RU2430968C2

RU2430968C2 - Амфифильная высокополимерная рнк из пекарских дрожжей

Info

Publication number: RU2430968C2
Application number: RU2009133894/10A
Authority: RU
Inventors: Татьяна Витальевна Ямковая (RU); Татьяна Витальевна Ямковая; Станислав Николаевич Загребельный (RU); Станислав Николаевич Загребельный; Лев Евгеньевич Панин (RU); Лев Евгеньевич Панин; Виталий Иванович Ямковой (RU); Виталий Иванович Ямковой
Original assignee: Общество с ограниченной ответственностью "ВИТАЛАНГ"
Priority date: 2009-09-09
Filing date: 2009-09-09
Publication date: 2011-10-10
Also published as: RU2009133894A

Abstract

Изобретение относится к биотехнологии. Описан препарат амфифильной высокополимерной дрожжевой РНК, стимулирующий лейкоцитарную реакцию и первичный гуморальный иммунный ответ. Препарат получен из дрожжей Saccharomyces cerevisiae экстракцией кипящей водой, содержащей оттитрованную NaOH олеиновую кислоту в течение 40 минут при температуре 99-102°С, с добавлением по мере упаривания кипящей воды до 0,3 л и NaOH через 10, 20 и 30 минут после начала экстракции. Предложенный препарат стимулирует лейкоцитарную реакцию и первичный гуморальный иммунный ответ.

Description

Изобретение относится к области ветеринарии и медицины, в частности к применению в лечебных целях новых физиологически активных соединений.

Известен препарат высокополимерной РНК, с фирменным названием Полирибонат, извлеченный из клеток пекарских дрожжей с помощью 2-этилгексановой кислоты. Он производится в препаративных количествах и применяется в качестве противовирусного средства в ветеринарии [1].

Однако данный препарат высокополимерной дрожжевой РНК ввиду своей относительной гидрофильности плохо проникает через биологические мембраны и слабо стимулирует биосинтез белка в иммунокомпетентных органах и тканях лабораторных животных [2].

Целью настоящего изобретения является придание высокополимерной дрожжевой РНК амфифильных свойств поскольку именно амфифильные соединения легче других проникают через биологические мембраны.

Поставленная цель достигается выделением высокополимерной РНК из пекарских дрожжей с помощью олеиновой кислоты.

Характеристики полученного препарата: выход из 30 г сухих дрожжей - 0,7-1,0 г; содержание олеиновой кислоты в комплексе с высокополимерной дрожжевой РНК, % - 10-20; цвет лиофилизованного препарата - белый; растворимость в воде - удовлетворительная (в отличие от относительно гидрофильного Полирибоната, растворяющегося в воде в течение нескольких секунд, данный амфифильный препарат растворяется в воде только через 0,5-1 ч при периодическом перемешивании), водный раствор мылкий, нерастворенные крупинки скользкие; весовая экстинкция, ОЕ₂₆₀/мг - 16-18; содержание КРФ, % ≤2,5; прирост КРФ за 1 сут при 22-25°С в дистиллированной воде, % ≤0,4; спектральные отношения: D₂₃₀/D₂₆₀ - 0,30-0,45; D₂₅₀/D₂₆₀ - 0,88-0,92; D₂₈₀/D₂₆₀ - 0,45-0,60.

Пример осуществления предлагаемого метода

30 г свежих сухих пекарских дрожжей (Saccharomyces cerevisiae, Новосибирский дрожжевой завод, ГОСТ 28483-90) с содержанием влаги ~7,4% суспендировали по порциям в течение 1-2 мин в 0,3 л кипящей воды, содержащей 4,5 г олеиновой кислоты (ЗАО «Купавнареактив», соответствует квалификации «ч» по ТУ 6-09-5290-86), оттитрованной 2 мл 2,5 М NaOH, так, чтобы температура суспензии не опускалась ниже 99°С. Суспензию кипятили 40 мин при 99-102°С, периодически перемешивая. По мере упаривания добавляли в нее кипящую воду до 0,3 л. Через 10, 20 и 30 мин после суспендирования последней порции дрожжей в кипящую суспензию добавляли по 1 мл 2,5 М NaOH. По окончании экстракции суспензию охлаждали до ~40°С, центрифугировали (3000 g, 10 мин, без охлаждения), супернатант (~0,16 л) сливали в стеклянную емкость на 0,5 л, добавляли в нее 53 г NaCl (ФГУП комбината «СИБСОЛЬ», г.Усолье-Сибирское, Иркутская обл., ГОСТ Р 51574-2000) и свежую дистиллированную воду до 0,3 л. Суспензию интенсивно перемешивали до полного растворения соли и оставляли при комнатной температуре на 22 ч. Высоленный осадок-шрот, содержащий амфифильную высокополимерную РНК, отделяли от супернатанта центрифугированием (3000 g, 10 мин, без охлаждения), промывали 2 порциями по 80 мл 3 М раствора NaCl и 4 порциями по 20 мл 96-97%-ного этанола (ОАО «Спиртовый комбинат», г.Мариинск, Кемеровская обл., ГОСТ Р 51652-2000); при этом шрот отделяли от 3 М раствора NaCl и этанола центрифугированием (3000 g, 10 мин, без охлаждения).

Товарную амфифильную высокополимерную РНК получали экстракцией ее из промытого шрота дистиллированной водой, осветлением экстракта центрифугированием (3000 g, 10 мин, без охлаждения) и заключительной лиофилизацией.

Полученный препарат амфифильной высокополимерной дрожжевой РНК (предполагаемое рыночное название «Виталанг-2») при внутрибрюшинном введении лабораторным животным - мышам - самцам-гибридам CBF1 - высокоотвечающего генотипа в дозе 100 мг/кг в течение 5 дней ежедневно сильно стимулировал лейкоцитарную реакцию - количество ядросодержащих клеток в крови увеличивалось в 1,7 раза, а также первичный гуморальный иммунный ответ на тимус-зависимый антиген - эритроциты барана - количество антителообразующих клеток классов IgG и IgM в селезенке по сравнению с контрольной группой увеличивалось на 30-60 и 70% соответственно. Вместе с тем данный препарат малотоксичен (LD₅₀>2 г/кг), ни одна мышь не погибла.

Источники информации

1. Ред. Масычева В.И. Сб. науч. трудов сотр. НИКТИ БАВ, 1996.

2. Ямковая Т.В., Ямковой В.И., Панин Л.Е. Биологическая активность разных препаратов РНК из пекарских дрожжей // Бюлл. Сибирского отделения РАМН, 2006, №3(121). С.117-121.

Claims

Препарат амфифильной высокополимерной дрожжевой РНК, стимулирующий лейкоцитарную реакцию и первичный гуморальный иммунный ответ, отличающийся тем, что его получают из дрожжей Saccharomyces cerevisiae экстракцией кипящей водой, содержащей оттитрованную 2,5 М NaOH олеиновую кислоту в течение 40 мин при температуре 99-102°С, добавлением по мере упаривания кипящей воды до 0,3 л и 2,5 М NaOH через 10, 20 и 30 мин после начала экстракции.