RU2599792C1 - Противовирусное средство и способ его получения - Google Patents

Противовирусное средство и способ его получения Download PDF

Info

Publication number
RU2599792C1
RU2599792C1 RU2015116400/04A RU2015116400A RU2599792C1 RU 2599792 C1 RU2599792 C1 RU 2599792C1 RU 2015116400/04 A RU2015116400/04 A RU 2015116400/04A RU 2015116400 A RU2015116400 A RU 2015116400A RU 2599792 C1 RU2599792 C1 RU 2599792C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
influenza
allyl
compounds
methyl
butanoate
Prior art date
Application number
RU2015116400/04A
Other languages
English (en)
Inventor
Фануза Арслановна Гималова
Мансур Сагарьярович Мифтахов
Виктор Анатольевич Егоров
Кенес Тагаевич Еримбетов
Владимир Константинович Подгородниченко
Original Assignee
Общество с ограниченной ответственностью "Научно-исследовательский центр "Парк активных молекул"
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Общество с ограниченной ответственностью "Научно-исследовательский центр "Парк активных молекул" filed Critical Общество с ограниченной ответственностью "Научно-исследовательский центр "Парк активных молекул"
Priority to RU2015116400/04A priority Critical patent/RU2599792C1/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2599792C1 publication Critical patent/RU2599792C1/ru

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C323/00—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups
    • C07C323/50—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
    • C07C323/51—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having the sulfur atoms of the thio groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton
    • C07C323/57—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having the sulfur atoms of the thio groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton the carbon skeleton being further substituted by nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups
    • C07C323/58—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having the sulfur atoms of the thio groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton the carbon skeleton being further substituted by nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups with amino groups bound to the carbon skeleton
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/21—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates
    • A61K31/215—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C317/00—Sulfones; Sulfoxides
    • C07C317/44—Sulfones; Sulfoxides having sulfone or sulfoxide groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
    • C07C317/48—Sulfones; Sulfoxides having sulfone or sulfoxide groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton the carbon skeleton being further substituted by singly-bound nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C319/00—Preparation of thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides
    • C07C319/14—Preparation of thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides of sulfides
    • C07C319/20—Preparation of thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides of sulfides by reactions not involving the formation of sulfide groups

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Abstract

Изобретение относится к средству, обладающему противогриппозной активностью, которое представляет собой соединения общей формулы (I) в виде смеси R- и S-диастереомеров или отдельных изомеров или их фармацевтически приемлемые соли. Изобретение относится также к применению соединений общей формулы (I) в качестве средства, обладающего противогриппозной активностью. 2 н. и 1 з.п. ф-лы, 2 табл., 8 пр.

