RU2244008C1 - Усовершенствованный способ получения нуклеината натрия - Google Patents
Усовершенствованный способ получения нуклеината натрия Download PDFInfo
- Publication number
- RU2244008C1 RU2244008C1 RU2004103275/13A RU2004103275A RU2244008C1 RU 2244008 C1 RU2244008 C1 RU 2244008C1 RU 2004103275/13 A RU2004103275/13 A RU 2004103275/13A RU 2004103275 A RU2004103275 A RU 2004103275A RU 2244008 C1 RU2244008 C1 RU 2244008C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- rna
- sodium
- solution
- acetone
- carried out
- Prior art date
Links
Landscapes
- Saccharide Compounds (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для получения нуклеината натрия из хлебопекарных дрожжей. Нуклеиновые кислоты извлекают из биомассы в присутствии сохраняющего вещества - пероксида водорода при низкой концентрации. Полученный экстракт обрабатывают протеолитическим ферментом, осаждают РНК кислотой в присутствии соли кальция. Очистку продукта проводят водными растворами ацетона и хлоридов кальция и натрия. Затем очистку нуклеината натрия осуществляют водно-ацетоновым раствором в присутствии активированного угля. Изобретение позволяет увеличить выход целевого продукта и улучшить его качество.
Description
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для получения медицинских препаратов.
Известен способ получения рибонуклеината натрия, включающий обработку дрожжей в водной среде при 100-110°С, отделение раствора рибонуклеиновой кислоты (РНК) от дрожжевого шлама путем фильтрации, осаждение РНК соляной кислотой, промывку, очистку от пигментов и белков, растворение РНК в воде с добавлением едкого натра и осаждение из раствора рибонуклеината натрия этиловым спиртом (см. Пояснительную записку к фармакопейной статье ФС 42-1781-82/11).
Недостатком данного способа является сложность технологического процесса, использование вредных веществ при очистке (диэтиловый эфир) и невысокое качество продукта, имеющего серовато-желтый цвет и высокое содержание белков.
Известен также способ получения нуклеината натрия, включающий экстракцию РНК из дрожжей 10-12%-ным раствором хлористого натрия при 100-110°С, отделение раствора РНК от дрожжевого шлама, осаждение РНК соляной кислотой, промывку выпавшей в осадок РНК этиловым спиртом, ее сушку, очистку от пигментов и белков при растворении РНК в воде и доведении рН до 8,0-8,2 добавлением едкого натра, добавление к раствору панкреатина и выдерживание около часа при 37-40°С. Осаждение нуклеиновой кислоты проводят охлажденным и подкисленным соляной кислотой до рН 1-2 этиловым спиртом, после чего проводят фильтрацию осадка, промывку этиловым спиртом, растворение в воде с добавлением гидроокиси натрия, осаждение нуклеината натрия из полученного раствора этиловым спиртом с последующей фильтрацией осадка, промывкой этиловым спиртом и сушкой (Земсков В.М. и др., Низкомолекулярная РНК. Получение, гидролиз и применение в медицине. Рига, Зинатне, 1985, с.7-8).
Недостатком этого способа является сложность его осуществления и невысокое качество конечного продукта.
Наиболее близким к заявляемому по своей технической сущности является способ получения рибонуклеината натрия, включающий экстракцию рибонуклеиновой кислоты (РНК) из биомассы дрожжей водным щелочным раствором при рН 7,0-9,5 при температуре 60-110°С, отделение биомассы, обработку экстракта протеолитическим ферментом, отделение скоагулированных примесей, осаждение РНК в виде кальциевой соли, отделение от раствора, перевод кальциевой соли в свободную рибонуклеиновую кислоту действием минеральной кислоты, переведение в натриевую соль щелочью, осаждение натриевой соли этиловым спиртом. (Патент RU №2081915, С 12 Р 19/34, 20.06.97).
Недостатком данного способа является низкий выход и недостаточная чистота нуклеината натрия.
Задачей изобретения является увеличение выхода и повышения качества нуклеината натрия.
