RU2346040C2 - Композиция для ингибирования пролиферации заключенных в структуру стволовых клеток млекопитающего и способы ингибирования пролиферации (варианты) - Google Patents

Композиция для ингибирования пролиферации заключенных в структуру стволовых клеток млекопитающего и способы ингибирования пролиферации (варианты) Download PDF

Info

Publication number
RU2346040C2
RU2346040C2 RU2006110637/13A RU2006110637A RU2346040C2 RU 2346040 C2 RU2346040 C2 RU 2346040C2 RU 2006110637/13 A RU2006110637/13 A RU 2006110637/13A RU 2006110637 A RU2006110637 A RU 2006110637A RU 2346040 C2 RU2346040 C2 RU 2346040C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
cells
stem cells
agarose
mammalian
population
Prior art date
Application number
RU2006110637/13A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2006110637A (ru
Inventor
Брайан КОНН (US)
Брайан КОНН
Барри СМИТ (US)
Барри Смит
Альберт Л. РУБИН (US)
Альберт Л. Рубин
Курт ШТЕНЦЕЛЬ (US)
Курт ШТЕНЦЕЛЬ
Original Assignee
Дзе Рогозин Инститьют
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Дзе Рогозин Инститьют filed Critical Дзе Рогозин Инститьют
Publication of RU2006110637A publication Critical patent/RU2006110637A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2346040C2 publication Critical patent/RU2346040C2/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0693—Tumour cells; Cancer cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
    • A01N1/02—Preservation of living parts
    • A01N1/0205—Chemical aspects
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
    • A01N1/02—Preservation of living parts
    • A01N1/0205—Chemical aspects
    • A01N1/0231—Chemically defined matrices, e.g. alginate gels, for immobilising, holding or storing cells, tissue or organs for preservation purposes; Chemically altering or fixing cells, tissue or organs, e.g. by cross-linking, for preservation purposes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/13—Tumour cells, irrespective of tissue of origin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/48—Reproductive organs
    • A61K35/54—Ovaries; Ova; Ovules; Embryos; Foetal cells; Germ cells
    • A61K35/545—Embryonic stem cells; Pluripotent stem cells; Induced pluripotent stem cells; Uncharacterised stem cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/0012—Cell encapsulation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0603—Embryonic cells ; Embryoid bodies
    • C12N5/0606—Pluripotent embryonic cells, e.g. embryonic stem cells [ES]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2502/00—Coculture with; Conditioned medium produced by
    • C12N2502/02—Coculture with; Conditioned medium produced by embryonic cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2533/00—Supports or coatings for cell culture, characterised by material
    • C12N2533/70—Polysaccharides
    • C12N2533/76—Agarose, agar-agar

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Gynecology & Obstetrics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

Изобретение относится к области молекулярной биологии и биоинженерии, а именно к стволовым клеткам. Предложены композиция для ингибирования пролиферации стволовых клеток млекопитающего, заключенных в структуру, содержащую агарозу, а также способы ингибирования других, не заключенных в ловушку клеток, включая стволовые клетки и раковые и/или гиперпролиферативные клетки. Изобретение может быть использовано при лечении клеточных пролиферативных заболеваний. 4 н. и 22 з.п. ф-лы.

