RU2615448C2 - Описание способа культивирования животной клетки - Google Patents
Описание способа культивирования животной клетки Download PDFInfo
- Publication number
- RU2615448C2 RU2615448C2 RU2013135255A RU2013135255A RU2615448C2 RU 2615448 C2 RU2615448 C2 RU 2615448C2 RU 2013135255 A RU2013135255 A RU 2013135255A RU 2013135255 A RU2013135255 A RU 2013135255A RU 2615448 C2 RU2615448 C2 RU 2615448C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- antibody
- cultivation
- temperature
- cell
- culture
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 67
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 title description 37
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 title description 8
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 claims abstract description 25
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims abstract description 19
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 9
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims abstract 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 92
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 84
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 73
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 20
- 239000000654 additive Substances 0.000 claims description 5
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 4
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 4
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 3
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 claims description 3
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 claims 1
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 claims 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 6
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 4
- 102100021594 Interleukin-31 receptor subunit alpha Human genes 0.000 abstract description 3
- 101710131691 Interleukin-31 receptor subunit alpha Proteins 0.000 abstract description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 102000010956 Glypican Human genes 0.000 abstract 1
- 108050001154 Glypican Proteins 0.000 abstract 1
- 108050007237 Glypican-3 Proteins 0.000 abstract 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 50
- 239000000306 component Substances 0.000 description 30
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 22
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 19
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 15
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 15
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 238000012365 batch cultivation Methods 0.000 description 7
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 7
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 7
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 7
- 238000012366 Fed-batch cultivation Methods 0.000 description 6
- 239000012526 feed medium Substances 0.000 description 6
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 6
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 6
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 6
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 5
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 5
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 5
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 5
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 5
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 5
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 4
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 4
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000004269 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 4
- 108010017080 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 4
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 4
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 4
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 4
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 4
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N Riboflavin Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N 0.000 description 4
- OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N adenosine Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 4
- OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N folic acid Chemical compound C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 4
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 4
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 3
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 3
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 3
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 3
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 3
- 238000012786 cultivation procedure Methods 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 3
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 3
- 125000003835 nucleoside group Chemical group 0.000 description 3
- 230000000426 osmoregulatory effect Effects 0.000 description 3
- 239000006179 pH buffering agent Substances 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 3
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 3
- 239000004017 serum-free culture medium Substances 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 3
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 3
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 3
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 3
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 3
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 3
- QDGAVODICPCDMU-UHFFFAOYSA-N 2-amino-3-[3-[bis(2-chloroethyl)amino]phenyl]propanoic acid Chemical compound OC(=O)C(N)CC1=CC=CC(N(CCCl)CCCl)=C1 QDGAVODICPCDMU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000001763 2-hydroxyethyl(trimethyl)azanium Substances 0.000 description 2
- ALYNCZNDIQEVRV-UHFFFAOYSA-N 4-aminobenzoic acid Chemical compound NC1=CC=C(C(O)=O)C=C1 ALYNCZNDIQEVRV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000015081 Blood Coagulation Factors Human genes 0.000 description 2
- 108010039209 Blood Coagulation Factors Proteins 0.000 description 2
- 235000019743 Choline chloride Nutrition 0.000 description 2
- 102000007644 Colony-Stimulating Factors Human genes 0.000 description 2
- 108010071942 Colony-Stimulating Factors Proteins 0.000 description 2
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 2
- AUNGANRZJHBGPY-UHFFFAOYSA-N D-Lyxoflavin Natural products OCC(O)C(O)C(O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O AUNGANRZJHBGPY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 2
- CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N D-OH-Asp Natural products OC(=O)C(N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N D-alpha-Ala Natural products CC([NH3+])C([O-])=O QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- 102000003951 Erythropoietin Human genes 0.000 description 2
- 108090000394 Erythropoietin Proteins 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N Guanosine Chemical compound C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 2
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 2
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 2
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 2
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 description 2
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 2
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 2
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 2
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N L-Alanine Natural products C[C@@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N 0.000 description 2
- CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N L-Aspartic acid Natural products OC(=O)[C@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N 0.000 description 2
- FFEARJCKVFRZRR-UHFFFAOYSA-N L-Methionine Natural products CSCCC(N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N L-Ornithine Chemical compound NCCC[C@H](N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 229930064664 L-arginine Natural products 0.000 description 2
- 235000014852 L-arginine Nutrition 0.000 description 2
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- 229930182844 L-isoleucine Natural products 0.000 description 2
- 239000004395 L-leucine Substances 0.000 description 2
- 235000019454 L-leucine Nutrition 0.000 description 2
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 229930195722 L-methionine Natural products 0.000 description 2
- 229930182821 L-proline Natural products 0.000 description 2
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N N-Pteroyl-L-glutaminsaeure Natural products C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N Niacin Chemical compound OC(=O)C1=CC=CN=C1 PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 2
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 2
- 102100033571 Tissue-type plasminogen activator Human genes 0.000 description 2
- 108050006955 Tissue-type plasminogen activator Proteins 0.000 description 2
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 2
- DRTQHJPVMGBUCF-XVFCMESISA-N Uridine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-XVFCMESISA-N 0.000 description 2
- 102000003990 Urokinase-type plasminogen activator Human genes 0.000 description 2
- 108090000435 Urokinase-type plasminogen activator Proteins 0.000 description 2
- 229930003779 Vitamin B12 Natural products 0.000 description 2
- DFPAKSUCGFBDDF-ZQBYOMGUSA-N [14c]-nicotinamide Chemical compound N[14C](=O)C1=CC=CN=C1 DFPAKSUCGFBDDF-ZQBYOMGUSA-N 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 2
- 229960003767 alanine Drugs 0.000 description 2
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 2
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 2
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 2
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 2
- 229960005261 aspartic acid Drugs 0.000 description 2
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 2
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 2
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 2
- 239000003114 blood coagulation factor Substances 0.000 description 2
- XXWCODXIQWIHQN-UHFFFAOYSA-N butane-1,4-diamine;hydron;dichloride Chemical compound Cl.Cl.NCCCCN XXWCODXIQWIHQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FAPWYRCQGJNNSJ-UBKPKTQASA-L calcium D-pantothenic acid Chemical compound [Ca+2].OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC([O-])=O.OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC([O-])=O FAPWYRCQGJNNSJ-UBKPKTQASA-L 0.000 description 2
- 229960002079 calcium pantothenate Drugs 0.000 description 2
- 238000005341 cation exchange Methods 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 229960003178 choline chloride Drugs 0.000 description 2
- SGMZJAMFUVOLNK-UHFFFAOYSA-M choline chloride Chemical compound [Cl-].C[N+](C)(C)CCO SGMZJAMFUVOLNK-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- FDJOLVPMNUYSCM-WZHZPDAFSA-L cobalt(3+);[(2r,3s,4r,5s)-5-(5,6-dimethylbenzimidazol-1-yl)-4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] [(2r)-1-[3-[(1r,2r,3r,4z,7s,9z,12s,13s,14z,17s,18s,19r)-2,13,18-tris(2-amino-2-oxoethyl)-7,12,17-tris(3-amino-3-oxopropyl)-3,5,8,8,13,15,18,19-octamethyl-2 Chemical compound [Co+3].N#[C-].N([C@@H]([C@]1(C)[N-]\C([C@H]([C@@]1(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=C(\C)/C1=N/C([C@H]([C@@]1(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=C\C1=N\C([C@H](C1(C)C)CCC(N)=O)=C/1C)[C@@H]2CC(N)=O)=C\1[C@]2(C)CCC(=O)NC[C@@H](C)OP([O-])(=O)O[C@H]1[C@@H](O)[C@@H](N2C3=CC(C)=C(C)C=C3N=C2)O[C@@H]1CO FDJOLVPMNUYSCM-WZHZPDAFSA-L 0.000 description 2
- 229910000365 copper sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L copper(II) sulfate Chemical compound [Cu+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000012364 cultivation method Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- BVTBRVFYZUCAKH-UHFFFAOYSA-L disodium selenite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-][Se]([O-])=O BVTBRVFYZUCAKH-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 2
- 229940105423 erythropoietin Drugs 0.000 description 2
- 229960000304 folic acid Drugs 0.000 description 2
- 235000019152 folic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000011724 folic acid Substances 0.000 description 2
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 2
- 229960002989 glutamic acid Drugs 0.000 description 2
- 229960002743 glutamine Drugs 0.000 description 2
- 229960002449 glycine Drugs 0.000 description 2
- 150000002337 glycosamines Chemical group 0.000 description 2
- -1 growth cofactors Substances 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 229960002885 histidine Drugs 0.000 description 2
