RU2616238C1 - Способ иммунологического анализа - Google Patents
Способ иммунологического анализа Download PDFInfo
- Publication number
- RU2616238C1 RU2616238C1 RU2016114383A RU2016114383A RU2616238C1 RU 2616238 C1 RU2616238 C1 RU 2616238C1 RU 2016114383 A RU2016114383 A RU 2016114383A RU 2016114383 A RU2016114383 A RU 2016114383A RU 2616238 C1 RU2616238 C1 RU 2616238C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- solution
- prototype
- chloride
- results
- reaction
- Prior art date
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
Abstract
Изобретение относится к медицине и касается способа иммунологического анализа, включающего адсорбцию биоспецифических лигандов на поверхность частиц коллоидных растворов гексацианферрата железа (II) (III), последующее их соединение с подлежащим тестированию биоматериалом в разведенном водном солевом растворе, где в качестве водного солевого раствора используют или водный раствор хлорида рубидия, или водный раствор хлорида цезия. Изобретение обеспечивает уменьшение времени постановки реакции и уменьшение процента ложнопозитивных результатов. 8 пр., 8 табл.
Description
Изобретение относится к областям биотехнологии, иммунохимии, ветеринарии и медицины, может быть использовано в решении задач диагностики различных инфекционных и соматических заболеваний человека и животных. При таких заболеваниях в организме возникают антитела, комплиментарные антигенам, лежащим в основе патогенеза заболевания. Данные антигены и антитела могут обнаруживаться в крови и являться маркерами конкретной нозологии. Однако до настоящего времени не созданы диагностические препараты, отличающиеся стабильностью и воспроизводимостью иммунохимических свойств и позволяющие проводить такие реакции бесприборно, в практически полевых условиях. Отсутствуют надежные и простые методы для скрининговых исследований животных и населения, относящихся к группам риска, что важно для коррекции терапии и определения прогноза заболевания. Цель изобретения - разработка бесприборного экспресс-метода для определения наличия специфических антигенов и антител, удаление ложноположительных результатов иммунохимического анализа.
Аналогом данного способа является способ определения различных антигенов и антител путем мечения одного из этих компонентов, именуемых в дальнейшем биолигандами, различными метками - радиоактивными, ферментными, флуоресцентными, эритроцитарными [1 - Ройт А. Основы иммунологии. М. 1991. - С. 91-93.], [2 - Покровский В.И. Руководство по иммунологии инфекционного процесса. - М. 1994. - С. 230], [3 - Никитин В.М. Справочник методов иммунологии. Кишинев, 1982. - 304 с.]. Данные способы выявления антигенов и антител отличаются длительным временем постановки, значительными материальными затратами, опасностью для персонала при работе со специфическими метками. Кроме того, они требуют для своего исполнения наличия дорогих и сложных в эксплуатации приборов.
Известны коллоидные растворы неорганической природы, на поверхности которых адсорбированы специфические биолиганды. К таковым относят препараты коллоидного золота с адсорбированными биолигандами [4 - Ред. Жданов В.М. Методы исследования в молекулярной, общей и медицинской вирусологии. - М. 1987. - С. 80-89] и препараты коллоидных растворов гексацианферрата железа (берлинской лазури) [5 - Попова С.В., Мешандин А.Г., Куклина С.А. Российский биомедицинский журнал. С-Петербург. - 2009, т. 10. – С. 478-491]. Данные способы выявления специфических биолигандов не требуют каких-либо специальных приборов, однако дороги (золото - драгоценный металл) имеют при своем исполнении определенное количество ложноположительных результатов.
Наиболее близко к поставленной цели изобретения является способ, описанный в [6 - Мешандин А.Г. Патент РФ №2485516 от 02.02.2012 г.]. Согласно известному способу, постановка реакций агглютинационного иммунологического анализа включает разведение гидрозольных препаратов в подлежащих тестированию образцах биологического материала в водном солевом растворе, в качестве раствора используют раствор хлорида лития. Согласно данному способу, взятому заявителем за прототип, гидрозольный препарат разводят в подлежащих тестированию образцах биологического материала в водном растворе хлорида лития.
