RU2232194C1 - Способ приготовления питательной среды для культивирования и количественного учета листерий (listeria monocytogenes) в объектах внешней среды - Google Patents
Способ приготовления питательной среды для культивирования и количественного учета листерий (listeria monocytogenes) в объектах внешней среды Download PDFInfo
- Publication number
- RU2232194C1 RU2232194C1 RU2003100580/13A RU2003100580A RU2232194C1 RU 2232194 C1 RU2232194 C1 RU 2232194C1 RU 2003100580/13 A RU2003100580/13 A RU 2003100580/13A RU 2003100580 A RU2003100580 A RU 2003100580A RU 2232194 C1 RU2232194 C1 RU 2232194C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- listeria
- phosphate buffer
- nutrient medium
- medium
- preparing
- Prior art date
Links
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для приготовления питательной среды при санитарно-гигиеническом контроле за инфицированностью листериями (Listeria monocytogenes) почв, растений и продуктов питания. Готовят питательную основу из силоса кукурузного, фосфатного буфера с рН 7,4 и агара в количестве 10-15 г. Кукурузный силос настаивают в фосфатном буфере с рН 7,4 в течение 10-12 ч при комнатной температуре при следующем соотношении компонентов, г/л: силос кукурузный 50-150, фосфатный буфер с рН 7,4 остальное. Полученный настой фильтруют, дважды по 20-30 мин стерилизуют текучим паром, охлаждают и добавляют к агару до 1 л. Изобретение обеспечивает повышение диагностической эффективности среды, упрощение технологии ее приготовления и удешевление среды. 1 табл.
Description
Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано в качестве питательной среды при санитарно-гигиеническом контроле за инфицированностью Listeria monocytogenes почв, растений и продуктов питания.
Известен способ приготовления питательной среды для культивирования иерсиний на основе растительных продуктов (Актуальные вопросы разработки препаратов медицинской биотехнологии. Тех. Конф. 4.1. Махачкала, с.108-109). При изготовлении питательной среды в качестве продуктов растительного продукта используют гидролизат белка пшеничных отрубей.
Недостатками этой среды является неадаптированность к росту внеорганизменных популяций бактерий и смывов с овощей, хотя в качестве питательной основы здесь используют продукт растительного происхождения - отруби пшеничные, однако их применяют в виде гидролизата и в сочетании с продуктами животного происхождения - автолизата селезенки. В результате этого среда является трудоемкой, дорогостоящей и не приспособленной для роста внеорганизменных популяций бактерий, так как длительно существующие в окружающей среде бактерии могут подвергаться изменчивости, плохо формировать колонии на средах, содержащих продукты животного происхождения.
Наиболее близкой к заявляемому техническому решению является способ приготовления питательной среды для культивирования и количественного учета иерсиний и листерий в объектах внешней среды (Патент RU №2161655, МКИ С 27 С 1/04, С 12 N 1/20 от 10.11.1998; Бузолева Л.С., Сомов Г.П.). Питательная среду готовят из отваров отрубей ржаных, капусты и моркови, а также соли фосфатного буфера.
Недостатком этой среды является трудоемкость ее приготовления и многокомпонентность.
При создании изобретения - способа приготовления питательной среды для культивирования и количественного учета листерий в объектах внешней среды ставилась задача: повышение диагностической эффективности питательной среды для более полного выявления внеорганизменных популяций бактерий, упрощение технологии ее приготовления, удешевление среды и расширение сырьевой базы.
Задача решается за счет того, что для приготовления питательной среды для культивирования и количественного учета листерий в объектах внешней среды используют питательную основу из продукта растительного происхождения, фосфатный буфер с рН 7,4 и агар в количестве 10-15 г, причем в качестве продукта растительного происхождения используют силос кукурузный, при этом питательную основу готовят путем настаивания его в фосфатном буфере с рН 7,4 в течение 10-12 часов при комнатной температуре при следующем соотношении компонентов, г/л:
Силос кукурузный 50-150,
Фосфатный буфер с рН 7,4 Остальное
Полученный настой фильтруют, дважды по 20-30 мин стерилизуют текучим паром, охлаждают и добавляют к агару до 1 л.
