RU2330665C2 - Способ лечения инфаркта миокарда - Google Patents
Способ лечения инфаркта миокарда Download PDFInfo
- Publication number
- RU2330665C2 RU2330665C2 RU2005119174/14A RU2005119174A RU2330665C2 RU 2330665 C2 RU2330665 C2 RU 2330665C2 RU 2005119174/14 A RU2005119174/14 A RU 2005119174/14A RU 2005119174 A RU2005119174 A RU 2005119174A RU 2330665 C2 RU2330665 C2 RU 2330665C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- src
- tyrosine kinase
- mammal
- pharmaceutical composition
- vegf
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 39
- 238000011282 treatment Methods 0.000 title claims description 24
- 206010061216 Infarction Diseases 0.000 title abstract description 24
- 230000007574 infarction Effects 0.000 title abstract description 18
- 210000004165 myocardium Anatomy 0.000 title abstract description 8
- 239000005483 tyrosine kinase inhibitor Substances 0.000 claims abstract description 60
- 229940121358 tyrosine kinase inhibitor Drugs 0.000 claims abstract description 58
- 150000004917 tyrosine kinase inhibitor derivatives Chemical class 0.000 claims abstract description 31
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 29
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 25
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 24
- 206010028851 Necrosis Diseases 0.000 claims abstract description 12
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 claims abstract description 12
- PBBRWFOVCUAONR-UHFFFAOYSA-N PP2 Chemical compound C12=C(N)N=CN=C2N(C(C)(C)C)N=C1C1=CC=C(Cl)C=C1 PBBRWFOVCUAONR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 11
- QUKPALAWEPMWOS-UHFFFAOYSA-N 1h-pyrazolo[3,4-d]pyrimidine Chemical compound C1=NC=C2C=NNC2=N1 QUKPALAWEPMWOS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 9
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 9
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 claims description 85
- 108010087686 src-Family Kinases Proteins 0.000 claims description 43
- 102000009076 src-Family Kinases Human genes 0.000 claims description 43
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 25
- 239000005022 packaging material Substances 0.000 claims description 13
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 8
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 6
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 claims description 5
- 230000036770 blood supply Effects 0.000 claims description 2
- 125000000590 4-methylphenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1*)C([H])([H])[H] 0.000 claims 4
- 229940121649 protein inhibitor Drugs 0.000 claims 2
- 239000012268 protein inhibitor Substances 0.000 claims 2
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 claims 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 claims 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 32
- 230000008728 vascular permeability Effects 0.000 abstract description 18
- 108090000412 Protein-Tyrosine Kinases Proteins 0.000 abstract description 14
- 102000004022 Protein-Tyrosine Kinases Human genes 0.000 abstract description 13
- 230000009467 reduction Effects 0.000 abstract description 11
- 239000013000 chemical inhibitor Substances 0.000 abstract description 5
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 description 76
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 76
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 45
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 42
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 34
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 32
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 30
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 26
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 21
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 21
- 230000000451 tissue damage Effects 0.000 description 20
- 231100000827 tissue damage Toxicity 0.000 description 20
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 19
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 19
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 18
- 208000006011 Stroke Diseases 0.000 description 17
- 210000001772 blood platelet Anatomy 0.000 description 16
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 15
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 14
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 14
- 210000005003 heart tissue Anatomy 0.000 description 14
- 208000028867 ischemia Diseases 0.000 description 14
- 230000004044 response Effects 0.000 description 14
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 13
- 210000004351 coronary vessel Anatomy 0.000 description 13
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 13
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 13
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 13
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 12
- 206010008118 cerebral infarction Diseases 0.000 description 12
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 12
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 12
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 12
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 12
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 10
- UBPYILGKFZZVDX-UHFFFAOYSA-N bosutinib Chemical compound C1=C(Cl)C(OC)=CC(NC=2C3=CC(OC)=C(OCCCN4CCN(C)CC4)C=C3N=CC=2C#N)=C1Cl UBPYILGKFZZVDX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 229960003736 bosutinib Drugs 0.000 description 10
- 201000006474 Brain Ischemia Diseases 0.000 description 9
- 206010008120 Cerebral ischaemia Diseases 0.000 description 9
- 102000008790 VE-cadherin Human genes 0.000 description 9
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 9
- 108010018828 cadherin 5 Proteins 0.000 description 9
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 9
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 9
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 8
- 229940122924 Src inhibitor Drugs 0.000 description 8
- 208000026106 cerebrovascular disease Diseases 0.000 description 8
- 230000006870 function Effects 0.000 description 8
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 8
- 210000005240 left ventricle Anatomy 0.000 description 8
- 239000008177 pharmaceutical agent Substances 0.000 description 8
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 8
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 8
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 8
- 102000015735 Beta-catenin Human genes 0.000 description 7
- 108060000903 Beta-catenin Proteins 0.000 description 7
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 7
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 7
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 7
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 7
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 7
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 7
- 230000008733 trauma Effects 0.000 description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- IYLIRRZCLARWKQ-UHFFFAOYSA-N 4-anilinoquinoline-3-carbonitrile Chemical compound N#CC1=CN=C2C=CC=CC2=C1NC1=CC=CC=C1 IYLIRRZCLARWKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 6
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 6
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 6
- OGEBRHQLRGFBNV-RZDIXWSQSA-N chembl2036808 Chemical class C12=NC(NCCCC)=NC=C2C(C=2C=CC(F)=CC=2)=NN1C[C@H]1CC[C@H](N)CC1 OGEBRHQLRGFBNV-RZDIXWSQSA-N 0.000 description 6
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 6
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 6
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 6
- 210000000107 myocyte Anatomy 0.000 description 6
- 206010008190 Cerebrovascular accident Diseases 0.000 description 5
- JRZJKWGQFNTSRN-UHFFFAOYSA-N Geldanamycin Natural products C1C(C)CC(OC)C(O)C(C)C=C(C)C(OC(N)=O)C(OC)CCC=C(C)C(=O)NC2=CC(=O)C(OC)=C1C2=O JRZJKWGQFNTSRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- MCAHMSDENAOJFZ-UHFFFAOYSA-N Herbimycin A Natural products N1C(=O)C(C)=CC=CC(OC)C(OC(N)=O)C(C)=CC(C)C(OC)C(OC)CC(C)C(OC)C2=CC(=O)C=C1C2=O MCAHMSDENAOJFZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 5
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 5
- 210000002469 basement membrane Anatomy 0.000 description 5
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 5
- 230000006931 brain damage Effects 0.000 description 5
- 231100000874 brain damage Toxicity 0.000 description 5
- 208000029028 brain injury Diseases 0.000 description 5
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 5
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 5
- 238000002592 echocardiography Methods 0.000 description 5
- QTQAWLPCGQOSGP-GBTDJJJQSA-N geldanamycin Chemical compound N1C(=O)\C(C)=C/C=C\[C@@H](OC)[C@H](OC(N)=O)\C(C)=C/[C@@H](C)[C@@H](O)[C@H](OC)C[C@@H](C)CC2=C(OC)C(=O)C=C1C2=O QTQAWLPCGQOSGP-GBTDJJJQSA-N 0.000 description 5
- MCAHMSDENAOJFZ-BVXDHVRPSA-N herbimycin Chemical compound N1C(=O)\C(C)=C\C=C/[C@H](OC)[C@@H](OC(N)=O)\C(C)=C\[C@H](C)[C@@H](OC)[C@@H](OC)C[C@H](C)[C@@H](OC)C2=CC(=O)C=C1C2=O MCAHMSDENAOJFZ-BVXDHVRPSA-N 0.000 description 5
- 229940043355 kinase inhibitor Drugs 0.000 description 5
- 210000003657 middle cerebral artery Anatomy 0.000 description 5
- 239000003757 phosphotransferase inhibitor Substances 0.000 description 5
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 5
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 5
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 5
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 5
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 5
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 description 4
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 4
- 102000001332 SRC Human genes 0.000 description 4
- 108060006706 SRC Proteins 0.000 description 4
- 206010053648 Vascular occlusion Diseases 0.000 description 4
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 4
- ZOJBYZNEUISWFT-UHFFFAOYSA-N allyl isothiocyanate Chemical compound C=CCN=C=S ZOJBYZNEUISWFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 4
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 4
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 4
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 4
- 210000003038 endothelium Anatomy 0.000 description 4
- -1 for example Chemical class 0.000 description 4
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 4
- 230000000302 ischemic effect Effects 0.000 description 4
- 230000002107 myocardial effect Effects 0.000 description 4
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 4
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 4
- 125000001037 p-tolyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1*)C([H])([H])[H] 0.000 description 4
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 4
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 4
- 230000010118 platelet activation Effects 0.000 description 4
- 159000000018 pyrido[2,3-d]pyrimidines Chemical class 0.000 description 4
- WYZWZEOGROVVHK-GTMNPGAYSA-N radicicol Chemical compound C/1=C/C=C/C(=O)CC2=C(Cl)C(O)=CC(O)=C2C(=O)O[C@H](C)C[C@H]2O[C@@H]2\1 WYZWZEOGROVVHK-GTMNPGAYSA-N 0.000 description 4
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 4
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 208000021331 vascular occlusion disease Diseases 0.000 description 4
- ZVPDNRVYHLRXLX-UHFFFAOYSA-N 1-ter-butyl-3-p-tolyl-1h-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-ylamine Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1C1=NN(C(C)(C)C)C2=NC=NC(N)=C12 ZVPDNRVYHLRXLX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- COXVTLYNGOIATD-HVMBLDELSA-N CC1=C(C=CC(=C1)C1=CC(C)=C(C=C1)\N=N\C1=C(O)C2=C(N)C(=CC(=C2C=C1)S(O)(=O)=O)S(O)(=O)=O)\N=N\C1=CC=C2C(=CC(=C(N)C2=C1O)S(O)(=O)=O)S(O)(=O)=O Chemical compound CC1=C(C=CC(=C1)C1=CC(C)=C(C=C1)\N=N\C1=C(O)C2=C(N)C(=CC(=C2C=C1)S(O)(=O)=O)S(O)(=O)=O)\N=N\C1=CC=C2C(=CC(=C(N)C2=C1O)S(O)(=O)=O)S(O)(=O)=O COXVTLYNGOIATD-HVMBLDELSA-N 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 3
- 102000038012 SFKs Human genes 0.000 description 3
- 108091008118 SFKs Proteins 0.000 description 3
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 3
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 3
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 3
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 3
- 239000001045 blue dye Substances 0.000 description 3
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 3
- 230000004087 circulation Effects 0.000 description 3
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 3
- 230000008497 endothelial barrier function Effects 0.000 description 3
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 description 3
- 229960003699 evans blue Drugs 0.000 description 3
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 description 3
- 230000007954 hypoxia Effects 0.000 description 3
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 3
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 3
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 3
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 3
- 150000002596 lactones Chemical group 0.000 description 3
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 3
- 208000031225 myocardial ischemia Diseases 0.000 description 3
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 3
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 3
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 3
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 3
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 3
- 230000010410 reperfusion Effects 0.000 description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 3
- 230000002861 ventricular Effects 0.000 description 3
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 2
- 206010011086 Coronary artery occlusion Diseases 0.000 description 2
- 101100540419 Danio rerio kdrl gene Proteins 0.000 description 2
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 2
- 101150118938 FLK gene Proteins 0.000 description 2
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N Formamide Chemical compound NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- 108091005975 Myofilaments Proteins 0.000 description 2
- 208000037273 Pathologic Processes Diseases 0.000 description 2
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101100173553 Rattus norvegicus Fer gene Proteins 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 2
- 108091008605 VEGF receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000009484 Vascular Endothelial Growth Factor Receptors Human genes 0.000 description 2
- 230000009692 acute damage Effects 0.000 description 2
- 235000016720 allyl isothiocyanate Nutrition 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 230000005549 barrier dysfunction Effects 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 208000029078 coronary artery disease Diseases 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 2
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 2
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 2
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 2
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 2
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 2
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 2
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 2
- 238000002595 magnetic resonance imaging Methods 0.000 description 2
- 230000037353 metabolic pathway Effects 0.000 description 2
- 210000003632 microfilament Anatomy 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 230000009054 pathological process Effects 0.000 description 2
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 description 2
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 2
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 2
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 2
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 2
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 2
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 2
- 238000004627 transmission electron microscopy Methods 0.000 description 2
- YFDSDPIBEUFTMI-UHFFFAOYSA-N tribromoethanol Chemical compound OCC(Br)(Br)Br YFDSDPIBEUFTMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GETQZCLCWQTVFV-UHFFFAOYSA-N trimethylamine Chemical compound CN(C)C GETQZCLCWQTVFV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000001493 tyrosinyl group Chemical group [H]OC1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 2
- 210000003934 vacuole Anatomy 0.000 description 2
- 150000005206 1,2-dihydroxybenzenes Chemical class 0.000 description 1
- PKDBCJSWQUOKDO-UHFFFAOYSA-M 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride Chemical compound [Cl-].C1=CC=CC=C1C(N=[N+]1C=2C=CC=CC=2)=NN1C1=CC=CC=C1 PKDBCJSWQUOKDO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- MIJDSYMOBYNHOT-UHFFFAOYSA-N 2-(ethylamino)ethanol Chemical compound CCNCCO MIJDSYMOBYNHOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 206010002383 Angina Pectoris Diseases 0.000 description 1
- 208000022211 Arteriovenous Malformations Diseases 0.000 description 1
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 208000004020 Brain Abscess Diseases 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010008111 Cerebral haemorrhage Diseases 0.000 description 1