Description

Данное изобретение относится к заключенным (или пойманным, или захваченным) в ловушку клеткам, таким как стволовые клетки. Пойманные в ловушку клетки при культивировании в заключающем в ловушку веществе производят продукт, который, когда находится в контакте с другими не заключенными в ловушку свободно растущими клетками in vitro или in vivo, ингибирует их пролиферацию. Кроме того, такой захват стволовых клеток ингибирует пролиферацию по крайней мере некоторых пойманных стволовых клеток и может ингибировать дифференцировку по крайней мере части пойманных стволовых клеток.
Уровень техники изобретения и предшествующий уровень техники
Захват в ловушку биологических материалов, таких как клетки, представляет собой способ, который используют для различных целей. Примерами патентной литературы в данной области являются патенты США №6303151 (Asina, et al.), №6224912 (Asina, et al.), №5888497 (Jain, et al.), №5643569 (Jain, et al.) и RE38027 (Jain, et al.), и все эти публикации в полном объеме включены в настоящее описание в виде ссылок. В этой серии родственных патентов показано, что раковые клетки и островки можно заключить в биосовместимый матрикс, такой как агароза, смесь агароза/коллаген и смесь агароза/желатин, а затем покрыть агарозой. Полученные захваченные клетки продуцируют вещества, которые, помимо прочего, диффундируют из проницаемых биосовместимых матриксов, в которых они удерживаются, и характеризуются полезными биологическими свойствами. В случае островков продуцируется инсулин. В случае раковых клеток вещество диффундирует из матрикса, и указанное вещество влияет на рост и пролиферацию раковых клеток. Просмотр патентов '912 и '151, цитируемых выше, показывает, что указанный эффект является перекрестным межвидовым эффектом, то есть захваченные или инкапсулированные раковые клетки от данного вида продуцируют вещество, которое ингибирует рост и/или пролиферацию раковых клеток от другого вида, а также вида, из которого происходят раковые клетки.
Дополнительные примеры способов захвата описаны, например, в патентах США №5227298 (Weber, et al.), 5053332 (Cook, et al.), 4997443 (Walthall, et al.), 4971833 (Larsson, et al.), 4902295 (Walthall, et al.), 4798786 (Tice, et al.), 4673566 (Goosen, et al.), 4647536 (Mosbach, et al.), 4409331 (Lim), 4392909 (Lim), 4352883 (Lim) и 4663286 (Tsang, et al.). Все эти ссылки включены в настоящее описание путем цитирования.
Захват в ловушку не всегда оказывает положительное воздействие на захваченные клетки. Например, см. Lloyd-George, et al., Biomat. Art. Cells & Immob. Biotech., 21 (3):323-333 (1993); Schinstine, et al., Cell Transplant, 41(1):93-102 (1995); Chicheportiche, et al., Diabetologica, 31:54-57 (1988); Jaeger, et al., Progress In Brain Research, 82:41-46 (1990); Zekorn, et al., Diabetologica, 29:99-106 (1992); Zhou, et al., Am. J. Physiol., 274:C1356-1362 (1998); Darquy, et al., Diabetologica, 28:776-780 (1985); Tse, et al., Biotech. & Bioeng., 51:271-280 (1996): Jaeger, et al., J. Neurol., 21-469-480 (1992); Hortelano, et al., Blood, 87(12):5095-5103 (1996): Gardiner, et al., Transp.Proc, 29:2019-2020 (1997). Bee указанные ссылки включены в настоящее описание путем цитирования.
Ни в одной из обсуждаемых выше ссылок не рассматривается класс клеток, известных как стволовые клетки, включая эмбриональные стволовые клетки.
Одно определение стволовых клеток, выдвинутое Reya et al., Nature, 414: 105-111 (2001), включенное путем цитирования, относится к стволовым клеткам, которые обладают способностью длительно сохраняться посредством самообновления и образовывать зрелые клетки определенных тканей в результате дифференцировки. Можно получать различные типы стволовых клеток, включая нервные, гематолимфоидные, миелоидные и другие типы стволовых клеток из различных органов. Все указанные клетки имеют возможность развиваться в определенные органы и ткани. Некоторые стволовые клетки, такие как эмбриональные стволовые клетки, являются полипотентными в том смысле, что путь их дифференцировки не установлен вообще, и они могут развиваться в различные органы и ткани.
Дискуссии относительно различных терапевтических применений, для которых могут быть предложены стволовые клетки, хорошо известны, и нет необходимости обсуждать их здесь. Заслуживает упоминания, поскольку относится к настоящему изобретению, то, что стволовые клетки являются очень необычными клетками, их очистка и отделение от других клеток трудоемки и трудны, и стволовые клетки дифференцируются в зрелую клетку, если только их не обрабатывают каким-либо образом, чтобы предотвратить дифференцировку.
В настоящее время установлено, что процедуры захвата клеток, в соответствии со способами, описанными Jain et al. и Iwata et al., Journ. Biomedical Material and Res., 26: 967 (1992), влияют на стволовые клетки весьма желательным образом. Следует уточнить, что пойманные в ловушку стволовые клетки продуцируют вещества, которые ингибируют пролиферацию различных типов клеток, включая стволовые клетки и раковые клетки. Указанное вещество перекрестно действует на линии клеток разных видов. Кроме того, обнаружено, что стволовые клетки, когда они заключены в ловушку, как описано в настоящем изобретении, сохраняют свою способность дифференцироваться, включая их полипотентность, в течение неопределенно длительного периода.
Описанные, а также другие признаки будут понятны из описания, которое следует далее.
Подробное описание предпочтительных воплощений
ПРИМЕР 1
Две различные линии мышиных эмбриональных стволовых [ES] клеток (то есть ES-D3 и SCC-PSA1, обе из которых доступны) получали из Американской коллекции типовых культур («АТСС»).
Обе линии выращивали в стандартных условиях культивирования, которые включали в себя рост в виде монослоя поверх подслоя "STO"-клеток эмбриональных фибробластов.
Указанные клетки также получали из АТСС. Стволовые клетки культивировали в среде DMEM, которую дополняли подходящей для ES фетальной бычьей сывороткой, фактором, ингибирующим активность лейкозных клеток (LIF), и β-меркаптоэтанолом (в совокупности -«среда А»). Клетки, которые консервировали путем замораживания при получении, подвергали оттаиванию и культивировали для стабилизации культуры по меньшей мере в течение 3 пассажей перед собственно культивированием, как описано выше.
