RU2284354C2 - Пробиотик - Google Patents

Пробиотик Download PDF

Info

Publication number
RU2284354C2
RU2284354C2 RU2003137810/13A RU2003137810A RU2284354C2 RU 2284354 C2 RU2284354 C2 RU 2284354C2 RU 2003137810/13 A RU2003137810/13 A RU 2003137810/13A RU 2003137810 A RU2003137810 A RU 2003137810A RU 2284354 C2 RU2284354 C2 RU 2284354C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
strain
lactobacillus fermentum
probiotic
activity
foodstuffs
Prior art date
Application number
RU2003137810/13A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2003137810A (ru
Inventor
Марика МИКЕЛСААР (EE)
Марика МИКЕЛСААР
Михкель ЗИЛМЕР (EE)
Михкель ЗИЛМЕР
Тииу КУЛЛИСААР (EE)
Тииу КУЛЛИСААР
Хеиди АННУК (EE)
Хеиди АННУК
Епп СОНГИСЕПП (EE)
Епп СОНГИСЕПП
Original Assignee
Тартуский Университет
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Тартуский Университет filed Critical Тартуский Университет
Publication of RU2003137810A publication Critical patent/RU2003137810A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2284354C2 publication Critical patent/RU2284354C2/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A61K35/741—Probiotics
    • A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
    • A61K35/747—Lactobacilli, e.g. L. acidophilus or L. brevis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
  • Food Preservation Except Freezing, Refrigeration, And Drying (AREA)
  • Anti-Oxidant Or Stabilizer Compositions (AREA)
  • Fodder In General (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

Изобретение относится к биотехнологии. Штамм Lactobacillus fermentum ME-3 DSM 14241 выделен из фекалий здорового однолетнего эстонского ребенка. Проявляет высокое антимикробное действие на штаммах Escherichia coli, Shigella sonnei, Staphylococcus aureus, Salmonella typhimurium 1 и 2 и умеренную активность против штаммов Helicobacter pylori, штамм проявляет активность Mn-супероксиддисмутазы, и как его лизаты, так и интактные клетки имеют антиокислительную активность, увеличивающую отношение восстановленного глутатиона к окисленному глутатиону в сыворотках крови, и способны улавливать токсические гидроксильные радикалы. Штамм L. fermentum ME-3 DSM 14241 применяют в качестве пробиотика, для приготовления функциональных пищевых продуктов (йогурта, сыра) и непищевых препаратов (таблеток, капсул), для профилактики кишечных инфекций и уроинфекций, как для предупреждения, так и для лечения хронических заболеваний, вызываемых продолжительным окислительным стрессом. Штамм проявляет высокое антимикробное действие, что способствует предупреждению размножения патогенов в продуктах питания, ферментированных этим штаммом, и предупреждает связанные с питанием инфекции. 3 з.п. ф-лы, 6 табл.

