RU2446210C2 - Пищевой продукт, содержащий специфичную к пролину протеазу, способ его производства и его применение для расщепления токсичных или аллергенных пептидов глютена - Google Patents
Пищевой продукт, содержащий специфичную к пролину протеазу, способ его производства и его применение для расщепления токсичных или аллергенных пептидов глютена Download PDFInfo
- Publication number
- RU2446210C2 RU2446210C2 RU2008135467/10A RU2008135467A RU2446210C2 RU 2446210 C2 RU2446210 C2 RU 2446210C2 RU 2008135467/10 A RU2008135467/10 A RU 2008135467/10A RU 2008135467 A RU2008135467 A RU 2008135467A RU 2446210 C2 RU2446210 C2 RU 2446210C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- food product
- proline
- gluten
- enzyme
- food
- Prior art date
Links
- 235000013305 food Nutrition 0.000 title claims abstract description 105
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 83
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 title claims abstract description 82
- 108010068370 Glutens Proteins 0.000 title claims abstract description 63
- 235000021312 gluten Nutrition 0.000 title claims abstract description 57
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 title claims abstract description 37
- 239000004365 Protease Substances 0.000 title claims abstract description 34
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 31
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims abstract description 26
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 title claims abstract 10
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 12
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 title description 11
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 title description 11
- 230000002009 allergenic effect Effects 0.000 title description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 61
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 36
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 claims abstract description 27
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 27
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 27
- 208000015943 Coeliac disease Diseases 0.000 claims abstract description 24
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 claims abstract description 5
- 102000012479 Serine Proteases Human genes 0.000 claims abstract description 5
- 108010022999 Serine Proteases Proteins 0.000 claims abstract description 5
- 235000004213 low-fat Nutrition 0.000 claims description 23
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 claims description 13
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 11
- 238000011049 filling Methods 0.000 claims description 11
- 235000011194 food seasoning agent Nutrition 0.000 claims description 7
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 claims description 6
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 claims description 5
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 claims description 5
- 235000015067 sauces Nutrition 0.000 claims description 5
- 230000007017 scission Effects 0.000 claims description 5
- 201000004384 Alopecia Diseases 0.000 claims description 4
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 claims description 4
- 208000020925 Bipolar disease Diseases 0.000 claims description 4
- 206010003805 Autism Diseases 0.000 claims description 3
- 208000020706 Autistic disease Diseases 0.000 claims description 3
- 206010003827 Autoimmune hepatitis Diseases 0.000 claims description 3
- 201000004624 Dermatitis Diseases 0.000 claims description 3
- 208000030836 Hashimoto thyroiditis Diseases 0.000 claims description 3
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 claims description 3
- 231100000360 alopecia Toxicity 0.000 claims description 3
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 claims description 3
- 208000002551 irritable bowel syndrome Diseases 0.000 claims description 3
- 208000006096 Attention Deficit Disorder with Hyperactivity Diseases 0.000 claims description 2
- 208000036864 Attention deficit/hyperactivity disease Diseases 0.000 claims description 2
- 208000005016 Intestinal Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 208000015914 Non-Hodgkin lymphomas Diseases 0.000 claims description 2
- 208000028683 bipolar I disease Diseases 0.000 claims description 2
- 208000025307 bipolar depression Diseases 0.000 claims description 2
- 201000002313 intestinal cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 claims description 2
- 208000020016 psychiatric disease Diseases 0.000 claims description 2
- 201000000980 schizophrenia Diseases 0.000 claims description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 abstract description 105
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 abstract description 105
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 104
- 101710118538 Protease Proteins 0.000 description 47
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 27
- 239000000047 product Substances 0.000 description 24
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 23
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 20
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 description 19
- 238000000034 method Methods 0.000 description 18
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 18
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 17
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 17
- 108010061711 Gliadin Proteins 0.000 description 14
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 14
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 12
- 238000009928 pasteurization Methods 0.000 description 11
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 11
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 10
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 10
- 235000008429 bread Nutrition 0.000 description 10
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 10
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 10
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 9
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 9
- 210000001198 duodenum Anatomy 0.000 description 8
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 8
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 8
- 241000228245 Aspergillus niger Species 0.000 description 7
- 101710087459 Gamma-gliadin Proteins 0.000 description 7
- 101710088675 Proline-rich peptide Proteins 0.000 description 7
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 7
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 7
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 7
- 239000000463 material Substances 0.000 description 7
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 7
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 7
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 6
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 6
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 6
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 6
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 6
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 6
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 6
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 6
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 6
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 6
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 6
- 102100025012 Dipeptidyl peptidase 4 Human genes 0.000 description 5
- 101710136733 Proline-rich protein Proteins 0.000 description 5
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 5
- 238000012875 competitive assay Methods 0.000 description 5
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 5
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 5
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 5
- 230000001079 digestive effect Effects 0.000 description 5
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 5
- 235000019197 fats Nutrition 0.000 description 5
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 5
- 235000012041 food component Nutrition 0.000 description 5
- 239000005417 food ingredient Substances 0.000 description 5
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 5
- 238000010874 in vitro model Methods 0.000 description 5
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 5
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 description 5
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 5
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 5
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102100037084 C4b-binding protein alpha chain Human genes 0.000 description 4
- 239000004278 EU approved seasoning Substances 0.000 description 4
- 102000056251 Prolyl Oligopeptidases Human genes 0.000 description 4
- 235000011034 Rubus glaucus Nutrition 0.000 description 4
- 244000235659 Rubus idaeus Species 0.000 description 4
- 235000009122 Rubus idaeus Nutrition 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 4
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 4
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 4
- 235000019640 taste Nutrition 0.000 description 4
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 4
- 102000011632 Caseins Human genes 0.000 description 3
- 108010076119 Caseins Proteins 0.000 description 3
- 108010067722 Dipeptidyl Peptidase 4 Proteins 0.000 description 3
- 108700015930 Prolyl Oligopeptidases Proteins 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 3
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 3
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 3
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 3
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 3
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 3
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 3
- -1 for example Proteins 0.000 description 3
- 210000004051 gastric juice Anatomy 0.000 description 3
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000001630 jejunum Anatomy 0.000 description 3
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 3
- 210000000214 mouth Anatomy 0.000 description 3
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 3
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 3
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 3
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 3
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 3
- 125000001500 prolyl group Chemical group [H]N1C([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 3
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 3
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 3
- 229960001322 trypsin Drugs 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 description 2
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 description 2
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 description 2
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090000317 Chymotrypsin Proteins 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 2
- 108010010256 Dietary Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000015781 Dietary Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108090000194 Dipeptidyl-peptidases and tripeptidyl-peptidases Proteins 0.000 description 2
- 102000003779 Dipeptidyl-peptidases and tripeptidyl-peptidases Human genes 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000930822 Giardia intestinalis Dipeptidyl-peptidase 4 Proteins 0.000 description 2
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 2
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 2
- 240000005979 Hordeum vulgare Species 0.000 description 2
- 235000007340 Hordeum vulgare Nutrition 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- 235000007688 Lycopersicon esculentum Nutrition 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- 206010060860 Neurological symptom Diseases 0.000 description 2
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 2
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 2
- 235000007238 Secale cereale Nutrition 0.000 description 2
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 240000003768 Solanum lycopersicum Species 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- 108060008539 Transglutaminase Proteins 0.000 description 2
- 108010046377 Whey Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000007544 Whey Proteins Human genes 0.000 description 2
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 150000001323 aldoses Chemical class 0.000 description 2
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 description 2
- 210000004666 bacterial spore Anatomy 0.000 description 2
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UTXSFKPOIVELPQ-SFHVURJKSA-N benzyl n-[2-[(2s)-2-[(4-nitrophenyl)carbamoyl]pyrrolidin-1-yl]-2-oxoethyl]carbamate Chemical compound C1=CC([N+](=O)[O-])=CC=C1NC(=O)[C@H]1N(C(=O)CNC(=O)OCC=2C=CC=CC=2)CCC1 UTXSFKPOIVELPQ-SFHVURJKSA-N 0.000 description 2
- 235000019658 bitter taste Nutrition 0.000 description 2
- 235000011089 carbon dioxide Nutrition 0.000 description 2
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 229960002376 chymotrypsin Drugs 0.000 description 2
- 239000005515 coenzyme Substances 0.000 description 2
- 235000021245 dietary protein Nutrition 0.000 description 2
- 229940042399 direct acting antivirals protease inhibitors Drugs 0.000 description 2
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 2
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 2
- 210000003238 esophagus Anatomy 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 210000003405 ileum Anatomy 0.000 description 2
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 235000008960 ketchup Nutrition 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000013310 margarine Nutrition 0.000 description 2
- 239000003264 margarine Substances 0.000 description 2
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 2
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 2
- 230000003340 mental effect Effects 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 2
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 2
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 2
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 2
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 description 2
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 description 2
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 2
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 235000010199 sorbic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000004334 sorbic acid Substances 0.000 description 2
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 102000003601 transglutaminase Human genes 0.000 description 2
- 235000012794 white bread Nutrition 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WSWCOQWTEOXDQX-MQQKCMAXSA-M (E,E)-sorbate Chemical compound C\C=C\C=C\C([O-])=O WSWCOQWTEOXDQX-MQQKCMAXSA-M 0.000 description 1
- HZWWPUTXBJEENE-UHFFFAOYSA-N 5-amino-2-[[1-[5-amino-2-[[1-[2-amino-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-5-oxopentanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-5-oxopentanoic acid Chemical compound C1CCC(C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)N2C(CCC2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(O)=O)N1C(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 HZWWPUTXBJEENE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GJCOSYZMQJWQCA-UHFFFAOYSA-N 9H-xanthene Chemical compound C1=CC=C2CC3=CC=CC=C3OC2=C1 GJCOSYZMQJWQCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CXRCVCURMBFFOL-FXQIFTODSA-N Ala-Ala-Pro Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O CXRCVCURMBFFOL-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 241000532370 Atla Species 0.000 description 1
- 235000007319 Avena orientalis Nutrition 0.000 description 1