Через три дня клетки ES оказывались на 70-80% конфлуэнтными, и их трипсинизировали, а затем захватывали в агарозные гранулы, покрывали агарозой, в соответствии с патентами США №6303151, 6224912 и 5888497, все из которых включены в настоящее описание путем цитирования. Вкратце, использовали агарозу Sigma XII в исходной концентрации приблизительно 1,0%. Аликвоты раствора указанной агарозы по 100 мкл добавляли к 34 мкл клеточной суспензии. Полученные гранулы содержали 2,0х105±1,5х104 мышиных эмбриональных стволовых клеток. На гранулы наносили второй слой агарозы в концентрации приблизительно 5,0%. Гранулы культивировали в среде, как описано выше, за исключением того, что среда не содержала ни LIF, ни жизнеспособных STO-клеток подслоя («среда В»).
Жизнеспособность клеток в гранулах оценивали с течением времени с помощью стандартного гистохимического и микроскопического исследования, а также стандартного МТТ-анализа, используя клетки, удаленные из гранул или удерживаемые в гранулах, в различные периоды.
Обнаружено, что в пойманных в ловушку стволовых клетках повышалась их метаболическая активность после первого покрытия агарозой. За этим повышением следовало снижение активности, так как клетки погибали в результате апоптоза, достигая наиболее низкого уровня их метаболической активности примерно к 21 дню. Однако после достижения указанного низкого уровня активности выжившие клетки медленно пролиферировали, и наблюдалось постепенное повышение общей метаболической активности вплоть до 35 дня после захвата. Это соответствует результатам исследования пойманных в ловушку раковых клеток.
Морфологически существуют значительные различия между колониями, образованными раковыми клетками в пределах внутреннего слоя агарозы гранулы, и колониями, образованными стволовыми клетками. Хотя оба типа колоний имеют яйцевидную форму, колонии, образованные раковыми клетками, характеризуются внешней зоной жизнеспособных клеток (обычно от двух до трех клеток по толщине), с центральной зоной из обломков эозинофильных клеток. С другой стороны, колонии, образованные стволовыми клетками, полностью оккупированы жизнеспособными клетками, и в них нет никакой центральной зоны из клеточных обломков.
ПРИМЕР 2
В представленных экспериментах исследовали ингибирующее действие стволовых клеток на пролиферацию других стволовых клеток.
Десятинедельные гранулы агароза/агароза, содержащие стволовые клетки (клетки SCC-PSA1), тестировали в отношении жизнеспособности, используя МТТ-анализ, описанный выше, и культивировали в среде В, обсуждаемой в примере 1, в течение 6 дней. Через 6 дней среду кондиционировали захваченными в ловушку стволовыми клетками. Поэтому описанную среду называют кондиционированной средой стволовых клеток (SCM).
После указанных 6 дней SCM переносили в 6-луночные планшеты, которые содержали свежие клетки SCC-PSA1. Каждый из этих планшетов содержал 9×105 STO-клеток подслоя, которые покрывали клетками SCC-PSA1, 1,5×104. STO-клетки обрабатывали митомицином С, чтобы предотвратить пролиферацию. Было поставлено три контроля, то есть лунки, которые содержали среду В (некондиционированная среда), и три лунки, которые содержали SCM.
Через 3 дня содержимое всех лунок трипсинизировали и считали общее количество клеток, используя стандартные способы. Количество клеток пересчитывали на 9х105 клеток подслоя. Результаты следуют:
Тестируемое изделие Среднее общее количество клеток/лунку Стандартное разведение Клетки после вычитания STO Процент ингибирования (SCC-клеток)
Контрольная среда 1,43×106 ±9,9×104 5,27×105  
SCM (мас./SCC) 1,19×106 ±3,6×104 2,90х105 44, 9%
Подобный эксперимент проводили со следующими результатами:
Тестируемое изделие Среднее общее количество клеток/лунку Стандартное разведение Клетки после вычитания STO Процент ингибирования (SCC-клеток)
Контрольная среда 3,09×106 ±1,7×105 1,41×106  
SCM (мас./SCC) 2,36×106 ±9,5×104 6,88×105 51,4%
Более того, как показывают следующие результаты, когда в среду добавляли клетки ES-D3, эффект не был специфичным в отношении той или иной клеточной линии:
Тестируемое изделие Среднее общее количество клеток/лунку Стандартное разведение Клетки после вычитания STO Процент ингибирования (SCC-клеток)
Контрольная среда 1,27×106 ±1,1×105 3,67×105  
SCM (мас./SCC) 1,14×106 ±7,6×104 2, 37×105 35,5%
ПРИМЕР 3
Пример 2 показал, что ингибирующее пролиферацию действие стволовых клеток не было специфичным в отношении клеточной линии. В представленных в описании экспериментах исследовали способность пойманных в ловушку стволовых клеток ингибировать пролиферацию раковых клеток.
В указанных экспериментах исследовали опухолевые клетки RENCA. Всего 15000 опухолевых клеток высевали на лунку. Применяли SCM (кондиционированную либо SCC-PSA1, либо ES-D3), описанную выше, с контрольной средой (среда В), также как описано.
Что касается SCM, кондиционирование происходило в течение 5 дней. Исследование проводили в течение периода 32 недель. Ингибирование клеток RENCA определяли фиксированием клеток 100% метанолом с последующим окрашиванием нейтральным красным, лизисом SDS и сканированием на спектрофотометре, чтобы определить количество нейтрального красного в клеточном лизате, которое пропорционально количеству клеток на лунку.
Результаты суммированы в следующих двух таблицах, в которых представлено действие стволовых клеток ES-D3 и SCC-PSA1 соответственно. Результаты для 1-3 недель коррелируют с результатами, рассматриваемыми в примере 1, то есть гибель изолированных стволовых клеток, достижение низкого уровня метаболической активности на 21 день с последующей регенерацией.
Неделя 1 3 12 16 20 24 28 32
% ингибирования RENCA-клеток посредством SCM (мас./ES-
D3)		 -
2,1%		 -
8,8%		 39,0
%		 24,4
%		 25,0
%		 20,9
%		 34,9
%		 31,3
%
Неделя 1 3 9 12 16 20 24 28 32
% ингибирования RENCA-клеток посредством SCM (мас./SCC-PSA1) 10,0% 8,9% 21,0% 40,4% 32,8% 22,5% 36,6% 38,0% 35,1%
ПРИМЕР 4
В предшествующих экспериментах исследовали и подтвердили способность пойманных в ловушку стволовых клеток ингибировать пролиферацию стволовых и раковых клеток. В представленных далее экспериментах предполагали выяснить, могут ли пойманные в ловушку раковые клетки ингибировать пролиферацию стволовых клеток.
Стволовые клетки высевали и культивировали таким же способом, как описано выше. Гранулы, содержащие клетки RENCA, полученные, как описано в патентах США 6303151, 6224912 и 5888497, культивировали в среде В, чтобы кондиционировать ее в течение 5 дней. Полученную RENCA-кондиционированную среду (RCM) затем добавляли к высеянным стволовым клеткам, а стволовые клетки считали через 3 дня. Результаты, которые следуют, представляют сначала данные для клеток ES-D3, затем для клеток SCC-PSA1:
Тестируемое изделие Среднее общее количество клеток/лунку Стандартное разведение Клетки после вычитания STO Процент ингибирования (ES-D3-клеток)
Контрольная среда 1,69×106 ±1,15×104 7,93×105  
RCM 1,42×106 ±8,74×104 5,23×105 34,0%
Тестируемое изделие Среднее общее количество клеток/лунку Стандартное разведение Клетки после вычитания STO Процент ингибирования (SCC-PSA1-клеток)
Контрольная среда 1,25×106 ±8, 08×104 3,47×105  
RCM 1,05×106 ±4,04×104 1,47×105 57,7%
Полученные результаты показывают, что заключенные в ловушку раковые клетки ингибировали пролиферацию стволовых клеток.
ПРИМЕР 5
Вопросом обсуждения при исследовании стволовых клеток является факт, что по своей природе стволовые клетки дифференцируются. Так как трудно получать стволовые клетки и предохранять их от дифференцировки, во-первых, желательно иметь подходящую методологию, согласно которой стволовые клетки можно сохранять в их недифференцированном состоянии настолько долго, насколько возможно.
С этой целью стволовые клетки заключали в ловушку, как описано в примере 1 выше. Полученные структуры хранили в среде В, описанной выше, и тестировали в течение периода более двух лет.
В течение упомянутого двухлетнего периода стволовые клетки высвобождали из фиксирующих структур и культивировали при стандартных условиях (включая добавку сокультур STO и среды LIF). Во всех случаях высвобожденные клетки создавали традиционный монослой стволовых клеток, которые пролиферировали на манер недифференцированных клеток, но сохраняли способность дифференцироваться спонтанно. Это показывает, что захват в ловушку стволовых клеток может поддерживать их недифференцированный фенотип в течение более чем двухлетнего периода в отсутствие традиционно необходимых ингибиторов дифференцировки (например, STO и LIF).
Несмотря на приведенный факт, если клетки не получают необходимые вещества, спустя короткий период они начинают дифференцироваться.
Приведенные выше примеры описывают изобретение, которое включает в себя, помимо прочего, композиции материала, которые можно использовать, чтобы продуцировать вещество, которое подавляет пролиферацию клеток, таких как раковые клетки и стволовые, не ограничиваясь указанными клетками. Указанные композиции содержат стволовые клетки, такие как эмбриональные стволовые клетки, заключенные в ловушку из избирательно проницаемого материала с образованием структуры, которая ограничивает пролиферацию пойманных клеток. В результате рестрикции клетки продуцируют неожиданно большое количество вещества, которое подавляет пролиферацию других клеток. Клетки в состоянии рестрикции продуцируют больше вещества, чем аналогичные клетки, не находящиеся в состоянии рестрикции.
Материал, используемый для создания структур согласно изобретению, может включать в себя биосовместимый материал, который обеспечивает рестрикцию роста (ограничивает рост) стволовых клеток, тем самым индуцируя продуцирование ими большего количества вещества, подавляющего клеточный рост и пролиферацию. Структура имеет подходящий размер пор для того, чтобы вышеуказанное вещество могло диффундировать во внешнюю среду, а также для того, чтобы предохранять продукты или клетки от проникновения иммунной системы хозяина в структуры и от индукции отторжения клеток или иного ухудшения их способности выживать и продолжать продуцировать требуемое вещество. Материалы, используемые для образования структуры, также должны быть способны поддерживать жизнеспособность (с ограниченной пролиферацией, но выживающие) клеток как in vitro, так и in vivo, предпочтительно в период до нескольких лет, посредством обеспечения поступления надлежащих питательных веществ и удаления продуктов клеточных отходов, и должны быть совместимы с физико-химической внутриструктурной средой. Полученные структуры обеспечивают среду, подходящую для продолжительного изучения стволовых клеток и различных факторов их дифференцировки, транскрипции и ядерных факторов. Результаты можно использовать, чтобы направлять желаемую дифференцировку других стволовых клеток. Материалы, используемые для приготовления структуры, предпочтительно должны быть очень устойчивыми, когда имплантированы in vivo, наиболее предпочтительно в течение всего периода имплантации у хозяина.
Неограничивающий список материалов и комбинаций материалов, которые могут быть использованы, включает в себя альгинат-поли-(L-лизин), альгинат-поли-(L-лизин)-альгинат, альгинат-поли-(L-лизин)-полиэтиленимин, хитозан-альгинат, полигидроксиэтил-метакрилат-метил-метакрилат, карбонилметилцеллюлозу, К-караген, хитозан, агароза-полиэфир-сульфон-гексади-метирин-бромид (полибрен), этилцеллюлозу, силикагели и их комбинации.
Структуры, которые содержат композиции материала, могут иметь разнообразные формы, такие как гранула, сфера, цилиндр, капсула, лист или любая другая форма, которая подходит для имплантации субъекту, и/или культура в среде in vitro. Размер структуры может варьировать в зависимости от ее возможного применения, что должно быть ясно квалифицированному специалисту.
Структуры согласно изобретению являются избирательно проницаемыми, с тем, чтобы питательные вещества могли входить в структуру, и с тем, чтобы ингибирующее пролиферацию вещество, а также клеточные отходы могли покидать структуру. Для применения in vivo предпочтительно, чтобы структуры предотвращали проникновение продуктов или клеток иммунной системы хозяина, которые могут вызывать отторжение клеток или иное ухудшение способности клеток продуцировать вещество, подавляющее пролиферацию.
Используемый в описании термин «пойманный в ловушку» означает, что клетки содержатся в структуре, которая предотвращает их проникновение в среду, окружающую структуру, то есть среду in vitro или in vivo. Несмотря на неспособность проникать из структуры, клетки находятся внутри структуры, которая допускает как поступление молекул, таких как вода, питательные вещества и так далее, так и проникновение из структуры клеточных отходов и молекулярных продуктов, продуцируемых клетками. Структура, в которой клетки содержатся, таким образом, поддерживает постоянную жизнеспособность и выживаемость клеток в течение длительного периода. Это также может зависеть от природы структуры/материала, фактора клеток, который содержится в них, чтобы изменить их поведение, включающее в себя такое поведение, как пролиферация, состояние дифференцировки и/или фенотипической экспрессии, не ограничиваясь перечисленным. При ингибировании дифференцировки структура de facto имеет запоминающее устройство, используемое для сохранения стволовых клеток как стволовые клетки. Типичные, но не исключительные способы захвата клеток включают в себя их инкапсулирование, их отгораживание или окружение их со всех сторон иным некоторым проницаемым материалом. Путем захвата ингибируют пролиферацию захваченных стволовых клеток. Кроме того, существуют ситуации, когда по крайней мере часть популяции, которую помещают в ловушку, также не подвергается какой-либо дифференцировке.