Однако данный способ приводит к появлению ложноположительных результатов и длителен по времени постановки. Целью настоящего изобретения являются снижение количества ложноположительных результатов и уменьшение времени постановки анализа. Поставленная цель достигается описанным ниже способом - коллоидные растворы гексацианферрата железа (II) (III) с адсорбированными на их поверхности биоспецифическими лигандами вводят во взаимодействие с подлежащими тестированию биологическими материалами в водном солевом растворе, отличающийся тем, что в качестве раствора используют водный раствор или хлорида рубидия, или хлорида цезия. Использование водного раствора или хлорида рубидия, или хлорида цезия является отличительным признаком заявляемого решения. Благодаря реализации данного способа уменьшается процент ложнопозитивных иммунологических реакций, уменьшается время постановки реакции.
Изобретение иллюстрируется следующими примерами конкретного выполнения.
Пример №1. Осуществляют нагружение коллоидного раствора гексацианферрата железа (II) (III) генно-инженерным антигеном туберкулезным по известным методам [8 - Мешандин А.Г. Патент РФ №2169924, 12.09.1996 г.]. В качестве модификатора поверхности частиц используют катион ртути в виде раствора хлорида ртути (II). Далее осуществляют постановку иммунологической реакции в 1% растворе хлорида лития (прототип) и в заявляемом варианте-растворе хлорида цезия разной концентрации. Сыворотки получают путем взятия небольшого количества (не более 0,1 мл) объема крови. Полученная кровь центрифугируется для осаждения форменных элементов. Допускается получение крови венопункцией, либо капиллярным взятием. Далее производят разведение сывороток в титрах 1:10. в 1% растворе хлорида лития (прототип) и в растворе хлорида цезия разной концентрации (заявляемое техническое решение). После осуществления разведения сывороток в указанных водных растворах, соединяют их с исходным коллоидным раствором гексацианферрата железа (гидрозолем), и осуществляют учет результатов реакции. Результаты реакции представлены в таблице 1.
Из представленных данных видны преимущества предлагаемого решения по сравнению с прототипом по позициям время постановки и % ложнопозитивных результатов. Вместе с тем, чувствительность реакции была аналогичной как у прототипа, так и в заявляемом техническом решении. Выход за оптимальные концентрации в заявляемом решении приводит к ухудшению результатов - в нижнем пределе концентрации хлорида цезия нет преимуществ перед прототипом, в верхнем пределе сокращается время постановки, однако недопустимо увеличивается % ложноположительных результатов.
Пример №2. Осуществляют нагружение коллоидного раствора гексацианферрата железа (II) (III) генно-инженерным антигеном туберкулезным по известным методам [8 - Мешандин А.Г. Патент РФ №2169924, 12.09.1996 г.]. В качестве модификатора поверхности частиц используют катион ртути в виде раствора хлорида ртути (II). Далее осуществляют постановку иммунологической реакции в 1% растворе хлорида лития (прототип) и в заявляемом варианте-растворе хлорида рубидия разной концентрации. Сыворотки получают аналогично примеры №1. Далее производят разведение сывороток в титрах 1:10. в 1% растворе хлорида лития (прототип) и в растворе хлорида рубидия разной концентрации (заявляемое техническое решение). После осуществления разведения сывороток в указанных водных растворах, соединяют их с исходным коллоидным раствором гексацианферрата железа (II) (III) (гидрозолем), и осуществляют учет результатов реакции. Результаты реакции представлены в таблице 2.
Пример №3. Осуществляют нагружение раствора коллоидного гексацианферрата железа (II) (III) антителами к хорионическому гонадотропину человека (ХГЧ) по известным методам [8]. Далее осуществляют постановку иммунологической реакции в 1% растворе хлорида лития (прототип) и в заявляемом варианте-растворе хлорида рубидия разной концентрации. Использовали в качестве биоматериала мочу как беременных женщин (положительный контроль), так и женщин не беременных (отрицательный контроль). Разведение использовали в соотношении 1:5., в остальном постановка была аналогична примеру №1. Результаты реакции представлены в таблице 3.