- 244000075850 Avena orientalis Species 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M Bicarbonate Chemical compound OC([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 102100020751 Dipeptidyl peptidase 2 Human genes 0.000 description 1
- 102100031416 Gastric triacylglycerol lipase Human genes 0.000 description 1
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 description 1
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 101710191695 Glutamine-rich protein Proteins 0.000 description 1
- 108010047762 HLA-DQ8 antigen Proteins 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101001095266 Homo sapiens Prolyl endopeptidase Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 description 1
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 description 1
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 description 1
- 229920002774 Maltodextrin Polymers 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000006057 Non-nutritive feed additive Substances 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 241000209056 Secale Species 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 1
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- 235000019714 Triticale Nutrition 0.000 description 1
- 239000005862 Whey Substances 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-N arachidonic acid Chemical class CCCCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCC(O)=O YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-N 0.000 description 1
- 235000021342 arachidonic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 210000000941 bile Anatomy 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 235000009767 bottled carbonated water Nutrition 0.000 description 1
- UDSAIICHUKSCKT-UHFFFAOYSA-N bromophenol blue Chemical compound C1=C(Br)C(O)=C(Br)C=C1C1(C=2C=C(Br)C(O)=C(Br)C=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 UDSAIICHUKSCKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000144987 brood Species 0.000 description 1
- 235000014121 butter Nutrition 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 229940021722 caseins Drugs 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 210000004913 chyme Anatomy 0.000 description 1
- 235000015165 citric acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 1
- 238000010411 cooking Methods 0.000 description 1
- 239000013256 coordination polymer Substances 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000013480 data collection Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000001784 detoxification Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 description 1
- 210000002249 digestive system Anatomy 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000002183 duodenal effect Effects 0.000 description 1
- 238000004945 emulsification Methods 0.000 description 1
- 230000006862 enzymatic digestion Effects 0.000 description 1
- 238000001976 enzyme digestion Methods 0.000 description 1
- BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N ethenylcyclopentane Chemical compound C=CC1CCCC1 BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000005187 foaming Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 239000012520 frozen sample Substances 0.000 description 1
- 235000015203 fruit juice Nutrition 0.000 description 1
- 230000030136 gastric emptying Effects 0.000 description 1
- 108010091264 gastric triacylglycerol lipase Proteins 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 235000006171 gluten free diet Nutrition 0.000 description 1
- 235000020884 gluten-free diet Nutrition 0.000 description 1
- 108010050792 glutenin Proteins 0.000 description 1
- 230000003676 hair loss Effects 0.000 description 1
- 239000012510 hollow fiber Substances 0.000 description 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 1
- 235000019692 hotdogs Nutrition 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 235000015243 ice cream Nutrition 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 210000002429 large intestine Anatomy 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 239000008268 mayonnaise Substances 0.000 description 1
- 235000010746 mayonnaise Nutrition 0.000 description 1
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 1
- 208000030159 metabolic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000001788 mono and diglycerides of fatty acids Substances 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000007764 o/w emulsion Substances 0.000 description 1
- 108010032563 oligopeptidase Proteins 0.000 description 1
- 229940005483 opioid analgesics Drugs 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 230000020477 pH reduction Effects 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 210000001819 pancreatic juice Anatomy 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002572 peristaltic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 229940068065 phytosterols Drugs 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 229920001451 polypropylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 235000015277 pork Nutrition 0.000 description 1
- 235000013606 potato chips Nutrition 0.000 description 1
- 238000011045 prefiltration Methods 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000529 probiotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 108060006613 prolamin Proteins 0.000 description 1
- XXRYFVCIMARHRS-UHFFFAOYSA-N propan-2-yl n-dimethoxyphosphorylcarbamate Chemical compound COP(=O)(OC)NC(=O)OC(C)C XXRYFVCIMARHRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 230000006337 proteolytic cleavage Effects 0.000 description 1
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 description 1
- 238000005086 pumping Methods 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- CVHZOJJKTDOEJC-UHFFFAOYSA-N saccharin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)NS(=O)(=O)C2=C1 CVHZOJJKTDOEJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940081974 saccharin Drugs 0.000 description 1
- 235000019204 saccharin Nutrition 0.000 description 1
- 239000000901 saccharin and its Na,K and Ca salt Substances 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- WXMKPNITSTVMEF-UHFFFAOYSA-M sodium benzoate Chemical compound [Na+].[O-]C(=O)C1=CC=CC=C1 WXMKPNITSTVMEF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000010234 sodium benzoate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004299 sodium benzoate Substances 0.000 description 1
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229940075554 sorbate Drugs 0.000 description 1
- 229940075582 sorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000014347 soups Nutrition 0.000 description 1
- 235000013555 soy sauce Nutrition 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 235000019871 vegetable fat Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 235000019155 vitamin A Nutrition 0.000 description 1
- 239000011719 vitamin A Substances 0.000 description 1
- 235000019166 vitamin D Nutrition 0.000 description 1
- 239000011710 vitamin D Substances 0.000 description 1
- 239000007762 w/o emulsion Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 235000021119 whey protein Nutrition 0.000 description 1
- 241000228158 x Triticosecale Species 0.000 description 1
- 229920001285 xanthan gum Polymers 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/58—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from fungi
- C12N9/62—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from fungi from Aspergillus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23D—EDIBLE OILS OR FATS, e.g. MARGARINES, SHORTENINGS, COOKING OILS
- A23D7/00—Edible oil or fat compositions containing an aqueous phase, e.g. margarines
- A23D7/001—Spread compositions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L2/00—Non-alcoholic beverages; Dry compositions or concentrates therefor; Their preparation
- A23L2/52—Adding ingredients
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L21/00—Marmalades, jams, jellies or the like; Products from apiculture; Preparation or treatment thereof
- A23L21/10—Marmalades; Jams; Jellies; Other similar fruit or vegetable compositions; Simulated fruit products
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L27/00—Spices; Flavouring agents or condiments; Artificial sweetening agents; Table salts; Dietetic salt substitutes; Preparation or treatment thereof
- A23L27/60—Salad dressings; Mayonnaise; Ketchup
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L29/00—Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof
- A23L29/06—Enzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/17—Amino acids, peptides or proteins
- A23L33/18—Peptides; Protein hydrolysates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
- C12Y304/14—Dipeptidyl-peptidases and tripeptidyl-peptidases (3.4.14)
- C12Y304/14002—Dipeptidyl-peptidase II (3.4.14.2)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
- C12Y304/14—Dipeptidyl-peptidases and tripeptidyl-peptidases (3.4.14)
- C12Y304/14005—Dipeptidyl-peptidase IV (3.4.14.5)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
- C12Y304/21—Serine endopeptidases (3.4.21)
- C12Y304/21026—Prolyl oligopeptidase (3.4.21.26), i.e. proline-specific endopeptidase
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
- Seeds, Soups, And Other Foods (AREA)
- General Preparation And Processing Of Foods (AREA)
- Food Preservation Except Freezing, Refrigeration, And Drying (AREA)
Abstract
Изобретение относится к пищевым продуктам, содержащим специфичную к пролину протеазу, способам их производства и применению специфичной к пролину протеазы при производстве пищевых продуктов. Пастеризованный пищевой продукт, содержащий специфичную к пролину протеазу, имеет активность воды, по меньшей мере, 0,85. В качестве фермента используют протеазу, выделенную из Aspergillus или относящуюся к семейству S28 сериновых протеаз. Оптимальная активность указанной протеазы при значении pH от 1 до 7, предпочтительно при значении pH от 2 до 6. Также предложен пищевой продукт, содержащий менее 1 мас.% белка или пептидов к массе продукта. Указанные пищевые продукты получают добавлением в них специфичной к пролину протеазы. Употребление таких продуктов обеспечивает расщепление пептидов глютена и рекомендовано больным, страдающим непереносимостью глютена. 5 н. и 12 з.п. ф-лы, 5 ил., 2 табл., 6 пр.
Description
Область техники, к которой относится изобретение
Изобретение относится к пищевому продукту, содержащему специфичную к пролину протеазу, к способу его производства и к его применению для расщепления токсичных или аллергенных пептидов глютена (клейковины).
Предшествующий уровень техники
Известно, что потребление глютена, т.е. общего пищевого белка, присутствующего в пшенице, ячмене, ржи, пшеницы спельте и тритикале, вызывает заболевание у некоторых индивидуумов. Глютен представляет собой сложную смесь богатых глутамином и пролином глиадинов и глютенинов, которые, как предполагается, ответственны за развитие ряда заболеваний. Вследствие аминокислотного состава глютенов их специфические части довольно устойчивы к протеолитическому расщеплению в желудочно-кишечном тракте человека. В результате этого могут накапливаться специфические, богатые пролином пептиды, что может привести к нежелательным симптомам, таким как непереносимость различных пептидов, образующихся из глютена. Например, в литературе описаны аминокислотные последовательности пептидов, ответственных за токсичность глютена, наблюдавшуюся у пациентов, страдающих глютеновой болезнью - целиакией (Arentz-Hansen et al., J. Exp.Med. 2000; 6: 337-342; Vader et al., Gastroenterology 2002; 122: 1729-1737).
Целиакия - это широко распространенное аутоиммунное заболевание тонкого кишечника. У больных целиакией наблюдается значительное превалирование различных аутоиммунных расстройств, главным образом, диабета I типа, герпетиформного дерматита, аутоиммунного тиреоидита, коллагенозов, аутоиммунной алопеции (облысения) и аутоиммунного гепатита. Целиакия часто сопровождается также психическими и неврологическими симптомами, которые могут привести к далеко идущим последствиям нарушения метаболизма пептидов, богатых пролином.
В таких случаях только соблюдение безглютеновой диеты на протяжении всей жизни может эффективно предупреждать клинические симптомы у больных целиакией. Но, к несчастью для таких больных, глютен представляет собой дешевый белок с вызывающим интерес потенциалом его использования, поэтому он широко применяется в различных пищевых продуктах, таких как реализуемые в торговой сети супы, соевые соусы, соусы, мороженое, картофельные чипсы и хот-доги. Вот почему больные с непереносимостью глютена нуждаются в подробном перечне пищевых продуктов, которые позволили бы им избежать потребления молекул проблематичного глютена, поскольку потребление глютена даже в таком малом количестве, как 50 мг в сутки, может вызвать у них повторное проявление клинических симптомов.
Сегодня понятно, что проблематичные богатые пролином пептиды, присутствующие в глютене, являются высоко устойчивыми к расщеплению желудочными пептидазами и пептидазами поджелудочной железы, такими как пепсин, трипсин, химотрипсин и др. Только специфические ферменты, которые могут гидролизовать пептидные связи, включающие пролин, способны к экстенсивному гидролизу богатых пролином последовательностей с разрушением при этом эпитопов, релевантных для целиакии. Сообщалось о различных ферментах, находящих полезное применение для инактивирования токсичных богатых пролином пептидов, таких как пролил-олигопептидазы (ЕС 3.4.21.26; Shan et al. Science 297, p.2275-2279) и дипептидил-пептидаза IV (ЕС 3.4.14.5; US-A-2002/0041871). Опубликован также ряд патентных заявок, в которых упоминается возможная роль специфичных к пролину протеаз в снижении антигенности пищевых продуктов, содержащих глютен (например, WO-A-2002/45523), а также применение таких ферментов для предупреждения клинических симптомов целиакии и сопутствующих заболеваний (например, WO 03068170 и WO 2005/027953). Совсем недавно была продемонстрирована пригодность ферментотерапии для лечения больных целиакией с применением дуоденальных экстрактов (Cornell et al., Scandinavian Journal of Gastroenterology, 2005; 40: 1304-1312).
WO-A-2002/45523 раскрывает конкретное применение специфичной к пролину эндопротеазы для протеолиза полипептидов, включая пептиды, богатые пролином. Заявка описывает введение эндопротеазы в белковые пищевые продукты для подавления в них горечи или снижения их аллергенности. В WO-A-2005/027953 подчеркивается, что эта конкретная эндопротеаза идеально подходит в качестве диетической добавки, поддерживающей процесс переваривания пищевого глютена, поскольку она показывает широкий pH-оптимум, что позволяет ферменту быть активным в ротовой полости, пищеводе, желудке и оставаться активным в двенадцатиперстной кишке.
WO 2005/027953 направлена на удаление токсичных богатых пролином пептидов из пищевого продукта перед его потреблением, в результате чего предупреждается или минимизируется воздействие на организм токсичных богатых пролином пептидов. В заявке раскрывается также применение стабилизированных ферментных композиций в качестве средства, способствующего пищеварению. В описанном подходе фермент потребляется вместе с пищевым продуктом с тем, чтобы богатые пролином и/или богатые глутамином белковые последовательности пищевого продукта расщеплялись при прохождении через желудочно-кишечный тракт. Однако согласно WO 2005/027953 ферментная композиция может вводиться только в богатые пролином и/или богатые глутамином пищевые продукты с активностью воды ниже 0,85 с тем, чтобы ферменты оставались достаточно активными. В том случае, если пищевой продукт должен храниться в течение длительных периодов времени, следует избегать его контакта с влагой или влажным воздухом, т.е. в таких случаях предлагается использовать сухие пищевые продукты. Такой подход значительно ограничивает выбор пищевых продуктов, которые можно комбинировать с эндопротеазой.
