RU2256320C2 - Способ определения гликогена в экстракте из органов и тканей пчел - Google Patents
Способ определения гликогена в экстракте из органов и тканей пчел Download PDFInfo
- Publication number
- RU2256320C2 RU2256320C2 RU2003112547/13A RU2003112547A RU2256320C2 RU 2256320 C2 RU2256320 C2 RU 2256320C2 RU 2003112547/13 A RU2003112547/13 A RU 2003112547/13A RU 2003112547 A RU2003112547 A RU 2003112547A RU 2256320 C2 RU2256320 C2 RU 2256320C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- solution
- glycogen
- cooling
- bees
- tissues
- Prior art date
Links
Landscapes
- Investigating Or Analyzing Non-Biological Materials By The Use Of Chemical Means (AREA)
Abstract
Способ относится к области ветеринарной медицины, в частности биохимии. Способ заключается в кипячении экстракта, охлаждении, центрифугировании, растворении осадка, охлаждении, центрифугировании, растворении осадка, добавлении в пробирку серной кислоты и 1% раствора конденсата, нагревании, охлаждении, фотометрировании против контроля при длине волны 315 нм, а в качестве конденсата используют резорцин. Данный способ позволяет повысить точность определения и является более экономичным. 1 табл.
Description
Изобретение относится к области ветеринарной медицины, в частности биохимии животных.
В ветеринарии определение содержания гликогена является одним из важных тестов в выявлении энергетического ресурса организма пчел.
Гликоген - полисахарид, или животный крахмал, синтезируется организмом и депонируется во всех его органах и тканях. Гликоген является легко мобилизируемой резервной формой глюкозы и представляет собой разветвленный полимер из остатков глюкозы крови.
Известно определение гликогена в крови цитохимически ШИК - реакцией, методом Шабадаша [см. Клиническая лабораторная аналитика под ред. В.В.Меньшикова. Том 2. - Частные аналитические технологии в клинической лаборатории. М. - “Лабинформ” - РАМЛД, 1999. С. 59-61], где осуществляют подготовку мазков крови, фиксацию в абсолютном спирте и обработку - инкубацию в растворе периодита и окрашивают реактивом Шиффа с последующим окрашиванием гемотоксилином и высушиванием, где гликоген окрашивается в вишнево-фиолетовый цвет на зеленом фоне препарата, и микроскопированием.
Также известно определение гликогена в крови [Horeysi J. Et al. Zaklady chemickeho vysetrovani v lekarstvi. Pppraha, 1957. Справочник Биохимические методы исследования в клинике. Под редакцией академика АМН СССР проф. А.А.Покровского. Медицина. М.: - 1969. Определение гликогена в крови колориметрическим методом с орцином (по Хорейши), стр. 230-231], где гликоген осаждают спиртом и гидролизуют в кислой среде до глюкозы и нагревают в серной кислоте, которая превращается в оксиметилфурфурол и конденсируется орцином, образуя окрашенное соединение. Все вышеуказанное осуществлялось путем кипячения исследуемого биологического субстрата в концентрированном растворе гидроксида натрия в центрифужной пробирке, с последующим добавлением спирта, охлаждением, центрифугированием, отбором надосадочной жидкости, растворением осадка в полунасыщенном растворе сернокислого натрия с последующим дополнительным охлаждением, центрифугированием и растворением осадка, одновременное добавление в центрифужную пробирку с исследуемым биологическим субстратом, в контрольную пробирку с водой и в пробирку со стандартным раствором глюкозы 13 мл серной кислоты и 1 мл 1% раствора орцина с последующим нагреванием, охлаждением, фотометрирование против контроля и определение гликогена по формуле
где Х - количество гликогена, мг%; Ео - экстинция опытной пробы; Ест - экстинция стандартного раствора,
Недостатками известных методов является трудоемкий длительный процесс, не достаточно точное определение содержания гликогена в крови, а также отсутствие возможности определения содержания гликогена в тканях органов у пчел.
Техническим решением задачи является повышение точности диагностирования, уменьшение затрат времени, материальных затрат и использование более доступных химических реактивов и расширение технологических возможностей.
Поставленная задача достигается тем, что в способе определения содержания гликогена в экстракте из органов и тканей пчел, включающем кипячение исследуемого биологического субстрата в концентрированном растворе гидроксида натрия в ценрифужной пробирка с последующим добавлением спирта, охлаждением, центрифугированием, отбором надосадочной жидкости, растворением осадка в полунасыщенном растворе сернокислого натрия с последующим дополнительным охлаждением, центрифугированием и растворением осадка, одновременное добавление в центрифужную пробирку с исследуемым биологическим субстратом, в контрольную пробирку с водой и в пробирку со стандартным раствором глюкозы 13 мл серной кислоты и 1 мл 1% раствора конденсата с последующим нагреванием, охлаждением, фотометрирование против контроля и определение гликогена по формуле
где Г - количество гликогена, мг%; Ео - экстинция опытной пробы; Ест - экстинция стандартного раствора,
в качестве биологического субстрата используют экстракт из органов и тканей пчел, а для кипячения - 30% гидроксид натрия, при этом охлаждение осуществляют в течение 15 минут, центрифугируют при 3 тыс. об/мин в течение 15 минут, добавляют в пробирки 2 мл 1% конденсата, в качестве которого используют резерцин, и фотометрируют при длине волны λ=315 нм.