Description

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ
Данное изобретение относится к биотехнологии и будет использовано в качестве нового пробиотика, применяемого в получении функциональных пищевых продуктов (йогурта, сыра) и непищевых препаратов (таблеток, капсул) для предупреждения или лечения различных заболеваний.
ПРЕДПОСЫЛКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Пробиотики являются живыми микробными пищевыми добавками, которые оказывают полезное действие на микробиологический баланс кишечника и здоровье человека. Пробиотики используют в качестве функциональных пищевых продуктов. Функциональные пищевые продукты являются пищевыми продуктами, потребляемыми дополнительно к обычным пищевым продуктам и содержащими биопрепараты (в том числе пробиотики) или другие компоненты, благоприятно влияющие на здоровье человека или уменьшающие риск заболеваний.
Пробиотики потребляются в виде компонентов пищевых продуктов (пробиотического йогурта или сыра) или непищевых препаратов (лиофилизированных микробных культур).
Большинство пробиотиков являются молочно-кислыми бактериями, главным образом молочно-кислыми бактериями (лактобациллами). Лактобациллы являются непатогенными микроорганизмами, колонизирующими кишечник и мочеполовые пути с раннего детства до старого возраста. В настоящее время успешно используют несколько коммерческих пробиотических лактобацилл, среди которых Lactobacillus rhamnosus GG (Saxelin M. Lactobacillus GG - a human probiotic strain with thorough clinical documentation. Food Rev Int 1997; 13: 293-313) является наиболее известным. Недавно были описаны и запатентованы несколько новых штаммов лактобацилл, например L. reuterii (патент Кореи KR 211529, C 12 N 1/20, Korea Institute Sciences Technology, 1999), выделенный из организма животного и по этой причине непригодный для применения человеком.
Несколько штаммов Lactobacillus fermentum используют для коррекции и стабилизации кишечной микрофлоры в случае дисбактериоза и инфекций мочеполовых путей с различными этиологиями. Штамм микроорганизма Lactobacillus fermentum 39 используют для получения бактериального биологического препарата (PCT/SU 89/00264 (WO 91/05852), C 12 N 1/20, А 61 К 35/74, University of Tartu, 1991). Штамм Lactobacillus fermentum 90-TS-4 (RU 2133272, C 12 N 1/20, А 61 К 35/74, Akivo Lentsner et al., 1999) характеризуется по лектинотипированию как штамм, имеющий чувствительный к маннозе профиль клеточной стенки. Этот препарат предписывают для применения в гинекологии.
Существуют некоторые хорошо известные пробиотики, нацеленные против только одного патогена (например, Salmonella) (патент США 54785576 А 61 К 35/74, US Agriculture, 1995; патент США 5340577, А 61 К 35/74, US Army, 1994). До настоящего времени не был описан штамм лактобацилл с сильным антимикробным действием против многочисленных патогенов и условно-патогенных микроорганизмов.
Подобным образом еще не известен такой штамм микроорганизма, который мог бы иметь природную антибиотическую устойчивость против лекарственных средств, используемых наиболее часто в лечении инфекций. Это свойство позволило бы использовать такие штаммы в случае принимающих антибиотики пациентов. В ветеринарии используют ряд различных микроорганизмов, содержащих также один штамм L. fermentum, но этот штамм не имеет сопутствующего антимикробного и антиокислительного действия (патент России RU 2119796, А 61 К 35/66, Закрытое акционерное общество "BAKS", 1998).
Антиокислительные препараты, подобные витаминам Е и С, бета-каротину и др., получают в настоящее время большое внимание в связи со здоровым питанием. Избыточное образование химически активных (реакционноспособных) молекул кислорода (ROS) в дыхании ткани может вызывать повреждение клеток и, следовательно, тканей. Образование химически активного кислорода может зависеть от некоторых стресс-факторов, таких как алкоголь, пероксиды и некоторые лекарственные средства.
Обычно избыточное окисление тесно связано с обусловленными питанием заболеваниями, возрастом, нарушениями центральной нервной системы и желудочно-кишечного тракта, раком и другими патологическими состояниями. Организм имеет несколько систем защиты против токсикогенности кислорода. Для гарантии функционирования этих систем важным является прием антиоксилительных веществ.
Из известных решений ближе всего к данному изобретению является патент, описывающий антиокислительные пищевые продукты, антиокислительный препарат и способ антиокисления (ЕР 0649603, A 23 L 3/3472, A 23 L 3/3571, Otsuka Pharma Co Ltd. 1995). Целью этого изобретения является препарат, который содержит природное вещество, включающее в себя марганец (листья растения чая) и микроорганизм Lactobacillus plantarum, который продуцирует систему каталазы и супероксиддисмутазы, увеличивая таким образом антиокислительную активность организма-хозяина. Авторы этого изобретения заявляют, что этот препарат предотвращает заболевания, развивающиеся вследствие действия химически активного кислорода. Однако они не описывают действия конкретного штамма Lactobacillus с уменьшающей реакционноспособный кислород антиокислительной активностью или улавливанием гидроксильных радикалов in vitro. Кроме того, этот штамм микроорганизма является также несовершенным, поскольку для получения предполагаемого антиокислительного действия в организме (in vivo) необходимо добавить некоторое количество Mn-содержащего материала (листья растения чая) к этому препарату, так как только в этом случае реализуется его SOD-(супероксиддисмутазная)-активность.