Description

Изобретение относится к области органической химии, конкретно к производным циклопент-2-енонов, проявляющим противогриппозную активность. Изобретение также относится к способу получения производных циклопент-2-енонов и к применению соединений настоящего изобретения в качестве противовирусного средства.
Вирусные заболевания, в особенности грипп, представляют серьезную угрозу для человечества из-за возможностей пандемий и летальных исходов. Всемирной Организацией Здравоохранения (ВОЗ) в качестве основного средства борьбы против гриппа в настоящее время рекомендована вакцинация. Однако в связи с высокой и непредсказуемой изменчивостью поверхностных белков вируса гриппа состав вакцины постоянно меняется в зависимости от изменения антигенной структуры циркулирующих вирусов. Для создания, проверки на безопасность и эффективность, производства, а также распространения в достаточном количестве среди населения необходимой вакцины к такому, вновь возникшему, штамму вируса гриппа требуется около 6 месяцев. Кроме того, вакцинация не всегда эффективна у людей пожилого возраста и у пациентов, страдающих хроническими заболеваниями, нарушениями функций иммунной системы и аллергией к компонентам вакцины. Поэтому в дополнении к вакцинации ВОЗ рекомендовано применение противогриппозных этиотропных химиопрепаратов, оказывающих непосредственное воздействие на репродукцию вируса и направленных на определенную вирусспецифическую мишень в ее цикле ([1] Hayden F. WHO Guidelines on the Use of Vaccines and Antivirals during Influenza. - Annex 5-Considerations for the Use of Antivirals during an Influenza pandemic, Geneva, 2-4 October, 2002).
Особую опасность для здоровья людей представляют распространенные в последнее время штаммы вируса гриппа H1N1 (свиной грипп) и H1N5 (птичий грипп). В медицинской практике применяются 2 класса лекарств для лечения гриппа: адамантаны (N2-блокаторы) и ингибиторы нейраминидазы. В настоящее время среди противогриппозных препаратов безусловными лидерами являются применяемые на практике ингибиторы нейраминидазы озельтамивир и занамивир, известные под торговыми названиями Tamiflu и Zanamavir, а также производное циклопентанкарбоновой кислоты Перамивир (Rapiacta).
Тамифлю (озельтамивир), имеющий функционализированный циклогексеновый каркас, очень активен в отношении вирусов гриппа А и В, эффективен при пероральном приеме. Циклопентановое производное Перамивир также является мощным и селективным ингибитором нейраминидазы. Новый ингибитор нейраминидазы пирролидинового ряда А-315675 - высокоактивный и пригодный для перорального применения в виде пролекарства эфира или кислоты. На фармацевтическом рынке России широко представлен отечественный препарат Арбидол, который эффективно подавляет вирусы гриппа А и В. По механизму действия Арбидол относится к ингибиторам фузии - угнетает слияние липидной оболочки вируса и клеточных мембран, предотвращая проникновение вируса внутрь клетки.
Однако практически все известные препараты имеют недостатки и ограничения. Так, применение препаратов адамантанового ряда (амантадин и ремантадин) ограничено отсутствием эффективности у них в отношении вируса гриппа В, наличием серьезных побочных эффектов и возникновением резистентности к ним ([1, 2] Hayden F. WHO Guidelines on the Use of Vaccines and Antivirals during Influenza. - Annex 5-Considerations for the Use of Antivirals during an Influenza pandemic, Geneva, 2-4 October, 2002; Monto A. Viral susceptibility and the choice of influenza antivirals // Clinical Infectious Diseases. - 2008. - Vol. 47. - P. 346-348). Применение занамивира часто сопряжено с возникновением побочных эффектов в виде раздражения носоглотки, что ограничивает его использование у людей, страдающих астмой и ХОБЛ, которые относятся к группе риска по заболеваемости гриппом. При этом необходимость распылительного устройства осложняет применение этого препарата у пожилых людей и детей. При применении озельтамивира отмечены побочные эффекты, проявляющиеся в виде тошноты и рвоты [1] (Hayden F. WHO Guidelines on the Use of Vaccines and Antivirals during Influenza. - Annex 5-Considerations for the Use of Antivirals during an Influenza pandemic, Geneva, 2-4 October, 2002). Кроме того, в последние годы чрезвычайно возросло количество штаммов, резистентных к озельтамивиру. По данным Центра контроля заболеваний (Атланта, США) в эпидемический сезон 2008-2009 г. практически все циркулирующие в этот период штаммы вируса гриппа A H3N2 были резистентны к амантадину/ремантадину, а 98-100% штаммов H1N1 были резистентны к ингибитору нейраминидазы - озельтамивиру ([2] Monto A. Viral susceptibility and the choice of influenza antivirals // Clinical Infectious Diseases. - 2008. - Vol. 47. - P. 346-348). Помимо этих факторов большое значение имеет то, что противогриппозные препараты второго поколения (занамивир, озельтамивир), из-за патентной защиты не производятся в России, что обусловливает их высокую стоимость и полную зависимость от иностранных производителей в случае возникновения эпидемических и пандемических ситуаций. В связи с вышеперечисленным, создание и внедрение в практику российского здравоохранения эффективных и безопасных противовирусных препаратов, обладающих оригинальной химической структурой и отличным от существующих аналогов механизмом действия, является приоритетной задачей отечественной медицинской науки.
