RU2361916C1 - Способ культивирования возбудителя туляремии - Google Patents
Способ культивирования возбудителя туляремии Download PDFInfo
- Publication number
- RU2361916C1 RU2361916C1 RU2007140641/13A RU2007140641A RU2361916C1 RU 2361916 C1 RU2361916 C1 RU 2361916C1 RU 2007140641/13 A RU2007140641/13 A RU 2007140641/13A RU 2007140641 A RU2007140641 A RU 2007140641A RU 2361916 C1 RU2361916 C1 RU 2361916C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- liquid nutrient
- tularensis
- phase
- cultivation
- carried out
- Prior art date
Links
Landscapes
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано для бактериологической диагностики туляремии. Способ предусматривает следующее. На стерильный перфтордеколин, представляющий собой нижнюю фазу, наслаивают жидкую питательную среду, содержащую L-аргинин, L-цистеин, L-гистидин, L-изолейцин, DL-метионин, DL-лейцин, L-лизин, L-пролин, DL-треонин, L-тирозин, L-валин, L-аспарагиновую кислоту, L-серин, глюкозу, хлорид натрия, сульфат магния, тиамин, пантотенат кальция, натрий фосфорнокислый двузамещенный, калий фосфорнокислый однозамещенный, дистиллированную воду при соотношении фаз 1:1. Засевают F. tularensis на границе фаз и культивируют. Культивирование F. tularensis в жидкой двухфазной питательной среде осуществляют в статических условиях в течение 120 ч при температуре 37°С. Изобретение позволяет повысить выход клеток микроорганизма. 1 табл.
Description
Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано для бактериологической диагностики туляремии.
Известен способ культивирования возбудителя туляремии в жидкой питательной среде М.С.Дрожевкиной на основе куриных желтков и стерильного физиологического раствора (Туляремия / Под ред. Н.Г.Олсуфьева. - М.: Медгиз, 1960. - 462 с.).
К недостаткам данного способа следует отнести разрушение компонентов питательной среды при стерилизации и продолжительность размножения в среде возбудителя туляремии до 10 суток.
Наиболее близким является способ культивирования F. tularensis в жидкой питательной среде в колбах в статических условиях в течение 120 ч при температуре 37°С. Используют жидкую питательную среду следующего состава, г/л:
L-аргинин - 0,2;
L-цистеин - 1,5;
L-гистидин - 2,0;
L-изолейцин - 0,3;
DL-метионин - 1,0;
DL-лейцин - 0,4;
L-лизин - 0,4;
L-пролин - 1,0;
DL-треонин - 4,0;
L-тирозин - 0,2;
L-валин - 0,8;
глюкоза - 15,0;
хлорид натрия - 5,0;
сульфат магния - 0,04;
тиамин - 0,02;
пантотенат кальция - 0,05;
натрий фосфорнокислый двузамещенный - 1,8;
калий фосфорнокислый однозамещенный - 2,8;
L-аспарагиновая кислота - 0,2;
L-серин - 0,2;
дистиллированная вода - до 1 л
(Майский В.Г., Шишов И.Н., Басилова Г.И. Питательные потребности Francisella tularensis // Ж. микробиол. - 1984. - №6. - С.20-23).
В известном способе видимый рост возбудителя туляремии появляется через 48 ч после инокуляции посевного материала в жидкую питательную среду.
Общим с заявляемым решением является близкое содержание компонентов жидкой питательной среды и культивирование в статических условиях.
К недостаткам данного способа следует отнести недостаточно высокий рост возбудителя туляремии и большое количество посевного материала.
Задачей предлагаемого изобретения является разработка способа культивирования возбудителя туляремии, позволяющего увеличить выход клеток данного микроорганизма при незначительном количестве посевного материала.
Поставленная задача решается путем культивирования F. tularensis в жидкой питательной среде в статических условиях в течение 120 ч при температуре 37°С. Культивирование осуществляют в жидкой питательной двухфазной среде, нижнюю фазу которой представляет собой перфтордекалин (ПФД) - газопереносящая подложка, а верхнюю фазу - жидкая питательная среда следующего состава, г/л:
L-аргинин - 0,2;
L-цистеин - 1,5;
L-гистидин - 2,0;
L-изолейцин - 0,3;
DL-метионин - 1,0;
DL-лейцин - 0,4;
L-лизин - 0,4;
L-пролин - 1,0;
DL-треонин - 4,0;
L-тирозин - 0,2;
L-валин - 0,8;
L-аспарагиновая кислота - 0,2;
L-серин - 0,2;
глюкоза - 15,0;
хлорид натрия - 5,0;
сульфат магния - 0,04;
тиамин - 0,02;
пантотенат кальция - 0,05;
натрий фосфорнокислый двузамещенный - 1,8;
калий фосфорнокислый однозамещенный - 2,8;
дистиллированная вода - до 1 л при соотношении фаз 1:1.
