に誘導するように作用してもよいＢｃｌ－２阻害剤などの放射線増感剤の追加を含んでもよい。Ｂｃｌ－２阻害剤としては、ＡＴ－１０１（（－）ゴシポール）、ＧＥＮＡＳＥＮＳＥ（登録商標）（Ｇ３１３９またはオブリメルセン；Ｂｃｌ－２標的アンチセンスオリゴヌクレオチド）、ＩＰＩ－１９４、ＩＰＩ－５６５、ＡＢＴ－７３７、ＡＢＴ－２６３、ＧＸ－０７０（オバトクラックス）および同種のものなどの小分子およびアンチセンスオリゴヌクレオチド薬物が挙げられる。
好ましい態様によれば、Ｂｃｌ－２阻害剤は、慢性リンパ性白血病（「ＣＬＬ」）を処置するために承認された薬物であるベネトクラックスであってもよい。ベネトクラックスは、ＢＣＬ－２のＢＨ３結合溝に結合し、それによってＢＩＭなどのアポトーシス促進タンパク質を置換して、ミトコンドリア外膜透過化（「ＭＯＭＰ」）、チトクロームｃの放出、およびカスパーゼ活性化を開始し、それによって、最終的に、プログラム化がん細胞死（すなわち、アポトーシス）が生じる。理想的には、アポトーシス促進刺激および抗アポトーシス刺激の間のバランスを変化させることによって、ベネトクラックスは、がん細胞のプログラム化細胞死を容易にし、したがって、罹患体の転帰を向上させる。
ある特定の態様によれば、本開示の放射線免疫治療（例えば、225Ａｃ－ＢＣ８）は、ＢＣＬ－２阻害剤および放射能標識抗ＣＤ４５抗体の量が、互いに共に投与される場合、がんを処置するために治療的に有効である、（ｉ）ＢＣＬ－２阻害剤を、（ｉｉ）放射能標識抗ＣＤ４５抗体（例えば、225Ａｃ－ＢＣ８）と共に対象に投与することを含む、がんに罹患した対象を処置するための方法を提供するために、ベネトクラックスなどのＢＣＬ－２阻害剤と併用して使用されてもよい。
本開示は、ベネトクラックスおよび225Ａｃ－ＢＣ８の量が、互いに共に投与される場合、急性骨髄性白血病を処置するために治療的に有効である、（ｉ）ベネトクラックスなどのＢＣＬ－２阻害剤を、（ｉｉ）225Ａｃ－ＢＣ８と共に対象に投与することを含む、血液疾患または血液障害に罹患したヒト対象を処置するための方法も提供する。
本明細書において、225Ａｃ－ＢＣ８などの放射能標識抗ＣＤ４５抗体「と共に」ＢＣＬ－２阻害剤を対象に投与することは、225Ａｃ－ＢＣ８の投与の前、間または後にＢＣＬ－２阻害剤を投与することを意味する。この投与としては、限定されるものではないが、以下のシナリオ、すなわち、（ｉ）最初にＢＣＬ－２阻害剤を投与し（例えば、２１日間、２８日間、３５日間、４２日間、４９日間、または処置しているがんが進行せず、かつＢＣＬ－２阻害剤が許容し得ない毒性を生じないより長い期間、１日１回、経口的に）、２番目に225Ａｃ－ＢＣ８を投与する（例えば、単回投与で、または複数の週の期間にわたって複数回の投与で、静脈内に）、（ｉｉ）ＢＣＬ－２阻害剤を225Ａｃ－ＢＣ８と同時に投与する（例えば、ＢＣＬ－２阻害剤を、ｎ日間、１日１回、経口投与し、225Ａｃ－ＢＣ８を、ＢＣＬ－２阻害剤レジメンのＤａｙ２～ｎ－１の内の１つにおいて、単回投与で、静脈内投与する）、（ｉｉｉ）ＢＣＬ－２阻害剤を225Ａｃ－ＢＣ８と同時に投与する（例えば、ＢＣＬ－２阻害剤を、１カ月を超える期間、経口投与し（例えば、３５日間、４２日間、４９日間、または処置しているがんが進行せず、かつＢＣＬ－２阻害剤が許容し得ない毒性を生じないより長い期間、１日１回、経口的に）、225Ａｃ－ＢＣ８を、ＢＣＬ－２阻害剤レジメンの最初の月の中の日に、単回投与で、静脈内投与する）、および（ｉｖ）最初に225Ａｃ－ＢＣ８を投与し（例えば、単回投与で、または複数の週の期間にわたる複数の投与で、静脈内に）、２番目にＢＣＬ－２阻害剤を投与する（例えば、２１日間、２８日間、３５日間、４２日間、４９日間、または処置しているがんが進行せず、かつＢＣＬ－２阻害剤が許容し得ない毒性を生じないより長い期間、１日１回、経口的に）、が挙げられる。
投与される放射能標識抗ＣＤ４５抗体の量は、罹患体における血液学的幹細胞を枯渇させるか、可逆的に免疫抑制するか、またはアブレーションするために十分であり得る。概して、放射能標識抗ＣＤ４５抗体の線量は、血液学的幹細胞を可逆的に免疫抑制し得る亜飽和線量である。
追加的な放射線増感剤としては、例えば、ボリノスタット、ベリノスタットおよびロミデプシンなどのヒストンデアセチラーゼ阻害剤（ＨＤＡＣｉ）；メトロニダゾール、ミソニダゾール、動脈内Ｂｕｄｒ、静脈内ヨウ化デオキシウリジン（ＩｕｄＲ）、ニトロイミダゾール、５－置換－４－ニトロイミダゾール、２Ｈ－イソインドールジオン、［［（２－ブロモエチル）－アミノ］メチル］－ニトロ－１Ｈ－イミダゾール－１－エタノール、ニトロアニリン誘導体、ＤＮＡ親和性低酸素選択的細胞毒、ハロゲン化ＤＮＡリガンド、１，２，４ベンゾトリアジンオキシド、２－ニトロイミダゾール誘導体、フッ素含有ニトロアゾール誘導体、ベンズアミド、ニコチンアミド、アクリジン－インターカレータ、５－チオトレトラゾール（５－ｔｈｉｏｔｒｅｔｒａｚｏｌｅ）誘導体、３－ニトロ－１，２，４－トリアゾール、４，５－ジニトロイミダゾール誘導体、ヒドロキシル化テキサフィリン（ｈｙｄｒｏｘｙｌａｔｅｄ ｔｅｘａｐｈｒｉｎｓ）、シスプラチン、マイトマイシン、チラパザミン（ｔｉｒｉｐａｚａｍｉｎｅ）、ニトロソ尿素、メルカプトプリン、メトトレキセート、フルオロウラシル、ブレオマイシン、ビンクリスチン、カルボプラチン、エピルビシン、ドキソルビシン、シクロホスファミド、ビンデシン、エトポシド、パクリタキセル、熱（温熱療法）および同種のものが挙げられる。
「ヒストンデアセチラーゼ阻害剤」または「ＨＤＡＣｉ」という用語は、４つのクラス、すなわち、ヒドロオキサメート（パノビノスタット（ＬＢＨ－５８９）、トリコスタチン－Ａ（ＴＳＡ）、ボリノスタット（ＳＡＨＡ）、ベリノスタット（ＰＸＤ１０１）、ＮＶＰ－ＬＡＱ８２４およびギビノスタット（ＩＴＦ２３５７））、環式ペプチド（ロミデプシン（デプシペプチド））、脂肪酸（バルプロン酸（ＶＰＡ）およびフェニル酪酸ナトリウム）およびベンズアミド（ＭＳ－２７５、ＭＧＣＤ０１０３）に組分けられ得るヒストンデアセチラーゼ阻害剤を指す。ＨＤＡＣｉは、クラスＩ特異的ＨＤＡＣ阻害剤（ＭＧＣＤ０１０３、ロミデプシンおよびＭＳ－２７５）として、またはクラスＩＨＤＡＣおよびクラスＩＩＨＤＡＣの両方に対する活性を示す汎ＨＤＡＣ阻害剤（ＴＳＡ、パノビノスタット、ボリノスタットおよびベリノスタット）として特徴付けられる。
ヒストンデアセチラーゼ阻害剤は、多くの場合、非ヒストンタンパク質のアセチル化によって、がん細胞において複数の細胞傷害作用を発揮することが認識される。ＨＤＡＣｉ致死性のいくつかのよく認識された機序としては、ＤＮＡの緩和および遺伝子転写の抑制解除に加えて、シャペロンタンパク質機能との干渉、フリーラジカル生成、ＤＮＡ損傷の誘導、細胞周期進行の内因性阻害剤の上方調節、およびアポトーシスの促進が挙げられる。興味深いことに、剤のこのクラスは、化学療法の後でＤＮＡ修復を停止させ、化学療法の有効性を促進することが分かっている形質転換細胞に対して比較的選択的である。
ある特定の態様によれば、本開示の放射線免疫治療（例えば、225Ａｃ－ＢＣ８）は、ＨＤＡＣｉおよび放射能標識抗ＣＤ４５抗体の量が、互いに共に投与される場合、がんを処置するために治療的に有効である、（ｉ）ＨＤＡＣｉを、（ｉｉ）放射能標識抗ＣＤ４５抗体（例えば、225Ａｃ－ＢＣ８）と共に対象に投与することを含む、がんに罹患した対象を処置するための方法を提供するために、ボリノスタット、ベリノスタットまたはロミデプシンなどのＨＤＡＣｉと併用して使用されてもよい。
本開示は、ＨＤＡＣｉおよび225Ａｃ－ＢＣ８の量が、互いに共に投与される場合、急性骨髄性白血病を処置するために治療的に有効である、（ｉ）ボリノスタット、ベリノスタットまたはロミデプシンなどのＨＤＡＣｉを、（ｉｉ）225Ａｃ－ＢＣ８と共に対象に投与することを含む、血液疾患または血液障害に罹患したヒト対象を処置するための方法も提供する。
ＢＣＬ－２阻害剤と同様に、225Ａｃ－ＢＣ８などの放射能標識抗ＣＤ４５抗体「と共に」ＨＤＡＣｉを対象に投与することは、225Ａｃ－ＢＣ８の投与の前、間または後にＨＤＡＣｉを投与することを意味する。この投与としては、限定されるものではないが、以下のシナリオ、すなわち、（ｉ）最初にＨＤＡＣｉを投与し（例えば、２１日間、２８日間、３５日間、４２日間、４９日間、もしくは処置しているがんが進行せず、かつＨＤＡＣｉが許容し得ない毒性を生じないより長い期間、１日１回、経口的に、または２８日サイクルのＤａｙ１、Ｄａｙ８、Ｄａｙ１５に、静脈内に）、２番目に225Ａｃ－ＢＣ８を投与する（例えば、単回投与で、または複数の週の期間にわたって複数回の投与で、静脈内に）、（ｉｉ）ＨＤＡＣｉを225Ａｃ－ＢＣ８と同時に投与する（例えば、ＨＤＡＣｉを、ｎ日間、１日１回、経口投与するか、またはｎ日間、静脈内投与し、225Ａｃ－ＢＣ８を、ＨＤＡＣｉレジメンのＤａｙ２～ｎ－１の内の１つにおいて、単回投与で、静脈内投与する）、（ｉｉｉ）ＨＤＡＣｉを225Ａｃ－ＢＣ８と同時に投与する（例えば、ＨＤＡＣｉを、本明細書に記載されるように、１カ月を超える期間、経口投与し、225Ａｃ－ＢＣ８を、ＨＤＡＣｉレジメンの最初の月の中の日に、単回投与で、静脈内投与する）、および（ｉｖ）最初に225Ａｃ－ＢＣ８を投与し（例えば、単回投与で、または複数の週の期間にわたる複数の投与で、静脈内に）、２番目にＨＤＡＣｉを投与する（本明細書に記載されるように）、が挙げられる。
製造物品
本開示は、（ａ）放射能標識抗ＣＤ４５イムノグロブリン、および（ｂ）対象の造血幹細胞を枯渇させるために有効な量のイムノグロブリンを対象に投与することを使用者に指示するラベルを含む製造物品をさらに提供する。
対象物品のある特定の態様によれば、放射能標識抗ＣＤ４５イムノグロブリンは、有効量が、例えば、０．０１μＣｉ／ｋｇ～５．０μＣｉ／ｋｇもしくは０．０１μＣｉ／ｋｇ～１．０μＣｉ／ｋｇの225Ａｃ－ＢＣ８、または１．０μＣｉ／ｋｇ～３．０μＣｉ／ｋｇの225Ａｃ－ＢＣ８、または３．０μＣｉ／ｋｇ～５．０μＣｉ／ｋｇの225Ａｃ－ＢＣ８、または１０μＣｉ～１２０μＣｉの225Ａｃ－ＢＣ８、または１００μＣｉ～２５０μＣｉの225Ａｃ－ＢＣ８、または２００μＣｉ～５００μＣｉの225Ａｃ－ＢＣ８、または５μＣｉ～８０μＣｉの225Ａｃ－ＢＣ８であり得る225Ａｃ－ＢＣ８である。