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Целью данного изобретения является обеспечение штамма микроорганизма в качестве нового антимикробного и антиокислительного пробиотика для применения в фармацевтической и пищевой промышленности, а также в медицине в качестве устойчивого к антибиотикам препарата для профилактики и лечения желудочно-кишечных и урологических инфекций и против окислительного стресса.
Объект данного исследования - штамм микроорганизма Lactobacillus fermentum ME-3 - был выделен из фекальной пробы здорового ребенка во время сравнительного исследования микрофлоры детей Эстонии и Швеции с использованием среды MRS (Oxoid) и культивированием его в СО2-содержащей окружающей среде (Sepp et al., Intestinal microflora of Estonian and Swedish infants, Acta Paediatricia, 1997, 86, 956-961).
Штамм микроорганизма Lactobacillus fermentum ME-3 выделяли посевом разведений фекалий здорового однолетнего эстонского ребенка (10-2-107 в фосфатном буфере с 0,04% тиогликолевой кислотой; рН 7,2). Эти разведения высевали на свежеприготовленную MRS-агаровую среду и культивировали при 37°С в среде с СО2. Штамм, который является объектом данного изобретения, выделяли из разведения 10-5 на основании характерной морфологии колоний и клеток. Затем следовала предварительная и более точная идентификация. С использованием дополнительных тестов этот штамм был отобран из других выделенных лактобацилл из того же самого ребенка на основании его особых свойств.
Тот факт, что микробный штамм Lactobacillus fermentum ME-3 происходит из кишечного тракта здорового ребенка, доказывает его GRAS - (обычно признаваемый как безопасный) - статус, т.е. этот штамм микроорганизма является безопасным для организма человека и пригодным для перорального введения.
Культурально-морфологические свойства определяли после культивирования этого штамма на средах MRS-агаре и MRS-бульоне (OXOID). Микробные клетки являются грамположительными палочками правильной формы, расположенными в параллельных цепях, не образующими спор, средней толщины и различной длины (2×3-5 мкм).
Физиолого-биохимические свойства: MRS-бульон был пригоден для культивирования этого микробного штамма в течение 24-48 часов в среде с 10% CO2, после чего в бульоне происходил гомогенный мутный рост. Колонии микроорганизма на MRS-агаре являются белыми, округленными, имеющими правильные края.
Оптимальная температура роста равна 37°С, микроорганизм размножается также при 45°С, но не растет при 15°С. Оптимальная среда для роста имеет рН 6,5.
Основными свойствами являются отрицательный каталазный тест, продуцирование газа при ферментации глюкозы, продуцирование NH3 из аргинина и продуцирование лизоцима. Во время репродукции в молоке он продуцирует 1,07% кислоты.
Штамм с вышеупомянутыми свойствами идентифицировали на основании биохимической активности с использованием набора API 50 CHL System (BioMerieux, France) как Lactobacillus fermentum (ID% 99,6, Т 0,87, только 1 тест был противоположным). Ферментировали следующие сахара и спирты: рибозу, галактозу, D-глюкозу, D-фруктозу, D-маннозу, эскулин, мальтозу, лактозу, мелибиозу, сахарозу, D-рафинозу, D-тагатозу и глюконат.
Профиль метаболитов Lactobacillus fermentum ME-3 был характерным для гетероферментативного метаболизма, как определено способом газовой хроматографии (Hewlett-Packard model 6890). Профиль ферментации зависел от среды инкубирования: кроме молочной и уксусной кислот в среде с CO2 продуцировалась в большом количестве янтарная кислота, но в анаэробной среде продуцировался в большом количестве этанол наряду с вышеупомянутыми веществами (таблица 1). Как янтарная кислота, так и этанол могут усиливать свойства стабильности этого микробного штамма в молоке, ферментируемом данным штаммом.
Таблица 1.
Концентрация уксусной кислоты, молочной кислоты, янтарной кислоты и этанола (мг/мл) в среде MRS при культивировании Lactobacillus fermentum ME-3 в микроаэрофильной и анаэробной среде в течение 24 и 48 часов
Figure 00000001
Молекулярная идентификация
Молекулярная идентификация при помощи ИТС-ПЦР (внутреннего транскрибируемого спейсера - полимеразной цепной реакции) с использованием Lactobacillus fermentum АТСС 14931 в качестве ссылочного штамма подтвердила более раннюю идентификацию с использованием API 50 CHL.
Микроорганизм с вышеупомянутыми свойствами был депонирован в Немецкой Коллекции для Микроорганизмов и Клеточных культур GmbH-s, регистрационный номер депозита DSM 14241 (19.04.2001).
Антимикробная активность