- 208000017667 Chronic Disease Diseases 0.000 description 1
- 206010009192 Circulatory collapse Diseases 0.000 description 1
- 208000001778 Coronary Occlusion Diseases 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 206010067276 Cytotoxic oedema Diseases 0.000 description 1
- 206010012689 Diabetic retinopathy Diseases 0.000 description 1
- 208000005189 Embolism Diseases 0.000 description 1
- 206010014612 Encephalitis viral Diseases 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 206010015866 Extravasation Diseases 0.000 description 1
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 description 1
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 description 1
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000018233 Fibroblast Growth Factor Human genes 0.000 description 1
- 108050007372 Fibroblast Growth Factor Proteins 0.000 description 1
- 208000034826 Genetic Predisposition to Disease Diseases 0.000 description 1
- 206010019280 Heart failures Diseases 0.000 description 1
- 101000820294 Homo sapiens Tyrosine-protein kinase Yes Proteins 0.000 description 1
- 208000032382 Ischaemic stroke Diseases 0.000 description 1
- 150000008575 L-amino acids Chemical group 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- 206010027202 Meningitis bacterial Diseases 0.000 description 1
- GMPKIPWJBDOURN-UHFFFAOYSA-N Methoxyamine Chemical compound CON GMPKIPWJBDOURN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091022875 Microtubule Proteins 0.000 description 1
- 102000029749 Microtubule Human genes 0.000 description 1
- 206010028594 Myocardial fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 206010064966 Myocardial oedema Diseases 0.000 description 1
- 206010028813 Nausea Diseases 0.000 description 1
- 208000012902 Nervous system disease Diseases 0.000 description 1
- 108030004039 Non-specific protein-tyrosine kinases Proteins 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 1
- 102000043276 Oncogene Human genes 0.000 description 1
- 108010058765 Oncogene Protein pp60(v-src) Proteins 0.000 description 1
- 102000045595 Phosphoprotein Phosphatases Human genes 0.000 description 1
- 108700019535 Phosphoprotein Phosphatases Proteins 0.000 description 1
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 1
- 208000013544 Platelet disease Diseases 0.000 description 1
- 208000002151 Pleural effusion Diseases 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical class [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000001253 Protein Kinase Human genes 0.000 description 1
- 108010021833 Proto-Oncogene Proteins c-yes Proteins 0.000 description 1
- 102000007696 Proto-Oncogene Proteins c-yes Human genes 0.000 description 1
- 102000014400 SH2 domains Human genes 0.000 description 1
- 108050003452 SH2 domains Proteins 0.000 description 1
- 102000000395 SH3 domains Human genes 0.000 description 1
- 108050008861 SH3 domains Proteins 0.000 description 1
- 229940124639 Selective inhibitor Drugs 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000007718 Stable Angina Diseases 0.000 description 1
- 208000026062 Tissue disease Diseases 0.000 description 1
- 208000012886 Vertigo Diseases 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 206010000891 acute myocardial infarction Diseases 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 1
- 230000002491 angiogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000320 anti-stroke effect Effects 0.000 description 1
- 210000000709 aorta Anatomy 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 239000008135 aqueous vehicle Substances 0.000 description 1
- 230000005744 arteriovenous malformation Effects 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000009904 bacterial meningitis Diseases 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000036760 body temperature Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000000337 buffer salt Substances 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000036952 cancer formation Effects 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 230000003683 cardiac damage Effects 0.000 description 1
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004700 cellular uptake Effects 0.000 description 1
- 230000003727 cerebral blood flow Effects 0.000 description 1
- 230000002490 cerebral effect Effects 0.000 description 1
- 125000003636 chemical group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 208000037516 chromosome inversion disease Diseases 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 230000008828 contractile function Effects 0.000 description 1
- 238000007887 coronary angioplasty Methods 0.000 description 1
- 235000012343 cottonseed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000002385 cottonseed oil Substances 0.000 description 1
- WZHCOOQXZCIUNC-UHFFFAOYSA-N cyclandelate Chemical compound C1C(C)(C)CC(C)CC1OC(=O)C(O)C1=CC=CC=C1 WZHCOOQXZCIUNC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 230000003205 diastolic effect Effects 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 238000002224 dissection Methods 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 201000006549 dyspepsia Diseases 0.000 description 1
- 210000005069 ears Anatomy 0.000 description 1
- 230000002497 edematous effect Effects 0.000 description 1
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 1
- 230000002874 effect on oedema Effects 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 210000003989 endothelium vascular Anatomy 0.000 description 1
- 239000002702 enteric coating Substances 0.000 description 1
- 238000009505 enteric coating Methods 0.000 description 1
- 239000002532 enzyme inhibitor Substances 0.000 description 1
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 210000003722 extracellular fluid Anatomy 0.000 description 1
- 230000036251 extravasation Effects 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 description 1
- 229940126864 fibroblast growth factor Drugs 0.000 description 1
- 239000011888 foil Substances 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007489 histopathology method Methods 0.000 description 1
- 102000048099 human YES1 Human genes 0.000 description 1
- 235000011167 hydrochloric acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 150000004679 hydroxides Chemical class 0.000 description 1
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 238000002991 immunohistochemical analysis Methods 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 150000007529 inorganic bases Chemical class 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 208000020658 intracerebral hemorrhage Diseases 0.000 description 1
- 238000007917 intracranial administration Methods 0.000 description 1
- 230000003447 ipsilateral effect Effects 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- JJWLVOIRVHMVIS-UHFFFAOYSA-N isopropylamine Chemical compound CC(C)N JJWLVOIRVHMVIS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000468 ketone group Chemical group 0.000 description 1
- 208000017169 kidney disease Diseases 0.000 description 1
- 238000011813 knockout mouse model Methods 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 239000006193 liquid solution Substances 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000003340 mental effect Effects 0.000 description 1
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000004089 microcirculation Effects 0.000 description 1
- 210000004688 microtubule Anatomy 0.000 description 1
- 210000004088 microvessel Anatomy 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 1
- 210000003470 mitochondria Anatomy 0.000 description 1
- 230000002438 mitochondrial effect Effects 0.000 description 1
- 210000001700 mitochondrial membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000003020 moisturizing effect Effects 0.000 description 1
- VYGYNVZNSSTDLJ-HKCOAVLJSA-N monorden Natural products CC1CC2OC2C=C/C=C/C(=O)CC3C(C(=CC(=C3Cl)O)O)C(=O)O1 VYGYNVZNSSTDLJ-HKCOAVLJSA-N 0.000 description 1
- 230000003680 myocardial damage Effects 0.000 description 1
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 1
- 230000008693 nausea Effects 0.000 description 1
- 230000001338 necrotic effect Effects 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 239000006186 oral dosage form Substances 0.000 description 1
- 210000004789 organ system Anatomy 0.000 description 1
- 210000003463 organelle Anatomy 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 150000007530 organic bases Chemical class 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 239000006179 pH buffering agent Substances 0.000 description 1
- 238000007427 paired t-test Methods 0.000 description 1
- 239000000123 paper Substances 0.000 description 1
- 230000007310 pathophysiology Effects 0.000 description 1
- 230000002572 peristaltic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008196 pharmacological composition Substances 0.000 description 1
- 230000009038 pharmacological inhibition Effects 0.000 description 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 1
- 235000011007 phosphoric acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000003016 phosphoric acids Chemical class 0.000 description 1
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 210000003446 pia mater Anatomy 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N procaine Chemical compound CCN(CC)CCOC(=O)C1=CC=C(N)C=C1 MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004919 procaine Drugs 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 108060006633 protein kinase Proteins 0.000 description 1
- 230000018883 protein targeting Effects 0.000 description 1
- 230000007398 protein translocation Effects 0.000 description 1
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AECPBJMOGBFQDN-YMYQVXQQSA-N radicicol Chemical compound C1CCCC(=O)C[C@H]2[C@H](Cl)C(=O)CC(=O)[C@H]2C(=O)O[C@H](C)C[C@H]2O[C@@H]21 AECPBJMOGBFQDN-YMYQVXQQSA-N 0.000 description 1
- 229930192524 radicicol Natural products 0.000 description 1
- 230000007363 regulatory process Effects 0.000 description 1
- 230000008458 response to injury Effects 0.000 description 1
- 208000037803 restenosis Diseases 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 230000008054 signal transmission Effects 0.000 description 1
- 230000007781 signaling event Effects 0.000 description 1
- 210000003625 skull Anatomy 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000012453 sprague-dawley rat model Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000012289 standard assay Methods 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 210000000966 temporal muscle Anatomy 0.000 description 1
- 230000008467 tissue growth Effects 0.000 description 1
- 238000003325 tomography Methods 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 229950004616 tribromoethanol Drugs 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 230000005747 tumor angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000003966 vascular damage Effects 0.000 description 1
- 208000019553 vascular disease Diseases 0.000 description 1
- 210000005166 vasculature Anatomy 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 231100000889 vertigo Toxicity 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 201000002498 viral encephalitis Diseases 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New or modified breeds of animals
- A01K67/027—New or modified breeds of vertebrates
- A01K67/0271—Chimeric vertebrates, e.g. comprising exogenous cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
- A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
- A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
- A61K31/7048—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having oxygen as a ring hetero atom, e.g. leucoglucosan, hesperidin, erythromycin, nystatin, digitoxin or digoxin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
- A61K38/45—Transferases (2)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/06—Antipsoriatics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
- A61P27/02—Ophthalmic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/08—Vasodilators for multiple indications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Hematology (AREA)
- Ophthalmology & Optometry (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине, в частности к кардиологии, и касается лечения инфаркта миокарда у млекопитающих, в том числе у человека. Для этого вводят терапевтически эффективное количество фармацевтической композиции, включающей химический ингибитор тирозинкиназы семейства Src. При этом ингибитор тирозинкиназы выбирают из группы, состоящей из 4-амино-5-(4-метилфенил)-7-(трет-бутил)пиразоло[3,4-d-]пиримидина, 4-амино-5-(4-хлорфенил)-7-(трет-бутил)пиразоло[3,4-d-]пиримидина и их смеси. Использование этих соединений в конкретных эффективных дозах, разработанных в опытах «ин виво», обеспечивает уменьшение сосудистой проницаемости и сокращения зоны некроза при инфаркте миокарда. 4 н. и 12 з.п. ф-лы, 2 табл., 14 ил.
Description
Настоящая заявка является заявкой в частичное продолжение заявки на патент США №10/298377, поданной 18 ноября 2002 г., которая является заявкой в частичное продолжение заявки на патент США №09/538248, поданной 29 марта 2000 г., которая является заявкой в частичное продолжение заявки на патент США №09/470881, поданной 22 декабря 1999 г., которая, в свою очередь, является заявкой в частичное продолжение международной заявки на патент № PCT/US99/11780 с указанием США в качестве страны назначения и поданной 29 мая 1998 г., которая заявляет приоритет предварительной заявки на патент США №60/087220, поданной 29 мая 1998 г. Указанные заявки включены в данное описание во всей своей полноте в качестве ссылки.
Заявление по вопросу прав Правительства
Настоящая заявка на патент выполнена при поддержке правительства согласно контрактам №№ СА 50286, СА 45726, СА 75924, СА 78045, HL 54444 и HL 09435 Национального Института Здоровья. Правительство имеет определенные права на настоящее изобретение.
Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к области медицины, конкретно к способам и композициям для лечения инфаркта миокарда у млекопитающих.
Уровень техники
Проницаемость сосудов в результате повреждения, заболевания или другой травмы кровеносных сосудов вызывает сосудистую утечку и отек, связанные с повреждением ткани. Например, нарушение мозгового кровообращения, связанное с инсультом (CVA), или другое повреждение кровеносных сосудов мозга или тканей позвоночника являются самым распространенным случаем неврологического нарушения и основной причиной нетрудоспособности. Обычно поражение мозга или тканей позвоночника в области CVA включает сосудистую утечку и/или отек. Обычно CVA может включать повреждение, вызванное ишемией мозга, нарушением нормального кровообращения мозга; умственную недостаточность вследствие транзиторных нарушений кровообращения; инфаркт вследствие отека и тромбоза внутричерепных и внечерепных артерий; кровоизлияние; и артериовенозные мальформации. Ишемический удар и внутримозговое кровоизлияние могут развиться внезапно, и последствия инцидента обычно отражают пораженную область мозга (См. The Merck Manual, 16-е издание, глава 123, 1992).
Помимо CVA инфекции или заболевание центральной нервной системы (ЦНС) также могут поражать кровеносные сосуды мозга и позвоночника и вызывать воспаление и отек, как, например, при бактериальных менингитах, вирусных энцефалитах и абсцедировании мозга (См. The Merck Manual, 16-е издание, глава 125, 1992). Также могут ослаблять кровеносные сосуды и приводить к сосудистой утечке и отеку состояния при системных заболеваниях, таких как диабет, заболевание почек, атеросклероз, инфаркт миокарда и т.п. Таким образом, сосудистая утечка и отек представляют собой критические патологии, отличные и независимые от рака, которые нуждаются в эффективном специфическом терапевтическом воздействии в соответствии с видом повреждения, травмы или состояний заболевания.
Инфаркт миокарда представляет собой гибель сердечных тканей вследствие перекрытия поступления крови в сердечную мышцу. Инфаркт миокарда является одним из самых распространенных диагнозов у госпитализированных пациентов в западных странах. Сообщалось, что в Соединенных Штатах около 1,1 миллиону людей в год ставят диагноз острого инфаркта миокарда. Смертность от инфаркта миокарда может превышать 53%, а до 66% выживших пациентов не достигают полного восстановления. Снижение смертности только на один процент могло бы спасти до 3400 жизней в год. Инфаркт миокарда и сопровождающий отек обычно происходят при окклюзии коронарной артерии, перекрытии поступления кислорода в сердечную ткань, которая снабжается блокированной артерией. При блокировании поставки крови ткань, в норме снабжаемая кровью блокированной артерией, становится ишемической. В результате сердечная ткань с кислородной недостаточностью начинает отмирать (некроз). Honkanen и др., патент США №5914242, описывает способ уменьшения зоны инфаркта миокарда, включающий введение пациенту некоторых ингибиторов фермента серин/треонин фосфатазы и родственных полипептидов после приступа ишемии сердца. Такие ферменты и полипептиды являются дорогостоящими и сложными в производстве и при очистке для фармацевтического использования.