Новизна заявляемого способа обусловлена тем, что является наиболее доступным и точным, и дает возможность определения содержания гликогена в тканях органов у пчел по сравнению с известным методом определения содержания гликогена крови как с научной, так и с экономической стороны. Предложенный метод позволяет определить содержание гликогена в экстракте органов и тканей у пчел. Кроме того, заявляемое предложение является более экономичным, т.к. не требует применения особо дорогостоящих химических реактивов.
Пример конкретного осуществления способа определения содержания гликогена в экстракте из органов и тканей пчел
Подготовка экстракта из органов и тканей пчел.
Для этого у пчел удаляли наружный покров и кишечник при помощи пинцета и глазных ножниц. Ткани и органы, полученные от десяти пчел, помещали в фарфоровую ступку и растирали пестиком, затем к содержимому добавили физиологический раствор из расчета 1:1, настаивали в течение 1-1,5 часов в холодильнике при температуре 5°С и фильтровали через бумажный фильтр.
Приготовление растворов
Для приготовления 52% серной кислоты объемом 325 мл необходимо взять 225 мл концентрированной серной кислоты и, осторожно приливая, 100 мл дистиллированной воды.
Для приготовления 1% раствора резорцина необходимо взять 1 г резорцина и 99 мл 52% раствора серной кислоты.
Для приготовления 30% раствора гидроксида натрия необходимо взять 30 г гидроксида натрия и 70 мл дистиллированной воды.
Для приготовления стандартного раствора глюкозы берут 10 мг глюкозы и растворяют их в 300 мл дистиллированной воды.
Осаждение и гидролиз гликогена в экстракте из органов и тканей пчел
Отфильтрованный экстракт из органов и тканей пчел помещали в центрифужную пробирку в количестве 0,3 мл и туда же вносили 0,2 мл дистиллированной воды и 0,2 мл 30% раствора гидроксида натрия. Затем пробирку помещали в водяную баню на 1,5-2 часа, после охлаждения в пробирку вносили 1 мл 96 об.% этилового спирта, суспендировали и охлаждали на льду в течение 15 минут, затем раствор центрифугировали при 3 тыс. об/мин в течение 15 минут. Надосадочную жидкость осторожно убирали пастеровской пипеткой, а в осадок добавляли 1 мл 96 об.% этилового спирта и охлаждали на льду в течение 15 минут, затем вновь центрифугировали при 3 тыс. об/мин в течение 15 минут. После центрифугирования надосадочную жидкость осторожно убирали пастеровской пипеткой, а осадок перемешали с 3 мл дистиллированной водой, 13 мл 52% раствора серной кислоты (перемешивали) и 2 мл 1% резорцина.
В контрольную (чистую пробирку) пробирку и со стандартным раствором глюкозы наливали по 3 мл дистиллированной воды, по 13 мл 52% раствора серной кислоты (перемешивали) и по 2 мл 1% резорцина.
Все пробирки помещали в водяную баню при температуре 80°С в течение 20 минут, затем охлаждали на льду в течение 15 минут. Пробирки с наличием глюкозы имели коричнево-желтое окрашивание.
Фотоколориметрирование проводили против контроля на КФК-3 при подборе длины волны λ=315 нм.
Расчет содержания гликогена в экстракте из мышц проводят по формуле
где Г - количество гликогена, мг%; Ео - экстинция опытной пробы; Ест - экстинция стандартного раствора.
Пример: у пчел серой горной кавказской породы
Ео - экстинция опытной пробы составила 0,566
Ест - экстинция стандартного раствора составила 0,253
Таким образом, подставляя в формулу, получим следующий результат:
Таблица Содержание гликогена в экстракте из органов и тканей пчел |
|
Породы пчел | Количество гликогена, мг % |
Итало-карпатская помесь первого поколения | 111,5 |
Карпатская порода | 225,0 |
Приокская | 375,0 |
Серая горная кавказская | 224,0 |
На основании данных, приведенных в таблице, можно сделать вывод, что порода пчел “Приокская” обладает наибольшим энергетическим ресурсом по сравнению с другими породами пчел. Эта порода пчел обладает устойчивостью к неблагоприятным погодным условиям и обладает возможностью воспроизводства потомства с повышенным иммунитетом.