Lactobacillus fermentum ME-3 проявляет высокое антимикробное действие на штаммах Escherichia coli, Shigella sonnei, Staphylococcus aureus, Salmonella typhimurium 1 и 2 и Helicobacter pylori in vitro (таблица 2).
Таблица 2.
Антимикробная активность штамма Lactobacillus fermentum ME-3 на модифицированном MRS-агаре, в MRS-бульоне и молоке
Lactobacillus fermentum ME-3 Escherichia coli Shigella sonnei Staphylococcus aureus Salmonella typhimurium 1 и 2 Helicobacter pylori
MRS-агар Зона ингибирования (мм)
CO2/анаэробная среда 24/22 26/21 20/19 25.8/ 24.7 23.8/19.7 13.2/13.1
MRS-бульон Уменьшение общего счета (log10) в сравнении с первоначальным счетом
  log 6.0 log 6.7 log 0.8 log 6.3 log 3.8 не определено
Молоко Супрессия после различных интервалов времени (24-48 часов)
  24 t 32 t 24 t 32 t 48 t не определено
С использованием ферментации молока удалось показать, что патогены, инокулированные в молоко, убивались в течение 24-48 часов, если молоко ферментировали с Lactobacillus fermentum ME-3. Такое свойство этого штамма может способствовать предупреждению размножения патогенов в продуктах (йогурте, сыре), ферментированных этим штаммом, и предупреждать связанные с питанием инфекции.
Органические кислоты и этанол, продуцируемые Lactobacillus fermentum ME-3, могли бы обеспечивать высокое антимикробное действие этого микроорганизма.
Устойчивость к антибиотикам
Согласно диск-диффузионному тесту (BBL Sensi disks) и Е-тесту (АВ Biodisk, Solna), Lactobacillus fermentum ME-3 был устойчивым к метронидазолу, офлоксацину, азтреонаму, цефокситину и TMP-SMX. Это позволяет использовать штамм Lactobacillus fermentum ME-3 в качестве препарата, сопровождающего лечение антибиотиками, в случае кишечных инфекций и уроинфекций.
Поверхностные структуры микробной клетки
Профиль углеводов поверхностной структуры микробных клеток Lactobacillus fermentum ME-3 определяли с использованием лектинотипирования. Этот штамм лактобацилл агглютинировал с пектином Griffonia simplifolia I, который является специфическим в отношении лигандов Gal и GalNAc в клеточной стенке.
Штамм Lactobacillus fermentum ME-3 не реагировал со следующими другими пектинами: Concanavalin ensiformis (Con А), Griffonia simplicifolia II, Arachis hypogaea (PNA), Vicia sativa (VSA) и Triticum vulgaris (WSA).
Таким образом, особый состав гликокаликса клеточной стенки Lactobacillus fermentum ME-3 становился ясным на основе лектинотипирования, он содержал остатки галактозы и N-ацетилгалактозамина. Эти соединения действуют в качестве адгезинов для сцепления с рецепторами слизистой оболочки эпителиальных клеток верхних мочевых путей.
Это является возможностью блокирования устойчивых к маннозе волосков (пилусов) Escherichia coli, что делает штамм авторов данного изобретения применимым в профилактике инфекций мочевых путей.
Антиокислительные свойства
Лактобацилл инкубируют в MRS-бульоне (Oxoid Ltd.) в течение 24 часов и центрифугируют при 4°С (1500 об/мин) в течение 10 минут с получением осадка, промывают изотонической солью (4°С) и суспендируют до плотности 1,15% KCl (Sigma, USA). Плотность суспензии была при OD600 1/1·109 бактериальных клеток в мл-1).
Для получения лизатов эти клетки разрушали обработкой звуком (В-12 Branson Sonic Power Company, Danbury, Connecticut) в 35 вибрациях с-1 в течение 10 минут на бане со льдом и затем в течение 10 минут при -18°С. Эту суспензию центрифугировали при 4°С при 10000 g/r в течение 10 минут и супернатант фильтровали (мембраны MILLEY-GS, стерильные, 0,22 мкм; Millipore S.A., 67 Molsheim, France) с получением бесклеточного экстракта. Клетки Lactobacillus fermentum ME-3 и лизат продуцировали Н2О2 в значительном количестве (таблица 3).
Таблица 3.
Общая антиокислительная способность штаммов Lactobacillus fermentum МЕ-3 и Е-338-1-1 (согласно тестам LA и TAS), содержание пероксида водорода, отношение восстановленного глутатиона к окисленному глутатиону и активность супероксиддисмутазы
Свойства Lactobacillus fermentum МЕ-3 Lactobacillus fermentum Е-338-1-1
  Интактные клетки Интактные клетки
ТАА в LA-тесте (%) 29±0.7 (n=5) 0
TAS (ммоль/л) 0.16±0.03 (n=5) 0
H2O2 (мкг/мл) 31±26 (n=3) 49±20 (n=3)
  Лизат клеток Лизат клеток
LA-тест (%) 59±3.8 (n=5) 0
H2O2 (мкг/мл) 229±37 (n=4) 137±25 (n=3)
TGSH 12.5±4.1 5.5±3.0
GSSG (мкг/мл) 2.59±2.01 5.5±2.4
GSH (мкг/мл) 9.95±3.30 Marks
GSSG/GSH 0.28±0.17 0е
30D (Е/мг белка) 0.859±0.309 (n=3) не определено
Пояснения: LA-тест - тест линоленовой кислоты; ТАА - общая антиокислительная активность; TAS - общий антиокислительный статус; GSSG - окисленный глутатион; GSH - восстановленный глутатион; GSSG/GSH - отношение глутатиона восстановленного к глутатиону оксиленному; SOD - супероксиддисмутаза.
Lactobacillus fermentum МЕ-3 имеет Mn-SOD-активность, определяемую электрофорезом. Для определения L. fermentum МЕ-3 SOD-типа бесклеточный экстракт (30 мкг белка) разделяли на 10% неденатурирующем полиакриламидном геле. Изофермент SOD определяли воздействием на этот гель 15 мМ H2O2, после чего сохранялась SOD-активность. Пояснение: H2O2 ингибирует Fe-SOD, но не ингибирует Mn-SOD. Это доказывает, что Lactobacillus fermentum МЕ-3 имеет Mn-SOD-активность.