Сущность изобретения заключается в следующем:
Способ получения нуклеината натрия включает экстракцию РНК из биомассы дрожжей щелочным водным раствором, обработку экстракта протеолитическим ферментом, коагуляцию и отделение скоагулированных примесей, осаждение РНК минеральной кислотой, доочистку от водорастворимых биокомпонентов клеток, переведение РНК в растворимую натриевую соль, окончательную доочистку с последующим выделением целевого продукта из водноорганической среды и отличается от известных ранее способов тем, что:
- биомассу дрожжей предварительно обрабатывают водным раствором пероксида водорода с концентрацией 0,01-0,1% при температуре 10-40°С;
- осаждение рибонуклеиновой кислоты проводят минеральной кислотой в присутствии шестиводного хлорида кальция в количестве 20-45 г/л;
- доочистку от водорастворимых биокомпонентов клеток осуществляют очищенной водой в присутствии хлорида натрия в количестве 20-40 г/л и хлорида кальция в количестве 1,5 г/л (в пересчете на безводную соль);
- осажденную рибонуклеиновую кислоту обрабатывают водно-ацетоновой смесью в соотношении вода: ацетон от 1:1 до 1:4;
- окончательную доочистку проводят из водно-ацетоновой среды при концентрации органического растворителя от 20 до 50% объемных при температуре 45±5°С в присутствии активированного угля в количестве 0,5-2,0%.
Согласно изобретению для подавления активности клеточных ферментов, разрушающих РНК в растворе, биомассу дрожжей обрабатывают разбавленным раствором пероксида водорода, для достижения полноты осаждения рибонуклеиновой кислоты неорганической кислотой и отделения основной массы белковых примесей процесс проводят в присутствии хлорида кальция, для предотвращения процесса “плавления” рибонуклеиновой кислоты отмывку ее от водорастворимых биокомпонентов клеток осуществляют в присутствии хлорида натрия, хлорида кальция и ацетона, для окончательной очистки продукта примеси осаждают из водно-органической среды в присутствии активированного угля, количество органического растворителя в водно-органической среде и количество угля зависят от качества дрожжей.
Изобретение позволяет увеличить выход нуклеината натрия от 10 до 100%. Полученный продукт полностью соответствует требованиям ФС 42-1781-97, цвет продукта белый без явного оттенка, имеет улучшенные показатели по прозрачности водного раствора.
Изобретение иллюстрируется следующим примером.
Пример 1.
200 г исходного сырья, в качестве которого используют обязательно свежие хлебопекарные дрожжи, суспендируют в одинаковом по массе количестве очищенной воды до получения однородного раствора, медленно при перемешивании вносят концентрированный раствор пероксида водорода до получения концентрации 0,1% в расчете на добавленную воду, 6,8 г хлорида натрия, устанавливают температуру 40-45°С, перемешивают в течение 15-20 минут, устанавливают рН 8,5-9,0 добавлением натриевой щелочи, нагревают до температуры 85-90°С, перемешивают 30 минут, охлаждают и отделяют биомассу. Затем рН фугата доводят до 6,9-7,2, прибавляют протосубтилин из расчета 0,05% и перемешивают 1 час при 50°С. После этого рН снижают до 4,0±0,05 и выдерживают 10 минут при 80-95°С. Скоагулированный осадок отделяют. Фугат охлаждают до температуры 18-25°С, при перемешивании добавляют хлорид кальция шестиводного из расчета 45 г/л и перемешивают 80 минут. После этого рН раствора снижают до значения 1,5 соляной кислотой. При этом наблюдается коагуляция и быстрое осаждение РНК. Раствор максимально декантируют, а к осадку приливают предварительно охлажденную до температуры 2±2°С очищенную воду, содержащую 3,0 г/л шестиводного хлорида кальция и 40 г/л хлорида натрия и имеющую рН 1,8-2,0 из расчета 3 объема на объем суспензии. Полученную смесь перемешивают 3-5 минут, осадку дают полностью осесть, затем раствор с осадка декантируют. Процесс промывки осадка повторяют, но не вводят в промывной раствор соль кальция. К суспензии после декантации приливают ацетон, равный объему суспензии, перемешивают 5-10 минут и отделяют осадок доступным методом.
Влажную пасту суспендируют в 100 мл очищенной воды, добавляют 2,2 г хлорида натрия, доводят рН до 4,9-5,1 раствором гидроксида натрия, перемешивают при комнатной температуре 10-20 минут, доводят температуру до 40-45°С и устанавливают рН 6,0-6,2, перемешивание продолжают до полного растворения осадка, раствор на 3-5 минут нагревают до 78-80°С и охлаждают до 36-40°С. К раствору при перемешивании приливают ацетон до образования хлопьевидного осадка (20-50% объемных), добавляют активированный уголь марки CXV в количестве 0,5% от объема водной части раствора, перемешивают 20 минут и фильтруют. Получают бесцветный прозрачный раствор нуклеината натрия. Раствор охлаждают до 2-5°С и при перемешивании добавляю ацетон, охлажденный до такой же температуры, в количестве, равном объему раствора. Не ранее, чем через 30 минут образовавшийся осадок отделяют от раствора, последовательно промывают спиртом и ацетоном и сушат при температуре 20-25°С до удаления паров ацетона и затем в сушильном шкафу при температуре 36-40°С до уровня влажности не более 14%. Получают белый сыпучий порошок.