К существенным недостаткам известных препаратов можно отнести сложности, связанные с технологией их производства. Указанные на фиг. 1 соединения - действующие вещества соответствующих лекарств - производятся путем многостадийного синтеза. Так, ниже приведена схема крупномасштабного синтеза Тамифлю в компании Roche из шикимовой кислоты (схема 1) ([3, 4] Rohloff J.C., Kent K.М., Postich М. J., et. al. // J. Org. Chem., 1998, v. 63, p. 4545; Federspiel M., Fischer R., e.a. // Org. Process Res. Dev., 1999, v. 3., p. 266).
Как видно из данной схемы, в производстве препарата используются дорогостоящие, токсичные и взрывоопасные реагенты, существуют критические условия (высокие давления, низкие температуры) и главное, многостадийный синтез осуществляется из достаточно дорогой хиральной шикимовой кислоты, выделяемой из природных источников.
Figure 00000001
Из-за периодически возникающих реальных угроз вспышек гриппа и соответственно повышения спроса на препараты, в последнее время предложены десятки оригинальных подходов к синтезу Тамифлю из хиральных и ахиральных исходных с целью увеличения выхода целевого продукта (см. обзоры: Shibasaki М., Kanai М. // Eur. J. Org. Chem., 2008, p. 1839). Тем не менее все эти подходы не лишены упомянутых выше для схемы Roche недостатков.
Синтез производного циклопентана - Перамивира (прототипа), аналогичного по строению с обсуждаемыми соединениями, приведен на схеме 2. В качестве исходного материала выбран коммерчески доступный (-)-лактам Vince. К недостаткам подхода можно отнести: многостадийность (8 стадий) и высокую стоимость исходного (-)-лактама Vince (1 г = 145.0 евро, 5 г = 598.0 евро, каталог Aldrich, 2012-2014, стр. 208).
Figure 00000002
Целью изобретения является получение оригинальных строений циклопентановых производных, обладающих противогриппозным действием. Технический результат заключается в расширении арсенала лекарственных средств, а также в сокращении времени синтеза заявляемых циклопентановых производных, повышении выхода целевого продукта и упрощении технологии его получения.
Согласно настоящему изобретению предлагаются новые производные циклопент-2-енонов, представляющие собой соединения общей формулы (I):
Figure 00000003
или их фармацевтически приемлемые соли.
В предпочтительном варианте осуществления, настоящее изобретение относится к соединениям общей формулы (I), в виде смеси R- и S-диастереомеров или отдельных изомеров, выбранных из:
метил 2(S)-[4(R)-аллил-5,5-диметокси-2,4-дихлор-3-оксоциклопент-1-ениламино]-4-(метилтио)бутаноат (соединение 1);
Метил 2(S)-[(4(S)-аллил-5,5-диметокси-2,4-дихлор-3-оксоцикло-пент-1-енил)амино]-4-(метилтио)бутаноат (соединение (2S,4′S)-1a)
Метил 2(R)-[(4-аллил-5,5-диметокси-2,4-дихлор-3-оксоциклопент-1-енил)амино]-4-(метилтио)бутаноат (соединение 5);
Метил 2(S)-[(4-аллил-5,5-диметокси-2,4-дихлор-3-оксоциклопент-1-ен-1-ил)амино]-4-(метилсульфинил)бутаноат (соединение 6);
Метил 2(S)-[(4(R)-аллил-5,5-диметокси-2,4-дихлор-3-оксоцикло-пент-1-ен-1-ил)амино]-4-(метилсульфинил)бутаноат (соединение 7);
Метил 2(R)-[(4-аллил-5,5-диметокси-2,4-дихлор-3-оксоциклопент-1-ен-1-ил)амино]-4-(метилсульфинил)бутаноат (соединение 8).
Изобретение также относится к способу получения заявленных соединений формулы (I). Способ основан на известной реакции SNE-замещения винильного атома хлора в 2,3,5-трихлорциклопент-2-енонах (Ахметвалеев P.P., Акбутина Ф.А., Иванова Н.А., Мифтахов М.С. // Изв. АН. Сер. хим. - 2001. - №9. - С. 1417-1435), и отличается тем, что 5-аллил-2,3,5-трихлорциклопент-2-енон-1-он 2 реагирует с гидрохлоридом метилового эфира L-метионина 3 в среде МеОН, содержащим КОН и NEt3 в молярном соотношении 1:1,7:1,7:1,7. Из образующейся при этом диастереомерной смеси 4 целевое соединение 1 выделяли хроматографированием на колонке с силикагелем с последующей перекристаллизацией. Указанная конфигурация хиральных центров 1 подтверждена данными рентгеноструктурного анализа.
Figure 00000004
Как видно из схемы 3, по сравнению с Тамифлю и Перамивиром способ получения хирального соединения 1 исключительно прост, значительно сокращает требуемое для синтеза время и, как далее показано в примере 1, значительно увеличивает выход целевого продукта. Схема включает легкодоступный из гексахлорциклопентадиена в 2 стадии (±)-блок 2 и источник хиральности - доступный, дешевый L-метионин (5 г=12,50 евро, 1 кг=350 евро, каталог Aldrich, 2012-2014, стр. 1687).
Сущность изобретения подтверждается следующими примерами:
Пример 1. 2(S)-[4(R)-аллил-5,5-диметокси-2,4-дихлор-3-оксоциклопент-1-ениламино]-4-(метилтио)бутаноат формулы (1), которое проявляет противогриппозную активность:
Figure 00000005