Штамм Lactobacillus fermentum МЕ-3 обнаруживает высокую величину ТАА (общей антиокислительной активности) в липидной среде на основе теста линоленовой кислоты, также высокую величину TAS (общего антиокислительного статуса) в водной среде (набор Randox, UK). В таблице 3 данные по антиокислительному штамму Lactobacillus fermentum E-338-1 добавлены для сравнения (таблица 3).
Клетки и лизаты штамма Lactobacillus fermentum МЕ-3 улавливают гидроксильные радикалы, что было доказано способом с терефталевой кислотой (27%±5%). 15 мМ восстановленный глутатион использовали для сравнения в качестве хорошо известного акцептора гидроксильных радикалов (84±4,6%). Lactobacillus fermentum МЕ-3 выживал в высокоокислительной среде Н2O2.
Повторное культивирование лиофилизированной культуры, поддерживаемой при комнатной температуре в течение продолжительного времени, доказало жизнеспособность этого штамма и стойкость его свойств. Это гарантирует, что лиофилизированный штамм Lactobacillus fermentum МЕ-3 мог бы быть использован в качестве непищевого продукта в схеме функционального питания.
НАИЛУЧШИЙ СПОСОБ ПРОВЕДЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Пример получения йогурта с высокоантиокислительными свойствами на основе штамма Lactobacillus fermentum МЕ-3 и испытание потребления этого йогурта здоровыми добровольцами.
Чистую культуру Lactobacillus fermentum ME-3 в 0,15% MRS-агаре используют для получения йогурта, дополнительно чистые культуры Lactobacillus plantarum и Lactobacillus buchneri высевают в свежее козье молоко, автоклавированное в течение 20 минут при 110°С. Три культуры этих штаммов лактобацилл смешивают в равных долях вместе с 2% Streptococcus thermophilus и добавляют при 0,2% содержании в автоклавированное козье молоко.
Lactobacillus fermentum ME-3 со штаммами лактобацилл и стрептококков будет гарантировать получение вкусного и высокоантиокислительного йогурта (таблица 4).
Таблица 4.
Антиокислительная активность чистой культуры Lactobacillus fermentum ME-3 и пробиотического йогурта
Штамм Общая антиокислительная активность (ТАА %)
  Клетки Йогурт
Lactobacillus fermentum ME-3 29 70
В таблицах 5 и 6 показаны изменения кишечной микрофлоры и показателей окислительного стресса сывороток крови здоровых добровольцев до и после приема пробиотического йогурта из козьего молока в течение 3 недель. Эти изменения доказывают антиокислительное (в том числе антиатерогенное) действие на организм человека.
Еще более высокая общая антиокислительная активность йогурта из козьего молока в сравнении с общей антиокислительной активностью интактных микробных клеток Lactobacillus fermentum ME-3 показана в таблице 5.
Микробные штаммы-добавки гарантируют стандартную кислотность и консистенцию йогурта.
Таблица 5.
Изменения кишечной микрофлоры здоровых добровольцев (n=16) до и после потребления пробиотического йогурта из козьего молока в течение 3 недель
  До После
  Колонизированные лица Отношение лактофлоры (%) Колонизированные лица Отношение лактофлоры (%)
Потребление йогурта из козьего молока (16 человек)
L. fermentum 4* 0,7-5,77 16* 0,5-49,9#
Потребление козьего молока (4 человека)
L. 0 0 1 0-32,9
Статистически значимое увеличение:
* Критерий Фишера показал различие количеств микроорганизмов в лицах, колонизированных Lactobacillus fermentum ME-3, р<0,015;
# Критерий суммы рангов Манна-Уитни показал различие относительной доли Lactobacillus fermentum ME-3 в лактофлоре.
Таким образом, после потребления йогурта в течение 3 недель этот микроб присутствовал в кишечном тракте всех добровольцев и количество Lactobacillus sp. заметно увеличивалось.
Таблица 6.
Показатели окислительного стресса сывороток крови добровольцев (n=16) до и после потребления пробиотического йогурта из козьего молока в течение 3 недель
Свойства Уровень стандарта Сыворотки крови до испытания Испытание крови после испытания Увеличение
ТАА (LA-тест, (%) 36±4.5 38±3.5 45±3.4 16%
TAS, ммоль/л 1.2±0.2 0.82±0.14 1.14±0.08 29%
Отношение Восстановленный/окисленный глутатион (GSSG/GSH) 0.17±0.08 0.15±0.01 0.11±0.035 -32%
Лаг-фаза LDL (время устойчивости) >30 мин 41±7.9 46±8.6 11%
Базовая величина диеновых конъюгатов (величина экстинкции) <0.3 0.27±0.06 0.23±0.06 -15%
Окисл.LDL (Е/л) >127 98±12 81±19 -18%
Пояснения: LA-тест - тест линоленовой кислоты; ТАА - общая антиокислительная активность; TAS - общий антиокислительный статус; GSSG - окисленный глутатион; GSH - восстановленный глутатион; GSSG/GSH - отношение глутатиона восстановленного к глутатиону оксиленному; окисл. LDL - окисленные липопротеины низкой плотности.
Таким образом, все параметры, определенные в сыворотках крови здоровых добровольцев, изменялись благоприятным образом в течение 3-недельного испытания с йогуртом.
Применения данного изобретения не ограничиваются вышеописанным показавшим преимущество примером. В рамках формулы данного изобретения возможны некоторые другие варианты, например получение пробиотического сыра и других молочных продуктов.