- Выход целевого продукта, полученного по патенту №2081915, - 0,61 г. Цвет соли - белый с серым оттенком, водный раствор опалесцирует.
- Выход целевого продукта в условиях Примера 1 - 1,30 г. Цвет соли белый, водный раствор прозрачный, бесцветный.
- Выход целевого продукта в условиях Примера 1, но концентрация пероксида водорода 0,01% при температуре 10°С - 0,70 г. Цвет соли белый, водный раствор прозрачный, бесцветный.
- Выход целевого продукта в условиях предыдущего опыта, но при температуре 40°С - 0,80 г. Цвет соли белый, водный раствор прозрачный, бесцветный.
- Выход целевого продукта в условиях Примера 1, но на стадии осаждения РНК концентрация хлорида кальция шестиводного 20 г/л - 0,90 г. Цвет соли белый, водный раствор прозрачный, бесцветный.
- Выход целевого продукта в условиях Примера 1, но доочистку проводят при концентрации хлорида натрия 20 г/л - 1,00 г. Цвет соли белый, водный раствор прозрачный, бесцветный.
- Выход целевого продукта в условиях Примера 1, но осажденную РНК обрабатывают водно-ацетоновой смесью 1:4 - 1,31 г. Цвет соли белый, водный раствор прозрачный, бесцветный.
- Выход целевого продукта в условиях Примера 1, но осажденную РНК обрабатывают водно-ацетоновой смесью 1:0,5 - 1,15 г. Цвет соли белый, водный раствор прозрачный, бесцветный.
- Выход целевого продукта в условиях Примера 1, но окончательную очистку РНК проводят в присутствии 2% активированного угля - 1,20 г. Цвет соли белый, водный раствор прозрачный, бесцветный.
Claims (1)
- Способ получения нуклеината натрия, включающий экстракцию РНК из биомассы дрожжей щелочным водным раствором, обработку экстракта протеолитическим ферментом, отделение скоагулированных примесей, осаждение РНК, доочистку от водорастворимых биокомпонентов клеток, перевод РНК в растворимую натриевую соль, окончательную очистку с последующим выделением целевого продукта органическим растворителем, отличающийся тем, что биомассу дрожжей предварительно обрабатывают водным раствором пероксида водорода, осаждение РНК проводят минеральной кислотой в присутствии соли кальция, доочистку от водорастворимых биокомпонентов клеток проводят водными растворами ацетона и хлоридов кальция и натрия, а окончательную очистку осуществляют водно-ацетоновым раствором в присутствии активированного угля.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2004103275/13A RU2244008C1 (ru) | 2004-02-05 | 2004-02-05 | Усовершенствованный способ получения нуклеината натрия |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2004103275/13A RU2244008C1 (ru) | 2004-02-05 | 2004-02-05 | Усовершенствованный способ получения нуклеината натрия |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2244008C1 true RU2244008C1 (ru) | 2005-01-10 |
Family
ID=34882022
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2004103275/13A RU2244008C1 (ru) | 2004-02-05 | 2004-02-05 | Усовершенствованный способ получения нуклеината натрия |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2244008C1 (ru) |
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2742056C1 (ru) * | 2020-01-09 | 2021-02-02 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Курская государственная сельскохозяйственная академия имени И.И. Иванова" | Способ получения нуклеината натрия из микроводоросли Chlorella vulgaris Beijerink |
RU2742053C1 (ru) * | 2020-01-09 | 2021-02-02 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Курская государственная сельскохозяйственная академия имени И.И. Иванова" | Способ получения нуклеината натрия из биомассы микроводоросли Chlorella vulgaris Beijerink |
RU2742054C1 (ru) * | 2020-01-09 | 2021-02-02 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Курская государственная сельскохозяйственная академия имени И.И. Иванова" | Способ получения нуклеината натрия из биомассы микроводоросли Chlorella vulgaris Beijerink |
RU2747120C1 (ru) * | 2020-01-09 | 2021-04-28 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Курская государственная сельскохозяйственная академия имени И.И. Иванова" | Способ получения нуклеината натрия из сухой биомассы микроводоросли Chlorella vulgaris Beijerink |