К перемешиваемому раствору 0.3 г (1.43 ммоль) трихлоркетона 2 в 10 мл абсолютного МеОН добавляли 0.34 г (1.72 ммоль) гидрохлорида метилового эфира L-метионина 3, 0.96 г (1.72 ммоль) КОН и 1.0 мл Et3N. Реакционную массу перемешивали до израсходования исходного соединения (~24 ч, контроль методом ТСХ), разбавляли 5 мл воды, МеОН упарили, водный слой подкисляли 1н. HCl до pH 4 и экстрагировали хлороформом (4×10 мл). Объединенные экстракты промывали насыщенным раствором NaCl, сушили MgSO4, упарили. Остаток очищали двукратным хроматографированием на колонке с SiO2 (EtOAc - петролейный эфир, 1:10), получили 0.36 г (80%) смеси диастеромеров 4. Из этой смеси кристаллизацией из системы EtOAc - петролейный эфир (1:10) выделили 0.16 г (35%) диастереомерно чистого соединения 1. Т.пл. 77-79°С.
Figure 00000006
(с 0.44, CHCl3). ИК спектр, ν, и см-1: 3287, 2951, 2920, 2853, 1749, 1715, 1593, 1539, 1456, 1377, 1364, 1283, 1252, 1220, 1180, 1171, 1093, 1065, 997, 957, 926, 733, 611. Спектр ЯМР 1Н (CDCl3) δ, м.д.: 2.12 с (3Н, SCH3), 2.21 м (2Н, СН2), 2.56 т (2Н, SCH2, J 7.3 Гц), 2.75 д (2Н, С2″Н2, J 7.6 Гц), 3.42 с (3Н, ОСН3), 3.56 с (3Н, ОСН3), 3.84 с (3Н, CO2CH3), 5.16 м (2Н,=СН2), 5.18 м (1Н, NCH), 5.79 м (1H,=СН), 6.23 м (1Н, NH). Спектр ЯМР 13С (CDCl3) δ, м.д.: 15.43 (СН3), 29.28 и 32.45 (СН2), 42.72 (С2″Н2), 51.92 и 52.41 (ОСН3), 53.15 (CO2CH3), 54.63 (NCH), 75.04 (С4′), 99.28 (С2′), 101.75 (С5′), 119.15 (=СН), 131.94 (=СН2), 158.33 (С1′), 171.50 (CO2Me), 187.68 (С=О). Масс-спектр, m/z (I, %): 411 [M]+(12), 376 [М-Cl]+ (100), 344 [М-Cl-МеОН]+ (28), 320 (19), 258 (12), 222 (13), 147 (17), 75 (8), 61 (38) [H2C=SMe]+. Найдено, %: M+411.0662. C16H23Cl2NO5S. Вычислено, %: M+ 411.0669.
Аналогичным образом получают остальные заявленные соединения. Ниже приведены примеры получения конкретных соединений.
Figure 00000007
Пример 2. Метил 2(S)-[(4(S)-аллил-5,5-диметокси-2,4-дихлор-3-оксоцикло-пент-1-енил)амино]-4-(метилтио)бутаноат ((2S,4′S)-1a) получен в смеси с 2S,4′R-изомером. Спектр ЯМР 1H (CDCl3) δ, м.д.: 2.12 с (3Н, SCH3), 2.21 м (2Н, СН2), 2.56 т (2Н, SCH2, J 7.5 Гц), 2.75 м (2Н, СН2), 3.42 с (3Н, ОСН3), 3.52 с (3Н, ОСН3), 3.84 с (3Н, CO2CH3), 5.16 м (2Н, =СН2), 5.18 м (1H, NCH), 5.79 м (1Н, =СН), 6.23 м (1Н, NH). Спектр ЯМР 13С (CDCl3) δ, м.д.: 15.48 (СН3), 30.54 и 32.70 (СН2), 40.78 (С2″Н2), 52.13 (ОСН3), 53.08 (CO2CH3), 54.87 (NCH), 74.19 (С4′), 100.0 (С2′), 102.25 (С5′), 119.15 (=СН), 131.94 (=СН2), 158.33 (С1′), 171.50 (CO2Me), 187.68 (С=O).
Пример 3. Метил 2(R)-[(4(R,S)-аллил-5,5-диметокси-2,4-дихлор-3-оксоциклопент-1-енил)амино]-4-(метилтио)бутаноат (5). Получен аналогично 4 из 0.5 г (1,75 ммоль) 5-аллил-2,3,5-трихлорциклопент-2-енон-1-она 2 и 0.42 г (2.10 ммоль) гидрохлорида метилового эфира D-метионина, в виде смеси диастереомеров в соотношении 3:1 (ЯМР 1Н), выход 0.57 г (79%). ИК спектр, ν, см-1: 3287, 2951, 2920, 2853, 1749, 1715, 1593, 1539, 1456, 1377, 1364, 1283, 1252, 1220, 1180, 1171, 1093, 1065, 997, 957, 926, 733, 611. Основной диастереомер. Спектр ЯМР 1Н (CDCl3) δ, м.д.: 2.09 с (3Н, SCH3), 2.18 м (2Н, СН2), 2.53 т (2Н, SCH2, J 7.3 Гц), 2.71 м (2Н, С2″Н2), 3.39 с (3Н, ОСН3), 3.53 с (3Н, ОСН3), 3.80 с (3Н, CO2CH3), 5.07 м (2Н, =СН2), 5.15 м (1Н, =СН), 5.75 м (1Н, NCH), 6.25 м (1H, NH). Спектр ЯМР 13С (CDCl3) δ, м.д.: 16.82 (СН3), 29.21 и 31.31 (СН2), 42.39 (С2″Н2), 53.29 и 53.77 (ОСН3), 54.50 (CO2CH3), 55.96 (NCH), 74.98 (С4′), 98.27 (С2′), 101.22 (С5′), 118.36 (=СН), 131.54 (=СН2), 159.16 (С1′), 170.97 (CO2Me), 187.21 (С=O). Масс-спектр, m/z (I, %): 411 [M]+ (12), 376 [М-Cl]+ (100), 344 [М-Cl-МеОН]+ (28), 320 (19), 258 (12), 222 (13), 147 (17), 75 (8), 61 (38) [H2C=SMe]+. Минорный диастереомер. Спектр ЯМР 1Н (CDCl3) δ, м.д.: 2.09 с (3Н, SCH3), 2.18 м (2Н, СН2), 2.53 т (2Н, SCH2, J 73 Гц), 2.71 м (2Н, С2″Н2), 3.49 с (3Н, ОСН3), 3.53 с (3Н, ОСН3), 3.79 с (3Н, CO2CH3), 5.07 м (2Н, =СН2), 5.15 м (1H, =СН), 5.75 м (1Н, NCH), 6.25 м (1Н, NH). Спектр ЯМР 13С (CDCl3) δ, м.д.: 16.87 (СН3), 29.00 и 31.48 (СН2), 40.50 (С2″Н2), 53.29 и 53.51 (ОСН3), 54.50 (CO2CH3), 56.22 (NCH), 74.02 (С4′), 98-49 (С2′), 101.65 (С5′), 118.06 (=СН), 132.14 (=СН2), 158.74 (С1′), 170.97 (CO2Me), 187.57 (С=O). Масс-спектр, m/z (I, %): 411 [М]+ (12), 376 [М-Cl]+ (100), 344 [М-Cl-МеОН]+ (28), 320 (19), 258 (12), 222 (13), 147 (17).
Пример 4. Метил 2(S)-[(4(R,S)-аллил-5,5-диметокси-2,4-дихлор-3-оксоциклопент-1-ен-1-ил)амино]-4-(метилсульфинил)бутаноат (6). К смеси 0.5 г (1.22 ммоль) соединения 4 [2] в 10 мл безводного хлористого метилена при -78°С при перемешивании по каплям добавляли 0.23 г (1.34 ммоль) м-хлорнадбензойной кислоты в 3 мл безводного CH2Cl2. Реакционную смесь перемешивали 30 мин при -78°С, затем температуру подняли до -10°С и перемешивали еще 20 мин, массу фильтровали, фильтрат упарили. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO2 (этилацетат-петролейный эфир, 1:10, 1:5, 1:1) и получили 0.42 г (81%) маслообразного соединения 5 в виде смеси диастереомеров в соотношении ~1:1 (ЯМР 1Н). ИК спектр, ν, см-1: 2998, 2983, 2953, 1747, 1711, 1669, 1607, 1534, 1437, 1273, 1216, 1183, 1167, 1092, 1072, 1037, 932, 732, 699. Спектр ЯМР 1H (CDCl3) δ, м.д.: 2.47 м (2Н, СН2), 2.58 с (3Н, SCH3), 2.77 т (2Н, SCH2, J 7.3 Гц), 2.86 д (2Н, С2″Н2, J 7.6 Гц), 3.39 с (3Н, ОСН3), 3.49 (3.50) с (3Н, ОСН3), (3Н, ОСН3), 3.80 с (3Н, CO2CH3), 5.11 м (2Н, =СН2), 5.87 м (1Н, =СН), 6.88 м (1Н, NCH). Спектр ЯМР 13С (CDCl3) δ, м.д.: 25.93 (26.02) (СН2), 38.35 (38.42) (СН3), 40.50 (40.14) (С2″Н2), 52.06 (52.14) (ОСН3), 54.50 (54.30) (CO2CH3), 53.18 (NCH), 74.21 (73.97) (С4′), 100.19 (С2′), 102.48 (102.40) (С5′), 118.75 (118.94) (=СН), 132.54 (131.92) (=СН2), 159.26 (С1'), 170.79 (CO2Me), 188.02 (С=O). Масс-спектр, m/z (I, %): 427 [М]+ (0.2), 396 [М-ОСН3]+ (5), 392 [М-Cl]+ (4), 376 (18), 340 (28), 296 (100), 272 (34), 264 (44), 236 (42), 194 (20), 147 (16), 61 (46).