Применение ферментных композиций во влагосодержащих пищевых продуктах, таких как маргарин или подобные ему спреды, хорошо известно, в основном, из уровня техники. Однако в большинстве случаев ферменты добавляют в качестве технологических добавок, облегчающих обработку, и пролонгированная ферментативная активность, т.е. активность, которая сохраняется после упаковки продукта, в этих случаях не требуется. Например, DE-A-101 04 945 раскрывает низкожирные спреды, содержащие фосфолипиды и ферменты, например, трансглютаминазу, без применения эмульгаторов или стабилизаторов. После кратковременного инкубационного периода на стадии изготовления продукта трансглютаминаза инактивируется тепловой обработкой при 95°С в течение 2-3 минут.
WO-A-95/28092 касается применения стабилизаторов, таких как полиолы, для стабилизации эмульсий вода-в-масле, пригодных для пищевых продуктов, в которых эмульсии содержат термолабильное соединение, такое как фермент. В противоположность двум вышеупомянутым заявкам, WO-A-95/28092 направлена на долгосрочную стабилизацию ферментной активности. С этой целью в водную фазу вводится от 40% до 50% глицерина, как указано в примере. Однако введение таких высоких количеств полиолов в пищевые продукты либо не допускается, либо неприемлемо с органолептической точки зрения.
Описание сущности изобретения
Авторами изобретения установлено, что специфичные к пролину протеазы можно использовать в качестве ингредиента в пищевых продуктах с высокой активностью воды, в которых отсутствуют высокие количества стабилизаторов ферментов. Такие продукты можно даже подвергать пастеризации с целью гарантирования их адекватной стабильности в хранении без значительных потерь характерной ферментной активности. В настоящей заявке продемонстрировано, что в пищевых продуктах, таких как начинки для сэндвичей, верхние начинки, приправы, соусы, различные напитки, и в эмульсиях, таких как низкожирные спреды, специфичные к пролину протеазы остаются достаточно активными для достижения адекватного гидролиза последовательностей богатого пролином глютена в желудке. В большинстве случаев вкус пищевого продукта не страдает или не изменяется от присутствия фермента.
Тот факт, что фермент выдерживает обработку пастеризацией, сам по себе удивителен, поскольку в уровне техники высказывалось предположение, что в условиях высокой активности воды большинство ферментов не способно выдерживать режимы пастеризации. Равным образом предполагалось, что большая часть ферментов теряет свою активность в продуктах с высокой активностью воды спустя одну неделю хранения. Таким образом, удивительным является также то, что согласно изобретению фермент поддерживает свою активность в течение периодов времени до одного года, если пищевой продукт с высокой активностью воды хранится при режимах охлаждения. Под выражением "при режимах охлаждения" подразумеваются температуры ниже 10°С, предпочтительно от 0 до 10°С, более предпочтительно от 2°С до 8°С.
Таким образом, изобретение относится к пастеризованным и стабильным в хранении пищевым продуктам, имеющим активность воды по меньшей мере 0,80, предпочтительно по меньшей мере 0,85, и содержащим специфичную к пролину протеолитическую активность, которая достаточно высока для обеспечения детоксикации богатых пролином белковых последовательностей. Токсичными количествами богатых пролином белковых последовательностей считаются присутствующие в глютене количества порядка выше 1 мг.
Согласно другому аспекту изобретения раскрывается стабильный в хранении пищевой продукт, имеющий активность воды по меньшей мере 0,80, предпочтительно по меньшей мере 0,85, и содержащий специфичную к пролину протеолитическую активность, которая способна обеспечить детоксикацию богатых пролином белковых последовательностей, в котором пищевой продукт содержит менее 1% мас./мас., белка или пептидов и предпочтительно пищевой продукт не содержит глютена.
Настоящее изобретение относится также к стерильной специфичной к пролину протеазе. Под "стерильной" имеется в виду не содержащая микроорганизмов, предпочтительно не содержащая также бактериальных спор. Специфичная к пролину протеаза предпочтительно подвергается фильтрованию для удаления микроорганизмов, предпочтительно и бактериальных спор.
Белки зерновых можно разделить на альбумины, глобулины, проламины и глютелины. Глютен представляет собой нерастворимую в воде белковую фракцию зерновых, таких как пшеница, рожь, пшеница спельта, овес, ячмень, кукуруза и рис, которая остается после промывки с целью удаления крахмала и растворимых в воде компонентов. Его можно подразделить на глиадины и глютенины. Глютенины можно подразделить на высоко- и низкомолекулярные субъединицы. Подробное обсуждение белков глютена см. Wheat Gluten (P.R.Shewry and A.S.Tatham eds., Cambridge: Royal Society of Chemistry, 2000) или обзорную статью Wieser (1996) в Acta Paediatr. Suppl. 412: 3-9.
В соответствии с признанными во всем мире схемами классификации и номенклатуры всех ферментов от IUMB олигопептидазы, дипептидилпептидазы и эндопротеазы - это ферменты, гидролизующие внутренние пептидные связи, которые в свою очередь подразделяются на дополнительные подклассы на основе их каталитического механизма. Предпочтительной специфичной к пролину протеазой, пригодной для цели настоящего изобретения, является кислотоустойчивая и стабильная к пепсину эндопротеаза из A.niger, раскрываемая в WO-A-02/45524 и WO-A-2005/027953, которая способна расщеплять пептиды и нативные белки с карбоксильной стороны пролиновых остатков и которая способна также расщеплять пептиды и нативные белки в условиях очень низкого pH и в присутствии пепсина. Эта эндопротеаза сохраняется в присутствии фермента пепсина в кислотных условиях и, по всей вероятности, продолжает оставаться активной и в двенадцатиперстной кишке. Наиболее предпочтительной эндопротеазой является специфичная к пролину эндопротеаза, выделенная из грибка пищевого качества Aspergillus или специфичная к пролину эндопротеаза, относящаяся к семейству S28 сериновых протеаз.
Активность воды - это относительное наличие воды в веществе. Она определяется в уровне техники как давление водяного пара, деленное на давление чистой воды при той же температуре. Таким образом, чистая дистиллированная вода имеет активность воды, равную точно единице. Активность воды отличается от влагосодержания (% воды) в пищевом продукте. Влагосодержание - это общее количество влаги, т.е. количество связанной плюс количество свободной влаги, присутствующей в образце, в то время как активность воды определяется измерением только свободной влаги и обычно выражается как aw или процентное содержание равновесной относительной влажности (Equilibrium Relative Humidity) (% ERH). Активность воды пищевого продукта - это постоянная относительная влажность воздуха в непосредственной близости от пищевого продукта, когда между пищевым продуктом и окружающим его воздухом устанавливается равновесие. Эта постоянная относительная влажность обозначается как «% ERH», если она выражается в процентах (от 0 до 100%), или как «активность воды», если она выражается числом от 0 до 1,0. Методы определения активности воды детально изложены в официальных методах анализа АОАС International (1995), метод 978.18.
Под "тепловой обработкой" в настоящем описании имеется в виду тепловая обработка при температуре по меньшей мере 65°С, предпочтительно при температуре по меньшей мере 70°С, в течение по меньшей мере 2 секунд, предпочтительно в течение по меньшей мере 20 секунд. Примером такой тепловой обработки может служить пастеризация, применяемая для молока, т.е. тепловая обработка при 72°С в течение 15 секунд. Пастеризация - это понятие, известное квалифицированному специалисту. Получаемый в результате пастеризации пищевой продукт является микробиологически безопасным продуктом, имеющим длительный срок хранения.
Под "пищевым продуктом" имеется в виду продукт или пищевой ингредиент, который предназначен для употребления без предварительных тепловых обработок, таких как выпекание, жарка или варка. Под "пищевым продуктом, имеющим длительный срок хранения", следует понимать продукт, имеющий срок хранения по меньшей мере от одной недели до года или более, в течение которого гарантируется сохранение органолептических свойств, а также микробиологической безопасности продукта. Очевидно, что допускаемый срок хранения в значительной степени зависит от фактических режимов хранения пищевого продукта. Многие скоропортящиеся пищевые продукты должны храниться в охлажденном виде для максимизации их срока хранения.
Если в пищевом продукте изобретения используются стабилизаторы, в частности полиолы, такие как глицерин, сорбит, сахароза, полипропиленгликоль, трегалоза, мальтодекстрины, лактоза и глюкоза, то их количество в большинстве случаев составляет менее 10 мас.%, предпочтительно менее 5 мас.% от пищевого продукта.
Предпочтительно пищевой продукт согласно изобретению содержит менее 1 мас.%/мас., казеина, более предпочтительно пищевой продукт согласно изобретению не содержит казеина.
Прием специфичных к пролину протеаз в форме пилюль или таблеток позволил бы больным, страдающим непереносимостью глютена, безопасно употреблять содержащие глютен пищевые продукты. Однако авторами изобретения теперь установлено, что протеазу можно также удобно вводить в пищевые продукты, которые сами по себе могут вообще не содержать глютена или содержать его в малых количествах, но которые традиционно комбинируются с содержащими глютен пищевыми продуктами. Более предпочтительно пищевые продукты согласно изобретению, содержащие эндопротеазу, представляют собой пищевые ингредиенты, которые в уровне техники рассматриваются как "не содержащие глютена". В соответствии с "Codex Standard for Gluten-Free Foods" (Кодексом стандартов на безглютеновые пищевые продукты) (Codex Stan 118-198) Кодекса Алиментариус (Стандарты ФАО/ВОЗ на продовольственные товары) содержание азота в пищевых ингредиентах, полученных из содержащих глютен зерновых, может не превышать 0,05 г (50 мг) на 100 г продукта в пересчете на сухое вещество в том случае, если указанные ингредиенты используются в не содержащем глютена пищевом продукте.
Согласно настоящему изобретению раскрывается пищевой продукт, который содержит специфичную к пролину протеолитическую активность в количестве более 0,5 PPU из расчета на порцию, т.е. ферментная активность, присутствующая в одной порции, способна гидролизовать 25 мг глютена. Одна порция - это количество пищи, потребляемой за один прием в течение обычно одного часа, предпочтительно в течение 40 минут.
Пищевые продукты, предпочитаемые в качестве носителя специфичных к пролину протеаз, являются такими пищевыми продуктами, которые требуется хранить охлажденными. Особенно предпочтительно, когда содержащий протеазу пищевой продукт является приправой, т.е. пищевым продуктом, который используется для усиления вкуса и аромата других пищевых продуктов, преимущественно содержащих глютен пищевых продуктов. Приправы имеют то преимущество, что они в изобилии имеются в домашнем хозяйстве, ресторанах, столовых и супермаркетах и в типичных случаях имеют длительный срок хранения. Предпочтительными примерами приправ являются томатный соус или томатный кетчуп. Такие продукты обычно имеют pH ниже 4,2, более предпочтительно ниже 4,0, что подразумевает, что они требуют только ограниченной обработки пастеризацией. Примерами других продуктов повышенной кислотности, требующих ограниченной обработки пастеризацией и особенно пригодных в качестве носителей для активной специфичной к пролину протеазы, являются фруктовые соки и фруктовые концентраты. Фактически даже подкисленная или газированная питьевая вода в бутылках может служить отличным носителем указанного фермента. "Шипучки", подобные овощным или фруктовым концентратам, также подпадают под эту категорию. Равным образом, продукты повышенной кислотности, содержащие консервант пищевого качества, такой как бензоат или сорбат, представляют собой отличные носители для фермента. Например, глазурь или начинки для сэндвичей, обычно употребляемые в комбинации с содержащими глютен пищевыми продуктами, такими как хлеб, имеющими показатели активности воды выше 0,85. Отличным носителем могут служить также продукты с очень высокой кислотностью, которые вообще не требуют пастеризации, такие как напитки типа колы, поскольку специфичная к пролину протеаза показывает заметную стабильность при таких условиях. Кроме того, фермент вполне совместим с препаратами, содержащими высокие концентрации жизнеспособных пробиотиков. Обычно такие пробиотические продукты имеют активность воды выше 0,95 и стабилизируются pH ниже 4,0.