Существенными признаками предложения следует считать получение питательной среды, отличной от известной по качественному и количественному составу.
Получаемая питательная среда отличается малокомпонентностью, исключительной дешевизной и простотой приготовления.
Пределы содержания компонентов и времени настаивания в предлагаемой питательной среде являются оптимальными и обуславливают относительную сбалансированность стоимости среды с ее ростовыми характеристиками. Использование силоса позволяет избежать изменения биологических свойств выделяемых штаммов, изначально обитающих в почвенной экосистеме, и увеличивает вероятность обнаружения листериозного микроба в исследуемых образцах.
Применение силоса кукурузного обеспечивает питательной среде необходимое количество органических, минеральных веществ, а также определенный набор витаминов. Кроме того, кукуруза является природным субстратом жизнеобитания листерий в естественных условиях.
Настаивание силоса кукурузного в фосфатном буфере с рН 7,4 способствует более быстрому разрушению оболочек клеток и выходу органических веществ в раствор.
Выход за пределы заявленных значений компонентов приводит либо к перерасходу продукции, либо к снижению ростовых свойств среды.
Настаивание силоса кукурузного в течение 10-12 часов позволяет полностью извлечь из силоса необходимые органические вещества. При настаивании смеси менее 10 часов не происходит полный выход органических веществ из силоса в раствор, а при настаивании более 12 часов существенных изменений в сторону увеличения количества органических веществ и соответственно повышения диагностической эффективности питательной среды не наблюдается.
Стерилизация настоя текучим паром дважды по 20-30 мин позволяет избавиться от сопутствующих микроорганизмов. В результате полученный настой можно готовить впрок и использовать по мере надобности.
При стерилизации настоя один раз и меньше 20 мин не удается избавить его от сопутствующих микроорганизмов, а при стерилизации настоя больше двух раз и 30 мин существенных изменений не происходит.
Данные приемы значительно упрощают технологию изготовления питательной среды, а также значительно удешевляют ее по отношению к прототипу.
Применение агара микробиологического в количестве 10-15 г обеспечивает питательной среде плотную основу для формирования колоний.
Способ осуществляется следующим образом.
Для приготовления 1 л питательной среды сначала готовят настой из силоса кукурузного. Настой готовят следующим образом:
1. Готовят фосфатный буфер. Для приготовления 1 л фосфатного буфера берут натрий фосфорнокислый двузамещенный 8,7 г/л, калий фосфорнокислый однозамещенный 2,7 г/л, доводят до 1 л дистиллированной водой, устанавливают рН 7,4. Буфер фосфатный готовят на основе стерильной воды.
2. К 50-150 г измельченного кукурузного силоса добавляют до 1 л фосфатный буфер с рН 7,4, смесь настаивают 10-12 часов, затем отфильтровывают через ватно-марлевый фильтр. Готовый настой стерилизуют текучим паром дважды по 20-30 мин.
Настой можно готовить впрок, хранить в холодильнике, использовать по мере необходимости.
Для приготовления 1 л. питательной среды берут 10-15 г агара микробиологического и добавляют до 1 л полученный настой.
Примеры конкретного выполнения
Пример №1
Для приготовления 1 л питательной среды сначала готовят настой для питательной среды. Для этого берут 100 г измельченного кукурузного силоса и добавляют к нему фосфатного буфера с рН 7,4 до 1 л, настаивают 11 часов, затем отфильтровывают через ватно-марлевый фильтр. Готовят буфер фосфатный рН 7,4 на основе стерильной воды. Для приготовления фосфатного буфера берут натрий фосфорнокислый двузамещенный 8,7 г/л, калий фосфорнокислый однозамещенный 2,7 г/л, до 1 л дистиллированная вода, устанавливают рН 7,4. Готовый настой стерилизуют текучим паром дважды при 100°С по 25 мин. Настой можно готовить впрок, хранить в холодильнике, использовать по мере необходимости.