Пример 5. Метил 2(S)-[(4(R)-аллил-5,5-диметокси-2,4-дихлор-3-оксоцикло-пент-1-ен-1-ил)амино]-4-(метилсульфинил)бутаноат (7) получен аналогично 6 из соединения 1.
Пример 6. Метил 2(R)-[(4(R,S)-аллил-5,5-диметокси-2,4-дихлор-3-оксоциклопент-1-ен-1-ил)амино]-4-(метилсульфинил)бутаноат (8) получен аналогично 6 из соединения 5.
Пример 7. Изучение цитотоксического действия соединений в культуре клеток MDCK, полученных из почек собаки.
В опытах использовали однослойные перевиваемые культуры клеток почки эмбрионов собаки MDCK, выращенные на минимальной среде Игла с добавлением 10% фетальной сыворотки телят и антибиотиков. В предварительной серии экспериментов в культуре клеток MDCK было изучено цитотоксическое действие представленных соединений (1-6). В качестве сравнения использовалась ранее изученная субстанция арбидола (серия 2188), предоставленная ОАО Фармстандарт Лексредства (г. Курск), а также озельтамивир карбоксилат. В опытах использовали однослойные перевиваемые культуры клеток почки эмбрионов собаки MDCK, выращенные на минимальной среде Игла с добавлением 10% фетальной сыворотки телят и антибиотиков.
Приготовление изучаемых соединений и препаратов сравнения для экспериментов осуществляли следующим образом. В культуре клеток к 5 мг субстанций добавляли 0,5 мл спирта и оставляли при 37°С на 30 минут до полного растворения. Далее к образцам добавляли 4,5 мл дистиллированной воды, и из полученного раствора концентрацией 1 мг/мл готовили для исследований необходимые концентрации препаратов на используемой культуральной среде. Озельтамивр карбоксилат разводили в стерильной дистиллированной воде до концентрации 1 мкг/мл, полученный раствор далее хранили при температуре 4°C, используя в нескольких опытах. Перед опытом из этого разведения готовили растворы необходимых концентраций на используемой культуральной среде, которые далее хранили при температуре 4°C, используя в дальнейших опытах. Вещества взвешивали с точностью до 0,1 мг на аналитических весах.
Определение цитотоксического действия препаратов в культуре клеток проводили, как описано (Assay Guidance Manual. http://www/ncgc.nih.gov/guidance/section2.html.). Клетки MDCK выращивали в 96-луночных планшетах фирмы "Costar" в среде Игла в присутствии 5% сыворотки телят и 10 мМ глутамина до полного монослоя. Затем среду удаляли и в планшеты вносили по 200 мкл предоставленных образцов в испытуемой концентрации в минимальной среде Игла без сыворотки. После инкубации клеток с препаратами в течение 24 часов при 37°C в атмосфере 5% CO2 визуально оценивали состояние клеточного монослоя, далее клетки отмывали 1-2 раза средой без сыворотки и к клеткам добавляли по 50 мкл раствора ПБС (фосфатно-солевой буфер) без красителя, содержащего 50 мкг на лунку ХТТ (2,3-бис(2-метокси-4-нитро-5-сульфофенил)-2Н-тетразолий -5-карбоксианимид) 5 мкл 5 мМ раствора PMS (фенозин метасульфат). После инкубации в течение 4 часов при 37°C результаты просчитывали на автоматическом колориметре при длине волны 450 нм. Концентрация соединений, уменьшающая значение ОП450 (оптическая плотность при длине волны 450) на 50% по сравнению с контролем клеток, принималась за 50% цитотоксическую дозу (ЦД50). Максимальная концентрация соединений, не изменяющая значение ОП450 по сравнению с контролем клеток, принималась за максимально переносимую концентрацию (МПК).
Визуальная оценка состояния клеточной культуры под инвертированным микроскопом после 48 часов инкубации с изученными концентрациями соединений 1-6 (до 160 мкг/мл) и озельтамивира карбоксилата (до 500 мкг/мл) не выявила каких-либо цитотоксических изменений в клетках (табл. 1). В то же время значения ЦД50 и МПК для изученной субстанции арбидола составляли 35 мкг/мл и 40 мкг/мл, соответственно. Количественное определение жизнеспособности клеток с использованием колориметрической пробы восстановления тетразолиевой соли (ХТТ метод) подтвердило визуальную оценку цитотоксичности соединений (табл. 1). Как видно из табл. 1, значения ЦД50 и МПК для соединений 1-6 и озельтамивира карбоксилата превышали 100-160 мкг/мл и 500 мкг/мл соответственно, в то время как для арбидола эти величины составляли 35 мкг/мл и 40 мкг/мл соответственно. Эти величины по арбидолу совпадали со значениями, ранее полученными для различных субстанций этого средства.
Figure 00000008
