RU2325437C1 - Аттенуированный штамм вируса оспы коз - Google Patents
Аттенуированный штамм вируса оспы коз Download PDFInfo
- Publication number
- RU2325437C1 RU2325437C1 RU2006133831/13A RU2006133831A RU2325437C1 RU 2325437 C1 RU2325437 C1 RU 2325437C1 RU 2006133831/13 A RU2006133831/13 A RU 2006133831/13A RU 2006133831 A RU2006133831 A RU 2006133831A RU 2325437 C1 RU2325437 C1 RU 2325437C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- virus
- strain
- goat
- tcd
- goats
- Prior art date
Links
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области ветеринарии, в частности к аттенуированным штаммам вируса оспы коз. Путем клонирования и адаптации к перевиваемой линии культур клеток почки овцы получен новый аттенуированный культуральный штамм вируса оспы коз. Изобретение может быть использовано для разработки и изготовления вакцины против оспы коз в научно-исследовательских учреждениях и на предприятиях биологической промышленности. 3 табл.
Description
Изобретение относится к области ветеринарии, в частности к аттенуированным штаммам вируса оспы коз (ВОК), и может быть использовано для разработки и изготовления вирусвакцины против оспы коз в научно-исследовательских учреждениях и на предприятиях биологической промышленности.
Согласно принятой классификации вирус оспы коз относится к семейству Poxviridae, род Capripoxvirus, вид Goatpox virus (Regenmortel M.H.V., Fauquet C.M., Bishop D.H.L. et al. Virus Taxonomy The Classification and Nomenclature of Viruses. The Seventh Report of the International Committee on Taxonomy of Viruses // Academic Press, San Diego, 1167 pp.).
В настоящее время в различных регионах мира аттенуированные или убитые штаммы вируса оспы коз используют для изготовления живых и инактивированных вакцин.
Так, в Китае аттенуированный штамм GT4-STV42 используют для получения культуральной вирусвакцины против оспы коз (ОК). Аттенуированный штамм GT4-STV42 не передавался горизонтально, не восстанавливал вирулентность после 5 серийных пассажей на козах (Wan g S., Jiang H., Lin X. et al. The pathomorphological studies on immunological effect of attenuated goat pox cellular virus. Acta veter. zootechn. sinica. 1988, 19, 2, 111-116).
В Российской Федерации известен гомогенат вирулентный штамм вируса оспы коз, который использовался Т.Я.Ванновским для разработки инактивированной «Гидроокисьалюминиевой формолглицериновой вакцины против оспы коз» (Осидзе Д.Ф. Ветеринарные препараты. М.: Колос, 1981). Недостатком данного штамма является низкая эффективность изготовленного на его основе препарата. Инактивированный препарат, полученный на основе вирулентного штамма оспы коз, создает нестойкий и короткий иммунитет (6 мес.), необходимость ревакцинации, использование больших объемов для иммунизации, сильную местную реакцию в месте введения вакцины, длительные сроки наступления иммунитета (21 сутки), имеет высокую себестоимость.
Использование аттенуированного штамма при конструировании живых вирусвакцин устраняет недостатки описанного выше инактивированного вирулентного штамма вируса оспы коз.
Аттенуированный штамм, используемый для производства живых вирусвакцин, обладает рядом преимуществ перед инактивированными препаратами, главными из которых являются: высокая напряженность и длительность создаваемого ими иммунитета при небольшой дозе вируса, слабая кратковременная общая и местная реакция, простота применения (однократная вакцинация), короткие сроки наступления иммунитета, низкая себестоимость препарата (Сергеев В.А. Вирусные вакцины// Киев: Урожай, 1993, - 368 с.).
Целью изобретения является получение нового аттенуированного культурального штамма вируса ОК, пригодного для разработки и изготовления вирусвакцины против оспы коз, индуцирующего напряженный иммунитет у привитых животных.
Поставленная цель достигается созданием путем клонирования и адаптации к перевиваемой линии культур клеток почки овцы (ПО - ВНИИВВиМ) и Vero авирулентного изолята вируса оспы коз, выделенного в Республике Таджикистан.
Полученный аттенуированный штамм вируса оспы коз обозначен как штамм «ОК/А-04» и депонирован в коллекции штаммов микроорганизмов ГНУ ВНИИВВиМ под инв. №2588 от 15.05.06.