対象物品のある特定の態様によれば、放射能標識抗ＣＤ４５イムノグロブリンは、有効量が、例えば、１μＣｉ／ｋｇ～５００μＣｉ／ｋｇもしくは１μＣｉ／ｋｇ～１００μＣｉ／ｋｇの177Ｌｕ－ＢＣ８、または１００μＣｉ／ｋｇ～３００μＣｉ／ｋｇの177Ｌｕ－ＢＣ８、または３００μＣｉ／ｋｇ～５００μＣｉ／ｋｇの177Ｌｕ－ＢＣ８であり得る177Ｌｕ－ＢＣ８である。
本開示は、続く実施例を参照することによってより良好に理解されるであろうが、当業者は、詳細に記載される具体的な実施例が、その後に続く請求項においてより完全に記載される通りの本開示を例示するものに過ぎないことを容易に認識するであろう。
本発明の態様
本出願において、以下の態様が開示される。
態様１ 対象の造血幹細胞を枯渇させるための方法であって、有効量の放射能標識抗ＣＤ４５イムノグロブリンを前記対象に投与することを含む方法。
態様２ 前記放射能標識抗ＣＤ４５イムノグロブリンの前記有効量が、前記対象の造血幹細胞の少なくとも２５％、または前記対象の造血幹細胞の５０％、または前記対象の造血幹細胞の少なくとも７０％、または前記対象の造血幹細胞の少なくとも８０％、または前記対象の造血幹細胞の少なくとも９０％、または前記対象の造血幹細胞の少なくとも９５％、または前記対象の造血幹細胞の９０％以下、または前記対象の造血幹細胞の９５％以下を枯渇させる、態様１に記載の方法。
態様３ 前記放射能標識抗ＣＤ４５イムノグロブリンの前記有効量が、前記対象の造血幹細胞の少なくとも９０％、または前記対象の造血幹細胞の少なくとも９５％、または前記対象の造血幹細胞の少なくとも９８％、または前記対象の造血幹細胞の少なくとも９９％、または前記対象の造血幹細胞の９８％以下、または前記対象の造血幹細胞の９９以下を枯渇させる、態様１に記載の方法。
態様４ 免疫治療剤、放射線増感剤または化学療法薬剤の内の１種または複数種を含む有効量の第２の治療剤を投与することをさらに含む、態様１～３のいずれか１つに記載の方法。
態様５ 前記免疫治療剤が、ＣＤ３３、ＣＤ３４、ＣＤ３８、ＣＤ１１９およびＣＤ１３５に対する１種または複数種の抗体を含む、態様４に記載の方法。
態様６ 前記放射線増感剤が、Ｂｃｌ－２阻害剤またはＨＤＡＣ阻害剤（ＨＤＡＣｉ）を含む、態様４に記載の方法。
態様７ 前記有効量の前記放射能標識抗ＣＤ４５イムノグロブリンが、前記対象の造血幹細胞の１００％を枯渇させる（すなわち、前記造血幹細胞をアブレーションする）、態様１に記載の方法。
態様８ 対象のリンパ球を枯渇させるための方法であって、有効量の放射能標識抗ＣＤ４５イムノグロブリンを前記対象に投与することを含む方法。
態様９ 前記有効量の前記放射能標識抗ＣＤ４５イムノグロブリンが、前記対象のリンパ球の少なくとも２５％、または前記対象のリンパ球の５０％、または前記対象のリンパ球の少なくとも７０％、または前記対象のリンパ球の少なくとも８０％、または前記対象のリンパ球の少なくとも９０％、または前記対象のリンパ球の少なくとも９５％、または前記対象のリンパ球の少なくとも９８％、または前記対象のリンパ球の少なくとも９９％、または前記対象のリンパ球の９０％以下、または前記対象のリンパ球の９５％以下、または前記対象のリンパ球の９８％以下、または前記対象のリンパ球の９９％以下を枯渇させる、態様８に記載の方法。
態様１０ 前記有効量の前記放射能標識抗ＣＤ４５イムノグロブリンが、前記対象の造血がん芽球の少なくとも２５％、または前記対象の造血がん芽球の５０％、または前記対象の造血がん芽球の少なくとも７０％、または前記対象の造血がん芽球の少なくとも８０％、または前記対象の造血がん芽球の少なくとも９０％、または前記対象の造血がん芽球の少なくとも９５％、または前記対象の造血がん芽球の少なくとも９８％、または前記対象の造血がん芽球の少なくとも９９％、または前記対象の造血がん芽球の９０％以下、または前記対象の造血がん芽球の９５％以下、または前記対象の造血がん芽球の９８％以下、または前記対象の造血がん芽球の９９％以下を枯渇させる、態様８に記載の方法。
態様１１ 前記有効量の前記放射能標識抗ＣＤ４５イムノグロブリンが、前記対象のリンパ球の１００％を枯渇させる（すなわち、前記リンパ球をアブレーションする）か、または前記対象の前記造血がん芽球の１００％を枯渇させる、態様８に記載の方法。
態様１２ 前記対象が、遺伝子編集細胞治療を介して処置可能な非癌性障害に罹患しており、前記障害を処置するためにそのような治療を受けようとしているところであり、単一線量として前記有効量の前記放射能標識抗ＣＤ４イムノグロブリンを投与する、態様１～１１のいずれか１つに記載の方法。
態様１３ 遺伝子編集細胞治療を介して処置可能な非癌性障害に罹患した対象を処置するための方法であって、（ｉ）前記対象の造血幹細胞を枯渇させるために有効な量の放射能標識抗ＣＤ４５イムノグロブリンを対象に投与すること、および（ｉｉ）適切な時間期間の後、前記対象に対する前記治療を行って、前記対象の障害を処置することを含む方法。
態様１４ 前記障害が、異常ヘモグロビン症、先天性免疫不全およびウイルス感染からなる群から選択される、態様１２または１３に記載の方法。
態様１５ 前記障害が、鎌状赤血球症（ＳＣＤ）、重症複合免疫不全症（ＳＣＩＤ）、β－サラセミアおよびファンコニ貧血からなる群から選択される、態様１４に記載の方法。
態様１６ 前記障害がＳＣＤであり、前記治療が遺伝子編集β－グロビン造血幹細胞治療である、態様１４に記載の方法。
態様１７ 前記障害がＳＣＩＤであり、前記治療が遺伝子編集造血幹細胞治療であり、前記編集遺伝子が、一般的ガンマ鎖（γｃ）遺伝子、アデノシンデアミナーゼ（ＡＤＡ）遺伝子およびヤヌスキナーゼ３（ＪＡＫ３）遺伝子からなる群から選択される、態様１４に記載の方法。
態様１８ 前記対象が癌性障害に罹患しており、前記障害を処置するために骨髄移植などの造血幹細胞移植を受けようとしており、単一線量として前記有効量の前記放射能標識抗ＣＤ４イムノグロブリンを投与する、態様１～７のいずれか１つに記載の方法。
態様１９ 前記対象が、遺伝子編集細胞治療を介して処置可能な癌性障害に罹患しており、前記障害を処置するためにそのような治療を受けようとしており、単一線量として前記有効量の前記放射能標識抗ＣＤ４イムノグロブリンを投与する、態様８～１１のいずれか１つに記載の方法。
態様２０： 遺伝子編集細胞治療を介して処置可能な癌性障害に罹患した対象を処置するための方法であって、（ｉ）前記対象のリンパ球を枯渇させるために有効な量の放射能標識抗ＣＤ４イムノグロブリンを前記対象に投与すること、および（ｉｉ）適切な時間期間の後、前記対象に対する前記治療を行って、前記対象の障害を処置することを含む方法。
態様２１：前記癌性障害が、非ホジキンリンパ腫の、急性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫である、態様１８～２０のいずれか１つに記載の方法。
態様２２：前記遺伝子編集細胞治療が、前記癌性障害を処置するための養子細胞治療である、態様１９または２０に記載の方法。
態様２３：前記養子細胞治療がＣＡＲ Ｔ細胞治療であり、前記ＣＡＲ Ｔ細胞治療が遺伝子編集ＣＡＲ Ｔ細胞の投与を含み、前記遺伝子編集ＣＡＲ Ｔ細胞が、少なくとも１種のチェックポイント受容体および／または少なくとも１種のＴ細胞受容体を妥当に発現することができない、態様２２に記載の方法。
態様２４：前記ＣＡＲ Ｔ細胞治療が自己由来細胞治療である、態様２３に記載の方法。
態様２５：前記ＣＡＲ Ｔ細胞治療が同種細胞治療である、態様２３に記載の方法。
態様２６：前記放射能標識抗ＣＤ４５抗体が225Ａｃ－ＢＣ８または177Ｌｕ－ＢＣ８である、態様１～２５のいずれか１つに記載の方法。
態様２７ 225Ａｃ－ＢＣ８の有効量が、対象質量の０．０１μＣｉ／ｋｇ～５．０μＣｉ／ｋｇ、もしくは対象質量の０．０１μＣｉ／ｋｇ～１．０μＣｉ／ｋｇ、もしくは対象質量の１．０μＣｉ／ｋｇ～３．０μＣｉ／ｋｇ、もしくは対象質量の３．０μＣｉ／ｋｇ～５．０μＣｉ／ｋｇであるか、または225Ａｃ－ＢＣ８の前記有効量が、２μＣｉ～０．５ｍＣｉ未満、もしくは少なくとも２μＣｉ～１２０μＣｉ未満、もしくは１０μＣｉ～１２０μＣｉ未満、もしくは５０μＣｉ～２５０μＣｉ未満であるか、または177Ｌｕ－ＢＣ８の有効量が、対象質量の１μＣｉ／ｋｇ～５００μＣｉ／ｋｇ、もしくは対象質量の１μＣｉ／ｋｇ～１００μＣｉ／ｋｇ、もしくは対象質量の１００μＣｉ／ｋｇ～３００μＣｉ／ｋｇ、もしくは対象質量の３００μＣｉ／ｋｇ～５００μＣｉ／ｋｇであるか、または177Ｌｕ－ＢＣ８の前記有効量が、１０μＣｉ～２０ｍＣｉ、もしくは１００μＣｉ～３ｍＣｉ、もしくは３ｍＣｉ～２０ｍＣｉである、態様２６に記載の方法。
態様２８：前記抗ＣＤ４５イムノグロブリンがＢＣ８を含み、前記ＢＣ８が、配列番号１に示される通りのアミノ酸配列を有する軽鎖、または配列番号９に示される通りの軽鎖Ｎ末端アミノ酸配列を含む、態様１～２７のいずれか１つに記載の方法。
態様２９：前記抗ＣＤ４５イムノグロブリンがＢＣ８を含み、前記ＢＣ８の前記軽鎖が、配列番号３、配列番号４または配列番号５に示される通りのアミノ酸配列を有する少なくとも１つの相補性決定領域を含む、態様１～２８のいずれか１つに記載の方法。
態様３０：前記抗ＣＤ４５イムノグロブリンがＢＣ８を含み、前記ＢＣ８が、配列番号１２または配列番号１３に示される通りのアミノ酸配列を有する軽鎖を含む、態様１～２９のいずれか１つに記載の方法。
態様３１：前記抗ＣＤ４５イムノグロブリンがＢＣ８を含み、前記ＢＣ８が、配列番号２示される通りのアミノ酸配列を有する重鎖、または配列番号１０に示される通りのヒービング鎖（ｈｅａｖｉｎｇ ｃｈａｉｎ）Ｎ末端アミノ酸配列を含む、態様１～３０のいずれか１つに記載の方法。
態様３２：前記抗ＣＤ４５イムノグロブリンがＢＣ８を含み、前記ＢＣ８の前記重鎖が、配列番号６、配列番号７または配列番号８に示される通りのアミノ酸配列を有する少なくとも１つの相補性決定領域を含む、態様１～３１のいずれか１つに記載の方法。
態様３３：前記抗ＣＤ４５イムノグロブリンがＢＣ８を含み、前記ＢＣ８が、配列番号１５または配列番号１６に示されるアミノ酸配列を有する重鎖を含む、態様１～３２のいずれか１つに記載の方法。