Claims (4)

1. Применение штамма Lactobacillus fermentum ME-3 DSM 14241 в качестве пробиотика.
2. Применение по п.1 для приготовления функционального продукта питания.
3. Применение по п.1 для приготовления продукта для профилактики и лечения кишечных инфекций и уроинфекций.
4. Применение по п.1 для приготовления продукта против окислительного стресса.
RU2003137810/13A 2001-06-29 2002-06-21 Пробиотик RU2284354C2 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EEP200100356A EE04580B1 (et) 2001-06-29 2001-06-29 Mikroorganismi tüvi Lactobacillus fermentum ME-3 kui antimikroobne ja antioksüdantne probiootikum
EEP200100356 2001-06-29

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2003137810A RU2003137810A (ru) 2005-05-20
RU2284354C2 true RU2284354C2 (ru) 2006-09-27

Family

ID=8161768

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2003137810/13A RU2284354C2 (ru) 2001-06-29 2002-06-21 Пробиотик

Country Status (9)

Country Link
US (1) US7244424B2 (ru)
EP (1) EP1401457B1 (ru)
AT (1) ATE489959T1 (ru)
DE (1) DE60238482D1 (ru)
DK (1) DK1401457T3 (ru)
EE (1) EE04580B1 (ru)
ES (1) ES2356119T3 (ru)
RU (1) RU2284354C2 (ru)
WO (1) WO2003002131A1 (ru)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2453591C1 (ru) * 2011-04-21 2012-06-20 Общество с ограниченной ответственностью "Бифилюкс" Штамм lactobacillus rhamnosus, используемый для получения продукции, содержащей лактобактерии
RU2640920C2 (ru) * 2011-10-27 2018-01-12 Саликс Фармасьютикалз, ИНК. Электролитные слабительные средства
RU2705250C2 (ru) * 2018-02-05 2019-11-06 Автономная Некоммерческая Организация "Научно-Исследовательский Центр Биотехнологии Антибиотиков И Других Биологически Активных Веществ "Биоан" Штамм Lactobacillus fermentum U-21, продуцирующий комплекс биологически активных веществ, осуществляющих нейтрализацию супероксид-аниона, индуцируемого химическими агентами
RU2757118C2 (ru) * 2019-12-11 2021-10-11 Общество с ограниченной ответственностью "Фармабиотики" Применение клеток штамма Lactobacillus fermentum U-21 для предотвращения патологических изменений в тканях, вызванных оксидативным стрессом