Новый аттенуированный штамм обладает следующими свойствами:
Морфологические свойства: При электронно-микроскопическом исследовании в вируссодержащем материале обнаруживают вирусные частицы кирпичеобразной формы, размером 300-270-200 нм, морфологически тождественные представителям рода Capripoxvirus, сем. Poxviridae.
Культуральные свойства: Штамм размножается в перевиваемых культурах клеток ПО-ВНИИВВиМ и Vero с характерными для вируса оспы коз цитоплазматическими изменениями с последующей деструкцией монослоя. Вирус в указанных культурах клеток накапливается в титрах 5,5-6,0 lg ТЦД50/см3.
Способ выращивания: Штамм культивируют в монослое перевиваемых линий культур клеток ПО и Vero в стационарных и роллерных культурах. При оптимальных условиях максимальное накопление вируса достигается через 5-6 суток культивирования. В качестве поддерживающей среды используют среду Игла-МЭМ с 2% сыворотки КРС.
Антигенные свойства: При подкожном введении козам штамм вызывает образование вируснейтрализующих антител.
Патогенность для человека: Не патогенен.
Вирулентность для восприимчивых животных: Штамм безвреден для коз и овец при подкожном введении в дозе 104,5 (100 прививных доз) ТЦД50.
Безвредность для лабораторных животных: Для лабораторных животных (кроликов, морских свинок, мышей) не является патогенным.
Контагиозность и реверсибельность: Штамм не передается при совместном содержании от привитых неиммунным козам. Не восстанавливает вирулентные свойства после трех последовательных пассажей на козах.
Реактогенность: Штамм слабореактогенен для коз при подкожном введении. У некоторых привитых коз в дозе 102,5-103,0 ТЦД50 может вызывать в течение 2-4 суток повышение температуры тела до 40,5-40,9°С.
Иммуногенные свойства: Штамм ОК/А-04 при подкожном введении в дозе 102,5-103,0 ТЦД50 создает у привитых коз иммунитет на 14 день после прививки.
Контаминация бактериями, грибами, микоплазмами и посторонними вирусами: Лиофилизированный штамм не контаминирован бактериями, грибами, микоплазмами и посторонними вирусами.
Стабильность генетических и иммунобиологических признаков: Основные биологические свойства штамма стабильно сохраняются на протяжении 20 пассажей культивирования в перевиваемой культуре клеток ПО - ВНИИВВиМ (срок наблюдения).
Способ и срок хранения, периодичность пассажей: Штамм хранят в лиофилизированном состоянии при температуре минус 40°С и «освежают» пассированием в культуре клеток ПО-ВНИИВВиМ один раз в пять лет.
Пример 1. Культивирование штамма «ОК/А-04» вируса оспы коз в перевиваемой культуре клеток ПО-ВНИИВВиМ роллерным методом.
Получение культурального штамма роллерным методом осуществляют при следующих режимах культивирования:
- множественность заражения 0,01-0,05 ТЦД50/кл;
- содержание сыворотки КРС в поддерживающей среде Игла-МЭМ 2%;
- скорость вращения роллерных бутылей 12-16 об/час;
- рН среды 7,0-7,4;
- срок смены поддерживающей среды при культивировании 3 суток;
- длительность культивирования 5-7 суток;
- температурный режим 37,0±0,5°С;
- объем заполнения роллерных трехлитровых бутылей 0,3-0,5 литра.
Данные режимы культивирования позволяют получать вируссодержащий материал с активностью 5,5-6,0 lg ТЦД 50/см3.
Результаты наработки трех опытных серий вируссодержащего материала на основе штамма «ОК/А-04» вируса оспы коз в культуре клеток ПО-ВНИИВВиМ представлены в табл.1.
| Таблица 1 Характеристика вируссодержащего сырья, полученного роллерным методом |
|||||
| Номер серии | Количество роллеров | Заражающая доза (ТЦД50/кл) | Сроки культивир. (сутки) | Объем серии (л) | Активность серии (lg ТЦД50/см3) |
| 1 | 8 | 0,05 | 6 | 2,4 | 6,0 |
| 2 | 8 | 0,05 | 5 | 2,4 | 5,5 |
| 3 | 8 | 0,01 | 5 | 2,4 | 6,0 |
Как видно из таблицы, активность трех серий вирусного сырья составляла 5,5-6,0 lg ТЦД50/см3.