Из представленных данных видны преимущества предлагаемого решения по сравнению с прототипом по позициям время постановки и % ложнопозитивных результатов. Вместе с тем, чувствительность реакции была аналогичной как у прототипа, так и в заявляемом техническом решении. Выход за оптимальные концентрации в заявляемом решении приводит к ухудшению результатов - в нижнем пределе концентрации хлорида рубидия нет преимуществ перед прототипом, в верхнем пределе сокращается время постановки, однако недопустимо увеличивается % ложноположительных результатов.
Пример №4. Осуществляют нагружение раствора коллоидного гексацианферрата железа (II) (III) антителами к хорионическому гонадотропину человека (ХГЧ) по известным методам [8]. Далее осуществляют постановку иммунологической реакции в 1% растворе хлорида лития (прототип) и в заявляемом варианте-растворе хлорида цезия разной концентрации. Использовали в качестве биоматериала мочу как беременных женщин (положительный контроль), так и женщин не беременных (отрицательный контроль). Разведение использовали в соотношении 1:5., в остальном постановка была аналогична примеру №1. Результаты реакции представлены в таблице 4.
Из представленных данных видны преимущества предлагаемого решения по сравнению с прототипом по позициям время постановки и % ложнопозитивных результатов. Вместе с тем, чувствительность реакции была аналогичной как у прототипа, так и в заявляемом техническом решении. Выход за оптимальные концентрации в заявляемом решении приводит к ухудшению результатов - в нижнем пределе концентрации хлорида цезия нет преимуществ перед прототипом, в верхнем пределе сокращается время постановки, однако недопустимо увеличивается % ложноположительных результатов.
Пример №5. Осуществляют нагружение коллоидного раствора гексацианферрата железа (II) (III) антигенами к вирусу птичьего гриппа по известным методам [4]. Далее осуществляют постановку иммунологической реакции в 1% растворе хлорида лития (прототип) и в заявляемом варианте-растворе хлорида рубидия разной концентрации. Использовали в качестве биоматериала сыворотки крови птиц иммунизированных (положительный контроль), так и неиммунизированных (отрицательный контроль). Разведение использовали в соотношении 1:20, в остальном постановка была аналогична примерам №1-2. Результаты реакции представлены в таблице 5.
Из представленных данных видны преимущества предлагаемого решения по сравнению с прототипом по позициям время постановки и % ложнопозитивных результатов. Вместе с тем, чувствительность реакции была аналогичной как у прототипа, так и в заявляемом техническом решении. Выход за оптимальные концентрации в заявляемом решении приводит к ухудшению результатов - в нижнем пределе концентрации хлорида рубидия нет преимуществ перед прототипом, в верхнем пределе сокращается время постановки, однако недопустимо увеличивается % ложноположительных результатов.
Пример №6. Осуществляют нагружение коллоидного раствора гексацианферрата железа (II) (III) антигенами к вирусу птичьего гриппа по известным методам [4]. Далее осуществляют постановку иммунологической реакции в 1% растворе хлорида лития (прототип) и в заявляемом варианте-растворе хлорида цезия разной концентрации. Использовали в качестве биоматериала сыворотки крови птиц иммунизированных (положительный контроль), так и неиммунизированных (отрицательный контроль). Разведение использовали в соотношении 1:20, в остальном постановка была аналогична примерам №1-2. Результаты реакции представлены в таблице 6.
Из представленных данных видны преимущества предлагаемого решения по сравнению с прототипом по позициям время постановки и % ложнопозитивных результатов. Вместе с тем, чувствительность реакции была аналогичной как у прототипа, так и в заявляемом техническом решении. Выход за оптимальные концентрации в заявляемом решении приводит к ухудшению результатов - в нижнем пределе концентрации хлорида цезия нет преимуществ перед прототипом, в верхнем пределе сокращается время постановки, однако недопустимо увеличивается % ложноположительных результатов.