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 2
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 2
- 229940047122 interleukins Drugs 0.000 description 2
- RBTARNINKXHZNM-UHFFFAOYSA-K iron trichloride Chemical compound Cl[Fe](Cl)Cl RBTARNINKXHZNM-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- VCJMYUPGQJHHFU-UHFFFAOYSA-N iron(3+);trinitrate Chemical compound [Fe+3].[O-][N+]([O-])=O.[O-][N+]([O-])=O.[O-][N+]([O-])=O VCJMYUPGQJHHFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NPFOYSMITVOQOS-UHFFFAOYSA-K iron(III) citrate Chemical compound [Fe+3].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NPFOYSMITVOQOS-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 2
- 229960003136 leucine Drugs 0.000 description 2
- AGBQKNBQESQNJD-UHFFFAOYSA-M lipoate Chemical compound [O-]C(=O)CCCCC1CCSS1 AGBQKNBQESQNJD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 235000019136 lipoic acid Nutrition 0.000 description 2
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 2
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 2
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 2
- 229960004452 methionine Drugs 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 2
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 2
- FGIUAXJPYTZDNR-UHFFFAOYSA-N potassium nitrate Chemical compound [K+].[O-][N+]([O-])=O FGIUAXJPYTZDNR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N potassium;[2-butyl-5-chloro-3-[[4-[2-(1,2,4-triaza-3-azanidacyclopenta-1,4-dien-5-yl)phenyl]phenyl]methyl]imidazol-4-yl]methanol Chemical compound [K+].CCCCC1=NC(Cl)=C(CO)N1CC1=CC=C(C=2C(=CC=CC=2)C2=N[N-]N=N2)C=C1 OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 229960002429 proline Drugs 0.000 description 2
- FCHXJFJNDJXENQ-UHFFFAOYSA-N pyridoxal hydrochloride Chemical compound Cl.CC1=NC=C(CO)C(C=O)=C1O FCHXJFJNDJXENQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RADKZDMFGJYCBB-UHFFFAOYSA-N pyridoxal hydrochloride Natural products CC1=NC=C(CO)C(C=O)=C1O RADKZDMFGJYCBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960002477 riboflavin Drugs 0.000 description 2
- 235000019192 riboflavin Nutrition 0.000 description 2
- 239000002151 riboflavin Substances 0.000 description 2
- 239000011781 sodium selenite Substances 0.000 description 2
- 235000015921 sodium selenite Nutrition 0.000 description 2
- 229960001471 sodium selenite Drugs 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- WPLOVIFNBMNBPD-ATHMIXSHSA-N subtilin Chemical compound CC1SCC(NC2=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C(C)CC)C(=O)NC(=C)C(=O)NC(CCCCN)C(O)=O)CSC(C)C2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C1NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C1NC(=O)C(=C/C)/NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)CNC(=O)C(NC(=O)C(NC(=O)C2NC(=O)CNC(=O)C3CCCN3C(=O)C(NC(=O)C3NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(=C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(CCCCN)NC(=O)C(N)CC=4C5=CC=CC=C5NC=4)CSC3)C(C)SC2)C(C)C)C(C)SC1)CC1=CC=CC=C1 WPLOVIFNBMNBPD-ATHMIXSHSA-N 0.000 description 2
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 229960000344 thiamine hydrochloride Drugs 0.000 description 2
- DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M thiamine hydrochloride Chemical compound Cl.[Cl-].CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 235000019190 thiamine hydrochloride Nutrition 0.000 description 2
- 239000011747 thiamine hydrochloride Substances 0.000 description 2
- 229960002663 thioctic acid Drugs 0.000 description 2
- 229960002898 threonine Drugs 0.000 description 2
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 2
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 2
- 229960004799 tryptophan Drugs 0.000 description 2
- 229960005356 urokinase Drugs 0.000 description 2
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 2
- 235000019163 vitamin B12 Nutrition 0.000 description 2
- 239000011715 vitamin B12 Substances 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L zinc sulfate Chemical compound [Zn+2].[O-]S([O-])(=O)=O NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229910000368 zinc sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 229960001763 zinc sulfate Drugs 0.000 description 2
- LNAZSHAWQACDHT-XIYTZBAFSA-N (2r,3r,4s,5r,6s)-4,5-dimethoxy-2-(methoxymethyl)-3-[(2s,3r,4s,5r,6r)-3,4,5-trimethoxy-6-(methoxymethyl)oxan-2-yl]oxy-6-[(2r,3r,4s,5r,6r)-4,5,6-trimethoxy-2-(methoxymethyl)oxan-3-yl]oxyoxane Chemical compound CO[C@@H]1[C@@H](OC)[C@H](OC)[C@@H](COC)O[C@H]1O[C@H]1[C@H](OC)[C@@H](OC)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](OC)[C@H](OC)O[C@@H]2COC)OC)O[C@@H]1COC LNAZSHAWQACDHT-XIYTZBAFSA-N 0.000 description 1
- UHDGCWIWMRVCDJ-UHFFFAOYSA-N 1-beta-D-Xylofuranosyl-NH-Cytosine Natural products O=C1N=C(N)C=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-2,4-dioxo-1,3-diazinane-5-carboximidamide Chemical compound CN1CC(C(N)=N)C(=O)NC1=O IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YKBGVTZYEHREMT-KVQBGUIXSA-N 2'-deoxyguanosine Chemical compound C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](CO)O1 YKBGVTZYEHREMT-KVQBGUIXSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QWJSAWXRUVVRLH-LREBCSMRSA-M 2-hydroxyethyl(trimethyl)azanium;(2r,3r)-2,3,4-trihydroxy-4-oxobutanoate Chemical compound C[N+](C)(C)CCO.OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O QWJSAWXRUVVRLH-LREBCSMRSA-M 0.000 description 1
- PMUNIMVZCACZBB-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxyethylazanium;chloride Chemical compound Cl.NCCO PMUNIMVZCACZBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DVLFYONBTKHTER-UHFFFAOYSA-N 3-(N-morpholino)propanesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CCCN1CCOCC1 DVLFYONBTKHTER-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CKTSBUTUHBMZGZ-ULQXZJNLSA-N 4-amino-1-[(2r,4s,5r)-4-hydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-5-tritiopyrimidin-2-one Chemical compound O=C1N=C(N)C([3H])=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 CKTSBUTUHBMZGZ-ULQXZJNLSA-N 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100031650 C-X-C chemokine receptor type 4 Human genes 0.000 description 1
- 239000002126 C01EB10 - Adenosine Substances 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 1
- MIKUYHXYGGJMLM-GIMIYPNGSA-N Crotonoside Natural products C1=NC2=C(N)NC(=O)N=C2N1[C@H]1O[C@@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O MIKUYHXYGGJMLM-GIMIYPNGSA-N 0.000 description 1
- UHDGCWIWMRVCDJ-PSQAKQOGSA-N Cytidine Natural products O=C1N=C(N)C=CN1[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-PSQAKQOGSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- NYHBQMYGNKIUIF-UHFFFAOYSA-N D-guanosine Natural products C1=2NC(N)=NC(=O)C=2N=CN1C1OC(CO)C(O)C1O NYHBQMYGNKIUIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- 101150074155 DHFR gene Proteins 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001856 Ethyl cellulose Substances 0.000 description 1
- ZZSNKZQZMQGXPY-UHFFFAOYSA-N Ethyl cellulose Chemical compound CCOCC1OC(OC)C(OCC)C(OCC)C1OC1C(O)C(O)C(OC)C(CO)O1 ZZSNKZQZMQGXPY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000001690 Factor VIII Human genes 0.000 description 1
- 108010054218 Factor VIII Proteins 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 1
- 229920000084 Gum arabic Polymers 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 101000922348 Homo sapiens C-X-C chemokine receptor type 4 Proteins 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 229910021577 Iron(II) chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910021578 Iron(III) chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M Lactate Chemical compound CC(O)C([O-])=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 239000007993 MOPS buffer Substances 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 229910021586 Nickel(II) chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N Orn-delta-NH2 Natural products NCCCC(N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 241000282579 Pan Species 0.000 description 1
- 239000004264 Petrolatum Substances 0.000 description 1
- BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N Phenolsulfonephthalein Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1(C=2C=CC(O)=CC=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 241000978776 Senegalia senegal Species 0.000 description 1
- UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M Sodium bicarbonate-14C Chemical compound [Na+].O[14C]([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M 0.000 description 1
- 229920002125 Sokalan® Polymers 0.000 description 1
- 235000021355 Stearic acid Nutrition 0.000 description 1
- 102400001320 Transforming growth factor alpha Human genes 0.000 description 1
- 101800004564 Transforming growth factor alpha Proteins 0.000 description 1
- 235000010489 acacia gum Nutrition 0.000 description 1
- 239000000205 acacia gum Substances 0.000 description 1
- DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N acetic acid;2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;sodium Chemical compound [Na].CC(O)=O.OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 229960005305 adenosine Drugs 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 235000010419 agar Nutrition 0.000 description 1
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 1
- SHGAZHPCJJPHSC-YCNIQYBTSA-N all-trans-retinoic acid Chemical compound OC(=O)\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C SHGAZHPCJJPHSC-YCNIQYBTSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 1
- 229960004050 aminobenzoic acid Drugs 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- IYNDLOXRXUOGIU-LQDWTQKMSA-M benzylpenicillin potassium Chemical compound [K+].N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C([O-])=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 IYNDLOXRXUOGIU-LQDWTQKMSA-M 0.000 description 1
- DRTQHJPVMGBUCF-PSQAKQOGSA-N beta-L-uridine Natural products O[C@H]1[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-PSQAKQOGSA-N 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 229920003123 carboxymethyl cellulose sodium Polymers 0.000 description 1
- 229940063834 carboxymethylcellulose sodium Drugs 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 230000001112 coagulating effect Effects 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- 229960000355 copper sulfate Drugs 0.000 description 1
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 1
- 238000012136 culture method Methods 0.000 description 1
- UHDGCWIWMRVCDJ-ZAKLUEHWSA-N cytidine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-ZAKLUEHWSA-N 0.000 description 1
- 229940105990 diglycerin Drugs 0.000 description 1
- GPLRAVKSCUXZTP-UHFFFAOYSA-N diglycerol Chemical compound OCC(O)COCC(O)CO GPLRAVKSCUXZTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- HQPMKSGTIOYHJT-UHFFFAOYSA-N ethane-1,2-diol;propane-1,2-diol Chemical compound OCCO.CC(O)CO HQPMKSGTIOYHJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012869 ethanol precipitation Methods 0.000 description 1
- 229940073579 ethanolamine hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- 235000019325 ethyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920001249 ethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 229960000301 factor viii Drugs 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 1
- 229940049906 glutamate Drugs 0.000 description 1
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 229960005150 glycerol Drugs 0.000 description 1
- 229940029575 guanosine Drugs 0.000 description 1
- 210000004754 hybrid cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- FBAFATDZDUQKNH-UHFFFAOYSA-M iron chloride Chemical compound [Cl-].[Fe] FBAFATDZDUQKNH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- NMCUIPGRVMDVDB-UHFFFAOYSA-L iron dichloride Chemical compound Cl[Fe]Cl NMCUIPGRVMDVDB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L iron(2+) sulfate (anhydrous) Chemical compound [Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- RUTXIHLAWFEWGM-UHFFFAOYSA-H iron(3+) sulfate Chemical compound [Fe+3].[Fe+3].[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O RUTXIHLAWFEWGM-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 229910000359 iron(II) sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910000360 iron(III) sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 238000001638 lipofection Methods 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960003390 magnesium sulfate Drugs 0.000 description 1
- 229940099596 manganese sulfate Drugs 0.000 description 1
- 239000011702 manganese sulphate Substances 0.000 description 1
