RU2392329C1 - Способ получения высокополимерной рнк из дрожжей - Google Patents
Способ получения высокополимерной рнк из дрожжей Download PDFInfo
- Publication number
- RU2392329C1 RU2392329C1 RU2008139832/13A RU2008139832A RU2392329C1 RU 2392329 C1 RU2392329 C1 RU 2392329C1 RU 2008139832/13 A RU2008139832/13 A RU 2008139832/13A RU 2008139832 A RU2008139832 A RU 2008139832A RU 2392329 C1 RU2392329 C1 RU 2392329C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- yeast
- rna
- room temperature
- suspension
- solution
- Prior art date
Links
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к выделению физиологически активных соединений. Предложенный способ получения высокополимерной РНК из дрожжей включает суспендирование дрожжей в водном 1-2%-ном растворе олеиновой кислоты, оттитрованной щелочью до pH 7-8, с последующим продолжительным кипячением суспензии. Далее отстаивают горячий лизат в течение 22 ч при комнатной температуре. После чего осаждают высокополимерную РНК из супернатанта хлористым натрием и промывают полученный шрот, содержащий высокополимерную РНК, последовательно 2 порциями 3 М раствора хлористого натрия и 5 порциями 94% этанола путем его ресуспендирования при комнатной температуре и низкоскоростного центрифугирования. Предложенное изобретение позволяет получить целевой продукт - высокополимерную РНК.
Description
Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к выделению физиологически активных соединений.
Известные способы получения РНК из дрожжей позволяют выделять низкополимерную РНК, например, патент РФ №2103365, патент РФ №1708845 [1], [2]. Она применяется в медицине при лечении широкого круга заболеваний: от вирусных инфекций до расстройств памяти (Земсков В.М., Лидак М.Ю., Земсков A.M., Микстайс У.Я. // Низкомолекулярная РНК: получение, гидролиз и применение в медицине. - Рига: Зинатне, 1985. - 191 с.) [3]. Однако этот препарат вводится пациентам всегда перорально и механизм его действия включает, скорее всего, поставку мономеров для синтеза эндогенных нуклеиновых кислот. Механизм действия высокополимерной дрожжевой РНК принципиально иной. Она гораздо менее токсична чем низкополимерная и вводится животным путем инъекций, что приводит к избирательной индукции синтеза некоторых белков, например гемоглобина (Ямковая Т.В., Ямковой В.И., Панин Л.Е. Биологическая активность разных препаратов РНК из пекарских дрожжей. // Бюллетень Сибирского отделения РАМН. - Новосибирск, 2006. - №3(121). - С.117-121) [4].
Наиболее близким к предлагаемому является способ получения высокополимерной РНК из дрожжей путем суспендирования их в водном 0,3-1,2 М растворе 2-этилгексановой кислоты, содержащем 0,1-0,5 М NaCl (pH - 7,0-7,5), суспензию выдерживают при 92-98°C в течение 10-40 мин, охлаждают до комнатной температуры, центрифугируют при 4000 об/мин в течение 15 мин при 0-4°C, к надосадочной жидкости добавляют этанол до содержания 50-55 об.%, центрифугируют (4000 об/мин, 15 мин, 0-4°C), полученный осадок суммарной РНК растворяют в воде до содержания 150-200 ОЕ260/мл. Раствор осветляют центрифугированием при 20000 об/мин в течение 20 мин при 0-4°C. Затем к надосадочной жидкости добавляют NaCl до концентрации 2 М, выдерживают смесь при 0-4°C в течение 1-2 ч и осадок высокополимерной РНК отделяют путем центрифугирования, растворяют до 150-200 ОЕ260/мл, после центрифугирования полученного раствора (20000 об/мин, 20 мин, 0-4°C) к надосадочной жидкости добавляют NaCl до содержания 1,5 М и этанол до содержания 50-55 об.%. Осадок натриевой соли РНК собирают центрифугированием при 0-4°C, к надосадочной жидкости добавляют NaCl до 0,1-0,5 М и этанол до содержания 50-55 об.%, полученный осадок высокополимерной РНК отделяют и высушивают обычными методами (а.с. SU 936701) [5].