Таким образом, изучение цитотоксичности соединений 1-6 как при визуальном наблюдении, так и с использованием количественного метода ХТТ в культуре клеток MDCK, показало, что эти вещества не оказывают никаких токсических эффектов в концентрациях, не превышающих 160 мкг/мл.
Пример 8. Изучение действия соединений на репродукцию вируса гриппа в культуре клеток.
В опытах in vitro использовали аллантоисный пул эталонного вируса гриппа человека А/Калифорния /7/09 (H1N1).
Определение противовирусной активности проводили, как описано (Методические указания по изучению ИЛП: Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ // - Медицина, 2012. - том 1, стр. 410-1420). Для определения противовирусной активности соединений клетки MDCK рассаживали в 96-луночных планшетах фирмы "Costar" со средней плотностью 30000-35000 клеток на лунку и выращивали в минимальной среде Игла в присутствии 5% фетальной сыворотки телят и 10 мМ глутамина до полного монослоя. Перед заражением вирусом клетки 2 раза промывали средой без сыворотки. Исследуемые препараты добавляли к клеткам в 2-х кратной концентрации в 100 мкл минимальной среды Игла. К вирусному контролю добавляли по 100 мкл этой же среды, а к клеточному контролю по 200 мкл. В опытах использовали штамм вируса гриппа человека, поэтому изучаемые образцы и разведения вируса готовились на среде с добавлением 2,5 мкг/мл ТРСК трипсина. После инкубации клеток с исследуемыми препаратами в течение 2 часов при 37°C в лунки, исключая клеточный контроль, добавляли по 100 мкл аллантоисного вируса, разведенного на среде с добавлением 5 мкг/мл ТРСК трипсина (от 0,1 до 5 БОЕ на клетку). Далее планшеты инкубировали в течение 24 часов в атмосфере 5% CO2 при 37°C клетки. После инкубации среду удаляли и клетки фиксировали 80% ацетоном на фосфатно-солевом буфере (ПБС) в течение 20 минут, хорошо высушивали, а затем отмывали 3 раза ПБС с 0,05% Твин-20 (ИФА-раствор). Эти и все дальнейшие процедуры отмывки проводили указанным раствором. Далее к клеткам добавляли по 100 мкл раствора ПБС с 1% фетальной сывороткой и 0,05% Твин-20 и инкубировали при 37°C в течение 30 минут. После удаления раствора к клеткам добавляли по 100 мкл моноклональные антитела (МКА) к внутренним белкам вируса гриппа A (NP+M1), разведенным 1:1000 на ИФА-растворе. После инкубации с антителами в течение 1 часа при 37°C и последующей 3-кратной промывки в лунки вносили по 100 мкл IgG кролика против IgG мыши, меченных пероксидазой хрена в разведении 1:5000 и инкубировали еще 1 час при 37°C. После 4-кратной промывки связанную пероксидазу выявляли добавлением в лунки 100 мкл 0,05% раствора ортофенилендиамина (ОФД) в 0,003% цитратном буфере рН=5,0, содержащем 0,003% H2O2. Планшеты выдерживали 15-30 минут в темноте до появления окраски, реакцию останавливали добавлением 50 мкл 4N H2SO4, далее оптическую плотность (ОП) измеряли на автоматическом спектрофотометре при 492 нм. В качестве клеточного контроля использовали лунки, не зараженные вирусом. Процент ингибирования вирусной репродукции изучаемыми соединениями определяли по формуле: процент ингибирования = 100-(ОП опыта - ОП клеточного контроля / ОП вирусного контроля в отсутствии соединения - ОП клеточного контроля). Для одной точки опыта использовали четыре лунки планшета, а каждое значение представляет среднее арифметическое, вычисленное из этого опыта. Концентрация препарата, уменьшающая значение величины ОП на 50%, принималась за ингибирующую концентрацию 50 (ИК 50).
Результаты проведенных исследований противовирусной активности соединений 1-6, а также препаратов сравнения Арбидола и Озельтамивира карбоксилата показали, что все исследуемые вещества в культуре клеток MDCK эффективно ингибировали репродукцию вируса гриппа А /Калифорния /7/09 (H1N1). Определение противовирусной активности в нетоксичных концентрациях изучаемых образцов показало, что эффективность ингибирования для каждого из них увеличивалась с повышением концентраций препаратов. На основании полученных данных были получены зависимости доза-ответ и определены ИК50 (табл. 2). Из полученных данных следует, что ИК50 была высокой для соединений 1-6 и находилась в пределах 5-10 мкг/мл, ИК50 для арбидола составляла 3-5 мкг/мл. При этом ИК50 для озельтамивира карбоксилата была наименьшей и составила 1 мкг/мл.
Figure 00000009
Figure 00000010
Таким образом, ИК50 для всех изученных препаратов были сравнимы, а для арбидола и озельтамивира карбоксилата совпадали с ингибирующими концентрациями, полученными ранее для этих препаратов в отношении эталонных и эпидемических штаммов вирусов гриппа А и В (Boriskin Y., Leneva I., Pecheur E. et al. // Current Med. Chem., 2008, v. 15, p. 997-1005 (Review Invited, English); Ленева И.А., Федякина И.Т., Гуськова T.A., Глушков Р.Г. // Терапевтический архив, 2005, №8, с. 84-88; Бурцева Е.И., Шевченко Е.С., Ленева И.А. и др. // Вопросы вирусологии, 2007, №2, с. 24-29; Ленева И.А., Федякина И.Т., Еропкин М.Ю., Гудова Н.В., Романовская А.А., Даниленко Д.М, Виноградова С.М., Лепешкин А.Ю., Шестопалов A.M. // Вопросы вирусологии, 2010, т. 55, №3, с. 19-27).

