RU2375074C1 - Способ получения бруцеллезной моноспецифической сыворотки anti-abortus - Google Patents
Способ получения бруцеллезной моноспецифической сыворотки anti-abortus Download PDFInfo
- Publication number
- RU2375074C1 RU2375074C1 RU2008126559/13A RU2008126559A RU2375074C1 RU 2375074 C1 RU2375074 C1 RU 2375074C1 RU 2008126559/13 A RU2008126559/13 A RU 2008126559/13A RU 2008126559 A RU2008126559 A RU 2008126559A RU 2375074 C1 RU2375074 C1 RU 2375074C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- serum
- abortus
- strain
- concentration
- suspension
- Prior art date
Links
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области биотехнологии. Способ включает иммунизацию кроликов вакцинным штаммом бруцелл вида В. abortus разовой дозой внутривенно, обескровливание животных, инактивацию сыворотки, перекрестную абсорбцию сыворотки бактериальной массой гетерологичного вида бруцелл с последующей ее инкубацией при 37°С в течение 2 ч, концентрирование сыворотки путем центрифугирования и добавление фенола в качестве консерванта. При этом для иммунизации кроликов используют смесь (1:1) взвеси вакцинного штамма В. abortus 19ВА концентрацией 3,0-5,0×109 м.к./мл, обеззараженной кипячением в течение 60 мин, и взвеси живой культуры того же штамма В. abortus 19ВА концентрацией 3,0-5,0×109 м.к./мл в объеме 1 мл. После обескровливания животных сыворотку инактивируют при 60-65°С в течение 1-1,5 ч. Для перекрестной абсорбции используют бакмассу штамма В. melitensis 548. Способ обеспечивает получение бруцеллезной моноспецифической сыворотки anti-abortus с существенно сниженным риском биологической опасности технологического цикла при сохранении высокой специфической активности и специфичности.
Description
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для получения бруцеллезной моноспецифической сыворотки anti-abortus, используемой для видовой дифференциации штаммов возбудителей рода Brucella.
Известна биотехнология получения бруцеллезной моноспецифической сыворотки (anti-abortus) с использованием штамма бруцелл вида В.abortus первого биовара, включающая внутривенное заражение кроликов суспензией штамма В.abortus 544 в дозе 1×109 колониеобразующих единиц (КОЕ)/мл. Через 5-7 дней животных обескровливают, полученную сыворотку абсорбируют бакмассой штамма гетерологичного вида бруцелл В. melitensis 16М. Абсорбированную сыворотку инкубируют при 37°С в течение 2 ч, концентрируют центрифугированием, разводят в фенолсолевом растворе [Corbel М.Х., Yill K.P.W., Thomas E.L. Methods for the identification of Brucella. Central Veterinary Lab. New Haw, Weybrige, Sury KT153, №13, 1978].
Недостатком описанной биотехнологии является получение сыворотки с использованием вирулентного штамма бруцелл на этапе заражения кроликов и этапе абсорбции сыворотки. Полученная сыворотка характеризуется низкой чувствительностью (1:160), что препятствует получению конечных результатов дифференциации с достаточной степенью достоверности.
Наиболее близким к заявляемому способу является способ получения бруцеллезной моноспецифической сыворотки anti-abortus, при котором заражение кроликов проводят разовой дозой штамма В. abortus 544 (1,8-2,0×108 КОЕ/мл), обескровливают животных через 5-7 дней, инактивируют сыворотку при 60-65°С в течение 1-1,5 ч и проводят перекрестную абсорбцию сыворотки бакмассой штамма В. melitensis 28 при ее концентрации 3,5-3,7×109 КОЕ на 10 мл сыворотки, с последующим добавлением фенола [Патент РФ №2104031, опубл. 10.02.98. Бюл. №4].
Способ является достаточно эффективным для получения бруцеллезной моноспецифической сыворотки anti-abortus, титры которой после перекрестной абсорбции составляют 1:160-1:320.
Использование в биотехнологии получения сывороток живых культур вирулентных штаммов бруцелл на этапах заражения лабораторных животных и их обескровливания делает технологический процесс получения сыворотки опасным из-за возможного негативного воздействия на персонал фактора биологической опасности (вирулентного штамма В. abortus).
