RU2074192C1 - Мурамилдипептидные производные, противогриппозная вакцина - Google Patents
Мурамилдипептидные производные, противогриппозная вакцина Download PDFInfo
- Publication number
- RU2074192C1 RU2074192C1 SU915010197A SU5010197A RU2074192C1 RU 2074192 C1 RU2074192 C1 RU 2074192C1 SU 915010197 A SU915010197 A SU 915010197A SU 5010197 A SU5010197 A SU 5010197A RU 2074192 C1 RU2074192 C1 RU 2074192C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- vaccine
- formula
- tetradecylhexadecanoyl
- antigen
- compound
- Prior art date
Links
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 43
- BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N muramyl dipeptide Chemical class OC(=O)CC[C@H](C(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](C)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H](O)[C@@H]1NC(C)=O BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N 0.000 title claims abstract description 9
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 25
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 25
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 25
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 claims abstract description 13
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 24
- -1 tetradecylhexadecanoyl Chemical group 0.000 claims description 13
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 9
- 229960003971 influenza vaccine Drugs 0.000 claims description 7
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 claims description 6
- 239000000654 additive Substances 0.000 claims description 4
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 claims description 4
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims description 4
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 claims description 4
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 claims description 4
- ARAIBEBZBOPLMB-UFGQHTETSA-N zanamivir Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](N=C(N)N)C=C(C(O)=O)O[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)CO ARAIBEBZBOPLMB-UFGQHTETSA-N 0.000 claims description 4
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 3
- QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N D-alpha-Ala Natural products CC([NH3+])C([O-])=O QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N L-Alanine Natural products C[C@@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N 0.000 claims description 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 2
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 claims description 2
- 229960003767 alanine Drugs 0.000 claims description 2
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000005313 fatty acid group Chemical group 0.000 claims description 2
- 150000002632 lipids Chemical group 0.000 claims description 2
- 101710145634 Antigen 1 Proteins 0.000 claims 1
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 12
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 2
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 abstract description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 17
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 description 4
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 4
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 description 4
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 description 4
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 description 4
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 4
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 3
- WVCHIGAIXREVNS-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxy-1,4-naphthoquinone Chemical compound C1=CC=C2C(O)=CC(=O)C(=O)C2=C1 WVCHIGAIXREVNS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N N-Methylmorpholine Chemical compound CN1CCOCC1 SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 3
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 3
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 3
- PFYXSUNOLOJMDX-UHFFFAOYSA-N bis(2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) carbonate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)ON1C(=O)CCC1=O PFYXSUNOLOJMDX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 3
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 3
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 3
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000277 virosome Substances 0.000 description 3
- AMFFPHQWQAZJHI-UHFFFAOYSA-N 2-tetradecylhexadecan-1-ol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCC(CO)CCCCCCCCCCCCCC AMFFPHQWQAZJHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 4-Dimethylaminopyridine Chemical compound CN(C)C1=CC=NC=C1 VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N Methylamine Chemical compound NC BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000005348 Neuraminidase Human genes 0.000 description 2
- 108010006232 Neuraminidase Proteins 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 2
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 2
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 239000012295 chemical reaction liquid Substances 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 2
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 2
- 238000000635 electron micrograph Methods 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 238000000703 high-speed centrifugation Methods 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 238000000464 low-speed centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 2
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 2
- 150000007530 organic bases Chemical class 0.000 description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 2
- 238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 description 2
- NRHMKIHPTBHXPF-TUJRSCDTSA-M sodium cholate Chemical class [Na+].C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC([O-])=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 NRHMKIHPTBHXPF-TUJRSCDTSA-M 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N α-tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2O[C@@](CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N 0.000 description 2
- KILNVBDSWZSGLL-KXQOOQHDSA-N 1,2-dihexadecanoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC KILNVBDSWZSGLL-KXQOOQHDSA-N 0.000 description 1
- PORPENFLTBBHSG-MGBGTMOVSA-N 1,2-dihexadecanoyl-sn-glycerol-3-phosphate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC PORPENFLTBBHSG-MGBGTMOVSA-N 0.000 description 1
- TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoserine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@H](N)C(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 0.000 description 1
- BIABMEZBCHDPBV-MPQUPPDSSA-N 1,2-palmitoyl-sn-glycero-3-phospho-(1'-sn-glycerol) Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@@H](O)CO)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC BIABMEZBCHDPBV-MPQUPPDSSA-N 0.000 description 1
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonium chloride Substances [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 1
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 1
- JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylethanolamin Natural products NCCOP(O)(=O)OCC(O)CO JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylserin Natural products OC(=O)C(N)COP(O)(=O)OCC(O)CO ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 241000712431 Influenza A virus Species 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- REYJJPSVUYRZGE-UHFFFAOYSA-N Octadecylamine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCN REYJJPSVUYRZGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 229940087168 alpha tocopherol Drugs 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N ammonia Natural products N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000006297 carbonyl amino group Chemical group [H]N([*:2])C([*:1])=O 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 229940107161 cholesterol Drugs 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- RNPXCFINMKSQPQ-UHFFFAOYSA-N dicetyl hydrogen phosphate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCOP(O)(=O)OCCCCCCCCCCCCCCCC RNPXCFINMKSQPQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940093541 dicetylphosphate Drugs 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 235000013345 egg yolk Nutrition 0.000 description 1
- 210000002969 egg yolk Anatomy 0.000 description 1
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 1
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012812 general test Methods 0.000 description 1
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N glycerol Substances OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- HEGSGKPQLMEBJL-RKQHYHRCSA-N octyl beta-D-glucopyranoside Chemical compound CCCCCCCCO[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O HEGSGKPQLMEBJL-RKQHYHRCSA-N 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 1
- 150000008105 phosphatidylcholines Chemical class 0.000 description 1
- 150000008104 phosphatidylethanolamines Chemical class 0.000 description 1
- 150000003905 phosphatidylinositols Chemical class 0.000 description 1
- 210000004777 protein coat Anatomy 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 238000007086 side reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 125000000185 sucrose group Chemical group 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 229960000984 tocofersolan Drugs 0.000 description 1
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 239000002076 α-tocopherol Substances 0.000 description 1
- 235000004835 α-tocopherol Nutrition 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/145—Orthomyxoviridae, e.g. influenza virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K9/00—Peptides having up to 20 amino acids, containing saccharide radicals and having a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K9/001—Peptides having up to 20 amino acids, containing saccharide radicals and having a fully defined sequence; Derivatives thereof the peptide sequence having less than 12 amino acids and not being part of a ring structure
- C07K9/005—Peptides having up to 20 amino acids, containing saccharide radicals and having a fully defined sequence; Derivatives thereof the peptide sequence having less than 12 amino acids and not being part of a ring structure containing within the molecule the substructure with m, n > 0 and m+n > 0, A, B, D, E being heteroatoms; X being a bond or a chain, e.g. muramylpeptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/5555—Muramyl dipeptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
- C12N2760/16111—Influenzavirus A, i.e. influenza A virus
- C12N2760/16134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S424/00—Drug, bio-affecting and body treating compositions
- Y10S424/812—Liposome comprising an antibody, antibody fragment, antigen, or other specific or nonspecific immunoeffector
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Virology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Использование: иммунология, медицина, биотехнология. Сущность изобретения: получены новые мурамилпептидные производные, в частности [6-0-(2-тетрадецилгексадеканоил)-N-ацетилмурамоил] -L-аланил-D-глютамамид и [6-0-(2-тетрадецилгексадеканоил)-N-ацетилмурамоил] -L-аланил-N-метил-D -глютамамид. Мурамилдипептидные производные обладают иммуногенной активностью и используются для приготовления синтетических противогриппозных вакцин. Предложена противогриппозная вакцина, содержащая мурамилдипептидное производное и антиген вируса гриппа. 2 с и 6 з.п.ф-лы, 3 табл.
Description
Изобретение касается мурамилдипептидных производных, обладающих иммуногенной активностью и потому используемых в качестве одного из компонентов синтетических противогриппозных вакцин типа виросомных вакцин. Изобретение также касается противогриппозной вакцины, использующей производные по изобретению и представляющей собой комплекс мурамилдипептидных производных и антигена оболочки вируса гриппа.
Вследствие того, что эффективность используемых в настоящее время противогриппозных вакцин на основе ГА (гемагглютинина) вируса гриппа не является постоянной вследствие мутаций гемагглютининовой молекулы этого широко распространенного вируса, имеется большая потребность в создании более эффективных вакцин, чем традиционные ГА-вакцины.
Из уровня техники известна комплексная, состоящая из ГА (гемагглютинина) и НА (неураминидазы) в качестве компонентов белковой оболочки синтетических вирусоподобных частиц антигена гриппа, которую получают из 6-О-(2-тетрадецилгексадеканоил)-N-ацетилмурамоил-L-аланил-D-изоглутамина. Это так называемая виросомная вакцина (см. выложенную в "J.P.KOKAI" заявку Японии N 61-282321). В частности, известная вакцина демонстрирует превосходный эффект повышения титра антител в крови.
Однако известная вакцина оказывает раздражающее действие в месте ее нанесения, приводя к покраснению кожи, что является нежелательной побочной реакцией и препятствует ее использованию в качестве терапевтического средства.
Задачей настоящего изобретения является создание новых мурамилдипептидных производных, которые могут использоваться в качестве компонента виросомных вакцин, не имеющих вышеописанных недостатков.
Другой задачей изобретения является создание новой противогриппозной вакцины виросомного типа, эффективной в отношении продуцирования антител и в то же время безопасной.
В соответствии с первым аспектом изобретения, предлагаются мурамилдипептидные производные следующей общей формулы:
где R представляет ацетилгруппу,
X- остаток L-аланина,
A представляет остаток жирной кислоты с 10-60 атомами углерода, и
R1 представляет атом водорода, и
R2 представляет атом водорода или низшую алкилгруппу.
где R представляет ацетилгруппу,
X- остаток L-аланина,
A представляет остаток жирной кислоты с 10-60 атомами углерода, и
R1 представляет атом водорода, и
R2 представляет атом водорода или низшую алкилгруппу.
В соответствии со вторым аспектом изобретения, предлагается противогриппозная вакцина, содержащая антиген вируса гриппа и иммуностимулирующую добавку. Вакцина по изобретению содержит, в качестве иммуностимулирующей добавки, соединение общей формулы (1), причем в качестве антигена вируса гриппа использован ГАНА-антиген при следующем соотношении компонентов (мас. ч.):
Гана-антиген вируса гриппа 1/300-10
Соединение формулы (1) 1
Описание сопровождается иллюстрациями, на которых изображено: фиг.1- электронная микрофотография (95000х) образца вакцины N 1 по изобретению; и фиг. 2 электронная микрофотография (95000х) образца вакцины N2 по изобретению.
Гана-антиген вируса гриппа 1/300-10
Соединение формулы (1) 1
Описание сопровождается иллюстрациями, на которых изображено: фиг.1- электронная микрофотография (95000х) образца вакцины N 1 по изобретению; и фиг. 2 электронная микрофотография (95000х) образца вакцины N2 по изобретению.
Часть соединения формулы (1), а именно структура -NHCH-(CONH2)-CH2CH2CO-
имеет D- и L-изомеры, поскольку в ней содержится асимметрический атом углерода. Обычно предпочтительно присутствие D-изомера.