Пример №7. Осуществляют нагружение коллоидного раствора гексацианферрата железа (II) (III) антителами к поверхностному антигену вируса гепатита B (HbsAg) по известным методам [8]. В качестве модификатора поверхности коллоидных частиц используют катион двухвалентной ртути в виде раствора хлорида ртути (II). Далее осуществляют постановку иммунологической реакции в 1% растворе хлорида лития (прототип) и в заявляемом варианте-растворе хлорида цезия разной концентрации. Разведение использовали в соотношении 1:2, в остальном постановка была аналогична примеру №1. Результаты реакции представлены в таблице 7.
Из представленных данных видны преимущества предлагаемого решения по сравнению с прототипом по позициям время постановки и % ложнопозитивных результатов. Вместе с тем, чувствительность реакции была аналогичной как у прототипа, так и в заявляемом техническом решении. Выход за оптимальные концентрации в заявляемом решении приводит к ухудшению результатов - в нижнем пределе концентрации хлорида цезия нет преимуществ перед прототипом, в верхнем пределе сокращается время постановки, однако недопустимо увеличивается % ложноположительных результатов, превышающий таковой даже в прототипе.
Пример №8. Осуществляют нагружение раствора коллоидного раствора гексацианферрата железа (II) (III) антителами к поверхностному антигену вируса гепатита B (HbsAg) по известным методам [8]. В качестве модификатора поверхности коллоидных частиц используют катион двухвалентной ртути в виде раствора хлорида ртути (II). Далее осуществляют постановку иммунологической реакции в 1% растворе хлорида лития (прототип) и в заявляемом варианте-растворе хлорида рубидия разной концентрации. Разведение использовали в соотношении 1:2, в остальном постановка была аналогична примеру №1. Результаты реакции представлены в таблице 8.
Из представленных данных видны преимущества предлагаемого решения по сравнению с прототипом по позициям время постановки и % ложнопозитивных результатов. Вместе с тем, чувствительность реакции была аналогичной как у прототипа, так и в заявляемом техническом решении. Выход за оптимальные концентрации в заявляемом решении приводит к ухудшению результатов - в нижнем пределе концентрации хлорида рубидия нет преимуществ перед прототипом, в верхнем пределе сокращается время постановки, однако недопустимо увеличивается % ложноположительных результатов, превышающий таковой даже в прототипе.
Таким образом, из приведенных примеров конкретного выполнения видны преимущества заявляемого изобретения в сравнении с прототипом по снижению времени постановки анализа и уменьшению количества ложноположительных результатов анализа.
Claims (1)
- Способ иммунологического анализа, включающий адсорбцию биоспецифических лигандов на поверхность частиц коллоидных растворов гексацианферрата железа (II) (III), последующее их соединение с подлежащим тестированию биоматериалом в разведенном водном солевом растворе, отличающийся тем, что в качестве водного солевого раствора используют или водный раствор хлорида рубидия, или водный раствор хлорида цезия.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2016114383A RU2616238C1 (ru) | 2016-04-13 | 2016-04-13 | Способ иммунологического анализа |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2016114383A RU2616238C1 (ru) | 2016-04-13 | 2016-04-13 | Способ иммунологического анализа |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2616238C1 true RU2616238C1 (ru) | 2017-04-13 |
Family
ID=58642474
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2016114383A RU2616238C1 (ru) | 2016-04-13 | 2016-04-13 | Способ иммунологического анализа |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2616238C1 (ru) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2169924C2 (ru) * | 1996-09-12 | 2001-06-27 | Мешандин Алексей Гаврилович | Способ агглютинационного иммунологического анализа |