Данный способ предполагает использование неприродного, редкого и высокотоксичного литического агента - 2-этилгексановой кислоты, что требует глубокой очистки конечного продукта, вследствие чего этот способ не экономичен и практически не масштабируем.
Целью изобретения является замена неприродного, редкого и высокотоксичного литического агента на пищевой крупнотоннажный, что существенно удешевляет процесс поскольку делает его практически безотходным.
Цель достигается тем, что дрожжи суспендируют в водном 1-2%-ном растворе олеиновой кислоты, оттитрованной щелочью до pH 7-8, суспензию выдерживают при 98-102°C в течение 40-60 мин, отстаивают горячий лизат в течение 20-24 ч при комнатной температуре, надосадочную жидкость сливают с помощью сифона (из осадка путем упаривания может быть получен кормовой белок), затем к слитой жидкости добавляют NaCl до концентрации 2-3 М, суспензию выдерживают 20-96 ч при комнатной температуре, центрифугируют (2500-3500 g, 5-15 мин, без охлаждения), полученный супернатант пригоден для извлечения низкополимерной РНК, а осадок промывают 2 порциями 2-3 М раствора NaCl и 5 порциями 92-96%-ного этанола путем последовательного его ресуспендирования при комнатной температуре и центрифугирования (2500-3500 g, 5-15 мин, без охлаждения).
Из полученного шрота высокополимерную РНК экстрагируют дистиллированной водой и высушивают обычным методом, а из этанола путем его перегонки может быть получено дрожжевое масло.
Таким образом, наряду с целевым продуктом - высокополимерной РНК, попутно можно получить концентрат кормового белка, низкополимерную РНК и дрожжевое масло.
При снижении центробежного ускорения ниже 2500 g и времени центрифугирования менее 5 мин осадок высокополимерной РНК образуется рыхлый и тянется за декантируемым супернатантом, а увеличение ускорения более 3500 g и времени центрифугирования более 15 мин не приводит к дополнительному его уплотнению.
Пример осуществления предлагаемого способа
Экстракция РНК. 1 кг свежих прессованных пекарских дрожжей (Saccharomyces cerevisiae, Новосибирский дрожжевой завод, ТУ 9182-001-00367108-04) с содержанием влаги ~70% суспендировали по порциям в течение 20 мин в 2 л кипящей воды, содержащей 45 г олеиновой кислоты, оттитрованной 20 мл 2,5 М NaOH так, чтобы температура суспензии не опускалась ниже 98°C. Суспензию кипятили 40 мин при 98-102°C и частом перемешивании. По мере упаривания добавляли в нее кипящую воду до 3 л. Через 10, 20 и 30 мин после суспендирования последней порции дрожжей в кипящую суспензию добавляли по 10 мл 2,5 М NaOH. По окончании экстракции в горячую суспензию добавляли кипящую воду до 4,5 л, перемешивали, переносили в узкий цилиндрический сосуд на 5 л из термостойкого стекла, в котором она и отстаивалась при комнатной температуре в течение 22 ч.
Высаливание высокополимерной РНК и сбор концентрата кормового белка. Отстоявшийся супернатант (2,9 л) сливали с помощью сифона в стеклянную емкость на 5 л. Киселеобразный дрожжевой шлам, собирающийся на дне сосуда и содержащий до 70% денатурированного белка, сушили при 58-62°C обычным способом. В супернатант же добавляли 620 г NaCl (ГОСТ Р 51574-2000 ФГУП комбината «СИБСОЛЬ», г.Усолье-Сибирское, Иркутская обл.) и свежекипяченую воду до 3,5 л. Суспензию интенсивно перемешивали до полного растворения соли и ставили отстаиваться при комнатной температуре на 22 ч. При этом в нижней части суспензии формируется осадок.