- 235000007079 manganese sulphate Nutrition 0.000 description 1
- SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L manganese(II) sulfate Chemical compound [Mn+2].[O-]S([O-])(=O)=O SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000012533 medium component Substances 0.000 description 1
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010981 methylcellulose Nutrition 0.000 description 1
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N monoethanolamine hydrochloride Natural products NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000403 monosodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- QMMRZOWCJAIUJA-UHFFFAOYSA-L nickel dichloride Chemical compound Cl[Ni]Cl QMMRZOWCJAIUJA-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000001968 nicotinic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960003512 nicotinic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000011664 nicotinic acid Substances 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Natural products CCCCCCCC(C)CCCCCCCCC(O)=O OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021313 oleic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 229960003104 ornithine Drugs 0.000 description 1
- 229940056211 paraffin Drugs 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 235000019271 petrolatum Nutrition 0.000 description 1
- 229940066842 petrolatum Drugs 0.000 description 1
- 239000007793 ph indicator Substances 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 229960003531 phenolsulfonphthalein Drugs 0.000 description 1
- 229920001993 poloxamer 188 Polymers 0.000 description 1
- 229920001495 poly(sodium acrylate) polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000004323 potassium nitrate Substances 0.000 description 1
- 235000010333 potassium nitrate Nutrition 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 229960004063 propylene glycol Drugs 0.000 description 1
- 235000013772 propylene glycol Nutrition 0.000 description 1
- 238000000164 protein isolation Methods 0.000 description 1
- ZUFQODAHGAHPFQ-UHFFFAOYSA-N pyridoxine hydrochloride Chemical compound Cl.CC1=NC=C(CO)C(CO)=C1O ZUFQODAHGAHPFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004172 pyridoxine hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- 235000019171 pyridoxine hydrochloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000011764 pyridoxine hydrochloride Substances 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 229930002330 retinoic acid Natural products 0.000 description 1
- 238000005185 salting out Methods 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 235000010413 sodium alginate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000661 sodium alginate Substances 0.000 description 1
- 229940005550 sodium alginate Drugs 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- NNMHYFLPFNGQFZ-UHFFFAOYSA-M sodium polyacrylate Chemical compound [Na+].[O-]C(=O)C=C NNMHYFLPFNGQFZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229910021336 sodium silicide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 239000008117 stearic acid Substances 0.000 description 1
- 125000004079 stearyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 150000005846 sugar alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- HPGGPRDJHPYFRM-UHFFFAOYSA-J tin(iv) chloride Chemical compound Cl[Sn](Cl)(Cl)Cl HPGGPRDJHPYFRM-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 229910021654 trace metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960001727 tretinoin Drugs 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 1
- DRTQHJPVMGBUCF-UHFFFAOYSA-N uracil arabinoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940045145 uridine Drugs 0.000 description 1
- 229960004295 valine Drugs 0.000 description 1
- 239000000230 xanthan gum Substances 0.000 description 1
- 235000010493 xanthan gum Nutrition 0.000 description 1
- 229920001285 xanthan gum Polymers 0.000 description 1
- 229940082509 xanthan gum Drugs 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
- C07K16/244—Interleukins [IL]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2866—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for cytokines, lymphokines, interferons
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
- C07K16/303—Liver or Pancreas
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
- C12P21/02—Preparation of peptides or proteins having a known sequence of two or more amino acids, e.g. glutathione
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/10—Immunoglobulins specific features characterized by their source of isolation or production
- C07K2317/14—Specific host cells or culture conditions, e.g. components, pH or temperature
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2511/00—Cells for large scale production
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2523/00—Culture process characterised by temperature
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Изобретения касаются способа снижения гетерогенности заряда целевого антитела, способа выработки целевого антитела со сниженной гетерогенностью заряда и способов приготовления лекарственного препарата для лечения злокачественных новообразований, содержащего антитело против глипикана 3 или антитело против IL-31RA. Представленный способ снижения гетерогенности заряда целевого антитела включает культивирование клетки СНО, которая вырабатывает антитело, при температуре 36-38°С до 3-7 дней после даты начала культивирования, и затем снижение температуры культивирования до 32-35°С однократно, и затем продолжение культивирования при сниженной температуре культивирования в течение приблизительно от 1 до 50 дней. Изобретения позволяют получать антитела со сниженной зарядовой гетерогенностью, которые могут быть использованы для изготовления лекарственных препаратов. 4 н. и 8 з.п. ф-лы, 3 ил., 3 пр.
Description
Область техники
Данное открытие относится к способу культивирования для модулирования гетерогенности целевого белка, при этом белок приготовлен культивированием животных клеток, которые вырабатывают белок, и к способу приготовления целевого белка с использованием того же способа. Более конкретно, данное открытие относится к способу приготовления целевого белка культивированием клеток, которые вырабатывают белок, где культивирование выполняется при нормальной температуре культивирования в течение некоторого периода и затем культивирование продолжается при температуре культивирования, сниженной до 25-35°C.
Предшествующий уровень техники
В случаях, когда животные клетки культивируются для того, чтобы добиться получения нативного белка, вырабатываемого клетками, или если целевой белок или ему подобный приготовлен культивированием животных клеток, в которые был введен ген, кодирующий белок, трудность заключалась в том, как модулировать в указанном нативном белке или целевом белке уровень гетерогенности компонентов, такой как зарядовая гетерогенность (кислотные пики, основные пики), и ассоциированной формы, которая, как правило, формируется из-за различий в дезамидированной форме, форме с замещенной или делетированной аминокислотой и структуре сахарной цепи.
В последние годы имеют место опасения по поводу проблем, таких как иммуногенность, и для того чтобы обеспечить безопасность и избежать осложнений на этапах выделения и очистки, существует необходимость в развитии клеточного способа культивирования, который модулирует уровень таких гетерогенных компонентов настолько, насколько это возможно.
Традиционно, развиваются различные способы культивирования животных клеток для решения вышеупомянутых проблем. Если быть точнее, были разработаны способы для снижения выработки белков в неправильно свернутой или агрегированной форме культивированием клеток при низкой температуре 27-30°C или низком pH (Патентный документ 1: WO 2008/131374) или добавлением меди и/или глутамата (Патентный документ 2: WO 2008/109410). Однако не имелось сообщений о способе контролирования зарядовой гетерогенности.
В качестве способа культивирования, посредством которого температура культивирования снижается до низкой температуры во время культивирования клеток CHO, был раскрыт способ, посредством которого количество выработанного белка, представляющего интерес, увеличено с использованием клеток CHO, которые обладают особенными характеристиками и которые проявляют повышение продуктивности представляющего интерес белка в расчете на клетку при низкой температуре (Патентный документ 3: JP H09-75077). Однако не было никаких предположений о модуляции гетерогенности представляющего интерес белка (предпочтительно, антитела), в частности зарядовой гетерогенности антитела, смещением температуры культивирования в сторону низкой температуры.
Цитированные источники
Патентные документы
Патентный документ 1: Международная патентная заявка № WO 2008/131374
Патентный документ 2: Международная патентная заявка № WO 2008/109410
Патентный документ 3: Японская нерассмотренная публикация патентной заявки № 09-075077
Сущность изобретения
Техническая задача
Задача данного открытия заключается в модулировании гетерогенности целевого белка, которая генернируется, при этом белок приготовлен культивированием животных клеток, которые вырабатывают белок.
Решение задачи
Авторы данного открытия приложили значительные усилия для того, чтобы решить вышеупомянутые задачи и, в качестве результата, обнаружили, что гетерогенность целевого белка может быть модулирована регулированием температурных условий для культивирования клеток. В частности, изобретатели обнаружили, что гетерогенность целевого белка может быть модулирована выполнением культивирования при нормальной температуре культивирования в течение некоторого периода и затем продолжением культивирования при сниженной температуре культивирования, и выполнили данное открытие на основе вышеупомянутого обнаружения.
Более конкретно, данное открытие относится к следующему:
(1) способ модулирования уровня гетерогенности компонентов целевого белка, при этом белок приготовлен культивированием животной клетки, которая вырабатывает белок для того, чтобы привести к тому, чтобы белок был выработан, где культивирование выполняется при нормальной температуре культивирования (36-38°C) в течение некоторого периода и затем культивирование продолжается при температуре культивирования, сниженной до 25-35°C;
(2) способ, как установлено в (1), где животная клетка является клеткой, имеющей такое свойство, что продуктивность целевого белка в расчете на клетку не возрастает или не снижается при более низкой температуре, чем нормальная температура культивирования (36-38°C);
(3) способ, как установлено выше, где модуляция уровня гетерогенности компонентов целевого белка включает в себя снижение уровня кислотных пиков;
(4) способ, как установлено выше, где культивирование выполняется при нормальной температуре культивирования до от 3 до 7 дней после даты начала культивирования и затем температура культивирования снижается;
(5) способ, как установлено выше, где культивирование выполняется при температуре 36-38°C в течение некоторого периода и затем культивирование продолжается при температуре культивирования, сниженной до 32-35°C;
(6) способ, как установлено выше, где клетка культивируется порционным культивированием, повторяемым порционным культивированием, подпитываемым порционным культивированием, повторяемым подпитываемым порционным культивированием, непрерывным культивированием или перфузионным культивированием;
(7) способ, как установлено выше, где животная клетка культивируется подпитываемым порционным культивированием;
(8) способ, как установлено выше, где животная клетка является клеткой, в которую был введен ген, кодирующий целевой белок;
(9) способ, как установлено выше, где целевой белок является антителом;
(10) способ, как установлено выше, где животная клетка является клеткой млекопитающего;
(11) способ, как установлено в (10), где клетка млекопитающего является клеткой CHO;
(12) способ, как установлено в (11), где клетка CHO выбрана из клеточных линий DG44, DXB-11, K-l и CHO-S;
(13) способ выработки целевого белка, где белок приготовлен культивированием клетки, которая вырабатывает белок с использованием способа, как установлено выше;
(14) способ, как установлено в (13), содержащий этап выращивания белка из культурального раствора после того, как была культивирована клетка, которая вырабатывает целевой белок;
(15) способ приготовления лекарственного препарата, содержащий белок, приготовленный способом, как установлено выше, в качестве активного ингредиента; и
(16) способ, как установлено выше, где целевой белок является анти-глипикан 3 антителом или анти-IL-31RA антителом.