Дополнительно изобретение относится к способу производства пищевого продукта, содержащего ферментную композицию изобретения, в котором специфичная к пролину протеаза добавляется в пищевой продукт после того, как этот пищевой продукт был подвергнут обработке пастеризацией. В таком подходе фермент может добавляться стерильным к уже пастеризованному продукту. Примером подходящей технологии для такого подхода является технология асептического дозирования, как, например, технология, продаваемая фирмой Tetra Рак (Terra Aldose TMS; см., например, http://www.tetrapak-processing.de/produkte/pdf/aldose.pdf).
Еще одним вариантом воплощения изобретения является эмульсия вода-в-масле или масло-в-воде, спред, предпочтительно маргарин или низкожирный спред. Широко употребляемые низкожирные спреды, предназначенные для употребления вместе с содержащим глютен пищевым продуктом, исключительно пригодны в качестве носителя для ферментного средства, способствующего пищеварению. Высокое содержание воды в этих продуктах позволяет вводить в них большие количества фермента, и продукты обычно хранятся при режимах охлаждения, традиционно при температурах порядка 7°С или ниже. Поскольку фермент ограничивается водной фазой, такие эмульсии также подпадают под категорию продуктов, имеющих активность воды по меньшей мере 0,85.
Другими важными преимуществами этого варианта воплощения изобретения является то, что хлеб или спред тщательно перемешиваются в ротовой полости, чем инициируется расщепление молекул глютена специфичной к пролину протеазой. Кроме того, известно, что присутствие соединений жирного ряда тормозит опорожнение желудка через орально-сенсорный механизм. Оба механизма приводят к более интенсивному и длительному взаимодействию между ферментом и глютеном, так что фермент и глютен могут максимально взаимодействовать друг с другом, прежде чем химус (пищевая кашица) достигнет двенадцатиперстной кишки. Это очень важно, поскольку известно, что двенадцатиперстная кишка является самой начальной частью желудочно-кишечного тракта, которая может провоцировать патогенные реакции молекул богатого пролином глютена. Было установлено, что специфичная к пролину протеаза, в частности кислотоустойчивая специфичная к пролину эндопротеаза из A.niger, согласно WO-A-2002/45523, имеет широкий pH-оптимум, что позволяет ей быть активной в ротовой полости, пищеводе, желудке и в двенадцатиперстной кишке. Тот факт, что специфичная к пролину эндопротеаза проявляет такую высокую остаточную активность при введении ее в эмульсию, является полностью неожиданным. Имеющаяся литература скорее единодушна в своих выводах относительно того, что контакт с эмульгаторами и последующее введение в эмульсии оказывают значительный стресс на ферменты и легко приводят к их инактивированию (см., например, Gatorae et al. в "Stability and Stabilization of Enzymes", Elsevier Sci. Publish. 1993, p.329, или de Roos and Waistra, "Colloids and Interfaces B"; Biointerfaces 6 (1996) 201-208). Поэтому особенно подходящим для настоящего изобретения является фермент:
- обладающий пролин-специфичной эндопротеазной активностью, и
- имеющий аминокислотную последовательность, идентичную SEQ ID No. 2 (см. WO 2002/45523), или имеющий аминокислотную последовательность, которая имеет по меньшей мере 80%-ную, предпочтительно по меньшей мере 90%-ную, идентичность с аминокислотной последовательностью с аминокислотами от 1 до 526 SEQ ID No. 2 (см. WO 2002/45523). Уровень идентичности между аминокислотными последовательностями определяется методом, упомянутым в WO 2002/45523 на странице 15.
Ферментная композиция согласно изобретению должна вводиться в пищевой продукт в таком количестве, которое соответствует общему количеству перевариваемого белка. Например, низкожирный спред обычно наносится на ломтик хлеба. На ломтик хлеба 18 граммов обычно наносятся пять граммов спреда. Хлеб в типичных случаях содержит 8% белка, из которых 7% составляет глютен, т.е. один ломтик хлеба содержит 1,5 грамма белка. Для достижения адекватного гидролиза в процессе переваривания в желудочно-кишечном тракте всех белков, т.е. включая и глютеновую фракцию, при использовании фермента, описанного в WO 2002/45523, требуется примерно 20 PPU фермента из расчета на 1 грамм присутствующего белка (для определения этого см. раздел Материалы и методы). Таким образом, для переваривания 1,5 грамма белка требуется 1,5 раза по 20 PPU, что соответствует 30 PPU. Эти 30 PPU должны обеспечиваться пятью граммами низкожирного спреда, что подразумевает активность фермента 6000 PPU/кг низкожирного спреда. Введение ферментной композиции согласно изобретению вряд ли способно повлиять на производство и свойства низкожирного спреда. Однако во избежание появления горечи, о которой часто сообщается в молочных продуктах после обработки их ферментами с протеолитической активностью, в спреде согласно изобретению предпочтительно избегается использование гидрофобных белков, таких как казеины. Так, вкусовые качества спреда можно улучшить за счет введения в него ферментированного белка молочной сыворотки с тем, чтобы обеспечить типичные вкус и аромат сливочного масла. Авторами изобретения установлено, что остаточные белки, присутствующие в ферментированной сыворотке, гидролизуются специфичным к пролину ферментом, но это не оказывает отрицательного действия на органолептические показатели. Специфичная к пролину протеаза предпочтительно добавляется в водную фазу перед формированием эмульсии, наиболее предпочтительно специфичная к пролину протеаза добавляется стерильной после пастеризации водной фазы, но перед формированием эмульсии. Существует ряд способов эффективного производства низкожирных спредов. Согласно одному из них масляная фаза, содержащая эмульгаторы, вкусоароматические добавки, витамины и красители, поддерживается в умеренно нагретом и щадящем перемешиваемом режиме во избежание отрицательного воздействия на качество масла. Затем водная фаза и масляная фаза смешиваются вместе и подаются в вотатор (теплообменник-смеситель). Более подробное описание приготовления эмульсий можно найти в литературе, в том числе у Moustafa в "Practical Handbook of Soybean Processing and Utilization"; David R. Erickson editor; совместная публикация AOCS Press и United Soybean Board. В настоящее время спреды с введением полезных для здоровья соединений, таких как фитостерины/станолы или арахидоновые кислоты, пользуются все возрастающей популярностью. Поскольку указанные соединения являются маслорастворимыми, они не влияют на стабильность фермента в водной фазе.
Таким образом, изобретение относится к способу производства пищевого продукта, содержащего ферментную композицию по изобретению, в котором специфичная к пролину протеаза добавляется в пищевой продукт либо перед, либо после подвергания пищевого продукта пастеризации.
В принципе можно использовать также и другие ферменты, обладающие способностью к гидролизу пептидных связей, включающих пролиновые остатки, такие как пролил-олигопептидаза (ЕС 3.4.21.26) или дипептидил-пептидаза IV (DPP IV, ЕС 3.4.14.5), или дипептидил-пептидаза II (DPP II, ЕС 3.4.14.2). Эти протеазы упоминаются в перечне, к примеру, Augustyns et al. (Current Medicinal Chemistry, 2005, 12, 971-998). Однако для того, чтобы специфичная к пролину протеаза стала пригодной в качестве облегчающего пищеварение средства в пищевом продукте, т.е. либо в пищевом продукте, содержащем глютен, либо в пищевом продукте, предназначенном для использования в комбинации с содержащими глютен пищевыми продуктами, специфичная к пролину протеаза должна: i) показывать pH-оптимум, который обеспечивает адекватную активность в кислотной области pH, превалирующей в желудке, предпочтительно при pH ниже 5; ii) выживать в присутствии желудочно-кишечного протеолитического фермента пепсина при указанных кислотных условиях; iii) оставаться активной во влагосодержащем окружении в течение по меньшей мере срока хранения пищевого продукта. Кроме того, допускается введение кофермента для достижения синергизма при гидролизе белков глютена. Очевидно, что кофермент должен удовлетворять таким же требованиям стабильности, что и специфичный к пролину фермент, в пищевом продукте. Изобретение относится также к применению специфичной к пролину протеазы в качестве способствующего пищеварению средства в производстве пастеризованного пищевого продукта, имеющего активность воды по меньшей мере 0,85, как указывалось выше, в целях предупреждения клинических симптомов целиакии или сопутствующих ей расстройств. Предпочтительно пищевой продукт предназначен для употребления в комбинации с содержащим глютен пищевым продуктом.
Причиной целиакии служит непереносимость некоторых пептидов, богатых пролином и глутамином. Неполное расщепление этих пептидов обусловливает развитие и степень тяжести целиакии. Целиакия часто сопровождается психическими и неврологическими симптомами. Уже в 1979 г. Panksepp (Trends in Neuroscience 1979; 2: 174-177) сформулировал теорию избыточных опиоидов, в которой он высказал предположение, что нарушение метаболизма опиоидов является частью патогенеза при аутизме. Таким образом, пищевой продукт, содержащий эндопротеазу по изобретению, может употребляться также больными, страдающими психическими расстройствами, включая аутизм, шизофрению, ADHD, биполярные расстройства настроения и депрессию, все из которых связаны с потреблением пищевых белков, богатых пролином. Другие расстройства, связанные с целиакией, включают аутоиммунные расстройства, главным образом, диабет I типа, герпетиформный дерматит, рак кишечника, кишечные неходжкинские лимфомы, аутоиммунный тиреоидит, коллагенозы, аутоиммунную алопецию и аутоиммунный гепатит. Кроме того, синдром раздраженной толстой кишки (IBS) связывают с трудно перевариваемыми богатыми пролином белковыми последовательностями. Пользу от настоящего изобретения могут получить больные, страдающие любым из вышеупомянутых расстройств. Такие больные могут быть любого возраста и включать взрослых и детей. Дети, в частности, могут выиграть от профилактических мероприятий, когда предупреждение на более ранней стадии воздействия токсичных пептидов глютена может предотвратить начальное развитие болезни. Введение композиции специфичных к пролину эндопротеаз имеет особое преимущество для той категории пациентов, среди которых большой популярностью пользуются приправы, в частности, майонез и кетчуп. Детей, нуждающихся в профилактике, можно идентифицировать по генетическому тесту на предрасположенность к болезни, например, путем классифицирования HLA-системы (антигенной системы лейкоцитов), изучения семейного анамнеза, пробой на Т-клетки или другими медицинскими средствами.
Описание фигур
Фиг.1 - уровни стимулирующих Т-клетки эпитопов, извлеченных из "желудка", без специфичной к пролину эндопротеазы. Условия эксперимента такие, какие описаны в Примере 3. "Альфа" относится к уровню реакционно-способных молекул альфа-глиадина; "гамма" - к уровню реакционно-способных молекул гамма-глиадина; "HMW" - к уровню реакционно-способных HMW (высокомолекулярных)-глютенинов и "LMW" - к уровню реакционно-способных LMB(низкомолекулярных)-глютенинов.