Другой аспект изобретения включает в себя композиции, которые используют при подавлении клеточной пролиферации. Композиции готовят, культивируя подвергнутые рестрикции клетки, как описано выше, в подходящей культуральной среде с последующим извлечением полученной кондиционированной среды. Концентраты затем могут быть получены из кондиционированной среды.
Изобретение не ограничено каким-либо определенным типом стволовых клеток; любой тип стволовых клеток можно использовать согласно изобретению. Показательными типами клеток, которые можно использовать, являются стволовые клетки человека и мыши, а также стволовые клетки других видов, особенно видов млекопитающих. Эмбриональные стволовые клетки являются особо предпочтительными, но стволовые клетки, полученные из различных органов и/или органных систем, также могут быть использованы.
Как должно быть ясно из данного описания, следующим аспектом изобретения являются терапевтические способы лечения индивидов, страдающих нарушениями клеточной пролиферации, такими как поликистозное заболевание почек, гипертрофическая тканевая реакция (включая образование рубцов), аутоиммунное заболевание, лимфопролиферативные нарушения, истинная полицитемия, а также как доброкачественная, так и злокачественная клеточная неоплазия. При использовании в терапевтическом контексте, который будет рассмотрен ниже, тип клетки, подвергнутой рестрикции в структуре, не обязательно является тем же типом клетки, который является причиной нарушения, от которого страдает индивид, хотя может им и быть. Один такой способ включает в себя введение по меньшей мере одной из структур согласно изобретению субъекту в количестве, достаточном, чтобы вызвать подавление клеточной пролиферации у субъекта. Предпочтительно субъектом является человек, хотя способ применим и к другим животным, таким как домашние животные, фермерские животные или любой тип животного.
Композицию согласно изобретению можно применять как основную терапию при лечении различных клеточных пролиферативных нарушений и как вспомогательное лечение в комбинации с другими терапиями. Например, при неопластических нарушениях, таких как рак, пациентов можно лечить композициями и по способам, предлагаемыми в изобретении, в сочетании с лучевой терапией, химиотерапией или с лечением другими биологически активными средствами, такими как цитокины, антисмысловые молекулы, стероидные гормоны, или в сочетании с генной терапией и тому подобным. Кроме того, композиции и способы согласно изобретению можно применять вместе с хирургическими методами лечения, чтобы лечить нарушения, такие как рак, например, путем имплантации таких структур после удаления опухоли, чтобы предотвратить повторный рост и метастазирование. При раковых заболеваниях в неоперабельном состоянии можно действенно оказывать помощь лечением антипролиферативными композициями согласно изобретению. Избыточную пролиферацию клеток, которая не является необходимой или желательной для надлежащей функции системы органов, но не является неопластической, такую как истинная полицитемия или поликистозное заболевание почек, также можно лечить предлагаемыми способами. При гиперпролиферативных нарушениях, таких как истинная полицитемия и поликистозное заболевание почек, вовлекаются клетки, которые проявляют избыточную пролиферацию, но в остальном нормальные (то есть не неопластические или трансформированные) клетки. Такие нарушения, дающие в результате многочисленные клетки, которые не являются необходимыми или желательными для надлежащей функции системы органов, также можно лечить предлагаемыми способами. Дополнительно, состояния, которые характеризуются гиперпролиферативными, нормальными клетками, такие как гипертрофические рубцы, также можно лечить подобным образом. При состояниях, таких как упомянутое состояние, нормальные клетки, то есть фибробласты, пролиферируют сверх того, что необходимо для заживления, но, в отличие от неоплазии, они не характеризуются другой, протекающей иным образом, нерегулируемой пролиферацией. Другие состояния, которые характеризуются подобным феноменом, хорошо известны специалистам, и нет необходимости их обсуждать.
Композиции согласно изобретению также можно применять профилактически индивидам с риском развития нарушений клеточной пролиферации, субъектам, у которых установлено наличие индивидуальных факторов риска, имеется семейный анамнез нарушения вообще, семейный анамнез специфического типа (например, рак молочной железы) и возможность профессионального заболевания и другие факторы. Для профилактики рака, например, профилактически эффективное количество структур согласно изобретению вводят индивиду при идентификации одного или более факторов риска.
Как показано с помощью примеров выше, антипролиферативное действие не ограничено ни типом используемых клеток, ни видом, из которого происходят стволовые клетки. Следовательно, можно вводить структуры, которые содержат стволовые клетки первого типа, субъекту другого вида. Например, мышиные стволовые клетки могут быть заключены в структуре согласно изобретению, а затем введены человеку. Конечно, структуры могут содержать стволовые клетки от того же самого вида, который лечат. Кроме того, стволовые клетки можно получать от индивида, которого лечат, помещать в ловушку и подвергать рестрикции в структуре, а затем вводить тому же самому индивиду.
Способы создания структур согласно изобретению также являются частью изобретения.
Другие аспекты изобретения будут понятны специалистам в данной области, и нет необходимости их обсуждать.
Употребляемые здесь термины и выражения использованы для описания, а не для ограничения, и не подразумевается, что любые эквиваленты представленных здесь признаков или их частей, а также различные их модификации входят в объем, охватываемый настоящим изобретением.