Авторы изобретения обнаружили, что ингибирование активности тирозинкиназы семейства Src обеспечивает способ лечения инфаркта миокарда посредством уменьшения отека и образующегося некроза коронарной ткани, который обычно является результатом окклюзии коронарной сосудистой сети, таким образом уменьшая эффекты повреждение ткани при инфаркте миокарда.
Раскрытие изобретения
Настоящее изобретение относится к способу лечения инфаркта миокарда (ИМ) посредством ингибирования активности тирозинкиназы семейства Src. Способ включает лечение коронарной ткани млекопитающего, страдающего окклюзией коронарных сосудов, эффективным количеством ингибитора тирозинкиназы семейства Src. Млекопитающее может быть человеком или млекопитающим, не являющимся человеком. Коронарная ткань, требующая лечения, может представлять собой любую часть сердца, которая страдает от ишемии (т.е. снижения кровообращения) вследствие окклюзии коронарных сосудов. Терапевтическое лечение проводится путем взаимодействия целевой коронарной ткани с эффективным количеством желаемой фармацевтической композиции, содержащей химический (т.е. небелковый) ингибитор тирозинкиназы семейства Src. Полезно обрабатывать больную коронарную ткань в области, близкой к месту, где происходит или произошла опасная окклюзия сосудов. Способ обеспечивает уменьшение некроза тканей (инфаркта), обычно являющегося результатом окклюзии коронарных сосудов.
Еще одним аспектом настоящего изобретения является изделие, которое содержит упаковочный материал и фармацевтическую композицию, содержащуюся в упаковочном материале, причем фармацевтическая композиция способна уменьшить некроз коронарной ткани, страдающей от снижения кровообращения в результате окклюзии коронарных сосудов. Упаковочный материал содержит маркировку, которая указывает, что фармацевтическая композиция может быть применена для лечения инфаркта миокарда и что фармацевтическая композиция содержит терапевтически эффективное количество ингибитора тирозинкиназы семейства Src в фармацевтически приемлемом носителе.
Подходящие ингибиторы тирозинкиназы семейства Src для целей настоящего изобретения включают ингибиторы тирозинкиназы семейства Src класса пиразолопиримидинов, такие как 4-амино-5-(4-метилфенил)-7-(трет-бутил)пиразоло[3,4-d-]пиримидин (AGL 1872), 4-амино-5-(4-хлорфенил)-7-(трет-бутил)пиразоло[3,4-d-]пиримидин (AGL 1879) и т.п.; ингибиторы тирозинкиназы семейства Src класса макроциклических диенонов, такие как радицикол R2146 (Radicicol R2146), гелданамицин, гербимицин А и т.п.; ингибиторы тирозинкиназы семейства Src класса пиридо[2,3-d]пиримидинов, такой как PD173955 и т.п.; ингибиторы тирозинкиназы семейства Src класса 4-анилино-3-хинолинкарбонитрила, такой как SKI-606 и т.п.; и их смеси.
Способы настоящего изобретения являются пригодными для лечения инфаркта миокарда. Более конкретно способы настоящего изобретения являются пригодными для уменьшения некроза сердечной ткани вследствие закупорки коронарных сосудов в результате заболевания, повреждения или травмы сердца.
Краткое описание чертежей, составляющих часть данного описания:
Фиг.1 представляет собой последовательность кДНК (SEQ ID NO:1) c-Src человека, которая впервые была описана у Braeuninger и др., Proc. Natl. Acad. Sci., США, 88:10411-10415 (1991). Данная последовательность является доступной через GenBank Accession под номером X59932 X71157. Последовательность содержит 2187 нуклеотидов с частью, кодирующей белок, которая начинается и заканчивается позициями нуклеотидов, соответствующими 134 и 1486.
Фиг.2 представляет собой кодированную последовательность аминокислотных остатков c-Src человека, которая кодируется последовательностью, показанной на Фиг.1 (SEQ ID NO:2).
На Фиг.3 изображена последовательность нуклеиновых кислот (SEQ ID NO:3) кДНК, кодирующая c-Yes белок человека. Данная последовательность является доступной через GenBank Accession под номером М15990. Последовательность содержит 4517 нуклеотидов с частью, кодирующей белок, которая начинается и заканчивается позициями нуклеотидов, соответствующими 208 и 1839, и транслируется в аминокислотную последовательность, изображенную на Фиг.4.
На Фиг.4 изображена аминокислотная последовательность c-Yes (SEQ ID NO:4).
На Фиг.5 показаны результаты модифицированных тестов Miles для ПС при VEGF в коже мышей с дефицитом Src, Fyn и Yes. Фиг.5,А представляет собой фотографии обработанных ушей. Фиг.5,В представляет собой графики результатов эксперимента по стимуляции мышей с различными типами дефицита. Фиг.5,С представляет собой диаграмму количества красителя Evan's blue, элюированного из обработанных тканей.
Фиг.6 представляет собой график, изображающий относительный размер церебрального инфаркта у Src+/-, Src-/-, дикого типа (WET) и AGL1872 (т.е. 4-амино-5-(4-метилфенил)-7-(трет-бутил)пиразоло[3,4-d-]пиримидин) обработанных мышей дикого типа. Доза составляла 1,5 мг/кг веса тела.
На Фиг.7 изображены последовательные снимки ЯМР-томографии головного мозга контрольных и обработанных AGL1872 мышей, демонстрирующие уменьшение размера мозгового инфаркта у животных, обработанных AGL1872 (справа), по сравнению с контрольными животными (слева).
На Фиг.8 изображены структуры предпочтительных ингибиторов тирозинкиназы семейства Src класса пиразолопиримидинов настоящего изобретения.
На Фиг.9 изображены структуры предпочтительных ингибиторов тирозинкиназы семейства Src макроциклических диенонов настоящего изобретения.
На Фиг.10 изображена структура предпочтительных ингибиторов тирозинкиназы семейства Src класса пиридо[2,3-d]пиримидинов настоящего изобретения.
На Фиг.11 приведены фотомикрографические изображения живой окрашенной сердечной ткани крысы, которая была травмирована для индуцирования инфаркта миокарда; изображение справа, показывающее значительную степень некроза, представляет собой контроль; изображение слева, показывающее резко сниженную степень некроза, представляет собой ткань, обработанную химическим ингибитором тирозинкиназы семейства Src (AGL1872).
На Фиг.12 изображена гистограмма размера инфаркта миокарда как функция концентрации ингибитора (AGL1872).
На Фиг.13 изображена гистограмма размера инфаркта миокарда как функция времени после обработки ингибитором (AGL1872).
На Фиг.14 изображена гистограмма содержания воды в миокарде как функция концентрации ингибитора (AGL1872).
Осуществление изобретения
А. Определения
Термин "аминокислотный остаток", как используется в настоящем описании, относится к аминокислоте, образованной путем химического расщепления (гидролиза) полипептида по его пептидным связям. Предпочтительно аминокислотные остатки, рассматриваемые в настоящем описании, представляют собой "L" изомерную форму. Однако остатки в "D" изомерной форме могут замещаться любым L-аминокислотным остатком при условии, что у полипептида сохраняется требуемое функциональное свойство. NH2 относится к свободной аминогруппе, находящейся на аминоконце полипептида. COOH относится к свободной карбоксильной группе, находящейся на карбоксильном конце полипептида, придерживаясь стандартной номенклатуры полипептидов (описанной в J. Biol. Chem., 243:3552-59 (1969) и принятой 37 CFR §1.822(b)(2)).
Следует отметить, что все последовательности аминокислотных остатков представлены в настоящем описании в виде формулы, у которой ориентация слева направо соответствует стандартному направлению от аминоконца (N-конец) к карбоксильному концу (С-конец). Помимо этого, следует отметить, что тире в начале или в конце последовательности аминокислотных остатков указывает на пептидную связь со следующей последовательностью из одной или нескольких остатков аминокислот.
Термин "полипептид", как используется в настоящем описании, относится к линейным последовательностям аминокислотных остатков, соединенных друг с другом пептидными связями между альфа-аминогруппой и карбоксильной группой соседних аминокислотных остатков.
Термин "пептид", как используется в настоящем описании, относится к линейным последовательностям, состоящим не более чем из 50 аминокислотных остатков, соединенных друг с другом как в полипептиде.
Термин "белок", как используется в настоящем описании, относится к линейным последовательностям, состоящим более чем из 50 аминокислотных остатков, соединенных друг с другом как в полипептиде.
В. Общее обсуждение
В общем случае настоящее изобретение относится к (1) установлению того, что VEGF-индуцируемая проницаемость сосудов (ПС) специфически опосредована белками тирозинкиназы, такими как Src и Yes, и что ПС может модулироваться ингибитором активности тирозинкиназы семейства Src; и (2) установлению того, что введение in vivo ингибитора тирозинкиназы семейства Src уменьшает поражение тканей в результате увеличения проницаемости сосудов, связанной с болезнью или повреждением.
Это открытие является важным ввиду роли, которую играет проницаемость сосудов в ряде патологических процессов. Настоящее изобретение относится к установлению того, что проницаемость сосудов может специфически модулироваться и уменьшаться путем ингибирования активности тирозинкиназы семейства Src. В частности, настоящее изобретение относится к установлению того, что введение in vivo ингибитора тирозинкиназы семейства Src уменьшает поражение тканей в результате увеличения проницаемости сосудов, связанной с болезнью или повреждением, которое не связано с раком или ангиогенезом.
Проницаемость сосудов вовлечена в ряд патологических процессов, в которых поражение ткани вызывается резким увеличением ПС вследствие травмы кровеносного сосуда. Таким образом, возможность специфически модулировать ПС предоставляет новые и эффективные виды лечения для уменьшения неблагоприятных последствий удара.
Примеры тканей, связанных с заболеванием или повреждением, индуцируемым сосудистой утечкой и/или отеком, на которые может быть оказано благоприятное действие при специфической модуляции посредством ингибитора с использованием ингибитора тирозинкиназы семейства Src, включают ревматоидный артрит, диабетическую ретинопатию, воспалительные заболевания, рестеноз, удар, инфаркт миокарда и т.п.
Сообщалось, что системная нейтрализация белка VEGF с использованием IgG слитого белка c VEGF рецепторами уменьшает размер инфаркта после церебральной ишемии. Такой эффект сопровождался уменьшением VEGF-регулируемой проницаемости сосудов (N. van Bruggen и др., J. Clin. Inves. 104:1613-1620 (1999)). Однако VEGF не является ключевым медиатором увеличения проницаемости сосудов, которым, как обнаружено в настоящее время, является Src. Более того, Src может быть активирован стимулом, отличным от VEGF (См., например, Erpel и др., Cell Biology, 7:176-182 (1995)).
Более конкретно, настоящее изобретение относится к установлению того, что ингибиторы тирозинкиназы семейства Src, конкретно ингибиторы Src, являются пригодными для лечения инфаркта миокарда путем уменьшения поражения коронарной ткани у млекопитающего вследствие окклюзии коронарных сосудов.
С. Белки тирозинкиназы семейства Src
Как используется в настоящем описании и прилагаемой формуле изобретения, термин "белок тирозинкиназы семейства Src" и его грамматические вариации относятся в частности к белку, имеющему аминокислотную последовательность, гомологичную v-Src, N-терминальную миристоляцию, сохраненную структуру домена, имеющую N-терминальную вариабельную область, за которой следует SH3-домен, SH2-домен, каталитический домен тирозинкиназы и С-терминальный регуляторный домен. Термины "белок Src" и "Src" используются для совместного обозначения различных форм белка Src тирозинкиназы, имеющего молекулярный вес 60 КДа, N-терминальную вариабельную область, включающую в себя 2 сайта фосфорилирования РКС и один сайт фосфорилирования РКА, относительно более высокую общую идентичность аминокислотной последовательности известным белкам Src, чем известным членам других подгрупп семейства Src (например, Yes, Fyn, Lck и Lyn), и которая активируется фосфорилированием тирозина, который соответствует тирозину в позиции 416 в SEQ ID NO:2. Термины "Yes белок" и "Yes" используют для совместного обозначения различных форм Yes белка тирозинкиназы, имеющего молекулярный вес 62 КДа, N-терминальную вариабельную область, у которой отсутствует какой-либо сайт фосфорилирования, относительно более высокую общую идентичность аминокислотной последовательности известным Yes белкам, чем известным членам других подгрупп семейства Src (например, Yes, Fyn, Lck и Lyn), и которая активируется фосфорилированием тирозина, который соответствует тирозину в позиции 426 в SEQ ID NO:4.
Предпочтительный способ измерения коронарной ишемии включает индуцирование ишемии у крыс путем наложения лигатуры на коронарную артерию и определения размера инфаркта миокарда при помощи ЯМР-томографии, эхокардиографии и аналогичных способов в течение всего времени, как более подробно изложено в настоящем описании ниже.
D. Способы лечения и предупреждения инфаркта миокарда
Способы настоящего изобретения включают взаимодействие ишемической коронарной ткани с фармацевтической композицией, которая включает, по меньшей мере, один химический ингибитор тирозинкиназы семейства Src.
Подходящие ингибиторы тирозинкиназы семейства Src для целей настоящего изобретения включают химические ингибиторы Src, такие как ингибиторы тирозинкиназы семейства Src класса пиразолопиримидинов, ингибиторы тирозинкиназы семейства Src класса макроциклических диенонов, ингибиторы тирозинкиназы семейства Src класса пиридо[2,3-d]пиримидинов и ингибиторы тирозинкиназы семейства Src класса 4-анилино-3-хинолинкарбонитрила. Также могут быть использованы смеси ингибиторов.