Промывка высоленной высокополимерной РНК 3 М раствором NaCl и этанолом и осаждение из отходов 3 М раствора NaCl низкополимерной РНК концентрированной HCl. Далее высоленный осадок-шрот, содержащий высокополимерную РНК, отделяли от супернатанта центрифугированием (3000 g, 10 мин, без охлаждения), промывали 2 порциями по 0,8 л 3 М раствора NaCl и 5 порциями по 200 мл 94%-ного этанола (Куйбышевский спиртовый завод, Новосибирская обл.); при этом шрот отделяли от 3 М раствора NaCl и этанола центрифугированием (3000 g, 10 мин, без охлаждения). Отработанный спирт регенерировали перегонкой, при этом в остатке собиралось дрожжевое масло. Содержащуюся же в супернатанте (~3,5 л) из-под высокополимерной РНК низкополимерную РНК осаждали добавлением 7 мл концентрированной HCl. Сформировавшийся в течение 2 сут при температуре 5-25°С осадок низкополимерной РНК выделяли центрифугированием (3000 g, 10 мин, без охлаждения), промывали 2 порциями по 400 мл 94%-ного этанола и сушили на воздухе при комнатной температуре.
Товарную высокополимерную РНК получали экстракцией ее из промытого шрота дистиллированной водой, осветлением экстракта центрифугированием (3000 g, 10 мин, без охлаждения) и заключительной лиофилизацией.
Из 1 кг свежих прессованных пекарских дрожжей получали 5-10 г высокополимерной РНК со следующими характеристиками: цвет лиофилизованного препарата - белый; растворимость в воде - хорошая; весовая экстинкция, ОЕ260/мг - 16-20; содержание КРФ, % ≤2,5; прирост КРФ, % ≤0,5; спектральные отношения: D230/D260 - 0,25-0,55; D250/D260 - 0,86-0,94; D280/D26o - 0,40-0,65.
Выход из 1 кг дрожжей концентрата кормового белка 250-270 г, низкополимерной РНК 1,2-2,4 г, дрожжевого масла 1-2 г.
Предложенный способ получения высокополимерной дрожжевой РНК (предполагаемое рыночное название «Виталанг») является практически безотходной, легко масштабируемой и простой технологией, поскольку предполагает использование крупнотоннажного и дешевого литического агента - олеиновой кислоты, являющейся к тому же незаменимым продуктом питания.
Источники информации
1. Патент РФ №2103365.
2. Патент РФ №1708845.
3. Земсков В.М., Лидак М.Ю., Земсков A.M., Микстайс У.Я. // Низкомолекулярная РНК: получение, гидролиз и применение в медицине. - Рига: Зинатне, 1985. - 191 с.
4. Ямковая Т.В., Ямковой В.И., Панин Л.Е. Биологическая активность разных препаратов РНК из пекарских дрожжей. // Бюллетень Сибирского отделения РАМН. - Новосибирск, 2006. - №3(121). - С.117-121.
5. Авторское свидетельство SU №936701.
Claims (1)
- Способ получения высокополимерной РНК из дрожжей путем суспендирования их в кипящем растворе литического агента с последующим продолжительным кипячением суспензии, отстаиванием горячего лизата при комнатной температуре, осаждением высокополимерной РНК из супернатанта хлористым натрием и промывкой осадка раствором хлористого натрия и этанолом путем последовательного его ресуспендирования-центрифугирования и выделения конечного продукта из полученного шрота экстракцией водой, отличающийся тем, что дрожжи суспендируют в водном 1-2%-ном растворе олеиновой кислоты, оттитрованной щелочью до pH 7-8, суспензию выдерживают при 98-102°С в течение 40 мин, отстаивают горячий лизат в течение 22 ч при комнатной температуре, к слитой надосадочной жидкости добавляют NaCl до концентрации 3 М, суспензию выдерживают 20-96 ч при комнатной температуре, центрифугируют на низкоскоростной центрифуге при ускорении 3000 g в течение 10 мин без охлаждения, а полученный шрот, содержащий высокополимерную РНК, промывают последовательно двумя порциями 3 М раствором NaCl и пятью порциями 94%-ным этанолом путем его ресуспендирования при комнатной температуре и низкоскоростного центрифугирования при ускорении 3000 g в течение 10 мин без охлаждения.