Полезные эффекты изобретения
Данное открытие может быть очень выгодно использовано в выработке биологически активных пептидов или белков. Данное изобретение характеризуется тем, что оно может модулировать гетерогенность целевого белка, которая встречается, когда белок приготовлен культивированием животных клеток, которые вырабатывают белок. Таким образом, изобретение обладает большим потенциалом для выработки более гомогенных белков, упрощает этапы выделения и очистки и является преимущественным для промышленного производства. В частности, изобретение, как правило, может вносить значительный вклад в массовое обеспечение фармацевтическими антителами и тому подобное.
Краткое описание чертежей
Фиг. 1 демонстрирует результаты примера (Пример 1), рассматривающего снижение кислотных пиков антитела посредством температурного сдвига.
Фиг. 2 демонстрирует результаты примера (Пример 2), рассматривающего снижение кислотных пиков антитела посредством температурного сдвига.
Фиг. 3 демонстрирует результаты примера (Пример 3), рассматривающего снижение кислотных пиков антитела посредством температурного сдвига.
Описание вариантов осуществления
Варианты осуществления данного открытия далее будут описаны более подробно.
Способ в соответствии с данным открытием характеризуется модулированием уровня гетерогенности компонентов целевого белка, при этом белок приготовлен культивированием животной клетки, которая вырабатывает белок. В частности, разработанный способ характеризуется способом приготовления белка культивированием животной клетки, которая вырабатывает белок, где культивирование выполняется при нормальной температуре культивирования в течение некоторого периода и затем культивирование продолжается при температуре культивирования, сниженной до 25-35°C.
В одном аспекте данного изобретения в соответствии со способом культивирования по данному изобретению животная клетка является клеткой, имеющей такое свойство, что продуктивность целевого белка в расчете на клетку не возрастает или не снижается при более низкой температуре, чем нормальная температура культивирования (36-38°C).
Для целей данного описания выполнение культивирования при нормальной температуре культивирования в течение некоторого периода и затем продолжение культивирования при сниженной температуре культивирования называется "смещение температуры культивирования" или "температурный сдвиг". Нормальная температура культивирования часто лежит в пределах 36-38°C, что пригодно для роста полученных из гомеотермов клеток, и наиболее часто составляет 37°C. Сниженная температура культивирования называется "смещенная температура". Смещенная температура ниже, чем нормальная температура культивирования и составляет менее 37°C, для примера в пределах 25-35°C, предпочтительно в пределах 30-35°C и более предпочтительно в пределах 32-35°C.
Авторы данного открытия исследовали эффекты температурного сдвига на клеточные линии CHO, вырабатывающие рекомбинантное гуманизированное антитело, с точки зрения клеточной плотности, клеточной жизнеспособности, изменения в компонентах среды, концентрации выработанного антительного белка и изменения в гетерогенности компонентов антитела.
В результате было обнаружено, что по сравнению с контролем, который культивировался при температуре, поддерживавшейся при 37°C, во время всего периода культивирования, потребление глюкозы и накопление лактата было снижено, при этом количество жизнеспособных клеток и жизнеспособность поддерживались при условиях температурного сдвига. Дополнительно, с точки зрения свойств выработанного антитела, было обнаружено, что температурный сдвиг приводил к желаемому результату с точки зрения качества представляющего интерес продукта, т.е. к сниженному уровню кислотных пиков. Это явление указывает на то, что температурный сдвиг может модулировать уровень гетерогенности компонентов. Однако количество выработанного антительного белка слегка снижалось по сравнению со случаем культивирования при нормальных температурных условиях.
В одном аспекте данного изобретения модуляция уровня гетерогенности компонентов целевого белка включает в себя снижение зарядовой гетерогенности. "Зарядовая гетерогенность" относится к явлению, когда электрический заряд белка становится гетерогенным из-за уровня компонентов с более высоким pI, чем у главного компонента (основные пики), и компонентов с более низким pI (кислотные пики), что вызвано различиями в дезамидированной форме, формой с замещенной или удаленной аминокислотой и структуре сахарной цепи.
В еще одном аспекте данного изобретения модуляция уровня гетерогенности компонентов целевого белка включает в себя снижение уровня кислотных пиков.
Кислотные пики белка относятся к компонентам с более низким pI, чем у главного компонента, и, как правило, образуются из-за различий в дезамидированной форме и структуре сахарной цепи. Кислотные пики определяются ионообменной хроматографией и рассчитываются по отношению к главному компоненту (%).
Момент температурного сдвига варьируется в зависимости от типа животной клетки, которая будет использована, и условий культивирования. Для животной клетки, которая будет использована, было осуществлено тестирование для оптимизации использования в качестве индикатора баланса между продуктивностью представляющего интерес белка и уровнем гетерогенности компонентов.
В общем, процессы культивирования клеток подразделяются на порционное культивирование, непрерывное культивирование и подпитываемое порционное культивирование. Порционное культивирование является культуральным процессом, посредством которого малое количество раствора посевной культуры добавляется в среду и клетки выращиваются без добавления добавочной среды или выведения культурального раствора во время культивирования. Непрерывное культивирование является культуральным процессом, посредством которого среда непрерывно добавляется и выводится во время культивирования. Непрерывное культивирование также включает в себя перфузионнео культивирование. Fed-подпитываемое порционное культивирование, которое является промежуточным между порционным культивированием и непрерывным культивированием и также называется "полупорционное культивирование", является культуральным процессом, посредством которого среда непрерывно или последовательно добавляется во время культивирования но, в отличие от непрерывного культивирования, культуральный раствор не выводится непрерывно.
В способе по данному изобретению любой культуральный процесс может быть использован, но предпочтительно используется подпитываемое порционное культивирование или непрерывное культивирование, и особенно предпочтительно используется подпитываемое порционное культивирование. Среда, которая будет добавлена во время подпитываемого порционного культивирования (в дальнейшем в этом документе называемая "подпитывающая среда"), не должна обязательно быть той же средой, которая уже была использована для культивирования (в дальнейшем в этом документе называемая "первичная среда"); другая среда может быть добавлена, или только отдельные компоненты могут быть добавлены. Как правило, состав подпитывающей среды отрегулирован так, что компоненты, потребленные во время культивирования, пополняются. Например, глюкоза, основной источник энергии для роста животных клеток, может быть пополнена посредством стратегии подпитывания.
Момент температурного сдвига определяется по балансу между количеством представляющего интерес экспрессированного белка и уровнем кислотных пиков. В частности, оптимальный момент температурного сдвига может быть выяснен проведением испытания, приведенного в примере 2. Предпочтительно инициировать температурный сдвиг в такой момент, когда клеточная плотность становится достаточно высокой, т.е. обычно порядка от 106 клеток/мл до 108 клеток/мл, хотя она не может быть ограничена в узком диапазоне, потому что достигаемая клеточная плотность варьируется в зависимости от типа используемой клетки и условий культивирования.
В качестве компонентов культурального раствора для использования в способе по данному изобретению могут быть использованы различные компоненты, часто используемые в данной области в среде для культивирования клеток (предпочтительно, животных клеток), соответствующим образом, и примеры включают в себя аминокислоты, витамины, липидные факторы, источники энергии, осморегулирующие агенты, источники железа и буферизующие pH агенты. Вдобавок к вышеупомянутым компонентам также могут быть добавлены металлические следовые элементы, поверхностно-активные вещества, ростовые кофакторы, нуклеозиды и тому подобное.
Другие компоненты культурального раствора могут быть, в частности, проиллюстрированы аминокислотами, такими как L-аланин, L-аргинин, L-аспарагин, L-аспарагиновая кислота, L-глутамин, L-глутаминовая кислота, глицин, L-гистидин, L-изолейцин, L-лейцин, L-лизин, L-метионин, L-орнитин, L-фенилаланин, L-пролин, L-треонин, L-триптофан и L-валин, предпочтительно, такими как L-аланин, L-аргинин, L-аспарагин, L-аспарагиновая кислота, L-глутамин, L-глутаминовая кислота, глицин, L-гистидин, L-изолейцин, L-лейцин, L-лизин, L-метионин, L-фенилаланин, L-пролин, L-треонин, L-триптофан и L-валин; витаминами, такими как i-инозит, биотин, фолиевая кислота, липоевая кислота, никотинамид, никотиновая кислота, п-аминобензойная кислота, пантотенат кальция, пиридоксаль гидрохлорид, пиридоксина гидрохлорид, рибофлавин, тиамина гидрохлорид, витамин B12 и аскорбиновая кислота, предпочтительно, такими как биотин, фолиевая кислота, липоевая кислота, никотинамид, пантотенат кальция, пиридоксаль гидрохлорид, рибофлавин, тиамина гидрохлорид, витамин B12 и аскорбиновая кислота; липидными факторами, такими как холинхлорид, тартрат холина, линолевая кислота, олеиновые кислоты и холестерин, предпочтительно, такими как холинхлорид; источниками энергии, такими как глюкоза, галактоза, манноза и фруктоза, предпочтительно, такими как глюкоза; осморегулирующими агентами, такими как хлорид натрия, хлорид калия и нитрат калия, предпочтительно, такими как хлорид натрия; источниками железа, такими как железный EDTA, цитрат железа (III), хлорид железа (II), хлорид железа (III), сульфат железа (II), сульфат железа (III) и нитрат железа (III), предпочтительно, такими как хлорид железа (III), железный EDTA и цитрат железа (III); и буферизующими pH агентами, такими как гидрокарбонат натрия, хлорид кальция, дигидрофосфат натрия, HEPES, и MOPS, предпочтительно, таким как гидрокарбонат натрия.