Посев возбудителя туляремии осуществляют на границе раздела фаз жидкой питательной двухфазной среды.
ПФД относится к перфторуглеродам, которые представляют собой фторированные углеводороды, в которых атомы водорода полностью замещены атомами фтора.
ПФД представляет собой химически инертную, гидрофобную жидкость в два раза тяжелее воды, способную растворять в себе большие количества кислорода (51 об.%) и углекислого газа (193 об.%) и легко освобождать эти газы при изменении их содержания в окружающей среде.
Сущность технического решения поясняется следующим.
Предложенный способ за счет улучшения газообмена стимулирует рост возбудителя туляремии, в результате чего выход клеток F. tularensis увеличивается более чем в два раза.
ПФД эффективно поддерживает газообмен в живых системах и биологических объектах. При соединении жидкой среды с ПФД в пробирке формируется двухфазная система, в силу своего большого веса ПФД располагается под средой, не смешиваясь с ней, а на границе раздела фаз создаются оптимальные условия для размножения микроорганизмов за счет улучшенного газообмена и абсорбции питательных веществ на поверхности ПФД. Присутствие в системе культивирования подложки из ПФД с высокой газовой емкостью, прежде всего, дает возможность улучшить аэрацию растущей культуры.
Способ осуществляется следующим образом.
Стерильный ПФД помещают в пробирку в количестве 3 мл, на него наслаивают 3 мл жидкой питательной среды. Таким образом, формируется система, нижнюю фазу которой составляет более тяжелый ПФД, а верхнюю - питательная среда. Посев возбудителя туляремии осуществляют на границе раздела фаз. Культивирование проводят в статических условиях в течение 120 ч при температуре 37°С.
Пример 1. Культивирование F. tularensis Schu осуществляют на среде следующего состава, г/л:
L-аргинин - 0,2;
L-цистеин - 1,5;
L-гистидин - 2,0;
L-изолейцин - 0,3;
DL-метионин - 1,0;
DL-лейцин - 0,4;
L-лизин - 0,4;
L-пролин - 1,0;
DL-треонин - 4,0;
L-тирозин - 0,2;
L-валин - 0,8;
L-аспарагиновая кислота - 0,2;
L-серин - 0,2;
глюкоза - 15,0;
хлорид натрия - 5,0;
сульфат магния - 0,04;
тиамин - 0,02;
пантотенат кальция - 0,05;
натрий фосфорнокислый двузамещенный - 1,8;
калий фосфорнокислый однозамещенный - 2,8;
дистиллированная вода - до 1 л.
В пробирки вносят 3 мл данной среды и добавляют культуру F. tularensis Schu из расчета 1×107 КОЕ/мл (КОЕ - колониеобразующая единица).
Культивирование проводят в статических условиях в течение 120 ч при температуре 37°С. Контроль за ростом культуры осуществляли макрокультуральным методом на плотной питательной среде того же состава. Пробы материала для подсчета количества клеток F. tularensis Schu брали каждые 24 ч после посева.
Предлагаемый способ позволяет получить 8,8×109 КОЕ/мл на 120 ч роста.
Пример 2. Культивирование F. tularensis Schu осуществляют в жидкой питательной двухфазной среде, нижнюю фазу которой представляет собой перфтордекалин - газопереносящая подложка, а верхнюю фазу - жидкая питательная среда следующего состава, г/л:
L-аргинин - 0,2;
L-цистеин - 1,5;
L-гистидин - 2,0;
L-изолейцин - 0,3;
DL-метионин - 1,0;
DL-лейцин - 0,4;
L-лизин - 0,4;
L-пролин - 1,0;
DL-треонин - 4,0;
L-тирозин - 0,2;
L-валин - 0,8;
глюкоза - 15,0;
хлорид натрия - 5,0;
сульфат магния - 0,04;
тиамин - 0,02;
пантотенат кальция - 0,05;
натрий фосфорнокислый двузамещенный - 1,8;
калий фосфорнокислый однозамещенный - 2,8;
L-аспарагиновая кислота - 0,2;
L-серин - 0,2;
дистиллированная вода - до 1 л,
при соотношении фаз 1:1.