Claims (3)

1. Средство, обладающее противогриппозной активностью, представляющее собой соединения общей формулы (I) в виде смеси R- и S-диастереомеров или отдельных изомеров или их фармацевтически приемлемые соли:
Figure 00000011
2. Средство по п.1, где соединения общей формулы (I) выбраны из
метил 2(S)-[4(R)-аллил-5,5-диметокси-2,4-дихлор-3-оксоциклопент-1-ениламино]-4-(метилтио)бутаноата,
метил 2(S)-[(4(S)-аллил-5,5-диметокси-2,4-дихлор-3-оксоциклопент-1-енил)амино]-4-(метилтио)бутаноата,
метил 2(R)-[(4(R,S)-аллил-5,5-диметокси-2,4-дихлор-3-оксоциклопент-1-енил)амино]-4-(метилтио)бутаноата,
метил 2(S)-[(4(R,S)-аллил-5,5-диметокси-2,4-дихлор-3-оксоциклопент-1-ен-1-ил)амино]-4-(метилсульфинил)бутаноата,
метил 2(S)-[(4(R)-аллил-5,5-диметокси-2,4-дихлор-3-оксоциклопент-1-ен-1-ил)амино]-4-(метилсульфинил)бутаноата,
метил 2(R)-[(4(R,S)-аллил-5,5-диметокси-2,4-дихлор-3-оксоциклопент-1-ен-1-ил)амино]-4-(метилсульфинил)бутаноата.
3. Применение соединений общей формулы (I), указанной в п.1, в качестве средства, обладающего противогриппозной активностью.
RU2015116400/04A 2015-04-30 2015-04-30 Противовирусное средство и способ его получения RU2599792C1 (ru)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2015116400/04A RU2599792C1 (ru) 2015-04-30 2015-04-30 Противовирусное средство и способ его получения