態様３４：前記抗ＣＤ４５イムノグロブリンがＢＣ８を含み、前記ＢＣ８の重鎖が、（Ｎ末端アミノ酸に対して）１４１位においてアミノ酸ＡＳＰまたはＡＳＮを含む、態様１～３３のいずれか１つに記載の方法。
態様３５：ＢＣ８タンパク質の集団におけるＡＳＰ：ＡＳＮの比が、１：９９～９９：１、例えば、１０：９０～９０：１０の範囲内である、態様３４に記載の方法。
態様３６：前記抗ＣＤ４５イムノグロブリンが、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４に由来する重鎖定常領域、すなわち、配列番号１７～配列番号１９の内の１つに示される通りのアミノ酸配列を含むように修飾されたＢＣ８を含む、態様１～３５のいずれか１つに記載の方法。
態様３７：前記抗ＣＤ４５イムノグロブリンが、配列番号２０に示される通りのアミノ酸配列を有する、突然変異Ｓ２２８Ｐを含むヒトＩｇＧ４に由来する重鎖定常領域を含むように修飾されたＢＣ８を含む、態様１～３６のいずれか１つに記載の方法。
態様３８：前記抗ＣＤ４５イムノグロブリンが、配列番号２１に示される通りのアミノ酸配列を有する、ヒトに由来する軽鎖カッパ定常領域を含むように修飾されたＢＣ８を含む、態様１～３７のいずれか１つに記載の方法。
態様３９ （ａ）放射能標識抗ＣＤ４５抗体、および（ｂ）対象に、前記対象の造血幹細胞もしくは前記対象のリンパ球を枯渇させるか、またはアブレーションするために有効な量の前記抗体を投与するように使用者に指示するラベルを含む製造物品。
態様４０ 前記放射能標識ＢＣ８が225Ａｃ－ＢＣ８であり、225Ａｃ－ＢＣ８の有効量が、対象質量の０．０１μＣｉ／ｋｇ～５．０μＣｉ／ｋｇ、もしくは０．０１μＣｉ／ｋｇ～１．０μＣｉ／ｋｇであるか、または対象質量の１．０μＣｉ／ｋｇ～３．０μＣｉ／ｋｇであるか、または対象質量の３．０μＣｉ／ｋｇ～５．０μＣｉ／ｋｇであるか、あるいは225Ａｃ－ＢＣ８の前記有効量が、２μＣｉ～０．５ｍＣｉ未満、または２μＣｉ～２５０μＣｉ、または７５μＣｉ～４００μＣｉである、態様３９に記載の物品。
実施例１－抗ＣＤ４５イムノグロブリンＢＣ８の生成
ヒト植物性血球凝集素（ＰＨＡ）刺激単核細胞で過剰免疫したＢＡＬＢ／Ｃマウス由来の脾臓細胞とマウス骨髄腫ＮＳ１細胞を融合することによって最初に開発されたハイブリドーマ（ＡＴＣＣ番号ＨＢ－１０５０７）からマウス抗ＣＤ４５ ｍＡｂ ＢＣ８を調製した。微生物混入についてのスクリーニングの後、１～２％のウシ胎児血清（ＦＢＳ）が補充されたＪＲＨ－Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ ＥＸＣｅｌｌ３００培地を使用して、元の融合細胞を培養した。
ハイブリドーマ細胞系を無血清培地中における培養のために適合させた。簡潔に言えば、培養中の細胞は、グルタミン、コレステロール、インスリンおよびトランスフェリンが補充されたｃｏｍｂｏ培地を使用して、徐々にかつ漸次に血清アルブミンを培養液から抜いていった。次いで、細胞を最高で５００Ｌのスケールで１×１０6個／ｍＬ超の密度に増殖させた。陽イオン交換クロマトグラフィ、タンパク質Ａクロマトグラフィおよびアニオン交換膜分離の組合せを使用して、抗ＣＤ４５抗体の精製のために、培地を採取し、処理した。精製された抗体をナノ濾過（３０ｋＤカットオフ）によって濃縮した。精製された産物の濃度を５．２ｍｇ／ｍＬで測定し、２～８℃で保存した。
精製された抗体は、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ手法、ＩＥＦ手法およびＳＥＣ－ＨＰＬＣ手法を特徴とする。約０．６％の集合体によるＳＥＣ－ＨＰＬＣによって単一産物ピーク（９９．４％）を記録した。非還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥによって、抗体についての単一のバンドが示された。還元条件下におけるＳＤＳ－ＰＡＧＥによって、軽鎖および重鎖の存在（共に９９．９％）が確認された。
実施例２－抗ＣＤ４５イムノグロブリンＢＣ８の配列決定
Ｔｒｉｚｏｌ（登録商標）試薬の技術マニュアルに従って、ハイブリドーマ細胞からトータルＲＮＡを単離した。トータルＲＮＡをアガロースゲル電気泳動によって分析し、ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ（商標）１ｓｔ Ｓｔｒａｎｄ ｃＤＮＡ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ Ｋｉｔの技術マニュアルに従ってアイソタイプ特異的アンチセンスプライマーまたは汎用プライマーを使用してｃＤＮＡに逆転写した。ＶＨ、ＶＬ、ＣＨおよびＣＬの抗体断片を増幅し、標準的分子クローニング手法を使用して標準的クローニングベクターに別々にクローニングした。正確な大きさの挿入物を有するクローンを同定するためにコロニーＰＣＲスクリーニングを行った。各抗体断片について、正確な大きさの挿入物を有する５超の単一コロニーを配列決定した。軽鎖および重鎖の完全なヌクレオチド配列は、図４Ａ、図４Ｂ、図５Ａおよび図５Ｂに示される。
質量分析ペプチドマッピングアプローチを使用して、抗ＣＤ４５イムノグロブリン（すなわち、ＢＣ８抗体）を配列決定した。ＢＣ８抗体を脱グリコシルし、還元し、個別の酵素、すなわち、トリプシン、Ｌｙｓ－Ｃおよびキモトリプシンで消化した。次いで、ＭＳ／ＭＳ断片化分析アプローチを使用してＬＣ連結質量分析手法によってペプチド断片を分析した。ＢＣ８抗体の重鎖および軽鎖のタンパク質配列決定は、実際のアミノ酸配列が、重鎖における単一アミノ酸のみによってＤＮＡ配列によって予測されるものと異なることを示した。図５Ａおよび図５Ｂにおいて強調されるように、１４１位におけるアミノ酸をコードするコドンによってＡＳＮ－１４１が予測されるが、タンパク質配列決定によって実際のＡＳＰ－１４１は見出されなかった。その上、タンパク質の様々なバッチの配列決定によって、１４１位置において異なる量のＡＳＰおよびＡＳＮが示され、すなわち、タンパク質は、１：９９～９９：１、例えば、１０：９０～９０：１０の比（ＡＳＮ－１４１：ＡＳＰ－１４１）でＡＳＮ－１４１およびＡＳＰ－１４１の両方を含むことが分かった。表１を参照のこと。
Figure 2022548694000002
この型の翻訳後修飾、すなわち、脱アミノ化は、細胞環境に依存する可能性があり、場合によっては、タンパク質年齢に関連する（例えば、タンパク質分解のためのシグナルを提供する可能性がある）とみなされた。しかし、他の脱アミノ化アミノ酸が同定されなかったという事実は、ＡＳＰ－１４１の重要で特異的な役割を示している可能性がある。最低でも、ＡＳＰ－１４１は、折り畳みタンパク質上における、露出した、またはアクセス可能な領域内にある可能性がある。すなわち、ＡＳＮ－１４１は、アクセス可能な溶媒である可能性があり、抗体の立体配座的に柔軟な領域内に存在する可能性がある。ＢＣ８抗体の生物活性に対する脱アミノ化の効果は、ヒト臨床治験の結果から決定され得る。
実施例３－ＢＣ８：225Ａｃ－ＢＣ８を形成するための標識化および精製
ＤＯＴＡとのＢＣ８および関連のない対照ｍＡｂ１８Ｂ７（マウスＩｇＧ１）のコンジュゲーション
ＭＷカットオフが５０，０００のＣｅｎｔｒｉｃｏｎフィルターまたはＭＷカットオフが５０，０００のＶｉｖａｓｐｉｎ限外濾過チューブを使用する４回の限外濾過回転によって、ＣＤ４５に対する抗体（すなわち、ＢＣ８抗体）および対照（すなわち、真菌多糖グルクロノキシロマンナンに対するマウスモノクローナル反応性；それぞれ２ｍｇ）をコンジュゲーション緩衝液（１ｍＭのＥＤＴＡを有する炭酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ＝８．５～９．０）と平衡させ、回転１回当たり１．５ミリリットル（ｍＬ）のコンジュゲーション緩衝液を使用した。各回転について、固定角回転子を有するＴｈｅｒｍｏ ＩＥＣ Ｃｅｎｔｒａ ＣＬ３Ｒ遠心分離機において、４℃で５～２０分間、５３，０００ＲＰＭで抗体を回転させて、残留物量を１００～２００マイクロリットル（μＬ）とした。回転時間は、異なる抗体および異なるタンパク質濃度について変化する。平衡化のための時間を可能にするために、２回目の回転および３回目の回転の後、４℃で３０分間、抗体をインキュベートした。
Figure 2022548694000003
コンジュゲーションのために、０．１５ＭのＮＨ４ＯＡｃ中における３ｍｇ／ｍＬのＤＯＴＡ－ｐＳＣＮ（ＭＷ＝６７８）の溶液を、ボルテックスによって溶解することによって調製した。Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆチューブ内でＤＯＴＡ－ｐＳＣＮおよび抗体（５ｍｇ／ｍＬ超）を５、７．５および１５のモル比で一緒に混合し、室温で１５時間インキュベートした（図９Ａ参照）。ＤＯＴＡ－抗体コンジュゲートの精製のために、上記の通りの７回の限外濾過によって未反応のＤＯＴＡ－ｐＳＣＮを除去し１．５ｍＬの０．１５ＭのＮＨ４ＯＡｃ緩衝液（ｐＨ＝６．５以下、およそ１００μＬの量）で毎回を洗浄する。最後の洗浄後、０．１５ＭのＮＨ４ＯＡｃ緩衝液を添加して、各試料を約１ｍｇ／ｍＬの終濃度とする。
簡略化されたローリー法によってＤＯＴＡ抗体コンジュゲートの終濃度を測定した。Dadachova et al., 1999, Spectrophotometric method for determination of bifunctional macrocyclic ligands in macrocyclic ligand-protein conjugates, Nuclear Medicine & Biology, 26:977-982に記載されているように、抗体にコンジュゲートしたＤＯＴＡ分子の数（タンパク質に対するＤＯＴＡのモル比）を決定した。タンパク質に対するＤＯＴＡのモル比の決定の結果を表２に示す。
225ＡｃによるＤＯＴＡ－抗体コンジュゲートの放射能標識