Пример 2. Сохраняемость лиофилизированного штамма «ОК/А-04» ВОК при различных температурных режимах.
Сохраняемость вакцинного штамма «ОК/А-04» ВОК трех лиофилизированых образцов культурального вируса после высушивания составляет 5,0-5,5 lg ТЦД50/см3.
Результаты инфекционной активности трех серий лиофилизированного штамма «ОК/А-04» вируса оспы коз в процессе хранения при различных температурах приведены в табл.2.
| Таблица 2 Сохраняемость лиофилизированного штамма «ОК/А-04» ВОК |
||||||
| Серия мат-ла | Активность лиофил. штамма (lg ТЦД 50/см3) | Темпер. хранения (°С) | Инфекционная активность при хранении (lg ТЦД50/см3) | |||
| 3 мес. | 6 мес. | 12 мес. | 24 мес. | |||
| 1 | 5,0 | 2±2 | 5,0 | 5,0 | 4,75 | 5,0 |
| -40±1 | 5,0 | 5,0 | 5,0 | 5,0 | ||
| 2 | 5,0 | 2±2 | 5,0 | 5,0 | 5,0 | 5,0 |
| -40±1 | 5,0 | 5,0 | 5,0 | 5,0 | ||
| 3 | 5,5 | 2±2 | 5,5 | 5,5 | 5,5 | 5,5 |
| -40±1 | 5,5 | 5,75 | 5,5 | 5,5 | ||
| 18±1 | н/и | 5,0 | 4,25 | 3,25 | ||
| Примечание: н/и - не исследовали | ||||||
Как видно из табл.2, лиофилизированный штамм «ОК/А-04» вируса ОК сохранял исходную активность в течение 24 месяцев хранения при температуре 2±2 и - 40±0,5°С.
Сохраняемость одной серии (№3) лиофилизированного штамма проверена при 18±1°С. В течение 12 месяцев хранения при этой температуре активность штамма снизилась на 1,25 lg ТЦД50/см3, а через 24 месяца на 2,25 lg ТЦД50/см3.
Эти данные указывают на хорошую сохраняемость данного штамма после лиофилизации, параметры которой сходны с таковыми у вируса оспы овец и другими вирусами оспы животных.
Пример 3. Проверка реверсибельности штамма «ОК/А-04» вируса оспы коз.
С этой целью проводят 3 пассажа штамма «ОК/А-04» на восприимчивых животных. При проведении первого пассажа культуральный вирус вводили козе 6-месячного возраста в дозе 3,5 lg ИД50 (10 прививных доз) подкожно в подмышечную область. На 6 сутки козу убивали, у нее отбирали бронхиальные и предлопаточные лимфоузлы, из которых готовили 10% суспензию на физиологическом растворе. Полученный материал дважды промораживали при -70°С и после осветления (1500 об/мин в течение 15 минут) вводили следующему животному аналогичным образом в объеме 1,0 см3 (второй пассаж). Аналогично проводят третий пассаж.
У опытных животных отсутствует клиническая реакция на прививку, а также реакция на месте введения вируса. Коза 3-го пассажа не заболела оспой в течение 21 суток после введения материала (срок наблюдения). Это указывало на стабильность биологических свойств у штамма «ОК/А-04» в течение трех пассажей в опыте на естественно восприимчивых животных.
Реверсибельность проверена с вирусом, прошедшим 20 пассажей в перевиваемой культуре клеток ПО-ВНИИВВиМ. Культуральный штамм с активностью 4,5 lg ТЦД50/см3 вводили подкожно 2 козам в объеме 1,0 см3. Клиническая реакция на введение вируса у животных отсутствует.
Это указывает на то, что штамм «ОК/А-04» вируса OK - нереверсибелен.
Пример 4. Проверка иммунобиологических свойств штамма «ОК/А-04» вируса ОК.
При проверке иммуногенности штамма в соответствии с рекомендациями МЭБ за одну прививную дозу принимали 102,5 ТЦД50 вируса.
Безвредность штамма проверяют на козах и овцах 7-9-месячного возраста. Штамм вводят подкожно в бесшерстный участок подмышечной области. Двух коз и овцу прививали вирусом в дозе 104,5 ТЦД50 (100 прививных доз), одну козу в дозе 103,5 ТЦД50 (10 прививных доз). В течение 15 суток иммунизированные козы и овца оставались клинически здоровыми. У привитых коз на 7-9 сутки отмечали повышение температуры тела до 40,6-40,7°С в течение 2-3 суток. Вакцинированная овца оставалась клинически здоровой в течение всего срока наблюдения.