имеет D- и L-изомеры, поскольку в ней содержится асимметрический атом углерода. Обычно предпочтительно присутствие D-изомера.
Что касается сахарозного остатка в положении 1 формулы (1), то он имеет аномерные изомеры (альфа- и бета-изомеры), которые оба могут использоваться для вакцины по изобретению.
Для удобства оба аномерных изомера представлены одной и той же структурой формулой
Ниже приводятся технологическая схема получения соединения формулы (1):
А именно, соединение формулы (II) можно прореагировать с соединением (III) посредством метода конденсации, часто используемого для синтеза пептидов, такого как карбодиимидный метод, Eintopf-конденсация, или метод активного сложного эфира, для образования требуемого соединения формулы (I). Например, если обычно используют активно-эфирный метод, то соединение формулы (II) растворяют в инертном органическом растворителе, таком как диметилформамид, тетрагидрофуран, диоксан, ацетонитрил или их смесь, и осуществляют реакцию с реагентом для получения активного сложного эфира, такого как N, N-дисукцинимидилкарбонат, N,N-карбонилимидазол или N,N-дисукцинимидил-оксалат, предпочтительно, в присутствии органического основания, такого как триэтиламин, N-метилморфолин или 4-диметиламинопиридин при температуре от 0oС до примерно 60oС в течение от 30 минут до нескольких часов с образованием активного сложного эфира, к которому добавляют аминосоединение формулы (III) в присутствии основания, такого как вышеописанные основания, при температуре от приблизительно -15oС до приблизительно 60oС, предпочтительно, от 0oС до 25oС, и эта реакция может проводиться в течение от нескольких минут до примерно одного дня. Вышеуказанныый реагент для образования активного сложного эфира может использоваться в эквимолярном количестве по отношению к соединению формулы (II). Вышеуказанное органического основание может также использоваться эквимолярно или в избытке по отношению к соединению формулы (II). Полученный продукт очищают хроматографией на силикагелевой колонке или подобном устройстве с получением соединения формулы (I).
Ниже приводятся технологическая схема получения соединения формулы (1):
А именно, соединение формулы (II) можно прореагировать с соединением (III) посредством метода конденсации, часто используемого для синтеза пептидов, такого как карбодиимидный метод, Eintopf-конденсация, или метод активного сложного эфира, для образования требуемого соединения формулы (I). Например, если обычно используют активно-эфирный метод, то соединение формулы (II) растворяют в инертном органическом растворителе, таком как диметилформамид, тетрагидрофуран, диоксан, ацетонитрил или их смесь, и осуществляют реакцию с реагентом для получения активного сложного эфира, такого как N, N-дисукцинимидилкарбонат, N,N-карбонилимидазол или N,N-дисукцинимидил-оксалат, предпочтительно, в присутствии органического основания, такого как триэтиламин, N-метилморфолин или 4-диметиламинопиридин при температуре от 0oС до примерно 60oС в течение от 30 минут до нескольких часов с образованием активного сложного эфира, к которому добавляют аминосоединение формулы (III) в присутствии основания, такого как вышеописанные основания, при температуре от приблизительно -15oС до приблизительно 60oС, предпочтительно, от 0oС до 25oС, и эта реакция может проводиться в течение от нескольких минут до примерно одного дня. Вышеуказанныый реагент для образования активного сложного эфира может использоваться в эквимолярном количестве по отношению к соединению формулы (II). Вышеуказанное органического основание может также использоваться эквимолярно или в избытке по отношению к соединению формулы (II). Полученный продукт очищают хроматографией на силикагелевой колонке или подобном устройстве с получением соединения формулы (I).
Соединение формулы (II) может быть приготовлено способом, описанным в патенте Японии 93-11359.
Комплекс, составляющий вакцину по изобретению, является таким, что соединение формулы (I) или его соль аггрегируют, если требуется, с липидом для получения везикулы, в оболочку которой внедряют антиген вируса гриппа. Типичным примером является вакцина, содержащая вирусоподобные частицы, называемые виросомами.
Антигены, которые могут использоваться по изобретению, включают антиген ГА (гемагглютинин), антиген НА (неураминидаза) и подобные антигены вируса гриппа. Обычно предпочтительнее использовать их смесь, так называемый ГА-НА антиген. ГА-НА антиген может быть получен посредством очистки вируса гриппа низко- или высокоскоростным центрифугированием для разделения фаз, или химической обработкой аллантоисной жидкости, инфицированной вирусом гриппа, с последующим переводом вируса в растворимое состояние поверхностно-активным веществом, таким как Тритон Х-100, натриевая соль холиевой кислоты или т.п. или посредством отделения вируса таким органическим растворителем, как эфир, и его очистки и выделения центрифугированием с градиентом плотности сахарозы, афинной хроматографией и т.п. Полученный таким образом антиген используется обычно в количестве от 1/300 до 10 мас.ч. предпочтительно, от 1/100 до 1 мас.ч. на одну весовую часть соединения формулы (I) или его соли.
Вакцину по изобретению можно получить различными методами, например, традиционным методом для получения липосом. Типичные примеры процесса получения вакцин приведены ниже.
Антиген вируса гриппа, соединение формулы (I) или его соль и предпочтительно фосфолипид смешивают вместе в подходящем буферном растворе, таком как фосфатно-буферный раствор или т.п. и к смеси для ее растворения добавляют эффективное количество (предпочтительно от 0,1 до 20 мас./об.) поверхностно-активного вещества, такого как холат натрия, октил-гликозид или т.п. Смесь затем подвергают диализу для удаления использованного поверхностно-активного вещества, получая при этом противогриппозную вакцину по изобретению. В полученную таким образом вакцину по изобретению могут добавляться в качестве изотонирующих веществ сахарид, такой как глюкоза, мальтоза или дактоза, соль, такая как хлорид натрия, или их смесь.