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2008139832/13A RU2392329C1 (ru) | 2008-10-07 | 2008-10-07 | Способ получения высокополимерной рнк из дрожжей |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2008139832/13A RU2392329C1 (ru) | 2008-10-07 | 2008-10-07 | Способ получения высокополимерной рнк из дрожжей |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2008139832A RU2008139832A (ru) | 2010-04-20 |
RU2392329C1 true RU2392329C1 (ru) | 2010-06-20 |
Family
ID=42682718
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2008139832/13A RU2392329C1 (ru) | 2008-10-07 | 2008-10-07 | Способ получения высокополимерной рнк из дрожжей |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2392329C1 (ru) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2510854C2 (ru) * | 2010-09-06 | 2014-04-10 | Общество с ограниченной ответственностью "ВИТАЛАНГ" | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СВОБОДНОГО ОТ БЕЛКА БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНОГО ПРЕПАРАТА ВЫСОКОПОЛИМЕРНОЙ РНК ИЗ СУХИХ ПЕКАРСКИХ ДРОЖЖЕЙ Saccharomyces cerevisiae |
-
2008
- 2008-10-07 RU RU2008139832/13A patent/RU2392329C1/ru active
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2510854C2 (ru) * | 2010-09-06 | 2014-04-10 | Общество с ограниченной ответственностью "ВИТАЛАНГ" | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СВОБОДНОГО ОТ БЕЛКА БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНОГО ПРЕПАРАТА ВЫСОКОПОЛИМЕРНОЙ РНК ИЗ СУХИХ ПЕКАРСКИХ ДРОЖЖЕЙ Saccharomyces cerevisiae |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
RU2008139832A (ru) | 2010-04-20 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US5268467A (en) | Immunomodulatory polysaccharide fractions from Astragalus plants | |
RU2403288C1 (ru) | Способ получения высокополимерной рнк из сухих пекарских дрожжей | |
CN102070727B (zh) | 一种肝素钠的提取方法 | |
CN114599671B (zh) | 一种角蛋白bd-10、制法和其药物组合物与用途 | |
RU2392329C1 (ru) | Способ получения высокополимерной рнк из дрожжей | |
RU2435862C1 (ru) | Способ получения высокополимерной рнк из отработанных пивных дрожжей | |
CN114214366A (zh) | 一种预防和治疗贫血的小肽粉和血红素之肽红复方药物及其制备方法和应用 | |
KR100563361B1 (ko) | 페로-숙신일카제인 착화물, 그 제조방법 및 이를 함유하는 약제조성무류 | |
CN114984032B (zh) | Dna四面体框架核酸-绿原酸复合物及其在制备治疗肝纤维化的药物中的用途 | |
CN110922506A (zh) | 一种高澄清度的肝素钠 | |
RU2392328C2 (ru) | Способ получения высокополимерной рнк из дрожжей | |
CN101906423A (zh) | 基于昆虫杆状病毒表达系统的重组人神经生长因子的制备方法 | |
RU2244008C1 (ru) | Усовершенствованный способ получения нуклеината натрия | |
RU2430969C2 (ru) | Высокополимерная рнк из пекарских дрожжей, свободная от примесных ассоциатов рнк с белками и полисахаридами | |
RU2430968C2 (ru) | Амфифильная высокополимерная рнк из пекарских дрожжей | |
US5064758A (en) | Method of preparing a mixture of ribonucleotides | |
RU2089204C1 (ru) | Способ получения пептидов, восстанавливающих функцию предстательной железы | |
RU2510854C2 (ru) | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СВОБОДНОГО ОТ БЕЛКА БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНОГО ПРЕПАРАТА ВЫСОКОПОЛИМЕРНОЙ РНК ИЗ СУХИХ ПЕКАРСКИХ ДРОЖЖЕЙ Saccharomyces cerevisiae | |
RU2261112C1 (ru) | Способ получения иммуноглобулинового препарата | |
CN109652486B (zh) | 一种小分子大青叶螯合肽的制备方法 | |
JPS6152807B2 (ru) | ||
RU2158130C1 (ru) | Способ получения фибриногена | |
CN1141945C (zh) | 一种治疗类风湿关节炎的中药制剂及其制备方法 | |
RU2054943C1 (ru) | Способ получения гиалуронидазы | |
RU2274658C2 (ru) | Способ получения панкреатического гидролизата рибонуклеиновой кислоты |