１５μＬの０．１５ＭのＮＨ4ＯＡｃ緩衝液（ｐＨ＝６．５）および２μＬ（１０μｇ）のＤＯＴＡ－ＢＣ８（５ｍｇ／ｍＬ）を含む反応物をＥｐｐｅｎｄｏｒｆ反応チューブ内において混合し、続いて０．０５ＭのＨＣｌ中における４μＬの225Ａｃ（１０μＣｉ）を添加した（図９Ｂ参照）。チューブの内容物をピペットチップで混合し、反応混合物を１００ｒｐｍの振盪によって３７℃で９０分間インキュベートした。インキュベーション期間の終了時に、３μＬの１ｍＭのＤＴＰＡ溶液を反応混合物に添加し、室温で２０分間インキュベートして、未反応の225Ａｃを225Ａｃ－ＤＴＰＡ複合体内に結合した。
１０ｃｍシリカゲルストリップおよび１０ｍＭ ＥＤＴＡ／生理食塩液移動相による迅速薄層クロマトグラフィ（ＩＴＬＣ）を使用して、遊離225Ａｃ（225Ａｃ－ＤＴＰＡ）から225Ａｃ標識ＢＣ８（225Ａｃ－ＤＯＴＡ－ＢＣ８）を分離することによって225Ａｃ－ＤＯＴＡ－ＢＣ８の放射化学的純度を決定した。この系において、放射能標識抗体は適用位置にとどまり、225Ａｃ－ＤＴＰＡは溶媒前部と共に移動する。ストリップを半分に切断し、その娘を除外するために225Ａｃのためのチャネル７２～１１０を使用してマルチチャネル分析器を備えたガンマ計数器で計数した。選択放射能標識の結果を表２に示すが、表２は、ＢＣ８に対するＤＯＴＡの初期モル比が７．５で形成されたコンジュゲートが最高のコンジュゲーション比（ＢＣ８タンパク質に対するＤＯＴＡ）を提供し、以下に記載される全ての追跡実験（バッチＡ）のために選択されたことを示す。
225Ａｃ－ＤＯＴＡ－ＢＣ８の精製および精製された225Ａｃ－ＤＯＴＡ－ＢＣ８のＨＰＬＣ
１％ＨＳＡで事前に遮断したＰＤ１０カラム上、または２×１．５ｍＬの洗浄で、１回転につき３分間の、ＭＷカットオフが５０ｋＤａのＶｉｖａｓｐｉｎ遠心濃縮器上で、225Ａｃ－ＤＯＴＡ－ＢＣ８試料を精製した。フロースルーＷａｔｅｒｓ ＵＶおよびＢｉｏｓｃａｎ Ｒａｄｉａｔｉｏｎ検出器を備えたＷａｔｅｒｓ ＨＰＬＣシステムを使用して、精製後の225Ａｃ－ＤＯＴＡ－ＢＣ８のＨＰＬＣ分析を行った。注入試料の大きさは３０μＬであった。溶出剤としてｐＨ＝７．４のＰＢＳを使用して、１ｍＬ／分の流量で、ＴＳＫ３０００ＳＷ ＸＬカラム上で溶出を行った。例示的クロマトグラムは、225Ａｃ－ＤＯＴＡ－ＢＣ８のＳＥＣ－ＨＰＬＣ（サイズ排除クロマトグラフィ－ＨＰＬＣ）を示す図１０Ａおよび図１０Ｂに提供され、図１０ＡはＢＣ８標準物質を示し、図１０Ｂは、225Ａｃ－ＤＯＴＡ－ＢＣ８を示す（１３分のピークは、最終製剤を安定化するために加えられるＨＳＡである）。
実施例４－225Ａｃ－ＢＣ８：安定性
225Ａｃ－ＤＯＴＡ－ＢＣ８の安定性の決定
ＤＯＴＡ－ＢＣ８（バッチＡ）を全ての免疫反応性実験において使用し、１μＣｉ／μｇの比活性で上記の手法に記載されるように225Ａｃで放射能標識した。安定性の決定のために、225Ａｃ－ＤＯＴＡ－ＢＣ８を２０μＬの元の量で試験するか、または作業緩衝液（０．１５ＭのＮＨ4ＯＡｃ）で４０μＬもしくは６０μＬに希釈し、室温（ｒｔ）で４８時間もしくは４℃で９６時間インキュベートし、ＩＴＬＣによって試験した。全ての試料を重複して分析し、実験を３回行った。
図１１に示される結果によって、アクチニウム－２２５標識ＢＣ８（225Ａｃ－ＤＯＴＡ－ＢＣ８）が４℃で最高９６時間安定したことが示される。
実施例５－225Ａｃ－ＢＣ８：免疫反応性
細胞系を使用した225Ａｃ－ＤＯＴＡ－ＢＣ８免疫反応性（ＩＲ）決定
ＤＯＴＡ－ＢＣ８（バッチＡ）を全ての免疫反応性実験において使用し、１μＣｉ／μｇの比活性で上記の手法に記載されるように225Ａｃで放射能標識した。Ｒａｍｏｓ ＣＤ４５陽性細胞および対照ＣＤ４５陰性ＥＬ４細胞を、試料１つにつき１，０００，０００個～７，５００，０００個の細胞の量で、重複して使用した。実験を２回行った。図１２に示される結果によって、225Ａｃ－ＤＯＴＡ－ＢＣ８がＲａｍｏｓ細胞に特異的に結合し、対照ＥＬ４細胞への結合率が約１０％だけであったのに対して、これらの細胞への放射能標識抗体結合率が５０％であったことが示される。しかし、ＱＣのための実験室内における２つの細胞系を連続的に増殖させることは費用効果的でなく、ＩＲ決定のために、より簡便なアッセイが所望された。対照として、以下の条件、すなわち、１％のＢＳＡで事前に遮断されたＲａｍｏｓ細胞、ＥＬ４細胞、１％のＢＳＡで事前に遮断されたＥＬ４細胞を使用した。
Ｃｙｔｏｔｒｏｌ細胞を使用した225Ａｃ－ＤＯＴＡ－ＢＣ８免疫反応性（ＩＲ）決定
最初にＣｙｔｏｔｒｏｌ細胞（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）を使用して、フローサイトメトリーによって、対照１８Ｂ７抗体（真菌多糖グルクロノキシロマンナンに対する非特異的対照抗体）に対するナイーブＢＣ８抗体のそれらの細胞への結合率を決定した（図１３Ａ）。細胞をＲＰＭＩ培地内に取り、二次抗体は、ＢｉｏｌｅｇｅｎｄのＰＥ標識ラット抗マウスＩｇＧ１であった。ＣｙｔｏＴｒｏｌ細胞は、ＣＤ４５表面抗原を示す末梢血から単離された凍結乾燥ヒトリンパ球であり、それらの商業的利用可能性（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）および一貫性に基づいて選択された。
Ｃｙｔｏｔｒｏｌ細胞に対するナイーブＢＣ８の結合率をＤＯＴＡ－ＢＣ８と比較した（図１３Ｂ）。ナイーブＢＣ８はＣｙｔｏｔｒｏｌ細胞への強固な結合を示したが、対照１８Ｂ７ ｍＡｂはバックグラウンドレベルで結合するだけであった（図１３Ｂ）。ＢＣ８へのＤＯＴＡの付着によって、そのＩＲは、ナイーブＢＣ８ ＩＲのおよそ７０％に減少した（図１３Ｂ）。
Figure 2022548694000004
続いて、２２５Ａｃ－ＤＯＴＡ－ＢＣ８についてのＩＲ決定を行った。Ｃｙｔｏｔｒｏｌ細胞への放射能標識抗体の結合率を測定するために、各試料についてＣｙｔｏｔｒｏｌ細胞（ロット７２９１５４）の３つのチューブを使用し、重複試料についての結合率を測定した。０．５ｍＬの復元緩衝液を使用して、バイアルからバイアルを洗浄し、細胞をプールした。バイアルをさらに０．５ｍＬの２つのアリコートで洗浄し、洗浄物をプールした。細胞を４０００ｒｐｍで４分間の遠心分離によって回収し、１％のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含む１ｍＬのＲＰＭＩで遮断し、再回転し、０．５ｍＬのＲＰＭＩ／ＢＳＡ中で再懸濁した。１つバイアルにつき約２５，０００ＣＰＭの標識抗体を加えた。バイアルを３７℃で１時間インキュベートし、１５０ＲＰＭで振盪し、４０００ＲＰＭで４分間回転し、３つの洗浄物を回収し、洗浄物および細胞を計数した。表３は、２２５Ａｃ－ＤＯＴＡ－ＢＣ８の６つの試料についてのＩＲ決定を示す。平均ＩＲは、６４．８±２．１４％であった。
最後に、フローサイトメトリーによってＣｙｔｏｔｒｏｌ細胞へのＤＯＴＡ－ＢＣ８試料の結合率の対照比較を行った後（図１４Ｂ）、225Ａｃによる同じ試料の放射能標識を速やかに行い、放射能標識試料へのＣｙｔｏｔｒｏｌ細胞の結合を行った（図１４Ａ）。フローサイトメトリーによる細胞へのＤＯＴＡ－ＢＣ８の結合率（ナイーブＢＣ８結合率の約６０％）は、Ｃｙｔｏｔｒｏｌ細胞への放射能標識225Ａｃ－ＤＯＴＡ－ＢＣ８の結合率に適合した。したがって、Ｃｙｔｏｔｒｏｌアッセイは、６４．８±２．１４％で細胞にルーチン的に結合する225Ａｃ－ＤＯＴＡ－ＢＣ８のＩＲを評価するための好都合で費用効果的な方法であることが分かった。
実施例６－225Ａｃ－ＢＣ８：多発性骨髄腫のための放射線免疫治療
225Ａｃ－ＤＯＴＡ－ＢＣ８による多発性骨髄腫の放射線免疫治療（ＲＩＴ）のためのモデル細胞系としてのヒトＨ９２９多発性骨髄腫細胞およびヒトＵ２６６多発性骨髄腫細胞の適合性の評価
多発性骨髄腫（ＭＭ）細胞系Ｈ９２９およびＵ２６６をＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ＡＴＴＣから購入し、ＡＴＣＣ指示書に従って増殖させた。両細胞系への非標識ＤＯＴＡ－ＢＣ８の結合率をフローサイトメトリーによって測定した後（図１５Ａ）、細胞に225Ａｃ－ＤＯＴＡ－ＢＣ８を結合させた（図１５Ｂ）。
続いて、225Ａｃ－ＤＯＴＡ－ＢＣ８によるインビトロ死滅アッセイのためにＨ９２９細胞およびＵ２６６細胞を使用した。２つの線量の225Ａｃ－ＤＯＴＡ－ＢＣ８（２０ｐＣｉ／ｍＬおよび２５０ｐＣｉ／ｍＬ）を使用した。総量が２００ｕＬの９６ウェルプレート内で放射能標識抗体による細胞のインキュベーションを行った。同じ２つの線量の対照抗体225Ａｃ－ＤＯＴＡ－１８Ｂ７を使用した。４時間および１２時間の時点で細胞を非結合放射能から洗浄し、３日後に、それらの生存率をＴｒｙｐａｎブルーアッセイで評価した（表４）。両細胞系の死滅は、抗体特異的であり、かつ線量依存的だった。すなわち、両細胞系は、225Ａｃ－ＤＯＴＡ－ＢＣ８による特異的標的化について、それらの表面上に十分量のＣＤ４５を発現し、後続のインビボ実験のために使用することが可能であった。
Figure 2022548694000005
実施例７－225Ａｃ－ＢＣ８：体内分布
ナイーブマウスモデルにおける225Ａｃ－ＤＯＴＡ－ＢＣ８の体内分布
本試験の目的は、疾患がない場合におけるベースライン時の体内分布およびクリアランスを確認するために、ナイーブマウスモデルにおける対照225Ａｃ－ＤＯＴＡ－１８Ｂ７抗体に対する225Ａｃ－ＤＯＴＡ－ＢＣ８の薬物動態体内分布（ｐｈａｒｍｏｋｉｎｅｔｉｃ ｂｉｏｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ）を評価することであった。上記で詳細に述べられるように、ＤＯＴＡコンジュゲートＢＣ８抗体（バッチＡ）および１８Ｂ７抗体（バッチＡと同じモル比で生成される；Ａｂに対して７．５モルのＤＯＴＡ）を225Ａｃで放射能標識した。抗体を０．４μＣｉ／μｇの比活性で放射能標識した。225Ａｃ－ＤＯＴＡ－ＢＣ８免疫反応性をＣｙｔｏｔｒｏｌ細胞で試験し、５５％の結合率を示したが、しかるに、これは５０％の最低限の結合率要件を満たした。