Затем к 10 г агара добавляют до 1 л полученный настой. И получают питательную среду для культивирования и количественного учета листерий (Listeria monocytogenes) в объектах внешней среды.
Полученная питательная среда слегка опалесцирует, темно-кремового цвета, не имеет запаха, рН среды 7,4.
На приготовленную среду высевают листерии в физиологическом растворе 102 КОЕ/мл.
За сутки культивирования количество колоний листерий составило 400±50.
Пример 2 аналогичен примеру №1, однако кукурузного силоса берут в количестве 150 г, смесь выдерживают в течение 12 часов, а агара используют 15 г.
Полученная питательная среда слегка опалесцирует, темно-кремового цвета, не имеет запаха, рН среды 7,4.
На приготовленную среду высевают листерии в физиологическом растворе 102 КОЕ/мл.
За сутки культивирования количество колоний листерий составило 42±11.
Пример 3 аналогичен примеру №1, однако кукурузного силоса берут в количестве 50 г, смесь выдерживают в течение 12 часов, а агара используют 15 г.
Полученная питательная среда слегка опалесцирует, темно-кремового цвета, не имеет запаха, рН среды 7,4.
На приготовленную среду высевают листерии в физиологическом растворе 102 КОЕ/мл.
За сутки культивирования количество колоний листерий составило 290±28.
Данные по всем примерам представлены в таблице. В контроле питательной средой для культивирования служили среды СО и питательная среда для культивирования и количественного учета иерсиний и листерий в объектах внешней среды Бузолевой, Сомова.
Приведенные примеры показывают, что предлагаемая питательная среда по своим ростовым свойствам не уступает прототипу. Преимущества предлагаемой среды перед известной выражаются в способности более полного выявления и учета вне организменных популяций листерий, обитающих в почвенных экосистемах. Способ приготовления питательной среды прост, не требует специального оборудования и реактивов. Применение предлагаемой среды для культивирования листериозного микроба в микробиологических исследованиях позволяет снизить себестоимость целевого продукта.
Claims (1)
- Способ приготовления питательной среды для культивирования и количественного учета листерий в объектах внешней среды, содержащей питательную основу из продукта растительного происхождения, фосфатный буфер с рН 7,4 и агар в количестве 10-15 г, отличающийся тем, что в качестве продукта растительного происхождения используют силос кукурузный, причем питательную основу готовят путем настаивания его в фосфатном буфере с рН 7,4 в течение 10-12 ч при комнатной температуре при следующем соотношении компонентов, г/л:Силос кукурузный 50-150Фосфатный буфер с рН 7,4 Остальноеполученный настой фильтруют, дважды по 20-30 мин стерилизуют текучим паром, охлаждают и добавляют к агару до 1 л.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2003100580/13A RU2232194C1 (ru) | 2003-01-08 | 2003-01-08 | Способ приготовления питательной среды для культивирования и количественного учета листерий (listeria monocytogenes) в объектах внешней среды |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2003100580/13A RU2232194C1 (ru) | 2003-01-08 | 2003-01-08 | Способ приготовления питательной среды для культивирования и количественного учета листерий (listeria monocytogenes) в объектах внешней среды |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2232194C1 true RU2232194C1 (ru) | 2004-07-10 |
RU2003100580A RU2003100580A (ru) | 2004-07-10 |
Family
ID=33413745