Предпочтительные ингибиторы тирозинкиназы семейства Src класса пиразолопиримидинов включают 4-амино-5-(4-метилфенил)-7-(трет-бутил)пиразоло[3,4-d-]пиримидин (также иногда называемый РР1 или AGL1872), 4-амино-5-(4-хлорфенил)-7-(трет-бутил)пиразоло[3,4-d-]пиримидин (также иногда называемый РР2 или AGL1879) и т.п., получение которых более подробно описано у Waltenberger и др., Circ. Res., 85:12-22 (1999), релевантное раскрытие которой включено в данное описание во всей своей полноте в качестве ссылки. Химические структуры AGL1872 и AGL1879 проиллюстрированы на Фиг.8. AGL1872 (РР1) является доступным от Biomol по лицензии от Pfizer, Inc. AGL1879 (РР2) является доступным от Calbiochem по лицензии от Pfizer, Inc. (см. также Hanke и др., J.Biol. Chem. 271(2):695-701 (1996)).
Предпочтительные ингибиторы тирозинкиназы семейства Src класса макроциклических диенонов включают, например, радицикол R2146, гелданамицин, гербимицин А и т.п. Структуры радицикола R2146, гелданамицина, гербимицина А проиллюстрированы на Фиг.9. Гелданамицин доступен от Life Technologies. Гербимицин А доступен от Sigma. Радицикол, который коммерчески доступен от различных компаний (например, Calbiochem, RBI, Sigma), является антибактериальным антибиотиком с макроциклическим лактонным кольцом, который также действует как неспецифический белковый ингибитор тирозинкиназы и проявляет ингибирование активности Src киназы. Ингибиторы макроциклических диенонов содержат макроциклическое лактонное кольцо с 12-20 атомами углерода или структуру лактонного кольца, содержащего группу α,β,γ,δ-бис-ненасыщенного кетона (т.е. диенона) и группу оксигенированного арила как часть макроциклического кольца.
Предпочтительные ингибиторы класса пиридо[2,3-d]пиримидинов включают, например, PD173955 и т.п. Структура PD173955, ингибитора, разработанного Parke Davis, раскрыта у Moasser и др., Cancer Res., 59:6145-6152 (1999), релевантное раскрытие которой включено в данное описание во всей своей полноте в качестве ссылки. Химическая структура PD173955 проиллюстрирована на Фиг.10.
Предпочтительные ингибиторы класса 4-анилино-3-хинолинкарбонитрила включают, например, SKI-606, доступный от Wyeth. Примеры ингибиторов Src 4-анилино-3-хинолинкарбонитрила раскрыты в публикациях патентов США № 2001/0051520 и № 2002/00260052, релевантное раскрытие которых включено в данное описание во всей своей полноте в качестве ссылки.
Другие специфические ингибиторы Src киназы, используемые в способах и композициях настоящего изобретения, включают PD162531 (Owens и др., Mol. Biol. Cell 11:51-64 (2000)), который разработан Parke Davis, но структура которого не доступна из литературных источников.
Предпочтительно химический ингибитор представляет собой ингибитор пиразолопиримидинов, более предпочтительно AGL1872 и AGL1879, наиболее предпочтительно химический ингибитор представляет собой AGL1872. Другой предпочтительный ингибитор Src представляет собой 4-анилино-3-хинолинкарбонитрил, известный как SKI-606.
Дополнительные подходящие ингибиторы тирозинкиназы семейства Src могут быть идентифицированы и охарактеризованы с использованием стандартных видов анализа, известных в данной области техники. Например, скрининг химических соединений для сильнодействующих и селективных ингибиторов Src или других тирозинкиназ может быть выполнен и может быть получен в результате идентификации химических групп, используемых в белковых ингибиторах тирозинкиназы семейства Src.
Например, катехолы были идентифицированы как важные связывающие элементы для некоторых ингибиторов тирозинкиназы, полученных из природных продуктов, и были обнаружены в соединениях, выбранных при помощи комбинаторного отбора управляемого мишенью для селективных ингибиторов c-Src (См. Maly et al., "Combinatorial target-guided ligand assembly: Identification of protein subtype-selective c-Src inhibitors" PNAS (США) 97(6):2419-2424 (2000)). Комбинаторная химия, основанная на скрининге соединений-кандидатов ингибитора, используя группы, которые известны как значимые для ингибирования Src, в качестве стартовой точки является действенным и эффективным средством для выделения и получения характеристик других химических ингибиторов тирозинкиназы семейства Src.
Однако даже тщательный отбор потенциальных связывающих элементов, основанный на возможности имитации широкого ряда функциональных групп, присутствующих на полипептидах и нуклеиновых кислотах, может быть использован для выполнения комбинаторного скрининга активных ингибиторов. Например, для такой задачи в частности подходят библиотеки О-метилоксима с учетом того, что библиотеку легко создать путем конденсации О-метилгидроксиламина с любым из большого количества коммерчески доступных альдегидов. Образование О-алкилоксима совместимо с широким рядом функциональных групп, которые являются стабильными при физиологическом рН (См. выше Maly и др.).
Млекопитающее, которое может быть подвергнуто лечению способом согласно настоящему изобретению, желательно, является человеком, хотя понятно, что принципы настоящего изобретения указывают на то, что способы настоящего изобретения являются эффективными также и в отношении млекопитающих, не являющихся людьми. В этом контексте понятно, что млекопитающее включает любые виды млекопитающих, виды сельскохозяйственных и домашних млекопитающих, а также людей, которым требуется лечение сосудистой утечки или отека, связанного с поражением ткани.
Предпочтительный способ лечения содержит введение млекопитающему, страдающему от инфаркта миокарда, терапевтически эффективного количества физиологически совместимой композиции, содержащей химический ингибитор тирозинкиназы семейства Src, более точно химический (т.е. небелковый) ингибитор Src.
Предпочтительный способ предупреждения инфаркта миокарда включает введение млекопитающему с повышенным риском инфаркта миокарда профилактического количества физиологически совместимой композиции, содержащей химический ингибитор тирозинкиназы семейства Src, более точно химический (т.е. небелковый) ингибитор Src.
Пределы дозирования для введения химического ингибитора тирозинкиназы семейства Src, такого как AGL1872 или SKI-606, могут находиться в диапазоне от примерно 0,1 мг/кг веса тела до примерно 100 мг/кг веса тела или ограничиваются растворимостью активного агента в фармацевтическом носителе. Предпочтительная доза составляет примерно 1,5 мг/кг веса тела. Фармацевтические композиции, реализующие настоящее изобретение, также могут быть введены орально. Иллюстративные дозированные формы для введения орально включают капсулы, таблетки с энтеросолюбильным покрытием или без него и т.п.
В случае острого повреждения или травмы самое лучшее начать лечение настолько быстро после того, как произошел инцидент, насколько это возможно. Однако в случаях острого инцидента время для эффективного введения ингибиторов тирозинкиназы семейства Src может находиться в пределах 48 часов после возникновения повреждения или травмы. Предпочтительным является введение в течение примерно 24 часов, лучше - введение в течение 6 часов. Наиболее предпочтительно введение пациенту ингибитора тирозинкиназы семейства Src в течение примерно 45 минут после повреждения. Введение после 48 часов после первичного повреждения может быть подходящим для уменьшения дополнительного поражения ткани вследствие последующей сосудистой утечки или отека; однако в таких случаях положительное воздействие на первичное поражение ткани может быть уменьшенным.
Если профилактическое введение произведено для предупреждения инфаркта миокарда, связанного с хирургической процедурой, или произведено ввиду предрасполагающих диагностических показателей, введение может происходить до любой острой окклюзии коронарных сосудов, или во время события, вызывающего такую окклюзию, например, подкожные сердечно-сосудистые вмешательства, такие как коронарная ангиопластика. Для лечения хронических состояний, которые приводят к окклюзии коронарных сосудов, введение химических ингибиторов тирозинкиназы семейства Src может быть произведено в режиме непрерывного дозирования.
Обычно доза может меняться в зависимости от возраста, состояния, пола и степени повреждения, от которого страдает пациент, и может определяться специалистом в данной области техники. В случае какого-либо осложнения доза также может подбираться конкретным врачом.
Фармацевтические композиции настоящего изобретения предпочтительно вводят парентерально путем инъекции или при помощи постепенной инфузии в течение некоторого времени. Хотя обычно ткань, требующая лечение, может быть доступна в теле посредством системного введения и, следовательно, наиболее часто ее лечат при помощи внутривенного введения терапевтических композиций, другие ткани и средства подачи рассматриваются в том случае, если существует вероятность того, что целевая ткань содержит целевую молекулу. Таким образом, композиции настоящего изобретения могут быть введены внутривенно, внутрибрюшинно, внутримышечно, подкожно, внутриполостно, чрескожно, орально и также могут подаваться при помощи перистальтических средств.
Внутривенное введение осуществляется, например, путем инъекции единичной дозы. Термин "единичная доза", при использовании в отношении к терапевтической композиции настоящего изобретения, относится к физически дискретным единицам, подходящим в качестве однократной дозы для субъекта, причем каждая единица содержит заданное количество активного вещества, рассчитанное для получения желаемого терапевтического эффекта в соответствии с требуемым разбавителем, т.е. носителем или наполнителем.
В одном из предпочтительных вариантов осуществления активный агент вводят внутривенно одной дозой. Локализованное введение может быть выполнено путем прямой инъекции или путем использования анатомически изолированных областей, изоляции микроциркуляции целевых систем органов, реперфузии в системе циркуляции или временной окклюзии целевых областей сосудистой системы, связанных с больными тканями с использованием катетера.
Фармацевтические композиции вводят способом, совместимым с лекарственной дозированной формой и в терапевтически эффективном количестве. Термины "терапевтически эффективное количество" и "профилактическое количество", как используются в настоящем описании и в прилагаемой формуле изобретения, относятся к фармацевтическим композициям, обозначают количество фармацевтической композиции, вызывающее у субъекта биологический или медицинский ответ, который необходим врачу-клиницисту (например, уменьшение поражения тканей или предупреждение инфаркта миокарда).
Количество, предназначенное для введения, и временные параметры зависят от субъекта, нуждающегося в лечении, способности организма субъекта усваивать активный ингредиент и степени желаемого терапевтического эффекта. Точное количество активного ингредиента, предназначенное для введения, зависит от заключения практикующего врача и является специфическим для каждого индивида. Однако подходящие пределы дозирования для системного введения изложены в настоящем описании и зависят от типа введения. Подходящие режимы введения также являются изменяемыми, но в типичном случае представляют собой начальное введение с последующими повторными дозами с интервалами от одного до нескольких часов путем инъекции или другим способом введения, например введения орально. В качестве альтернативы предлагается длительная внутривенная инфузия, достаточная для поддержания концентраций в крови в пределах, установленных для терапии in vivo.
Способы настоящего изобретения уменьшают поражение тканей в результате окклюзии коронарных сосудов, связанное с различными формами коронарной болезни, либо в результате повреждения, либо травмы сердца, уменьшают симптомы заболевания, и в зависимости от заболевания могут способствовать лечению данного заболевания. Степень некроза ткани и, следовательно, степень ингибирования, достижимая способами настоящего изобретения, может быть оценена различными способами. В частности, способы настоящего изобретения чрезвычайно хорошо подходят для лечения инфаркта миокарда.
Уменьшение поражения тканей в результате окклюзии коронарных сосудов может происходить за короткий промежуток времени после введения терапевтической композиции. Большинство из терапевтических эффектов может быть визуализировано через 24 часа после введения в случае острого поражения или травмы. Однако в случае длительного применения эффекты не будут заметны так быстро.
Факторы временного ограничения включают скорость абсорбции ткани, усвоение на клеточном уровне, транслокацию белка или трансляцию нуклеиновых кислот (в зависимости от лекарства) и нацеливание белка. Таким образом, эффекты, регулирующие повреждение ткани, могут происходить в течение часа с момента введения ингибитора. Сердечная ткань также может быть подвержена дополнительному или пролонгированному воздействию ингибиторов тирозинкиназы семейства Src, применяя надлежащие условия. Таким образом, может быть разработано множество желаемых терапевтических временных рамок путем модификации параметров.
Е. Терапевтические композиции
Ингибиторы тирозинкиназы семейства Src, как изложено в настоящем описании, могут быть использованы для изготовления лекарственных веществ для лечения инфаркта миокарда. Ингибиторы могут быть включены в фармацевтические композиции, пригодные для осуществления терапевтических и профилактических способов, изложенных в настоящем описании. Фармацевтические композиции настоящего изобретения содержат физиологически совместимый носитель вместе с химическим ингибитором тирозинкиназы семейства Src, как изложено в настоящем описании, растворенным или диспергированным в нем в качестве активного ингредиента. В предпочтительном варианте осуществления фармацевтическая композиция не является иммуногенной при введении с терапевтической целью пациенту, относящемуся к млекопитающему, такому как человек.
Как используется в настоящем описании, термины "фармацевтически приемлемый" и "физиологически совместимый" и их грамматические вариации, если они относятся к композициям, носителям, разбавителям и реагентам, используются взаимозаменяемо и означают, что млекопитающему можно принимать вещества внутрь или наружно без получения нежелательных физиологических эффектов, таких как тошнота, вертиго, расстройство желудка и т.п.
Изготовление фармакологической композиции, которая содержит активные ингредиенты, растворенные или диспергированные в ней, хорошо известны в данной области техники и не ограничены лекарственной формой. Обычно такие композиции изготавливают в виде инъекций, либо в виде жидких растворов, либо в виде суспензий. Также могут быть изготовлены твердые формы, пригодные для растворения или суспендирования в жидкости перед использованием. Лекарственные препараты также могут быть эмульгированными или могут быть представлены в виде липосомной композиции.