| WO2009152543A1 (de) * | 2008-06-17 | 2009-12-23 | Erber Aktiengesellschaft | Immunochromatographisches verfahren und testsystem zur bestimmung von wenigstens einem analyten in einer zu untersuchenden testlösung |
| RU2485516C1 (ru) * | 2012-02-02 | 2013-06-20 | Алексей Гаврилович Мешандин | Способ постановки реакции иммунологического анализа |
-
2016
- 2016-04-13 RU RU2016114383A patent/RU2616238C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2169924C2 (ru) * | 1996-09-12 | 2001-06-27 | Мешандин Алексей Гаврилович | Способ агглютинационного иммунологического анализа |
| WO2009152543A1 (de) * | 2008-06-17 | 2009-12-23 | Erber Aktiengesellschaft | Immunochromatographisches verfahren und testsystem zur bestimmung von wenigstens einem analyten in einer zu untersuchenden testlösung |
| RU2485516C1 (ru) * | 2012-02-02 | 2013-06-20 | Алексей Гаврилович Мешандин | Способ постановки реакции иммунологического анализа |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| GUO M., et al., Expression and self-assembly in baculovirus of porcine enteric calicivirus capsids into virus-like particles and their use in an enzyme-linked immunosorbent assay for antibody detection in swine.J Clin Microbiol. 2001 Apr;39(4):1487-93. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US9389229B2 (en) | Methods for detecting and measuring aggregation | |
| US20120015350A1 (en) | Lateral flow strip and uses thereof | |
| CN105823880B (zh) | 一种利用钩状效应拓展检测范围的生物芯片及其检测方法 | |
| KR100209072B1 (ko) | 숙신이미드함유 중합체로 생물학적 활성 시약을 제조하는 방법, 분석 요소 및 이것의 사용방법 | |
| JP2022046716A (ja) | 免疫凝集反応を用いた濃度測定における被験物質濃度の適正性の判定方法およびそのための処理部を有する試料分析装置 | |
| WO2012113907A2 (en) | Paper support and method of recovering biological material therefrom | |
| WO2012113911A1 (en) | Solid support and method of recovering biological material therefrom | |
| JPH0795065B2 (ja) | 水不溶性試薬、それを含む要素及びその使用方法 | |
| RU2360252C1 (ru) | Диагностикум и тест-система для определения активности антирабических сывороток и препарата гетерологичного антирабического иммуноглобулина in vitro методом дот-иммуноанализа | |
| RU2616238C1 (ru) | Способ иммунологического анализа | |
| EP2883062B1 (en) | Use of antioxidants in methods and means for detection of target molecules in a blood sample | |
| WO2012113906A2 (en) | Solid support and method of enhancing the recovery of biological material therefrom | |
| RU2485516C1 (ru) | Способ постановки реакции иммунологического анализа | |
| RU2298791C2 (ru) | Метод иммунологической диагностики беременности и бесплодия коров и телок | |
| JPS5991369A (ja) | 生物学的流体中の物質の遊離部分の分析法 | |
| KR101726181B1 (ko) | 면역크로마토그래피 분석용 디바이스 | |
| RU2484477C1 (ru) | Способ иммунохимического анализа | |
| RU2508405C1 (ru) | Способ получения инкорпорированных контрольных образцов для иммуноферментных тест-систем путем сушки в лунках планшета | |
| JP5586232B2 (ja) | 微小粒子の凝集反応を用いる検体の免疫学的測定方法および測定用キット | |
| RU2195668C2 (ru) | Способ постановки реакции агглютинационного иммунологического анализа | |
| JPH08292192A (ja) | 免疫測定法 | |
| JPH08193999A (ja) | 免疫測定法 | |
| RU2729635C1 (ru) | Набор для выявления антигенов возбудителей инфекционных заболеваний в формате дот-иммуноанализа "у постели больного" | |
| JP3657015B2 (ja) | 免疫反応測定用試薬キット | |
| JPS6262291B2 (ru) |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD4A | Correction of name of patent owner | ||
| QB4A | Licence on use of patent |
Free format text: LICENCE FORMERLY AGREED ON 20190924 Effective date: 20190924 |
|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20200414 |