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2003100580/13A RU2232194C1 (ru) | 2003-01-08 | 2003-01-08 | Способ приготовления питательной среды для культивирования и количественного учета листерий (listeria monocytogenes) в объектах внешней среды |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2232194C1 (ru) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2562859C1 (ru) * | 2014-10-29 | 2015-09-10 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени Г.П. Сомова"(НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Г.П.Сомова) | СПОСОБ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ Listeria monocytogenes НА ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЕ, ПРИГОТОВЛЕННОЙ НА ОСНОВЕ ЛИСТОВОГО САЛАТА (Lactuca sativa) |
-
2003
- 2003-01-08 RU RU2003100580/13A patent/RU2232194C1/ru not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Листериоз на рубеже тысячелетий. Международный симпозиум. Материалы. - Покров, 1999, с. 109-111. КОЗЛОВ Ю.А. Питательные среды в медицинской микробиологии. - Медгиз, 1956, с. 106 и 107. СИДОРОВА М.А. Определитель зоопатогенных микроорганизмов. - М.: Колос, 1996, с. 101. * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2562859C1 (ru) * | 2014-10-29 | 2015-09-10 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени Г.П. Сомова"(НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Г.П.Сомова) | СПОСОБ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ Listeria monocytogenes НА ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЕ, ПРИГОТОВЛЕННОЙ НА ОСНОВЕ ЛИСТОВОГО САЛАТА (Lactuca sativa) |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN103857297B (zh) | 水果饮料中的益生菌 | |
CN111304117B (zh) | 一株具有抗氧化活性的植物乳杆菌gl-5及其应用 | |
CN112111433A (zh) | 一株具有耐酸耐胆盐活性的植物乳杆菌lzu-j-qa85及其应用 | |
KR101950245B1 (ko) | 남조류 스피룰리나 추출물을 함유하는 세포 배양액, 이의 제조방법, 및 이를 이용한 세포의 배양방법 | |
CN105176874B (zh) | 凝结芽孢杆菌fm603及其应用 | |
CN105175518B (zh) | 凝结芽孢杆菌fm603产生的细菌素及其制备方法 | |
CN109055268A (zh) | 一种复合微生态制剂及其在蜜蜂养殖过程中的应用 | |
CN104689310A (zh) | 一种嗜水气单胞菌和维氏气单胞菌二联口服缓释微球疫苗及制备方法 | |
CN109182397B (zh) | 一种提高罗伊氏菌素产量的方法 | |
CN110484467A (zh) | 一株多粘芽孢杆菌及其产生的抗菌肽和应用 | |
CN101160136A (zh) | 通过乳酸菌培养所得到的降血压剂 | |
RU2232194C1 (ru) | Способ приготовления питательной среды для культивирования и количественного учета листерий (listeria monocytogenes) в объектах внешней среды | |
CN104357334B (zh) | 一种能够提高非酶糖基化反应抑制率的蜜环菌发酵液的制备方法 | |
HARTAJANIE et al. | Probiotic potential of lactic acid bacteria from yellow bamboo shoot fermentation using 2.5% and 5% brine at room temperature | |
CN109810928A (zh) | 一种工业生产中乳酸菌快速繁殖的方法 | |
Turner | Essentials of microbiology | |
CN105031636B (zh) | 一种嗜水气单胞菌及维氏气单胞菌二联灭活疫苗及制备方法 | |
RU2213779C2 (ru) | Питательная среда для выделения лактобактерий | |
RU2366699C2 (ru) | Способ получения биомассы бифидобактерий | |
RU2247775C1 (ru) | Транспортная жидкая питательная среда для сбора, культивирования и транспортировки крови больных, подозреваемых на заболевание бруцеллезом | |
RU2550256C1 (ru) | Способ приготовления питательной среды для культивирования лактобактерий | |
RU2333948C2 (ru) | Питательная среда для выращивания возбудителя туляремии | |
RU2161655C2 (ru) | Питательная среда для культивирования и количественного учета иерсиний и листерий в объектах внешней среды | |
RU2399660C2 (ru) | Питательная среда для культивирования бактерий | |
RU2757137C1 (ru) | Способ производства ростовой среды с содержанием нанофильтрата творожной сыворотки, предназначенной для выращивания пробиотических культур |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20050109 |