Активный ингредиент может быть смешан с наполнителем, который является фармацевтически приемлемым и совместимым с активным ингредиентом, и находится в количестве, подходящем для применения в терапевтических способах, изложенных в настоящем описании. Подходящими наполнителями являются, например, вода, физиологический раствор, декстроза, глицерин, этанол и т.п. и их комбинации. Дополнительно, при необходимости, композиции могут содержать некоторые количества вспомогательных веществ, таких как увлажняющие или эмульгирующие агенты, агенты рН буферизации и т.п., которые усиливают эффективность активного ингредиента.
Терапевтическая композиция настоящего изобретения может включать в себя фармацевтически приемлемые соли активных компонентов. Фармацевтически приемлемые соли включают соли присоединения кислоты (образованные со свободными аминогруппами полипептидов), которые образованы неорганическими кислотами, такими как, например, хлористоводородная или фосфорная кислоты, или органическими кислотами, такими как уксусная, винная, миндальная и т.п. Соли, образованные свободными карбоксильными группами, также могут быть получены из неорганических оснований, таких как, например, гидроксиды натрия, калия, аммония, кальция или железа, и органических оснований, таких как изопропиламин, триметиламин, 2-этиламиноэтанол, гистидин, прокаин и т.п.
Физиологически совместимые носители хорошо известны в данной области техники. Примерами жидких носителей являются стерильные водные растворы, которые не содержат вещества помимо активных ингредиентов и воды, или содержат буфер, такой как натрий-фосфатный с физиологическим рН, физиологический раствор, или оба эти компонента, такой как забуференный фосфатом физиологический раствор. Дополнительно к этому, водные носители могут содержать более чем одну буферную соль, а также соли, такие как хлориды натрия и калия, декстрозу, полиэтиленгликоль и другие растворы.
Жидкие композиции также могут содержать жидкие фазы дополнительно к воде или вместо нее. Примерами таких дополнительных жидких фаз являются глицерин, растительные масла, такие как хлопковое масло, и водно-масляные эмульсии.
Химические терапевтические композиции настоящего изобретения содержат физиологически совместимые носители совместно с ингибитором тирозинкиназы семейства Src, растворенным или диспергированным в них в качестве активного ингредиента.
Подходящие ингибиторы тирозинкиназы семейства Src ингибируют биологическую тирозинкиназную активность тирозинкиназы семейства Src. Более подходящие тирозинкиназы семейства Src имеют первичную специфичность для ингибирования активности белка Src и дополнительно ингибируют наиболее близкородственные тирозинкиназы семейства Src.
F. Изделия
Настоящее изобретение также предлагает изделие, которое представляет собой емкость с маркировкой для предоставления терапевтически эффективного количества ингибитора тирозинкиназы семейства Src. Ингибитор может представлять собой отдельно упакованный химический ингибитор тирозинкиназы семейства Src или сочетание из одного или нескольких ингибиторов. Изделие содержит упаковочный материал и фармацевтический агент, содержащийся внутри упаковочного материала. Изделие также может содержать две или более суб-терапевтически эффективные дозы фармацевтической композиции, которые совместно действуют синергидно, приводя в результате к уменьшению поражения тканей в результате окклюзии коронарных сосудов.
Как используется в настоящем описании, термин упаковочный материал относится к материалу, такому как стекло, пластик, бумага, фольга и т.п., способному содержать внутри фиксированного средства фармацевтический агент. Таким образом, например, упаковочный материал может представлять собой пластмассовые или стеклянные ампулы, ламинированные оболочки и подобные емкости, используемые для содержания фармацевтической композиции, включающей в себя фармацевтический агент.
В предпочтительных вариантах осуществления упаковочный материал содержит маркировку, которая представляет собой описание содержимого изделия и применение фармацевтического агента, содержащегося в нем.
Фармацевтический агент в изделии представляет собой любую композицию настоящего изобретения, пригодную для предоставления ингибитора тирозинкиназы семейства Src, составленную в фармацевтически приемлемой форме, как изложено в настоящем описании, в соответствии с изложенными указаниями. Подходящие ингибиторы тирозинкиназы семейства Src для целей настоящего изобретения включают химические ингибиторы Src, включающие ингибиторы тирозинкиназы семейства Src класса пиразолопиримидинов, такие как 4-амино-5-(4-метилфенил)-7-(трет-бутил)пиразоло[3,4-d-]пиримидин, 4-амино-5-(4-хлорфенил)-7-(трет-бутил)пиразоло[3,4-d-]пиримидин и т.п.; ингибиторы тирозинкиназы семейства Src класса макроциклических диенонов, такие как радицикол R2146, гелданамицин, гербимицин А и т.п.; ингибиторы тирозинкиназы семейства Src класса пиридо[2,3-d]пиримидинов, такой как PD173955 и т.п.; ингибиторы тирозинкиназы семейства Src класса 4-анилино-3-хинолинкарбонитрила, такой как SKI-606 и т.п.; и их смеси. Изделие содержит количество фармацевтического агента, достаточное для применения при лечении состояния, указанного в настоящем описании, либо в единичной дозе, либо в виде множества доз.
Упаковочный материал содержит маркировку, которая указывает на применение фармацевтического агента, содержащегося в нем, например, для лечения состояний, облегчаемых посредством ингибирования увеличения проницаемости сосудов, и состояний, подобных рассмотренным в настоящем описании. Дополнительно маркировка может включать в себя инструкции по применению и соответствующую информацию, которая требуется при продаже. Упаковочный материал может включать в себя емкость(емкости) для хранения фармацевтического агента.
ПРИМЕРЫ
Нижеследующие примеры, относящиеся к данному изобретению, являются иллюстративными и, конечно, не должны быть истолкованы как ограничивающие настоящее изобретение. Более того, такие изменения настоящего изобретения, известные в настоящее время, и которые будут разработаны в дальнейшем, которые могут находиться в сфере компетенции специалистов в данной области техники, следует рассматривать как входящие в объем нижеприведенной формулы настоящего изобретения.
Пример 1. VEGF-опосредованная активность ПС зависит от Src и Yes, но не Fyn
Специфичность потребности Src для ПС изучали при помощи оценки индуцируемой VEGF активности ПС, связанной с SFK, такими как Fyn или Yes, которые подобно Src известны как экспрессируемые эндотелиальными клетками (Bull и др., FEBS Letters, 361:41-44 (1994); Kiefer и др., Curr. Biol. 4:100-109 (1994)). Было подтверждено, что эти три SFK одинаково экспрессировались в аорте мышей дикого типа. Подобно src-/- мышам, животные с дефицитом Yes также имели нарушения ПС, индуцируемой VEGF. Интересно отметить, что мыши с недостатком Fyn поддерживали высокую ПС в ответ на VEGF, которая незначительно отличалась от контрольных мышей. VEGF-индуцируемое нарушение ПС у src-/- и yes-/- мышей, демонстрирует, что киназная активность специфичных SFK является существенной для VEGF-опосредованных сигнальных событий, ведущих к активности ПС, но не к ангиогенезу.
Свойства проницаемости сосудов при VEGF в коже src+/- (Фиг.5,А, левый фотоснимок) или src-/- (Фиг.5,А, правый фотоснимок) мышей определяли путем введения внутрикожной инъекции физиологического раствора или VEGF (400 нг) мышам, которым внутривенно инъецировали краситель Evan′s blue. После 15 мин кусочки кожи сфотографировали (масштаб 1 мм). Звездочки указывают на участки инъекции. Области, окружающие участки инъекции VEGF, bFGF или физиологического раствора, отделяли и производили количественное определение ПС элюированием красителя Evan's blue в формамид при 58°С в течение 24 часов, и измерения абсорбции при 500 нм (Фиг.5,В, левый график). Способность медиатора воспаления (аллилизотиоцианата), известного как индуцирующего воспаление, связанное с ПС, тестировали у src+/- или src-/- мышей (Фиг.5,В, справа).
Способность VEGF индуцировать ПС сравнивали у src-/-, fyn-/- или yes-/- мышей в Miles тесте (Фиг.5,С). Данные для каждого Miles теста выражали в виде среднего значения ± SD для трех животных. Нарушения ПС У src-/- и yes-/- по сравнению с контрольными животными были статистически значимыми (*р<0,05, парный t-критерий), причем нарушения ПС ни у fyn-/- мышей, обработанных VEGF, ни у src+/- мышей, обработанных аллилизотиоцианатом, не были статистически значимыми (**р<0,05).
Пример 2. Мыши, обработанные ингибитором тирозинкинзы семейства Src, и Src-/- мыши показали уменьшенное поражение ткани, связанное с травмой или повреждением кровеносных сосудов по сравнению с необработанным диким типом мышей
Ингибиторы киназ семейства Src снижают патологическую сосудистую утечку и проницаемость после повреждения или заболевания сосудов, такого как инсульт. Сосудистый эндотелий представляет собой тип активных клеток, который реагирует на многие раздражители в регуляторных процессах, таких как рост новых кровеносных сосудов во время ангиогенеза опухоли, в регуляции проницаемости стенки сосуда во время отека, индуцированного инсультом, и повреждения ткани.
Уменьшение проницаемости сосудов в двух мышиных моделях инсульта посредством лекарственного ингибирования пути метаболизма Src, является достаточным для ингибирования поражения головного мозга путем уменьшения сосудистой утечки, индуцированной ишемией. Более того, обычно при недостатке у мышей Src, который уменьшает сосудистую утечку/проницаемость, объем инфаркта также является уменьшенным. Объединение данных для синтетического ингибитора Src с подтверждающим генетическим признаком уменьшения сосудистой утечки при инсульте и другие родственные модели демонстрируют физиологическую значимость такого подхода в уменьшении повреждения мозга после инсультов. Ингибирование таких путей метаболизма некоторыми доступными ингибиторами киназ семейства Src для таких последовательностей передачи сигналов имеет терапевтическую пользу, заключающуюся в уменьшении поражения мозга вследствие поражения ткани, связанного с проницаемостью сосудов.
Использовали два различных способа индуцирования фокальной церебральной ишемии. Обе модели животных фокальной церебральной ишемии хорошо изучены и широко используются при изучении инсульта. Обе модели ранее использовались для изучения патофизиологии церебральной ишемии, а также для проверки новых противоинсультных лекарственных препаратов.
(а) Мышей анестезировали 2,2,2-трибромэтанолом (AVERTINTM) и поддерживали температуру тела путем содержания животного на горячей грелке. Между правым ухом и правым глазом произвели рассечение. Ретракцией височной мышцы обнажили череп и в области выше средней мозговой артерии (СМА) просверлили небольшое трепанационное отверстие. Удалили мягкие мозговые оболочки и закупорили правую СМА путем коагуляции с использованием нити накала. Животным предоставили возможность восстановиться и вернули в свои клетки. После 24 часов провели перфузию мозга, который удалили и разрезали на 1-мм поперечные срезы. Срезы погрузили в 2% раствор хлорида 2,3,5-трифенилтетразолия (ТТС), и области мозга, охваченные инфарктом, идентифицировали как неокрашенную (белую) ткань, окруженную жизнеспособной (красной) тканью. Величину инфаркта определяли как сумму неокрашенных площадей срезов, умноженную на их толщину.
Для изучения роли Src в церебральной ишемии использовались мыши с дефицитом Src (Src-/-). Src+/- мыши служили в качестве контроля. Авторы обнаружили, что у Src-/- мышей объем инфаркта уменьшился с 26±10 до 16±4 мм3 в контрольных группах через 24 часа после инсульта. Эффект был выражен даже в большей степени в случае, когда мыши С57В16 дикого типа были инъецированы внутрибрюшинно (i.p.) 1,5 мг/кг AGL1872 через 30 мин после окклюзии сосудов. Размер инфаркта уменьшился с 31±12 мм3 у необработанной группы до 8±2 мм3 у группы, обработанной AGL1872.
(b) Во второй модели фокальной церебральной ишемии СМА закупорили посредством помещения эмбола в начало СМА. Одиночный интактный 24-х часовой зрелый тромб, богатый фибрином, поместили в начало СМА с использованием модифицированного катетера РЕ-50. Индуцирование церебральной ишемии подтверждали снижением церебрального потока крови в ипсилатеральном полушарии по сравнению с контрлатеральным полушарием. Через 24 часа мозг удаляли, готовили серийные срезы и окрашивали гематоксилин-эозином (ГЭ). Определяли величину инфаркта путем сложения площадей инфаркта в серийных ГЭ срезах, умноженных на расстояние между сечениями.
Дозу AGL1872, использованную в этом исследовании (1,5 мг/кг i.p.), выбирали эмпирически. Известно, что VEGF впервые проявляется примерно через 3 часа после церебральной ишемии мозга с достижением максимума после 12-24 часов. В этом исследовании AGL1872 был введен через 30 мин после приступа инфаркта, чтобы полностью блокировать увеличение VEGF-индуцируемой проницаемости сосудов. В соответствии с динамикой типичной экспрессии VEGF потенциальное терапевтическое окно для введения ингибиторов Src может достигать 12 часов после инсульта. При заболеваниях, связанных с устойчивым увеличением проницаемости сосудов, подходящим является длительное применение лекарственного препарата, подавляющего Src.
Фиг.6 представляет собой график, который изображает результаты сравнения среднего объема инфаркта (мм3) мозга у мышей после повреждения, в котором мыши представляют собой Src гетерогенных (Src+/-), доминантных негативных Src мутантов (Src-/-), мышей дикого типа (WET) или мышей дикого типа, обработанных 1,5 мг/кг AGL1872.