５０匹の健康なＣＤ－１マウス雌性マウスを２つの群に無作為に割り付け、225Ａｃ－ＤＯＴＡ－ＢＣ８または対照225Ａｃ－ＤＯＴＡ－１８Ｂ７を腹腔内注射した。各マウスは、アスコルビン酸と共に１００μＬの０．１５ＭのＮＨ4ＯＡｃ緩衝液中における５μｇ（２μＣｉ）の放射能標識抗体の投与を受けた。腹腔内経路は、従事者、動物および施設の混入（すなわち、尾部から背圧スプラッシュの可能性のため）を回避するために、225Ａｃなどの長寿命放射性核種の場合、尾静脈注射よりも好ましい。本発明者ら自身のデータおよび他の群のデータによれば、腹腔内注射された抗体は、注射後の１時間以内に腹膜から完全に消える。マウスを、１時間、４時間、２４時間、４８時間および９６時間（１時点当たりの構築物１つ当たりｎ＝５匹のマウス）に安楽死させた。各マウスから組織試料（脳、筋肉、骨（骨髄を有する大腿骨）、心臓、肺、肝臓、脾臓、腎臓、胃、腸および血液）を回収し、計量し、225Ａｃエネルギーウインドウを使用して組織１つ当たりの累積活性をガンマ計数器で計数した。
１グラム当たりの注射線量の割合（ＩＤ／ｇ（％））を図１６Ａおよび図１６Ｂに示す。結果は、２種の抗体の体内分布（ｂｉｏｄｉｓｔｒｂｕｔｉｏｎ）および薬物動態クリアランスのパターンが互いに非常に近かったことを示しているが、このことは、インビボにおけるワンステップ標識抗体の全体的安定性を証明する。血液および血液を多く含む器官からのクリアランスならびに対照225Ａｃ－ＤＯＴＡ－１８Ｂ７の取り込みは、いくぶんより低かったが、このことは、マウスタンパク質および１８Ｂ７抗原（真菌多糖グルクロノキシロマンナン）の間の相同性の欠如によって説明される。
図１６Ａおよび図１６ＢにおけるデータならびにＰｒｉｚｍ５．０ソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ、米国カリフォルニア州サンディエゴ）を使用して、血液および血液を多く含む器官（肺および心臓）における225Ａｃ－ＤＯＴＡ－ＢＣ８抗体半減期および225Ａｃ－ＤＯＴＡ－１８Ｂ７抗体半減期を決定するための計算も行った。結果を表５に示すが、それによって、225Ａｃ－ＤＯＴＡ－ＢＣ８の半減期が、哺乳動物の抗原に対するフルサイズのマウスＩｇＧ１について典型的である約１００時間（４．２日間）であり、225Ａｃ－ＤＯＴＡ－１８Ｂ７（同様にマウスＩｇＧ１）の半減期が、おそらくそのそれぞれの抗原の外来的性質（真菌多糖）のため、わずか３０時間（１．２５日間）であることが示される。したがって、放射能標識抗体は、インビボで安定しており、血液および血液を多く含む器官から急速に消失し、ＣＤ４５陽性担腫瘍マウスにおける後続の薬物動態実験における使用のために適切であると思われる。
Figure 2022548694000006
骨髄腫保持ＳＣＩＤマウスにおける225Ａｃ－ＤＯＴＡ－ＢＣ８ ｍＡｂの体内分布
本試験の目的は、多発性骨髄腫ＳＣＩＤマウスモデルにおける対照225Ａｃ－ＤＯＴＡ－１８Ｂ７抗体に対する225Ａｃ－ＤＯＴＡ－ＢＣ８の体内分布を理解することであった。比活性が０．４μＣｉ／μｇである、上記の通りの225Ａｃで、ＤＯＴＡコンジュゲートＢＣ８（バッチＡ）および１８Ｂ７（上記の通り）を放射能標識した。それらの免疫反応性をＣｙｔｏｔｒｏｌ細胞で試験し、６１％の結合率を示したが、これは５０％の最低限の結合率要件を満たした。
５０匹のＳＣＩＤ－ＮＯＤ（重症複合免疫不全非肥満性糖尿病）雌性４～５週齢マウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）の右側腹部に１０7個のヒト多発性骨髄腫Ｈ９２９細胞（ＡＴＣＣ）を、左側腹部に１０7個のヒト多発性骨髄腫Ｕ２６６細胞（ＡＴＣＣ）を皮下注射した。およそ２０日間で、腫瘍が直径３～４ｍｍに達した際、マウスを２５匹のマウスの２つの２群（ｔｗｏ ２ ｇｒｏｕｐｓ）に無作為化し、225Ａｃ－ＤＯＴＡ－ＢＣ８または対照225Ａｃ－ＤＯＴＡ－１８Ｂ７ ｍＡｂを眼窩内に注射した。次いで、各マウスは、アスコルビン酸と共に５０μＬの０．１５ＭのＮＨ4ＯＡｃ緩衝液中における０．４μＣｉ（１μｇ）の放射能標識抗体の投与を受けた。上記のように、眼窩内経路は、尾部からの背圧スプラッシュの可能性を回避するために尾静脈注射よりも好ましい。マウスを、１時間、４時間、２４時間、４８時間および９６時間（１時点当たりの構築物１つ当たりｎ＝５匹のマウス）に安楽死させた。各マウスから腫瘍試料および組織試料（脳、筋肉、大腿骨、骨髄、心臓、肺、肝臓、脾臓、腎臓、胃、腸および血液を回収し、計量し、225Ａｃエネルギーウインドウを使用して組織１つ当たりの累積活性をガンマ計数器で計数した。
結果を１グラム当たりの注射線量の割合（ＩＤ／ｇ（％））として図１７Ａおよび図１７Ｂに示す。Ｈ９２９腫瘍およびＵ２６６腫瘍における225Ａｃ－ＤＯＴＡ－ＢＣ８の取り込みは、225Ａｃ－ＤＯＴＡ－１８Ｂ７よりも有意に（Ｐ＝０．０１）高かった。両抗体は、血液および血液を多く含む器官から迅速に消失した。重要なことに、骨髄における225Ａｃ－ＤＯＴＡ－ＢＣ８の取り込みはなかったが、このことは、マウス骨髄においてヒトＣＤ４５に対するいかなる相同性もなかったことを証明する。これらの結果は、225Ａｃ－ＤＯＴＡ－ＢＣ８が、Ｈ９２９腫瘍およびＵ２６６腫瘍において特異的に局在化し、したがって、さらなる放射線免疫治療（ＲＩＴ）実験のために使用することが可能であったことを示す。
実施例８－225Ａｃ－ＢＣ８：マウスにおける腫瘍の放射線免疫治療
２２５Ａｃ－ＤＯＴＡ－ＢＣ８によるＳＣＩＤ－ＮＯＤマウスにおけるＨ９２９腫瘍およびＵ２６６腫瘍の放射線免疫治療（ＲＩＴ）
４０匹のＳＣＩＤ－ＮＯＤ雌性４～５週齢マウスを使用して、マウスモデルにおける多発性骨髄腫異種移植片の処置のための225Ａｃ－ＤＯＴＡ－ＢＣ８の治療的可能性を評価した。体内分布実験のように、１０7個のＨ９２９（右側腹部）ヒト多発性骨髄腫細胞およびＵ２６６（左の側腹部）ヒト多発性骨髄腫細胞をマウスに皮下注射した。およそ１９日間で、腫瘍が直径３～４ｍｍに達した際、マウスを８つの群に無作為化し、０．３μＣｉの225Ａｃ－ＤＯＴＡ－ＢＣ８、０．３μＣｉの225Ａｃ－ＤＯＴＡ－１８Ｂ７対照ｍＡｂ、適合量の非標識ＢＣ８で眼窩内に処置したか、または未処置のままとした。電子キャリパで腫瘍の大きさを処置の日およびその後３日毎に測定した。マウスを、それらの腫瘍の大きさおよび健康について３０日間モニタした。
図１８Ａおよび図１８Ｂに、ＲＩＴ試験の結果を示す。Ｈ９２９腫瘍およびＵ２６６腫瘍に対する225Ａｃ－ＤＯＴＡ－ＢＣ８の顕著な治療効果があった。対照225Ａｃ－ＤＯＴＡ－１８Ｂ７の適合活性は、腫瘍の大きさに対する多少の効果を有したが、225Ａｃ－ＤＯＴＡ－ＢＣ８の適合活性よりも有意に（Ｐ＝０．０２）低かった。したがって、多発性骨髄腫異種移植片を保持するマウスのＲＩＴが腫瘍増殖をほとんど完全に抑止し、いかなる望ましくない副作用もないことにおいて有効であったことは明らかである。
ＲＩＴ後の腫瘍の組織学的分析
ＲＩＴ実験が完了した際、マウスを屠殺し、それらの腫瘍を切除し、エタノール中に配置した後、緩衝ホルマリン中に配置し、パラフィンで処理し（ｐａｒａｆｉｎｉｚｅｄ）、５μｍの切片に切断し、Ｈ＆Ｅで染色した。図１９Ａ～図１９Ｄは、未処置マウスおよび225Ａｃ－ＤＯＴＡ－ＢＣ８処置マウスから得られたＨ９２９腫瘍およびＵ２６６腫瘍を示す。未処置腫瘍は、コヒーレンスおよび壊死の欠如を示すＲＩＴ処置腫瘍よりも非常にコヒーレントである。
実施例９－225Ａｃ－３０Ｆ１１：抗ＣＤ４５代用物の骨髄破壊的効果
本試験において、ＢＭＴの前の標的前処置のためのマウスにおける225Ａｃ標識抗マウス汎ＣＤ４５抗体クローン３０Ｆ１１の忍容性および骨髄破壊効果を評価した。したがって、Ｂ６－Ｌｙ５aマウスに対する225Ａｃ抗ＣＤ４５抗体（３０Ｆ１１）の線量依存的骨髄破壊効果を評価した。さらに、試験は、Ｂ６－Ｌｙ５bによる類遺伝子性骨髄移植後の移植およびドナーキメラ化の程度を評価した（キメラ化をモニタするためのＣＤ４５アロタイプ差）。
実験方法：
（１）３０Ｆ１１のコンジュゲーションおよび標識。
上記のように抗ＣＤ４５抗体３０Ｆ１１をキレート剤ＤＯＴＡとコンジュゲートさせた。ＤＯＴＡコンジュゲート３０Ｆ１１が免疫反応性を保持するかどうかを試験するために、ＣＤ４５陽性であることを示す細胞を裸の３０Ｆ１１およびＤＯＴＡ－３０Ｆ１１でインキュベートし、結合抗体を検出するために抗ラットＩｇＧ２ｂPEを使用してフローサイトメトリーによって結合Ａｂの量を決定した。
前述のようにＤＯＴＡ－３０Ｆ１１を111Ｉｎまたは225Ａｃで放射能標識して、比活性をそれぞれ５μＣｉ／１μｇ（１：１）または１μＣｉ／１μｇ（１：１）の抗体とし、放射化学的純度を９９±１とした。
（１）Ｃ５７Ｂ１／６マウスにおける抗ＣＤ４５抗体３０Ｆ１１の体内分布。
Ｃ５７Ｂｌ／６マウスに比活性が５μＣｉ／μｇである６０μｇの111Ｉｎ－３０Ｆ１１を静脈内注射した。注射の１～２４０時間後、脾臓が111Ｉｎ標識３０Ｆ１１を最高に取り込んだことが分かり、続いて骨髄および肝臓であった。腎臓、卵巣、肺および血液は、最低限の取り込みを示した。各器官についての体内分布を時間活性曲線に当てはめて、器官毎の累積活性を計算した。次いで、表６に報告される投与活性当たりの器官に対する線量を得るために225Ａｃの平衡線量定数を適用した。
Figure 2022548694000007
（２）Ｂ６－Ｌｙ5aマウスにおける225Ａｃ－３０Ｆ１１の線量依存性忍容性。
225Ａｃ－ＣＤ４５抗体放射性コンジュゲートの忍容性を決定するために、Ｃ５７Ｂｌ／６（コホート１つにつき５匹）をＤａｙ０において線量を増大しつつ225Ａｃ－３０Ｆ１１で処置した。尾静脈内に（静脈内）注射した合計１０ｕｇ（約０．５ｍｇ／ｋｇ）の３０Ｆ１１抗体（１００～２００ｕＬの量）において、３つの増大線量レベル（１００ｎＣｉ、２５０ｎＣｉおよび５００ｎＣｉ）を投与した。本試験のための対照として５匹の未処置マウスを供した。前処置の直前に、ベースライン時の血球数測定のための対照マウスから、処置前の血液試料を得た。Ｗｅｅｋ１およびＷｅｅｋ２にＲＢＣおよびＷＢＣの各々を測定し、Ｗｅｅｋ４にマウスを安楽死させた。安楽死させたマウスから血液を回収し、肝臓毒性および腎臓毒性について分析した。すなわち、血中尿素窒素（ＢＵＮ）、クレアチン、アラニントランスアミナーゼ（ＡＬＴ）およびアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）を測定した。カプラン－マイヤーグラフによって、１００ｎＣｉおよび２５０ｎＣｉの線量の各々で忍容性は良好であったが、５００ｎＣｉ線量では１週後の生存確率の減少が示されたことが示された。