Примеры фосфолипидов включают фосфатидил-глицерины, такие как димиристоилфосфадил-глицерин и дипальмитоилфосфатидил-глицерин; фосфатидил-серин; фосфатидил-холины, такие как дипальмитоилфосфатидил-холин; фосфатидил-этаноламин; фосфатидилинозитол; фосфатидная кислота и т.п. Эти вещества могут быть получены из натурального сырья, такого как яичный желток или соевые бобы, или могут быть синтезированы. Они могут использоваться как по отдельности, так и в смеси.
В вышеописанном процессе, фосфолипид может использоваться в комбинации с холестерином, альфа-токоферолом, дицетилфосфатом, стеариламином или т.п. которые используют обычно в количестве не более 2 мас.ч. предпочтительно, от 1/10 до 1/2 мас.ч. на одну массовую часть соединения формулы (I) или его соли.
Вакцина по изобретению, полученная таким образом, обычно находится в таком виде, что соединение формулы (I) или его соль и фосфолипид образуют частицы, в мембрану которых внедрен антиген с получением так называемых виросом. Средний размер частиц и zeta-потенциал их поверхности может регулироваться посредством изменения соотношения количеств соединения формулы (I) или его соли и фосфолипида. Обычно средний диаметр виросомных частиц предпочтительно составляет от 40 до 300 нм, а их zeta-потенциал предпочтительно составляет от -5 до -70 mV.
Вакцина по изобретению предназначена обычно для подкожного введения. Вводят от 350 до 12 μг вакцины (из расчета антигенного белка) единовременно или несколько раз за сезон.
Мурамилдипептидные производные по изобретению обладают превосходной адъювантной активностью и являются прекрасными компонентами виросомной вакцины.
Вакцина по изобретению вызывает продуцирование антител с активностью, эквивалентной или более высокой, чем активность известной виросомной вакцины, причем с точки зрения возможных воспалений и лихорадки настоящая вакцина значительно безопаснее известной. Кроме того, вакцина по изобретению обладает высокой стабильностью при хранении, и ее можно хранить замороженной или лиофилизированной.
Для иллюстрации изобретения, ниже приводятся примеры его выполнения, не ограничивающие его объем.
Пример 1.
1,0 г [6-O-(2-тетрадецилгексадеканоил)-N-ацетилмурамоил]-L-аланил-D-изоглютамина растворяли в 100 мл тетрагидрофурана. К раствору добавляли 0,3 г N, N-дисукцинимидил-карбоната и 0,15 мл триэтиламина, и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1,5 ч. Затем добавляли 0,22 мл 28%-ного водного раствора аммиака и перемешивали дальше при комнатной температуре еще 30 мин.
Реакционную жидкость концентрировали при пониженном давлении, и остаток подвергали хроматографии на силикагелевой колонке. После очистки элюированием смесью хлороформ/метанол с последующей сушкой замораживанием из смеси вода/диоксан получили 0,44 г [6-O-(2-тетрадецилгексадеканоил)-N-ацетилмурамоил] -L-аланил-D-глутамамида. Температура плавления: 155-165oС. Молекулярная масса: 926 (C49H91N5O11);
FAB Масс-спектрометрия m/z 927 (М+1)
1H-ЯМР (DMSO-d6) δ:
0,85 (6H, т, J=7 Гц),1,2-1,3,1,39, 1,50 (58Н, м),1,72 (1Н,м)
1,80 (3Н,с), 1,93(1Н,м), 2,08(2Н, т,J=8 Гц),2,30(1Н,м),
3,28(1Н,т, J=9 Гц), 3,46(1Н,т,J=9 Гц),3,67(1Н,м),3,81(1Н,м),
4,02 (1Н,д-д,J=12 Гц,5 Гц),4,12(1Н,д-кв,J=9 Гц, 5 Гц),
4,31 (2Н,м), 4,34(1Н,д,J=10 Гц), 4,44 и 4,98 (1Н),
5,43 (1Н,д,J=4 Гц), 6,67(1Н,д,J=4 Гц), 6,74 (1Н,с),
7,01 (1Н,с), 7,27 (1Н,с), 7,30(1Н,с), 7,65(1Н,д,J=7 Гц),
8,08 (1Н,д,J=8 Гц), 8,17 (1Н,д, J=8 Гц).
FAB Масс-спектрометрия m/z 927 (М+1)
1H-ЯМР (DMSO-d6) δ:
0,85 (6H, т, J=7 Гц),1,2-1,3,1,39, 1,50 (58Н, м),1,72 (1Н,м)
1,80 (3Н,с), 1,93(1Н,м), 2,08(2Н, т,J=8 Гц),2,30(1Н,м),
3,28(1Н,т, J=9 Гц), 3,46(1Н,т,J=9 Гц),3,67(1Н,м),3,81(1Н,м),
4,02 (1Н,д-д,J=12 Гц,5 Гц),4,12(1Н,д-кв,J=9 Гц, 5 Гц),
4,31 (2Н,м), 4,34(1Н,д,J=10 Гц), 4,44 и 4,98 (1Н),
5,43 (1Н,д,J=4 Гц), 6,67(1Н,д,J=4 Гц), 6,74 (1Н,с),
7,01 (1Н,с), 7,27 (1Н,с), 7,30(1Н,с), 7,65(1Н,д,J=7 Гц),
8,08 (1Н,д,J=8 Гц), 8,17 (1Н,д, J=8 Гц).
Пример 2
1,0 г [6-O-(2-тетрадецилгексадеканоил)-N-ацетилмурамоил]-L-аланилD-изоглюта- мина растворяли в 100 мл тетрагидрофурана. К раствору добавляли 0,3 г N, N-дисукцинимидил-карбоната и 0,15 мл триэтиламина, и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1,5 ч. Затем в смесь добавляли 0,2 ил 40% -ного водного раствора метиламина и перемешивали дальше при комнатной температуре еще 30 мин.