Компоненты, которые могут быть добавлены вдобавок к вышеупомянутым компонентам, включают в себя, но не ограничены ими, металлические следовые элементы, такие как сульфат меди, сульфат марганца, сульфат цинка, сульфат магния, хлорид никеля, хлорид олова, хлорид магния и силицид натрия, предпочтительно, такие как сульфат меди, сульфат цинка и сульфат магния; поверхностно-активные вещества, такие как Tween 80 и Pluronic F68; ростовые кофакторы, такие как рекомбинантный инсулин, рекомбинантный IGF, рекомбинантный EGF, рекомбинантный FGF, рекомбинантный PDGF, рекомбинантный TGF-α, этаноламин гидрохлорид, селенит натрия, ретиноевая кислота и путресцин гидрохлорид, предпочтительно, такие как селенит натрия, этаноламин гидрохлорид, рекомбинантный IGF и путресцин гидрохлорид; и нуклеозиды, такие как дезоксиаденозин, дезоксицитидин, дезоксигуанозин, аденозин, цитидин, гуанозин и уридин. В предпочтительных примерах данного открытия, как описано выше, могут быть включены антибиотики, такие как стрептомицин, пенициллин G калия и гентамицин, и индикаторы pH, такие как феноловый красный.
Целесообразно, чтобы культуральный раствор содержал другие компоненты в следующих количествах: 0,05-1500 мг/л аминокислот, 0,001-10 мг/л витаминов, 0-200 мг/л липидных факторов, 1-20 г/л источников энергии, 0,1-10000 мг/л осморегулирующих агентов, 0,1-500 мг/л источников железа, 1-10000 мг/л буферизующих pH агентов, 0,00001-200 мг/л металлических следовых элементов, 0-5000 мг/л поверхностно-активных веществ, 0,05-10000 мкг/л ростовых кофакторов и 0,001-50 мг/л нуклеозидов, но эти содержания могут быть определены соответствующим образом в зависимости от типа клетки, которая будет культивирована, типа целевого белка и тому подобного.
pH культурального раствора варьируется в зависимости от типа клетки, которая будет культивирована, но пригодные подходящие pH обычно лежат в пределах от pH 6,8 до 7,6 и во многих случаях в пределах от pH 7,0 до 7,4.
В данном изобретении клетки могут культивироваться с использованием химически определенной среды, с растворенными в ней вышеизложенными компонентами. Альтернативно, также возможно использовать общеизвестную культуральную среду для животных клеток в качестве основной среды и дополнять ее другими компонентами по необходимости. Примеры коммерчески доступной основной среды, которая может быть использована в качестве культуральной среды для животных клеток, включают в себя, но не ограничены ими, D-MEM (среда Игла, модифицированная по способу Дульбекко), D-MEM/F-12 смесь 1:1 (среда Игла, модифицированная по способу Дульбекко: питательная смесь F-12), RPMI1640, CHO-S-SFMII (Invitrogen), CHO-SF (Sigma-Aldrich), EX-CELL 301 (JRH biosciences), CD-CHO (Invitrogen), IS CHO-V (Irvine Scientific) и PF-ACF-CHO (Sigma-Aldrich). В случаях, когда клетки культивируются подпитываемым порционным культивированием, такая коммерчески доступная среда может быть использована в качестве начальной среды, которая должна быть использована на ранней стадии культивирования клеток.
Предпочтительным вариантом данного открытия является способ модулирования уровня гетерогенности компонентов целевого белка, при этом культивирование животных клеток, таких как клетки COS и клетки CHO, в которые был встроен ген посредством генно-инженерной манипуляции, или слитые клетки типизируются по гибридомам, таким как мышино-человеческая, мышино-мышиная, мышино-крысиная и другие гибридные клетки. Способ по данному изобретению также может быть использован для культивирования животных клеток для того, чтобы попытаться получить нативный белок, выработанный клетками.
Животные клетки, которые будут использованы в данном открытии для экспрессирования целевого белка, не ограничены особым образом, но предпочтительны клетки млекопитающего. Клетки млекопитающего, которые будут использованы, могут быть клетками, полученными из любых млекопитающих, включая приматов, таких как люди, шимпанзе, и грызунов, таких как мыши, крысы и хомяки, но широко используемые животные клетки, такие как клетки CHO, COS, 3T3, миеломы, BHK, HeLa и Vero, являются предпочтительными, и клетки CHO являются особенно предпочтительными с целью высокой экспрессии. С целью приготовления целевого белка клетки, пригодные для внесения целевого гена, являются особенно предпочтительными, такие как клетки dhfr-CHO, которые являются клетками CHO, лишенными гена DHFR (Proc. Natl Acad. ScL USA (1980) 77, 4216-4220), и клетки CHO K-l (Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1968) 60, 1275).
Как выше изложено, клетки CHO, клеточные линии DG44, DXB-11, K-l и CHO-S предпочтительны, и клеточные линии DG44 и DXB-11 являются особенно предпочтительными.
Внесение векторов в клетки-хозяина может быть выполнено различными способами, включая способ с фосфатом кальция, способ с DEAE-декстраном, способ с использованием DOTAP катионной рибосомы (Boehringer Mannheim), электропорацию и липофекцию.
Особенно предпочтительными животными клетками в данном открытии являются клетки CHO, в которые был внесен ген, кодирующий целевой белок. Целевой белок не ограничен особым образом и может являться любым белком, включая антитела, такие как природные антитела, фрагменты антитела, миниантитела, химерные антитела, гуманизированные антитела и биспецифические антитела (например, анти-IL-6 рецептор антитела, анти-IL-6 антитела, анти-глипикан-3 антитела, анти-CD3 антитела, анти-CD20 антитела, анти-GPIIb/IIIa антитела, анти-TNF антитела, анти-CD25 антитела, анти-EGFR антитела, анти-Her2/neu антитела, анти-RSV антитела, анти-CD33 антитела, анти-CD52 антитела, анти-IgE антитела, анти-CD11a антитела, анти-VEGF антитела, анти-VLA4 антитела, анти-NR10 (IL-31RA) антитела, антиганглиозид GM3 антитела, анти-TPO агонист рецептора антитела, заменяющие коагулирующий фактор VIII антитела, анти-IL-31 рецептор антитела, анти-HLA антитела, анти-AXL антитела, анти-CXCR4 антитела, биспецифические антитела к факторам IX и X) и физиологически активные белки (например, гранулоцитарный колониестимулирующий фактор (G-CSF), гранулоцитарно-моноцитарный колониестимулирующий фактор (GM-CSF), эритропоетин, интерферон, интерлейкины, такие как IL-1 и IL-6, t-PA, урокиназа, сывороточные альбумины, факторы свертывания крови), но антитела являются особенно предпочтительными.
Антитела включают в себя не только моноклональные антитела, полученные у животных, таких как люди, мыши, крысы, хомяки, кролики и обезьяны, но также искусственно генетически модифицированные рекомбинантные антитела, такие как химерные антитела, гуманизированные антитела и биспецифические антитела. Класс иммуноглобулинов антител не ограничен особым образом и может являться любым классом, включая IgG (например, IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4), IgA, IgD, IgE и IgM, но IgG и IgM предпочтительны для фармацевтического использования. Антитела по данному открытию включают в себя не только полные антитела, но также фрагменты антител, такие как Fv, Fab и F(ab)2, и миниантитела, состоящие из одноцепочечного Fv (например, scFv, sc(Fv)2) моно-, двух- или большей валентости, в которых вариабельные области антитела соединены линкерами, такими как пептидные линкеры.
В предпочтительном варианте осуществления данное открытие представляет собой способ модулирования уровня кислотных пиков антитела во время культивирования клеток CHO, в которые был внесен ген, кодирующий антитело, с целью приготовления антитела, где культивирование выполняется при нормальной температуре культивирования до от 3 до 7 дней после даты начала культивирования, и затем температура культивирования снижается. Более конкретно, после того как культивирование выполнено при нормальной температуре культивирования, например, до 3, 4, 5, 6 или 7 дней после начала культивирования, осуществляется температурный сдвиг, и после этого культивирование продолжается при смещенной температуре.
Период после смещения температуры в сторону низкой температуры и до окончания культивирования обычно варьируется от 1 до 50 дней, предпочтительно от 5 до 15 дней и более предпочтительно от 7 до 12 дней.
Культуральные условия варьируются в зависимости от типа клеток, которые будут использованы, и таким образом подходящие условия могут быть определены соответствующим образом. Например, клетки CHO обычно могут быть культивированы в атмосфере газа CO2 в концентрации 0-40%, предпочтительно 2-10%, в течение 1-50 дней, предпочтительно 1-14 дней.
Культивирование может быть выполнено с использованием различных культуральных систем для животных клеток, таких как ферментерные емкостные культуральные системы, аэрлифтные культуральные системы, культуральные системы колбового типа, культуральные системы с вращающейся колбой, культуральные системы с микроносителем, культуральные системы с псевдоожиженным слоем, культуральные системы с полым волокном, культуральные системы с вращающимся флаконом и культуральные системы с уплотненным слоем.
Предпочтительные культуральные условия, выбранные в данном открытии, являются такими условиями, при которых уровень гетерогенности компонентов представляющего интерес белка, выработанного животными клетками, модулируется для достижения небольшого падения продуктивности. В действительности, авторы данного открытия обнаружили, что в соответствии с данной заявкой количество антитела, выработанного в расчете на клетку, слегка снижалось из-за температурного сдвига, но коррекция смещенной температуры и момента предоставляет возможность минимизации снижения количества экспрессированного представляющего интерес белка, а также модуляции уровня гетерогенности компонентов.