Культивирование F. tularensis Schu осуществляют следующим образом.
Стерильный ПФД помещают в пробирку в количестве 3 мл, на него наслаивают 3 мл жидкой питательной среды. Таким образом, формируется система, нижнюю фазу которой составляет более тяжелый ПФД, а верхнюю - питательная среда. Посев возбудителя туляремии осуществляют на границе раздела фаз. Культивирование проводят в статических условиях в течение 120 ч при температуре 37°С. Контроль за ростом культуры осуществляли макрокультуральным методом на плотной питательной среде того же состава, но без добавления ПФД.
Предлагаемый способ позволяет получить 17,4×109 КОЕ/мл на 72 ч роста, что в 2 раза превышает количество клеток, полученное в примере 1 на 120 ч роста.
Пример 3. Культивирование F. tularensis Schu осуществляют по технологии, описанной в примере 1, но добавляют культуру F. tularensis Schu из расчета 1×105 КОЕ/мл.
Предлагаемый способ позволяет получить 8,3×109 КОЕ/мл на 120 ч роста.
Пример 4. Культивирование F. tularensis Schu осуществляют по технологии, описанной в примере 2, но добавляют культуру F. tularensis Schu из расчета 1×105 КОЕ/мл.
Предлагаемый способ позволяет получить 17,1×109 КОЕ/мл на 120 ч роста. Данное количество клеток соответствует максимальному количеству клеток, полученному в примере 2, что показывает возможность использования при культивировании F. tularensis небольшого количества посевного материала.
Пример 5. Культивирование F. tularensis 15 НИИЭГ осуществляют по технологии, описанной в примере 1.
Предлагаемый способ позволяет получить 4,3×109 КОЕ/мл на 120 ч роста.
Пример 6. Культивирование F. tularensis 15 НИИЭГ осуществляют по технологии, описанной в примере 2.
Предлагаемый способ позволяет получить 10,3×109 КОЕ/мл на 72 ч роста, что в 2,4 раза превышает количество клеток, полученное в примере 5 на 120 ч роста.
Пример 7. Культивирование F. tularensis 15 НИИЭГ осуществляют по технологии, описанной в примере 3, при этом отмечается отсутствие видимого роста даже на 120 ч роста.
Предлагаемый способ позволяет получить 2,1×107 КОЕ/мл на 120 ч роста.
Пример 8. Культивирование F. tularensis 15 НИИЭГ осуществляют по технологии, описанной в примере 4.
Предлагаемый способ позволяет получить 10,2×109 КОЕ/мл на 120 ч роста.
Данное количество клеток соответствует максимальному количеству клеток, полученному в примере 6, что показывает возможность использования при культивировании F. tularensis небольшого количества посевного материала.
Сводные данные по абсолютному количеству клеток F. tularensis в описанных выше примерах представлены в таблице.
Из таблицы следует, что максимальное количество клеток F. tularensis в двухфазной среде достигало на 72 ч роста и превышало таковое в обычной среде в 2,0-2,4 раза при количестве посевного материала 1×107 КОЕ/мл, а при количестве посевного материала 1×105 КОЕ/мл максимальное количество клеток F. tularensis в двухфазной среде достигало на 120 ч.
Таким образом, способ культивирования F. tularensis в жидкой питательной двухфазной среде в статических условиях обеспечивает увеличение скорости роста и количества клеток, т.е. способствует повышению эффективности культивирования, при этом достигается хорошая воспроизводимость результатов при культивировании возбудителя туляремии различных подвидов. Данный способ можно использовать при выделении F. tularensis из органов больных и иммунизированных животных с малой обсемененностью.