Фиг.2 - уровни стимулирующих Т-клетки эпитопов, извлеченных из "желудка", содержащих специфичную к пролину эндопротеазу. Условия эксперимента такие, какие описаны в Примере 3. См. пояснения к фиг.1, объясняющие значение "альфа", "гамма", "HMW и "LMW".
Фиг.3 - уровни стимулирующих Т-клетки эпитопов в осадках, извлеченных из "желудка", с добавлением и без добавления специфичной к пролину эндопротеазы и подвергнутых вестерн-блоттингу с обработкой антителами, специфичными для альфа-глиадина. Условия эксперимента такие, какие описаны в Примере 3.
Фиг.4 - % остаточной ферментной активности в водной фазе после расплавления низкожирного спреда при 53°С, добавления специфичной к пролину эндопротеазы в водную фазу и встряхивания смеси вода/жир в течение 10, 70 и 100 минут при 53°С. Условия эксперимента такие, какие описаны в Примере 4.
Фиг.5 - стабильность в хранении специфичной к пролину эндопротеазы в водной фазе низкожирного спреда при различных температурах хранения. Условия эксперимента такие, какие описаны в Примере 5.
Материалы и методы
Тесты на активность фермента
Активность пролинспецифичной эндопротеазы, выделенной из A.niger, определялась тестом с использованием CBZ-Gly-Pro-pNA (Bachem, Bubendorf, Швейцария) в качестве субстрата при 37°С в цитратном/динатрий-фосфатном буфере с pH 4,6. Продукты реакции контролировались спектрофотометрически при 405 нм. Увеличение спектральной поглощательной способности при 405 нм во времени является мерой активности фермента. Единица пролин-протеазы (PPU) определяется как количество фермента, которое высвобождает 1 мкмол р-нитроанилида в минуту при заданных условиях и при концентрации субстрата 0,37 мМ Z-Gly-Pro-pNA.
Количественное обнаружение стимулирующих Т-клетки эпитопов
Концентрация стимулирующих Т-клетки эпитопов как глиадина, так и глютенинов в растворимых фракциях динамической желудочно-кишечной in vitro модели определялась с помощью проб на конкурентность с использованием моноклональных антител (mAB). С этой целью образцы разводились буфером, содержащим 50 мМ Na2HPO4/NaH2PO4 (pH 7,0), 150 мМ NaCl, 0,1% Tween-20 и смесь ингибиторов протеазы (Complete, Roche Diagnostics GmbH, Penzberg, Germany). Пробы выполнялись дважды, как описывалось ранее (Spaenij-Dekking et al., (2004) Gut 53, 1267-1273).
Анализ белков с помощью 1D SDS-PAGE и вестерн-блоттинга
Для определения уровня стимулирующих Т-клетки эпитопов, присутствующих в твердых (осажденных) фракциях различных образцов динамической желудочно-кишечной in vitro модели, выполнялись эксперименты по проведению 1D SDS-PAGE (одномерный электрофорез в полиакриламидном геле с использованием додецилсульфата натрия). Твердые фракции солюбилизировались путем растворения образцов белка в 6-кратном объеме буфера (60% глицерина, 300 мМ Трис-а (pH 6,8), 12 мМ ЭДТУ (pH 8,0), 12% SDS, 864 мМ 2-меркаптоэтанола, 0,05% бромфенолового синего) и наносились на 12,5% SDS-PAGE гель. Визуализация белков проводилась либо с помощью их прямого окрашивания красителем для белков Imperial Protein Stain (Pierce, Rockford I.L., USA), либо после вестерн-блоттинга на PVDF мембраны с использованием mAB (моноклональные антитела), специфичных для стимулирующих Т-клетки эпитопов α- и γ-глиадина (Spaenij-Dekking et al., (2004) Gut 53, 1267-1273) и HMW(высокомолекулярных)- и LMW(низкомолекулярных)-глютенинов (Spaenij-Dekking et al., Gastroenterology 2005; 797-806).
Конкурентный анализ с использованием антител
Для проведения конкурентного анализа с использованием антител у мышей Balb С инициировали выработку моноклональных антител против вышеупомянутых стимулирующих Т-клетки альфа-, гамма-глиадина и пептида LMW-глютенина. После объединения селезенок мышей с линией клеток миеломы мышей были получены продуцирующие антитела гибридомы. Последние клонировали ограниченным разведением, а mAB (моноклональные антитела), секретируемые этими клетками, тестировали на пригодность их использования в конкурентном анализе. Для каждой из специфичностей отбирали одно или два подходящих mAB и определяли эпитопы, распознаваемые различными mAB (таблица 1).
| Таблица 1 | |||
| Специфичность | Стимулирующий Т-клетки эпитоп | mAB эпитоп | |
| α-глиадин (α-9) | QLQPFPQPQLPY | QPFPQPQ | |
| (α20) | PFRPQQPYPQPQPQ | RPQQPYP | |
| γ-глиадин | QPQQPQQSPFQQQRF | QQRPFI | |
| LMW-глютенин | QPPFSQQQQSPFSQ | GSPFS или PPFSQQ | |
| HMW-глютенин | GYYPTSPQQS | ||
С использованием mAB проводили конкурентные анализы, которые позволили количественно обнаружить стимулирующие Т-клетки эпитопы, присутствующие как в нативных (интактных) белках, так и в малых пептидах, размером примерно 11 аминокислот (размер эпитопа Т-клетки) при низких уровнях их содержания.
В конкурентном анализе различные разбавления образцов смешивались с фиксированной концентрацией биотинилированного (т.е. обработанного биотином) пептида-индикатора (который кодирует эпитоп Т-клетки). Для количественной оценки глиадина в указанной пробе была построена стандартная кривая с использованием Европейского стандартного глиадина IRMM-480 в диапазоне концентраций от 10 микрограммов (мкг)/мл до 10 нанограммов (нг)/мл. Количественная оценка LMW-глютенина проводилась с использованием синтетического пептида, кодирующего стимулирующий Т-клетки эпитоп в диапазоне от 1 мкг/мл до 1 нг/мл. В то время как количественная оценка HMW-глютенина проводилась с использованием продукта гидролиза пепсином/трипсином рекомбинантных белков HMW-глютенинов в диапазоне от 1 мкг/мл до 1 нг/мл. Визуальная оценка наличия связанного с антителом биотинилированного пептида проводилась с использованием стрептавидина в качестве метки.
Пример 1
Стерилизация фильтрованием специфичной к пролину эндопротеазы
Фильтрование является предпочтительном вариантом стерилизации ферментов. Подлежащий стерилизации раствор фермента может быть получен очисткой хроматографией, и этот раствор может содержать один или более растворителей либо других добавок для регулирования активности фермента и его последующей стабилизации. Подходящими стабилизаторами являются, например, сорбит и глицерин. Глицериновые растворители могут добавляться в концентрации от 10 до 70 мас.%/мас. раствора фермента, более предпочтительно от 30 до 60 мас.%/мас.
Стерилизация фильтрованием может осуществляться путем прокачки насосом ферментного раствора через стерильный фильтр. Предпочтительно стерилизация фильтрованием проводится путем предварительной фильтрации с последующей вторичной фильтрацией через патронный фильтр 0,22 нм. Стерилизованный таким путем ферментный раствор может добавляться через стерильное дозирующее устройство в емкость для выдержки, содержащую предварительно подвергнутый пастеризации или стерилизации водный пищевой продукт или пищевой ингредиент. Затем содержащий фермент продукт или пищевой ингредиент может сразу фасоваться в упаковку. Если ферментный раствор требуется ввести в жирный или низкожирный спред, то в этом случае стерилизованный ферментный раствор можно смешать с пастеризованной водной фазой, а полученную смесь подвергнуть затем эмульгированию вместе с жиром или маслом при соответствующей повышенной температуре.
Для получения стерилизованного ферментного раствора, предназначенного для использования в лабораторном масштабе, раствор специфичной к пролину эндопротеазы, выделенной из A.niger, стерилизовался фильтрованием по следующей методике. Шприц заполнялся 1 мл ферментного концентрата, и сверху шприца помещался стерильный фильтр Millex GV 0,22 мкм от фирмы Millipore с площадью поверхности 4,91 см. Под действием давления рукой ферментный раствор пропускался через фильтр Millipore 0,22 мкм, в результате чего обеспечивался стерилизованный раствор с активностью фермента, соответствующей активности ферментного раствора до стерилизации фильтрованием.
Пример 2
Переваривание хлеба в динамической желудочно-кишечной in vitro модели в отсутствие и в присутствии специфичной к пролину эндопротеазы
Прохождение пищи через желудочно-кишечный тракт является очень динамичным процессом, который невозможно имитировать в статических in vitro моделях. Динамическая желудочно-кишечная in vitro модель, такая как разработанная TNO (Zeist, Нидерланды), является общепринятой моделью процесса пищеварения, которая в значительной степени имитирует прогрессирующие динамические процессы в желудке и в тонком кишечнике (Minekus et al., ATLA 1995, 23, 197-209; Larsson et al., J. Sci. Food Agic. 1997, 74, 99-106). Результаты, полученные на этих моделях, показали очень большое сходство с результатами, полученными в исследованиях на человеке и животных.
С целью изучения переваривания белого хлеба в отсутствие и в присутствии специфичной к пролину эндопротеазы, выделенной из A.niger, были предприняты эксперименты на указанной динамической желудочно-кишечной модели. Эти эксперименты выполнялись при усредненных физиологических условиях желудочно-кишечного тракта, таких как описанные в литературе для взрослых молодого возраста после приема полутвердой пищи. Хлеб сначала "прожевывался", т.е. тщательно смешивался с ферментами слюны в течение 5 минут и в отсутствие (контроль) или в присутствии специфичной к пролину эндопротеазы из A.niger. В собственно эксперименте 70 граммов белого хлеба (содержащего 5 граммов глютена) гомогенизировались вместе с 11 мл желудочного сока в отсутствие или в присутствии 100 PPU специфичной к пролину эндопротеазы. После гомогенизации 25% смеси добавлялись в систему пищеварения in vitro. В желудочном отделе pH постепенно снижался в результате секреции желудочного сока. "Проглоченные" ферменты слюны (амилаза) присутствовали изначально, в то время как желудочные ферменты (пепсин и желудочная липаза) секретировались постепенно. Пепсин становился активным при pH ниже 5,0. В продолжение 2,5 часов содержимое желудка постепенно поступало в тонкий кишечник через "клапан привратника желудка". В отделе двенадцатиперстной кишки pH регулировался на уровне pH 6,5 за счет секреции бикарбоната. В этот же отдел постепенно секретировались сок поджелудочной железы, содержащий амилазу, липазу и протеолитические ферменты (например, трипсин и химотрипсин), и желчь. Продукты секреции смешивались с пищей, поступающей из желудка, путем перистальтического смешивания и постепенно перемещались в отделы тощей кишки и подвздошной кишки.
Спустя 4-5 часов примерно 80% содержимого тонкого кишечника постепенно переместилось в "толстую кишку" (склянка для образцов) через "подвздошно-слепокишечный клапан". Соединения - продукты пищеварения непрерывно подвергались диализу на выходе из отделов тощей кишки и подвздошной кишки модели через мембранные системы из полупроницаемых полых волокон. Склянки для диализа заменялись каждые 2 часа.
В процессе прохождения белков глютена (и пищи) через отделы динамической системы из отделов желудка, двенадцатиперстной кишки и тощей кишки отбирались небольшого объема образцы (около 2 мл) в следующие моменты времени: t=0, 15, 30, 45, 60, 90, 120, 150, 180 и 240 мин. Сразу после отбора образцы замораживались в сухом льду с целью подавления активности ферментов. В конце каждого эксперимента остатки из разных отделов собирались на сухой лед и хранились в двух пробирках по 10 мл каждая при минус 20°С.