Целью изобретения является разработка биотехнологии получения бруцеллезной моноспецифической сыворотки anti-abortus, позволяющей существенно снизить риск опасного воздействия биологического фактора (вирулентного штамма возбудителя бруцеллеза) на персонал при опытно-экспериментальном производстве, с сохранением высокой специфической активности и специфичности сыворотки.
Для достижения поставленной цели предлагаемый способ получения бруцеллезной моноспецифической сыворотки anti-abortus включает иммунизацию кроликов породы Шиншилла разовой дозой в объеме 1 мл смесью (1:1) из взвеси вакцинного штамма В. abortus 19ВА концентрацией 3,0-5,0×109 м.к. (микробных клеток)/мл, обеззараженной кипячением в течение 60 мин, и взвеси живой культуры того же штамма В. abortus 19ВА концентрацией 3,0-5,0×109 м.к. /мл, обескровливание животных через 9 суток, инактивацию сыворотки при 60-65°С в течение 1-1,5 ч. Для перекрестной абсорбции используют бакмассу штамма В. melitensis 548, полученную путем выращивания культуры в течение 70-72 ч и добавляемую к сыворотке из расчета 3,5-3,7×109 м.к. на 10 мл сыворотки, с последующей инкубацией сыворотки при 37°С в течение 2 ч, ее концентрированием путем центрифугирования (30 мин при 5000 об/мин) и добавлением фенола в качестве консерванта до конечной концентрации 0,3-0,4%.
По отношению к прототипу у заявляемого изобретения имеются следующие отличительные признаки.
Использование в качестве иммунизирующего агента смеси (1:1) из взвеси вакцинного штамма В. abortus 19ВА, обеззараженной кипячением в течение 60 мин, и взвеси живой культуры того же штамма В. abortus 19ВА, значительно снижает риск биологической опасности при манипуляциях персонала на этапе иммунизации и обескровливания. Использование в качестве агента для перекрестной абсорбции культуры штамма В. melitensis 548 обеспечивает получение сыворотки с более высокой специфической активностью. Титры полученной предлагаемым способом бруцеллезной моноспецифической сыворотки anti-abortus составляют 1:320-1:640. Заявляемый способ осуществляется следующим образом.
Пример 1. Культуру В. abortus 19ВА выращивают на косяках плотной питательной среды в течение 48 ч при температуре 37°С, готовят 2 мл взвеси данного штамма концентрацией 5,0×109 м.к./мл. Один миллилитр взвеси обеззараживают кипячением в течение 60 минут. Готовят 1 мл смеси (1:1) из взвеси, обеззараженной кипячением, и взвеси живой культуры В. abortus 19ВА, которую вводят внутривенно кролику массой 2,5-3,0 кг. Через 9 суток животных обескровливают, сыворотку отбирают и инактивируют при 60°С в течение 1 ч. Параллельно выращивают культуру штамма гетерологичного вида В. melitensis 548 на матрацах в течение 72 ч. Бакмассу смывают 0,9% раствором натрия хлорида, центрифугируют в течение 30 минут при частоте вращения 5000 об/мин, осадок собирают и добавляют к нему 0,9% раствор натрия хлорида. Полученную бакмассу из расчета 3,7×109 м.к. на 10 мл добавляют к сыворотке, инкубируют при 37°С в течение 2 ч и центрифугируют в течение 30 минут при частоте вращения 5000 об/мин. Сыворотку отбирают и добавляют фенол до 0,3-0,4%. Титр сыворотки составляет 1:320-1:640.
Пример 2. Выполняют аналогично примеру 1 за исключением того, что готовят 2 мл взвеси штамма В. abortus концентрацией 4,0×109 м.к./мл. Один миллилитр взвеси обеззараживают кипячением в течение 60 минут. Готовят 1 мл смеси (1:1) из взвеси, обеззараженной кипячением, и взвеси живой культуры В. abortus 19ВА, которую вводят внутривенно кролику массой 2,5-3,0 кг. Через 9 суток животных обескровливают, сыворотку отбирают и инактивируют при 60°С в течение 1 ч. Параллельно выращивают культуру штамма гетерологичного вида B. melitensis 548 на матрацах в течение 72 ч. Бакмассу смывают 0,9% раствором натрия хлорида, центрифугируют в течение 30 минут при частоте вращения 5000 об/мин, осадок собирают и добавляют к нему 0,9% раствор натрия хлорида. Полученную бакмассу из расчета 3,7×109 м.к. на 10 мл добавляют к сыворотке, инкубируют при 37°С в течение 2 ч и центрифугируют в течение 30 минут при частоте вращения 5000 об/мин. Сыворотку отбирают и добавляют фенол до 0,3-0,4%. Титр сыворотки составляет 1:320-1:640.