（３）Ｂ６－Ｌｙ５aマウスにおける225Ａｃ－３０Ｆ１１の安全性プロファイル。
２２５Ａｃ－ＣＤ４５骨髄移植の安全性プロファイルを決定するために、Ｃ５７Ｂ１／６のマウスを、以下のように、225Ａｃ－３０Ｆ１１で処置し、ドナー骨髄（ＣＤ４５．１）で再構成した。すなわち、１００ｎＣｉまたは２５０ｎＣｉの225Ａｃ－３０Ｆ１１を（上記のように）Ｄａｙ０に注射した。前処置の４日後、コホートの半分は、尾静脈を介して注射された１０7個の有核細胞の骨髄の標的密度でＣ５７Ｂｌ／６－Ｌｙ５bマウスから採取された類遺伝子性骨髄（ＢＭＴ）の投与を受けた。体重ならびに健康および挙動の変化の明白な徴候について、定期的にマウスをモニタした。
血液回収によって移植およびドナーキメラ化を評価し、１２週目にマウスを安楽死させた。総ＷＢＣ数、総ＲＢＣ数、総ＨＳＣ数、総好中球数および総血小板数ならびにＢＵＮ、クレアチニン、ＡＬＴおよびＡＳＴによって移植を評価した。
結果：５００ｎＣｉ 225Ａｃ－３０Ｆ１１は、この骨髄破壊様相のための最大耐量であることが分かった。２５０ｎＣｉおよび１００ｎＣｉの225Ａｃ－３０Ｆ１１で処置したマウスは、いかなる長期血液学的毒性もなしで、線量依存的様式で、有効な骨髄破壊的前処置およびドナーＢＭ移植を示した。
結論：225Ａｃで武装した汎ＣＤ４５標的抗体３０Ｆ１１は、ＢＭＴのための安全で効力のある標的前処置アプローチであると思われる。このデータは、225Ａｃ武装抗体を使用したＢＭＴの前におけるＣＤ４５標的アブレーションの発展を支持する。
実施例１０－177Ｌｕ抗ＣＤ４５および131Ｉ抗ＣＤ４５によるリンパ枯渇
罹患体が操作自己由来ＣＡＲ－Ｔ細胞または操作同種ＣＡＲ－Ｔ細胞などのある用量の養子細胞移入の投与を受ける前に、多くの場合高用量化学療法を使用してリンパ枯渇ステップを行うことは、一般的である。このプロセスは、移入細胞を移植することが可能となるために骨髄などの免疫微小環境内に十分な空きを生じさせるために重要であると考えられる。さらに、それは、ドナーリンパ球の確立および増殖のための良好なサイトカインプロファイルを誘発すると思われる。本試験において、マウスモデルにおける有効なリンパ枯渇を媒介するためのベータ放射体177Ｌｕ（６．６日間の半減期、１．５ｍｍの経路長）の使用を試験する。マウスモデルにおいて、特定の免疫細胞型における標的ＲＩＴリンパ枯渇の応答と、結果として生じる免疫サイトカイン発現の変化とを検討するために、177Ｌｕ標識および131Ｉ標識代理抗マウス汎ＣＤ４５抗体（３０Ｆ１１）を使用した前臨床試験を行った。
非骨髄破壊的線量の177Ｌｕ－ＣＤ４５－ＲＩＴの単回投与の後、リンパ枯渇のためのリンパ球サブセットおよび骨髄サブセットならびにサイトカインプロファイリングのための血清を評価するために、免疫表現型検査のための処置の９６時間後および１０日後に、８～１２週齢のＣ５７Ｂｌ／６マウスから、末梢血試料、骨髄試料および脾臓試料を回収した。177Ｌｕ－ＣＤ４５－ＲＩＴは、免疫抑制性Ｔ ｒｅｇおよびＭＤＳＣを含むリンパ球および骨髄細胞の両方を効果的にリンパ枯渇することを示した。ＯＶＡ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞による養子細胞移入の前のＥ．Ｇ７リンパ腫保持マウスにおけるこの標的リンパ枯渇レジメンを評価する試験も示す。
方法および材料
抗マウス汎ＣＤ４５抗体３０Ｆ１１をルテチウム－１７７（177Ｌｕ－ＣＤ４５）およびヨウ素１３１（131Ｉ－ＣＤ４５）で標識し、放射能標識汎ヒトＢＣ８の代用物として使用して、マウスにおける標的リンパ枯渇を行った。免疫反応性は、ＣＤ４５＋細胞ベース結合アッセイにおいて９５％超であったことが確認された。
マウスにおけるリンパ枯渇試験のために、免疫細胞サブセットを選択的に枯渇させる能力を決定するために、２０μＣｉもしくは４０μＣｉの177Ｌｕまたは５０μＣｉもしくは１００μＣｉの131Ｉで標識された２０ｕｇの３０Ｆ１１で、雌性思春期Ｃ５７Ｂｌ／６マウスを処置した。フローサイトメトリーによって、免疫細胞サブセットの定量を測定した。
ＯＴ Ｉマウスモデルにおけるリンパ枯渇試験のために、１００ｍｍ３の腫瘍容積に達するまで、雌性思春期Ｃ５７Ｂｌ／６ ＣＤ４５．１マウスにＯＶＡ発現ＣＤ４５＋Ｅ．Ｇ７－ＯＶＡリンパ腫細胞を皮下注射した。腫瘍細胞の注射のおよそ７日後に、マウスを177Ｌｕ－ＣＤ４５（４０μＣｉ）、131ＩＣＤ４５（１００μＣｉ）で処置したか、またはリンパ枯渇処置を行わなかった。リンパ枯渇の４日後に、ＣＤ４５．２ＯＴ Ｉマウスから単離された単離ＣＤ８＋Ｔ細胞をマウスに投与した。腫瘍容積および体重をモニタし、腫瘍容積が４０００ｍｍ3を超えたか、または壊死性になった場合、マウスを屠殺した。
結果
抗ＣＤ４５抗体を２０：１の比でＤＯＴＡにコンジュゲートし、次いで５：１の比で111Ｉｎで標識した。比活性が５μＣｉ／μｇである６０μｇの111Ｉｎ標識抗ＣＤ４５抗体をＣ５７Ｂｌ／６マウスに腹腔内注射し、示された時点でｍｉｃｒｏＳＰＥＣＴ／ＣＴによって抗体分布をモニタした。ＣＤ４５抗体は、免疫系器官、すなわち、リンパ節、脾臓および骨髄に戻った（図２０参照）。
放射能標識抗ＣＤ４５抗体177Ｌｕ－ＣＤ４５および131Ｉ－ＣＤ４５は、血小板、赤血球または骨髄細胞に影響を及ぼすことなく、ＣＤ４５＋免疫細胞サブセットを一過性に枯渇させることが分かった。図２１に示されるように、（Ａ）２０μＣｉもしくは４０μＣｉの177Ｌｕ－ＣＤ４５または（Ｂ）５０μＣｉもしくは１００μＣｉの131－Ｉ ＣＤ４５抗体による、腫瘍を保持しないＣ５７Ｂ／６マウスの処置は、骨髄細胞、赤血球または血小板に影響を及ぼすことなく、様々な免疫細胞集団を一過性にリンパ枯渇することに同様に有効であった。
その上、177Ｌｕ放射能標識抗ＣＤ４５抗体は、脾臓におけるＣＤ４５発現免疫細胞サブセットを一過性に枯渇させることが分かった。図２２に示されるように、４０μＣｉの177Ｌｕ－ＣＤ４５抗体による、腫瘍を保持しないＣ５７Ｂ／６マウスの処置は、調節性Ｔ細胞（Ｔ－ｒｅｇ）を含む脾臓における様々な免疫集団を一過性に枯渇させることに有効だった。このリンパ枯渇によって、ＯＴ１養子細胞治療モデルにおける腫瘍制御が可能になった。
図２３に示されるように、Ｅ．Ｇ７腫瘍移植の後、マウスは、前処置（未処置およびＯＴ Ｉ）を受けなかったか、またはＤａｙ０に４０μＣｉの１７７Ｌｕ－ＣＤ４５もしくは１００μＣｉの１３１Ｉ－ＣＤ４５で前処置され、次いで、Ｄａｙ４に、１×１０6個のＯＴ Ｉ ＣＤ８＋ＣＤ４５．２ＯＶＡ反応性Ｔ細胞の投与を受けた。パネルＡは、養子導入ＯＴ Ｉ Ｔ細胞がＥＧ．７腫瘍増殖の制御を可能にした前における177Ｌｕ－ＣＤ４５および131Ｉ－ＣＤ４５によって媒介された標的前処置の結果を示す。パネルＢは、各群における個別のマウスについての腫瘍の大きさを示す。屠殺時に、マウスにおいてＯＴ１ Ｔ細胞の残存および拡大が確認された。パネルＣは、対照マウス（すなわち、前処置またはＯＴ Ｉ Ｔ細胞の投与を受けなかった）、ＯＴ１Ｔ細胞の投与を受けたマウス、ならびに177Ｌｕ－ＣＤ４５および131Ｉ－ＣＤ４５によって媒介された標的前処置も受けたマウスの全生存率を示す。
結論
これらの試験は、養子細胞治療の前の一過性非骨髄破壊的標的リンパ枯渇レジメンとして低線量の177Ｌｕ－ＣＤ４５放射線免疫治療または131Ｉ－ＣＤ４５放射線免疫治療を使用することの実現可能性を示す。111Ｉｎ－ＣＤ４５イメージングは、ＣＤ４５標的化によって免疫特権組織に選択的に放射線を送達されることを示した。試験は、４０μＣｉの177Ｌｕ－ＣＤ４５または１００μＣｉの131Ｉ－ＣＤ４５が、マウスにおける様々な免疫細胞サブセットを効果的に枯渇させることが可能であったが、骨髄細胞、赤血球および血小板を残すことが可能であったことを決定した。ＥＧ．７－ＯＶＡ腫瘍を保持するＣＤ４５．１ＯＴ１マウスを使用する養子細胞治療のモデルにおいて、ＲＩＴ媒介リンパ枯渇を受けたマウスは、リンパ枯渇を受けなかったマウスよりも腫瘍制御が増強したことを示した。このデータは、非骨髄破壊的線量の131Ｉ－ＣＤ４５ＲＩＴまたは177Ｌｕ－ＣＤ４５ＲＩＴを使用する養子細胞治療の前におけるＣＤ４５標的リンパ枯渇を支持する。
実施例１１－225Ａｃ－ＢＣ８：鎌状赤血球症（ＳＣＤ）
本実施例では、ＳＣＤの罹患体における遺伝子編集ＨＳＣによる移植に先立つＨＳＣアブレーション（すなわち、１００％枯渇）が記載される。
ＳＣＤは、世界的に最もよくみられる異常ヘモグロビン症である。アフリカ系アメリカ人の中のＳＣＤの発現率は、５００人におよそ１人である。米国において１００，０００人の個体が罹患していると推定される。ＳＣＤは、鎌状ヘモグロビンを産生するβ－グロビン遺伝子内の単一のヌクレオチド突然変異によって引き起こされる。ＳＣＤ罹患体は、貧血、血流閉塞発作（ＶＯＣ）、溶血、慢性器官機能不全および早期死を示す可能性がある。ＳＣＤの小児における死亡率は、１００，０００人当たり０．５人である。しかしながら、成人における死亡率は、１００，０００人当たり２．５人超であり、余命の中央値は、ＳＣＤの男性および女性の両方について、５０歳未満である。
現在では、ＳＣＤのための唯一の治癒的処置は、造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）である。不都合にも、ＳＣＤのためのＨＳＣＴは、問題がないわけではない。国際血液骨髄移植研究センターによれば、１９９１年から２０１７年４月にかけてＨＳＣＴを受けたＳＣＤの患者は、１，０８９人だけであった。ＨＳＣＴに関連するリスクとしては、同種ドナー幹細胞の使用から生じる合併症（例えば、移植片対宿主疾患）が挙げられる。
遺伝子編集技術の出現によって、現在、ＳＣＤの原因となるβ－グロビン遺伝子内の突然変異を修正した自己由来幹細胞を使用してＳＣＤ罹患体を治癒させる機会がある。幹細胞を修復するため、またはＳＣＤ罹患体から幹細胞を除去および置換するために、ＺＦＮ、ＴＡＬＥＮ、ＣＲＩＳＰＲ／ｃａｓ９および他のヌクレアーゼによって媒介される編集アプローチを使用することが可能であった。例えば、ＳｕｎおよびＺｈａｏ（Biotech. And Bioeng., 2014, 111(5)）は、ＴＡＬＥＮを使用して罹患体多能性（ｐｌｅｕｒｉｐｏｔｅｎｔ）ＨＳＣにおけるヒトβ－グロビン遺伝子突然変異の修復の成功を示した。加えて、Ｄｅｖｅｒら（Nature, 2016, 539:384-389）は、ＣＲＩＳＰＲ／ｃａｓ９を使用して罹患体ＨＳＣにおけるＳＣＤの原因となるＧｌｕ６Ｖａｌ突然変異の効率的修復を示した。現在、ＳＣＤのためのこのアプローチを使用する臨床試験が始まっている。