Пример 3
Тестирование переваренного in vitro хлеба на присутствие токсичных эпитопов глютена
Существуют два типа реагентов, которые можно использовать для измерения присутствия пептидов глютена в образцах пищи: клоны Т-клеток, выделенные из тонкого кишечника больных целиакией, и моноклональные антитела, специфичные для различных пептидов глютена. Клоны Т-клеток реагируют на пептиды глютена, когда последние связываются с молекулами HLA-DQ2 или HLA-DQ8, обусловливающими предрасположенность к болезни. Эти ответные реакции Т-клеток зоны воспаления служат, как предполагается, главной причиной целиакии. Клоны Т-клеток, специфичных для пептидов альфа-, гамма-глиадина, LMW-глютенина и HMW-глютенина, вполне доступны (см. Wal van de, Y. et al., Eur. J. Immunol. 29, 3133-3139 (1999) & Vader et al., Gastroenterology, 122: 1729-1737 (2002)). Моноклональные антитела, специфичные для стимулирующих Т-клетки альфа-глиадина, гамма-глиадина, пептидов низкомолекулярного (LMW) и высокомолекулярного (HMW) глютенинов, также доступны и вводились в конкурентный анализ для обнаружения этих пептидов в образцах пищи (Spaenij-Dekking et al., Gut 53: 1267-1273 (2004)).
Фракции желудка и двенадцатиперстной кишки, собранные в моменты времени t=0, 15, 30, 45, 60, 90 и 120 минут, приготовленные с добавлением и без добавления специфичной к пролину эндопротеазы, подвергались предварительной обработке согласно следующей методике, предназначенной для инактивирования специфичной к пролину эндопротеазы. Сначала pH образцов повышался до pH 11-12 с помощью 1 М NaOH, а затем сразу же нейтрализовался с помощью 1 М HCl. После центрифугирования в продолжение 10 минут при 14000 об/мин супернатанты, а также осадки различных образцов собирались и подвергались тепловой обработке при 85°С в течение 10 минут для подавления любой остаточной ферментной активности. Из супернатантов приготавливались разведения 1:40, 1:200, 1:1000 и 1:5000 в 20 мМ фосфатном буфере с pH 7, 150 мМ NaCl, 0,1% Tween-20, смеси 2 ингибиторов протеазы без ЭДТА. Указанные разведения, а также фракции осадков хранились при -20°С до проведения измерения на следующий день.
После размораживания образцов растворимые в воде фракции образцов анализировались в конкурентном анализе с моноклональными антителами, специфичными для альфа- и гамма-глиадина и для LMW- и HMW-глютенинов. С этой целью образцы обрабатывались, как указывается в разделе Материалы и методы, и проводились измерения различных разведений. Результаты, полученные для этих растворимых в воде образцов из желудка, представлены на фиг.1 (полученные в отсутствие специфичной к пролину эндопротеазы) и на фиг.2 (полученные в присутствии специфичной к пролину эндопротеазы). Удалось обнаружить все компоненты глютена за исключением HMW-глютенинов. Полученные данные четко показывают, что добавление специфичной к пролину эндопротеазы из A.niger оказывает сильно выраженное влияние на присутствие этих белков глютена в растворимой фракции: даже при t=0 (т.е. спустя менее 1 минуты после добавления фермента к препарату для перорального употребления) можно было наблюдать резкое снижение наличия белков/пептидов глютена.
В отдельно проводившемся эксперименте нерастворимые в воде фракции (т.е. осадок) образцов из желудка подвергались SDS-PAGE с последующим переносом разделенных белков на PVDF-мембраны. Затем эти мембраны окрашивались специфичным для альфа-глиадина антителом (фиг.3). В то время как антитело обнаружило глиадин во всех фракциях без специфичной к пролину эндопротеазы, добавление специфичной к пролину эндопротеазы приводило к значительному ослаблению сигнала спустя t=45 минут. При t=90 и t=120 минут вряд ли можно было обнаружить глиадин в образцах из желудка, полученных из материала, переваренного в присутствии специфичной к пролину эндопротеазы.
На основании всех этих данных можно сделать вывод, что специфичная к пролину эндопротеаза является высокоэффективной в расщеплении молекул глютена, присутствующих в растворимой в воде фракции. Поскольку использованные в указанной пробе антитела являются специфичными для аминокислотных последовательностей, более коротких, чем требуемые для стимуляции Т-клеток, это указывает на то, что обработка специфичной к пролину эндопротеазой приводит к сильному сокращению потенциально вредных молекул типа глютена в растворимой в воде фракции. Благодаря тому, что эти преимущественно растворимые в воде пептиды эффективно взаимодействуют, что и следовало ожидать, с рецепторными участками, релевантными для целиакии, данные, полученные для растворимой в воде фракции глютена, высоко релевантны для in vivo условий.
Совершенно удивительным образом специфичная к пролину эндопротеаза способна также к гидролизу молекул глютена, присутствующих и в нерастворимой в воде фазе. Спустя 90 минут молекулы глиадина нельзя было обнаружить во фракциях, обработанных ферментом, в то время как в контрольных образцах такие молекулы все еще присутствовали.
Совместные результаты, описанные в настоящем примере, указывают на то, что специфичная к пролину эндопротеаза согласно изобретению способна расщеплять глютен в условиях, имитирующих условия в желудке человека. Более того, фермент способен делать это настолько эффективно, что токсичных эпитопов глютена фактически не остается.
Пример 4
Совместимость специфичной к пролину эндопротеазы с производством низкожирного спреда
Для проверки того, сохраняет или нет специфичная к пролину эндопротеаза свою активность при воздействии эмульгаторов при повышенных температурах и введении в эмульсию вода-в-масле, проводился следующий тест.
В местном супермаркете был куплен низкожирный спред "Halvarine voor op brood" (40% жира) производства фирмы Winner Food BV, Lopik, Нидерланды. Указанные на его этикетке ингредиенты включали моно- и диглицериды жирных кислот (Е 471) в качестве эмульгатора, сорбиновую кислоту (Е200) в качестве консерванта, лимонную кислоту, растительные масла и жиры, воду, вкусоароматические добавки, витамины А и D и соль. Способность к плавлению низкожирного спреда оценивалась в термостатируемом инкубаторе, оборудованном встряхивающим устройством. При 53°С низкожирный спред полностью расплавился, показав медленное разделение на водный слой и жировой слой.
Для обеспечения введения адекватного количества специфичной к пролину эндопротеазы в низкожирный спред 15 мл жидкого ферментного концентрата, содержащего примерно 10 PPU/мл (определение фермента см. раздел Материалы и методы), были подвергнуты сублимационной сушке в пробирке Грейнера на 50 мл. Полученный порошок (около 2,25 грамма) смешивался с 25 граммами низкожирного спреда, после чего смесь расплавлялась при 53°С в термостатируемом инкубаторе, оборудованном встряхивающим устройством, что способствовало растворению полученного сублимационной сушкой порошка фермента. Сразу после расплавления и спонтанного разделения на воду и жир образец (300 мкл) извлекался из водного слоя в пробирке и охлаждался до комнатной температуры. После извлечения этого первого образца пробирка, содержащая разжиженную эмульсию с ферментом, интенсивно встряхивалась в течение 10 секунд и выдерживалась при 53°С. Спустя 10, 70 и 100 минут вновь извлекались из водного слоя образцы по 300 мкл, которые после извлечения интенсивно встряхивались. В заключение все образцы, полученные из водного слоя, разводились в 1000 раз 100 мМ ацетатного буфера с pH 4,2, и остаточная активность фермента измерялась пробой с микротитровальным планшетом (МТР). С этой целью после гидролиза синтетического пептидного субстрата Ala-Ala-Pro-pNA (Pepscan, Lelystad, Нидерланды) с получением трипептида Ala-Ala-Pro и окрашенной молекулы pNa проводились в течение 10 минут кинетические измерения при 405 нм и 40°С с помощью планшет-ридера TECAN Genios МТР Reader (Зальцбург, Австрия). Субстрат Ala-Ala-Pro-pNA (скорее чем Z-Gly-Pro-pNa) использовался по той причине, что Ala-Ala-Pro-pNA позволяет проводить измерение намного меньших количеств фермента. Каждая лунка планшета содержала 250 мкл раствора субстрата (3 мМ AAP-pNa в 100 мМ ацетатного буфера с pH 4,2) и предварительно нагревалась в планшет-ридере Tecan Genios МТР Reader в течение 10 минут при 40°С. Реакция инициировалась добавлением 50 мкл соответствующего разведения фермента (в данном случае в 1000 раз). Высвобождение молекулы pNa происходило за 15 минут. Сбор данных проводился программным обеспечением Magellan (Tecan). Было зафиксировано увеличение оптической плотности при 405 нм; последующая обработка проводилась в Excel с получением картинки, представленной на фиг.4. Активность специфичной к пролину эндопротеазы сразу после расплавления спреда составила по результатам определения 100%. Эти результаты показали, что на активность фермента окружение низкожирного спреда едва ли оказывает влияние при 53°С. Даже встряхивание расплавленного спреда, имитирующее процесс эмульгирования, оказывало лишь незначительное влияние или вообще не оказывало влияния, несмотря на чрезмерное пенообразование.
Пример 5
Стабильность в хранении специфичной к пролину эндопротеазы в водной фазе низкожирного спреда
Для проверки стабильности в хранении специфичной к пролину эндопротеазы в водной фазе низкожирного спреда приготавливалась содержащая молочную кислоту водная фаза с pH 4,5 и активностью воды 0,98. Во избежание бактериального заражения водной фазы добавляемый для доведения концентрации до 600 ppm (частей на миллион частей) концентрированный раствор бензоата натрия был стерильным. Затем добавлялась стерильная (стерилизация фильтрованием) специфичная к пролину эндопротеаза для достижения активности фермента 15 PPU/грамм. Общий раствор распределялся по большому числу небольших стерильных склянок. Некоторые из этих склянок размещались при минус 20°С и служили в качестве контроля, остальные склянки содержались при 8°С и при 30°С. Каждые несколько недель измерялась остаточная активность специфичного к пролину фермента в разных склянках. Активность фермента измерялась согласно методике, подробно изложенной в разделе Материалы и методы.
Результаты, представленные на фиг.5, показывают, что при хранении фермента при температуре 8°С он остается достаточно активным в течение периода времени по меньшей мере 50 недель при указанных высоких значениях aw.
Пример 6
Переваривание in vitro тостов с малиновой начинкой сверху, содержащей фермент
Для демонстрации концепции применения содержащей фермент начинки для облегчения расщепления молекул токсичного глютена в пищевом продукте был проведен следующий эксперимент. Сначала приготовлялись 250 мл стабильной в хранении малиновой начинки. К жидкому ферментному концентрату в количестве 204 г (12 PPU/мл) добавлялись 20,7 грамма сахарозы, 1,0 грамм лимонной кислоты, 0,02% малиной вкусоароматической добавки (Givaudan, 76525-36) и 20,7 грамма 0,5%-ного раствора сахарина в воде. После растворения всех этих ингредиентов добавлялись 3,11 грамма ксантана (Keltrol RD, CP Kelco, Il.), которые растворялись в результате тщательного размешивания. Конечный pH вязкой массы составил 3,7; конечная концентрация фермента - около 9,8 PPU/г начинки; конечная активность воды - примерно 0,99. Концентрация бензоата поддерживалась на уровне примерно 600 ppm. Таким же способом был приготовлен продукт плацебо, содержащий все упомянутые ингредиенты, но без активного специфичного к пролину фермента. В качестве контроля с ранее проводившимися экспериментами (см. Примеры 2 и 3) в тест был введен также невязкий раствор чистого фермента.