Families Citing this family (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20040170617A1 (en) * 2000-06-05 2004-09-02 Finegold Sydney M. Method of treating diseases associated with abnormal gastrointestinal flora
MXPA05010696A (es) * 2003-04-02 2006-04-18 Axcan Pharma S A Cepa de lactobacillus fermentum y usos de la misma.
DE102005062731A1 (de) * 2005-12-22 2007-06-28 Organobalance Gmbh Neue Lactobacillus Stämme und deren Verwendung
TWI346554B (en) 2008-04-30 2011-08-11 Genmont Biotech Inc Lactobacillus isolates having anti-inflammatory activities and uses of the same
EP2448420A2 (en) * 2009-06-30 2012-05-09 Chr. Hansen A/S A method for producing a fermented milk product
US8735089B2 (en) 2010-01-08 2014-05-27 Compagnie Gervais Danone Method for selecting bacteria with anti-oxidant action
ES2587136T3 (es) 2010-01-08 2016-10-20 Compagnie Gervais Danone Lactobacilos con acción antioxidante
US9707207B2 (en) 2010-05-26 2017-07-18 The United States Of America As Represented By The Department Of Veterans Affairs Method for diagnosing, preventing, and treating neurological diseases
EA028340B1 (ru) * 2011-06-08 2017-11-30 Новозимс А/С Лечение и профилактика инфекций, вызываемых helicobacter pylori у людей и животных, с помощью композиции, содержащей высушенные распылением клетки лактобактерий
JP6084162B2 (ja) * 2011-10-28 2017-02-22 株式会社明治 ナチュラルチーズおよびその製造方法
GB201223370D0 (en) * 2012-12-24 2013-02-06 Univ Tartu Method of treatment using lactobacillus fermentum ME-3
WO2015025072A1 (es) * 2013-08-23 2015-02-26 Consejo Superior De Investigaciones Científicas (Csic) Cepa probiótica de lactobacillus reuteri con actividad anti-helicobacter, producto probiótico o bioterapéutico que la comprende y uso del mismo
RS57471B1 (sr) * 2015-12-17 2018-09-28 Institut Za Molekularnu Genetiku I Geneticko Inzenjerstvo Univerzitet U Beogradu Nova probiotička starter kultura za humanu i animalnu primenu
CN106967630B (zh) * 2016-12-01 2019-12-10 广东省微生物研究所（广东省微生物分析检测中心） 一种发酵乳杆菌及其应用
WO2020214685A1 (en) * 2019-04-16 2020-10-22 Locus Ip Company, Llc Microbe-based emulsifying food additives
KR102424594B1 (ko) * 2020-11-30 2022-07-25 파이토지노믹스 주식회사 항염 활성 및 유해 미생물에 대한 항균 활성을 가지는 락토바실러스 퍼멘텀 okbl-l.fe 1 균주 및 이의 용도
CN116574630B (zh) * 2023-01-31 2024-02-20 江苏省农业科学院 具有抑菌和抗氧化活性的乳杆菌、适用于秸秆青贮的复合微生物菌剂及其应用
CN116590175A (zh) * 2023-04-12 2023-08-15 吉林省中科特殊食品创新研究院有限公司 一种发酵乳杆菌elf041及其应用

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IT1227154B (it) * 1988-08-05 1991-03-19 A Tosi Farmaceutici S R L Nova Composizioni farmaceutiche per uso ginecologico a base di lattobacilli
US6180100B1 (en) * 1994-09-30 2001-01-30 Urex Biotech., Inc. Lactobacillus compositions and methods for treating urinary tract infections
KR100211529B1 (ko) 1997-04-28 1999-08-02 박원훈 유해 미생물 억제 활성을 갖는 신규 내산성 락토바실러스 속 미생물 및 이를 함유하는 가축용 생균활성제
IT1299070B1 (it) * 1998-04-10 2000-02-07 Proge Farm Srl Ceppi di lattobacilli capaci di inibire e/o avere azione microbicida nei confronti di microorganismi patogeni e metodo di induzione e
RU2133272C1 (ru) 1998-06-11 1999-07-20 Акционерное общество открытого типа "Биомед" им.И.И.Мечникова Штамм бактерии lactobacillus fermentum 90-ts-4(21), используемый для получения эубиотического препарата для применения в гинекологической практике
IL143632A0 (en) * 1998-12-11 2002-04-21 Urex Biotech Inc Pharmaceutical compositions containing lactobacillus

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
MIKELSAAR MARIKA ET. AL: Antagonistic and antioxidative activity of Lactobacilli and survival in oxidative milieu, American journal of clinical nutrition, v.73, no 2S, february 2001, p.495S. ШЕНДЕРОВ Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание. Пробиотики и функциональное питание, т.111, М.: Грантъ, 2001, там же, с.84-87. *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2453591C1 (ru) * 2011-04-21 2012-06-20 Общество с ограниченной ответственностью "Бифилюкс" Штамм lactobacillus rhamnosus, используемый для получения продукции, содержащей лактобактерии
RU2640920C2 (ru) * 2011-10-27 2018-01-12 Саликс Фармасьютикалз, ИНК. Электролитные слабительные средства
RU2705250C2 (ru) * 2018-02-05 2019-11-06 Автономная Некоммерческая Организация "Научно-Исследовательский Центр Биотехнологии Антибиотиков И Других Биологически Активных Веществ "Биоан" Штамм Lactobacillus fermentum U-21, продуцирующий комплекс биологически активных веществ, осуществляющих нейтрализацию супероксид-аниона, индуцируемого химическими агентами
RU2757118C2 (ru) * 2019-12-11 2021-10-11 Общество с ограниченной ответственностью "Фармабиотики" Применение клеток штамма Lactobacillus fermentum U-21 для предотвращения патологических изменений в тканях, вызванных оксидативным стрессом