На Фиг.7 показаны последовательные снимки ЯМР-томографии образцов изолированного перфузированного мозга мыши после обработки для индуцирования повреждения ЦНС, где изменение изображений у животных (справа), обработанных AGL1872, ясно демонстрирует уменьшение церебрального инфаркта по сравнению с изменением изображений у контрольных необработанных животных (слева).
Пример 3. Крысы, обработанные ингибитором тирозинкиназы семейства Src и Src-/- мыши показывают уменьшение поражения тканей, связанного с травмой или повреждением коронарных кровеносных сосудов, по сравнению с необработанными мышами дикого типа.
Ишемию миокарда индуцировали посредством наложения лигатуры на левую переднюю нисходящую коронарную артерию у Sprague-Dawley крыс. Пораженные ткани приводили в контакт с химическим ингибитором тирозинкиназы семейства Src посредством инъекций внутрибрюшинно (i.p.) ингибитора тиразинкиназы семейства Src класса пиразолопиримидинов AGL1872 или SKI-606 после индуцирования ишемии. Магнитная резонасная томография (ЯМР-томография) с высоким разрешением, измерение сухого веса, размер инфаркта, объем сердца и область повышенного риска определяли через 24 часа после операции. Определяли степень выживания и выполнили эхокардиографию через 4 недели после операции у крыс, получивших i.p. инъекции ингибитора при дозе примерно 1,5 мг/кг после инфаркта миокарда (ИМ).
На Фиг.11 показаны фотомикрографические снимки сердечной ткани крыс, обработанных (слева) и контрольных (справа), окрашенной эозиновым красителем (витальный краситель). Контрольная ткань (верхний правый снимок) показывает большую площадь некроза на периферии этой ткани. Напротив, обработанная ткань (верхний левый снимок) показывает очень небольшое количество некротической ткани.
На Фиг.12 показана гистограмма размера инфаркта через 24 часа после обработки (в мг ткани) как функция концентрации ингибитора (AGL1872). Оптимальный уровень ингибирования был достигнут при дозе примерно 1,5 мг/кг. Доза примерно 3 мг/кг не привела в результате к какому-либо значимому уменьшению размера инфаркта.
Обработка ингибитором терозинкиназы семейства Src дает в результате уменьшение размера инфаркта и области повышенного риска в зависимости от дозы в течение 24 часов после операции. Максимальное ингибирование, примерно 68% (р<0,05) размера инфаркта достигалось при дозе ингибитора примерно 1,5 мг/кг, введенного примерно через 45 мин после индуцирования ишемии (Фиг.13). Ингибитор также был эффективным, когда вводился примерно через 6 часов после индуцирования ишемии, приводя в результате к уменьшению размера инфаркта примерно на 42% (р<0,05). Как определили при помощи иммуногистохимического анализа, ингибирование Src не препятствует экспрессии VEGF в ишемических тканях. Уменьшенный размер инфаркта сопровождался снижением содержания воды в миокарде (примерно 5%+/-1,3%; р<0,05) и сокращением объема отечных тканей, как определили при помощи ЯМР-томографии, что указывает на то, что положительный эффект ингибирования Src связан с предупреждением VEGF-опосредованной ПС (Фиг.14). Фракция укорочения, как оценили при помощи эхокардиографии, примерно через 4 недели после операции, составила примерно 29% у контрольных и примерно 34% у обработанных крыс (р<0,05). Существенно то, что четырехнедельная доля выживших была неожиданно высокой (100%) для обработанных крыс относительно примерно 63% для контрольных крыс.
Для точной регистрации отека in vivo авторы использовали магнитно-резонансную томографию (ЯМР-томографию) с высоким разрешением для оценки сердечной ткани у крыс, которые были обработаны ингибитором Src AGL1872 или SKI-606 или без него, после необратимой окклюзии левой передней нисходящей (LAD) артерии. Ожидается, что области отека, из-за увеличенного содержания воды в них, имеют большую Т2 релаксацию, чем области без отека. Для количественной оценки отека были установлены размеры области с Т2>49 мсек (более чем на два стандартных отклонения, превышающих среднее значение нормально перфузируемого миокарда). Через час после приступа ишемии ингибирование Src, индицируемое Т2-взвешенным сигналом, не повлияло на исходный цитотоксический отек. Однако через 24 часа рассчитанные Т2 карты показали уменьшение отека миокарда, связанного с инфарктом, на 47% посредством AGL1872 по сравнению с носителем (n=2 AGL1872 группа, n=1 группа носителя). Такой результат коррелирует с содержанием воды в миокарде, вычисленным ex-vivo с использованием влажного/сухого веса миокарда без ишемии. В зависимости от предоставляемой дозы AGL1872 уменьшает отек и размер инфаркта, с максимальным уменьшением при 1,5 мг/кг (n>5 в каждой группе, Р<0,001). SKI-606 также значимо уменьшает размер инфаркта, если вводится мыши или крысе после необратимой окклюзии. Для оценки динамики такого ответа AGL1872 вводили в различные моменты времени после окклюзии. Несмотря на то что максимальный эффект (уменьшение размера инфаркта на 50%) был достигнут при введении через 45 минут после окклюзии, обработка после 6 часов все еще дает 25% защиту (n=5 в каждой группе, Р<0,05).
Ингибирование Src, показанное эхокардиографией, подтверждает значимое сохранение Фракции укорочения и диастолического диаметра левого желудочка (ЛЖ) через 4 недели по сравнению с необработанными крысами, указывающее на то, что в восстановленной ткани сохранялась сократительная функция в течение долгого времени. Ингибирование Src также обеспечивало благоприятное влияние на систолический диаметр ЛЖ и региональное движение стенок (таблица 1). Обработка ингибитором Src SKI-606 также благоприятно повлияла на Фракцию укорочения и показатель регионального движения стенок (n=7 в каждой группе, Р<0,01). Для оценки выживания после ИМ авторы использовали 2-годичных С57 черных мышей в качестве модели, характеризуемой значительной смертностью (>40%) после утечки LAD. Введение AGL1872 (1,5 мг/кг) через 45 минут после ИМ увеличило выживание по сравнению с контролем в течение первых 4 недель (91,7% по сравнению с 58,3%, соответственно, n=12 в каждой группе), демонстрирующее длительный терапевтический эффект ингибирования Src.
Таблица 1 | ||||
Функциональное восстановление после ИМ: Эхокардиография | ||||
Контроль | AGL1872 | Улучшение в % | Р-значение | |
Диаметр ЛЖ, диастола (мм) | 0,93±0,02 | 0,82±0,02 | 11 | 0,01 |
Диаметр ЛЖ, систола (мм) | 0,71±0,03 | 0,59±0,04 | 16 | 0,03 |
Фракция укорочения (%) | 23,8±1,7 | 32,8±3,2 | 38 | 0,03 |
Показатель региональное движение стенок | 26,9±0,8 | 24,0±0,5 | 9 | 0,01 |
# крыс на группу | 8 | 8 |
Хронический фиброз миокарда происходит после инфаркта и является непосредственным отражением степени некроза тканей после ИМ. Для оценки влияния ингибирования Src на фиброз через 4 недели после ИМ у крыс проводили гистопатологический анализ фиброзной ткани, используя гибкое трихромное окрашивание. Ингибирование Src способствовало уменьшению на 52% в фиброзной ткани ЛЖ по сравнению с контролем (19,1±2,2% по сравнению с 40,0±3,0%, n=4 в каждой группе, P<0,01). Устойчиво лучшее сохранение волокон миокарда и структуры ЛЖ наблюдали среди образцов, которые получили ингибитор Src, что указывает на то, что ингибирование Src способствует длительному защитному эффекту миокарда после ИМ.
Для оценки эффективности ингибирования Src после перенесенной ишемии крыс подвергли окклюзии с последующей реперфузией и затем через 24 часа оценивали функцию желудочка и размер инфаркта. Ингибирование Src при помощи AGL1872 сохранило Фракцию укорочения левого желудочка (ЛЖ) и уменьшило размер инфаркта по сравнению с контрольными группами (n=4 в каждой группе, Р<0,05). 18% уменьшение размера инфаркта после ишемии-реперфузии сравнимо с уменьшением на 50% после необратимой окклюзии, в которых поддерживалась экспрессия VEGF, являющаяся следствием влияния гипоксии. Дополнительно, SKI-606 (5 мг/кг) обеспечило уменьшение размера инфаркта на 43% в модели ишемии-реперфузии (n=5 в каждой группе, Р<0,01). Совместно, эти данные демонстрируют положительный эффект ингибирования Src после перенесенной ишемии.
Пример 4. Влияние ИМ на целостность сосудов и жизнеспособность миоцитов в периинфарктной зоне
Поскольку экспрессия VEGF увеличивается главным образом в периинфарктной зоне, в этой области через 3-24 часа после ИМ исследовали ультраструктурные эффекты ингибирования Src в небольших кровеносных сосудах. В таблице 2 приведены суммарные наблюдения для 250 кровеносных сосудов, исследованных в каждой группе с использованием трансмиссионной электронной микроскопии. Напротив, для многочисленных образцов нормальной ткани миокарда многочисленные примеры нарушений в периинфарктной зоне наблюдали в тканях, подвергшихся инфаркту. В интерстициальной жидкости присутствовали экстравазированные клетки крови (эритроциты, тромбоциты и нейтрофилы), очевидно просочившиеся через ближайшие кровеносные сосуды. Некоторые эндотелиальные клетки (ЭК), которые часто выглядели электронно-прозрачными и содержали большое количество ямок, набухли и закупорили часть просвета кровеносных сосудов. В эндотелии присутствовали большие круглые вакуоли, которые часто были в несколько раз больше, чем толщина ЭК. Со временем после ИМ повреждение миоцитов увеличивалось и изменялось между смежными клетками, идентифицируемое как разрыв митохондриальной мембраны, дезорганизация митохондриальных крист, внутриклеточный отек и дезинтеграция миофиламентов. Наиболее сильно пострадавшие миоциты часто были смежными с поврежденными кровеносными сосудами или свободными клетками крови. Часто через 24 часа после ИМ авторы наблюдали нейтрофилы, которые участвовали в сильном ответе на повреждение и могли вносить вклад в продуцирование VEGF.
Таблица 2 | ||||
Ультраструктурные наблюдения в сердечной ткани мышей после ИМ или инъекции VEGF | ||||
Дисфункция барьера ЭК | Активация тромбоцитов и адгезия | Повреждение ЭК | Поражение сердца | |
3 ч ИМ | 18 | 36 | 31 | 22 |
3 ч ИМ +AGL1872 | 2 | 11 | 14 | 2 |
24 ч ИМ | 5 | 7 | 34 | 45 |
24 ч ИМ +AGL1872 | 0 | 1 | 15 | 9 |
Контроль | 0 | 0 | 1 | 0 |
VEGF, pp60Src+/+ | 24 | 18 | 33 | 16 |
VEGF, pp60Src+/+ | 0 | 0 | 0 | 0 |
Для каждой группы исследовали ткань левого желудочка в течение 4 часов (приблизительно 250 микрососудов) при помощи трансмиссионной электронной микроскопии, и наблюдения были посчитаны и сгруппированы в соответствии с:
(а) дисфункцией барьера ЭК: | щели, фенестрация, экстравазированные клетки крови; |
(b) активацией/адгезией тромбоцитов: | тромбоциты, дегранулированные тромбоциты, кластеры тромбоцитов, адгезия тромбоцитов в ЕСМ (внеклеточный матрикс); |
(с) повреждением ЭК: | электронно-прозрачные ЭК, набухшие ЭК, большие ЭК вакуоли, закупоренный просвет сосудов; |
(d) поражением сердца: | набухание митохондрий, дезорганизация крист, дезинтеграция миофиламентов. |
Через три часа после ИМ часто наблюдали щели между соседними EG, которые могли объяснить экстравазацией клеток крови в окружающее интерстициальное пространство. Интересно отметить, что многие щели были закупорены тромбоцитами. Некоторые тромбоциты находились в контакте с базальной пластинкой, расположенной между ЭК тогда, как в других случаях базальная пластинка также выглядела разрушенной. Некоторые тромбоциты были дегранулированы и могли потенциировать дальнейшую активацию, адгезию и агрегацию циркулирующих тромбоцитов. Поскольку такие закупоривающие массы тромбоцитов могут предотвращать дальнейшую сосудистую утечку, они могут непреднамеренно способствовать уменьшению перфузии в небольших кровеносных сосудах путем образования микротромбов, которые могут в дальнейшем привести к заболеванию тканей, связанному с ишемией.
Пример 5. ИМ и системная инъекция VEGF продуцируют аналогичную ответную реакцию кровеносных сосудов.
Для определения вклада VEGF в сложную патологию или ИМ внутривенно инъецировали VEGF нормальной мыши и через 30 мин оценили сердечную ткань на ультраструктурном уровне. Интересно отметить, что степень дисфункции эндотелиального барьера, индуцированного VEGF, и степень повреждения кровеносных сосудов были сравнимы со степенью, наблюдаемой в периинфарктной зоне после ИМ (таблица 2). Наблюдали значительную адгезию тромбоцитов к базальной мембране ЭК, а также поражение миоцитов. Аналогичные признаки поражения мозга обнаружили после системной инъекции VEGF, подтверждая, что такие эффекты могут быть системными. Эти результаты указывают, что VEGF-опосредованная ПС соответствует многим ответным реакциям кровеносных сосудов после ИМ.