1,0 г [6-O-(2-тетрадецилгексадеканоил)-N-ацетилмурамоил]-L-аланилD-изоглюта- мина растворяли в 100 мл тетрагидрофурана. К раствору добавляли 0,3 г N, N-дисукцинимидил-карбоната и 0,15 мл триэтиламина, и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1,5 ч. Затем в смесь добавляли 0,2 ил 40% -ного водного раствора метиламина и перемешивали дальше при комнатной температуре еще 30 мин.
Реакционную жидкость концентрировали при пониженном давлении, и остаток подвергали хроматографии на силикагелевой колонке. После очистки элюированием смесью хлороформ/метанол с последующей сушкой замораживанием из смеси вода/диоксан получили 0,5 г [6-O-(2-тетрадецилгексадеканоил)-N-ацетилмурамоил] -L-аланил-N-метил-D- глутамамида. Температура плавления: 95-100oС. Молекулярная масса: 939 (C50H93N5O11);
FAB Масс-спектрометрия m/z 940 (М+1)
1Н-ЯМР (ДMSO-d6) δ:
0,85 (6H,т, J=7 Гц),1,2-1,3,1,39,1,50 (58Н,м),1,73 (1Н,м),
1,79 (3Н,с), 1,93(1Н,м),2,07 (2Н,т,J=8 Гц), 2,30 (1Н,м),
2,55 (3Н,д,J=5 Гц), 3,26 (1Н,т,J=9 Гц), 3,46 (1Н,т,J=9 Гц),
3,68 (1Н,м), 3,82 (1Н,м), 4,03 (1Н,д-д,J=12 Гц, 5 Гц),
4,12 (1H,д-кв, J=9 Гц,5 Гц),4,30 (2Н,м),4,36 (1Н,д,J=10 Гц),
4,98 (1Н,т,J=3,5 Гц), 5,43 (1Н,д,J=4 Гц),6,67 (1Н,д,J=4 Гц),
7,01(1Н,с),7,31(1Н,с),7,64 (1Н,д,J=7 Гц),7,71 (1Н,д,J=5 Гц),
8,07 (1Н,д, J=8 Гц), 8,17 (1Н, д,J=8 Гц).
FAB Масс-спектрометрия m/z 940 (М+1)
1Н-ЯМР (ДMSO-d6) δ:
0,85 (6H,т, J=7 Гц),1,2-1,3,1,39,1,50 (58Н,м),1,73 (1Н,м),
1,79 (3Н,с), 1,93(1Н,м),2,07 (2Н,т,J=8 Гц), 2,30 (1Н,м),
2,55 (3Н,д,J=5 Гц), 3,26 (1Н,т,J=9 Гц), 3,46 (1Н,т,J=9 Гц),
3,68 (1Н,м), 3,82 (1Н,м), 4,03 (1Н,д-д,J=12 Гц, 5 Гц),
4,12 (1H,д-кв, J=9 Гц,5 Гц),4,30 (2Н,м),4,36 (1Н,д,J=10 Гц),
4,98 (1Н,т,J=3,5 Гц), 5,43 (1Н,д,J=4 Гц),6,67 (1Н,д,J=4 Гц),
7,01(1Н,с),7,31(1Н,с),7,64 (1Н,д,J=7 Гц),7,71 (1Н,д,J=5 Гц),
8,07 (1Н,д, J=8 Гц), 8,17 (1Н, д,J=8 Гц).
Пример 3
По примеру 2, получали [6-O-(2-тетрадецилгексадеканол)-N-ацетилмурамоил] -L-аланил-N-этил-D- глутамамид. Молекулярная масса: 953 (C51H95N5O11);
FAB Масс-спектрометрия m/z 954 (М+1)
1H-ЯМР (DMSO-d6) δ:
0,85(6Н,т,J=7 Гц),0,99(3Н,т,J=7 Гц),1,2-1,3,1,39,1,50(58Н,м),
1,71 (1Н,м),1,79 (3Н,с),1,93 (1Н,м),2,06 (2Н,т,J=8 Гц), 2,29 (1Н,м),
3,04 (2Н,д-кв,J=3,5 Гц, 7 Гц), 3,28 (1Н,т,J=9 Гц),3,45 (1Н,т,J=9 Гц),
3,68 (1Н,м),3,81 (1Н,м),4,03 (1Н,д-д, J=12 Гц, 5 Гц),
4,12 (1Н,д-кв, J=9 Гц,5 Гц), 4.29 (2Н,м), 4,35 (1Н,д,J=10 Гц),
4,97 (1Н,т,J=3,5 Гц),5,44 (1Н,д,J=7 Гц), 6,68 (1Н,д,J=4 Гц),
7,01(1Н,с),7,30(1Н,с),7,64(1Н,д,J=7 Гц),7,76(1Н,д,J=5,5 Гц),
8,07 (1Н,д, J=8 Гц),8.16 (1Н,д,J=8 Гц).