Claims (26)

1. Композиция для ингибирования пролиферации заключенных в структуру стволовых клеток млекопитающего, содержащая стволовые клетки млекопитающего, заключенные в структуру, содержащую агарозу.
2. Композиция по п.1, где указанные стволовые клетки млекопитающего являются стволовыми клетками человека.
3. Композиция по п.1, где указанные клетки млекопитающего являются мышиными стволовыми клетками.
4. Композиция по п.1, где указанные стволовые клетки млекопитающего являются эмбриональными стволовыми клетками.
5. Композиция по п.1, где структура, содержащая агарозу, сама покрыта агарозой.
6. Композиция по п.1, где указанные стволовые клетки млекопитающего заключены в смесь агарозы и коллагена или смесь агарозы и желатина.
7. Композиция по п.6, где указанная смесь агарозы и коллагена или указанная смесь агарозы и желатина покрыта агарозой.
8. Способ ингибирования пролиферации популяции стволовых клеток млекопитающего, предусматривающий заключение указанных стволовых клеток млекопитающего в структуру из агарозы, как указано в п.1.
9. Способ по п.8, при котором указанные стволовые клетки млекопитающего являются стволовыми клетками человека.
10. Способ по п.8, при котором указанные стволовые клетки млекопитающего являются мышиными стволовыми клетками.
11. Способ по п.8, при котором указанные стволовые клетки млекопитающего являются эмбриональными стволовыми клетками.
12. Способ по п.8, согласно которому структура, содержащая агарозу, сама покрыта агарозой.
13. Способ по п.8, при котором указанные стволовые клетки млекопитающего заключают в смесь агарозы и коллагена или смесь агарозы и желатина.
14. Способ по п.13, при котором указанную смесь агарозы и коллагена или смесь агарозы и желатина покрывают агарозой.
15. Способ ингибирования пролиферации не заключенной в структуру из агарозы популяции стволовых и/или раковых клеток млекопитающего, предусматривающий культивирование указанной клеточной популяции в присутствии композиции по п.1.
16. Способ по п.15, при котором указанная клеточная популяция происходит из вида, отличного от того вида, к которому относится источник клеток, заключенных в указанную композицию.
17. Способ по п.15, при котором указанная клеточная популяция происходит из того же самого вида, к которому относится источник клеток, заключенных в указанную композицию.
18. Способ по п.15, при котором указанная клеточная популяция млекопитающего является популяцией раковых клеток.
19. Способ по п.15, при котором указанная клеточная популяция клеток млекопитающего является популяцией гиперпролиферирующих клеток.
20. Способ по п.15, при котором указанная популяция клеток млекопитающего является популяцией клеток человека.
21. Способ по п.15, при котором указанная популяция клеток млекопитающего является популяцией мышиных клеток.
22. Способ ингибирования пролиферации популяции не заключенных в структуру из агарозы стволовых клеток и/или раковых клеток млекопитающего, предусматривающий культивирование композиции по п.1 в среде в течение периода, достаточного, чтобы произошла диффузия вещества, ингибирующего пролиферацию, в указанную среду, и контактирование указанной среды с указанной популяцией не заключенных в структуру из агарозы стволовых клеток и/или раковых клеток млекопитающего в течение периода, достаточного для ингибирования пролиферации популяции клеток, не заключенных в структуру из агарозы.
23. Способ по п.22, при котором указанную популяцию не заключенных в структуру из агарозы стволовых клеток и/или раковых клеток млекопитающего и клеток, заключенных в указанную композицию материала, получают от разных видов.
24. Способ по п.22, при котором указанная популяция не заключенных в структуру из агарозы стволовых клеток и/или раковых клеток млекопитающего и клеток, заключенных в указанную композицию материала, получают от одного и того же вида.
25. Способ по п.22, при котором указанная популяция клеток млекопитающего является популяцией стволовых и/или раковых клеток человека.
26. Способ по п.22, при котором указанная популяция клеток млекопитающего является популяцией стволовых и/или раковых клеток мыши.
RU2006110637/13A 2003-09-04 2004-08-09 Композиция для ингибирования пролиферации заключенных в структуру стволовых клеток млекопитающего и способы ингибирования пролиферации (варианты) RU2346040C2 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US10/655,275 2003-09-04
US10/655,275 US20050053586A1 (en) 2003-09-04 2003-09-04 Entrapped stem cells and uses thereof