Иммуногенность штамма определяют по результатам контрольного заражения привитых коз вирулентным штаммом «Дангаринский» вируса оспы коз в дозе 1000 ИД50. С этой целью двух коз вакцинируют вирусом в дозе 102,5 ТЦД50 (1 прививная доза). У одной козы температурная реакция отсутствует, у второй на 7-8 сутки отмечают повышение температуры тела до 40,5°С.
Через 14 суток опытных животных и одну контрольную козу заражают штаммом «Дангаринский» в дозе 1000 ИД50. Вирус вводят внутрикожно в подхвостовую складку в объеме 0,5 см3. Вместе с этими животными заражены козы и овца, используемые в опыте по определению безвредности штамма. Результаты этих опытов представлены в табл.3.
Иммунизированные животные не реагировали на заражение вирулентным вирусом (срок наблюдения 30 суток), в то время как контрольная коза переболела оспой с характерными клиническими признаками, длительность температурной реакции составляла 6 суток, температура тела достигала 41,7°С.
| Таблица 3 Иммуногенные свойства штамма «ОК/А-04» ВОК |
|||||
| Прививная доза (ТЦД50) | Номер и вид животных | Реакция на прививку | Результаты контрольного заражения | ||
| Темпер. реакция (сут) | Максим. темпер. (°С) | Темпер. реакция (сут) | Максим. темп. (°С) | ||
| 104,5 | №1 коза | 5 | 40,7 | - | 39,7 |
| №2 коза | 2 | 40,6 | - | 39,8 | |
| №3 овца | - | 39,7 | - | 39,6 | |
| 103,5 | №4 коза | 3 | 40,6 | - | 39,4 |
| 102,5 | №5 коза | 2 | 40,5 | - | 39,1 |
| №6 коза | - | 39,4 | - | 39,6 | |
| контроль | №7 коза | - | - | 6 | 41,7 |
Эти данные показывают, что аттенуированный штамм «ОК/А-04» ВОК создает через 14 суток у привитых в дозе 102,5 ТЦД50 коз иммунитет против вирулентного штамма «Дангаринский» вируса оспы коз и безвреден для коз и овец, привитых в дозе 104,5 ТЦД50.
На основании этого штамма изготовлена экспериментальная серия вирусвакцины в количестве 82,5 тыс. доз, которая проверена во внутриинститутских комиссионных испытаниях.
Показано, что вирусвакцина безвредна для коз и овец при введении им 10 и 100 прививных доз препарата. На 14 сутки после иммунизации одной (102,5 ТЦД50) и 0,1 (101,5 ТЦД50) прививной дозы вакцина защищала коз от заражения вирулентным вирусом.
Claims (1)
- Аттенуированный штамм вируса оспы коз, семейство Variola coprina virus, коллекция штаммов микроорганизмов ВНИИВВиМ №2588 от 15.05.06, для разработки и изготовления вакцинных препаратов.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2006133831/13A RU2325437C1 (ru) | 2006-09-22 | 2006-09-22 | Аттенуированный штамм вируса оспы коз |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2006133831/13A RU2325437C1 (ru) | 2006-09-22 | 2006-09-22 | Аттенуированный штамм вируса оспы коз |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2325437C1 true RU2325437C1 (ru) | 2008-05-27 |
Family
ID=39586597
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2006133831/13A RU2325437C1 (ru) | 2006-09-22 | 2006-09-22 | Аттенуированный штамм вируса оспы коз |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2325437C1 (ru) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104758928A (zh) * | 2015-01-21 | 2015-07-08 | 中国农业科学院兰州兽医研究所 | 一种山羊痘、羊口疮二联细胞弱毒疫苗及其制备方法和用途 |