Для проверки эффективности всех этих различных препаратов в расщеплении токсичных эпитопов глютена проводился тест на переваривание in vitro, в котором сокращение числа эпитопов происходило во времени. С этой целью на ломтик (около 10 граммов, содержащий 1,4 г белка) закупленного в торговой сети белого пшеничного хлеба, обжаренного в виде тостов (Bolletje, "Engelse toast"), наносился фермент в различной форме. Так, один ломтик покрывался содержащей фермент малиновой начинкой; один ломтик покрывался начинкой-плацебо (т.е. без ферментной активности), а к еще одному ломтику добавлялся чистый жидкий фермент. В случаях начинки, содержащей фермент, и добавления чистого жидкого фермента активность фермента дозировалась таким образом, чтобы она составляла 20 PPU/г присутствующего белка. Спустя пять минут после нанесения различных продуктов на тосты последние измельчали и смешивали с 60 мл (для контроля и жидкого варианта фермента) и с 62,3 мл (для образования геля) раствора с pH 5,0, имитирующего желудочный сок (NaCl (4,8 г/л), KCl (2,2 г/л), CaCl2 (0,22 г/л) и NaHCO3 (1,5 г/л)). 2,3 мл такого же раствора, содержащего свиной пепсин (Sigma, Р-7012) в концентрации 500 KU/л, добавлялись к каждому из тостов.
Первый образец был получен при t=0 минут (т.е. спустя 5 минут после добавления раствора пепсина). Затем pH каждой смеси постепенно снижался с целью имитации медленного подкисления содержимого желудка. pH снижался с pH 5 до pH 4,5, и спустя 15 минут после отбора первого образца отбирался второй образец. В следующие 15 минут pH вновь снижался до pH 4, и при t=30 минут от начала эксперимента отбирался третий образец. Последующие образцы отбирались следующим образом: при t=45 минут (после понижения pH до 3,5); при t=60 минут (после понижения pH до 3,0); при t=90 минут (после понижения pH до 2,5); после этого pH понижался до 2,0 и дополнительные образцы отбирались при t=120 минут и, в заключение при t=150 минут. Все образцы мгновенно замораживались в жидком азоте и хранились при -80°С.
Для измерения остаточных уровней эпитопов глютена в различных препаратах замороженные образцы сначала подвергались процедуре тщательного инактивирования фермента. Еще будучи замороженными, образцы подвергались тепловой обработке при 95°С в течение 30 минут, затем pH образцов повышался до pH 11-12, потом понижался до pH 2 и в заключение нейтрализовался до pH 6. Затем образцы вновь подвергались тепловой обработке при 95°С в течение 15 минут, после чего отбиралось аликвотное количество их (1 мл) и центрифугировалось в продолжение 30 минут в центрифуге Эппендорфа. Полученный супернатант содержал растворимую в воде фракцию, а осадок - нерастворимую в воде фракцию. Количественная оценка остаточного уровня стимулирующих Т-клетки эпитопов в растворимой в воде фракции проводилась пробами на конкурентность с использованием моноклональных антител в соответствии с Spaenij-Dekking et al., (2004) Gut 53, 1267-1273 (см. также раздел Материалы и методы). Результаты этих проб на конкурентность (среднее от двух автономных измерений) представлены в таблице 2. Остаточные уровни стимулирующих Т-клетки эпитопов во фракции осадка воспроизводились визуально вестерн-блоттингом (см. Пример 3). Результаты последнего эксперимента (фотографии не приводятся), равно как и данные, полученные для растворимой в воде фракции, подтверждают эффективное расщепление различных стимулирующих Т-клетки эпитопов обоими препаратами, содержащими фермент.
В итоге полученные данные четко указывают на то, что оба препарата, содержащие фермент, независимо от того, в каком виде он присутствует - в виде чистого свободного фермента или в виде желированного продукта типа джема с высокой активностью воды, эффективно разрушали большинство стимулирующих Т-клетки эпитопов глютена при инкубации в течение примерно 30 минут в условиях, имитирующих условия в желудке человека. Только LMW (низкомолекулярная) фракция оказалась, по-видимому, более устойчивой к расщеплению ферментом в используемой (in vitro) экспериментальной установке.
| Таблица 2 | ||||||
| Уровни остаточных стимулирующих Т-клетки эпитопов (в микрограммах/мл) в растворимой в воде фракции | ||||||
| Альфа 9 | Альфа 20 | Гамма 1 | LMW | HMW | ||
| Образец спустя (минут) | ||||||
| Фермент | 0 | 258 | 243 | 212 | 1558 | 158 |
| 15 | 94 | 95 | 91 | >2000 | 306 | |
| Плацебо | 30 | 667 | 413 | 625 | >2000 | 333 |
| 45 | 477 | 531 | 619 | >2000 | 576 | |
| 60 | 318 | 556 | 434 | >2000 | 779 | |
| 90 | 758 | 335 | 567 | >2000 | 994 | |
| 120 | 144 | 539 | 381 | >2000 | 592 | |
| 150 | 120 | 259 | 300 | >2000 | 233 | |
| Чистый фермент жидкий | 0 | |||||
| 15 | 46 | 40 | 74 | 568 | 97 | |
| 30 | 120 | 57 | 112 | >2000 | 144 | |
| 45 | 28 | 21 | 70 | 2010 | 91 | |
| 60 | 27 | 17 | 69 | 668 | 15 | |
| 90 | 41 | 27 | 91 | >2000 | 216 | |
| 120 | 25 | 19 | 66 | 1043 | 152 | |
| 150 | 59 | 31 | 79 | 1310 | 72 | |
| Фермент | 0 | 61 | 35 | 57 | 416 | 99 |
| 15 | 244 | 103 | 498 | >2000 | 170 | |
| Начинка | 30 | 136 | 66 | 193 | >2000 | 105 |
| 45 | 121 | 58 | 121 | >2000 | 160 | |
| 60 | 222 | 95 | 375 | >2000 | 244 | |
| 90 | 73 | 34 | 56 | >2000 | 152 | |
| 120 | 75 | 39 | 104 | 1549 | 132 | |
| 150 | 36 | 21 | 49 | 912 | 83 | |
Claims (17)
1. Пастеризованный пищевой продукт, обеспечивающий расщепление пептидов глютена, имеющий активность воды, по меньшей мере, 0,85, и содержащий специфичную к пролину протеазу, которая выделена из Aspergillus или относится к семейству S28 сериновых протеаз и которая имеет оптимальную активность при значении pH от 1 до 7, предпочтительно при значении pH от 2 до 6.
2. Продукт по п.1, который представляет собой не содержащий глютен пищевой продукт.
3. Продукт по п.1, который является приправой, верхней начинкой, начинкой для сэндвича, соусом, напитком или эмульсией, такой как спред.
4. Продукт по п.1, который является низкожирным спредом.
5. Продукт по п.1, который рекомендован больным, страдающим целиакией.
6. Пищевой продукт, обеспечивающий расщепление пептидов глютена, имеющий активность воды, по меньшей мере, 0,85 и содержащий специфичную к пролину протеазу, которая выделена из Aspergillus или относится к семейству S28 сериновых протеаз и которая имеет оптимальную активность при значении pH от 1 до 7, предпочтительно при значении pH от 2 до 6, при этом продукт содержит менее 1 мас.% белка или пептидов к массе продукта.
7. Продукт по п.6, который представляет собой не содержащий глютен пищевой продукт.
8. Продукт по п.6, который является приправой, верхней начинкой, начинкой для сэндвича, соусом, напитком или эмульсией, такой как спред.
9. Продукт по п.6, который является низкожирным спредом.
10. Продукт по п.6, который рекомендован больным, страдающим целиакией.
11. Способ производства пищевого продукта по любому из пп.6-10, в котором специфичную к пролину протеазу добавляют в указанный пищевой продукт, после чего пищевой продукт подвергают пастеризации.
12. Способ производства пищевого продукта по любому из пп.1-5, в котором специфичную к пролину протеазу добавляют в пастеризованный пищевой продукт.
13. Применение специфичной к пролину протеазы, которая выделена из Aspergillus или относится к семейству S28 сериновых протеаз и которая имеет оптимальную активность при значении pH от 1 до 7, предпочтительно при значении pH от 2 до 6, для расщепления пептидов глютена в производстве пищевого продукта или пастеризованного пищевого продукта по любому из пп.1-10.
14. Применение по п.13 для предупреждения любого вредного для здоровья воздействия, оказываемого пищевым продуктом, богатым пролином.
15. Применение по п.13 для предупреждения клинических симптомов целиакии или связанных с ней расстройств.
16. Применение по любому из пп.13-15, в котором указанный пищевой продукт предназначен для употребления в комбинации с содержащим глютен пищевым продуктом.