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2006110637A RU2006110637A (ru) 2007-10-10
RU2346040C2 true RU2346040C2 (ru) 2009-02-10

Family

ID=34226098

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2006110637/13A RU2346040C2 (ru) 2003-09-04 2004-08-09 Композиция для ингибирования пролиферации заключенных в структуру стволовых клеток млекопитающего и способы ингибирования пролиферации (варианты)

Country Status (17)

Country Link
US (4) US20050053586A1 (ru)
EP (1) EP1660633B9 (ru)
JP (1) JP5069466B2 (ru)
KR (1) KR101294417B1 (ru)
CN (1) CN101415817B (ru)
AU (1) AU2004272987C1 (ru)
CA (1) CA2537861C (ru)
DK (1) DK1660633T3 (ru)
ES (1) ES2537755T3 (ru)
HK (1) HK1126815A1 (ru)
IL (1) IL173342A (ru)
NO (1) NO338248B1 (ru)
NZ (2) NZ545542A (ru)
PL (1) PL1660633T3 (ru)
PT (1) PT1660633E (ru)
RU (1) RU2346040C2 (ru)
WO (1) WO2005026320A2 (ru)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2583296C2 (ru) * 2010-11-23 2016-05-10 Дзе Рогозин Инститьют, Инк. Способ выделения раковой клетки, резистентной к химиотерапевтическому агенту и обладающей свойствами стволовой клетки

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SG131016A1 (en) 2005-09-19 2007-04-26 Millipore Corp Asymmetric porous adsorptive bead
EP2152860A4 (en) * 2007-06-13 2011-12-07 Fmc Corp PEPTIDE-RELATED CELLULAR MATRIX MATERIAL FOR STEM CELLS AND METHODS OF USE THEREOF
WO2010136136A2 (de) * 2009-05-27 2010-12-02 Bayer Materialscience Ag Verfahren zur herstellung eines beschichteten zellkulturträgers
GB2489320A (en) * 2011-03-21 2012-09-26 Univ Reading Transport of cells by encapsulating in a hydrogel
PL2809782T3 (pl) 2012-01-31 2018-04-30 The Rogosin Institute, Inc. Ulepszony sposób wytwarzania makroperełek

Family Cites Families (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US38027A (en) 1863-03-31 Improved method of affixing tubes in steam-condensers
US4409331A (en) 1979-03-28 1983-10-11 Damon Corporation Preparation of substances with encapsulated cells
US4352883A (en) 1979-03-28 1982-10-05 Damon Corporation Encapsulation of biological material
DE3032931C2 (de) 1980-09-02 1982-07-29 Robert Bürkle GmbH & Co, 7290 Freudenstadt Verfahren und Anordnung zur Herstellung von Mehrschicht-Leiterplatten
SE441009B (sv) 1982-03-08 1985-09-02 Kjell Nilsson Sett att immobilisera levande biomaterial i perlformiga polymerer
US4798786A (en) 1982-05-06 1989-01-17 Stolle Research And Development Corporation Living cells encapsulated in crosslinked protein
CA1196862A (en) 1983-06-01 1985-11-19 Anthony M.F. Sun Microencapsulation of living tissue and cells
US4663286A (en) 1984-02-13 1987-05-05 Damon Biotech, Inc. Encapsulation of materials
US4902295A (en) 1985-08-26 1990-02-20 Hana Biologics, Inc. Transplantable artificial tissue
US4997443A (en) 1985-08-26 1991-03-05 Hana Biologics, Inc. Transplantable artificial tissue and process
SE8604684L (sv) 1986-11-03 1988-05-04 Excorim Kommanditbolag Sett att belegga fasta partiklar med en hydrofil gel samt genom settet belagda partiklar
US5053332A (en) 1989-07-24 1991-10-01 Cook Richard B Agarose beads, preferably incorporating biological materials
US5227298A (en) 1990-08-17 1993-07-13 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Method for microencapuslation of cells or tissue
DK1418228T3 (da) 1994-01-13 2006-07-17 Rogosin Inst Makroindkapslede sekretoriske celler
US5888497A (en) 1996-04-03 1999-03-30 The Rogosin Institute Agarose coated agarose beads containing cancer cells that produce material which suppresses cancer cell proliferation
US6224912B1 (en) * 1996-04-03 2001-05-01 The Rogo Institute Cancer-cell proliferation-suppressing material produced by cancer cells restricted by entrapment
US6303151B1 (en) 1996-04-03 2001-10-16 The Rogosin Institute Cancer-cell proliferation-suppressing material produced by cancer cells restricted by entrapment
JP5057629B2 (ja) * 2001-02-06 2012-10-24 マサチューセッツ インスティテュート オブ テクノロジー ペプチド足場での組織細胞のカプセル化およびその使用
CA2351156A1 (en) * 2001-07-04 2003-01-04 Peter W. Zandstra A bioprocess for the generation of pluripotent cell derived cells and tissues
EP1437403A4 (en) * 2001-09-21 2004-10-27 Japan Science & Tech Corp METHOD FOR PATTERNING REPROGRAMMING FACTOR, METHOD OF PATTERNED REPROGRAMMING FACTOR, METHOD FOR USE OF REPROGRAMMING FACTOR, METHOD FOR DIFFERENTIATING AND SIFE-INGENATING FAN
JP2004248505A (ja) * 2001-09-21 2004-09-09 Norio Nakatsuji 移植抗原の一部または全てを欠除したｅｓ細胞由来の未分化な体細胞融合細胞およびその製造
JP4317337B2 (ja) * 2001-10-16 2009-08-19 株式会社リプロセル 細胞株継代用酵素溶液、および、それを用いた霊長類胚性幹細胞の培養増殖方法
US7101546B2 (en) * 2001-12-21 2006-09-05 Amcyte, Inc. In situ maturation of cultured pancreatic stem cells having a specified, intermediate stage of development
KR20120091471A (ko) * 2004-03-04 2012-08-17 도쿠리츠교세이호진 고쿠리츠간켄큐센터 래트 배아 줄기 세포