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2015116400/04A RU2599792C1 (ru) 2015-04-30 2015-04-30 Противовирусное средство и способ его получения

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2599792C1 true RU2599792C1 (ru) 2016-10-20

Family

ID=57138405

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2015116400/04A RU2599792C1 (ru) 2015-04-30 2015-04-30 Противовирусное средство и способ его получения

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2599792C1 (ru)

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2145166C1 (ru) * 1997-10-30 2000-02-10 Институт органической химии Уфимского научного центра РАН Ингибитор вируса табачной мозаики на листьях табака

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2145166C1 (ru) * 1997-10-30 2000-02-10 Институт органической химии Уфимского научного центра РАН Ингибитор вируса табачной мозаики на листьях табака

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Ф. А. ГИМАЛОВА И ДР., О реакции 5-аллил-4,4-диметокси-2,3,5-трихлорциклопент-2-ен-1-она с аминокислотами, ЖУРН. ОРГАН. ХИМИИ, 2007, Т.43, с.987-989. R. R. AKHMETVALEEV ET AL., New chlorinated cyclopentenones prepared from hexachlorocyclopentadiene: synthesis, chemical properties, and application in the synthesis, RUSS. CHEM. BULL., INT. ED., 2001, Vol. 50, pp.1489-1509. *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP5709688B2 (ja) ノイラミニダーゼ阻害剤として有用な置換シクロペンタン及びシクロペンテン化合物
DK170068B1 (da) Analogifremgangsmåde til fremstilling af xanthater
WO2021075147A1 (ja) Ｂｒａｐ２作用増強剤
Teplov et al. Synthesis of new compounds combining adamantanamine and monoterpene fragments and their antiviral activity against influenza virus A (H1N1) pdm09
CA2946609A1 (en) Naphthaquinone methyltransferase inhibitors and uses thereof
JP6198741B2 (ja) インフルエンザを処置するための化合物
Hajzer et al. Stereoisomers of oseltamivir–synthesis, in silico prediction and biological evaluation
RU2599792C1 (ru) Противовирусное средство и способ его получения
RU2554934C1 (ru) ИМИНОПРОИЗВОДНЫЕ КАМФОРЫ - ЭФФЕКТИВНЫЕ ИНГИБИТОРЫ РЕПРОДУКЦИИ ВИРУСА ГРИППА (штамм A/California/07/09 (H1N1)pdm09)
JP4482883B2 (ja) 抗ウイルス作用を有する化合物およびその配合剤
RU2520967C1 (ru) СИММЕТРИЧНЫЕ ДИИМИНЫ НА ОСНОВЕ КАМФОРЫ - ИНГИБИТОРЫ РЕПРОДУКЦИИ ВИРУСА ГРИППА (ШТАММ A/California/07/09 (H1N1)pdm09)
Matsuya et al. Synthesis and anti-influenza virus activity of dihydrofuran-fused perhydrophenanthrenes with a benzyloxy-type side-chain
RU2530554C1 (ru) Применение 1,7,7-триметилбицикло[2.2.1]гептан-2-илиден-аминоэтанола в качестве ингибитора репродукции вируса гриппа
RU2649406C1 (ru) 3-n-замещенные борнилпропионаты, используемые в качестве ингибиторов вируса марбург
RU2607451C1 (ru) ИМИНОПРОИЗВОДНЫЕ КАМФОРЫ, СОДЕРЖАЩИЕ АРОМАТИЧЕСКИЙ ИЛИ ГЕТЕРОАРОМАТИЧЕСКИЙ ФРАГМЕНТ, - ИНГИБИТОРЫ РЕПРОДУКЦИИ ВИРУСА ГРИППА (штамм A/California/07/09 (H1N1)pdm09)
WO2003068736A2 (en) Mixed steroidal 1,2,4,5-tetraoxane compounds and methods of making and using thereof
RU2798171C1 (ru) O-Ациламидоксимы и 1,2,4-оксадиазолы, содержащие фрагмент бицикло[2.2.1]гептанона-2, в качестве ингибиторов репродукции филогенетически различных вирусов гриппа А: штаммы A/Puerto Rico/8/34 (H1N1), A/Anhui/1/2013 (H7N9)
CN107827830B (zh) 一种奥司他韦衍生物及其制备方法与应用
RU2647576C1 (ru) Циклобутил (S)-2-[[[(R)-2-(6-аминопурин-9-ил)-1-метил-этокси]метил-фенокси-фосфорил]амино]-пропаноаты, способ их получения и применения
Peçanha et al. Synthesis and anti-HIV activity of new C2 symmetric derivatives designed as HIV-1 protease inhibitors
RU2756587C9 (ru) Производные 2-ацетамидо-6-гидрокси-бензотиофена и их фармацевтически приемлемые соли, обладающие противовирусной активностью
RU2697716C1 (ru) Гидрохлорид 1,7,7-триметилбицикло[2.2.1]гептан-2-ил 3-(пиперидин-1-ил)пропионат, используемый в качестве ингибитора вируса Эбола
RU2616255C1 (ru) ПРИМЕНЕНИЕ (1S,3aR,4R,7aS)-N-(2,2,4,7a-ТЕТРАМЕТИЛОКТАГИДРО-1,4-ЭТАНОИНДЕН-3а-ИЛ)-АЦЕТАМИДА В КАЧЕСТВЕ ИНГИБИТОРА РЕПРОДУКЦИИ ВИРУСА ГРИППА
RU2664331C1 (ru) 6,13,13-ТРИМЕТИЛ-6,8,9,12-ТЕТРАГИДРО-6,9-МЕТАНОАЗЕПИНО[2,1-b]ХИНАЗОЛИН-10(7Н)-ОН В КАЧЕСТВЕ ИНГИБИТОРА ВИРУСОВ ГРИППА А
Jiang et al. Construction and synthesis of tricyclic matrinic derivatives against influenza A virus by privileged structure strategy

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20170501