17. Применение по п.14 или 15, в котором указанное вредное для здоровья воздействие или расстройство, связанное с целиакией, включает аутоиммунные расстройства, главным образом, диабет I типа, герпетиформный дерматит, рак кишечника, кишечные неходжкинские лимфомы, синдром раздраженной толстой кишки, аутоиммунный тиреоидит, коллагенозы, аутоиммунную аллопецию и аутоиммунный гепатит, и психические расстройства, включая аутизм, шизофрению, ADHD, биполярные расстройства настроения и депрессию.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP06101219 | 2006-02-02 | ||
| EP06101219.1 | 2006-02-02 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2008135467A RU2008135467A (ru) | 2010-03-10 |
| RU2446210C2 true RU2446210C2 (ru) | 2012-03-27 |
Family
ID=36090926
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2008135467/10A RU2446210C2 (ru) | 2006-02-02 | 2007-01-30 | Пищевой продукт, содержащий специфичную к пролину протеазу, способ его производства и его применение для расщепления токсичных или аллергенных пептидов глютена |
Country Status (11)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20090304670A1 (ru) |
| EP (1) | EP1978829A2 (ru) |
| JP (1) | JP5134551B2 (ru) |
| CN (1) | CN101511211A (ru) |
| AU (1) | AU2007211641B2 (ru) |
| BR (1) | BRPI0707440A2 (ru) |
| CA (1) | CA2637701A1 (ru) |
| IL (1) | IL193067A0 (ru) |
| NZ (1) | NZ569989A (ru) |
| RU (1) | RU2446210C2 (ru) |
| WO (1) | WO2007088062A2 (ru) |
Families Citing this family (32)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6632429B1 (en) | 1999-12-17 | 2003-10-14 | Joan M. Fallon | Methods for treating pervasive development disorders |
| US20070053895A1 (en) | 2000-08-14 | 2007-03-08 | Fallon Joan M | Method of treating and diagnosing parkinsons disease and related dysautonomic disorders |
| US8030002B2 (en) | 2000-11-16 | 2011-10-04 | Curemark Llc | Methods for diagnosing pervasive development disorders, dysautonomia and other neurological conditions |
| US20080058282A1 (en) | 2005-08-30 | 2008-03-06 | Fallon Joan M | Use of lactulose in the treatment of autism |
| US8658163B2 (en) | 2008-03-13 | 2014-02-25 | Curemark Llc | Compositions and use thereof for treating symptoms of preeclampsia |
| US8084025B2 (en) | 2008-04-18 | 2011-12-27 | Curemark Llc | Method for the treatment of the symptoms of drug and alcohol addiction |
| US20090324730A1 (en) * | 2008-06-26 | 2009-12-31 | Fallon Joan M | Methods and compositions for the treatment of symptoms of complex regional pain syndrome |
| US9320780B2 (en) | 2008-06-26 | 2016-04-26 | Curemark Llc | Methods and compositions for the treatment of symptoms of Williams Syndrome |
| WO2010002972A1 (en) | 2008-07-01 | 2010-01-07 | Curemark, Llc | Methods and compositions for the treatment of symptoms of neurological and mental health disorders |
| US10776453B2 (en) | 2008-08-04 | 2020-09-15 | Galenagen, Llc | Systems and methods employing remote data gathering and monitoring for diagnosing, staging, and treatment of Parkinsons disease, movement and neurological disorders, and chronic pain |
| US20100092447A1 (en) | 2008-10-03 | 2010-04-15 | Fallon Joan M | Methods and compositions for the treatment of symptoms of prion diseases |
| NZ593823A (en) | 2009-01-06 | 2013-09-27 | Curelon Llc | Compositions and methods for the treatment or the prevention of infections by e. coli |
| ES2668909T3 (es) | 2009-01-06 | 2018-05-23 | Galenagen, Llc | Composiciones que comprenden proteasa, amilasa y lipasa para su uso en el tratamiento de infecciones por Staphylococcus aureus |
| US9056050B2 (en) | 2009-04-13 | 2015-06-16 | Curemark Llc | Enzyme delivery systems and methods of preparation and use |
| US9511125B2 (en) | 2009-10-21 | 2016-12-06 | Curemark Llc | Methods and compositions for the treatment of influenza |
| US9011842B2 (en) | 2010-02-02 | 2015-04-21 | Amano Enzyme Inc. | Use of proteases for gluten intolerance |
| WO2011126873A2 (en) * | 2010-03-30 | 2011-10-13 | Alvine Pharmaceuticals, Inc. | Proteases for degrading gluten |
| WO2012135646A2 (en) | 2011-03-30 | 2012-10-04 | Alvine Pharmaceuticals, Inc. | Proteases for degrading gluten |
| MX347770B (es) | 2011-04-21 | 2017-05-12 | Curemark Llc | Compuesto para el tratamiento de alteraciones neuropsiquiatricas. |
| US10350278B2 (en) | 2012-05-30 | 2019-07-16 | Curemark, Llc | Methods of treating Celiac disease |
| US9867872B2 (en) | 2013-09-05 | 2018-01-16 | Dsm Ip Assets B.V. | Use of an acidic soft drink to enhance the efficacy of a gluten-digesting enzyme |
| GB201320781D0 (en) | 2013-11-25 | 2014-01-08 | Univ Newcastle | Model Gut System |
| EP3164500B1 (en) * | 2014-07-01 | 2019-12-25 | DSM IP Assets B.V. | Low gluten yeast hydrolysates |
| WO2016071989A1 (ja) * | 2014-11-06 | 2016-05-12 | ヤヱガキ醗酵技研株式会社 | ヒト用食品添加剤、健康補助食品、および、体質改善方法 |
| JP2017029129A (ja) * | 2015-07-30 | 2017-02-09 | 三菱化学フーズ株式会社 | プロテアーゼの活性維持方法およびプロテアーゼ溶液 |
| ES2559902B1 (es) * | 2015-11-11 | 2016-11-22 | Pevesa Biotech, S.A. | Procedimiento de reducción de contaminantes en materia vegetal proteica |
| CN109430683B (zh) * | 2018-10-10 | 2022-05-27 | 宁波希诺亚海洋生物科技有限公司 | 去除麸质的复合酶制剂 |
| US20200383351A1 (en) * | 2018-10-26 | 2020-12-10 | The Regents Of The University Of California | Use of proteolytic enzymes to enhance protein bioavailability |
| CN109497529A (zh) * | 2018-12-18 | 2019-03-22 | 山西中谱安信质检技术服务有限公司 | 富含稀少糖和抗氧化活性物质酵素的低温发酵方法 |
| US11541009B2 (en) | 2020-09-10 | 2023-01-03 | Curemark, Llc | Methods of prophylaxis of coronavirus infection and treatment of coronaviruses |
| CN113151228A (zh) * | 2021-03-16 | 2021-07-23 | 李明达 | 一种病毒消杀用的复合酶制剂及其制备方法与应用 |
| AU2023213894A1 (en) | 2022-01-26 | 2024-08-15 | Digestiva, Inc. | Blood glucose stabilizing methods and compositions |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2001024816A2 (en) * | 1999-10-01 | 2001-04-12 | Klaire Laboratories, Inc. | Compositions and methods relating to the inhibition of casomorphin and gluteomorphin |
| WO2002045523A2 (en) * | 2000-12-07 | 2002-06-13 | Dsm Ip Assets B.V. | Protein hydrolysates enriched in peptides having a carboxy terminal proline residue |
| WO2005027953A2 (en) * | 2003-09-23 | 2005-03-31 | Dsm Ip Assets B.V. | Use of proline specific endoproteases to hydrolyse peptides and proteins |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH06292505A (ja) * | 1993-04-09 | 1994-10-21 | Kanegafuchi Chem Ind Co Ltd | 水中油型乳化組成物及びその製造方法 |
| US6447772B1 (en) * | 1999-10-01 | 2002-09-10 | Klaire Laboratories, Inc. | Compositions and methods relating to reduction of symptoms of autism |
| JP4443829B2 (ja) * | 2000-12-07 | 2010-03-31 | ディーエスエム アイピー アセッツ ビー．ブイ． | 飲料中の濁りを防止または減少する方法 |
| KR20040026683A (ko) * | 2001-07-18 | 2004-03-31 | 디에스엠 아이피 어셋츠 비.브이. | 우유 단백질의 가수분해 방법 |
| JP4355592B2 (ja) * | 2004-02-23 | 2009-11-04 | 森永乳業株式会社 | 抗ウイルス剤 |
| JP2005328738A (ja) * | 2004-05-19 | 2005-12-02 | Kikkoman Corp | 酵素混合物及び調味料 |
| EP1774014A2 (en) * | 2004-07-12 | 2007-04-18 | DSMIP Assets B.V. | Blood pressure lowering oligopeptides |
| US20060210692A1 (en) * | 2005-03-18 | 2006-09-21 | Mower Thomas E | Baby food composition |
-
2007
- 2007-01-30 EP EP07703225A patent/EP1978829A2/en not_active Withdrawn
- 2007-01-30 AU AU2007211641A patent/AU2007211641B2/en not_active Ceased
- 2007-01-30 WO PCT/EP2007/000896 patent/WO2007088062A2/en active Application Filing
- 2007-01-30 NZ NZ569989A patent/NZ569989A/xx not_active IP Right Cessation
- 2007-01-30 CN CNA2007800044845A patent/CN101511211A/zh active Pending
- 2007-01-30 RU RU2008135467/10A patent/RU2446210C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2007-01-30 CA CA002637701A patent/CA2637701A1/en not_active Abandoned
- 2007-01-30 US US12/162,512 patent/US20090304670A1/en not_active Abandoned
- 2007-01-30 BR BRPI0707440-9A patent/BRPI0707440A2/pt not_active IP Right Cessation
- 2007-01-30 JP JP2008552750A patent/JP5134551B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
2008
- 2008-07-24 IL IL193067A patent/IL193067A0/en unknown
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2001024816A2 (en) * | 1999-10-01 | 2001-04-12 | Klaire Laboratories, Inc. | Compositions and methods relating to the inhibition of casomorphin and gluteomorphin |
| WO2002045523A2 (en) * | 2000-12-07 | 2002-06-13 | Dsm Ip Assets B.V. | Protein hydrolysates enriched in peptides having a carboxy terminal proline residue |
| WO2005027953A2 (en) * | 2003-09-23 | 2005-03-31 | Dsm Ip Assets B.V. | Use of proline specific endoproteases to hydrolyse peptides and proteins |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| НЕЧАЕВ А.П., ТРАУБЕНБЕРГ С.Е. и др. Пищевая химия / Под ред. А.П.Нечаева. - СПб.: ГИОРД, 2001, с.446-447. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| NZ569989A (en) | 2012-11-30 |
| EP1978829A2 (en) | 2008-10-15 |
| IL193067A0 (en) | 2009-02-11 |
| US20090304670A1 (en) | 2009-12-10 |
| WO2007088062A2 (en) | 2007-08-09 |
| WO2007088062A3 (en) | 2008-09-12 |
| RU2008135467A (ru) | 2010-03-10 |
| CA2637701A1 (en) | 2007-08-09 |
| AU2007211641A1 (en) | 2007-08-09 |
| JP5134551B2 (ja) | 2013-01-30 |
| AU2007211641B2 (en) | 2012-09-06 |
| CN101511211A (zh) | 2009-08-19 |
| JP2009525033A (ja) | 2009-07-09 |
| BRPI0707440A2 (pt) | 2011-05-03 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2446210C2 (ru) | Пищевой продукт, содержащий специфичную к пролину протеазу, способ его производства и его применение для расщепления токсичных или аллергенных пептидов глютена | |
| Grom et al. | Postprandial glycemia in healthy subjects: Which probiotic dairy food is more adequate? | |
| Mitea et al. | Efficient degradation of gluten by a prolyl endoprotease in a gastrointestinal model: implications for coeliac disease | |
| Sinha et al. | Whey protein hydrolysate: Functional properties, nutritional quality and utilization in beverage formulation | |
| Ricci-Cabello et al. | Possible role of milk-derived bioactive peptides in the treatment and prevention of metabolic syndrome | |
| RU2370279C2 (ru) | Применение пролинспецифичных эндопротеаз для гидролиза пептидов и белков | |
| AU2013267357B2 (en) | Methods of treating celiac disease | |
| EP2793605A1 (en) | Process for obtaining rice protein hydrolysates useful in the prevention and/or treatment of obesity | |
| JP7369893B2 (ja) | グルテン不耐症及びそれから生じる障害を治療するための組成物及び方法 | |
| RU2741637C2 (ru) | Пищевая добавка и композиция для лечения метаболического синдрома | |
| JP2011144167A (ja) | 血糖値降下剤及び血糖値降下飲食品組成物 | |
| RU2635932C2 (ru) | Способ получения содержащей белки композиции с уменьшенной коагуляцией в пищеварительном тракте | |
| RU2352146C2 (ru) | Композиция (варианты) и пищевой продукт из овса | |
| AU2001282806B2 (en) | Stabilisation of immunoglobulins at a low pH | |
| EP2003989A1 (en) | Process for the hydrolysis of milk proteins | |
| AU2001282806A1 (en) | Stabilisation of immunoglobulins at a low pH | |
| EP0357776A1 (en) | Egg white hydrolyzate | |
| Wang et al. | Gastric digestion of cow milk, almond milk and oat milk in rats | |
| WO2014060495A1 (en) | Process for the production of an infant formula | |
| MX2008009960A (en) | Food product comprising a proline specific protease, the preparation thereof and its use for degrading toxic or allergenic gluten peptides | |
| JPH07215851A (ja) | 抗アレルギー剤及びその製造法 | |
| Bly | Matrix and food processing induced changes in the accuracy of different commercial milk ELISA kits | |
| Vasquez Orejarena | Development of a Functional Shelf Stable High Protein Dairy Beverage with Oat-beta-glucan | |
| WO2018139624A1 (ja) | インスリン分泌促進用組成物 | |
| EP4395563A1 (en) | Fungal enzyme mixtures and uses thereof |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20140131 |