Also Published As

Publication number Publication date
DE60238482D1 (de) 2011-01-13
EE200100356A (et) 2003-02-17
ATE489959T1 (de) 2010-12-15
RU2003137810A (ru) 2005-05-20
EP1401457A1 (en) 2004-03-31
ES2356119T3 (es) 2011-04-05
EP1401457B1 (en) 2010-12-01
DK1401457T3 (da) 2011-01-17
US20040151708A1 (en) 2004-08-05
WO2003002131A1 (en) 2003-01-09
US7244424B2 (en) 2007-07-17
EE04580B1 (et) 2006-02-15
WO2003002131B1 (en) 2003-03-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2284354C2 (ru) Пробиотик
Tamime et al. Microbiological and technological aspects of milks fermented by bifidobacteria
Pithva et al. Probiotic attributes of autochthonous Lactobacillus rhamnosus strains of human origin
CN109182207B (zh) 一株具有调节血糖和胆固醇水平等益生功能的嗜酸乳杆菌La-SJLH001及其应用
TW202108757A (zh) 用以抗氧化之含乳酸菌菌株或其發酵物之組合物及其用途
Hadadji et al. Identification of cultivable Bifidobacterium species isolated from breast-fed infants feces in West-Algeria
RU2303058C2 (ru) Средство для лечения кишечных инфекций, осложненных дисбактериозом &#34;биобаланс-к&#34;
Zárate et al. Assessing survival of dairy propionibacteria in gastrointestinal conditions and adherence to intestinal epithelia
RU2261909C1 (ru) КОНСОРЦИУМ БИФИДОБАКТЕРИЙ Bifidobacterium bifidum 791-МБ, Bifidobacterium longum В 379М-МБ, Bifidobacterium adolescentis Г-7513- МБ, Bifidobacterium infantis 73-15-МБ, Bifidobacterium breve 79-119-МБ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ КИСЛО-МОЛОЧНЫХ, НЕФЕРМЕНТИРОВАННЫХ ПРОДУКТОВ, БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ДОБАВОК, БИФИДОСОДЕРЖАЩИХ ПРЕПАРАТОВ, КОСМЕТИЧЕСКИХ И ГИГИЕНИЧЕСКИХ СРЕДСТВ
CN106544287A (zh) 一株具有抗氧化能力及产细菌素的德式乳杆菌
Ghahremani et al. Phenotypic and genotypic characterization of lactic acid bacteria from traditional cheese in Khorramabad city of Iran with probiotic potential
KR20220004865A (ko) 프로바이오틱스 관련 효소 분비능, 항산화 활성, 담즙산염 분해 활성, 항균 활성이 있고, 유해효소 및 유해대사산물을 생성하지 않는 락토바실러스 브레비스 srcm101607 균주 및 이의 용도
Chaia et al. Dairy propionibacteria from milk or cheese diets remain viable and enhance propionic acid production in the mouse cecum
CN113881592B (zh) 一株罗伊氏乳杆菌及其应用
RU2584600C2 (ru) ШТАММ L.bulgaricus, СПОСОБНЫЙ ИНГИБИРОВАТЬ АДГЕЗИЮ ШТАММОВ Н.pylori К ЭПИТЕЛИАЛЬНЫМ КЛЕТКАМ
JP2007186529A (ja) 悪臭ガス放出減少方法
RU2506308C1 (ru) КОНСОРЦИУМ ПРОБИОТИЧЕСКИХ ШТАММОВ Lactobacillus rhamnosus И Lactobacillus plantarum ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ БАКТЕРИАЛЬНОГО ПРЕПАРАТА И ЗАКВАСКИ ПРЯМОГО ВНЕСЕНИЯ ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВА ФЕРМЕНТИРОВАННОГО МОЛОКА И ФЕРМЕНТИРОВАННОГО СВЕКОЛЬНОГО СОКА
RU2291194C2 (ru) Консорциум штаммов бифидобактерий, используемый для получения жидкого концентрата бифидобактерий, кисломолочных, неферментированных лечебно-профилактических продуктов, биологически активных добавок и бактерийных препаратов
KR100299306B1 (ko) 내산성및생장속도가높고혈중콜레스테롤저하능이우수한젖산균
RU2376366C2 (ru) Консорциум штаммов лактобактерий и способ получения на его основе биологически активной добавки или закваски для производства кисломолочных продуктов
TWI742406B (zh) 用以抗氧化之含乳酸菌菌株之食品組合物以及醫藥組合物
Shweta et al. In vitro studies on anti-inflammatory, antioxidant and antihyperglycemic activities of potential probiotic Pediococcus acidilactici NCDC 252
Mandal et al. Therapeutic potential of Lactobacillus ingluviei ADK10, a newly established probiotic organism against acetaminophen induced uremic rats
CN115025133B (zh) 一种乳酸菌口服液及其在缓解和治疗腹泻中的应用
TW201809263A (zh) 具免疫調節機能的植物乳桿菌及其用途