Для выработки белка с использованием животных клеток некоторые клетки необходимо только культивировать, или для некоторых могут требоваться специальные манипуляции, и манипуляции, культуральные условия или тому подобное могут быть определены соответствующим образом в зависимости от типа животных клеток, которые должны быть культивированы. Например, в случае, когда клетки CHO, трансформированные посредством генно-инженерной манипуляции вектором, содержащим ген, кодирующий антитело, такое как мышинно-человеческое химерное антитело или гуманизированное антитело, или любой другой белок, культивируются при вышеизложенных условиях, целевой белок может быть выработан в среде в течение около 1-50 дней, предпочтительно в течение около 5-21 дня и более предпочтительно в течение около 7-14 дней. Полученный в результате белок выделяется и очищается общепринятыми способами (например, см.: Kotaikogakunyumon (Introduction to Antibody Engineering), Chijin Shokan Co. Ltd., (1994) p. 102-104; and Affinity Chromatography Principles & Methods, GE Healthcare, (2003) p. 56-60) так, что может быть получен целевой белок.
Белок, секретированный из культивированных животных клеток в среду, может быть собран из культурального раствора общепринятым способом. Альтернативно, белок может также быть собран из лизата клеток хозяина общепринятым способом. Если быть точнее, целевой белок может быть собран удалением клеток и клеточных фрагментов из клеточного культурального раствора или клеточного лизата, как правило, центрифугированием и затем применением обычных технологий выделения и очистки белка, таких как высаливание (например, фракционирование сульфатом аммония), осаждение спиртом (например, осаждение этанолом), PEG, электрофорез, ионообменная хроматография, ультрацентрифугирование, гель-фильтрация, гидрофобная хроматография и аффинная хроматография. В случаях, когда целевой белок является антителом, преимущественно используется хроматография с белком A, но это не единственный пример. Кроме того, посредством использования различных основанных на аффинности способов разделения и фракционирования, антитела могут быть разделены в соответствии с классом иммуноглобулинов или фракционированы на основании их антигенной аффинности.
Данное открытие делает возможным приготовление рекомбинантных антител (например, природные антитела, фрагменты антитела, миниантитела, химерные антитела, гуманизированные антитела и биспецифические антитела), генетически рекомбинантных белков (например, гранулоцитарный колониестимулирующий фактор (G-CSF), гранулоцитарно-моноцитарный колониестимулирующий фактор (GM-CSF), эритропоетин, интерферон, интерлейкины, такие как IL-1 и IL-6, t-PA, урокиназа, сывороточные альбумины, факторы свертывания крови) и тому подобного, при этом поддерживаются высокая продуктивность и гомогенность.
В случаях, когда белок или полипептид, приготовленный по способу данного открытия (также называемый "разработанный белок"), имеет фармацевтически применимую биологическую активность, может быть приготовлен лекарственный препарат смешиванием белка или полипептида с фармацевтически приемлемыми носителями или добавками для образования состава. Разработанный белок и лекарственный препарат, содержащий разработанный белок в качестве активного ингредиента, также попадают в объем данного изобретения.
Примеры фармацевтически приемлемых носителей и добавок включают в себя, но не ограничены ими, воду, фармацевтически приемлемые органические растворители, коллаген, поливиниловый спирт, поливинилпирролидон, карбоксивиниловый полимер, карбоксиметилцеллозу натрия, полиакрилат натрия, альгинат натрия, растворимый в воде декстран, карбоксиметилкрахмал натрия, пектин, метилцеллюлозу, этилцеллюлозу, ксантановую камедь, аравийскую камедь, казеин, агар, полиэтиленгликоль, диглицерин, глицерин, пропиленгликоль, вазелин, парафин, стеариловый спирт, стеариновую кислоту, человеческий сывороточный альбумин (HSA), маннит, сорбит, лактозу и поверхностно-активные вещества, которые являются приемлемыми в качестве фармацевтических добавок.
В существующих применениях добавки выбраны независимо или по желанию в комбинации из приведенных выше в зависимости от лекарственной формы лечебного агента, т.е. лекарственного препарата по данному изобретению, но это, естественно, не является единственным примером. Например, в случае с использованием лекарственного препарата по изобретению в качестве состава для инъекции, может быть использован продукт, приготовленный растворением очищенного полипептида в растворителе, таком как физиологический раствор, буферный раствор или глюкозный раствор и добавлением антиадсорбционного агента, такого как Tween 80, Tween 20, желатин или человеческий сывороточный альбумин. Альтернативно, также может быть выполнена лиофилизация для предоставления лекарственной формы, которая позволяет растворение для восстановления перед использованием, и иллюстративные вспомогательные вещества, которые могут быть использованы для лиофилизации, включают в себя сахарные спирты, такие как маннит, и сахара, такие как глюкоза.
Эффективная доза полипептида выбрана соответствующим образом в зависимости от различных факторов, включая тип полипептида, тип заболевания, которое должно быть вылечено или предотвращено, возраста пациента и тяжести заболевания. Например, в случаях, когда разработанный белок является антителом, таким как антиглипикан антитело, эффективная доза выбрана из диапазона от 0,001 до 1000 мг в расчете на кг массы тела в расчете на дозу. Альтернативно, доза может быть выбрана из диапазона от 0,01 до 100000 мг/тело в расчете на пациента. Однако эффективная доза не ограничена вышеизложенными диапазонами доз.
Лекарственный препарат по данному открытию может быть введен как орально, так и парентерально, но парентеральное введение предпочтительно, и конкретные примеры включают в себя инъекцию (например, общее или местное введение внутривенной, внутримышечной, внутрибрюшинной, подкожной или другими инъекциями), трансназальное введение, транспульмональное введение и чрескожное введение.
ПРИМЕРЫ
Данное открытие далее будет подробно описано посредством примеров и сравнительных примеров. Необходимо отметить, что эти примеры предусмотрены для иллюстрации данного изобретения и не ограничивают объем изобретения.
[Пример 1] Снижение кислотных пиков антитела посредством температурного сдвига
(Исследование смещенной температуры)
Первичная среда
Полученный из растения гидролизат добавляли к коммерчески доступной бессывороточной культуральной среде для животных клеток, смесь растворяли и затем раствор фильтровали и стерилизовали.
Подпитывающая среда
Глюкозу добавляли в коммерчески доступную бессывороточную культуральную среду для животных клеток и растворяли в ней и раствор фильтровали и стерилизовали.
Клетки
Клеточная линия CHO (DXB-11; G. Urlaub et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77: 4216-4220 1980; коммерчески доступная от ATCC), вырабатывающая рекомбинантное анти-глипикан-3 (GPC-3) гуманизированное антитело (гуманизированное GC33 антитело класса IgG1, которое приготовили выполнением гуманизации по процедуре, раскрытой в примере 24 в WO 2006/006693, и модификацией L цепи посредством процедуры, раскрытой в примере 25 там же).
Процедура культивирования
Каждые из 1 л сосудов клеточных культуральных систем (5 единиц) загружали первичной средой, клеточную линию CHO засеивали туда так, чтобы была получена плотность 2×105 клеток/мл, и культивирование начинали при 37°C. Температурный сдвиг осуществляли с дня 5 после начала культивирования. Смещенные температуры в культуральных емкостях 1-5 составляли 32°C, 33°C, 34°C, 35°C и 37°C (без сдвига), соответственно, и последующее культивирование продолжали при каждой из этих смещенных температур. DO и pH контролировалась при 40% и 6,9, соответственно. Подпитываемая среда была инъецирована при фиксированной скорости потока с дня 3.
Процедура анализа
Количество жизнеспособных клеток и жизнеспособность измеряли окрашиванием трипановым синим. 1 мл каждой из клеточных суспензий помещали в автоматический анализатор клеток Cedex для определения количеств жизнеспособных и мертвых клеток. Определение количеств жизнеспособных мертвых клеток и расчет плотности жизнеспособных клеток (105 клеток/мл) и жизнеспособности (%) выполняли автоматически с использованием программного обеспечения для анализа данных Cedex Loader (Ver. 1.51 или более поздние; Innovatis).
Концентрации глюкозы и молочной кислоты определяли анализатором биохимии (модель 2700; YSI) с использованием супернатантов, полученных центрифугированием отобранных культуральных растворов (1000 об/мин, 5 мин).
Концентрацию антитела определяли посредством белок A-HPLC с использованием супернатантов, полученных центрифугированием отобранных культуральных растворов (1000 об/мин, 5 мин).
Ионообменную хроматографию (ВЕС) выполняли с ипользованием катионообменных колонн (ProPac WCX-10).
Результаты
Результаты показаны на фиг. 1.
С точки зрения максимума клеточной плотности образец, культивированный при 37°C без температурного сдвига, достигал наибольшего значения, и другие образцы, которые подвергались температурному сдвигу, демонстрировали сниженный клеточный рост. Однако имела место тенденция, что чем более низкой была смещенная температура, тем лучше сохранялась жизнеспособность и большее количество жизнеспособных клеток поддерживалось даже на более поздней стадии культивирования. С точки зрения количества выработанного антитела, образец, культивированный при 37°C без температурного сдвига, демонстрировал наибольшее значение 3,61 г/л, при этом все из других образцов, которые подвергались температурному сдвигу, давали значение не более 3,2 г/л; этот результат указывает на то, что температурный сдвиг снижал количество выработанного антитела. Это может иметь место из-за того, что температурный сдвиг снижает активность самих клеток. Относительно глюкозы и молочной кислоты во время культивирования, было обнаружено, что чем более низкой была смещенная температура, тем меньшим были потребление глюкозы и выработка молочной кислоты. Это также может иметь место из-за того, что температурный сдвиг снижает активность самих клеток. Частоты возникновения кислотного пика, определенные DEC, составляли 47,5% без температурного сдвига, 29,1% для сдвига до 35°C, 18,7% для сдвига до 34°C, 19,4% для сдвига до 33°C и 14,7% для сдвига до 32°C; этот результат указывает на то, что температурный сдвиг снижал уровень кислотных пиков, и что чем меньше была смещенная температура, тем меньше была частота возникновения кислотного пика.