Пример 3. Выполняют аналогично примеру 1 за исключением того, что готовят 2 мл взвеси штамма В. abortus 19ВА концентрацией 3,0×109 м.к./мл. Один миллилитр взвеси обеззараживают кипячением в течение 60 минут. Готовят 1 мл смеси (1:1) из взвеси, обеззараженной кипячением, и взвеси живой культуры В. abortus 19ВА, которую вводят внутривенно кролику массой 2,5-3,0 кг. Через 9 суток животных обескровливают, сыворотку отбирают и инактивируют при 60°С в течение 1 ч. Параллельно выращивают культуру гетерологичного вида В. melitensis 548 на матрацах в течение 72 ч. Бакмассу смывают 0,9% раствором натрия хлорида, центрифугируют в течение 30 минут при частоте вращения 5000 об/мин, осадок собирают и добавляют к нему 0,9% раствор натрия хлорида. Полученную бакмассу из расчета 3,7×109 м.к. на 10 мл добавляют к сыворотке, инкубируют при 37°С в течение 2 ч и центрифугируют в течение 30 минут при частоте вращения 5000 об/мин. Сыворотку отбирают и добавляют фенол до 0,3-0,4%. Титр сыворотки составляет 1:320-1:640.
Выбор штамма для иммунизации кроликов обеспечивает создание оптимальных условий биологической безопасности в ходе данной манипуляции. Выбор граничных значений заявляемых параметров предлагаемого способа обусловлен тем, что уменьшение концентраций иммунизирующего агента (В. abortus 19ВА) ниже 3,0×109 м.к./мл приводит к недостаточному образованию антител, что в конечном итоге снижает специфическую активность получаемой сыворотки, а увеличение иммунизирующей дозы выше 5,0×109 м.к./мл нецелесообразно, так как заявленные пределы концентраций используемого штамма обеспечивают достаточную степень иммунизации животных, в противном случае дальнейшее повышение иммунизирующих доз приведет к недифференцированному иммунологическому ответу.
Таким образом, изобретение практически осуществимо, его использование обеспечивает получение бруцеллезной моноспецифической сыворотки anti-abortus с существенно сниженным риском биологической опасности технологического цикла, чем по способу-прототипу, за счет использования на этапе иммунизации животных-продуцентов вместо вирулентного вакцинного штамма бруцелл В. abortus 19ВА. При этом сохраняется высокая специфическая активность и специфичность получаемой сыворотки.