RU2753608C2 (ru) * | 2020-01-09 | 2021-08-18 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Курская государственная сельскохозяйственная академия имени И.И. Иванова" | Способ получения нуклеината натрия из микроводоросли Chlorella vulgaris Beijerink |
-
2004
- 2004-02-05 RU RU2004103275/13A patent/RU2244008C1/ru active
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
BARAI V.N. et al. Preparation of highly-purified from yeast using calcium ion, PRIKL. BIOKHM. MI CROBIOL., 1995, 31, 494-7. * |
MAJUMDAR D et al., Simultaneous and rapid isolation of bacterial eucariotic DNA and RNA: a new approach for isolation DNA BIOTECHNIQUES, 1991, 11, 94-101. * |
Химия и биохимия нуклеиновых кислот /Под ред. И.Б.ЗБАРСКОГО, С.С.ДЕБОВА. - Медицина, 1968, с.87-106. * |
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2742056C1 (ru) * | 2020-01-09 | 2021-02-02 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Курская государственная сельскохозяйственная академия имени И.И. Иванова" | Способ получения нуклеината натрия из микроводоросли Chlorella vulgaris Beijerink |
RU2742053C1 (ru) * | 2020-01-09 | 2021-02-02 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Курская государственная сельскохозяйственная академия имени И.И. Иванова" | Способ получения нуклеината натрия из биомассы микроводоросли Chlorella vulgaris Beijerink |
RU2742054C1 (ru) * | 2020-01-09 | 2021-02-02 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Курская государственная сельскохозяйственная академия имени И.И. Иванова" | Способ получения нуклеината натрия из биомассы микроводоросли Chlorella vulgaris Beijerink |
RU2747120C1 (ru) * | 2020-01-09 | 2021-04-28 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Курская государственная сельскохозяйственная академия имени И.И. Иванова" | Способ получения нуклеината натрия из сухой биомассы микроводоросли Chlorella vulgaris Beijerink |
RU2753608C2 (ru) * | 2020-01-09 | 2021-08-18 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Курская государственная сельскохозяйственная академия имени И.И. Иванова" | Способ получения нуклеината натрия из микроводоросли Chlorella vulgaris Beijerink |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
EP1272528B1 (en) | Chitosan and method of preparing chitosan | |
CN103030715B (zh) | 一种分离纯化肝素钠的方法 | |
KR100986603B1 (ko) | 어류 정액 또는 알로부터 분리된 dna 중합체 단편복합체 및 그의 제조방법 | |
KR101476381B1 (ko) | 어류 정액 또는 알로부터 분리된 dna 중합체 단편복합체를 포함하는 세포활성 강화용 조성물, 및 얼굴 또는 피부 충진제 | |
US20090162905A1 (en) | Method for Purification of Hyaluronic Acid Salt | |
Clarke et al. | The preparation of plant nucleic acids | |
JP2008512105A (ja) | K5多糖の製造方法 | |
ITMI991465A1 (it) | Processo per la preparazione dei polisaccaridi k4 e k5 da escherichiacoli | |
RU2403288C1 (ru) | Способ получения высокополимерной рнк из сухих пекарских дрожжей | |
RU2244008C1 (ru) | Усовершенствованный способ получения нуклеината натрия | |
CN103044578A (zh) | 一种高效精制粗品肝素钠的方法 | |
WO2010006498A1 (zh) | 还原型辅酶q10的制备方法 | |
CN110592163A (zh) | 一种改善透明质酸钠色度的生产方法 | |
CN108456262A (zh) | 一种高纯度肝素钠的制备工艺 | |
CN110922506A (zh) | 一种高澄清度的肝素钠 | |
CN103804518A (zh) | 提高硫酸软骨素含量的制备方法 | |
RU2435862C1 (ru) | Способ получения высокополимерной рнк из отработанных пивных дрожжей | |
JPH05184378A (ja) | キトサンの製造方法 | |
RU2081915C1 (ru) | Способ получения нуклеината натрия | |
CN108423692B (zh) | 用维生素c生产废盐提纯精制氯化钠的方法 | |
CN103641935B (zh) | 硫酸软骨素的提取方法 | |
RU2392328C2 (ru) | Способ получения высокополимерной рнк из дрожжей | |
RU2680691C1 (ru) | Способ получения хитина из личинок черной львинки hermetia illucens | |
RU2392329C1 (ru) | Способ получения высокополимерной рнк из дрожжей | |
JP2007186689A (ja) | 低分子量ヒアルロン酸の製造方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
QB4A | Licence on use of patent |
Effective date: 20050729 |
|
QB4A | Licence on use of patent |
Effective date: 20100901 |
|
QB4A | Licence on use of patent |
Free format text: LICENCE Effective date: 20150902 |
|
PD4A | Correction of name of patent owner |