Claims (1)
- Способ определения содержания гликогена в экстракте из органов и тканей пчел, включающий кипячение исследуемого субстрата в концентрированном растворе гидроксида натрия, охлаждение, центрифугирование, растворение осадка в растворе сернокислого натрия, охлаждение, центрифугирование, растворение осадка, одновременное добавление в пробирку с исследуемым биологическим субстратом, в контрольную пробирку с водой и в пробирку со стандартным раствором глюкозы 13 мл серной кислоты и 1% раствора конденсата с последующим нагреванием, охлаждением, фотометрированием против контроля и определение гликогена по формуле: Г=Ео· 100/Ест мг%, где Г - количество гликогена в мг%; Ео - экстинция опытной пробы; Ест - экстинция стандартного раствора, при этом для кипячения субстрата используют 30%-ный гидроксид натрия, охлаждают - по 15 мин, центрифугируют при 3 тыс. об./мин по 15 мин, добавляют в пробирки 2 мл 1% раствора конденсата, в качестве которого используют резорцин, и фотометрируют при длине волны 315 нм.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2003112547/13A RU2256320C2 (ru) | 2003-04-28 | 2003-04-28 | Способ определения гликогена в экстракте из органов и тканей пчел |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2003112547/13A RU2256320C2 (ru) | 2003-04-28 | 2003-04-28 | Способ определения гликогена в экстракте из органов и тканей пчел |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2003112547A RU2003112547A (ru) | 2004-12-27 |
RU2256320C2 true RU2256320C2 (ru) | 2005-07-20 |
Family
ID=35842697
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2003112547/13A RU2256320C2 (ru) | 2003-04-28 | 2003-04-28 | Способ определения гликогена в экстракте из органов и тканей пчел |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2256320C2 (ru) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2681167C1 (ru) * | 2018-02-22 | 2019-03-04 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Федеральный научный центр - Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии имени К.И. Скрябина и Я.Р. Коваленко Российской академии наук" | Способ определения количества гликогена в личинках трихинелл для контроля качества обезвреживания инвазионного материала |
-
2003
- 2003-04-28 RU RU2003112547/13A patent/RU2256320C2/ru not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
ПОКРОВСКИЙ А.А. Справочник. Биохимические методы исследования в клинике: М.: "Медицина", 1969, с.230-231. ЗЕФИРОВ Н.С. Химическая энциклопедия. М.: "Большая российская энциклопедия"; т.4, 1995, с.228. КНУНЯНЦ И.Л. Краткая химическая энциклопедия. М.: "Советская энциклопедия", т.3, 1964, с.782. * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2681167C1 (ru) * | 2018-02-22 | 2019-03-04 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Федеральный научный центр - Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии имени К.И. Скрябина и Я.Р. Коваленко Российской академии наук" | Способ определения количества гликогена в личинках трихинелл для контроля качества обезвреживания инвазионного материала |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN103502465B (zh) | 使用荧光标记了的l-葡萄糖衍生物检测癌细胞的方法以及含有该衍生物的癌细胞的显像剂 | |
JP6327565B2 (ja) | クマリン誘導体が結合した蛍光標識糖誘導体を用いた細胞イメージング方法及びイメージング剤 | |
Kim et al. | A ratiometric two-photon probe for Ca2+ in live tissues and its application to spinal cord injury model | |
CN110055300A (zh) | 一种真菌感染检测试剂盒及其应用 | |
RU2256320C2 (ru) | Способ определения гликогена в экстракте из органов и тканей пчел | |
JP2003066035A (ja) | 水溶性組織清澄溶液 | |
Imperatore et al. | Identification of orexin and endocannabinoid receptors in adult zebrafish using immunoperoxidase and immunofluorescence methods | |
CN113189071B (zh) | 用于完整器官血管三维网络精准成像的试剂盒及成像方法 | |
RU2243723C1 (ru) | Способ определения питательной ценности мяса животного | |
Gusel’nikova et al. | Fluorene derivative disodium salt as a new fluorescent dye for identification of amyloid deposits in myocardium of mdx mice | |
RU2429462C2 (ru) | Способ оптического просветления образцов биологических тканей | |
US5952192A (en) | Method of fluorescent analysis of biological sample utilizing biebrich scarlet | |
RU2309585C1 (ru) | Способ диагностики миксоспоридий у рыб | |
HAMMED et al. | New and ModifiedStaining TechniquesforRapid Diagnosis of Hemoparasites in Blood Smears of Cows | |
JPS62135769A (ja) | 細胞中の蛋白質とdnaの比率の測定法及び測定用試薬 | |
RU2180104C1 (ru) | Способ одновременного определения лизосомных катионных белков гранулоцитов и днк, рнк лимфоцитов на одном препарате в тканях | |
Nagata | Histochemistry, general and special | |
RU2393478C2 (ru) | Способ определения прижизненных паранекротических изменений тканей органов и костной системы экспериментальных животных | |
RU2612149C1 (ru) | Способ определения активности миелопероксидазы нейтрофилов в мазках крови животных | |
UA142793U (uk) | Спосіб діагностики паразитозів шлунково-кишкового тракту та печінкових трематодозів | |
RU2003112547A (ru) | Способ определения гликогена в экстракте из органов и тканей пчел | |
CN115184594A (zh) | 一种华支睾吸虫检测的荧光显色方法 | |
CN115308411A (zh) | 肠损伤的通透性指标在制备重症急性胰腺炎诊断试剂中的应用 | |
RU2032374C1 (ru) | Способ диагностики балантидиоза свиней | |
RU2540477C2 (ru) | Способ предварительной обработки желчи для диагностики описторхозной инвазии |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20050429 |