[Пример 2] Снижение кислотных пиков антитела посредством температурного сдвига (Исследование момента сдвига ~ 1)
Первичная среда
Полученный из растения гидролизат добавляли к коммерчески доступной бессывороточной культуральной среде для животных клеток, смесь растворяли и затем раствор фильтровали и стерилизовали.
Подпитывающая среда
Глюкозу добавляли к коммерчески доступной бессывороточной культуральной среде для животных клеток и растворяли в ней и раствор фильтровали и стерилизовали.
Клетки
Клеточная линия CHO, вырабатывающая рекомбинантное анти-глипикан-3 (GPC-3) гуманизированное антитело.
Процедура культивирования
В каждый из 1 л сосудов системы для культивирования клеток (5 единиц) загружали первичную среду, засеивали туда клеточную линию CHO так, чтобы была получена плотность 2×105 клеток/мл, и культивирование начинали при 37°C. Была установлена смещенная температура 33°C, и были установлены моменты сдвига в культуральных емкостях 1-5 в дни 3, 4, 5 и 6 после начала культивирования и отсутствие сдвига, соответственно. Последующее культивирование продолжалось при смещенной температуре. DO и pH контролировали при 40% и 6,9, соответственно. Подпитывающая среда вводилась с фиксированной скоростью потока с дня 3.
Процедура анализа
Количество жизнеспособных клеток и жизнеспособность измеряли окрашиванием трипановым синим. 1 мл каждой из клеточных суспензий помещали в автоматический анализатор клеток Cedex для определения количества жизнеспособных и мертвых клеток. Определение количества жизнеспособных и мертвых клеток и расчет плотности жизнеспособных клеток (105 клетки/мл) и жизнеспособности (%) выполняли автоматически с использованием программного обеспечения для анализа данных Cedex Loader (Ver. 1.51 или более поздние; Innovatis).
Концентрации глюкозы и молочной кислоты определяли анализатором биохимии (модель 2700; YSI) с использованием супернатантов, полученных центрифугированием отобранных культуральных растворов (1000 об/мин, 5 мин).
Концентрацию антитела определяли белок A-HPLC с использованием супернатантов, полученных центрифугированием отобранных культуральных растворов (1000 об/мин, 5 мин).
Ионообменную хроматографию (IEC) выполняли с использованием катионообменной колонны (ProPac WCX-10).
Результаты
Результаты показаны на фиг. 2.
С точки зрения максимума клеточной плотности образец, культивированный без температурного сдвига, достигал наибольшего значения, и другие образцы, которые подвергались температурному сдвигу, демонстрировали сниженный клеточный рост. Имело место тенденция, что чем более ранним был момент температурного сдвига, тем меньше был максимум клеточной плотности, но жизнеспособность сохранялась. С точки зрения количества выработанного антитела, образец, культивированный без температурного сдвига, демонстрировал наибольшее значение 3,61 г/л, образец, который подвергался температурному сдвигу на день 6, демонстрировал значение 3,57 г/л, и те, которые подверглись температурному сдвигу на дни 5, 4 и 3 демонстрировали значения 2,91, 2,13 и 1,61 г/л, соответственно; результат указывает на то, что чем более ранним был момент температурного сдвига, тем меньшее количество антитела было выработано. В отношении концентрации глюкозы, чем более ранним был момент сдвига, тем большее количество глюкозы было накоплено. С точки зрения количества выработанной молочной кислоты, только образец, культивированный без температурного сдвига, демонстрировал накопление молочной кислоты на более поздней стадии культивирования, при том, что все из тех, что подвергались температурному сдвигу, имели концентрацию не более 0,5 г/л. Частоты возникновения кислотного пика, определенные IEC, составляли 47,5% при отсутствии температурного сдвига, 21,9% для сдвига на день 6 и не более 20% для сдвигов в дни 3, 4 и 5; уровень кислотных пиков, определенный IEC, был снижен даже в случае культивирования, выполненного на день 6.
[Пример 3] Снижение кислотных пиков антитела посредством температурного сдвига (Исследование момента сдвига - 2)
Первичная среда
Коммерчески доступную бессывороточную культуральную среду для животных клеток растворяли и затем раствор фильтровали и стерилизовали.
Подпитывающая среда
Глюкозу добавляли в коммерчески доступную бессывороточную культуральную среду для животных клеток и растворяли в ней и раствор фильтровали и стерилизовали.
Клетки
Клеточная линия CHO (DXB-11; G. Urlaub et al, Proc. Natl. Acad. Sci. USA IT. 4216-42: 1980; коммерчески доступная от ATCC), вырабатывающая анти-NR10 (IL-31RA) гуманизированное антитело (полностью гуманизированное NS22 антитело, приготовленное процедурой, раскрытой в примере 12 в WO 2009/072604). Анти-NR10 гуманизированное антитело являлось антителом класса IgG2.
Процедура культивирования
Культивирование выполняли по той же процедуре, что в примере 2. Более конкретно культивирование начинали при 37°C, была установлена смещенная температура 33°C, были установлены моменты сдвига в дни 5 и 7 после начала культивирования и отсутствие сдвига, и последующее культивирование продолжалось при смещенной температуре.
Процедура анализа
Анализ выполняли по той же процедуре, что в примере 2.
Результаты
Как и в примере 2, уровень кислотных пиков антитела был значительно снижен, когда был осуществлен температурный сдвиг (фиг. 3).
Claims (12)
1. Способ снижения гетерогенности заряда целевого антитела, при этом антитело приготовлено культивированием клетки СНО, которая вырабатывает антитело, где культивирование выполняется при температуре 36-38°С до 3-7 дней после даты начала культивирования, и затем температура культивирования снижается до 32-35°С однократно, и затем культивирование продолжается при сниженной температуре культивирования в течение приблизительно от 1 до 50 дней.
2. Способ по п. 1, где клетка СНО является клеткой, имеющей такое свойство, что продуктивность целевого антитела в расчете на клетку не возрастает или снижается при более низкой температуре, чем нормальная температура культивирования.
3. Способ по п. 1, где снижение гетерогенности заряда целевого антитела включает снижение уровня кислотных пиков.
4. Способ по п. 1, где клетка культивируется посредством порционного культивирования, повторяемого порционного культивирования, подпитываемого порционного культивирования, повторяемого подпитываемого порционного культивирования, непрерывного культивирования или перфузионного культивирования.
5. Способ по п. 1, где клетка СНО является клеткой, в которую был введен ген, кодирующий целевое антитело.
6. Способ по п. 1, где антитело является антителом против глипикана 3 или антителом против IL-31RA.
7. Способ по п. 1, где клетка СНО выбрана из клеточных линий DG44, DXB-11, K-l и CHO-S.
8. Способ выработки целевого антитела со сниженной гетерогенностью заряда, где антитело приготовлено культивированием клетки СНО, которая вырабатывает антитело, где культивирование выполняется при температуре 36-38°С до 3-7 дней после даты начала культивирования, и затем температура культивирования снижается до 32-35°С однократно, и затем культивирование продолжается при сниженной температуре культивирования в течение от приблизительно 1 до 50 дней.
9. Способ по п. 8, включающий этап сбора антитела из культурального раствора после того, как культивирована клетка, которая вырабатывает целевое антитело.
10. Способ по п. 8, где целевым белком является антитело против глипикана 3 или антитела против IL-31RA.
11. Способ приготовления лекарственного препарата для лечения злокачественного новообразования, содержащего антитело против глипикана 3, где антитело приготовлено культивированием клетки СНО, которая вырабатывает антитело, где культивирование выполняется при температуре 36-38°С до 3-7 дней после даты начала культивирования, и затем температура культивирования снижается до 32-35°С однократно, и затем культивирование продолжается при сниженной температуре культивирования в течение приблизительно от 1 до 50 дней, включающий этап сбора антитела из культурального раствора после того, как культивирована клетка, которая вырабатывает целевое антитело, и/или этап смешивания антитела, в качестве активного ингредиента, с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми носителями или добавками.