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2583296C2 (ru) * 2010-11-23 2016-05-10 Дзе Рогозин Инститьют, Инк. Способ выделения раковой клетки, резистентной к химиотерапевтическому агенту и обладающей свойствами стволовой клетки

Also Published As

Publication number Publication date
EP1660633A4 (en) 2009-12-02
WO2005026320A2 (en) 2005-03-24
PT1660633E (pt) 2016-01-18
AU2004272987A1 (en) 2005-03-24
CA2537861A1 (en) 2005-03-24
EP1660633B9 (en) 2015-05-06
RU2006110637A (ru) 2007-10-10
JP5069466B2 (ja) 2012-11-07
US20050053586A1 (en) 2005-03-10
IL173342A (en) 2013-11-28
NZ577865A (en) 2010-04-30
WO2005026320A3 (en) 2009-04-09
KR101294417B1 (ko) 2013-08-08
HK1126815A1 (en) 2009-09-11
US20110275155A1 (en) 2011-11-10
US7838291B2 (en) 2010-11-23
US20060216278A1 (en) 2006-09-28
CN101415817B (zh) 2014-08-06
IL173342A0 (en) 2006-06-11
US20080020463A1 (en) 2008-01-24
JP2007513057A (ja) 2007-05-24
CA2537861C (en) 2012-04-10
DK1660633T3 (en) 2015-05-04
NO338248B1 (no) 2016-08-08
KR20060123704A (ko) 2006-12-04
ES2537755T3 (es) 2015-06-11
PL1660633T3 (pl) 2015-08-31
AU2004272987C1 (en) 2008-04-03
NO20061478L (no) 2006-06-02
CN101415817A (zh) 2009-04-22
AU2004272987B2 (en) 2007-09-06
NZ545542A (en) 2010-01-29
EP1660633B1 (en) 2015-03-04
EP1660633A2 (en) 2006-05-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR101012952B1 (ko) 산후 포유류의 태반, 이의 용도 및 태반 줄기세포
RU2236855C2 (ru) Композиции подвергнутых рестрикции клеток, способных к быстрому росту, которые продуцируют вещества, подавляющие пролиферацию клеток, и их применение
EP3517118B1 (en) Sperm activator and uses thereof
US11566227B2 (en) Kit containing medium for culturing natural killer cells and method of effectively culturing natural killer cells using the same
KR20140040696A (ko) 간엽줄기세포 및 면역조절 t 세포를 유효성분으로 포함하는 면역질환의 예방 또는 치료용 세포치료제 조성물
US20110275155A1 (en) Entrapped stem cells and uses thereof
Schwartz et al. Actinomycin D: effects on Ridgway osteogenic sarcoma in mice
JP7389507B2 (ja) クローナル幹細胞を含む移植片対宿主病の治療用薬学的組成物
JP7389505B2 (ja) クローナル幹細胞を含む膵炎治療用薬学的組成物
KR20130012552A (ko) 줄기세포를 유효성분으로 포함하는 난청의 예방 및 치료를 위한 세포 치료제 조성물 및 이의 이식 방법
AU2007203602B2 (en) Entrapped stem cells and uses thereof
MXPA06002579A (en) Entrapped stem cells and uses thereof
US20230016479A1 (en) Method for preparing mesenchymal stem cells having improved viability through anti-cancer virus introduction
KR20040000287A (ko) 인간 간엽줄기 세포를 이용한 항암치료방법
Wee et al. CELL SURFACE MODIFICATION BY ACTIVATED POLYETHYLENE GLYCOL PREVENTS ALLO-SENSITIZATION IN ISLET TRANSPLANTATION.
WO1999030723A9 (en) Use of human umbilical cord blood for adoptive therapy