Для определения, является ли VEGF эффективным как посредник длительной патологии, связанной с ИМ, мышей инъецировали VEGF четыре раза в течение 2 часов. Такая обработка создавала поражение, аналогичное поражению, наблюдаемому через 24 часа после ИМ. Были обнаружены адгезия тромбоцитов, нейтрофилов и значительное поражение миоцитов, а также многочисленные электронно-прозрачные ЭК, многие из которых были набухшими, закупоривая просвет кровеносных сосудов. Суммарно 30-минутное воздействие VEGF было достаточным для возникновения ультраструктуры, аналогичной таковой, наблюдаемой через 3 часа после ИМ, после чего в периинфарктной зоне значительно увеличивается экспрессия VEGF. Более длительное воздействие VEGF вызывало реструктурирование, аналогичное реструктурированию, наблюдаемому в тканях через 24 часа после ИМ.
Тот факт, что мыши с дефицитом Src были защищены после ИМ и не имели ПС в коже и мозге после местной инъекции, указывает на то, что в сердце у мышей с дефицитом Src отсутствовала VEGF-индуцируемая ПС. В соответствии с результатами ингибирования Src у рр60Src-/- мышей (таблица 2) после инъекции VEGF не наблюдали признаки ответной реакции кровеносных сосудов, такие как щели, активность тромбоцитов, пораженные ЭК и экстравазированные клетки крови у мышей дикого типа. Полное блокирование любой ответной реакции указывает на то, что VEGF-опосредованная активность Src во время ишемической болезни инициирует каскады, ведущие к повреждению, индуцированному ПС.
Обсуждение
У мышей системное введение антител VE-кадгерина вызывает ПС в сердце и легких, интерстициальный отек и фокальные точки, выраженные на базальной мембране, которые выглядят аналогично на ультраструктурном уровне с поражением, наблюдаемым после введения VEGF. В эмбрионах мышей кровеносные сосуды с нулевым β-катенином содержат плоские фенестрированные эндотелиальные клетки, связанные с частой геморрагией. Предшествующее изучение in vitro подразумевало VEGF в регуляции функции VE-кадгерина. В ЭК в состоянии потока VE-кадгерин образует комплекс с Flk. Для оценки комплекса VE-кадгерин-VEGF in vivo были приготовлены лизаты тканей сердца мышей, инъецированных VEGF или без него. Эти лизаты были подвергнуты иминопреципитации с анти-Flk с последующим иммуноблотингом для VE-кадгерина и β-катенина. В контрольной группе мышей предшествующий комплекс Flk, β-катенина и VE-кадгерина наблюдали в кровеносных сосудах. Такой комплекс быстро разрушался в течение 2-5 минут после VEGF стимуляции, и снова собирался через 15 мин в кровеносных сосудах in vivo. Временная шкала диссоциации комплекса полностью соответствовала таковой для фосфорилирования Flk, β-катенина и VE-кадгерина и диссоциации β-катенина и VE-кадгерина. Эти VEGF-опосредованные события являются Src-зависимыми, поскольку сигнальный комплекс Flk-кадгерин-катенин сохранялся без повреждений, и у мышей, стимулированных VEGF, заранее обработанных ингибиторами Src, не происходило фосфорилирования β-катенина и VE-кадгерина. Такие события не наблюдались после инъекции фактора роста базальных фибробластов (bFGF), аналогичного ангиогенному фактору роста, который не вызывает проницаемости сосудов.
Хотя единичная инъекция VEGF продуцировала обратимый, быстрый и транзиторный сигнальный ответ, который возвращался в исходное состояние через 15 минут, четыре инъекции VEGF (через каждые 30 минут) продуцировали длительный ответ передачи сигнала. Например, после длительного воздействия VEGF сохраняются диссоциация Flk-катенин и Erk фосфорилирование. Такая модель может быть применимой к физиологической ситуации после ИМ, в которой экспрессия VEGF увеличивается в результате гипоксии и сохраняется в течение нескольких дней.
Src играет физиологическую и молекулярную роль в ПС после острого ИМ или системного введения VEGF. Неблагоприятный исход после ИМ, очевидно отчасти, является следствием гиперпроницаемости перфузированных микрососудов сердца вокруг зоны инфаркта. Такие сосуды испытывают неблагоприятное воздействие VEGF и подвержены Src зависимому увеличению ПС, что приводит к окклюзии сосудов или коллапсу, и в конечном счете к поражению окружающих миоцитов. Это согласуется с продолжительностью слабой перфузии тканей и высокой смертностью, которая была задокументирована после ИМ, несмотря на открытие сосудов во время реперфузии. Ингибирование Src по истечении 6 часов после ИМ все еще обеспечивает значимую защиту от VEGF-индуцированной ПС, указывая на важность такого подхода в клинической практике. По-видимому, введение ингибиторов Src после ИМ ограничивает ПС, предотвращая диссоциацию комплексов Flk-кадгерин-катенин, которые поддерживают функцию эндотелиального барьера.
Ультраструктурные данные подтверждают, что начальные эффекты VEGF после ИМ включают открытие эндотелиальных соединений, обнажающее базальную мембрану эндотелия. Тромбоциты, многие из которых были дегранулированы и активированы, склеивались с такими участками. Это представляет интерес, поскольку тромбоциты содержат VEGF, который при локальном освобождении при активации тромбоцитов может увеличивать ПС-ответ. Фактически является возможным, что некоторые из таких благоприятных воздействий ингибирования Src являются следствием его воздействий на активирование тромбоцитов. Из представленных данных очевидно, что ранние события после ИМ инициируют каскад, который приводит в результате к увеличению отека, поражению тканей, что затем приводит к фиброзу и реструктурированию сердечной ткани. Важно отметить, что фиброзная реструктурированная сердечная ткань функционально является неполноценной по сравнению с нормальной сердечной тканью. Таким образом, при ограничении воздействия повреждения на раннем этапе можно ожидать долговременных положительных последствий, поскольку требуется меньший объем реструктурирования сердечной ткани. Поскольку блокирование одного коронарного сосуда вызывает острое повреждение, которое ведет к росту зоны инфаркта, фиброзу и в некоторых случаях к смерти, эффективное вмешательство в этот процесс на раннем этапе может обеспечить длительную защиту и благоприятное воздействие.
Представленные данные показывают, что ингибитор Src может хорошо выполнять такую роль. Ингибирование Src поддерживает комплекс Flk-кадгерин-катенин и приводит эндотелиальные соединения в состояние резистентности к воздействиям VEGF, вызывающим проницаемость.
Интересно отметить, что системная инъекция VEGF продуцирует многие из ультраструктурных эффектов в кровеносных сосудах сердца, наблюдаемых после ИМ. Для индуцирования дисфункции эндотелиального барьера и поражения кровеносных сосудов in vivo было достаточно только VEGF. Подобным образом, способы настоящего изобретения, включающие в себя блокирование ингибитором Src тирозинкиназы семейства Src, подтвердило такие события не только после ИМ, но даже после системной инъекции VEGF. Ингибирование Src стабилизирует комплекс Flk-кадгерин-катенин несмотря на стимуляцию VEGF. Другие участники VEGF-индуцированной ПС могут включать в себя ямки или визикуло-вакуолярные органеллы (VVO) и фенестрации. Такие виды проницаемости также могут быть Src-зависимыми, поскольку рр60Src-/- мыши не проявляют признаков проницаемости после инъекции VEGF. В качестве альтернативы эндотелиальные щели, экстравазированные клетки крови и незащищенная базальная мембрана могут индуцировать фенестрации и VVO.
VEGF экспрессируется in vivo в ответ на множество факторов (цитокины, онкогены, гипоксия) и влияет на индуцирование проницаемости и ангиогенез, а также пролиферацию эндотелиальных клеток, миграцию и защиту от апоптоза. Опухоли продуцируют большое количество VEGF, которое может быть обнаружено в кровотоке. Фактически после инъекции VEGF кровеносные сосуды внутри или около опухоли имеют многие общие характеристики, описанные в настоящем исследовании, такие как фенестрированный эндотелий, открытые межэндотелиальные соединения и кластеризованные слитые ямки. Уровень VEGF в сыворотке пациентов с разными типами рака может находиться в пределах 100-3000 пг/мл, в то время как уровень VEGF в местной ткани или клетках может быть в 10-100 раз выше. У пациентов после ИМ отмечали уровень VEGF в сыворотке между 100-400 пг/мл и выше - у пациентов с острым ИМ по сравнению с устойчивой стенокардией. Что касается некоторых первичных и метастатических опухолей, локальные уровни VEGF в периинфарктной области могут сильно превышать уровни в сыворотке. Представленные данные могут объяснить тот факт, что некоторые раковые пациенты имели повышенное заболевание тромбоцитов, поскольку увеличенное накопление VEGF в кровотоке может провоцировать ПС-ответ, который привлекает тромбоциты и приводит к снижению потока крови. Дополнительно, недавно опубликованное исследование может объяснить плевральный выпот и общий отек, связанный с раком поздней стадии. Таким образом, блокирование Src может иметь глубокое воздействие на отечное заболевание, связанное с раком.
AGL1872, несмотря на ингибирование тирозинкиназы семейства Src, также разрушает ряд других киназ, принимая во внимание, что SKI-606is по имеющимся сведениям более селективен для Src и Yes. Оба этих ингибитора показали аналогичный паттерн биологической активности, который отражал эффекты, наблюдаемые у мышей с дефицитом Src. Тот факт, что фармакологические ингибиторы Src, введенные животным дикого типа, оказывали такое же воздействие на поврежденные ткани, биохимию и ультраструктуру сердечных сосудов, как и наблюдаемое у "knockout" мышей (мыши с удаленным геном), подтверждает, что результат является главным образом следствием утечки, опосредованной ЭК, и не связан с генетической предрасположенностью у этих животных. Src и Yes, но не Fyn, являются существенными для ответа VEGF-опосредованной ПС и роста ткани, пораженной инфарктом, после ишемического повреждения мозга. Суммарно, эти данные подтверждают то, что положительные эффекты введения ингибитора тирозинкиназы семейства Src после ИМ действительно являются функцией ингибирования Src киназы, и, наиболее вероятно, вовлекают pp60Src и pp62Yes в качестве Src киназ.
По существу идентичные ультраструктурные изменения наблюдались после ИМ или сразу после инъекции VEGF. Тот факт, что VEGF действует главным образом на эндотелий, а не на другие типы клеток, указывает на то, что блокирование Src в ЭК объясняет ультраструктурные наблюдения. Более того, большинство наблюдаемых изменений непосредственно связаны с изменениями в ЭК контактах клетка-клетка и целостностью кровеносных сосудов, ни одно из которых не наблюдалось ни у животных после Src инсульта, ни у животных дикого типа, обработанных ингибитором Src. Необходимо отметить, что роль Src в ПС может быть отнесена к ее способности к фосфорилированию VE-кадгерина и β-катенина и способности вызывать диссоциацию комплекса таких белков, соединенных с рецептором VEGF, Flk.
Способы настоящего изобретения хорошо подходят для специфического уменьшения поражения тканей, индуцированного ПС, в частности которое является результатом инфаркта миокарда, поскольку целевое ингибирование действия тирозинкиназы семейства Src фокусирует ингибирование на ПС без длительного воздействия на другие VEGF-индуцированные ответы, которые могут быть благоприятными для восстановления от повреждения.
По-видимому, Src контролирует поражение тканей путем влияния на проницаемость сосудов и, таким образом, представляет собой новую терапевтическую цель в патологии ишемии миокарда. Степень поражения миокарда после окклюзии коронарной артерии может быть значительно уменьшена при помощи сильного фармакологического ингибирования тирозинкиназы семейства Src.
В общем случае применение синтетических относительно низкомолекулярных химических ингибиторов является безопасным и более контролируемым, чем применение относительно более больших белков. Таким образом, первые являются предпочтительными в качестве терапевтически активных агентов.
Вышеуказанная спецификация позволяет специалистам в данной области техники применять на практике настоящее изобретение. Более того, различные модификации настоящего изобретения дополнительно к таковым, показанным и изложенным в настоящем описании, будут очевидными специалистам в данной области техники из вышеуказанного описания и входят в объем прилагаемой формулы изобретения.
Claims (16)
1. Способ лечения млекопитающего, страдающего от инфаркта миокарда, включающий введение млекопитающему терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции, включающей химический ингибитор тирозинкиназы семейства Src, причем ингибитор тирозинкиназы выбирают из группы, состоящей из 4-амино-5-(4-метилфенил)-7-(трет-бутил)пиразоло[3,4-d-]пиримидина, 4-амино-5-(4-хлорфенил)-7-(трет-бутил)пиразоло[3,4-d-]пиримидина и их смеси.
2. Способ по п.1, в котором млекопитающее является человеком.
3. Способ по п.1, в котором млекопитающее не является человеком.
4. Способ по п.1, в котором ингибитор тирозинкиназы семейства Src представляет собой ингибитор белка Src.
5. Способ по п.1, в котором фармацевтическую композицию вводят млекопитающему посредством внутрибрюшинной инъекции.
6. Способ по п.1, в котором фармацевтическую композицию вводят млекопитающему посредством внутривенной инъекции.
7. Способ по п.1, в котором фармацевтическую композицию вводят млекопитающему в течение примерно 6 ч после инфаркта миокарда.
8. Способ по п.1, в котором фармацевтическую композицию вводят млекопитающему в течение примерно 24 ч после инфаркта миокарда.
9. Изделие, содержащее упаковочный материал и фармацевтическую композицию, содержащуюся в упаковочном материале, в котором фармацевтическая композиция находится в количестве, способном уменьшить некроз в коронарной ткани, страдающей от затрудненной подачи крови, причем упаковочный материал содержит наклейку, которая указывает, что указанная фармацевтическая композиция может быть применена для лечения инфаркта миокарда, и при этом фармацевтическая композиция содержит химический ингибитор тирозинкиназы семейства Src и фармацевтически приемлемый носитель, в котором ингибитор тирозинкиназы семейства Src выбирают из группы, состоящей из 4-амино-5-(4-метилфенил)-7-(трет-бутил)пиразоло[3,4-d-]пиримидина, 4-амино-5-(4-хлорфенил)-7-(третбутил)пиразоло[3,4-d-]пиримидина и их смеси.