По примеру 2, получали [6-O-(2-тетрадецилгексадеканол)-N-ацетилмурамоил] -L-аланил-N-этил-D- глутамамид. Молекулярная масса: 953 (C51H95N5O11);
FAB Масс-спектрометрия m/z 954 (М+1)
1H-ЯМР (DMSO-d6) δ:
0,85(6Н,т,J=7 Гц),0,99(3Н,т,J=7 Гц),1,2-1,3,1,39,1,50(58Н,м),
1,71 (1Н,м),1,79 (3Н,с),1,93 (1Н,м),2,06 (2Н,т,J=8 Гц), 2,29 (1Н,м),
3,04 (2Н,д-кв,J=3,5 Гц, 7 Гц), 3,28 (1Н,т,J=9 Гц),3,45 (1Н,т,J=9 Гц),
3,68 (1Н,м),3,81 (1Н,м),4,03 (1Н,д-д, J=12 Гц, 5 Гц),
4,12 (1Н,д-кв, J=9 Гц,5 Гц), 4.29 (2Н,м), 4,35 (1Н,д,J=10 Гц),
4,97 (1Н,т,J=3,5 Гц),5,44 (1Н,д,J=7 Гц), 6,68 (1Н,д,J=4 Гц),
7,01(1Н,с),7,30(1Н,с),7,64(1Н,д,J=7 Гц),7,76(1Н,д,J=5,5 Гц),
8,07 (1Н,д, J=8 Гц),8.16 (1Н,д,J=8 Гц).
Пример 4.
Приготовление ГА-НА антигена вируса гриппа.
Очищенный вирус получают из аллантоисной жидкости, инфицированной штаммом Yamagata/120/86 вируса гриппа А с помощью высокоскоростного центрифугирования (23 тыс.об./мин, 90 мин), низкоскоростного центрифугирования (6 тыс. об. /мин, 3 ч) и центрифугирования с градиентом плотности сахарозы. Затем к раствору вируса добавляют Тритон Х-100 в таком количестве, чтобы концентрация Тритона составила 1% Смесь тщательно перемешивают для растворения вируса и затем получают раствор очищенного ГАНА-антигена посредством равновесного метода градиента плотности сахарозы.
Приготовление виросомной вакцины.
Из полученного как описано выше раствора очищенного ГАНА-антигена приготавливают четыре вида образцов вакцины, каждый из которых имеет состав, показанный в табл.1, следующим образом:
соответствующие ингредиенты смешивают и затем к смеси добавляют октилглюкозид в таком количестве, чтобы его концентрация составила 4% для растворения ингредиентов смеси. Затем осуществляют диализ в содержащем 5% глюкозы фосфатно-буферном растворе (рН 7,4) традиционным методом. Концентрацию ГАНА-антигена в каждом полученном таким образом образце доводили до 70 μг/мл:. Виросомные образования наблюдали в полученном образце. Виросомы образцов N 1 и 2 по изобретению показаны на фиг.1 и 2.
соответствующие ингредиенты смешивают и затем к смеси добавляют октилглюкозид в таком количестве, чтобы его концентрация составила 4% для растворения ингредиентов смеси. Затем осуществляют диализ в содержащем 5% глюкозы фосфатно-буферном растворе (рН 7,4) традиционным методом. Концентрацию ГАНА-антигена в каждом полученном таким образом образце доводили до 70 μг/мл:. Виросомные образования наблюдали в полученном образце. Виросомы образцов N 1 и 2 по изобретению показаны на фиг.1 и 2.
Виросомные вакцины (N 1 и 2) по изобретению и контрольную вакцину разводили до концентрации 1/15 исходного вакцинного раствора и вводили подкожно в области спинки каждой из группы морских свинок, состоявшей их 10 животных, в количестве 0,5 мл. Через три недели после инокуляции, свинок инокулировали вакциной еще раз в том же количестве. Через три и пять недель соответственно, у свинок брали кровь и тестировали ее на гемагглютин-ингибирование согласно методу WHO для определения активности продуцирования антител. Результаты показаны в табл.1.
Из вышеприведенной таблицы очевидно, что вакцины по настоящему изобретению проявляют активность продуцирования антител, эквивалентную или более высокую, чем контрольные вакцины.
Примечание: контрольное соединение - [6-O-(2-тетрадецилгексадеканол)-N-ацетилмурамоил]-L-аланил-D-изоглютамин.
Тест на реакцию покраснения
В ходе теста на реакцию покраснения, 0,5 мл образца инокулировали подкожно в спинку каждому из пяти кроликов, и каждый день определяли площадь покрасневшей области кожи Затем рассчитывали общую площадь у пяти кроликов и затем рассчитывали среднюю площадь области покраснения. Результаты показаны в табл.2.
В ходе теста на реакцию покраснения, 0,5 мл образца инокулировали подкожно в спинку каждому из пяти кроликов, и каждый день определяли площадь покрасневшей области кожи Затем рассчитывали общую площадь у пяти кроликов и затем рассчитывали среднюю площадь области покраснения. Результаты показаны в табл.2.
Из вышеприведенной таблицы очевидно, что степень покраснения, вызванного вакцинами по изобретению, ниже, чем степень покраснения, вызываемого контрольными вакцинами.
Тест на лихорадку
В ходе теста на лихорадку, 1 мл каждого образца вводили в вену кролику согласно Стандартной Общей методики исследования биологических продуктов. Когда общее повышение температуры, возникшее в результате реакции на введение вакцины у трех кроликов, составляло 1,3oС или менее, то результат теста рассматривался как отрицательный, а когда это повышение температуры составляло 2,5oС или более, то результат считался положительным. Результаты приведены в табл. 3.
В ходе теста на лихорадку, 1 мл каждого образца вводили в вену кролику согласно Стандартной Общей методики исследования биологических продуктов. Когда общее повышение температуры, возникшее в результате реакции на введение вакцины у трех кроликов, составляло 1,3oС или менее, то результат теста рассматривался как отрицательный, а когда это повышение температуры составляло 2,5oС или более, то результат считался положительным. Результаты приведены в табл. 3.
Из вышеприведенной таблицы очевидно, что степень повышения температуры, вызванного введением вакцины по изобретению ниже, чем степень повышения температуры, вызванного контрольной вакциной.
Claims (7)
1. Мурамилдипептидные производные общей формулы I
где R ацетилгруппа;
X остаток L-аланина;
A остаток жирной кислоты с 10 60 атомами углерода;
R1 атом водорода;
R2 атом водорода или низшая алкилгруппа.