Claims (1)
- Способ культивирования F. tularensis в жидкой питательной среде в статических условиях в течение 120 ч при температуре 37°С, отличающийся тем, что культивирование осуществляют в жидкой питательной двухфазной среде, нижнюю фазу которой представляет собой перфтордекалин - газопереносящая подложка, а верхнюю фазу - жидкая питательная среда следующего состава, г/л:
L-аргинин 0,2 L-цистеин 1,5 L-гистидин 2,0 L-изолейцин 0,3 DL-метионин 1,0 DL-лейцин 0,4 L-лизин 0,4 L-пролин 1,0 DL-треонин 4,0 L-тирозин 0,2 L-валин 0,8 глюкоза 15,0 хлорид натрия 5,0 сульфат магния 0,04 тиамин 0,02 пантотенат кальция 0,05 натрий фосфорно-кислый двузамещенный 1,8 калий фосфорно-кислый однозамещенный 2,8 L-аспарагиновая кислота 0,2 L-серин 0,2 дистиллированная вода до 1 л
при соотношении фаз 1:1, причем посев возбудителя туляремии осуществляют на границе раздела фаз жидкой питательной двухфазной среды.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2007140641/13A RU2361916C1 (ru) | 2007-11-01 | 2007-11-01 | Способ культивирования возбудителя туляремии |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2007140641/13A RU2361916C1 (ru) | 2007-11-01 | 2007-11-01 | Способ культивирования возбудителя туляремии |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2007140641A RU2007140641A (ru) | 2009-05-10 |
| RU2361916C1 true RU2361916C1 (ru) | 2009-07-20 |
Family
ID=41019598
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2007140641/13A RU2361916C1 (ru) | 2007-11-01 | 2007-11-01 | Способ культивирования возбудителя туляремии |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2361916C1 (ru) |
-
2007
- 2007-11-01 RU RU2007140641/13A patent/RU2361916C1/ru not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| МАЙСКИЙ В.Г., ШИШОВ И.Н., БАСИЛОВА Г.И. Питательные потребности Francisella tularensis, Микробиология, 1984, №6, с.20-23. * |
| ПОЗДНЕЕВ O.K. Медицинская микробиология. - М.: ГЭОТАР-МЕД, 2001, с.392-394. Под ред. М.О. БИРГЕРА. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования. - М.: Медицина, 1982, с.287-291. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2007140641A (ru) | 2009-05-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Herriott et al. | Defined medium for growth of Haemophilus influenzae | |
| AU2004231739B2 (en) | Methods of producing carbon-13 labeled biomass | |
| Rouf et al. | An overview of microbial cell culture | |
| CN107094752A (zh) | 一种肿瘤组织体外保存液及其制备方法 | |
| TW201210465A (en) | Production method of liquid seeds for mushroom | |
| RU2361916C1 (ru) | Способ культивирования возбудителя туляремии | |
| CN114831107B (zh) | 一种细胞和组织低温保存液及其配制方法、应用 | |
| CN1118563C (zh) | 中空纤维模拟骨髓造血装置 | |
| CN107254446A (zh) | 一种人原代肿瘤细胞的分离制备方法 | |
| CN117397621A (zh) | 一种提高无菌丰年虫孵化率的孵化方法及其应用 | |
| JPH10113095A (ja) | ミジンコの培養方法 | |
| CN103141425A (zh) | 无菌斑马鱼的生产方法 | |
| CN1162549C (zh) | 结核菌双相快速培养基及其制备方法 | |
| RU2238973C1 (ru) | Питательная среда (жидкая) для культивирования бруцелл | |
| RU2255974C1 (ru) | Способ культивирования микобактерий туберкулеза | |
| RU2757428C1 (ru) | Питательная среда жидкая для глубинного выращивания вакцинного штамма чумного микроба y. pestis ev | |
| CN115449485B (zh) | 一种养殖海水小球藻的方法 | |
| RU2242511C2 (ru) | Питательная среда для выделения и культивирования l-форм микобактерий туберкулеза | |
| RU2725733C1 (ru) | Транспортная жидкая питательная среда для сохранения жизнеспособности бруцеллезного микроба | |
| RU2412991C2 (ru) | Питательная двухфазная среда для культивирования микроорганизмов | |
| RU2344169C1 (ru) | Среда для сохранения жизнеспособности клинических изолятов патогенной treponema pallidum | |
| RU2681116C2 (ru) | Питательная среда плотная для хранения микроба чумы | |
| Işık et al. | Microalgae Culture | |
| RU2232194C1 (ru) | Способ приготовления питательной среды для культивирования и количественного учета листерий (listeria monocytogenes) в объектах внешней среды | |
| RU2381269C1 (ru) | ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА И СЕЛЕКТИВНАЯ ДОБАВКА ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ И КУЛЬТИВИРОВАНИЯ Trichomonas vaginalis |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20101102 |