Claims (1)
- Способ получения бруцеллезной моноспецифической сыворотки anti-abortus, включающий иммунизацию кроликов вакцинным штаммом бруцелл вида В. abortus разовой дозой внутривенно, обескровливание животных, инактивацию сыворотки, перекрестную абсорбцию сыворотки бактериальной массой гетерологичного вида бруцелл с последующей ее инкубацией при 37°С в течение 2 ч, концентрирование сыворотки путем центрифугирования и добавление фенола в качестве консерванта, отличающийся тем, что для иммунизации кроликов используют смесь (1:1) взвеси вакцинного штамма В. abortus 19 ВА концентрацией 3,0-5,0×109 м.к./мл, обеззараженной кипячением в течение 60 мин, и взвеси живой культуры того же штамма В. abortus 19 ВА концентрацией 3,0-5,0×109 м.к./мл в объеме 1 мл, после обескровливания животных сыворотку инактивируют при 60-65°С в течение 1-1,5 ч, для перекрестной абсорбции используют бакмассу штамма В. melitensis 548.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2008126559/13A RU2375074C1 (ru) | 2008-06-30 | 2008-06-30 | Способ получения бруцеллезной моноспецифической сыворотки anti-abortus |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2008126559/13A RU2375074C1 (ru) | 2008-06-30 | 2008-06-30 | Способ получения бруцеллезной моноспецифической сыворотки anti-abortus |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2375074C1 true RU2375074C1 (ru) | 2009-12-10 |
Family
ID=41489391
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2008126559/13A RU2375074C1 (ru) | 2008-06-30 | 2008-06-30 | Способ получения бруцеллезной моноспецифической сыворотки anti-abortus |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2375074C1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2639127C2 (ru) * | 2016-04-22 | 2017-12-19 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Всероссийский научно-исследовательский институт бруцеллеза и туберкулеза животных" (ФГБНУ ВНИИБТЖ) | Способ получения бруцеллёзной моноспецифической сыворотки anti-abortus |
-
2008
- 2008-06-30 RU RU2008126559/13A patent/RU2375074C1/ru not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| CORBEL M.I., GILL K.P., THOMAS E.L. Methods for the Identification of Brucella. Central veterinary Lab. New Haw., Weybrige, Sury * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2639127C2 (ru) * | 2016-04-22 | 2017-12-19 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Всероссийский научно-исследовательский институт бруцеллеза и туберкулеза животных" (ФГБНУ ВНИИБТЖ) | Способ получения бруцеллёзной моноспецифической сыворотки anti-abortus |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN110117576B (zh) | 一种鸭腺病毒3型病毒株及其卵黄抗体制备和应用 | |
| CN115141812B (zh) | 一株阿卡斑病毒疫苗株及其应用 | |
| Scott et al. | A biologic comparison of two strains of Herpesvirus hominis | |
| WO2011134163A1 (zh) | 一种h9n2亚型禽流感灭活疫苗的制备方法及产品 | |
| RU2375074C1 (ru) | Способ получения бруцеллезной моноспецифической сыворотки anti-abortus | |
| US3585266A (en) | Live rabies virus vaccine and method for the production thereof | |
| CN103160475B (zh) | 一种肠道病毒71型病毒株及其用途、疫苗和制备方法 | |
| RU2388489C1 (ru) | Способ изготовления вакцины ассоциированной против псевдомоноза и энтерококковой инфекции нутрий | |
| CN112143714B (zh) | 利用低免鸡胚生产h7亚型禽流感病毒灭活疫苗的方法 | |
| CN109439687B (zh) | 一种表达禽流感h9n2病毒ha蛋白的新城疫病毒载体疫苗株 | |
| CN103160474B (zh) | 肠道病毒71型病毒株、疫苗、动物模型建立方法 | |
| RU2539827C1 (ru) | Способ получения бруцеллезного l-антигена | |
| CN115960842B (zh) | 一种提高重组禽流感病毒感染鸡胚能力的方法 | |
| US3255080A (en) | Live rabies virus vaccine and method for the production thereof | |
| RU2316345C1 (ru) | Способ изготовления вакцины ассоциированной против колибактериоза, сальмонеллеза, стрептококкоза и энтерококковой инфекции нутрий | |
| RU2325437C1 (ru) | Аттенуированный штамм вируса оспы коз | |
| CN106085947B (zh) | Mdck克隆细胞株及其应用 | |
| RU2631925C2 (ru) | Штамм "Шевченко-2014" вируса геморрагической болезни кроликов для изготовления вакцинных, диагностических и лечебных препаратов | |
| Abdualiyeva et al. | Improving the Technology of obtaining an inactivated Antirabic vaccine from CVS-11 strain | |
| RU2405567C1 (ru) | Способ получения вакцины против пастереллеза животных | |
| CN102565390B (zh) | 鸡新城疫诊断用抗原制备方法 | |
| RU2606848C2 (ru) | Способ определения биологической активности вирусов кори, эпидемического паротита и краснухи при производстве ассоциированных препаратов (варианты) | |
| KR102568329B1 (ko) | 조류인플루엔자 뉴라미니다아제를 포함하는 바이러스-유사입자 및 이를 이용한 범용 백신 | |
| CN110862956B (zh) | 一种新城疫病毒/全悬浮chok1细胞株及其制法和采用该细胞株制备的抗原及疫苗 | |
| RU2404801C1 (ru) | Способ изготовления вакцины против колибактериоза кроликов |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20160701 |