где R ацетилгруппа;
X остаток L-аланина;
A остаток жирной кислоты с 10 60 атомами углерода;
R1 атом водорода;
R2 атом водорода или низшая алкилгруппа.
2. Производные по п. 1, отличающиеся тем, что А - тетрадецилгексадеканоил.
3. Производные по п. 1, отличающиеся тем, что R2 С1 - С2-алкил.
4. Производные по п. 1, отличающиеся тем, что выбраны из группы, состоящей из [6-O-(2-тетрадецилгексадеканоил)-N-ацетилмурамоил]-L-аланил-D-глутама- мида, [6-O-(2-тетрадецилгексадеканоил)-N-ацетилмурамоил]- L-аланил-N-метил-D-глутамамида и [6-O-(2-тетрадецилгексадеканоил)- N-ацетилмурамоил] -L-аланил-N-этил-D-глутамамида.
5. Противогриппозная вакцина, содержащая антиген вируса гриппа и иммуностимулирующую добавку, отличающаяся тем, что в качестве иммуностимулирующей добавки она содержит соединение общей формулы I по п. 1, а в качестве антигена вируса гриппа ГАНА-антиген при следующем соотношении компонентов, мас. ч.
ГАНА-антиген вируса гриппа 1/300 10
Соединение формулы I по п. 1 1
6. Вакцина по п. 5, отличающаяся тем, что в соединении формулы I по п. 1 А тетрадецилгексадеканоил.
Соединение формулы I по п. 1 1
6. Вакцина по п. 5, отличающаяся тем, что в соединении формулы I по п. 1 А тетрадецилгексадеканоил.
7. Вакцина по п. 5, отличающаяся тем, что соединение формулы I или его соль по п. 1 и любой липид образуют везикулу, в оболочку которой внедрен гриппозный ГАНА-антиген.
8. Вакцина по п. 7, отличающаяся тем, что она содержит фосфолипид в количестве от 1/4 до 3 мас.ч. на 1 мас.ч. соединения формулы I или его соли по п. 1.
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP29333690 | 1990-10-30 | ||
| JP293335/90 | 1990-10-30 | ||
| JP293336/90 | 1990-10-30 | ||
| JP29333590 | 1990-10-30 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2074192C1 true RU2074192C1 (ru) | 1997-02-27 |
Family
ID=26559366
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SU915010197A RU2074192C1 (ru) | 1990-10-30 | 1991-10-29 | Мурамилдипептидные производные, противогриппозная вакцина |
Country Status (16)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5292506A (ru) |
| EP (2) | EP0487909A3 (ru) |
| KR (1) | KR920008064A (ru) |
| CN (1) | CN1062146A (ru) |
| AU (1) | AU642048B2 (ru) |
| CA (1) | CA2054228A1 (ru) |
| FI (1) | FI915089A (ru) |
| HU (1) | HUT62199A (ru) |
| IE (1) | IE913765A1 (ru) |
| IL (1) | IL99851A (ru) |
| MX (1) | MX9101820A (ru) |
| NO (1) | NO914233D0 (ru) |
| NZ (1) | NZ240369A (ru) |
| PT (1) | PT99389A (ru) |
| RU (1) | RU2074192C1 (ru) |
| TW (1) | TW207545B (ru) |
Families Citing this family (17)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5612037A (en) * | 1994-07-26 | 1997-03-18 | Connaught Laboratories, Inc. | Influenza virus subunit conjugates |
| CN1253220C (zh) * | 2001-06-29 | 2006-04-26 | 贝克顿迪肯森公司 | 通过微管在真皮内输入疫苗和基因治疗剂 |
| US20040247661A1 (en) * | 2002-07-03 | 2004-12-09 | Dov Michaeli | Liposomal vaccine |
| US20050169979A1 (en) * | 2002-07-03 | 2005-08-04 | Dov Michaeli | Liposomal vaccine |
| EP1528915A2 (en) * | 2002-07-03 | 2005-05-11 | Aphton Corporation | Liposomal vaccine |
| US20050123550A1 (en) * | 2003-05-12 | 2005-06-09 | Laurent Philippe E. | Molecules enhancing dermal delivery of influenza vaccines |
| US7588774B2 (en) * | 2003-05-12 | 2009-09-15 | Becton, Dickinson And Company | Molecules enhancing dermal delivery of influenza vaccines |
| AR056245A1 (es) | 2003-06-19 | 2007-10-03 | Bestewil Holding Bv | Membranas virales reconstituidas funcionales que contienen un coadyuvante |
| EP1708742A4 (en) * | 2003-12-05 | 2008-11-05 | Becton Dickinson Co | METHOD FOR IMPROVING THE IMMUNE RESPONSE IN THE INTRADERMAL COMPARTMENT AND USEFUL LINKS THEREFOR |
| EP2179744B1 (en) | 2004-09-09 | 2010-12-01 | Novartis Vaccines and Diagnostics GmbH | Decreasing potential latrogenic risks associated with influenza vaccines |
| US20090004222A1 (en) | 2004-11-03 | 2009-01-01 | O'hagan Derek | Influenza Vaccination |
| US20060121055A1 (en) * | 2004-12-06 | 2006-06-08 | Becton, Dickinson And Company, Inc. | Compositions with enhanced immunogenicity |
| CN101100483B (zh) * | 2006-07-07 | 2011-12-07 | 中国医学科学院药物研究所 | 胞壁酰二肽的类似物 |
| WO2008024075A1 (en) | 2006-08-25 | 2008-02-28 | Agency For Science, Technology And Research | Modulators of candida hyphal morphogenesis and uses thereof |