12. Способ приготовления лекарственного препарата для лечения воспалительного заболевания, включающего антитело против IL-31RA, где антитело приготовлено культивированием клетки СНО, которая вырабатывает антитело, где культивирование выполняется при температуре 36-38°С до 3-7 дней после даты начала культивирования, и затем температура культивирования снижается до 32-35°С однократно, и затем культивирование продолжается при сниженной температуре культивирования в течение приблизительно от 1 до 50 дней, включающий этап сбора антитела из культурального раствора после того, как культивирована клетка, которая вырабатывает целевое антитело, и/или этап смешивания антитела, в качестве активного ингредиента, с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми носителями или добавками.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2010-291636 | 2010-12-28 | ||
JP2010291636 | 2010-12-28 | ||
PCT/JP2011/080478 WO2012091124A1 (ja) | 2010-12-28 | 2011-12-28 | 動物細胞の培養方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2013135255A RU2013135255A (ru) | 2015-02-10 |
RU2615448C2 true RU2615448C2 (ru) | 2017-04-04 |
Family
ID=46383211
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2013135255A RU2615448C2 (ru) | 2010-12-28 | 2011-12-28 | Описание способа культивирования животной клетки |
Country Status (17)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20130295613A1 (ru) |
EP (1) | EP2660328A4 (ru) |
JP (1) | JP6001456B2 (ru) |
KR (1) | KR101903208B1 (ru) |
CN (2) | CN103282509A (ru) |
AU (1) | AU2011350456B2 (ru) |
BR (1) | BR112013018751B1 (ru) |
CA (1) | CA2822947A1 (ru) |
HK (1) | HK1248242A1 (ru) |
IL (1) | IL227185B (ru) |
MX (1) | MX345399B (ru) |
MY (1) | MY163081A (ru) |
NZ (1) | NZ611862A (ru) |
RU (1) | RU2615448C2 (ru) |
SG (1) | SG191371A1 (ru) |
WO (1) | WO2012091124A1 (ru) |
ZA (1) | ZA201304332B (ru) |
Families Citing this family (16)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US9150645B2 (en) | 2012-04-20 | 2015-10-06 | Abbvie, Inc. | Cell culture methods to reduce acidic species |
US9181572B2 (en) | 2012-04-20 | 2015-11-10 | Abbvie, Inc. | Methods to modulate lysine variant distribution |
SG11201504564TA (en) | 2012-12-10 | 2015-08-28 | Seikagaku Kogyo Co Ltd | Novel recombinant factor c and method for producing the same, and method for measuring endotoxin |
AR095196A1 (es) | 2013-03-15 | 2015-09-30 | Regeneron Pharma | Medio de cultivo celular libre de suero |
CN103255238A (zh) * | 2013-05-15 | 2013-08-21 | 江苏泰康生物医药有限公司 | 一种控制哺乳动物细胞乳酸生成的方法 |
TW201514305A (zh) * | 2013-07-06 | 2015-04-16 | Cadila Healthcare Ltd | 製造單株抗體之改良方法 |
US10376582B2 (en) | 2013-10-16 | 2019-08-13 | Outlook Therapeutics, Inc. | Buffer formulations for enhanced antibody stability |
EP3247718B1 (en) | 2015-01-21 | 2021-09-01 | Outlook Therapeutics, Inc. | Modulation of charge variants in a monoclonal antibody composition |
CN105777896B (zh) * | 2015-03-19 | 2019-08-16 | 广东东阳光药业有限公司 | 一种抗体酸性峰的纯化方法 |
TW202330904A (zh) | 2015-08-04 | 2023-08-01 | 美商再生元醫藥公司 | 補充牛磺酸之細胞培養基及用法 |
KR101789509B1 (ko) | 2015-11-05 | 2017-10-26 | 주식회사 프로젠 | 재조합 인간 갑상선 자극 호르몬을 포함하는 조성물 및 상기 재조합 인간 갑상선 자극 호르몬의 생산 방법 |
EP3400242A1 (en) * | 2016-01-06 | 2018-11-14 | Oncobiologics, Inc. | Reduction of high molecular weight species, acidic charge species, and fragments in a monoclonal antibody composition |
CA3013336A1 (en) | 2016-02-03 | 2017-08-10 | Oncobiologics, Inc. | Buffer formulations for enhanced antibody stability |
SG11201908891YA (en) * | 2017-03-31 | 2019-10-30 | Boehringer Ingelheim Int | Perfusion medium |
CN111500662A (zh) * | 2018-06-25 | 2020-08-07 | 深圳市菲鹏生物制药股份有限公司 | 调节cho-k1表达系统所分泌抗体的酸性峰含量的方法 |
KR20230051921A (ko) * | 2021-10-12 | 2023-04-19 | 프레스티지바이오로직스 주식회사 | 항체 집단의 제조 방법 |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EA000703B1 (ru) * | 1995-10-06 | 2000-02-28 | Мерк Энд Ко., Инк. | Способ дезинтеграции культивированных клеток с использованием устройства на основе применения сталкивающихся струй |
WO2003083066A2 (en) * | 2002-03-27 | 2003-10-09 | Immunex Corporation | Methods for increasing polypeptide production |
WO2008008360A1 (en) * | 2006-07-13 | 2008-01-17 | Wyeth | Production of glycoproteins |
US7511155B2 (en) * | 2002-07-08 | 2009-03-31 | Ge Healthcare Uk Limited | Reagents and a method for saturation labelling of proteins |
Family Cites Families (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RO105652B1 (ro) * | 1988-09-28 | 1992-11-30 | Lilly Co Eli | Procedeu de reducere a heterogenitatii anticorpilor monoclonali |
JP4306813B2 (ja) * | 1995-09-19 | 2009-08-05 | アスビオファーマ株式会社 | 動物細胞の新規培養方法 |
EP2898897A3 (en) * | 2004-07-09 | 2015-10-14 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Anti-glypican 3 antibody |
DK2115126T3 (en) | 2007-03-02 | 2015-05-04 | Wyeth Llc | Use of copper and glutamate in cell culture for the preparation of polypeptides |
TW200902708A (en) * | 2007-04-23 | 2009-01-16 | Wyeth Corp | Methods of protein production using anti-senescence compounds |
RS54624B1 (en) * | 2007-07-17 | 2016-08-31 | E. R. Squibb & Sons, L.L.C. | MONOCLONIC ANTIBODIES AGAINST GLIPICAN-3 |
MX2010004007A (es) * | 2007-10-15 | 2010-06-15 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Metodo para la produccion de un anticuerpo. |
BRPI0821110B8 (pt) * | 2007-12-05 | 2021-05-25 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | anticorpo de neutralização de anti-nr10/il31ra, composição farmacêutica compreendendo o referido anticorpo e uso do mesmo |
ES2560470T3 (es) * | 2011-04-29 | 2016-02-19 | Biocon Research Limited | Un método para reducir la heterogeneidad de anticuerpos y un proceso de producción de dichos anticuerpos |
-
2011
- 2011-12-28 MY MYPI2013701124A patent/MY163081A/en unknown
- 2011-12-28 CN CN2011800629499A patent/CN103282509A/zh active Pending
- 2011-12-28 CN CN201710929315.8A patent/CN107629124A/zh active Pending
- 2011-12-28 RU RU2013135255A patent/RU2615448C2/ru active
- 2011-12-28 MX MX2013007650A patent/MX345399B/es active IP Right Grant
- 2011-12-28 JP JP2012551055A patent/JP6001456B2/ja active Active
- 2011-12-28 US US13/976,196 patent/US20130295613A1/en not_active Abandoned
- 2011-12-28 KR KR1020137019477A patent/KR101903208B1/ko active IP Right Grant
- 2011-12-28 AU AU2011350456A patent/AU2011350456B2/en not_active Ceased
- 2011-12-28 CA CA2822947A patent/CA2822947A1/en not_active Abandoned
- 2011-12-28 WO PCT/JP2011/080478 patent/WO2012091124A1/ja active Application Filing
- 2011-12-28 EP EP11854471.7A patent/EP2660328A4/en active Pending
- 2011-12-28 NZ NZ611862A patent/NZ611862A/en not_active IP Right Cessation
- 2011-12-28 SG SG2013049507A patent/SG191371A1/en unknown
- 2011-12-28 BR BR112013018751-4A patent/BR112013018751B1/pt not_active IP Right Cessation
-
2013
- 2013-06-12 ZA ZA2013/04332A patent/ZA201304332B/en unknown
- 2013-06-25 IL IL227185A patent/IL227185B/en active IP Right Grant
-
2014
- 2014-02-04 HK HK18107499.1A patent/HK1248242A1/zh unknown
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EA000703B1 (ru) * | 1995-10-06 | 2000-02-28 | Мерк Энд Ко., Инк. | Способ дезинтеграции культивированных клеток с использованием устройства на основе применения сталкивающихся струй |
WO2003083066A2 (en) * | 2002-03-27 | 2003-10-09 | Immunex Corporation | Methods for increasing polypeptide production |
US7511155B2 (en) * | 2002-07-08 | 2009-03-31 | Ge Healthcare Uk Limited | Reagents and a method for saturation labelling of proteins |
WO2008008360A1 (en) * | 2006-07-13 | 2008-01-17 | Wyeth | Production of glycoproteins |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
MELISSA PERKINS et al., Determination of the Origin of Charge Heterogeneity in a Murine Monoclonal Antibody, Pharmaceutical Research, 2000, Vol. 17, No. 9, pp.1110-1117. * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO2012091124A1 (ja) | 2012-07-05 |
CN103282509A (zh) | 2013-09-04 |
AU2011350456A1 (en) | 2013-07-04 |
MX345399B (es) | 2017-01-30 |
AU2011350456B2 (en) | 2016-05-26 |
BR112013018751A2 (pt) | 2016-08-09 |
US20130295613A1 (en) | 2013-11-07 |
MY163081A (en) | 2017-08-15 |
CN107629124A (zh) | 2018-01-26 |
ZA201304332B (en) | 2014-08-27 |
KR101903208B1 (ko) | 2018-10-01 |
CA2822947A1 (en) | 2012-07-05 |
JPWO2012091124A1 (ja) | 2014-06-05 |
KR20130131415A (ko) | 2013-12-03 |
EP2660328A1 (en) | 2013-11-06 |
HK1248242A1 (zh) | 2018-10-12 |
MX2013007650A (es) | 2013-08-01 |
BR112013018751B1 (pt) | 2021-01-05 |
RU2013135255A (ru) | 2015-02-10 |
IL227185B (en) | 2018-05-31 |
EP2660328A4 (en) | 2016-07-13 |
SG191371A1 (en) | 2013-08-30 |
JP6001456B2 (ja) | 2016-10-05 |
NZ611862A (en) | 2015-05-29 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2615448C2 (ru) | Описание способа культивирования животной клетки | |
US11661579B2 (en) | Cell culture method using amino acid-enriched medium | |
KR101540124B1 (ko) | 항노화 화합물을 사용하는 단백질의 생산 방법 | |
JP5749930B2 (ja) | ペプチド含有動物細胞培養用培地 | |
RU2486245C2 (ru) | Способ получения клетки, способной продуцировать гетеропротеины с высоким выходом | |
JP6752776B2 (ja) | 銅イオン制御製造方法 | |
CN117242186A (zh) | 细胞培养方法 | |
KR20230051277A (ko) | 세포 배양 방법 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
HE9A | Changing address for correspondence with an applicant |