不都合にも、高用量化学療法または全身照射を使用する標準骨髄破壊的前処置レジメン（すなわち、１００％ＨＳＣ枯渇レジメン）は、自己由来遺伝子編集細胞移植のためを含む、移植のために現在使用されている。これらの罹患体のためのより安全でかつより有効な前処置方法の必要性がある。放射能標識ＢＣ８（例えば、225Ａｃ－ＢＣ８）は、罹患体の正常組織をより多く残す。とりわけ、ＳＣＤのより老年の罹患体は、それらの疾患の結果として、器官損傷をすでに有する可能性があり、骨髄破壊的前処置レジメンとしての非特異的放射線または化学療法に対する曝露によって、幹細胞移植を行うことがさらによりリスクが高くなる可能性があった。放射能標識ＢＣ８アプローチは、これらの罹患体のためのより良好な選択肢を示す。
さらに、疾患の遺伝的性質のため、遺伝子編集ＨＳＣの移植による疾患の修正は、疾患の合併症が不可逆性である可能性があり、罹患体の長期生存に否定的な影響がある可能性があるので、できるだけ若年期に行うこと好ましい。よって、遺伝子編集ＨＳＣを使用してＳＣＤに罹患した乳児または若い小児を処置することが想定される。この目的のために、放射能標識ＢＣ８、特に225Ａｃなどのアルファ線放射性核種で標識されたＢＣ８が理想的である。その非常に短い、高エネルギー放射線経路長を有する225Ａｃなどのアルファ線放射性核種の使用によって、放射線はＣＤ４５陽性細胞に集中し、（骨髄破壊的線量の131Ｉ－ＢＣ８で前処置するために必要であるように）処置された罹患体を分離する必要なしで有効な骨髄破壊が可能になる。
実施例１２－225Ａｃ－ＢＣ８：重症複合免疫不全（ＳＣＩＤ）
本実施例には、重症複合免疫不全（ＳＣＩＤ）の罹患体における遺伝子編集ＨＳＣによる移植に先立つＨＳＣアブレーションが記載される。
ＳＣＩＤは、罹患した罹患体が、付随するＢ細胞欠損の有無にかかわらず、重度のＴ細胞欠損を有することを示す生殖系列遺伝障害である。ＳＣＩＤは、罹患体が病原体に対する有効な抗体応答を開始することを阻止する適合的な免疫応答の欠損を含む。ＳＣＩＤは原発性免疫欠損の最も重度の形態であり、突然変異がＳＣＩＤをもたらす少なくとも９つの異なる知られた遺伝子がある。ＳＣＩＤ罹患体は、適合的な免疫応答を開始することができないので、感染に罹患しやすく、早期死亡率が高い。ＳＣＩＤは、生命を脅かす感染症を回避するために罹患体を無菌環境内に保たなければならないので、「バブルボーイ」疾患としても知られている。
ＳＣＩＤにおいて最も頻度が高い遺伝子欠損は、インターロイキンＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－７、ＩＬ－９、ＩＬ－１５およびＩＬ－２１に対する受容体によって共有されるタンパク質である一般的ガンマ鎖（γｃ）である。ＳＣＩＤをもたらす可能性がある他の変異遺伝子は、ＡＤＡおよびＪＡＫ３である。ＳＣＤと同様に、幹細胞移植による処置だけは、ＳＣＩＤのために潜在的に治癒的である。しかし、遅発性免疫回復およびＧＶＨＤは、これらの罹患体に対する著しいリスクである。また、ＳＣＤ罹患体と同様に、ＳＣＩＤ罹患体は若いので、移植前のより良好な前処置レジメンを含む、処置のための有効でかつ安全な方法を必要とする。
遺伝子編集技術は、ＳＣＩＤ罹患体自身のＨＳＣにおける欠損を正確に修復することが可能である。これらの操作ＨＳＣは、身体に戻されると、正常リンパ球を産生することが可能になり、感染に対して保護するための作用している適合的免疫応答を確立することができる。最近、Ｃｈａｎｇら（Cell Reports, 2015, 12:1668-1677）は、マウスにおけるＪＡＫ３遺伝子内の突然変異のＣＲＩＳＰＲ／ｃａｓ９媒介修復を介して正常リンパ球発生を効果的に回復することを報告した。さらに、Ａｌｚｕｂｉら（Nature, Scientific Reports, 2017, 7:12475）は、最近、マウスにおける、Ｘ－ＳＣＩＤの原因となる遺伝子であるＩＬ２ＲＧ（一般的ガンマ鎖）内の遺伝子欠損を正確に修復するためのＴＡＬＥＮ技術の使用を示した。
ヒトＳＣＩＤ罹患体を前処置するための、より安全で、かつより有効な方法が開発されることが重要である。これらの主に若い罹患体を安全に前処置するために、例えば225Ａｃ－ＢＣ８によるアルファ放射体ＣＤ４５放射線免疫治療が必要である。
実施例１３－225Ａｃ－ＢＣ８：非悪性障害のための処置の概要
表７は、アクチニウム放射能標識ＢＣ８抗体（すなわち、前処置剤；225Ａｃ－ＢＣ８）の投与を介したＨＳＣ枯渇後の遺伝子編集幹細胞投与を使用する、選択された処置レジメンを要約したものである。
Figure 2022548694000008

Claims (29)

  1. 有効量の放射能標識抗ＣＤ４５抗体を含む組成物を投与することを含む、異常ヘモグロビン症または血液疾患もしくは血液障害を処置するための方法であって、
    前記有効量が単一線量として投与され、前記放射能標識抗ＣＤ４５抗体がアクチニウム－２２５標識抗体（225Ａｃ）またはルテチウム－１７７標識抗体（177Ｌｕ）を含む、方法。
  2. 前記放射能標識抗ＣＤ４５抗体が、配列番号１に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖または配列番号９に示される通りのＮ末端アミノ酸配列を有する軽鎖を有する225Ａｃ－ＢＣ８を含む、請求項１に記載の方法。
  3. 前記放射能標識抗ＣＤ４５抗体が、配列番号３、配列番号４または配列番号５に示される通りのアミノ酸配列を有する少なくとも１つの相補性決定領域を有する軽鎖を有する225Ａｃ－ＢＣ８を含む、請求項１に記載の方法。
  4. 前記放射能標識抗ＣＤ４５抗体が、配列番号１２または配列番号１３に示される通りのアミノ酸配列を有する軽鎖を有する225Ａｃ－ＢＣ８を含む、請求項１に記載の方法。
  5. 前記放射能標識抗ＣＤ４５抗体が、配列番号２に示されるアミノ酸配列を有する重鎖または配列番号１０に示される通りのＮ末端アミノ酸配列を有する重鎖を有する225Ａｃ－ＢＣ８を含む、請求項１に記載の方法。
  6. 前記放射能標識抗ＣＤ４５抗体が、配列番号６、配列番号７または配列番号８に示される通りのアミノ酸配列を有する少なくとも１つの相補性決定領域を有する重鎖を有する225Ａｃ－ＢＣ８を含む、請求項１に記載の方法。
  7. 前記放射能標識抗ＣＤ４５抗体が、配列番号１５または配列番号１６に示される通りのアミノ酸配列を有する重鎖を有する225Ａｃ－ＢＣ８を含む、請求項１に記載の方法。
  8. 前記放射能標識抗ＣＤ４５抗体が、（Ｎ末端アミノ酸に対して）１４１位のアミノ酸ＡＳＰまたはＡＳＮを有する225Ａｃ－ＢＣ８を含む、請求項１に記載の方法。
  9. ＢＣ８タンパク質の集団におけるＡＳＰ：ＡＳＮの比が、１：９９～９９：１、例えば、１０：９０～９０：１０である、請求項８に記載の方法。
  10. 有効量の第２の剤を投与することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
  11. 前記第２の剤が放射線増感剤を含む、請求項１２に記載の方法。
  12. 前記放射線増感剤が、Ｂｃｌ－２阻害剤、ＨＤＡＣ阻害剤またはそれらの組合せを含む、請求項１５に記載の方法。
  13. 前記組成物がアクチニウム－２２５標識ＢＣ８抗体（225Ａｃ－ＢＣ８）および非標識抗ＣＤ４５抗体を含み、前記標識ＢＣ８および前記非標識抗ＣＤ４５抗体の各々の線量が、罹患体の質量、罹患体の年齢、罹患体の性別および／または罹患体の健康状態から選択される罹患体特異的特性に基づいて選択される、請求項１に記載の方法。
  14. 前記有効量の前記放射能標識抗ＣＤ４５抗体が、前記対象のリンパ球の少なくとも５０％を枯渇させるが、前記対象における骨髄破壊を誘導しない、請求項１に記載の方法。
  15. 前記有効量の前記放射能標識抗ＣＤ４５抗体が、造血起源の循環腫瘍細胞を枯渇させる、請求項１４に記載の方法。
  16. 前記有効量の前記放射能標識抗ＣＤ４５が、骨髄に２Ｇｙ以下の放射線量を、または前記骨髄に少なくとも２Ｇｙ～８Ｇｙ未満を提供する、請求項１４に記載の方法。
  17. 前記放射能標識抗ＣＤ４５が225Ａｃ－ＢＣ８を含み、前記有効量が、０．１ｕＣｉ／ｋｇ～１．０ｕＣｉ／ｋｇの線量、または１０ｕＣｉ～１５０ｕＣｉの線量を含む、請求項１５に記載の方法。
  18. 前記有効量の前記アクチニウム－２２５抗ＣＤ４５がＣＤ４５＋循環腫瘍細胞を枯渇させるが、行わない、請求項２６に記載の方法
  19. 前記罹患体が骨髄移植を必要とする、請求項１４に記載の方法。
  20. 前記放射能標識抗ＣＤ４５抗体の前記投与の４日後、５日後、６日後、７日後、８日後または９日後に前記骨髄移植を行うことをさらに含む、請求項１９に記載の方法。
  21. 前記有効量の前記放射能標識抗ＣＤ４５が、調節性Ｔ細胞、骨髄由来サプレッサー細胞、腫瘍感作マクロファージ、ＩＬ－１および／またはＩＬ－６を分泌する活性化マクロファージ、ならびにそれらの組合せを枯渇させる、請求項１に記載の方法。
  22. 前記有効量の前記放射能標識抗ＣＤ４５が、骨髄に８Ｇｙ超の放射線量を提供する、請求項２１に記載の方法。
  23. 前記放射能標識抗ＣＤ４５抗体の前記投与の６日後、７日後または８日後に、キメラ抗原受容体またはＴ細胞受容体（ＣＡＲ／ＴＣＲ）を発現する有効量の細胞集団を前記対象に投与することをさらに含む、
    請求項１６または請求項２２に記載の方法。
  24. 前記対象が、遺伝子編集細胞治療を介して処置可能な非癌性障害に罹患しており、前記障害を処置するためにそのような治療を受けようとしているところであり、単一線量として前記有効量の前記放射能標識抗ＣＤ４５抗体を投与する、請求項１に記載の方法。
  25. 前記障害が、異常ヘモグロビン症、先天性免疫不全およびウイルス感染からなる群から選択される、請求項２４に記載の方法。