| CN104958760A (zh) * | 2015-03-27 | 2015-10-07 | 中牧实业股份有限公司 | 一种山羊痘灭活疫苗及其制备方法 |
-
2006
- 2006-09-22 RU RU2006133831/13A patent/RU2325437C1/ru not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| HOSAMANI M, SINGH S.K., MONDAL В., SEN A. A bivalent vaccine against goat pox and Peste des Petits ruminants induces protective immune response in goats. Vaccine. 2006 Aug 28; 24(35-36):6058-64. Epub 2006 Jun 5. BHANUPRAKASH V, INDRANI B.K., HEGDE R, KUMAR M.M., MOORTHY A.R. A classical live attenuated vaccine for sheep pox. Trop. Anim. Health Prod. 2004 May; 36(4):307-20. HOSAMANI M., NANDI S., MONDAL B., SINGH R.K., RASOOL T.J., BANDYOPADHYAY S.K. A Vero cell-attenuated Goatpox virus provides protection against virulent virus challenge.Acta. Virol. 2004; 48(1):15-21. * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104758928A (zh) * | 2015-01-21 | 2015-07-08 | 中国农业科学院兰州兽医研究所 | 一种山羊痘、羊口疮二联细胞弱毒疫苗及其制备方法和用途 |
| CN104758928B (zh) * | 2015-01-21 | 2017-09-22 | 中国农业科学院兰州兽医研究所 | 一种山羊痘、羊口疮二联细胞弱毒疫苗及其制备方法和用途 |
| CN104958760A (zh) * | 2015-03-27 | 2015-10-07 | 中牧实业股份有限公司 | 一种山羊痘灭活疫苗及其制备方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR100286573B1 (ko) | 불활성화 미코플라스마 히오뉴모니에 박테린 및 그의 이용방법 | |
| CN106399260B (zh) | 一种犬瘟热、细小病毒病二联活疫苗及其制备方法 | |
| CN103497934B (zh) | 鸡传染性支气管炎病毒疫苗株（hf2株）及其应用 | |
| US20200237897A1 (en) | Recombinant Bivalent Inactivated Vaccine Against Foot-and-Mouth Disease Virus, Preparation Method and Use Thereof | |
| RU2325437C1 (ru) | Аттенуированный штамм вируса оспы коз | |
| CN106834168B (zh) | 一种猪链球菌2型弱毒株及其应用 | |
| CN109022373A (zh) | 鸭瘟病毒ul56基因3’端缺失和lorf5基因缺失突变株及其构建方法与应用 | |
| CN104096222B (zh) | 一种疫苗组合物及其制备方法和应用 | |
| CN103784951B (zh) | 预防和治疗猪的继发感染的呼吸系统疾病的抗原组合物及其制备方法和应用 | |
| CN113073083A (zh) | 犬细小病毒弱毒株、及其制备的疫苗组合物和应用 | |
| CN101795706B (zh) | 副百日咳杆菌全菌体疫苗组合物 | |
| CN103656634B (zh) | 抗猪圆环病毒和猪传染性胸膜肺炎感染疫苗组合物及制备 | |
| CN108939060B (zh) | 一种中华鳖细菌性腮腺炎口服疫苗 | |
| RU2220744C1 (ru) | Вакцина против ящура типа азия-1 и способ ее изготовления | |
| AU2005253864B2 (en) | Q fever vaccine preparation and method of producing the vaccine | |
| KR101210082B1 (ko) | 돼지 다발성 장막염 예방용 백신 조성물 및 그 제조방법 | |
| CN111909965A (zh) | 一种表达传染性法氏囊病病毒vp2蛋白重组病毒载体的构建与应用 | |
| Peshev et al. | The efficacy of a bivalent vaccine against pasteurellosis and rabbit haemorrhagic disease virus | |
| RU2129443C1 (ru) | Живая вакцина "кс" против классической чумы свиней и способ профилактики классической чумы свиней | |
| CN110004100A (zh) | 一株重组o型口蹄疫病毒vp1基因的粗糙型布鲁氏菌及其疫苗生产方法 | |
| RU2801949C1 (ru) | Штамм "СК" вируса классической чумы свиней Pestivirus для изготовления биопрепаратов для специфической профилактики классической чумы свиней | |
| RU2463073C1 (ru) | Вакцина против трансмиссивного гастроэнтерита свиней и способ ее применения | |
| RU2396977C1 (ru) | Вирус-вакцина против оспы коз культуральная сухая | |
| CN111467488B (zh) | 一种水溶性复合免疫佐剂及其应用 | |
| CN106520636B (zh) | 一种猪支气管波氏杆菌菌株 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20080923 |
|
| NF4A | Reinstatement of patent |
Effective date: 20100610 |
|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20150923 |