| WO2008112218A2 (en) | 2007-03-12 | 2008-09-18 | Antigen Express, Inc. | Li-rnai involved li suppression in cancer immunotherapy |
| CA2812135A1 (en) | 2010-09-07 | 2012-03-15 | Novartis Ag | Generic assays for detection of mammalian reovirus |
| US9884084B2 (en) | 2012-05-16 | 2018-02-06 | Snu R&Db Foundation | Bone loss preventing and bone regeneration or bone formation promoting pharmaceutical composition comprising muramyl dipeptide |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6042398A (ja) * | 1983-08-18 | 1985-03-06 | Toshiyuki Hamaoka | ムラミルジペプチド活性エステル誘導体 |
| JPH0688911B2 (ja) * | 1985-06-06 | 1994-11-09 | 国立予防衛生研究所長 | インフルエンザワクチン及びその製造方法 |
| US4895835A (en) * | 1987-11-20 | 1990-01-23 | Nisshin Oil Mills, Ltd. | Muramyl peptide derivatives and use thereof |
| HU205147B (en) * | 1989-06-29 | 1992-03-30 | Sandoz Ag | Process for producing muramyl dipeptide derivative and pharmaceutical compostions comprising same |
-
1991
- 1991-10-25 CA CA002054228A patent/CA2054228A1/en not_active Abandoned
- 1991-10-25 NZ NZ240369A patent/NZ240369A/xx unknown
- 1991-10-25 IL IL9985191A patent/IL99851A/en not_active IP Right Cessation
- 1991-10-28 EP EP19910118331 patent/EP0487909A3/en not_active Withdrawn
- 1991-10-28 EP EP95105637A patent/EP0680974A1/en not_active Withdrawn
- 1991-10-28 US US07/783,148 patent/US5292506A/en not_active Expired - Fee Related
- 1991-10-29 NO NO91914233A patent/NO914233D0/no unknown
- 1991-10-29 HU HU913398A patent/HUT62199A/hu unknown
- 1991-10-29 RU SU915010197A patent/RU2074192C1/ru active
- 1991-10-29 IE IE376591A patent/IE913765A1/en not_active Application Discontinuation
- 1991-10-29 FI FI915089A patent/FI915089A/fi not_active Application Discontinuation
- 1991-10-29 MX MX9101820A patent/MX9101820A/es not_active IP Right Cessation
- 1991-10-29 AU AU86849/91A patent/AU642048B2/en not_active Ceased
- 1991-10-30 PT PT99389A patent/PT99389A/pt not_active Application Discontinuation
- 1991-10-30 CN CN91111449A patent/CN1062146A/zh active Pending
- 1991-10-30 KR KR1019910019182A patent/KR920008064A/ko not_active Application Discontinuation
- 1991-11-05 TW TW080108684A patent/TW207545B/zh active
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Заявка Японии N 61-282321, кл. C 07 K 9/00, 1985. Патент США N 4606857, кл. C 07 K 9/00, 1986. Патент США N 4629782, кл. C 07 K 9/00, 1986. Европейский патент N 0135788, кл. C 07 K 9/00, 1985. Европейский патент N 0173960, кл. C 07 K 9/00, 1986. Патент WO 89/01778, кл. C 07 K 9/00, 1989. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| MX9101820A (es) | 1992-06-05 |
| IL99851A (en) | 1996-06-18 |
| PT99389A (pt) | 1992-09-30 |
| US5292506A (en) | 1994-03-08 |
| IE913765A1 (en) | 1992-05-22 |
| AU8684991A (en) | 1992-05-07 |
| FI915089A0 (fi) | 1991-10-29 |
| HUT62199A (en) | 1993-04-28 |
| TW207545B (ru) | 1993-06-11 |
| EP0487909A3 (en) | 1992-08-12 |
| EP0680974A1 (en) | 1995-11-08 |
| FI915089A (fi) | 1992-05-01 |
| NZ240369A (en) | 1993-09-27 |
| IL99851A0 (en) | 1992-08-18 |
| AU642048B2 (en) | 1993-10-07 |
| NO914233D0 (no) | 1991-10-29 |
| HU913398D0 (en) | 1992-01-28 |
| EP0487909A2 (en) | 1992-06-03 |
| CN1062146A (zh) | 1992-06-24 |
| CA2054228A1 (en) | 1992-05-01 |
| KR920008064A (ko) | 1992-05-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2074192C1 (ru) | Мурамилдипептидные производные, противогриппозная вакцина | |
| KR940001373B1 (ko) | 인플루엔자 백신의 제조방법 | |
| US4853228A (en) | Method of manufacturing unilamellar lipid vesicles | |
| JP2557603B2 (ja) | ワクチン組成物 | |
| AU2007209104B2 (en) | Novel glycolipid adjuvant compositions | |
| EP0004512B1 (fr) | Composés esters de muramyl-peptide et leurs applications dans les compositions pharmaceutiques et réactifs de laboratoire | |
| JPH0826057B2 (ja) | シアル酸オリゴ糖誘導体及び微粒子キャリヤー | |
| EP0165123B1 (fr) | Dérivés lipophiles de muramylpeptides ayant des propriétés d'activation des macrophages, compositions les contenant et procédé pour les obtenir | |
| EP0006068B1 (fr) | Composés du type muramyl-peptide et médicaments les contenant | |
| JPH07121871B2 (ja) | インフルエンザワクチン凍結乾燥製剤 | |
| JP3539739B2 (ja) | 新規ムラミルジペプチド誘導体 | |
| JPH05229960A (ja) | 新規インフルエンザワクチン | |
| WO1979000802A1 (fr) | Nouveaux composes esters de muramyl-peptide et leurs applications dans les compositions pharmaceutiques et reactifs de laboratoire | |
| JP2777258B2 (ja) | ムラミルジペプチド含有脂質膜構造体 | |
| JPH057765A (ja) | リポソーム |