10. Изделие по п.9, в котором ингибитор тирозинкиназы семейства Src представляет собой ингибитор белка Src.
11. Способ профилактического лечения млекопитающего с риском инфаркта миокарда, включающий введение млекопитающему профилактического количества фармацевтической композиции, содержащей химический ингибитор тирозинкиназы семейства Src, причем ингибитор тирозинкиназы выбирают из группы, состоящей из 4-амино-5-(4-метилфенил)-7-(трет-бутил)пиразоло[3,4-d-]пиримидина, 4-амино-5-(4-хлорфенил)-7-(трет-бутил)пиразоло[3,4-d-]пиримидина и их смеси.
12. Способ по п.11, в котором млекопитающее не является человеком.
13. Способ по п.11, в котором млекопитающее является человеком.
14. Способ по п.11, в котором фармацевтическую композицию вводят млекопитающему орально.
15. Способ по п.11, в котором фармацевтическую композицию вводят млекопитающему парентерально.
16. Применение химического ингибитора тирозинкиназы семейства Src, выбранного из группы, состоящей из 4-амино-5-(4-метилфенил)-7-(трет-бутил)пиразоло[3,4-d-] пиримидина, 4-амино-5-(4-хлорфенил)-7-(трет-бутил)пиразоло[3,4-d-]пиримидина и их смеси для производства лекарственного средства для лечения инфаркта миокарда.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US10/298,377 | 2002-11-18 | ||
US10/298,377 US20030130209A1 (en) | 1999-12-22 | 2002-11-18 | Method of treatment of myocardial infarction |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2005119174A RU2005119174A (ru) | 2006-01-20 |
RU2330665C2 true RU2330665C2 (ru) | 2008-08-10 |
Family
ID=32324361
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2005119174/14A RU2330665C2 (ru) | 2002-11-18 | 2003-11-18 | Способ лечения инфаркта миокарда |
Country Status (13)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20030130209A1 (ru) |
EP (1) | EP1567160A4 (ru) |
JP (1) | JP2006510620A (ru) |
KR (1) | KR101174333B1 (ru) |
CN (1) | CN100577170C (ru) |
AU (1) | AU2003293037A1 (ru) |
BR (1) | BR0316382A (ru) |
CA (1) | CA2506476C (ru) |
MX (1) | MXPA05005307A (ru) |
PL (1) | PL209912B1 (ru) |
RU (1) | RU2330665C2 (ru) |
WO (1) | WO2004045563A2 (ru) |
ZA (1) | ZA200504774B (ru) |
Families Citing this family (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2008002676A2 (en) | 2006-06-29 | 2008-01-03 | Kinex Pharmaceuticals, Llc | Biaryl compositions and methods for modulating a kinase cascade |
TWI457336B (zh) | 2006-12-28 | 2014-10-21 | Kinex Pharmaceuticals Llc | 調節激酶級聯之組成物及方法 |
US8642067B2 (en) | 2007-04-02 | 2014-02-04 | Allergen, Inc. | Methods and compositions for intraocular administration to treat ocular conditions |
EP3777832A1 (en) | 2007-10-20 | 2021-02-17 | Athenex, Inc. | Pharmaceutical compositions for modulating a kinase cascade and methods of use thereof |
WO2009142679A2 (en) * | 2008-03-26 | 2009-11-26 | Orthologic Corp. | Methods for treating acute myocardial infarction |
EP2905024A1 (en) * | 2014-02-07 | 2015-08-12 | Institut Quimic De Sarriá Cets, Fundació Privada | Pyrido[2,3-d]pyrimidine-7(8H)-one derivatives for the treatment of infections caused by Flaviviridae |
WO2018124236A1 (ja) * | 2016-12-27 | 2018-07-05 | 国立大学法人大阪大学 | 難治性心疾患治療用医薬組成物 |
CN113209096B (zh) * | 2021-05-17 | 2022-06-14 | 武汉大学 | 培西达替尼在制备预防、缓解和/或治疗心肌梗死及其相关疾病药物中的应用 |
Family Cites Families (15)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5731343A (en) * | 1995-02-24 | 1998-03-24 | The Scripps Research Institute | Method of use of radicicol for treatment of immunopathological disorders |
US5593997A (en) * | 1995-05-23 | 1997-01-14 | Pfizer Inc. | 4-aminopyrazolo(3-,4-D)pyrimidine and 4-aminopyrazolo-(3,4-D)pyridine tyrosine kinase inhibitors |
AU4753697A (en) | 1996-10-01 | 1998-04-24 | South Alabama Medical Science Foundation | Method for diminishing myocardial infarction using protein phosphatase inhibitors |
US7863444B2 (en) * | 1997-03-19 | 2011-01-04 | Abbott Laboratories | 4-aminopyrrolopyrimidines as kinase inhibitors |
US6235740B1 (en) * | 1997-08-25 | 2001-05-22 | Bristol-Myers Squibb Co. | Imidazoquinoxaline protein tyrosine kinase inhibitors |
NZ503491A (en) * | 1997-11-10 | 2002-08-28 | Bristol Myers Squibb Co | 2-substituted amino-1,3-benzothiazole derivatives useful as protein tyrosine kinase inhibitors |
DE69943374D1 (de) * | 1998-05-29 | 2011-06-01 | Us Government | Verfahren zur modulation der angiogenese mittels der tyrosin kinase src |
SK3852001A3 (en) * | 1998-09-18 | 2003-03-04 | Basf Ag | 4-Aminopyrrolopyrimidines as kinase inhibitors |
US6921763B2 (en) * | 1999-09-17 | 2005-07-26 | Abbott Laboratories | Pyrazolopyrimidines as therapeutic agents |
SK287575B6 (sk) * | 1999-12-22 | 2011-03-04 | The Scripps Research Institute | Farmaceutická kompozícia obsahujúca nukleovú kyselinu, použitie nukleovej kyseliny a výrobný artikel obsahujúci farmaceutickú kompozíciu |
US6521618B2 (en) | 2000-03-28 | 2003-02-18 | Wyeth | 3-cyanoquinolines, 3-cyano-1,6-naphthyridines, and 3-cyano-1,7-naphthyridines as protein kinase inhibitors |
SE518028C2 (sv) | 2000-04-17 | 2002-08-20 | Ericsson Telefon Ab L M | Förfarande och metod för att undvika överbelastning i ett cellulärt radiosystem med makrodiversitet |
MXPA03009257A (es) * | 2001-04-10 | 2004-01-29 | Vertex Pharma | Derivados de isoxaxol como inhibidores de src y otras proteinas cinasas. |
WO2003006444A2 (en) * | 2001-07-09 | 2003-01-23 | Aventis Pharmaceuticals Inc. | Substituted amides, sulfonamides and ureas useful for inhibiting kinase activity |
CA2500368A1 (en) * | 2002-10-04 | 2004-04-22 | Caritas St. Elizabeth's Medical Center Of Boston, Inc. | Inhibition of src for treatment of reperfusion injury related to revascularization |
-
2002
- 2002-11-18 US US10/298,377 patent/US20030130209A1/en not_active Abandoned
-
2003
- 2003-11-18 EP EP03790028A patent/EP1567160A4/en not_active Withdrawn
- 2003-11-18 PL PL377040A patent/PL209912B1/pl unknown
- 2003-11-18 JP JP2004554028A patent/JP2006510620A/ja active Pending
- 2003-11-18 RU RU2005119174/14A patent/RU2330665C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2003-11-18 AU AU2003293037A patent/AU2003293037A1/en not_active Abandoned
- 2003-11-18 CN CN200380108930A patent/CN100577170C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2003-11-18 WO PCT/US2003/037653 patent/WO2004045563A2/en active Application Filing
- 2003-11-18 BR BR0316382-2A patent/BR0316382A/pt not_active IP Right Cessation
- 2003-11-18 CA CA2506476A patent/CA2506476C/en not_active Expired - Fee Related
- 2003-11-18 KR KR1020057008850A patent/KR101174333B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2003-11-18 MX MXPA05005307A patent/MXPA05005307A/es active IP Right Grant
-
2005
- 2005-06-10 ZA ZA2005/04774A patent/ZA200504774B/en unknown
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
OWENS D.W. et al. The catalytic activity of the Src famili kinases is reqired to disrupt cadheren-dependent cell-cell contacts. Mol. Biol. Cell. 2000, 11:51-64. * |
СУМАРОКОВ А.В. и др. Клиническая кардиология. Универсум Паблишинг, 1996, с.37. HATTORI R. et al. Src tyrosine kinase is the trigger but not mediator of ischemic preconditioning". Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 2001 Sep; 281(3):H1066-74, реферат. HENKE JH et al. Discovery of a novel, potent, and Src famili-selective tyrosine kinase inhibitor. J. Biol. Chem. 1996, vol.271, No2, Jan12:695-701, * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP1567160A4 (en) | 2009-06-10 |
CN1738624A (zh) | 2006-02-22 |
PL209912B1 (pl) | 2011-11-30 |
CA2506476A1 (en) | 2004-06-03 |
EP1567160A2 (en) | 2005-08-31 |
BR0316382A (pt) | 2005-10-04 |
JP2006510620A (ja) | 2006-03-30 |
RU2005119174A (ru) | 2006-01-20 |
CN100577170C (zh) | 2010-01-06 |
WO2004045563A2 (en) | 2004-06-03 |
PL377040A1 (pl) | 2006-01-23 |
AU2003293037A1 (en) | 2004-06-15 |
WO2004045563A3 (en) | 2004-12-23 |
ZA200504774B (en) | 2006-03-29 |
MXPA05005307A (es) | 2005-08-16 |
KR20050086698A (ko) | 2005-08-30 |
US20030130209A1 (en) | 2003-07-10 |
CA2506476C (en) | 2011-09-27 |
KR101174333B1 (ko) | 2012-08-16 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Monnier et al. | Involvement of caspase-6 and caspase-8 in neuronal apoptosis and the regenerative failure of injured retinal ganglion cells | |
AU2005223044A1 (en) | Method of treatment of myocardial infarction | |
Hughes et al. | Activity and injury-dependent expression of inducible transcription factors, growth factors and apoptosis-related genes within the central nervous system | |
US20090209473A1 (en) | Componds and methods for pormoting angiogenesis | |
Peng et al. | Therapeutic time window and dose dependence of xenon delivered via echogenic liposomes for neuroprotection in stroke | |
HRP20040406A2 (en) | Methods for treating ocular neovascular diseases | |
BRPI0615962A2 (pt) | uso de um composto selecionado do grupo que consiste em um inibidor proteassomal, um inibidor de autofagia, um inibidor lisossomal, um inibidor do trasporte de proteìna do er ao golgi, um inibidor de chaperonina hsp90, um ativador da resposta a choque térmico, um inibidor de glicosidade, e um inibidor de histona deacetilase, uso de 11-cis-retinal ou 9-cis-retinal e um composto selecionado do grupo que consiste em um inibidor proteassomal, um inibidor de autofagia, um inibidor lissosomal, um inibidor do transporte de proteìna do er ao golgi, um inibidor de chaperonina hsp90, um ativador de resposta a choque térmico, um inibidor de glicosidase, e um inibidor de histona deacetilase, método para aumentar a quantidade de um conformação bioquimicamente funcional de uma proteìna em uma célula, composição farmacêutica para o tratamento de um pcd ocular, composição farmacêutica para o tratamento de retinite pigmentosa, kit para o tratamento de um pcd ocular, kit para o tratamento de retinite pigmentosa, método para a identificação de um composto útil para o tratamento de um indivìduo que tem um pcd ocular, método para a identificação de um composto útil para o tratamento de um indivìduo que tem retinite pigmentosa, uso de um inibidor proteassomal ou um inibidor de autofagia e método para a produção de uma proteìna recombinante em uma conformação bioquimicamente funcional | |
ZA200504774B (en) | Method of treatment of myocardial infarction | |
Gu et al. | Artemisinin attenuates post-infarct myocardial remodeling by down-regulating the NF-κB pathway | |
Chiu et al. | Molecular machinery and pathophysiology of mitochondrial dynamics | |
Chen et al. | Different effects of clazosentan on consequences of subarachnoid hemorrhage in rats | |
US20080260644A1 (en) | Chloride transport upregulation for the treatment of traumatic brain injury | |
Yokobori et al. | Pathobiology of primary traumatic brain injury | |
US20060167021A1 (en) | Inhibition of src for treatment of reperfusion injury related to revascularization | |
EP2895184A1 (en) | Modulation of podoplanin mediated platelet activation | |
US20080200481A1 (en) | Method of treatment of myocardial infarction | |
US10314826B2 (en) | Methods of treatment of ischemia-induced angiogenesis and arteriogenesis | |
WO2002017899A2 (en) | Regulation of angiogenesis via modulation of edg receptor mediated signal transduction comprising sphingosine-1-phosphate administration | |
Park et al. | Effect of imatinib mesylate and rapamycin on the preformed intimal hyperplasia in rat carotid injury model | |
US10751324B2 (en) | Treatment of TNF- alpha cytotoxicity | |
CA2304956C (en) | Pharmaceutical composition for preventing or treating ischemic diseases | |
Ammar et al. | A randomized controlled trial of intra-aortic adenosine infusion before release of the aortic cross-clamp during coronary artery bypass surgery | |
WO2018183219A2 (en) | Nucleic acid-based compositions and methods for treating small vessel diseases | |
WO2020143548A1 (zh) | 神经调节蛋白用于预防、治疗或延迟心肌损伤的方法和组合物 | |
KR102118116B1 (ko) | Foxp3 또는 이를 코딩하는 유전자를 포함하는 나노입자 및 이의 용도 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20161119 |