  26. 前記障害が、鎌状赤血球症（ＳＣＤ）、重症複合免疫不全症（ＳＣＩＤ）、β－サラセミアおよびファンコニ貧血からなる群から選択される、請求項２４に記載の方法。
  27. 前記障害がＳＣＤであり、前記治療が遺伝子編集β－グロビン造血幹細胞治療である、請求項２６に記載の方法。
  28. 前記障害がＳＣＩＤであり、前記治療が遺伝子編集造血幹細胞治療であり、前記編集遺伝子が、一般的ガンマ鎖（γｃ）遺伝子、アデノシンデアミナーゼ（ＡＤＡ）遺伝子およびヤヌスキナーゼ３（ＪＡＫ３）遺伝子からなる群から選択される、請求項２７に記載の方法。
  29. 前記血液疾患が、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄増殖性新生物またはそれらの組合せである、請求項１に記載の方法。
JP2022517380A 2019-09-17 2020-09-17 抗ｃｄ４５イムノグロブリンの放射能標識およびその使用方法 Pending JP2022548694A (ja)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201962901290P 2019-09-17 2019-09-17
US62/901,290 2019-09-17
PCT/US2020/051324 WO2021055638A1 (en) 2019-09-17 2020-09-17 Radiolabeling of anti-cd45 immunoglobulin and methods of use thereof

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JP2022548694A true JP2022548694A (ja) 2022-11-21
JPWO2021055638A5 JPWO2021055638A5 (ja) 2023-09-27

Family

ID=74883490

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2022517380A Pending JP2022548694A (ja) 2019-09-17 2020-09-17 抗ｃｄ４５イムノグロブリンの放射能標識およびその使用方法

Country Status (7)

Country Link
US (1) US20220378955A1 (ja)
EP (1) EP4031188A4 (ja)
JP (1) JP2022548694A (ja)
CN (1) CN114728074A (ja)
AU (1) AU2020350677A1 (ja)
CA (1) CA3154732A1 (ja)
WO (1) WO2021055638A1 (ja)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2023137335A2 (en) * 2022-01-11 2023-07-20 Actinium Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating cd33-positive hematological malignancies
WO2023183927A2 (en) 2022-03-24 2023-09-28 Actinium Pharmaceuticals, Inc. Humanized anti-cd45 antibodies

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5273738A (en) * 1990-03-03 1993-12-28 Fred Hutchinson Cancer Research Center Radiation delivery to lymphoid and marrow tissues
EP3297684B1 (en) * 2015-05-21 2020-12-23 Actinium Pharmaceuticals, Inc. Infusion administration of conjugated monoclonal antibodies
CN116334142A (zh) * 2015-06-09 2023-06-27 爱迪塔斯医药公司 用于改善移植的crispr/cas相关方法和组合物
EP3307282A4 (en) * 2015-06-12 2019-05-01 Immunomedics, Inc. TREATMENT OF DISEASES WITH CHIMERIC ANTIGEN RECEPTOR (CAR) AND T-CELL (T-CAR) OR NK (CAR-NK) CELL EXPRESSION CONSTRUCTIONS CAR CONSTRUCTIONS
CA3016901C (en) * 2016-03-07 2023-06-13 Actinium Pharmaceuticals, Inc. Stabilized radiolabeled anti-cd45 immunoglobulin compositions
CA3078963A1 (en) * 2017-10-25 2019-05-02 Actinium Pharmaceuticals, Inc. Anti-cd45-based conditioning methods and uses thereof in conjunction with gene-edited cell-based therapies
WO2019136422A1 (en) * 2018-01-08 2019-07-11 Actinum Pharmaceuticals, Inc. Combination immunotherapy and chemotherapy for the treatment of a hematological malignancy

Also Published As

Publication number Publication date
CA3154732A1 (en) 2021-03-25
US20220378955A1 (en) 2022-12-01
EP4031188A1 (en) 2022-07-27
EP4031188A4 (en) 2023-11-01
AU2020350677A1 (en) 2022-04-14
WO2021055638A1 (en) 2021-03-25
CN114728074A (zh) 2022-07-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2350477T5 (es) Internalización de anticuerpos anti-CD74 y métodos de uso
RU2658438C2 (ru) Химерное терапевтическое антитело нн1 против cd-37
JP5855209B2 (ja) 放射免疫コンジュゲートおよびその使用
Richman et al. High-dose radioimmunotherapy combined with fixed, low-dose paclitaxel in metastatic prostate and breast cancer by using a MUC-1 monoclonal antibody, m170, linked to indium-111/yttrium-90 via a cathepsin cleavable linker with cyclosporine to prevent human anti-mouse antibody
BRPI0607486B1 (pt) Anticorpo humanizado l243 contra hla-dr presente nas células hladr+,composição farmacêutica, kit e uso dos referidos anticorpos.
EP3049118B1 (en) Anti-cd146 monoclonal antibody
US11912780B2 (en) Anti-CD45-based conditioning methods and uses thereof in conjunction with gene-edited cell-based therapies
BR112020018560A2 (pt) Agentes de ligação bi específicos e usos dos mesmos
US20220378955A1 (en) Radiolabeling of anti-cd45 immunoglobulin and methods of use thereof
CN116940386A (zh) 吡咯并苯并二氮杂䓬-抗体缀合物以及其用途
JP2022529536A (ja) 悪性および非悪性血液疾患の治療のための免疫枯渇の組成物および方法
CA3137568A1 (en) Compositions and methods of immunodepletion for the treatment of malignant and non-malignant hematological diseases
Jurcic et al. Advances in immunotherapy of hematologic malignancies: cellular and humoral approaches
Goldenberg et al. Program and Abstracts Ninth Conference on Cancer Therapy with Antibodies and Immunoconjugates

Legal Events

Date Code Title Description
A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20230919

A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20230919